Universidad Nacional de Chimborazo

FACULTA DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO
TCNICAS HISTOLOGICAS
DOCENTE: IVN PEAFIEL MNDEZ
TEMA : FIJADORES HISTOLGICOS
GRUPO 6:
JACKELINE MULLO
ELIZABETH OVANDO YNEZ
MARCO ROJAS

FIJADORES HISTOLOGICOS
En anatoma patolgica el primero objetivo consiste en observar la estructura
histolgica lo ms parecido posible a como se encuentra en el organismo, por
lo tanto el rgano debe ser fijado despus de su extirpacin con el fin de que
se conserve lo ms veraz posible sus estructuras celulares,
Para de esta manera observar tanto el buen funcionamiento y estructuras que
componen del rgano as como la patologa de mismo.
Pea ello se debe mantener toda su estructura qumica lo ms inalterada
posible, de tal forma que sus componentes celulares mantengan las mismas
caractersticas que cuando dicho ser o tejido estaban vivos.

FIJADORES HISTOLOGICOS

Pea ello se debe mantener toda su estructura qumica lo ms

inalterada posible, de tal forma que sus componentes celulares
mantengan las mismas caractersticas que cuando dicho tejido
estaban vivo.

Los objetivos de la fijacin son:

Mantener las estructuras en el estado ms parecido al

que posean en vivo.

Evitar la lisis celular y la proliferacin bacteriana

Dar cierta solidez o dureza al tejido o material. La fijacin

detiene los procesos vitales pero en ciertas condiciones
mantiene las actividades de algunos componentes moleculares,
por ejemplo la actividad de algunas enzimas

Los objetivos de la fijacin son

Mantener

las estructuras en el estado ms parecido

al que posean en vivo.

Evitar
Dar

la lisis celular y la proliferacin bacteriana

cierta solidez o dureza al tejido o material.

La fijacin detiene los procesos vitales pero en
ciertas condiciones mantiene las actividades
de algunos componentes moleculares, por ejemplo
la actividad de algunas enzimas

Caractersticas de un Fijador Ideal

Las caractersticas que debe tener un buen fijador son las
siguientes
Debe

tener la capacidad de bloquear la autolisis

inmediatamente ( Destruccin celular )

Debe

poseer efecto microbicida, impidiendo la accin

bacteriana, la cual provoca la degradacin del tejido

No

debe provocar retracciones o distorsiones las cuales

pueden alterar sus arquitectura

Debe

cuidar la textura y composicin tisular que favorezca

la inclusin, el corte y la coloracin del materia histolgico

Tiempo de Accin

Se denomina velocidad de penetracin a la rapidez con la que

un fijador se difunde en el interior de un tejido. Este tiempo
vara con relacin al tipo de fijador que se utiliza, al tamao y la
naturaleza de la muestra adems de la temperatura de fijacin.

Por lo tanto el tiempo de fijacin va a variar en rango muy

amplios. En cualquier circunstancia, siempre deben respetarse
los tiempos recomendados para cada tipo de fijador

Los fijadores ms utilizados son

Alcohol

Acetona

Formalina

Todos estos fijadores se caracterizan por tener una velocidad de

penetracin de 0,9 mm/h

Mtodos de Fijacin
Existen
diferentes
formas de fijar los
tejidos dependiendo
del tipo de fijador

Se pueden Clasificar en dos tipos

Fsicos y Qumicos

Fijadores Fsicos
Son aquellos que detiene la Autolisis y la
putrefaccin se basan en una congelacin muy
rpida del tejido o bien en la aplicacin de
calor elevado.
Se utilizan cuando los fijadores qumicos
alteran la estructuras que se desean observar o
cuando necesitamos una fijacin muy rpida,

Fijadores Fsicos
Los fijadores por mtodos fsicos se utilizan principalmente para
estudios morfolgicos y funcionales en los que se quiera mantener
intacta la estructura del tejido.

Congelacin: Es el mtodo el cual consistes en el

enfriamiento por congelacin para la fijacin del tejido para
realizar estudios morfolgicos o funcionales de los mismos
La clave para una correcta fijacin por congelacin del
tejido es que su realizacin sea instantnea porque un
enfriamiento lento provoca la formacin de micro cristales
titulares de hielo dificultando el diagnostico

Fijadores Fsicos
CONGELACION
El procedimiento
para fijar tejidos
por congelacin
consiste en
utilizar
ISOPENTANO a
menos de 50C
como agente de
congelacin y
realizar una
fragmentacin
suficiente de la
muestra que se
vaya a congelar.

Normalmente se
preparan bloques
de no ms de 3
cm. cuadrados de
superficie y 3 mm
de espesor de
modo que el
proceso de
congelacin
instantnea no
requiera ms de
10 segundos.

