ORIGINAL ARTICLE

Sampepajung DS. Human Epidermal Growth Factor Receptor-2

HUMAN EPIDERMAL GROWTH FACTOR

RECEPTOR-2(HER-2) / NEU GENE PROFILE ON
BREAST CANCER PATIENTS IN MAKASSAR
Daniel Sampepajung
Oncology Division, Department of Surgery, Medical Faculty Hasanuddin University

ABSTRACT
Background: Human epidermal growth factor-2 (Her-2)/Neu gene has been known
as one of prognostic factors of breast cancer patients So far there is no information
whether this gene can be detected in Makassar patients. Objectives: To see Her-2/
Neu gene profile in breast cancer patients in Makassar. Methods: Tumor tissue and
blood from 44 breast cancer patient in Makassar were collected. DNA were extracted
and amplified on PCR by using primer from Paris. Results: Her-2/Neu gene were
found in 97,7% and 54,5% of tumor tissue and peripheral blood, respectively.
Conclusions: Her-2/Neu gene can be detected in the tumor tissue and peripheral
blood, therefore the “Primer” from Paris can be used as standard primer of Her-2/
Neu gene research in breast cancer patients in Makassar.
Key Words: Her-2/Neu gene, breast cancer

PROFIL GEN HUMAN EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR-

2(HER-2)/ NEU PADA PENDERITA KANKER PAYUDARA DI MAKASSAR
Latar belakang: Gen Her-2/Neu merupakan salah satu faktor prognostik pada
penderita kanker payudara (KPD). Sejauh ini belum ada informasi mengeni profil
gen ini pada pasien di Makassar. Tujuan: Mengetahui profil gen Her-2/Neu pada
pasien KPD di Makassar. Metode: Jaringan tumor dan darah perifer di kumpulkan
dari pasien kanker payudara. DNA diekstraksi kemudian diamplifikasi dengan PCR
menggunakan primer yang berasal dari paris. Hasil: gen Her-2/Neu ditemukan
97,7% pada jaringan tumor dan 54,54% pada darah penderita KPD. Kesimpulan:
Gen Her-2/Neu dapat dideteksi pada jaringan tumor dan darah pasien dengan
KPD di Makassar. Ditemukannya gen ini dengan menggunakan primer dari Paris
menunnjukkan bahwa primer ini dapat digunakan sebagai primer standar untuk
penelitian gen Her-2/Neu pada penderita KPD di Makassar.
Kata kunci : gen Her-2/Neu, kanker payudara.

The Indonesian Journal of Medical Science Volume 1 No. 2 October-December 2008 59

