Anda di halaman 1dari 86

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

UJI IN VIVO DAN VALIDASI PROTOKOL SLUG IRRITATION TEST


PADA SEDIAAN BEDAK TABUR AMILUM MANIHOT (Manihot
utilissima L.) MENGGUNAKAN PEWARNA KAROTENOID DARI UMBI
WORTEL (Daucus carota L.) DENGAN METODE CLASSIFICATION AND
REGRESSION TREE (CART)

SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi

Oleh:
Carolina Dea Sekar Panintra
NIM: 118114046

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2015

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

UJI IN VIVO DAN VALIDASI PROTOKOL SLUG IRRITATION TEST


PADA SEDIAAN BEDAK TABUR AMILUM MANIHOT (Manihot
utilissima L.) MENGGUNAKAN PEWARNA KAROTENOID DARI UMBI
WORTEL (Daucus carota L.) DENGAN METODE CLASSIFICATION AND
REGRESSION TREE (CART)

SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi

Oleh:
Carolina Dea Sekar Panintra
NIM: 118114046

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2015

ii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

iii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

iv

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

LEMBAR PERSEMBAHAN

THE SAME BOILING WATER THAT SOFTENS THE POTATO HARDENS THE EGG.
ITS ABOUT WHAT YOURE MADE OF, NOT THE CIRCUMSTANCES.

Kupersembahkan untuk:
Keluargaku, Mama, Papa, Mas Aan, Vano
Saudara, Sahabat, Teman dan Almamaterku

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

vi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah Yang Maha Kuasa atas
berkat dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang
berjudul Uji In Vivo dan Validasi Protokol Slug Irritation Test pada Sediaan
Bedak Tabur Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) Menggunakan Pewarna
Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus carota L.) dengan Metode Classification
and Regression Tree (CART). Penelitian ini merupakan bagian dari Penelitian
Validasi Protokol Uji Iritasi Kulit Sediaan Bahan Alam berdasarkan Prinsip 3R
(Reduce, Refinement, and Replace). Skripsi ini disusun guna memenuhi salah satu
syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) di Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Selama perkuliahan, penelitian dan penyusunan skripsi, penulis telah
banyak mendapatkan bantuan, sarana, dukungan, nasehat, bimbingan, kritik dan
saran dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan
terimakasih yang sebesar-besarnya kepada:
1.

Tuhan Yesus atas segala berkat dan karunia-Nya kepada penulis mulai dari
awal penelitian hingga selesai penyusunan naskah.

2.

Dr. Sri Hartati Yuliani, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing dan Kepala
Program Studi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas masukan,
bimbingan, kritik, saran dan bahan penelitian yang diberikan kepada penulis.

3.

Enade Perdana Istyastono, Ph.D., Apt., selaku dosen penguji dan juga atas
saran serta dukungan selama penyusunan naskah.

vii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

4.

Dr. Nunung Yuniarti, M.Si., Apt. selaku dosen penguji dan juga atas saran
serta dukungan kepada penulis.

5.

Agustina Setiawati, M.Sc., Apt. selaku Kepala Laboratorium atas ijin yang
diberikan.

6.

Seluruh dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma


yang telah membagikan ilmu serta pengalaman selama perkuliahan.

7.

Mas Agung, Pak Musrifin, Pak Iswandi dan semua laboran atas bantuan dan
kerjasamanya selama penulis melakukan penelitian.

8.

Mama, Papa, Mas Aan dan Vano atas doa, dukungan, kasih sayang, cinta dan
semangatnya yang diberikan kepada penulis selama proses penelitian hingga
penyusunan naskah.

9.

Stevanus Nonot Pratito atas doa, dukungan, kasih sayang, cinta dan
semangatnya.

10. Tiyut dan Cik Ailing, tim siput atas kerjasama dan sukaduka selama
penelitian hingga penyusunan naskah.
11. Lala, Lisul, Ocha dan Henra untuk kebersamaan, canda tawa, motivasi dan
dukungan selama 4 tahun berdinamika bersama.
12. Dara Prabandari Sumardi atas semangat, dukungan dan saran yang diberikan
kepada penulis.
13. Ines, Mbak Rini, Mbak Tyas, Verlita, Ocita dan teman-teman kos Caritas.
Terimakasih sudah menjadi teman yang luar biasa selama di kos, berbagi
canda tawa serta dukungan yang telah diberikan selama bersama-sama di kos
Caritas.

viii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

14. Teman ngelab lantai 1 (Dara, Mpit, Lukas, Deni, Ahen, Lauren, Ardha,
Sheilla, teman-teman FST A 2011, FSM A 2011 dan seluruh angkatan 2011
atas kebersamaan dan keceriaan selama ini.
15. Serta semua pihak yang telah membantu penulis dan tidak dapat disebutkan
satu per satu.
Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penyusunan
skripsi ini. Penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua
pihak. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak.

Yogyakarta,

Penulis

ix

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL .................................................................................... ii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................. iii
HALAMAN PENGESAHAN ....................................................................... iv
HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................... v
LEMBAR

PERNYATAAN

PUBLIKASI

ILMIAH

UNTUK

KEPENTINGAN AKADEMIS ..................................................................... vi


PRAKATA ................................................................................................... vii
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................ x
DAFTAR ISI ................................................................................................ xi
DAFTAR TABEL ........................................................................................ xiv
DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xv
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xvi
DAFTAR SINGKATAN .............................................................................. xvii
INTISARI ..................................................................................................... xviii
ABSTRACT ................................................................................................... xix
BAB I PENGANTAR ................................................................................... 1
A. Latar Belakang ......................................................................................... 1
1.

Perumusan Masalah ........................................................................... 3

2.

Keaslian Penelitian ............................................................................ 3

3.

Manfaat Penelitian ............................................................................. 4

B. Tujuan Penelitian ..................................................................................... 4


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ............................................................ 5
A. Kulit ......................................................................................................... 5
1. Epidermis ............................................................................................ 6
2. Dermis ................................................................................................. 6
B. Iritasi ........................................................................................................ 7
C. Bedak ....................................................................................................... 8
D. Bedak Tabur ............................................................................................. 8

xi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

E. Karakteristik Bedak Tabur ........................................................................ 8


1. Daya penutupan bedak ......................................................................... 8
2.

Daya serap ......................................................................................... 9

3.

Daya lekat ......................................................................................... 10

4.

Pewarna ............................................................................................. 10

5.

Pengawet ........................................................................................... 11

F. Wortel ...................................................................................................... 12
1.

Keterangan botani.............................................................................. 12

2.

Kandungan wortel ............................................................................. 12

G. Bahan Uji Iritasi ....................................................................................... 13


1. Asam salisilat ..................................................................................... 13
2. Arbutin ............................................................................................... 14
3. Sodium Lauryl Sulfate......................................................................... 15
I. Slug Irritation Test ................................................................................... 16
1. Slug Mucosal Irritation (SMI) ............................................................ 16
2. Laevicaulis alte .................................................................................. 17
a. Klasifikasi..................................................................................... 17
b. Deskripsi umum ............................................................................ 18
c. Keterangan biologis ...................................................................... 18
d. Habitat .......................................................................................... 18
J. Spektrofotometri ...................................................................................... 18
K. Validasi Alternatif Tes ............................................................................. 19
L. Classification and Regression Tree (CART) ............................................. 20
M. Keterangan Empiris .................................................................................. 21
BAB III METODE PENELITIAN ................................................................ 23
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................ 23
B. Variabel Penelitian ................................................................................... 23
C. Definisi Operasional ................................................................................. 23
D. Bahan Penelitian....................................................................................... 24
E. Alat Penelitian .......................................................................................... 25
F. Tata Cara Penelitian ................................................................................. 26

xii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

1. Formulasi bedak tabur.......................................................................... 26


2. Pengumpulan dan penyiapan sari umbi wortel...................................... 26
3. Penghomogenan dan pewarnaan bedak tabur ....................................... 26
4. Pembuatan kontrol positif dan kontrol negatif ...................................... 27
5. Slug Irritation Test ............................................................................... 27
a. Pengumpulan dan determinasi siput ................................................. 27
b. Slug irritation test ........................................................................... 28
c. Pengukuran kadar albumin .............................................................. 28
d. Pengukuran ALP ............................................................................. 29
e. Pengukuran LDH ............................................................................ 29
G. Analisis hasil ............................................................................................ 30
1. Validasi protokol slug irritation test..................................................... 30
2. Prediksi sifat iritatif sediaan bedak tabur .............................................. 31
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 32
A. Formulasi ................................................................................................. 32
B. Pembuatan Bedak Tabur ........................................................................... 32
C. Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif Sediaan ........................... 34
D. Slug Irritation Test ................................................................................... 36
1. Pengumpulan dan determinasi siput ..................................................... 36
2. Slug Irritation Test ............................................................................... 36
3. Validasi menggunakan metode Classification and Regression Tree
(CART) ............................................................................................... 40
4. Prediksi sifat iritatif bedak tabur .......................................................... 43
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN......................................................... 45
A. Kesimpulan .............................................................................................. 45
B. Saran ........................................................................................................ 45
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 46
LAMPIRAN ................................................................................................. 50
BIOGRAFI PENULIS .................................................................................. 67

xiii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR TABEL

Tabel I.

Komposisi kandungan gizi wortel per 100 g bahan ..................... 13

Tabel II.

Penggunaan SLS pada berbagai keperluan .................................. 15

Tabel III. Komposisi dan konsentrasi reagen ALP ...................................... 25


Tabel IV. Komposisi dan konsentrasi reagen LDH ..................................... 25
Tabel V.

Komposisi dan konsentrasi reagen albumin ................................. 25

Tabel VI. Formula acuan (Dewi, 2012) ....................................................... 26


Tabel VII. Formula bahan uji ....................................................................... 27
Tabel VIII. Confusion Matrix ........................................................................ 31
Tabel IX. Data slug irritation test ............................................................... 37
Tabel X.

Confusion Matrix prediksi CART ............................................... 42

Tabel XI. Perbandingan nilai cut off dengan persen mukus sediaan bedak
tabur ........................................................................................... 43

xiv

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Diagram kulit dengan perbedaan lapisan epidermis ..................... 5


Gambar 2. Struktur metil paraben ................................................................ 11
Gambar 3. Struktur asam salisilat ................................................................. 14
Gambar 4. Struktur arbutin........................................................................... 15
Gambar 5. Laevicaulis alte........................................................................... 17
Gambar 6. Classification (a) and Regression (b) Tree (CART) ..................... 41

xv

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Data penimbangan dan dokumentasi formula ............................ 51


Lampiran 2. Dokumentasi Slug Irritation Test............................................... 52
Lampiran 3. Data penimbangan siput ............................................................ 54
Lampiran 4. Data selisih absorbansi ALP, LDH dan albumin ........................ 56
Lampiran 5. Data persen mukus, LDH, ALP dan Albumin ............................ 58
Lampiran 6. Data prediksi true positive, true negative, false positive dan
false negative............................................................................ 60
Lampiran 7. Data Classification and Regression Tree (CART)
menggunakan RStudio .............................................................. 62
Lampiran 8. Surat determinasi siput .............................................................. 66

xvi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR SINGKATAN

alb

Albumin

ALP

Alkaline Phospatase

anova

Analysis of Variance

CART

Classification and Regression Tree

FN

False Negative

FP

False Positive

LDH

Lactate Dehydrogenase

PBS

Phospate Buffer Saline

SLS

Sodium Lauryl Sulfate

TN

True Negative

TP

True Positive

xvii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

INTISARI

Produk sediaan farmasi, terutama kosmetik sudah sangat tersebar luas di


pasaran. Dalam kosmetik, digunakan berbagai macam bahan yang diformulasikan
sedemikian rupa agar menghasilkan sediaan yang baik dan aman. Perlu dilakukan
uji iritasi terhadap sediaan agar keamanan konsumen terjamin. Penelitian
mengenai Uji In Vivo dan Validasi Protokol Slug Irritation Test Pada Sediaan
Bedak Tabur Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) menggunakan Pewarna
Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus carota L.) dengan Metode Classification
And Regression Tree (CART) bertujuan untuk mengetahui validitas Slug
Irritation Test dalam pengujian sediaan bedak tabur amilum manihot
menggunakan pewarna karotenoid dari umbi wortel.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental kuasi dan eksploratif.
Dilakukan uji in vivo menggunakan siput telanjang dan validitas metode diuji.
Validitas protokol Slug Irritation Test dilihat berdasarkan nilai sensitivitas dan
selektivitas. Metode dinyatakan valid apabila nilai sensitivitas dan spesifisitas
>60%.
Hasil penelitian menunjukkan persen mukus sebagai variabel penting
dalam klasifikasi dengan nilai cut off sebesar 0,0325. Didapatkan nilai sensitivitas
100% dan spesifisitas 77,5% dan metode dinyatakan valid. Potensi iritasi sediaan
bedak tabur diprediksi dibandingkan dengan cut off dari persen mukus. Bedak
tabur memiliki rata-rata persen mukus sebesar 0,08360,01, sehingga disimpulkan
bahwa bedak tabur memiliki potensi iritasi.
Kata kunci: Slug Irritation Test, bedak tabur, pewarna, validasi, cut off,
Classification and Regression Tree