Al enfriar tanto no
actan bacterias
ni enzimas y el
tejido se
endurece para
cortar estos
tejidos utilizamos
el micrtomo de
congelacin

Fijadores Fsicos
Criodesecacin
Consiste en someter al tejido a dos
procesos
el primero es la congelacin en
Nitrgeno lquido fijacin por
el segundo desecacin por sublimacin
directa del agua congelada
tiene una ventaja muy importante y es
que al eliminar totalmente el agua
tisular, paraliza la autolisis y produce
una conservacin indefinida

Criosustitucin:
es la sustitucin lenta y progresiva
del agua congelada de un tejido por
un lquido fijador
Tras la congelacin instantnea del
tejido con nitrgeno liquido o
isopentano a - 50C se coloca el
tejido congelado en el medio de
sustitucin, El cual esta formado por
una mezcla de alcohol etlico,
acetona y propiln- glicol., enfriado a
-40C,
El intercambio del agua de realizarse
dentro de un congelador para
procurarse que la temperatura se
mantenga

Fijadores Qumicos
Son lquidos que actan desnaturalizando e
insolubilizando las protenas tisulares, lo cual
bloquea la autolisis por inactivacin enzimtica
Adems algunos de estos lquidos fijadores
impiden el crecimiento bacteriano

Lquidos fijadores simple

FORMOL

o FORMALDEIDO:

El que mas se utiliza es el formol a 10 %, es el

fijador por excelencia en anatoma patolgica , ya que permite una buena conservacin de
todos los detalles histolgicos del tejido, y realiza diversas tnicas especiales

En estado puedo se trata de un gas toxico y muy irritante para la mucosa, que se disuelve
con facilidad en agua. En este estado en concentraciones 35 y 40 % y estabilizado se
denomina formalina pura o formol

Ventajas del usar Formol

1.Conserva la estructura tisular

2. Por se un buen desinfectante y no
endurecer
de manera excesiva los
tejidos, es un medio optimo para
conservar y almacenar biopsias y piezas
quirrgicas
3.Provoca escasa retraccin Tisular
4.Posee
velocidad
de
penetracin
inmediata
5.Es un excelente fijador para el tejido
adiposo y para lquidos en general as
como para el tejido nervosos
6. El proceso de fijacin puede ser
acelerado o retardado sin inconvenientes
modificando la temperatura
En temperatura ambiente se consigue
una fijacin completa a partir de las 36 h
mientras que a 35 C entre 12 y 24 horas
y a 55C en solo 3 H
7.Es compatible con la mayor parte de
tinciones

Desventajas del usar Formol

Produce abundante vapores irritantes

sobre la conjuntiva y mucosa nasal
Por accin de la luz y del oxigeno se
transforma de manera progresiva en
acido frmico. Lo que afecta a las
estructuras celulares cromatina
Por eso se debe guardar en frascos
opacos

Alcohol Etlico

Es un Liquido transparente, inflamable, ,uy

voltil y de olor agradable. Como fijador se
encuentra a concentraciones de 70, 90, y 95 %

El tiempo de fijacin correspondiente a una

pieza de 5mm de espesor es dos a cuatro
horas renovando unas 3 veces el lquido.

Ventajas y Desventajas
1.Preserva el glucgeno
2. Se emplea en las extensiones
citolgicas
3. Fija y deshidrata el tejido
4. Gran velocidad de Penetracin
5. Es un agente bactericida y por
lo tanto un buen conservante

1. Es un fuerte reductor, por

consiguiente, incompatible con
fijadores
2. Endurece y contrae de
manera excesiva los tejidos
3. Disuelve las grasas

Acetona

Lquido transparente, inflamable, muy voltil y de olor

dulzn.

Su uso como fijador est prcticamente limitado a los

mtodos hitoqumicos e inmunohistoqumicos porque
conserva muy bien la estructura antignica y la actividad
enzimtica, a veces tambin se utiliza en microscopia
electrnica para la fijacin del material que se va a
incluir en resinas acrlicas.

Se emplea generalmente sin diluir a 4C

El tiempo de fijacin nunca exceder de dos horas y en

piezas delgadas son recomendables 20 minutos .

Ventajas y desventajas del uso de cetona

Las desventajas que presenta son las
siguientes:
Tiene las ventajas siguientes:
1. Se utiliza en las tcnicas enzimticas.
2. Se emplea en la inmunohistoqumica

1. Provoca contraccin tisular y, por

tanto, graves artefactos que suelen
hacer intil su empleo en microscopia
ptica convencional.
2. A temperatura superior de 40 C,
disuelve las grasas.

cido Actico:

Lquido transparente y fuerte olor avinagrado.

Conserva la cromatina. Retrae los tejidos. Es ms un
conservante que un fijador.

