5.

Penentuan Sorbitol (AOAC, 1990 - 1995)

Sorbitol dapat ditentukan dengan cara spektofotometri atau dengan kromatografi gas –
cair (GLC).
Prinsip penentuan spektofotometri UV – Vis :
Sorbitol akan teroksidasi oleh nikotinamida-adenin- dinukleotida (NAD)menjadi xylulosa
atau fruktosa dengan bantuan sorbitol dehidrogenase (SDH).

SDH
D-sorbitol + NAD fruktosa + NADH + H

SDH
Xylitol + NAD xylulosa + NADH + H

Dalam keadan normal, kesetimbangan reaksi jauh terletak pada sisi NAD dan D-sorbitol
atau zylitol. Reaksi ini dapat diarahkan terbalik dengan menarik NADH yang terbentuk.

diaphorase
NADH + INT + H NAD + formazan

NADH akan mereduksi iodonetrotetrazolium-klorida (INT) menjadi senyawa formazan

dengan bantuan enzim diaphorase. Senyawa yang terbentuk ditentukan dengan
spektofotometri pada panjang gelombang 492 nm.