xviii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

ABSTRACT

Pharmaceutical dosage forms, especially cosmetics, have been spread


widely in the market. Wide varieties of materials are used in order to formulate
good as well as safe cosmetics products. The irritation test is needed to guarantee
the product safety for the consumers. The study about In Vivo Test and Protocol
Validation of Slug Irritation Test on Amylum Manihot (Manihot utilissima L.)
Face Powder Using Carotenoid Dye from Carrots Tuber (Daucus carota L.) by
the Method of Classification and Regression Tree (CART) aims to discover the
Slug Irritation Tests validity in the examination of Amylum manihot face powder
using carotenoid dye from carrots tuber.
This study is a quasi experimental and an explorative research. The in
vivo test using slugs was performed and the protocol validity of Slug Irritation
Test was determined by the sensitivity and the selectivity. This method is valid if
the value of both are >60%.
The result of the study shows the mucus production (in percent) as the
important variable in the classification with the cut off value of 0.0325. The
sensitivity value is 100% and the specification value is 77.5%. Therefore, the
method is valid. The irritation potential of face powder dosage form is predicted
by the cut off from the mucus production. The powder has the average mucus
production of 0.08360.01 percent. From the result, it can be concluded that the
powder has the irritation potential.
Keywords: Slug Irritation Test, powder, dye, validity, cut off, Classification and
Regression Tree

xix

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

BAB I
PENGANTAR

A. Latar Belakang
Iritasi adalah adalah gejala inflamasi yang terjadi pada kulit atau
membran mukosa segera setelah perlakuan berkepanjangan atau berulang dengan
menggunakan bahan kimia atau bahan lain. Iritasi kulit disebabkan oleh suatu
bahan dapat terjadi pada setiap orang dan tidak melibatkan sistem imun tubuh.
Ada beberapa faktor-faktor yang memegang peranan seperti keadaan permukaan
kulit, lamanya bahan bersentuhan dengan kulit, dan konsentrasi dari bahan (Irsan
dkk., 2013).
Produk sediaan farmasi, terutama kosmetik sudah sangat tersebar luas di
pasaran. Dalam kosmetik, digunakan berbagai macam bahan yang diformulasikan
sedemikian rupa agar menghasilkan sediaan yang baik. Tanpa disadari, bahanbahan tersebut memiliki potensi untuk mengiritasi pengguna kosmetik. Salah satu
bahan yang dinilai memberikan potensi iritasi adalah bahan pewarna. Pewarna
yang merupakan bahan alam sangat penting untuk diuji potensi iritasinya, karena
kandungan senyawa dalam bahan alam tersebut belum diketahui dengan pasti.
Dewi (2012), telah memformulasikan sediaan bedak tabur dengan
menggunakan pewarna bahan alam yaitu karotenoid dari umbi wortel. Sudah
dilakukan uji iritasi pada penelitian tersebut dengan menggunakan hewan uji
kelinci. Didapatkan hasil bahwa sediaan bedak tabur yang diformulasikan bersifat
non-iritatif.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


2

European Chemical Agency telah menggalakkan larangan penggunaan


hewan vertebrata (hewan bertulang belakang) untuk beberapa uji laboratorium.
Telah diminimalisir beberapa metode standar yang menggunakan hewan
vertebrata sebagai model untuk memprediksi efek dari senyawa kimia pada
manusia (Casati dkk., 2013). Tikus maupun kelinci sebagai hewan untuk uji iritasi
telah diminimalisir penggunaannya, sehingga dikembangkan cara lain untuk
melakukan uji iritasi.
Slug Mucosal Irritation assay (SMI) kemudian dikembangkan sebagai
salah satu alternatif untuk uji iritasi menggantikan Draize Test yang menggunakan
kelinci sebagai hewan uji oleh Adriaens pada tahun 2006. SMI assay yang
dikembangkan oleh Adriaens menggunakan hewan avertebrata slug (Arion
lusitancius) yang mempunyai luas permukaan mukosa yang besar. SMI assay
dapat memprediksi toleransi lokal dari sediaan solid, semi-solid maupun liquid.
Potensi iritasi dapat diprediksi berdasarkan jumlah total dari mukus yang
diproduksi, sedangkan parameter kerusakan jaringan dilihat dari produksi enzim
dan protein (Dhondt, 2005).
Untuk dapat memenuhi syarat keamanan, sediaan bedak tabur diuji
dengan metode Slug Irritation Test. Validasi metode diuji menggunakan metode
Classification and Regression Test (CART). Validasi protokol Slug Irritation Test
pada sediaan bedak tabur dengan pewarna karotenoid dari umbi wortel perlu
dilakukan agar dapat menjadi salah satu alternatif untuk uji iritasi dengan
menggunakan hewan avertebrata.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


3

1. Perumusan masalah
Berdasarkan latar belakang, permasalahan yang diangkat penulis dalam
penelitian ini adalah:
a. Apakah protokol slug irritation test dapat menunjukkan hasil yang valid
untuk pengujian iritasi sediaan bedak tabur amilum manihot menggunakan
pewarna karotenoid dari umbi wortel dengan metode Classification and
Regression Tree (CART)?
b. Apakah sediaan bedak tabur amilum manihot menggunakan pewarna
karotenoid dari umbi wortel bersifat iritatif atau non-iritatif sebagai sediaan
topikal?
2. Keaslian penelitian
Sejauh penelusuran yang dilakukan oleh penulis, penelitian tentang Uji
In Vivo dan Validasi Protokol Slug Irritation Test pada Sediaan Bedak Tabur
Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) menggunakan Pewarna Karotenoid dari
Umbi Wortel (Daucus carota L.) dengan Metode Classification And Regression
Tree (CART) belum pernah dilakukan. Penelitian ini dilakukan berdasarkan
penelitian yang dilakukan oleh Els Adriaens pada tahun 2006 tentang The Slug
Mucosal Irritation assay: an alternative assay for local tolerance testing. Formula
yang digunakan dalam penelitian ini mengacu pada penelitian yang dilakukan
oleh Intan Chintya Dewi pada tahun 2012 tentang Perbandingan Sifat Fisis Bedak
Tabur Berbahan Dasar Amilum solani (Solanum tuberosum L.) dan Amilum
manihot (Manihot uttilisima L.) dengan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel
(Daucus carota L.).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


4

3. Manfaat penelitian
a.

Manfaat Teoretis. Dengan adanya penelitian ini, diharapkan dapat

diketahui apakah slug irritation test dapat menunjukkan hasil yang valid untuk
menguji sediaan bedak tabur.
b.

Manfaat Praktis. Dengan adanya penelitian ini, diharapkan penggunaan

hewan uji mamal untuk uji iritasi dapat diminimalkan mengingat penggunaan
hewan mamal untuk uji iritasi sudah banyak dilarang.

B. Tujuan Penelitian
1.

Untuk mengetahui validitas Slug Irritation Test dalam pengujian sediaan

bedak tabur amilum manihot menggunakan pewarna karotenoid dari umbi wortel
dengan metode Classification and Regression Tree (CART).
2.

Jika protokol Slug Irritation Test pada sediaan bedak tabur Amilum Manihot

(Manihot utilissima L.) menggunakan pewarna karotenoid dari umbi wortel


(Daucus carota L.) dengan metode Classification and Regression Tree (CART)
dinyatakan valid, digunakan untuk mengetahui potensi iritasi sediaan bedak tabur
Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) menggunakan pewarna karotenoid dari
umbi wortel (Daucus carota L.) sebagai sediaan topikal.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA

A. Kulit
Kulit merupakan organ yang menutupi seluruh permukaan tubuh dan
memiliki fungsi utama sebagai pelindung dari berbagai macam gangguan dan
rangsangan luar. Fungsi perlindungan ini terjadi melalui sejumlah mekanisme
biologis, seperti pembentukan lapisan tanduk secara terus menerus (keratinisasi
dan pelepasan sel-sel yang sudah mati), respirasi dan pengaturan suhu tubuh,
produksi sebum dan keringat, dan pembentukan pigmen melanin untuk
melindungi kulit dari bahaya sinar UV, sebagai peraba dan perasa, serta
pertahanan terhadap tekanan dan infeksi dari luar (Tranggono dkk., 2007).
Diagram kulit dengan perbedaan lapisan epidermis disajikan pada Gambar 1.

Gambar 1. Diagram kulit dengan perbedaan lapisan epidermis


(Wibowo, 2000).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


6

1. Epidermis
Epidermis (kulit ari) merupakan lapisan paling luar dari kulit. Para ahli
histologi membagi epidermis dari bagian terluar hingga ke dalam menjadi 5
lapisan yaitu stratum korneum, stratum lusidum, stratum granulosum, stratum
spinosum dan stratum germinativum. Ketebalan epidermis berbeda-beda pada
berbagai bagian tubuh, yang paling tebal berukuran 1 mm, misalnya pada telapak
kaki dan tangan, dan lapisan yang tipis berukuran 0,1 mm terdapat pada kelopak
mata, pipi, dahi dan perut. Sel-sel epidermis ini disebut keratinosit (Tranggono
dkk., 2007).
2. Dermis
Bagian dermis terdiri dari bahan dasar serabut kolagen dan elastin yang
berada di dalam substansi dasar yang bersifat koloid dan terbuat dari gelatin
mukopolisakarida. Serabut kolagen dapat mencapai 72% dari keseluruhan berat
kulit manusia bebas lemak (Tranggono dkk., 2007).
Di dalam dermis terdapat jaringan-jaringan kulit seperti folikel rambut,
papilla rambut, kelenjar keringat, saluran keringat, kelenjar sebasea, otot penegak
rambut, ujung pembuluh darah, ujung saraf dan sebagian serabut lemak yang
terdapat pada lapisan lemak bawah kulit (subkutis/hipodermis) (Tranggono dkk.,
2007).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


7

B. Iritasi
Iritasi adalah adalah gejala inflamasi yang terjadi pada kulit atau
membran mukosa segera setelah perlakuan berkepanjangan atau berulang dengan
menggunakan bahan kimia atau bahan lain. Iritasi kulit disebabkan oleh suatu
bahan dapat terjadi pada setiap orang, tidak melibatkan sistem imun tubuh dan ada
beberapa faktor-faktor yang memegang peranan seperti keadaan permukaan kulit,
lamanya bahan bersentuhan dengan kulit, dan konsentrasi dari bahan (Irsan dkk.,
2013).
Iritasi kulit karena induksi kimia dipicu oleh kerusakan sel dan jaringan.
Sel kulit

melepaskan mediator inflamasi (kemokin dan sitokin) yang

meningkatkan diameter dan permeabilitas pembuluh darah, membuat sel imun


menuju jaringan yang rusak dan memicu migrasi sel imun melewati endotelium ke
dalam jaringan dimana sel imun berperan dalam perbaikan jaringan. Selain itu,
mediator inflamasi dapat merangsang ujung saraf yang mengarah ke gejala seperti
rasa terbakar, gatal atau sensasi menyengat. Respon inflamasi lokal mengarah ke
gejala-gejala seperti kemerahan, panas, nyeri dan bengkak pada jaringan yang
mengalami inflamasi. Kemerahan dan rasa panas pada kulit disebabkan oleh
kenaikan aliran darah pada area inflamasi. Pembengkakan pada kulit disebabkan
oleh peningkatan permeabilitas dari sel endotel yang membentuk dinding
pembuluh darah (Zuang dkk., 2013).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


8

C. Bedak
Bedak (face powder) termasuk dalam kosmetik dekoratif yang ditujukan
untuk menyembunyikan kekurangan pada kulit wajah, misalnya untuk menutupi
kulit wajah yang mengilap (skin imperfection and shininess). Fungsi utama bedak
adalah untuk menutupi kulit wajah secara visual. Untuk maksud itu, bedak hampir
selalu berisi bahan-bahan dasar dengan sifat-sifat penutup yang paling efektif,
yaitu zink oksida dan titanium oksida, yang daya penutupnya tidak menurun jika
terkena air atau petrolatum sebagaimana bahan dasar penutup lainnya (Tranggono
dkk., 2007).

D. Bedak Tabur
Bedak tabur adalah bedak kering yang hampir semua bahan bakunya
terbuat dari serbuk bahan bedak. Pengaplikasian bedak tabur dengan
menggunakan puff dan harus tersebar merata. Pembuatan bedak tabur cukup
mudah, yaitu dengan cara mencampurkan bahan bedak dan pigmen dengan
blender. Pencampuran bedak harus homogen dan tahap terakhir adalah tahap
pengayakan bedak untuk mencapai ukuran yang ditentukan (Mitsui, 1997).

