IDENTIFIKASI BAKTERI GRAM NEGATIF

ESHERICHIA COLI

I.

Tujuan :
Untuk mengetahui morfologi dan uji biokimia bakteri Esherichia coli

II.

Spesies esherichia
1.
2.

III.

Esherichia coli
Esherichia hermanii

Morfologi
a.
b.
c.
d.
e.
f.

IV.

bakteri Gram negatif

Ada flagel
tidak berspora
Tidak berkapsul
berbentuk kokus
Suhu optimum 370C

Sifat pertumbuhan
a)

Pada media ENDO

Berwarna merah metalik, metalik berbau khas, dan bersifat meragi

laktosa
b) Pada media EMB
Berwarna hijau metalik, metalik berbau khas, dan bersifat meragi
laktosa
Pada media MC
Berwarna merah muda, dan bersifat meragi laktosa.

c)

V.

Spesimen / sampel
a.
b.
c.
d.
e.
f.

VI.

feses
Swab anus
push
Air
Mak/min
urin

Habitat :
Flora normal esherichia coli yaitu pada usus besar manusia

VII. Alat dan bahan :

a.
b.

Media ENDO ,EMB dan MC

Media deret lengkap + gula-gula (TSIA, SIM, Urea, Simmon

c.

Citrat, MR, VP, Glukosa, Laktosa, Maltosa, Manitol, Sakarosa)

Reagen penguji : BCP, kovak, methyl red, KOH 40%, alfa naftol

d.
e.
f.
g.
h.
i.

1%,
Cat gram A,B,C,D
Object glass
Oshe bulat dan lurus
Pembakar spiritus
Mikroskop dan emersi
Kapas lidi steril

VIII. Cara kerja :

Hari pertama
1) Lakukan pewarnaan gram
2) Inokulasikan sampel ke media ENDO, EMB dan MC secara goresan
dengan ose bulat
3) Inkubasi pada suhu 370 C selama 24 jam

Hari II
4) Amati koloni yang tumbuh pada media ENDO dan MC

Media
Bentuk
Ukuran
Permukaan
Elevasi
Warna
Ciri khas
sifat

ENDO
Bulat
Besar
Halus
Cembung
Merah metalik
Metalik, berbau khas
Meragi laktosa

5) Lakukan pewarnaan gram

MC
Bulat
Besar
Halus
Cembung
Kehijauan metalik
Metalik, berbau khas
Meragi laktosa

6)
6)
6)
6)
6)
6)
6)
6)
Inokulasikan satu koloni yang terpisah ke dalam media deret lengkap dan
gula-gula menggunakan oshe lurus secara terpisah
7) Inkubasi pada suhu 370C selama 24 jam

Hari III
8) Baca hasil RBK Esherichia coli

Nama media
T Fermentasi
S H2S
I Gas
S H2S
I Indol
M Motil
Urea
Simon citrat
Methyl red
Voges proskauer
glukosa
laktosa
Manitol
Maltosa
Sakarosa
* catatan :

Esherichia coli
A/A
(-) negatif
(+) positif
(-) negatif
(+) positif
(+) positif
(-) negatif
(-) negatif
(+) positif
(-) negatif
(+) positif, gas (+) positif
(+) positif, gas (+) positif
(+) positif, gas (+) positif
(+) positif, gas (+) positif
(+) positif, gas (-) negatif

 KIA / TSIA :
Media berwarna merah
Indikatior fenol red
Fungsinya untuk mengetahui fermentasi karbohidrat,
terbentuknya H2S & Gas
cara penanaman dengan tusuk sampai dasar, dan zig zag
Interpretasi hasil :
A/A fermentasi = media berwarna kuning/kuning
K/A fermentasi = media berwarna merah / kuning
Positif (+) H2S = terbentuk endapan hitam
Negatif (-) H2S = tidak terbentuk endapan hitam
Positif (+) gas = media terangkat / pecah
Nnegatif (-) gas = media tidak pecah
SIM

:
media berwarna kuning
Fungsinya untuk mengetahui adanya enzim
tryptopanase yang mengubah asam amino menjadi indol
Cara penanaman dengan tusukan gantung
Interpretasi hasil :
Positif (+) sulfur = media berwarna hitam /
terbentuknya H2S
Negatif (-) sulfur = media tidak berwarna hitan
Positif (+) indol = terbentuk cicin merah (setelah
ditetesi methyl red)
Negatif (-) indol = tidak terbentuk cicin merah
Positif (+) motil = terbentuk kabut pada bekas
tusukan dan tersebar
Negatif (-) motil = tidak terbentuk kabut pada
bekas tusukan