Se utiliza diluido en concentraciones entre el 1 y 5 %

formando parte de mezclas fijadores o de soluciones
descalcificantes

Ventajas que tiene es el fijador ideal para ncleo

protenas y acido nucleicos y otra es precipitar
protenas sin sustraer el agua de los tejidos porque
no es giroscpico y produce cierto edema intersticial
que compensa la excesiva refraccin pausado por
otros agentes fijadores.

Desventajas: es mal fijador de citoplasma y

membranas celular y destruye mitocondrias.

cido Pcrico:

Acta coagulando las protenas a travs de la

formacin de picratos que las confieren gran
apetencia por colorantes cidos.

Se utiliza en solucin saturada al 2%, es un

excelente fijador estructural que conserva
adecuadamente la composicin proteica de los
tejidos. Controlando adecuadamente el tiempo de
fijacin produce una ptima contraccin de los
tejidos que favorece su procesamiento
histolgico.

Desventajas del cido Pcrico:

En estado puro el cido pcrico es explosivo si se somete a color hay que

mantenerlo alejado de fuentes de color,

Si se prolonga el efecto de fijacin que es de 4-18 horas dependiendo de

tamao pieza aparecen inconvenientes por una excesiva retraccin tisular.
Sobre todo si la pieza ha sido inadecuadamente lavado en agua y luego
deshidratada.

Tie los tejidos de color amarillo y si no se elimina completamente antes de

la inclusin en parafina provoca un continuo deterioro de la estructura tisular
que pueda hacer imposible su estudio histopatolgico

La eliminacin se realiza mediante lavados sucesivos en alcohol etlico al 7080% lo que es incompatible en la inclusin en celoidina.

https://www.youtube.com/watch?v=LRmum06psn8

Lquidos fijadores simples

Alcohol

Metlico: Se emplea con frecuencia

para fijar frotis desecados(sangre, mdula sea,

ganglios, bazo, lquidos extrados por puncin,
etc.).
cido

smico. en disolucin a 1 o 2 %,

conserva muy bien las estructuras. Tie de

negro las grasas y es poco penetrante.

Mezclas fijadoras

La mayor parte de los procesos de fijacin usan varias sustancias

fijadoras, bien mezcladas en la solucin acuosa inicial o utilizadas
sucesivamente en el tiempo. Con ello se aprovechan las ventajas de
cada una de ellas y se pueden contrarrestar sus desventajas.

A continuacin vamos a mencionar algunas combinaciones usadas

frecuentemente porque tienen unas propiedades de fijacin que las
hace apropiadas para las observacin de una gran variedad de tejidos y
para el uso diversas de tcnicas de tincin.

Mezclas fijadoras

Glutaraldehido:lquido oleoso en
comercios se encuentra en disolucin
al 25%. Mecanismo de actuacin es el
mismo que el formaldehdo y como
fijador se emplea en concentraciones
entre el 1 y el 3%

Mezclas fijadoras

Glutaraldehido:
Ventajas
Es el primer fijador de eleccin para microscopa electrnica porque tienen una
excepcional capacidad para preservar la morfologa celular.
Se emplea para fijacin de tejidos por perfusin en patologa.

Desventajas
Tiene velocidad de penetracin muy baja por lo que los fragmentos
de tejido no pueden tener volumen superior a unos pocos
milmetros cbicos.
Posee gran capacidad de retraccin y endurecimiento tisular que
impide prolongar el tiempo de fijacin por encima de las 3 horas.

Mezclas fijadoras

Tetraxido de Osmio: OsO4 :En el

comercio se encuentra en forma de
cristales amarillentos solubles en agua,
muy voltiles y txicas. Acta igual que
el formol y se prepara como agente
fijador al 1% en tampn fosfato.

Mezclas fijadoras
Tetraxido de Osmio:
Ventajas
Es el mejor fijador estructural conocido, por eso se utiliza en microscopa
electrnica especficamente como 2 fijador.

Desventajas
Muy caro y descompone en preseca de luz por lo que hay que conservarlo en
recipientes opacos y oscuridad
Posee muy baja capacidad de penetracin tisular por lo que las muestras deben
tener muy poco volumen.
Es incompatible con formol y dificulta la coloracin nuclear, esto obliga a lavar
abundantemente los tejidos tras utilizarlo.