E. Karakteristik Bedak Tabur


1. Daya penutupan bedak
Daya penutupan bedak adalah kemampuan untuk menutupi cacat dan
kemerahan pada wajah. Kemampuan ini dapat diperoleh dari bahan-bahan seperti
kaolin, zinc oksida dan titanium dioksida (Poucher, 1992).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


9

Titanium dioksida (titanium dioxide). Titanium dioksida memiliki indeks


refraktif yang tinggi dan memiliki ukuran diameter partikel yang sangat kecil
sehingga memiliki kemampuan sebagai penutup (covering) yang baik pada bedak.
Bersifat ringan, stabil terhadap panas dan kimia membuat titanium dioksida sangat
baik digunakan untuk pigmen warna putih (Mitsui, 1997). Pada penelitian yang
dilakukan oleh Roy dan Saha (1981), pengaplikasian 100 g titanium dioksida pada
kulit kelinci albino jantan selama 24 jam tidak menimbulkan iritasi. Tidak
ditemukan potensi iritasi titanium dioksida pada kulit manusia maupun kulit
hewan (Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-Food Products,
2000).
2. Daya serap
Bedak wajah diharapkan mampu menutupi kekurangan wajah, salah
satunya adalah menghilangkan kilau pada kulit. Kilau pada kulit dihilangkan
dengan proses penyerapan sekresi minyak dan keringat. Oleh karena itu pada
formulasi bedak wajah diperlukan bahan yang memiliki daya serap yang tinggi.
Biasanya bahan yang digunakan adalah amilum (starch) (Poucher, 1992).
Amilum (starch). Amilum merupakan serbuk putih tidak berbau,
memiliki kelarutan yang rendah dalam air (Dirjen Pengawasan Obat dan
Makanan, 1995). Selain itu amilum juga memiliki daya serap sekresi minyak dan
keringat yang baik sehingga akan menyamarkan kilauan pada wajah. Amilum
tersusun dari amilosa dan amilopektin. Tiap-tiap tanaman memiliki karakteristik
amilum dan kandungan amilosa dan amilopektin yang berbeda. Pada amilum
manihot mengandung amilosa sebesar 17-20%, dengan diameter granul sekitar 4-

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


10

35 m, diameter rata-rata sebesar 15 m. Tidak ditemukan adanya potensi iritasi


pada amilum (BeMiller dkk., 2009).
3. Daya lekat
Daya lekat mengindikasikan seberapa baik bedak melekat pada kulit.
Daya lekat juga membantu menentukan daya tahan bedak (lasting power) (Mitsui,
1997). Daya lekat diperoleh dari penggunaan magnesium stearat.
Magnesium stearat (magnesium stearate). Magnesium stearat adalah
serbuk sangat halus, berwarna putih terang, hampir tidak terasa dikarenakan
densitas bulk yang rendah. Magnesium stearat memiliki sifat greasy dan mampu
melekat jika diaplikasikan pada kulit. Tidak ditemukan potensi iritasi ketika
diaplikasikan secara topikal (Rowe dkk., 2009).
4. Pewarna
Pewarna adalah bahan tambahan alam dalam sebuah produk kosmetik
dekoratif, seperti bedak. Fungsi utama pewarna adalah menyamarkan bintik atau
noda serta menghasilkan warna yang indah untuk menciptakan daya tarik.
Pewarna terbagi menjadi pewarna bahan organik sintetik, pigmen inorganik dan
pewarna alami (Mitsui, 1997).
Carotenoid adalah salah satu contoh dari pewarna alami. Carotenoid
merupakan pigmen yang disintesis oleh tanaman alga, bakteri fotosintetik, yang
berwarna kuning, orange dan merah dan larut dalam minyak (Asgar dan
Musaddad, 2006). Karoten dapat terdegradasi cepat mulai suhu 60C, cahaya dan
oksigen. Contoh karoten adalah -carotene, -carotene, -cryptoxanthin, lutein,
lycopene, zeaxanthin (Mortensen, 2009).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


11

5. Pengawet
Pengawet (preservative) adalah bahan untuk mencegah tumbuhnya
mikroorganisme yang bisa merusak produk atau tumbuh pada produk kosmetik
(Tranggono dkk., 2007). Bahan pengawet yang sering digunakan dalam dunia
farmasi salah satunya adalah metil paraben.
Metil paraben. Metil paraben digunakan secara luas sebagai pengawet
antimikroba dalam kosmetik, produk makanan dan produk farmasi. Dapat
digunakan dalam bentuk tunggal atau dikombinasikan dengan golongan paraben
atau dengan agen antimikroba lainnya. Pada kosmetik, metil paraben merupakan
bahan yang paling sering digunakan sebagai pengawet antimikroba (Rowe dkk.,
2009). Berdasarkan Annex VI, kadar maksimal metil paraben yang dapat
digunakan sebagai pengawet adalah sampai 0,4% di dalam produk hasil ester
tunggal dan 0,8% untuk campuran ester (Scientific Committee on Consumer
Products, 2005). Struktur metil paraben ditunjukkan pada Gambar 3.

Gambar 2. Struktur metil paraben


(Rowe dkk., 2009).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


12

F. Wortel
1. Keterangan botani
Wortel (Daucus carota L.) termasuk jenis tanaman sayuran umbi
semusim, berbentuk semak (perdu) yang tumbuh tegak dengan ketinggian antara
30 cm 100 cm atau lebih, tergantung jenis atau varietasnya. Tanaman wortel
berumur pendek yaitu berkisar antara 70 120 hari, tergantung pada varietasnya
(Cahyono, 2002).
Umbi wortel terbentuk dari akar tunggang yang berubah fungsi menjadi
tempat penyimpanan cadangan makanan (karbohidrat, albumin, lemak, vitamin,
mineral dan air). Ukuran umbi wortel bervariasi bergantung varietasnya. Umbi
yang berukuran besar berdiameter 6,3 cm sedangkan wortel yang berukuran kecil
berdiameter 3,5 cm. Berat umbi dapat mencapai 300 g sedangkan yang berukuran
kecil mempunyai berat 100 g (Cahyono, 2002).
2. Kandungan wortel
Berdasarkan angka yang tercantum pada daftar komposisi bahan
makanan yang disusun Direktorat Gizi Departemen Kesehatan RI, kandungan gizi
wortel dapat dilihat pada Tabel I.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


13

Tabel I. Komposisi kandungan gizi wortel per 100 g bahan


Bahan penyusun
Kandungan gizi
Kalori (kal)
42,00
Karbohidrat (g)
9
Lemak (g)
0,2
Albumin (g)
1
Kalsium (mg)
33
Fosfor (mg)
35
Besi (mg)
0,66
Vitamin A (SI)
835
Vitamin B (mg)
0,6
Vitamin C (mg)
1,9
Air (g)
88,20
Bagian yang dapat dimakan (%)
88.00
(Direktorat Gizi, 1979).
Menurut Cheng dkk., (cit., Dewi, 2012), pada jus wortel mengandung
62,5 g mL-1 -karoten; 27,6 g mL-1 -karoten; 6,0 g mL-1 lutein; 3,4 g mL-1
13-cis--karoten; 1,3 g mL-1 13,15 di-cis--karoten; 1,1 g mL-1 15-cis-karoten; 1,1 g mL-1 9-cis--karoten; 0,6 g mL-1 13-cis-lutein; 0,4 g mL-1 9-cislutein; 0,2 g mL-1 13--karoten; 0,2 g mL-1 9-cis--karoten.

G. Bahan Uji Iritasi


1. Asam salisilat
Asam salisilat dengan rumus molekul C7H6O3 merupakan serbuk hablur
ringan tidak berwarna atau serbuk berwarna putih, hampir tidak berbau, memiliki
rasa agak manis dan tajam. Dalam bidang farmasi biasa digunakan sebagai
keratolitikum dan antifungi (Dirjen POM, 1979). Menurut Kepala Badan POM
dalam Peraturan Kepala Badan POM (PerKBPOM) no. HK.03.1.23.08.11.07517
Tahun 2011 tentang Persyaratan Teknis Bahan Kosmetika, kadar maksimum asam
salisilat yang boleh digunakan dalam kosmetik adalah 3,0% untuk sediaan

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


14

perawatan rambut dibilas dan 2,0% untuk sediaan lainnya. Asam salisilat
mempunyai potensi iritasi yang tinggi pada konsentrasi tinggi, sehingga
digunakan konsentrasi 1,5% atau kurang pada krim kosmetik kulit. (Leyden dkk.,
2002). Struktur asam salisilat dapat dilihat pada Gambar 5.

Gambar 3. Struktur asam salisilat


(Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-Food Products, 2002).
2. Arbutin
Arbutin merupakan agen pemutih kulit yang efektif dan dapat berfungsi
sebagai antioksidan.

Arbutin terhidrolisis

menjadi

hidrokuinon,

dimana

hidrokuinon juga memiliki efek yang kuat dalam memutihkan kulit. Penggunaan
hidrokuinon dalam kosmetik jenis leave-on dilarang pada tahun 1999 karena dapat
menimbulkan efek buruk pada pigmentasi seperti ochronosis dan kanker kulit.
Efek pemutihan kulit dari arbutin berdasarkan inhibisi enzim tirosinase yang
merupakan enzim utama dalam biosintesis melanin. Arbutin meningkatkan
disintegrasi melanin sehingga warna kulit merata dan kulit menjadi terlihat lebih
cerah (Council of Europe, 2008). Kadar maksimum yang diperbolehkan adalah
sampai 7% dalam sediaan. Kadar 10% larutan -Arbutin dapat menimbulkan
sedikit potensi iritasi primer (Scientific Committee on Consumer Products, 2008).
Struktur arbutin dapat dilihat pada Gambar 6.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


15

Gambar 4. Struktur arbutin


(Council of Europe, 2008).
3. Sodium Lauryl Sulfate
Sodium Lauryl Sulfate (SLS) secara luas digunakan pada produk
kosmetik, formulasi sediaan oral dan sediaan topikal. SLS digolongkan sebagai
bahan yang dapat menyebabkan toksisitas moderat dengan efek toksisitas akut
termasuk iritasi pada kulit, mata, membrane mukosa, saluran pernapasan bagian
atas dan lambung. Jika pemakaian dilakukan berulang-ulang akan mengakibatkan
kekeringan dan pecah-pecah pada kulit, bahkan dapat menyebabkan dermatitis
kontak. Penggunaan SLS pada berbagai keperluan dapat dilihat pada Tabel II.
Tabel II. Penggunaan SLS pada berbagai keperluan
Penggunaan
Konsentrasi (%)
Emulsifier anionik
0,5-2,5
Detergen pada sampo
10
Pembersih topikal
1
Agen solubilisasi
>0,0025
Pelicin tablet
1,0-2,0
Wetting agent
1,0-2,0
(Rowe dkk., 2009).
Untuk sediaan topikal digunakan pada konsentrasi 0,1-12,7% (Michael
dan Ash, 2004). Pada uji okular akut, 10% SLS menyebabkan kerusakan korneal
pada mata kelinci. Pada uji Draize suatu produk yang mengandung 5,1% SLS
menyebabkan iritasi ringan, dan dengan konsentrasi 21% menyebabkan iritasi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


16

hebat. Berdasarkan studi iritasi kulit akut pada hewan disimpulkan bahwa 0,5% 10% SLS menyebabkan iritasi ringan. Aplikasi 10% - 30% menyebabkan korosi
kulit dan iritasi hebat. Untuk kontak jangka panjang pada kulit konsentrasi SLS
seharusnya tidak lebih dari 1% (Robinson dkk., 2010).