UREA :
media berwarna kuning keorengan
Fungsinya untuk melihat apakah bakteri mengandung
enzim urease dengan bantuan amoniak

 Cara penanaman dengan zig-zag (miring) dan tusuk

(datar)
Interpretasi hasil :
Positif (+) = media berwarna merah muda / pink
Negatif (-) = media tetap berwarna kuning
keorengan
Simon citrat :
Media berwarna hijau
Fungsinya untuk melihat apakah bakteri menggunakan
citrat sebagai sumber karbon
Cara penanaman dengan zig-zag (miring) dan tusuk
(datar)
Interpretasi hasil :
Positif (+) = media berwarna biru
Negatif (-) = media tetap berwarna hijau
Mr
Media cair berwarna jernih / transparan
Fungsinya untuk melihat keasaman ph dibawah 4
Cara penanaman dengan mencelupkan oshe yang
berkoloni nya saja
Setelah inkubasi teteskan methyl red
Interpretasi hasil :
Positif (+) = terbentuk warna merah
Negatif (-) = tidak terbentuk warna merah
Vp
Media cair berwarna jernih / transparan
Fungsi untuk melihat apakah bakteri mampu
menghasilkan acethyl methyl carbinol
Cara penanaman dengan mencelupkan oshe yang
berkoloni nya saja
Setelah inkubasi teteskan larutan KOH 40% dan alfa
naftol 1%
Interpretasi hasil :
Positif (+) = terbentuk warna ungu
Negatif (-) = tidak terbentuk warna ungu

 Gula - Gula
Media berwarna ungu
Fungsi untuk melihat fermentasi karbohidrat dari 5
gula-gula (glukosa, laktosa, manitol, maltosa,sakarosa)
Cara penanaman dengan dicelupkan saja setelah
dimasukkan tabung durham
Interpretasi hasil :
Positif (+) fermentasi = media berubah warna
menjadi warna kuning
Negatif (-) fermentasi = media tetap ungu
Positif (+) gas = tabung durham
kosong
Negatif (-) gas = tabung durham tidak
kosong
9) Lakukan test katalase
- Siapkan object glass bersih
- Tambahkan 1-2 koloni bakteri
- Tambahkan 1 tetes H2O2 3%, homogenkan
Interpretasi hasil :

(+) terjadi gelembung gas

(-) tidak terjadi gelembung gas

10) Lakukan test koagulase plasma citrat :

siapkan object glass bersih, kering dan bebas lemak
tambahkan 1-2 ohse koloni
tambahkan 1 tetes plasma citrat menggunakan pipet tetes
secara aseptis, aduk homogen
Interpretasi hasil :
(+) terjadi aglutinasi
(-) tidak terjadi aglutinasi

IX.

Hasil

1. Pemeriksaan mikroskopis
Bentuk
: basil
Warna
: merah
Susunan
: satu-satu
Gram
: positif (-)
Latar belakang
: putih
2. Hasil pertumbuhan pada media
spesifikasi
Bentuk koloni
ukuran
warna
permukaan
Elevasi
sifat

dari medium
ENDO
Bulat
sedang
Merah metalik
Halus
Cembung
Meragi laktosa

Dari medium
EMB
Bulat
Sedang
Hijau metalik
Halus
Cembung
Meragi laktosa
Dari medium

spesifikasi
Bentuk koloni
ukuran
warna
permukaan
Elevasi
sifat

dari medium
MC
Bulat
sedang
Merah muda
Halus
Cembung
Meragi laktosa

3. Hasil pertumbuhan pada media RBK

NAMA BAKTERI
TSIA
Hasil
SIM
Hasil
UREA
Hasil
S.CITRAT
Hasil
GLUKOSA
Hasil
LAKTOSA
Hasil
MALTOSA
Hasil
MANITOL
Hasil
SAKAROSA
Hasil

ESHERICHIA COLI
A/A H2s (-)negatif Gas (+)positif
H2s (+)positif indol (+)positif motil (+)positif
(-) negatif
(-) negatif
(+) positif gas (+) positif
(+) positif gas (+) positif
(+) positif gas (+) positif
(+) positif gas (+) possitif
(+) positif gas (+) positif

4. Hasil uji serologi :

Hasil : MR = (+) positif terbentuk cicin merah
VP = (-) negatif
5. Hasil uji Oksidasi :
Hasil : (-) negatif strip warna kuning
6. Kesimpulan :
Berdasarkan hasil-hasil pengujian diatas disimpulkan bahwa
ditemukannya bakteri Esherichia coli