ORIGINAL ARTICLE
Sampepajung DS. Human Epidermal Growth Factor Receptor-2
PENDAHULUAN
Kanker payudara (KPD) masih
merupakan masalah yang mendapat
perhatian sangat besar oleh para ahli
bedah, ahli bedah onkologi khususnya
karena insidens dan mortalitas yang
cukup tinggi. Setiap tahun ada sekitar
183.000 kasus baru ditemukan di
Amerika1,2, terdapat 210,000 kasus baru
dan 76.000 kematian setiap tahun di Uni
Eropa 3 . KPD merupakan 30% dari
seluruh kanker pada wanita 2. Angka
kematian ini bisa ditekan jika terdapat
cara untuk memprediksi perjalanan KPD
dan hasil / respons terhadap terapi.
Gen Human Epidermal growth factor
Receptor (Her-2) / Neu merupakan proto
onkogen yang mengatur pertumbuhan
dan pembelahan sel dan pada sel epitel
normal ekspresi protein gen Her-2 ini
rendah 4. Gen HER-2 sering juga disebut
Gen Neu atau c-Erb B-2 terletak di
kromosom 17q yang menyandi protein
Transmembrane Tyrosine Kinase
Growth Factor Receptor5.
Amplifikasi Gen Her-2/Neu terjadi pada
sekitar 15 – 25% penderita KPD sedang
ekspresi protein Her-2/Neu berlebihan
pada penelitian interstudy menemukan
persentasi yang lebih tinggi yaitu sekitar
10 – 50% 6. Ekspresi berlebihan protein
ini oleh sebagian besar peneliti
disimpulkan mempunyai kaitan dengan
survival rate yang lebih singkat,
khususnya pada penderita KPD dengan
pembesaran kelenjar getah bening 7.
Ekspresi protein Her-2/Neu ini
menggambarkan meningkatnya
aktivitas proliferasi sel tumor, sehingga
ekspresi berlebihan dari protein ini
mempunyai hubungan dengan
agresivitas tumor dan prognosis yang
jelek7. Pada penelitian preklinik diduga
bahwa ekspresi berlebihan dari gen Her-
60 The Indonesian Journal of Medical Science Volume 1 No. 2 October-December 2008
2/neu ini dapat meningkatkan potensi
metastasis dari sel kanker payudara8.
Telah banyak penelitian yang dilakukan
tentang faktor prognostik baik
berdasarkan pada morfologi maupun
molekuler terhadap gen Her-2 maupun
Tumor marker karena kemampuan Her-
2 dalam memprediksi hasil akhir dari
perjalanan KPD9. Gen Her-2/Neu dalam
faktor terakhir ini mendapat banyak
perhatian oleh para peneliti karena
adanya ekspresi berlebihan protein gen
ini yang dianggap sebagai suatu faktor
prognostik sekaligus sebagai faktor
prediktif yang diharapkan bisa
memprediksi perjalanan KPD dan hasil
terapi pada penderita KPD. Banyak
metode yang dipakai untuk mengukur
amplifikasi gen Her-2/Neu dan ekspresi
berlebihan protein Her-2/Neu, seperti
Southern Blotting, W estern Blotting,
PCR, Fluorescence in situ Hybridization
(FISH) dan Immunohistochemistry
(IHC).
Untuk melakukan penelitian tentang gen
Her-2/Neu pada penderita KPD di
Makassar, perlu diketahui lebih dahulu
bagaimana profil gen Her-2/Neu pada
penderita KPD di Makassar dan perlu
juga dicari primer gen Her-2/Neu yang
sesuai untuk etnis dan ras di Sulawesi
Selatan sehingga bisa digunakan
sebagai primer yang standar.
Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui profil gen Her-2/Neu pada
penderita KPD di Makassar dan untuk
mengetahui apakah gen Her-2/Neu
dapat dideteksi di dalam darah perifer.
METODOLOGI
Penelitian ini merupakan cross section
yang dilakukan dari September 2002
sampai Juli 2003 dengan melibatkan
pasien yang dirawat di Rumah Sakit
ORIGINAL ARTICLE
Sampepajung DS. Human Epidermal Growth Factor Receptor-2
Pendidikan di Makassar. Pemeriksaan
DNA gen Her-2/Neu dilakukan di
Laboratorium Biologi Molekuler dan
Immunology, Bagian Microbiologi,
Fakultas Kedokteran, Universitas
Hasanuddin Makassar Populasi
penelitian ini adalah semua penderita
wanita yang menderita kanker payudara
yang dirawat di Rumah Sakit Pendidikan.
Sampel dihitung berdasarkan rumus
Madyono (1995). Besar sampel
berdasarkan perhitungan ini minimal
20 sampel. Jaringan dan darah pasien
yang positif menderita kanker payudara
berdasarkan pemeriksaan klinis dan
histopatologis diambil dan dilakukan
ekstraksi DNA. DNA murni hasil ekstrak
dicampur dengan primer dan
diamplifikasi dengan proses PCR. Hasil
amplifikasi di masukkan kedalam
Agarose gel kemudian di elektroforesis,
hasil elektroforesis ini kemudian dinilai
dengan menggunakan sinar ultra violet.
Hasil dikatakan positif apabila tampak
band dalam Agarose gel dan negatif
apabila tidak tampak. Primer yang
digunakan sama dengan Primer yang
telah digunakan oleh Bieche dkk dan
telah diketahui tidak mengandung
polymorphism.
HASIL
Telah dilakukan penelitian terhadap 45
penderita KPD di Rumah Sakit
Pendidikan di Makassar dengan
mengambil jaringan tumor dan darah
penderita, selama periode Juli – Oktober
2003. Dari 45 penderita KPD ini ada satu
penderita yang kami keluarkan dari
penelitian karena j umlah DNA yang
dibutuhkan tidak cukup untuk
pemeriksaan Gel Elektroforesis.
Dari 44 penderita yang diteliti, kelompok
umur yang paling banyak ditemukan