H. Slug Irritation Test


1. Slug Mucosal Irritation (SMI)
Slug Mucosal Irritation (SMI) dikembangkan di Laboratorium Teknologi
Farmasi (Ghent University, Belgium). Siput telanjang jenis Arion lusitanicus
dipilih sebagai hewan uji. Menurut Adriaens (cit., Dhondt, 2005), karena tubuh
siput yang tidak terlindung dari bahan iritan memproduksi mukus untuk
melindungi dirinya, maka produksi mukus siput dipilih sebagai poin kunci untuk
mengetahui potensi iritasi dari bahan iritan.
Sebagai tambahan, kerusakan jaringan dapat diprediksikan dengan
pelepasan albumin dan enzim dari tubuh siput. Produksi albumin, enzim Lactate
Dehydrogenase (LDH) dan Alkaline Phospatase (ALP) dipilih sebagai penanda
yang paling relevan untuk evaluasi kerusakan jaringan yang disebabkan oleh
bahan uji. (Adriaens, cit., Dhondt, 2005).
Secara umum, enzim ALP terdapat pada 3 daerah pada tubuh moluska
yaitu saluran pencernaan, organ excretory dan pada bagian mantel. Aktivitas ALP
akan meningkat jika terjadi kerusakan sel maupun infeksi pada snails dan slugs.
Enzim LDH merupakan enzim sitosolik dan akan dikeluarkan pertama kali saat
terjadi kerusakan jaringan (McComb dkk., 1979).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


17

SMI dapat digunakan sebagai skrining awal pada tahap riset dan
pengembangan formulasi sediaan baru untuk mengevaluasi toleransi lokal tanpa
menggunakan hewan mamalia. Uji SMI telah divalidasi sebelumnya untuk
skrining potensi iritan mata dari bahan-bahan kimia. Uji SMI

juga

direkomendasikan sebagai salah satu uji alternatif untuk menggantikan Uji Draize
(Adriaens, 2006).
2. Laevicaulis alte

Gambar 5. Laevicaulis alte


a. Klasifikasi
Regnum

: Animalia

Phylum

: mollusca

Classis

: gastropoda

Ordo

: systellommatophora

Familia

: veronicellidae

Genus

: laevicaulis

Species

: Laevicaulis alte Frussac, 1822


(Brodie dkk., 2012).

b. Deskripsi umum. Siput telanjang dengan nama latin Laevicaulis alte


(Gambar 7) masuk dalam famili Veronicellidae. Memiliki mantel yang

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


18

menutupi seluruh punggung sampai kepala; memiliki sepasang mata yang


dekat dengan tentakel anterior. Mata dan tentakel hewan dapat terlihat
ketika hewan dalam keadaan aktif. Mantel pada siput agak kasar dan pada
permukaannya terlihat ada titik-titik kecil. Mantel siput berwarna coklat tua
sampai kehitaman dengan garis pucat yang membujur di tengah-tengah
punggung siput (Barker dkk., 2005).
c. Keterangan biologis. Siput telanjang merupakan hewan hermaprodit dan
dapat berubah jenis kelamin dari jantan ke betina selama masa hidupnya.
Panjang tubuhnya berkisar antara 0,5 cm sampai dengan lebih dari 4 cm.
Populasi siput mencapai populasi maksimum pada saat musim hujan yaitu
mencapai 20 siput/m2 (Barker dkk., 2005).
d. Habitat. Siput telanjang hidup di darat, biasa ditemukan di sampah
dedaunan dan di bawah kayu yang sudah lapuk; hidup di dataran rendah
sampai dataran tinggi hutan dan padang rumput dengan kelembaban yang
tinggi (Barker dkk., 2005).

I. Spektrofotometri
Metode pengukuran menggunakan prinsip spektrofotometri berdasarkan
absorpsi cahaya pada panjang gelombang tertentu melalui suatu larutan yang
mengandung kontaminan yang akan ditentukan konsentrasinya. Prinsip kerja
metod ini adalah jumlah cahaya yang diabsorpsi oleh larutan sebanding dengan
konsentrasi kontaminan dalam larutan. Prinsip ini dijabarkan dalam Hukum Beer-

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


19

Lambert yang menghubungkan antara absorbansi cahaya dengan konsentrasi pada


suatu bahan yang mengabsorpsi berdasarkan persamaan berikut:
A = log (Iin/Iout) = (1/T) = a x b x c
A

= Absorbansi

Iin

= Intensitas cahaya yang masuk

Iout

= Intensitas cahaya yang keluar

= Transmitansi

= tetapan absorpsitivitas molar

= panjang jalur

= konsentrasi pada suatu bahan yang mengabsorpsi


(Lestari, 2007).

J. Validasi Alternatif Tes


Menurut Balls dkk. (1990), validasi dari sebuah metode alternatif dapat
didefinisikan sebagai proses dimana reliabilitas dan relevansi dari sebuah metode
alternatif terjamin untuk tujuan penelitian tersebut. Archer dkk. (1997),
mendeskripsikan bahwa sebuah metode untuk penggantian dari uji menggunakan
hewan meliputi uji sistem dan model prediksi. Model prediksi dikembangkan
dengan pengalaman dan metode statistika. Klasifikasi model prediksi dilakukan
dengan membuat prediksi pada skala kategori, sedangkan model matematik
dilakukan dengan membuat prediksi pada skala yang berulang (Worth dkk.,
2001).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


20

Relevansi dari metode dievaluasi menggunakan beberapa metode secara


statistik. Indeks, sensitifitas, dan spesifisitas dihitung untuk menentukan validasi
metode. Indeks merupakan jumlah bahan yang diklasifikasikan secara benar
melalui uji alternatif, dibagi dengan total bahan yang diuji. Sensitivitas (evaluasi
jumlah negatif palsu) adalah jumlah total bahan iritan yang diklasifikasikan secara
benar dengan uji alternatif, dibagi dengan jumlah total bahan iritan yang dites.
Spesifisitas (evaluasi jumlah positif palsu) adalah jumlah total bahan non-iritan
yang diklasifikasikan secara benar dengan uji alternatif, dibagi dengan jumlah
total bahan non-iritan yang diuji. Metode dinyatakan valid jika nilai sensitivitas
dan spesifisitas >60% (Fentem et al., cit., Dhondt, 2005).

K. Classification and Regression Tree (CART)


Classification and Regression Tree (CART) adalah suatu metode statistik
non-parametrik yang dapat menggambarkan hubungan antara variabel respon
(dependent variable) dengan satu atau lebih variabel prediktor (independent
variable). Menurut Breiman dkk. (1993), apabila variabel respon berbentuk
kontinu maka metode yang digunakan adalah metode regresi pohon (regression
tree), sedangkan apabila variabel respon memiliki skala kategorik maka metode
yang digunakan

adalah metode klasifikasi pohon (classification

tree).

Pembentukan pohon klasifikasi terdiri atas 3 tahap yang memerlukan learning


sample L.
Tahap pertama adalah pemilihan pemilah. Setiap pemilahan hanya
bergantung pada nilai yang berasal dari satu variabel independen. Tahap kedua

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


21

adalah penentuan simpul terminal. Simpul t dapat dijadikan simpul terminal jika
tidak terdapat penurunan keheterogenan yang berarti pada pemilahan, hanya
terdapat satu pengamatan (n=1) pada tiap simpul anak atau adanya batasan
minimum n serta adanya batasan jumlah level atau tingkat kedalaman pohon
maksimal. Tahap ketiga adalah penandaan label tiap simpul terminal berdasar
aturan jumlah anggota kelas terbanyak. Proses pembentukan pohon klasifikasi
berhenti saat terdapat hanya satu pengamatan dalam tiap simpul anak atau adanya
batasan minimum n, semua pengamatan dalam tiap simpul anak identik, dan
adanya batasan jumlah level/kedalaman pohon maksimal (Hartati, 2012).

Keterangan Empiris
Telah diminimalisir penggunaan hewan vertebrata untuk uji iritasi pada
sediaan farmasi. Tikus maupun kelinci sebagai hewan untuk uji iritasi telah
diminimalisir penggunaannya, sehingga dikembangkan cara lain untuk melakukan
uji iritasi.
Slug Mucosal Irritation assay (SMI) kemudian dikembangkan sebagai
salah satu alternatif untuk uji iritasi menggantikan Draize Test yang menggunakan
kelinci sebagai hewan uji oleh Adriaens pada tahun 2006. SMI dikembangkan
menggunakan hewan avertebrata slug (Arion lusitancius) yang mempunyai luas
permukaan mukosa yang besar. Slug Mucosal Irritation assay dapat memprediksi
toleransi lokal dari sediaan solid, semi-solid maupun liquid. Karena tubuh siput
yang tidak terlindung dari bahan iritan memproduksi mukus untuk melindungi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


22

dirinya, maka produksi mukus siput dipilih sebagai poin kunci untuk mengetahui
potensi iritasi dari bahan iritan.
Penelitian ini merupakan adaptasi dari penelitian yang dilakukan
Adriaens (2006) tentang Slug Mucosal Irritation Test. Parameter-parameter yang
digunakan antara lain produksi mukus, enzim ALP dan LDH serta protein
albumin. Potensi iritasi dapat diprediksi dari produksi mukus yang dihasilkan oleh
siput ketika diberi bahan uji. Kerusakan jaringan pada siput diprediksi dari
produksi enzim ALP dan LDH serta protein albumin.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

BAB III
METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian


Penelitian dengan judul Uji In Vivo dan Validasi Protokol Slug Irritation
Test pada Sediaan Bedak Tabur Amilum Manihot (Manihot utilissima L.)
menggunakan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus Carota L.) dengan
Metode Classification and Regression Tree (CART) merupakan jenis penelitian
eksperimental kuasi dan eksploratif.

B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah jenis bahan uji iritasi.
2. Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah sifat iritatif yang ditinjau dari
produksi mukus, albumin, LDH, dan ALP setelah diberi perlakuan bahan uji.
3. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah berat siput yang akan
digunakan untuk slug irritation test (3-4 g).
4. Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini adalah umur dan kondisi
patologis siput serta subjektivitas pengamatan.

C. Definisi Operasional
1. Iritasi adalah keadaan di mana siput mengeluarkan jumlah mukus yang lebih
banyak dari normal.

23

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


24

2. Mukus adalah lendir yang dikeluarkan oleh siput dan berada di luar tubuh
siput.
3. Siput atau slug adalah siput telanjang spesies Laevicaulis alte (FR), mantel
berwarna hitam dan memiliki berat 3-4 g.
4. Bedak wajah (face powder) merupakan kosmetik dekoratif yang digunakan
untuk pemakaian pada wajah.
5. Bedak tabur (loose powder) merupakan bedak berbentuk serbuk yang
digunakan untuk pemakaian pada wajah.
6. Umbi wortel yang digunakan merupakan jenis wortel nantes.
7. Sari wortel (juice wortel) diperoleh dari wortel dengan menggunakan blender
dan disaring hingga tidak ada ampasnya.

D. Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah siput telanjang
(3-5 g) spesies Laevicaulis alte (FR) yang diperoleh dari daerah Ungaran, Jawa
Tengah, umbi wortel yang diperoleh dari Lottemart Wholesale Yogyakarta,
amilum manihot (PT. Brataco Chemica Yogyakarta), titanium dioksida (PT.
Brataco Chemica Yogyakarta), Sodium Lauryl Sulfate (SLS) (PT. Brataco
Chemica Yogyakarta), arbutin (PT. Brataco Chemica Yogyakarta), metil paraben,
magnesium stearat, asam salisilat farmasetis, reagen LDH (DiaSys), reagen ALP
(ReiGed Diagnostics), reagen albumin (ReiGed Diagnostics), Phospate Buffer
Saline (PBS), larutan NaCl 0,9% dan akuades. Komposisi reagen ALP, LDH dan
albumin dapat dilihat pada Tabel III, IV dan V.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


25

Tabel III. Komposisi dan konsentrasi reagen ALP


Komposisi
Konsentrasi (mM)
Diethanolamine
1,0
Reagen 1
Magnesium chloride
0,5
p- Nitrophenylphosphatase
Reagen 2
10,0
pH 10,4 0,2

Tabel IV. Komposisi dan konsentrasi reagen LDH


Komposisi
pH Konsentrasi (mmol/ L)
Phosphate buffer 7,5
64
Reagen 1
Pyruvate
0,80
Goods buffer
9,6
Reagen 2
NADH
1,0

Tabel V. Komposisi dan konsentrasi reagen albumin


Komposisi
Konsentrasi (mM)
Bromcresol green
0,25
Succinat Buffer
85
Surfactant
pH 4,20 0,1

E. Alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah blender, oven
Memmert, Software statistic RStudio, alat-alat gelas (Iwaki TE-32 Pirex
Unmderli), neraca analitik Mettler-Todelo AB204, indikator pH universal Merck,
Spektrofotometer UV-VIS Shimadzu tipe UV mini-1240, kain saring dan kertas
saring Whatman 0,45 m.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


26

F. Tata Cara Penelitian


1. Formulasi bedak tabur
Formula pada penelitian ini menggunakan formula sediaan bedak tabur
dari penelitian yang dilakukan oleh Dewi (2012). Formula sediaan bedak tabur
dapat dilihat pada Tabel VI.
Tabel VI. Formula Acuan (Dewi, 2012)
Formula
Jumlah yang Digunakan (g)
Titanium dioksida
6
Metil paraben
0,3
Magnesium stearat
3
Sari wortel
150
Amilum manihot
92,7

2. Pengumpulan dan penyiapan sari umbi wortel (Daucus carota L.)


Umbi wortel diperoleh dari Lottemart Wholesale Yogyakarta. Umbi
dicuci dengan air mengalir kemudian dilakukan sortasi basah. Umbi dikupas
kulitnya tipis-tipis. Umbi ditimbang bobotnya lalu dilakukan pengambilan sari
menggunakan blender kemudian disaring untuk menghilangkan ampas sehingga
didapat sari wortel murni.
3. Penghomogenan dan pewarnaan bedak tabur
Bahan-bahan bedak dihomogenkan dengan bantuan blender mulai dari
bobot yang terkecil. Sebanyak 150 ml ekstrak wortel ditambahkan dan didiamkan
selama 6 hari untuk mewarnai komponen bedak. Kandungan air dikeringkan
dengan oven pada suhu 40-45C selama 3 hari. Dilakukan pengecilan ukuran
serbuk bedak dengan menggunakan blender kering dan serbuk bedak diayak
dengan ayakan dengan nomer Mesh 40.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