FIJADORES QUE CONTIENEN

Fijador de Bouin (1897): muy utilizado en histologa embriolgica y para rganos genitales.
FORMOL
Asimismo, se lo recomienda cuando se desea colorear con cualquier tcnica tricrmica para la
diferenciacin de tejido muscular y conectivo. Las muestras se deben lavar con etanol a 70

Se prepara de la siguiente manera:

SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO

Para Preparar la solucin se disuelve

primero la sal de cobre en el agua
destilada luego se aade el acido
pcrico y tras filtrado el formol y el
acido actico glacial

750.0 ml
FORMALINA CONCENTRADA250.0 ml
C. ACTICO GLACIAL50.0 ml
PH. FINAL2.2
TIEMPO DE FIJACIN2 A 24 HORAS

FIJADORES QUE CONTIENEN

FORMOL
Fijador de Bouin-Hollander: es una variante del lquido de Bouin
especialmente indicado para la fijacin de los cilindros de biopsia de mdula sea la
conservacin, es de 48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento.
Para preparar la solucin se
disuelve primero la sal de cobre
en el agua destilada luego se
aade el cido pcrico y tras
filtrarlos el formol y el cido
actico glacial.
Esta solucin se conserva
indefinidamente a temperatura
ambiente el tiempo de fijacin
oscila entre 48-72 horas

Se prepara de la siguiente manera:

ACETATO NEUTRO DE COBRE2.5
gr.
C. PCRICO4.0 gr.
FORMALINA CONCENTRADA10.0
ml.
C. ACTICO GLACIAL1.5 ml.
AGUA DESTILADA100.0 ml.

FIJADORES QUE CONTIENEN

FORMOL
Fijador de Mller: Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico con la
adicin de sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para fabricar los fijadores de
Orth y de Zenker. Lo que llamamos solucin madre. Est compuesta de:

Tiempo de fijacin 4 y 8
horas. Tras la fijacin es
necesario
lavar
abundantemente en agua
corriente
durante
unas
horas

DICROMATO POTASICO2.5gr.
SULFATO SDICO.1.0 gr.
AGUA DESTILADA 100.0 ml.

FIJADORES QUE CONTIENEN

FORMOL
Fijador de Orth: Se emplea exclusivamente en cietas tecnicas de fijacin de tejido nervioso

El tiempo de fijacin de tejido

nervioso es de 48 horas y tras
el proceso de fijacin los tejidos
han
de
ser
lavados
abundantemente en agua y
almacenados en alcohol etlico
al 70%

Solucin stock de Orth: idntica a la

composicin del fijador de Mller.
Solucin de trabajo: en el momento
de su uso se mezclan:
SOLUCIN STOCK90.0 ml.
FORMULINA
CONCENTRADA10.0 ml.

FIJADORES QUE CONTIENEN

Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly) :Ambas
FORMOL
mezclas son en esencia casi idnticas.
La solucin de Zenker-formol
contiene dicromato potsico y sulfato
sdico.

La denominacin B5 corresponde en
realidad a una modificacin de la de
Zenker.

CLORURO MERCRICO5gr.
DICROMATO POTSICO2.5 gr.
SULFATO SDICO 1 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P..100.0
ml.

CLORURO MERCRICO...12.0 gr.

ACETATO SDICO. 2.5 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P.200 ml.

La mayor utilidad de estos fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, para el diagnstico
morfolgico en las patologas del sistema linfoide y hematopoytico
Adems estas soluciones B5 zenker formol son los fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido
conectivo y para fibrin

Eliminacin del pigmento

mercrico

Se realiza tratando las secciones histolgicas antes de su coloracin con

soluciones yodadas y utilizamos:

Despus de la desparafinacin
hay que tratar los cortes durante
diez minutos con la solucin
yodada a continuacin lavar bien
en agua destilada
despus decolorar durante dos
minutos en la solucin en agua
corriente durante 10 minutos
antes de realizar la coloracin

Solucin de LUGOL:
YODURO POTSICO.2gr.
CRISTALES DE YODO .1gr.
ALCOHOL ETLICO 70-80%....100
ml.
Solucin de tiosulfato sdico:
TIOSULFATO SDICO.5gr.
AGUA DESTILADA100ml.

FIJADORES QUE NO CONTIENEN

FORMOL
Lquido de Zenker:se la puede emplear para la preservacin de

componentes ricos en sangre y para la realizacin de mtodos tricrmicos

y coloracin de miofilamentos.

En el momento de usar de
debe agregar 5 ml de cido
actico glacial por cada 95
ml de la solucin stock

Cloruro de mercurio 12.5

gr
Dicromato de potasio 6.3
gr
Sulfato de sodio 2.5 gr
Agua destilada 250 ml

FIJADORES QUE CONTIENEN

FORMOL

Lquido de Carnoy (1887): frmula que penetra muy rpidamente y

tiene aplicacin en citologa para la coloracin de cidos nucleicos.
Tambin preserva glucgeno. Tiende a destruir micobacterias.

Composicin
Etanol absoluto 60 ml
Cloroformo 30 ml
Acido actico 10 ml

El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3

horas.
Las
muestras
deben
cambiarse
directamente a alcohol etlico absoluto. El mayor
endurecimiento se produce al prolongar
demasiado la deshidratacin en alcohol, para
prevenirlo se puede sustituir el etanol por metanol
en la composicin de lquido fijador

GR
AC
I

AS