adalah kelompok umur 40 – 49 tahun
The Indonesian Journal of Medical Science Volume 1 No. 2 October-December 2008
(31,82 %) menyusul kelompok 50 – 59
tahun (29,54 %), 30 - 39 tahun (18,18
%), 60 - 69 tahun (15,91 %) dan
kelompok70 - 79 tahun ( 4,55 %). Pada
pemeriksaan PCR ditemukan 97,73 %
band positif pada jaringan tumor dan
54,55 % pada darah.
PEMBAHASAN
Dari 44 kasus yang diperiksa ternyata
43 kasus menunjukkan band yang positif
yang berarti bahwa 97,73 % penderita
menunjukkan adanya gen Her-2/neu
yang aktif, dengan demikian hasil ini
membuktikan pula bahwa Primer yang
kami pakai dalam penelitian ini bisa
dijadikan primer standar untuk
penelitian gen Her-2/neu selanjutnya di
Makassar dan mungkin j uga untuk
Indonesia pada umumnya. Penelitian ini
juga membuktikan bahwa susunan gen
Her-2/neu pada etnik Eropa sama
dengan susunan gen Her-2 /neu pada
etnik Sulawesi Selatan karena Primer
yang digunakan adalah Primer yang
dipakai di Eropa (Perancis). Band negatif
yang ditemukan pada 1 dari 44 jaringan
tumor yang diperiksa dalam penelitian
mungkin disebabkan oleh adanya
mutasi yang sesungguhnya, atau
mungkin saja gen Her-2/neu normal
tetapi tidak aktif
Yang menarik dalam penelitian ini
adalah ditemukan ada mRNA Her-2/Neu
dalam darah (pita positif) pada 24 dari
44 kasus (54,54 %) yang seharusnya
tidak ditemukan dalam darah. Adanya
mRNA gen Her-2/neu dalam darah ini
mungkin berasal dari sel kanker
payudara yang terlepas dari induk tumor
yang kemudian menyebar masuk ke
dalam sirkulasi. Sel Kanker yang
berhasil mencapai sirkulasi disebut
sebagai Circulating Tumor Cells (CTCs)
dan hanya sebagian kecil sel kanker
61
ORIGINAL ARTICLE
Sampepajung DS. Human Epidermal Growth Factor Receptor-2
yang mencapai sirkulasi (<0,01%) yang
akhirnya berhasil membentuk koloni di
tempat metastasisnya10.
Terdeteksinya mRNA Her-2/neu dalam
darah dalam penelitian ini menunjukkan
adanya sel kanker payudara dalam
darah atau yang disebut sebagai
Circulating Tumor Cells, walaupun hanya
sebagian kecil saj a (< 0,01%) yang
kemungkinan bisa membentuk
metastasis ditempat lain dikemudian
hari, ini bisa merupakan petanda
prognosis jelek karena penderita yang
ditemukan CTCs dalam darahnya jelas
mempunyai prognosis yang lebih buruk
dari pada penderita yang tidak ditemukan
CTCs dalam darahnya karena peluang
terjadi metastasis jauh akan lebih besar.
Cristofanilli dkk. (2004) dalam
penelitiannya melaporkan ada korelasi
antara adanya CTCs dalam darah perifer
dengan prognosis yang lebih jelek 10.
Lal P dkk. (2003) menyatakan bahwa
Her-2 / Neu merupakan suatu biomarker
yang penting pada kanker payudara 11.
Austrup dkk melaporkan adanya
ekspresi berlebihan gen Her-2/Neu
yang ditemukan dalam darah perifer
penderita KPD yang merupakan suatu
faktor prognostik yang kuat. Penelitian
terhadap 19 penderita KPD
(metastasis+) menemukan CTCs
dalam darah 10 penderita dan 7
diantaranya memperlihatkan ekspresi
berlebihan Her-2/neu pada CTCs 5 .
Beberapa penelitian lain juga
memperlihatkan kemampuan PCR
dalam mendeteksi sel kanker dalam
darah perifer (CTCs) sehingga bisa
menjadi faktor prognostik yang kuat10 .
Apakah adanya mRNA Her-2/neu dalam
darah menunjukkan bahwa sel kanker
payudara yang terlepas dalam darah
dapat lolos dari mekanisme immun
62 The Indonesian Journal of Medical Science Volume 1 No. 2 October-December 2008
tubuh karena terj adinya ekspresi
berlebihan dari gen tersebut dan apakah
semua penderita yang pita positif juga
mengalami amplifikasi / ekspresi
berlebihan Her-2/neu masih belum
jelas. Pada penelitian ini tidak dapat
disimpulkan apakah band positif
merupakan pertanda adanya ekspresi
berlebihan gen Her-2/neu sehingga
perlu dilakukan penelitian lanjut
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan
gen Her-2/neu ditemukan pada
sebagian besar j aringan tumor
penderita KPD ( 97,73 %). Gen tersebut
juga terdeteksi pada separuh sampel
darah pasien yang menunj ukkan
terlepasnya sel kanker disirkulasi.
Selanjutnya, Primer yang digunakan
oleh Bieche dkk dapat digunakan
sebagai “Primer Standar” untuk
penelitian gen Her-2/neu di Makassar.
DAFTAR RUJUKAN
1. Winer EP, Morrow M, Osborne CK,
et al. Malignant Tumor of The Breast
In DeVita VT, Hellman S, Rosenberg
SA eds. Cancer. Principles &
Practice of Oncology. 6 th ed.
Lippincott W illiams & W ilkins.
Philadelphia, Baltimore, New York,
London, Buenos Aires, Hong Kong.
2001: 1651-1706.
2. Osborne MP. Breast Anatomy and
Development In: Harris JR ed.
Diseases of the Breast. 2 nd ed.
Lippincott W illiams & W ilkins.
Philadelphia. 2000: 1-12.
3. Neal AJ, Hoskin PJ. Breast cancer.
In: Clinical Oncology: Basic
Principles and Practice. 3 rd ed.
Arnold. London. 2003: 68-85.
4. Grushko TA, Blackwood MA,
Schumm PL, et al. Molecular-
ORIGINAL ARTICLE
Sampepajung DS. Human Epidermal Growth Factor Receptor-2