27

4. Pembuatan kontrol positif dan kontrol negatif


Tabel VII. Formula bahan uji
Bahan
Amilum
Magnesium stearat
Titanium dioksida
Sari wortel
Metil paraben
SLS
Asam salisilat
Arbutin

F1
1g
-

F2
1g
-

F3
F4
F5
F6
92,7 g 92,7 g 92,7 g 92,7 g
3g
3g
3g
3g
6g
6g
6g
6g
150 g
0,3 g 0,3 g 0,3 g 0,3 g
1g
0,5 g
5g

Tabel VII. Keterangan: F1=amilum; F2=magnesium stearat; F3=SLS;


F4=asam salisilat; F5=sediaan bedak tabur; F6=arbutin. Kontrol positif = F3;
Kontrol negatif = F1, F2, F4, F6

Bahan-bahan yang digunakan sebagai kontrol positif yaitu SLS,


dihomogenkan dengan basis dan bahan tambahan yang digunakan kecuali sari
umbi wortel. Untuk kontrol negatif digunakan amilum manihot, asam salisilat,
arbutin dan magnesium stearat. Bahan uji dibuat dengan konsentrasi 1% untuk
SLS, asam salisilat dengan konsentrasi 0,5% dan arbutin dengan konsentrasi 5%.
5. Slug Irritation Test
a. Pengumpulan dan determinasi siput
Siput

diperoleh dari wilayah Perumda, Ungaran,

Kabupaten

Semarang. Determinasi dilakukan dengan mencocokan karakteristik siput


dengan literatur. Untuk klasifikasi spesies siput, dilakukan pembedahan
untuk mengetahui bentuk alat kelamin siput sebagai pembeda yang khas
berdasarkan literatur. Siput yang digunakan untuk prosedur uji adalah siput
yang memiliki berat antara 3-4 g.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


28

b. Slug Irritation Test


Uji iritasi menggunakan slug irritation test diadaptasi dari prosedur uji
Slug Mucosal Test mengacu pada penelitian yang dilakukan oleh Adriaens
(2006). Uji iritasi dievaluasi dengan menempatkan siput pada 1 g bahan uji
dengan konsentrasi bahan uji amilum 100%, magnesium stearat 100%, SLS
1%, asam salisilat 0,5% dan arbutin 5% dalam periode waktu 60 menit dan
diukur jumlah lendir diproduksi. Masing-masing siput dan cawan petri
ditimbang. Bahan uji dimasukkan ke dalam cawan petri, kemudian siput
diletakkan di atas bahan uji dan ditunggu selama 60 menit. Siput kemudian
dipindah ke cawan petri baru, kemudian ditambahkan 1 ml Phospate Buffer
Saline (PBS) di dekat bagian bawah tubuh siput dan didiamkan selama 60
menit untuk menarik biomarker yang dikeluarkan oleh siput (ALP, LDH
dan albumin). Setelah 60 menit, cairan PBS yang telah kontak dengan tubuh
siput ditampung dalam microtube.
c. Pengukuran kadar albumin
Pengukuran kadar albumin menggunakan metode spektrofotometri.
Sebanyak 8 l mukus yang diproduksi oleh siput setelah diberi PBS diambil
dan ditambahkan dengan 800 l reagen albumin dan diencerkan
menggunakan akuades sebanyak 3200 l. Komposisi reagen albumin
disajikan pada Tabel V. Absorbansi dibaca pada panjang gelombang 630
nm.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


29

d. Pengukuran ALP
Pengukuran kadar ALP menggunakan metode spektrofotometri.
Mukus yang diproduksi setelah ditambahkan PBS diambil 20 l,
dimasukkan ke dalam labu ukur 5 ml, ditambahkan reagen pertama
sebanyak 800 l dan reagen kedua sebanyak 200 l, kemudian ad dengan
akuades hingga tanda batas 5 ml. Komposisi reagen ALP disajikan pada
Tabel III. Larutan didiamkan selama 3 menit dan diukur. Pengukuran
absorbansi dilakukan kembali pada waktu 4, 5 dan 6 menit. Absorbansi
dibaca pada panjang gelombang 405 nm.
e. Pengukuran LDH
Pengukuran kadar albumin menggunakan metode spektrofotometri.
Mukus yang diproduksi setelah ditambahkan PBS diambil 20 l,
dimasukkan kedalam labu ukur 5 ml, ditambahkan reagen pertama sebanyak
800 l dan reagen kedua 200 l, kemudian ad dengan NaCl 0,9% hingga
tanda batas 5 ml. Komposisi reagen LDH disajikan pada Tabel IV. Larutan
didiamkan selama 1 menit dan diukur. Pengukuran absorbansi dilakukan
kembali pada waktu 2, 3 dan 4 menit. Absorbansi dibaca pada panjang
gelombang 340 nm.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


30

G. Analisis hasil
1. Validasi protokol slug irritation test
a. Perhitungan persen mukus
% mukus =

bobot mukus yang dikeluarkan


x 100%
bobot siput

b. Perhitungan ALP
ALP [U/L] = absorbansi/menit x faktor koresponding (3300)
c. Perhitungan albumin
Albumin

Absorbansi sampel
g
dL = absorbansi standar x konsentrasi standar ( dL)

d. Perhitungan aktivitas LDH


Aktivitas LDH [U/L] = absorbansi/menit x faktor koresponding (10.080)
e. Penentuan nilai cut off
Dicari nilai cut off dari faktor yang digunakan untuk prediksi respon
iritasi berdasarkan variabel persen mukus, kadar ALP, kadar albumin, dan
kadar LDH menggunakan Classification And Regression Tree pada program
RStudio.
f. Penentuan jumlah data true positive, false positive, true negative, false
negative
Data slug irritation test diprediksi sebagai iritan maupun non-iritan
sesuai nilai cut off dari faktor yang digunakan. Dinyatakan true positive,
false positive, true negative, false negative jika :

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


31

Tabel VIII. Confusion Matrix

Literatur

Prediksi CART
Iritan

Non-iritan

Iritan

true positive

false negative

Non-iritan

false positive

true negative

g. Perhitungan nilai spesifisitas dan sensitivitas


TN

1) Spesifisitas = TN+FP
TP

2) Sensitivitas = TP+FN
Keterangan:
TP = True Positive
TN = True Negative
FP = False Positive
FN = False Negative
2. Prediksi sifat iritatif sediaan bedak tabur
Jika nilai sensitivitas dan spesifisitas metode dengan prediksi CART
>60% maka dapat dilakukan prediksi sifat iritatif dari sediaan. Prediksi dilakukan
sesuai dengan faktor klasifikasi dan nilai cut off yang didapatkan dari metode
CART.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


32

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Formulasi
Formula yang digunakan pada penelitian ini adalah formula bedak tabur
acuan dari Dewi (2012). Bahan-bahan yang digunakan dalam pembuatan bedak
tabur antara lain amilum manihot, magnesium stearat, titanium dioksida, metil
paraben dan sari wortel. Sedian bedak tabur akan diuji potensi iritasinya
menggunakan Slug Irritation Test jika protokol telah dinyatakan valid dengan
metode Classification and Regression Tree (CART).

B. Pembuatan Bedak Tabur


Sebelum dilakukan pencampuran komponen-komponen bedak tabur, hal
yang pertama dilakukan adalah pembuatan sari umbi wortel. Wortel dipotongpotong kemudian dicuci bersih dengan air mengalir. Wortel yang sudah bersih
kemudian dihancurkan menggunakan blender untuk mendapatkan sari wortel
yang diinginkan. Tidak digunakan juice extractor dikarenakan keterbatasan alat
penelitian. Untuk memisahkan sari wortel dengan ampasnya digunakan kain
saring.
Penghomogenan sari wortel dilakukan dengan cara diaduk. Proses
pencampuran komponen bedak tabur yang meliputi amilum, titanium dioksida,
dan metil paraben dilakukan dengan menggunakan blender. Hal ini bertujuan agar
pencampuran lebih homogen dan praktis apabila dibandingkan dengan

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


33

penggunaan mortir dan stamper. Pencampuran bahan dilakukan dengan urutan


kuantitas bahan yang kecil hingga kuantitas yang terbesar yaitu metil paraben,
titanium dioksida dan amilum dengan tujuan mempermudah pencampuran bahan
sehingga didapatkan campuran yang homogen. Penambahan sari umbi wortel
dilakukan setelah semua bahan tercampur.
Sari wortel kemudian dicampur menggunakan blender dengan komponen
bedak lainnya kecuali magnesium stearat. Digunakan 150 g sari wortel dalam
setiap

100

sediaan

bedak

tabur.

Penghomogenan

berguna

untuk

menghomogenkan komponen-komponen bedak tabur dan untuk memperkecil


ukuran partikel. Penghomogenan dilakukan selama 1 menit yang merupakan
waktu optimal penghomogenan serbuk mengacu pada penelitian yang dilakukan
oleh Dewi (2012).
Setelah komponen bedak terbasahi sempurna, dilakukan pendiaman
selama 6 hari pada suhu kamar yang bertujuan agar sari wortel dapat mewarnai
seluruh komponen bedak tabur. Pengeringan dilakukan setelah pendiaman 6 hari
di oven dengan suhu tidak lebih dari 45C karena senyawa karotenoid dapat
terdegradasi pada pemanasan tinggi di atas 60C (Ruswanti, 2010). Untuk
meminimalkan degradasi karotenoid, digunakan suhu 40-45C. Pengeringan
dilakukan selama 3 hari.
Setelah dilakukan pengeringan, serbuk bedak akan membentuk cake,
dikarenakan komponen air sudah menguap pada saat pemanasan. Cake yang
sudah kering kemudian dihaluskan dan dihomogenkan kembali menggunakan
blender. Waktu yang digunakan untuk penghomogenan tidak boleh terlalu lama

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


34

karena proses penghomogenan menggunakan blender akan menghasilkan energi


panas yang dikhawatirkan dapat mendegradasi senyawa karotenoid pada bedak.
Penambahan magnesium stearat dilakukan di akhir pembuatan bedak
dikarenakan sifat nonpolar yang dimiliki magnesium stearat. Jika penambahan
dilakukan bersamaan dengan bahan lainnya, maka magnesium stearat tidak bisa
bercampur dengan bahan lain. Pencampuran dilakukan menggunakan blender
selama 1 menit untuk meminimalisir kontak senyawa karotenoid dengan panas
yang dihasilkan blender.

C. Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif Sediaan


Kontrol positif dan kontrol negatif dibuat dengan prosedur yang sama
dengan pembuatan sediaan bedak tabur (kecuali amilum manihot dan magnesium
stearat) tanpa menggunakan sari wortel. Seluruh bahan-bahan tanpa sari wortel
dihomogenkan menggunakan blender dari kuantitas bahan terkecil sampai
kuantitas bahan terbesar. Penghomogenan dilakukan selama 1 menit. Tidak
dilakukan proses pendiaman dan pemanasan karena pada kontrol positif tidak
digunakan pewarna dari sari wortel.
Amilum dan magnesium strearat digunakan sebagai bahan uji karena
kedua bahan tersebut terdapat dalam formula sediaan bedak tabur. Amilum
digunakan sebagai komponen daya serap bedak sedangkan magnesium stearat
digunakan sebagai komponen daya lekat pada bedak. Tidak ditemukan potensi
iritasi pada amilum dan magnesium stearat sehingga kedua bahan ini dapat
digunakan sebagai kontrol negatif (BeMiller dkk., 2009; Rowe dkk., 2009).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


35

Sodium Lauryl Sulfate (SLS) dibuat dengan kadar 1% dalam 100 g


sediaan. Berdasarkan studi iritasi kulit akut pada hewan disimpulkan bahwa 0,5%
- 10% Sodium Lauryl Sulfate menyebabkan iritasi ringan (Robinson dkk., 2010).
Sodium Lauryl Sulfate (SLS) dengan kadar 1% digunakan karena mampu
mengiritasi siput tetapi tidak membuat siput mati. Pada tahap orientasi digunakan
kadar 1, 2 dan 5%. Hasilnya siput yang diberi SLS kadar 2 dan 5% mati,
sedangkan pada kadar 1% siput tetap hidup. Jika siput mati selama penelitian,
maka mukus yang sudah dihasilkan tidak bisa digunakan karena siput akan
berhenti memproduksi ALP, albumin dan LDH yang akan diukur sebagai
parameter kerusakan jaringan pada siput.
Asam salisilat dibuat dengan kadar 0,5% dalam 100 g sediaan. Dalam
kosmetik, penggunaan asam salisilat dibatasi maksimal 2% karena penggunaan
berlebihan akan menyebabkan iritasi pada kulit (Kepala Badan Pengawasan Obat
dan Makanan, 2011). Asam salisilat dengan kadar 0,5% digunakan karena asam
salisilat dengan kadar 0,5% tidak membuat siput mati. Pada tahap orientasi
digunakan kadar 0,5, 1, 1,5 dan 2%. Hasilnya siput yang diberi asam salisilat
kadar 1, 1,5 dan 2% mati, sedangkan pada kadar 0,5% siput tetap hidup.
Kontrol negatif arbutin dibuat dengan kadar 5% dalam 100 g sediaan.
Digunakan 5% karena batas penggunaan arbutin pada sediaan topikal adalah 7%
(Scientific Committee on Consumer Products, 2008). Penggunaan arbutin dengan
kadar 5% dianggap tidak menimbulkan iritasi dan dapat digunakan sebagai
kontrol negatif.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


36

D. Slug Irritation Test


1. Pengumpulan dan determinasi siput
Siput diperoleh dari wilayah Perumda, Ungaran, Kabupaten Semarang.
Populasi siput paling banyak ditemukan ketika musim hujan. Siput ditempatkan di
wadah plastik berlubang dan diberi makan sayuran. Determinasi dilakukan dengan
mencocokan karakteristik siput dengan literatur. Determinasi siput dilakukan
untuk menentukan spesies siput yang digunakan. Perlu dilakukan determinasi
karena perbedaan spesies siput dapat menyebabkan perbedaan data yang
didapatkan. Untuk klasifikasi spesies siput, dilakukan pembedahan untuk
mengetahui bentuk alat kelamin siput sebagai pembeda yang khas berdasarkan
literatur. Hasil determinasi (Lampiran 8) menyatakan bahwa siput yang digunakan
merupakan jenis Laevicaulis alte.
2. Slug Irritation Test
Pada Slug Irritation Test, siput yang sudah ditimbang kemudian
diletakkan di cawan petri yang sudah dibersihkan dan ditimbang sebelumnya.
Siput diberi perlakuan dengan diberi bahan-bahan uji yaitu amilum, magnesium
stearat, Sodium Lauryl Sulfate, asam salisilat, sediaan bedak tabur dan arbutin
selama 60 menit. Selama 60 menit perlakuan, siput akan memproduksi mukus
sebagai mekanisme pertahanan diri. Semakin iritatif suatu bahan seharusnya
produksi mukus akan semakin banyak karena produksi mukus pada siput
merupakan mekanisme pertahanan diri untuk melindungi seluruh bagian tubuh
siput dari bahan iritan. Oleh karena itu produksi mukus dapat digunakan untuk
melihat adanya potensi iritasi suatu bahan.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


37

Setelah 60 menit perlakuan, siput dibersihkan dari sisa sediaan


menggunakan cotton bud kemudian dipindahkan ke cawan petri baru. Siput diberi
Phospate Buffer Saline (PBS) pH 7,4 dan dibiarkan selama 60 menit. PBS
berfungsi untuk menarik biomarker dari siput sebagai respon kerusakan jaringan.
Sampel PBS kemudian diuji menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Didapatkan
nilai absorbansi masing-masing sampel untuk 3 jenis variabel yaitu ALP, LDH
dan albumin (data dapat dilihat pada Lampiran 4). Nilai absorbansi kemudian
dikonversi menjadi kadar masing-masing variabel.
Tabel IX. Data slug irritation test

Magnesium stearat

Amilum manihot

Bahan Uji

Replikasi
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Persen mukus
(%)
4,412
5,561
2,927
4,276
1,379
3,148
8,477
9,845
3,598
0,006
1,054
0,525
0,147
0,868
-4,481
1,206
0,427
1,461
1,100
0,906

LDH
(U/L)
-3,360
0,000
-3,360
3,360
0,000
10,080
-3,360
0,000
-3,360
13,440
0,000
0,000
1,100
0,000
1,100
0,000
-1,100
-1,100
0,000
-2,200

ALP
(U/L)
11,000
12,100
9,900
5,500
15,400
3,300
4,400
5,500
19,800
12,100
9,900
4,400
11,000
12,100
14,300
9,900
11,000
2,200
13,200
11,000

Albumin
(g/dL)
-0,208
0,127
0,509
0,106
0,172
0,172
0,220
0,110
0,157
-0,110
0,081
0,173
0,451
0,053
0,172
0,172
0,094
0,157
0,110
-0,055

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


38

Tabel IX. Data slug irritation test (lanjutan)

Arbutin

Sediaan

Sodium Lauryl Sulfate

Bahan Uji

Replikasi
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Persen mukus
(%)
3,837
4,500
5,519
4,602
3,447
3,660
6,278
10,277
27,397
6,791
2,168
4,535
9,040
10,799
8,209
10,814
6,146
10,031
10,632
8,445
4,922
0,955
1,496
0,170
1,861
2,048
1,002
1,370
1,712
3,045
3,350

LDH
(U/L)
-3,360
-16,800
-6,720
6,720
-3,360
0,000
-3,360
3,360
-6,720
-3,360
-3,360
0,000
-3,360
3,360
13,440
0,000
16,800
0,000
-3,360
0,000
0,000
0,000
3,360
3,360
3,360
3,360
6,720
10,080
-23,520
0,000
0,000

ALP
(U/L)
33,000
18,700
5,500
29,700
16,500
24,200
27,500
2,200
8,800
23,100
9,900
8,800
9,900
13,200
8,800
11,000
7,700
6,600
4,400
7,700
6,600
7,700
24,200
16,500
9,900
7,700
6,600
9,900
13,200
7,700
4,400

Albumin
(g/dL)
0,081
0,520
0,497
0,145
0,185
0,185
0,173
0,157
0,157
-0,152
-0,028
0,092
0,520
0,509
0,198
0,145
0,172
0,173
0,110
0,235
0,014
0,092
0,497
0,509
0,158
0,185
0,172
0,110
0,157
0,173
0,083

Parameter persen mukus dihitung dari produksi mukus yang dihasilkan


dibagi dengan bobot siput kemudian dikalikan 100%. Prinsip pengukuran ALP
pada penelitian ini adalah mengukur kecepatan pembentukan p-nitrofenol dari

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


39

reaksi antara reagen dan sampel uji. Jumlah p-nitrofenol yang terukur secara
fotometrik sebanding dengan jumlah ALP pada sampel. Jika pada sampel terdapat
enzim ALP, maka enzim tersebut akan mengubah p-nitrofenilfosfat (terdapat pada
reagen) menjadi p-nitrofenol. Reaksi ditunjukkan pada reaksi (1).
P-nitrofenilfosfat + H2O

ALP

Fosfat + P-nitrofenol

(1)

Parameter ALP dihitung dari selisih absorbansi permenit dikalikan dengan faktor
koresponding yang tertera pada petunjuk kerja reagen ALP yaitu sebesar 3.300.
Prinsip pengukuran LDH adalah dengan mengubah piruvat dan NADH
pada reagen yang digunakan menjadi laktat dan NAD+ yang akan dibaca pada
panjang gelombang 340 nm. Reaksi ditunjukkan pada reaksi (2).
Piruvat + NADH

LDH

Laktat + NAD+

(2)

Parameter LDH dihitung dari selisih absorbansi permenit dikalikan dengan faktor
koresponding yang tertera pada petunjuk kerja reagen LDH yaitu sebesar 10.080.
Prinsip pengukuran albumin adalah membuat kompleks Bromocresol
Green dengan albumin yang akan dibaca pada panjang gelombang 630 nm.
Reaksi dapat dilihat pada reaksi (3).
Bromocresol green (BCG) + albumin

Kompleks BCG-albumin (3)

Parameter albumin dihitung dari absorbansi sampel dibagi dengan absorbansi


standar kemudian dikalikan dengan konsentrasi standar yang digunakan yaitu 4
g/dL. Data slug irritation test (Tabel IX) akan digunakan untuk validasi
menggunakan metode Classification and Regression Tree (CART).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


40

3. Validasi menggunakan metode Classification and Regression Tree (CART)


Validasi protokol dilakukan dengan menggunakan metode Classification
and Regression Tree (CART) pada program RStudio. Dilakukan prediksi sifat
iritatif bahan uji dengan memasukkan data persen mukus, kadar ALP, LDH dan
albumin sebagai faktor penentu klasifikasi. Persen mukus digunakan untuk
memprediksi potensi iritasi, sedangkan kadar ALP, LDH dan albumin digunakan
untuk memprediksi kerusakan jaringan pada siput.
Ada beberapa tipe splitting dalam CART. Pada penelitian ini digunakan 2
tipe yaitu tipe class dan tipe anova. Keduanya dibandingkan dengan melihat
output yang dihasilkan dari masing-masing tipe. Output yang diharapkan adalah
output berupa pengelompokan dengan nilai binary (0 dan 1).
Berdasarkan data pada Lampiran 6, baik menggunakan tipe class maupun
tipe anova, keduanya memberikan variabel penting yang sama dengan nilai cut off
yang juga sama, yaitu variabel persen mukus dengan nilai cut off sebesar 0,0325.
Cut off pada CART merupakan titik di mana sensitivitas dan spesifisitas suatu
metode mencapai titik maksimal. Karena variabel yang digunakan hanya persen
mukus, maka dapat disimpulkan bahwa bahan uji yang digunakan memiliki
potensi iritasi, tetapi tidak menimbulkan kerusakan jaringan pada siput. Penentuan
parameter yang digunakan didapatkan dari validasi menggunakan metode CART.
Validasi menggunakan metode CART dapat dilihat pada Lampiran 7.
Prediksi

dilanjutkan

dengan

membuat

tree

construction

untuk

menentukan klasifikasi masing-masing bahan berdasarkan variabel yang sudah

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


41

ditentukan. Perbedaan antara keduanya terlihat ketika data diplot ke dalam bentuk
tree construction.

a
b
Gambar 6. Classification (a) and Regression (b) Tree (CART)
Classification Tree memiliki output berupa kelas. Pada Gambar 6(a).
nilai 0 dan 1 menunjukkan kelas. Nol menunjukkan kelas non-iritan dan satu
menunjukkan kelas

iritan.

Bahan

uji

dengan persen

mukus

<0,0325

diklasifikasikan sebagai bahan non-iritan dan bahan uji dengan persen mukus
0,0325 diklasifikasikan sebagai bahan iritan. Dari 50 data, didapatkan 31 masuk
kelas 0 (non-iritan) dan 19 masuk kelas 1 (iritan).
Regression Tree memiliki output berupa rata-rata dari node (nilai
kontinu). Pada Gambar 6(b), nilai 0 dan 0,5263 merupakan rata-rata dari node.
Nilai 0,5263 menunjukkan bahwa bahan uji yang masuk ke dalam kelompok iritan
tidak mutlak bernilai 1. Karena penelitian ini bertujuan salah satunya untuk
menentukan penggolongan bahan uji dalam bentuk kelas, maka lebih dipilih tipe
class untuk menggambarkan klasifikasinya. Tipe anova tidak dipilih karena tidak
diharapkan output berbentuk nilai kontinu.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


42

Untuk melihat sensitivitas dan spesifisitas metode, dilakukan perhitungan


nilai positif benar (true positive), negatif benar (true negative), positif palsu (false
positive) dan negatif palsu (false negative) dengan menggunakan confusing
matrix.
Tabel X. Confusion Matrix prediksi CART

Literatur

Prediksi CART
Iritan

Non-iritan

Iritan

10

Non-iritan

31

Data dikatakan positif benar (true positive) jika pada literatur bahan
dikatakan iritan dan prediksi CART bahan dikatakan iritan. Data dikatakan negatif
benar (true negative) jika pada literatur bahan dikatakan non-iritan dan pada
prediksi CART dikatakan non-iritan. Data dikatakan positif palsu (false positive)
jika pada literatur bahan dikatakan non-iritan dan pada prediksi CART bahan
dikatakan iritan. Data dikatakan negatif palsu (false negative) jika pada literatur
bahan dikatakan iritan dan prediksi CART bahan dikatakan non-iritan.
Menurut Fentem et al. (cit., Dhondt, 2005), metode Slug Irritation Test
dinyatakan valid jika nilai spesifisitas dan sensitivitas >60%. Pada penelitian
didapatkan nilai spesifisitas sebesar 77,5% dan nilai sensitivitas 100% untuk
kedua metode. Dapat disimpulkan bahwa metode valid untuk menentukan sifat
iritatif sediaan bedak tabur.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


43

4. Prediksi sifat iritatif sediaan bedak tabur


Sediaan bedak tabur diprediksi sifat iritatifnya menggunakan metode
yang telah divalidasi sebelumnya. Data persen mukus sediaan bedak tabur
kemudian dibandingkan dengan nilai cut off yang didapatkan dari CART yaitu
0,0325.
Tabel XI. Perbandingan nilai cut off dengan
persen mukus sediaan bedak tabur
Replikasi
Persen mukus sediaan bedak tabur (x100%) Nilai cut off
1
0,045
2
0,090
3
0,108
4
0,082
5
0,102
6
0,061
0,0325
7
0,100
8
0,106
9
0,084
10
0,049
Mean SEM
0,0836 0,01

Dari Tabel XI, dapat dilihat pada 10 replikasi yang dilakukan, nilai
persen mukus sediaan bedak tabur lebih besar dari nilai cut off yang didapatkan.
Dapat disimpulkan bahwa sediaan bedak tabur yang diuji memiliki potensi iritasi.
Pada penelitian yang dilakukan Dewi (2012), telah dilakukan Uji Draize
dengan menggunakan hewan uji kelinci. Hasil menunjukkan bahwa sediaan bedak
tabur yang digunakan tidak mengiritasi. Jika kedua data dibandingkan, terjadi
perbedaan kesimpulan. Hal ini disebabkan karena metode Slug Irritation Test
yang sudah valid dinilai lebih sensitif untuk pengujian iritasi sediaan bedak tabur
dibandingkan dengan uji iritasi pada kelinci, sehingga bahan yang mungkin tidak
mengiritasi kelinci dapat mengiritasi siput. Metode Slug Irritation Test dikatakan
lebih sensitif karena barrier pada tubuh siput tidak sekuat barrier pada kulit

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


44

kelinci. Uji kelinci tetap harus dilakukan sebagai pembanding karena sediaan yang
diuji merupakan sediaan topikal dan kulit kelinci lebih dapat menggambarkan
kulit manusia jika dibandingkan dengan bagian luar siput.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN

A. KESIMPULAN
1. Protokol slug irritation test menunjukkan hasil yang valid untuk pengujian
iritasi sediaan bedak tabur amilum manihot menggunakan pewarna carotenoid
dari umbi wortel dengan metode Classification and Regression Tree (CART)
baik dengan tipe splitting class maupun anova dengan nilai spesifisitas 77,5%
dan sensitivitas 100%.
2. Berdasarkan nilai cut off yang didapatkan dari prediksi CART, sediaan bedak
tabur amilum manihot menggunakan pewarna carotenoid dari umbi wortel
diprediksi bersifat iritatif sebagai sediaan topikal.