Cytogenetic Analysis of HER-2/neu 8. Sahin AA. Biologic and clinical

Gene in BRCA1-associated Breast significance of HER-2/neu (cerbB-
Cancers Cancer Research 2002; 2) in breast cancer. Adv Anat Pathol.
62: 1481-88. 2000; 7: 158-66.
5. Hayes DF. Priciples of 9. Ross JS, Fletcher JA. The HER-2/
systemicTherapy. In: Hayes DF ed. neu Oncogene in Breast Cancer:
Atlas of Breast Cancer. 2 nd ed. Prognostic Factor, Predictive Factor,
Mosby-Wolfe. 2000: 11.2 – 11.12. and Target for Therapy. The
Oncologist 1998; 3: 237-52.
6. Ferrero-Pous M, Hecene K, Bouchet
C, Le Doussat V, Tubiana-Hulin M, 10. Cristofanilli M, Esteva FJ. Occult
Spyratos F. Relationship between c- Micrometastasis in Bone Marrow
erbB-2 and other Tumor and Blood. In : Singletary SE, Robb
Characteristics in Breast Cancer GL, Hortobagy eds. Advanced
Prognosis. Clinical Cancer Therapy of breast Disease. 2 nd ed.
Research. 2000; 6: 4745 – 4754. BC Decker Inc. Hamilton, London.
2004: 489-97.
7. Muss HB, Thor AD, Berry DA, et al.
11. Lal P, Salazar PA, Ladanyi M, et al.
c-erbB-2 Expression and
Impact of polysomy 17 on HER-2/
Response to Adjuvant Therapy in
neu immunohistochemistry in
W omen with Node-Positive Early
breast carcinomas without HER-2/
Breast Cancer. N Engl J Med 1994;
neu gene amplification. J Mol
330: 1260-6.
Diagn. 2003; 5: 155-9.

The Indonesian Journal of Medical Science Volume 1 No. 2 October-December 2008 63