B. SARAN
1. Kontrol positif dan kontrol negatif yang digunakan perlu diperbanyak agar
hasil yang didapatkan semakin valid dan dapat merepresentasikan bahan-bahan
yang digunakan di pasaran.
2. Perlu diseimbangkan proporsi antara kontrol positif dan kontrol negatif dengan
menambahkan bahan iritan untuk kontrol positif dan bahan non-iritan untuk
kontrol negatif dengan klasifikasi yang benar.
3. Perlu dilakukan optimasi langkah kerja dari preparasi sampel sampai sampel
siap diukur.

45

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR PUSTAKA
Adriaens, E., 2006, The Slug Mucosal Irritation assay: an alternative assay for
local tolerance testing, Research, pp. 1-9.
Archer, G., Balls, M., Bruner, L.H., Curren, R.D., Fentem, J.H., Holzhtter, H.G.,
dkk., 1997, The validation of toxicological prediction models, ATLA, 25,
pp. 505-516.
Asgar, A., dan Mussadad, 2006, Optimasi, Cara, Suhu, dan Lama Blansing
sebelum Pengeringan pada Wortel, J. Hort., 16(3), hal. 245-252.
Balls, M., Goldberg, A.M., Fentem, J.H., Broadhead, C.L., Burch, M.F.W.,
Fraizer, J.M., dkk., 1990, The Three Rs: The Way Forward: The Report
and Recommendations of ECVAM Workshop, Utrecht University, The
Netherlands.
Barker, G.M., Price, R. dan Briggs, C., 2005, Priorities for addition to the fijian
protected natural areas network: an assasment based on complementary
in land snail assemblages, New Zealand Landcare Research contract
report prepared for Wildlife Conservation Society, Suva, p. 162.
BeMiller J. dan Whistler R., 2009, Starch: Chemistry and Technology, Elsevier,
USA, pp. 527, 544, 550.
Breiman, L., Friedman J.H., Olshen R.A., dan Stone C.J., 1993, Classification
And Regression Tree, Chapman And Hall, New York.
Brodie, G., dan Barker, G.M., 2012, Laevicaulis alte (Frussac, 1822), Family
Veronicellidae, USP Introduced Land Snails of The Fiji Island Fact Sheet
Series, No. 3.
Cahyono, B., 2002, Wortel Teknik Budidaya dan Analisa Usaha Tani, Kanisius,
Yogyakarta, hal. 15, 18-19.
Casati, S., Worth, A., Amcoff, P. dan Whelan, M., 2013, EURL ECVAM Strategy
for Replacement of Animal Testing for Skin Sensitisation Hazard
Identification and Classification, Publications Office of the European
Union, Luxembourg, p. 3.
Council of Europe, 2008, Active ingredients used in cosmetic: safety survey,
Council
of
Europe
Publishing,
Strasbourg,
pp.
33-34.

46

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


47

Dewi, I.C., 2012, Perbandingan Sifat Fisis Bedak Tabur Berbahan Dasar Amilum
Solani (Solanum tuberosum L.) dan Amilum Manihot (Manihot
utilissima L.) dengan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus
carota L.), Skripsi, 23-24, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Dhondt, M., 2005, Optimisation and Validation of An Alternative Mucosal
Irritation Test, Dissertation, Ghent University, Belgium, 2, 14, 36.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1979, Farmakope
Indonesia, jilid III, Departemen Keseharan Republik Indonesia, Jakarta,
hal. 56.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope
Indonesia, jilid IV, Departemen Keseharan Republik Indonesia, Jakarta,
hal. 107-108.
Fentem, J.H., Briggs, D., Chesne, C., Elliott, G., Harbell, J., Heylings, J.R.,
Portes, P., Rouget, R., Van De Sandt, J. dan Botham, P., 2001, A
prevalidation study on in vitro tests for acute skin irritation: results and
evaluation by the management team. Toxicology in Vitro, 15, 57-93.
Hartati, A., Zain, Ismaini dan Ulama, Brodjol Sutijo S., 2012, Analisis CART
(Classification And Regression Tree) pada Faktor-Faktor yang
Mempengaruhi Kepala Rumah Tangga di Jawa Timur Melakukan
Urbanisasi, Jurnal Sains Dan Seni ITS Vol. 1, No. 1, (Sept. 2012), D100.
Irsan, Manggau, M.A., Pakki, E,, dan Usmar, 2013, Uji Iritasi Krim Antioksidan
Ekstrak Biji Lengkeng (Euphoria longana Stend) pada Kulit Kelinci
(Oryctolagus cuniculus), Majalah Farmasi dan Farmakologi, Vol. 17,
No.2 Juli 2013, hal. 55 60.
Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan, 2011, Persyaratan Teknis Bahan
Kosmetika, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 40.
Lestari, F., 2007, Bahaya Kimia: Sampling & Pengukuran Kontaminan Kimia di
Udara, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal. 189.
Leyden, J.J., dan Rawling, A.V., (Eds.), 2002, Skin Moisturization, Cosmetic
Science and Technology Series, Marcel Dekker, Inc., New York, pp. 324328, 331, 354-356, 613-614, 625.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


48

McComb, R., Bowers, G., dan Posen, S., 1979, Alkaline Phospatase, Plenum
Press, New York, pp. 44-46.
Michael dan Ash, 2004, Handbook of Preservatives, Synapes Information
Resources Inc., USA, p. 535.
Mitsui, T., 1997, New Cosmetic Science, 2th ed, (Ed), Elsevier Science B. V.,
Netherlands, pp. 375-376.
Mortensen, A., 2006, Carotenoids and Other Pigment as Natural Colorant, Pure
and Applied Chemistry., 78(8), 1447-1491.
Poucher, W.A., 1992, Pouchers Perfumes, Cosmetics and Soaps, volume 3
Cosmetics, in Butler, H., (Ed.), Pouchers Perfumes, Cosmetics and
Soaps, volume 3 Cosmetics, Academic Publishers, Netherlands, pp. 111112, 178-183.
Robinson, V.C., Bergfeld W.F., Belsito D.V., Hill R.A., Klaassen C.D., Marks
J.G., dkk., 1983, Final Report on the Safety Assessment of Sodium
Lauryl Sulfate, International Journal of Toxicology, 29(4), 127-181.
Rowe, R.C., Sheskey, P.J., dan Quinn, M.E., 2009, Handbook of Pharmaceutical
Excipient, 6th edition, Pharmaceutical Press and American Pharmacists
Association 2009, Washington D. C., pp. 405-406, 441-442, 651-653.
Roy, D., dan Saha, J., 1981, Acute Toxicity of Dyes used in Drugs and Cosmetics,
The Eastern Pharmacist, pp. 125-126.
Ruwanti, S., 2010, Optimasi Kadar -caroten pada Proses Pembuatan Tepung Ubi
Jalar Oranye (Ipamoea batatas L.) dengan Menggunakan Response
Surface Methodology (RSM), Laporan Penelitian, Fakultas Pertanian
Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Scientific Committee on Consumer Products, 2005, Extended Opinion on the
Safety Evaluation of Parabens, European Commission, Europe, p. 3.
Scientific Committee on Consumer Products, 2008, Opinion on -arbutin,
European Commission, Europe, p. 10.
Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-Food Products, 2002,
Opinion Of The Scientific Committee On Cosmetic Products And NonFood Products Intended For Consumers Concerning: Salicylic Acid,
European Commission, Europe, p. 4.
Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-Food Products, 2000,
Opinion Of The Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


49

Food Products Intended For Consumers Concerning: Titanium dioxide,


European Commission, Europe, p. 30.
Tranggono, R.I., dan Latifah, F., 2007, Buku Pedoman: Ilmu Pengetahuan
Kosmetik, Gramedia Pustaka Utama, hal. 11, 13.
Wibowo, D.S., 2000, Anatomi Tubuh Manusia, Grasindo, Jakarta, hal. 26.
Worth, A. P., dan Balls, M., 2001, The Importance of the Prediction Model in the
Validation of Alternative Tests, ECVAM, Institute for Health and
Consumer Protection, European Commission Joint Research Centre,
21020 Ispra (VA), Italy.
Zuang, V., Schffer, M., Tuomainen, A.M., Amcoff, P., Bernasconi, C., Bremer,
S., dkk., 2013, EURL ECVAM progress report on the development,
validation and regulatory acceptance of alternative methods,
Publications Office of the European Union, Luxembourg, p. 12.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

LAMPIRAN

50

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


51

Lampiran 1. Data penimbangan dan dokumentasi formula

1. Data penimbangan wortel


Wortel yang digunakan

: 2,5 kg

Sari yang didapatkan

: 750 g sari wortel

1 kg wortel mendapatkan

: 300 g sari wortel

100 g bedak tabur membutuhkan : 150 g sari wortel


Orientasi yang dilakukan

: 3 formula

Bedak tabur akhir

: 1 formula

Total sari yang digunakan

: 4 x 150 g
= 600 g sari wortel

2. Dokumentasi bedak tabur

Formula bedak tabur akhir

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


52

Lampiran 2. Dokumentasi Slug Irritation Test

Laevicaulis alte

Perlakuan amilum manihot

Perlakuan texapon

Organ dalam Laevicaulis alte

Perlakuan magnesium stearat

Perlakuan asam salisilat

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


53

Perlakuan sediaan bedak tabur

Perlakuan arbutin

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


54

Lampiran 3. Data penimbangan siput

Sodium lauril sulftat

Magnesium stearat

Amilum manihot

Bahan
Uji

Rep

Bobot
siput
(g)

Berat
petri
(g)

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

3,128
3,129
3,143
3,204
3,335
3,145
3,421
3,169
3,613
3,904
3,415
3,046
3,406
3,457
3,370
3,896
3,980
3,765
3,456
3,973
3,362
3,111
3,515
3,433
3,800
4,044
3,393
3,902
3,004
3,711

34,480
35,794
46,451
34,476
35,788
46,433
38,331
46,922
34,487
39,142
45,667
45,925
40,632
45,653
43,362
40,625
43,378
48,796
46,459
46,450
46,916
47,759
39,095
46,909
45,313
46,818
45,668
39,103
51,027
46,881

Berat
petri+
sediaan
(g)
35,480
36,795
47,453
35,481
36,791
47,451
39,343
47,923
35,491
40,148
46,674
46,940
41,637
46,455
44,365
41,625
44,378
49,796
47,459
47,444
47,929
48,781
40,099
47,911
46,315
47,830
46,685
40,104
52,036
47,891

Berat petri+
sediaan+
CottonBud
(g)
35,643
36,962
47,613
35,645
36,933
47,601
39,374
48,093
35,661
40,329
46,848
47,102
41,803
46,810
44,502
41,792
44,524
49,941
47,629
47,590
48,106
48,932
40,275
48,040
46,477
47,988
46,839
40,252
52,196
48,044

Berat petri+
sediaan+
CottonBud+
mukus (g)
35,781
37,136
47,705
35,782
36,979
47,700
39,664
48,405
35,791
40,555
46,884
47,118
41,808
46,840
44,351
41,839
44,541
49,996
47,667
47,626
48,235
49,072
40,469
48,198
46,608
48,136
47,052
40,653
53,019
48,296

Berat
mukus
(g)
0,138
0,174
0,092
0,137
0,046
0,099
0,290
0,312
0,130
0,226
0,036
0,016
0,005
0,030
-0,151
0,047
0,017
0,055
0,038
0,036
0,129
0,140
0,194
0,158
0,131
0,148
0,213
0,401
0,823
0,252

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


55

Arbutin

Sediaan

Asam salisilat

Bahan
Uji

Rep

Bobot
siput
(g)

Berat
petri
(g)

Berat
petri+
sediaan
(g)

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

3,692
3,800
3,654
3,219
4,032
3,498
3,328
3,988
3,810
3,690
3,881
3,031
3,565
3,216
3,699
3,677
3,868
3,847
3,742
3,596
3,981
3,610
3,537
3,117
3,125
3,792
3,430
3,564
3,875
3,701

48,793
40,587
38,323
48,785
47,748
38,316
37,922
41,813
46,831
38,322
41,810
51,020
45,322
41,803
51,013
40,581
45,931
40,640
40,589
45,370
37,914
43,370
46,828
37,907
39,091
45,916
35,794
45,325
47,766
35,794

49,801
41,593
39,337
49,783
48,752
39,314
38,925
42,814
47,835
39,359
42,811
52,021
46,321
42,816
52,014
41,580
46,937
41,647
41,589
46,390
38,915
44,389
47,831
38,852
40,095
46,918
36,796
46,331
48,776
36,795

Berat
petri+
sediaan+
CottonBud
(g)
49,978
41,747
39,506
49,937
48,931
39,456
39,076
42,961
47,977
39,505
42,984
52,190
46,497
42,988
52,150
41,744
47,077
41,807
41,754
46,545
39,077
44,555
48,000
39,052
40,263
47,091
36,970
46,472
48,933
36,964

Berat petri+
sediaan+
CottonBud+
mukus (g)

Berat
mukus
(g)

50,024
41,757
39,569
49,978
49,007
39,533
39,204
43,118
48,075
39,585
43,160
52,464
46,882
43,252
52,550
41,970
47,465
42,216
42,070
46,722
39,115
44,609
48,006
39,110
40,327
47,129
37,017
46,533
49,051
37,088

0,046
0,010
0,063
0,041
0,076
0,077
0,128
0,157
0,098
0,080
0,176
0,274
0,385
0,264
0,400
0,226
0,388
0,409
0,316
0,177
0,038
0,054
0,006
0,058
0,064
0,038
0,047
0,061
0,118
0,124

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


56

Lampiran 4. Data selisih absorbansi ALP, LDH dan albumin


Data ALP
Replikasi
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Amilum
0,003
0,004
0,003
0,002
0,005
0,001
0,001
0,002
0,006
0,004

Mg Stearat
0,003
0,001
0,003
0,004
0,004
0,003
0,003
0,001
0,004
0,003

Absorbansi
SLS
Asam salisilat
0,010
0,008
0,006
0,005
0,002
0,005
0,009
0,006
0,005
0,003
0,007
0,005
0,008
0,002
0,001
0,003
0,003
0,006
0,007
0,003

Sediaan
0,003
0,003
0,004
0,003
0,003
0,002
0,002
0,001
0,002
0,002

Arbutin
0,002
0,007
0,005
0,003
0,002
0,002
0,003
0,004
0,002
0,001

Sediaan

Arbutin

0,000
0,000
0,000
0,001
0,000
0,002
0,000
0,000
0,000
0,000

0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,001
0,001
-0,002
0,000
0,000

Data LDH
Replikasi
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Amilum

Mg Stearat

0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,001
0,000
0,000
0,000
0,001

0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
-0,001

Absorbansi
SLS
Asam salisilat
0,000
-0,002
-0,001
0,001
0,000
0,000
0,000
0,000
-0,001
0,000

0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
-0,001
0,000

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


57

Data albumin
Replikasi
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Amilum
-0,018
0,011
0,044
0,008
0,013
0,013
0,014
0,007
0,01
-0,008

Mg Stearat
0,007
0,015
0,039
0,004
0,013
0,013
0,006
0,01
0,007
-0,004

Absorbansi
SLS
Asam salisilat
0,007
0,013
0,045
0,043
0,043
0,046
0,011
0,009
0,014
0,012
0,014
0,013
0,011
0,006
0,01
0,008
0,01
0,007
-0,011
-0,002

Sediaan
0,008
0,045
0,044
0,015
0,011
0,013
0,011
0,007
0,015
0,001

Arbutin
0,008
0,043
0,044
0,012
0,014
0,013
0,007
0,01
0,011
0,006

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


58

Lampiran 5. Data persen mukus, LDH, ALP dan Albumin

Sodium Lauryl Sulfate

Magnesium stearat

Amilum manihot

Bahan Uji

Replikasi
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Persen mukus
(%)
4,412
5,561
2,927
4,276
1,379
3,148
8,477
9,845
3,598
0,006
1,054
0,525
0,147
0,868
-4,481
1,206
0,427
1,461
1,100
0,906
3,837
4,500
5,519
4,602
3,447
3,660
6,278
10,277
27,397
6,791

LDH
(U/L)
-3,360
0,000
-3,360
3,360
0,000
10,080
-3,360
0,000
-3,360
13,440
0,000
0,000
1,100
0,000
1,100
0,000
-1,100
-1,100
0,000
-2,200
-3,360
-16,800
-6,720
6,720
-3,360
0,000
-3,360
3,360
-6,720
-3,360

ALP
(U/L)
11,000
12,100
9,900
5,500
15,400
3,300
4,400
5,500
19,800
12,100
9,900
4,400
11,000
12,100
14,300
9,900
11,000
2,200
13,200
11,000
33,000
18,700
5,500
29,700
16,500
24,200
27,500
2,200
8,800
23,100

Albumin
(g/dL)
-0,208
0,127
0,509
0,106
0,172
0,172
0,220
0,110
0,157
-0,110
0,081
0,173
0,451
0,053
0,172
0,172
0,094
0,157
0,110
-0,055
0,081
0,520
0,497
0,145
0,185
0,185
0,173
0,157
0,157
-0,152

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


59

Arbutin

Sediaan

Asam salisilat

Bahan Uji

Replikasi
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Persen mukus
(%)
1,246
0,263
1,724
1,274
1,885
2,201
3,846
3,937
2,572
2,168
4,535
9,040
10,799
8,209
10,814
6,146
10,031
10,632
8,445
4,922
0,955
1,496
0,170
1,861
2,048
1,002
1,370
1,712
3,045
3,350

LDH
(U/L)
3,360
0,000
0,000
3,360
0,000
0,000
0,000
-3,360
-6,720
-3,360
0,000
-3,360
3,360
13,440
0,000
16,800
0,000
-3,360
0,000
0,000
0,000
3,360
3,360
3,360
3,360
6,720
10,080
-23,520
0,000
0,000

ALP
(U/L)
25,300
17,600
16,500
19,800
9,900
15,400
5,500
11,000
18,700
9,900
8,800
9,900
13,200
8,800
11,000
7,700
6,600
4,400
7,700
6,600
7,700
24,200
16,500
9,900
7,700
6,600
9,900
13,200
7,700
4,400

Albumin
(g/dL)
0,150
0,497
0,532
0,119
0,158
0,172
0,094
0,125
0,110
-0,028
0,092
0,520
0,509
0,198
0,145
0,172
0,173
0,110
0,235
0,014
0,092
0,497
0,509
0,158
0,185
0,172
0,110
0,157
0,173
0,083

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


60

Lampiran 6. Data prediksi true positive, true negative, false positive dan false
negative

Literatur

Persen
mukus

LDH

ALP

alb

Prediksi

TP

FP

TN

FN

amilum

0.044

-3.360

11.00

-0.208

amilum

0.056

0.000

12.10

0.127

amilum

0.029

-3.360

9.90

0.509

amilum

0.043

3.360

5.50

0.106

amilum

0.014

0.000

15.40

0.172

amilum

0.031

10.080

3.30

0.172

amilum

0.085

-3.360

4.40

0.220

amilum

0.098

0.000

5.50

0.110

amilum

0.036

-3.360

19.80

0.157

amilum

0.000

13.440

12.10

-0.110

mg stearat

0.011

0.000

9.90

0.081

mg stearat

0.005

0.000

4.40

0.173

mg stearat

0.001

1.100

11.00

0.451

mg stearat

0.009

0.000

12.10

0.053

mg stearat

-0.045

1.100

14.30

0.172

mg stearat

0.012

0.000

9.90

0.172

mg stearat

0.004

-1.100

11.00

0.094

mg stearat

0.015

-1.100

2.20

0.157

mg stearat

0.011

0.000

13.20

0.110

mg stearat

0.009

-2.200

11.00

-0.055

sls

0.038

-3.360

33.00

0.081

sls

0.045

-16.800

18.70

0.520

sls

0.055

-6.720

5.50

0.497

sls

0.046

6.720

29.70

0.145

sls

0.034

-3.360

16.50

0.185

sls

0.037

0.000

24.20

0.185

sls

0.063

-3.360

27.50

0.173

sls

0.103

3.360

2.20

0.157

sls

0.274

-6.720

8.80

0.157

sls

0.068

-3.360

23.10

-0.152

salisilat

0.012

3.360

25.30

0.150

Bahan Uji

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


61

Literatur

Persen
mukus

LDH

ALP

alb

Prediksi

TP

FP

TN

FN

salisilat

0.003

0.000

17.60

0.497

salisilat

0.017

0.000

16.50

0.532

salisilat

0.013

3.360

19.80

0.119

salisilat

0.019

0.000

9.90

0.158

salisilat

0.022

0.000

15.40

0.172

salisilat

0.038

0.000

5.50

0.094

salisilat

0.039

-3.360

11.00

0.125

salisilat

0.026

-6.720

18.70

0.110

salisilat

0.022

-3.360

9.90

-0.028

arbutin

0.010

0.000

7.70

0.092

arbutin

0.015

3.360

24.20

0.497

arbutin

0.002

3.360

16.50

0.509

arbutin

0.019

3.360

9.90

0.158

arbutin

0.020

3.360

7.70

0.185

arbutin

0.010

6.720

6.60

0.172

arbutin

0.014

10.080

9.90

0.110

arbutin

0.017

-23.520

13.20

0.157

Arbutin

0.030

0.000

7.70

0.173

Arbutin

0.034

0.000

4.40

0.083

10

31

Bahan Uji

Total

Perhitungan sensitivitas dan spesifisitas

1) Sensitivitas

TP
TP + FN
10

= 10+0 = 1
2) Spesifisitas

TN
TN +FP
31

= 31+9 = 0,775

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


62

Lampiran 7. Data Classification and Regression Tree (CART) menggunakan


RStudio

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


63

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


64

Data di atas menggunakan 2 jenis tipe splitting yaitu class dan anova.
Variabel yang digunakan pada klasifikasi (tree construction) pada kedua metode
adalah persen mukus dengan cut off sebesar 0,0325. Yang membedakan dari
kedua metode tersebut terlihat pada tree construction.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


65

Tree construction

Pada Classification Tree, nilai 0 dan 1 menunjukkan kelas. Nol


menunjukkan kelas non-iritan dan satu menunjukkan kelas iritan. Bahan uji
dengan persen mukus <0,0325 masuk kelas 0 dan bahan uji dengan persen mukus
>0,0325 masuk kelas 1.
Pada Regression Tree, nilai 0 dan 0,5263 menunjukkan nilai rata-rata
dari node. Pada metode anova, kelas tidak dibagi menjadi 0 dan 1, melainkan
menggunakan rata-rata dari node. Bahan yang masuk kelompok iritan dianggap
tidak mutlak bernilai 1.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


66

Lampiran 8. Surat determinasi siput

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI


67

BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi dengan judul Uji In Vivo dan Validasi
Protokol Slug Irritation Test pada Sediaan Bedak Tabur
Amilum Manihot (Manihot Utilissima L.) menggunakan
Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus Carota
L.) dengan Metode Classification And Regression Tree
(CART) memiliki nama lengkap Carolina Dea Sekar
Panintra. Penulis lahir pada tanggal 5 Juli 1993 di
Bandarlampung, Lampung sebagai anak kedua dari tiga
bersaudara, pasangan Yohanes Handoko dan Katarina
Murjiyati. Penulis telah menempuh pendidikan di TK
Xaverius Way Halim Permai tahun 1997-1999, lalu
melanjutkan pendidikan di Sekolah Dasar Xaverius
Way Halim Permai pada tahun 1999-2005. Penulis
melanjutkan pendidikan di SMP Fransiskus Tanjungkarang pada tahun 20052008. Penulis menyelesaikan jenjang SMA di SMA Fransiskus Bandarlampung
pada tahun 2008-2011. Setamat dari SMA, penulis melanjutkan kuliah S1 di
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2011-2015.
Selama aktif sebagai mahasiswa, penulis pernah mengikuti kegiatan
kepanitiaan antara lain kepanitiaan pelepasan wisuda Fakultas Farmasi (2012),
kepanitiaan Temu Alumni Akbar Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
(2013), kepanitiaan Komisi Pemilihan Umum Gubernur BEMF dan Ketua DPMF
Farmasi (2013) dan juga mengikuti berbagai macam acara dan seminar.