Kontrol Mikroorganisme

(Sterilisasi – Disinfeksi)

BAGIAN MIKROBIOLOGI
FK UNDIP
 lingkungan fisik lingkungan biologis
(air, udara, tanah) (manusia, binatang, tumbuhan)

Environment

INFECTION

Agent Host
 Kontrol mikroorganisme

•Membunuh mikroorganisme,
biasanya digunakan istilah cide atau cidal,
misal bactericide (bactericidal), fungicide, virucide, sporocide.

•Menghambat pertumbuhan mikroorganisme,

biasanya disini digunakan istilah static.
 sterilisasi

usaha untuk membebaskan sesuatu

dari mikroorganisme secara keseluruhan,
baik bentuk vegetatif maupun
bentuk spora, termasuk virus.

Tentunya metode ini hanya dapat diterapkan

terutama untuk benda-benda mati.
Untuk mengontrol mikroorganisme pada manusia
tentunya harus menggunakan cara yang aman
bagi tubuh manusia tersebut.
 sanitasi
usaha untuk meminimalkan jumlah mikroorganisme
dalam suatu ruang lingkup yang besar
dan umumnya berhubungan dengan tata ruang
dan lingkungan.

Misalnya penyiapan makanan untuk industri makanan atau restoran,

sanitasi air pada perusahaan air minum,
tata ruang dan bangunan
untuk perumahan penduduk
untuk mengatur saluran comberan, sumur dan WC.
 Tabel: Berbagai metode yang digunakan untuk kontrol mikroorganisme

METODE FISIK
Panas Panas kering Red heat
Flaming
Hot air oven
Infrared radiation
Incineration

Panas lembab < 100oC Pasteurisasi

Inspisasi
100oC Tindalisasi
Perebusan
Penguapan
> 100oC Otoklaf

Radiasi Ionisasi
Non-ionisasi

Filtrasi
METODE KIMIA
Disinfektan Larutan

Gas

Larutan
Antiseptik

Antibiotik - Topikal
Kemoterapi
Sistemik
 Kriteria Jenis Bahan Kimia Antimikroba

Toksisitas Spesifitas

1. Disinfektan +++ -

2. Antiseptik ++ -

3. Kemoterapeutik, Antibiotik + +++

 kontrol mikroorganisme dengan metode yang tidak spesifik
(artinya tidak dapat membedakan
antara sel mikroorganisme atau sel host),
baik cara fisik maupun kimia

antimikroba yang kerjanya spesifik

(khusus membunuh mikroba, berpengaruh minimal pada sel host),
 Faktor-faktor yang Berpengaruh
pada Kerja Antimikroba

•Waktu yang dibutuhkan untuk membasmi populasi mikroorganisme

pada sterilisasi bervariasi.
Bakteri lebih mudah terbunuh pada saat aktif membelah

•Jumlah mikroorganisme,
makin banyak mikroorganisme yang harus dibasmi,
makin lama waktu yang diperlukan.

•Variasi populasi.
Bila hanya satu spesies kuman dalam suatu campuran,
akan lebih mudah membasminya
dibandingkan dengan bila bahan yang disterilkan tersebut
mengandung berbagai spesies maupun jenisnya
(bakteri, jamur, virus, spora).
Spesies, contohnya N. gonorrhoeae
lebih sensitif terhadap panas dibandingkan Staphylococcus aureus.
 Faktor-faktor yang Berpengaruh
pada Kerja Antimikroba
(lanjt.)

•Lingkungan: suhu, pH, bahan terlarut

(garam, bahan organik, ion). Bahan yang mengandung
darah, nanah dan sebagainya.
akan menghambat kerja sterilisasi.

•Waktu kontak, intensitas, konsentrasi atau dosis

antimikroba.
 Cara Kerja Antimikroba

1. yang kurang selektif:

membuat kerusakan besar pada beberapa bagian sel,
umumnya adalah cidal.
Contoh: panas, radiasi, beberapa bahan disinfektan,

2. moderat selektif,

3. paling selektif,
ini umumnya adalah kelompok antibiotik
yang mempunyai toksisitas selektif,
artinya toksik terhadap bakteri,
tetapi tidak toksik terhadap jaringan host.
 Target seluler antimikroba

baik fisik maupun kimia

secara umum dikategorikan menjadi 4 golongan, yaitu:

• Dinding sel

• Membran sel

• Proses sintesis seluler (DNA, RNA)

• Protein
 Antimikroba yang Berefek pada Dinding Sel

Dinding sel memelihara integritas struktur mikroorganisme

Beberapa tipe agen kimia merusak dinding sel

dengan menghambat sintesis, mencerna atau merusak permukaan.
Contoh antimikroba kelompok ini adalah antibiotik penicillin,
enzim lysozyme dan lysostaphin.

Sedangkan golongan antiseptik

adalah kelompok detergent dan alkohol.
Antimikroba yang Berefek Pada Membran Sel

Semua mikroorganisme mempunyai membran sel

yang tersusun atas lipid dan protein dua lapis (lipid bilayers),
termasuk virus yang berselubung (envelop).

Struktur lipid bilayer merupakan molekul dengan bagian polar

(bagian yang larut dalam air, hidroflik)
yang menghadap ke luar,
sedangkan bagian nonpolar menjulur saling berhadapan.
Dengan struktur ini membran akan tidak terlalu mudah
dilewati molekul dari luar yang akan masuk ke dalam sel.
Bahan surfatctan merupakan molekul polar
yang mempunyai bagian hidrofobik dan hidrofilik.
Dengan struktur tersebut bahan surfactan akan dapat menyisip
pada membran sel,
dan masuk ke dalam bagian polar lipid bilayers,
membuat disintegritas membran tersebut.
 Molekul surfactan

Lipid bilayers

Sitoplasma

Sitoplasma

Cara kerja surfactan pada membran sel.

Kerusakan membran sel membuat kebocoran masuk dan ke luar sel.
 Antimikroba yang Berefek pada
Sintesis Protein dan Asam Nukleat

Protein merupakan kemponen utama sel,

sehingga dengan terganggunya sintesis protein pada sel tersebut
akan merusak struktur dan fungsi sel tersebut.

Contoh antimikroba yang merusak sintesis sel ini

adalah chloramphenicol.
Chloramphenicol akan berikatan dengan ribosom,
sehingga translasi protein terganggu.
 Antimikroba yang Merubah Fungsi Protein

Sel mikroba berisi berbagai jenis protein yang hanya berfungsi

bila mereka tetap dalam bentuk konfigurasi
tiga dimensi yang normal (konformasi),
contohnya adalah enzim.

Denaturasi menyebabkan perubahan lipatan bentuk sekunder

dan tersier protein,
sehingga bentuk kumparan atau tekukannya tidak seperti aslinya.
Denaturasi dapat terjadi karena panas lembab
atau pengaruh bahan-bahan kimia pelarut organik kuat
(mis.: alkohol, asam, dan fenol)
atau ion-ion metal yang melekatkan diri pada bagian aktif protein
dan mencegah interaksinya dengan substrat yang cocok.
 STERILISASI METODE FISIK

Sterilisasi Panas

panas kering (dry heat) panas lembab (moist heat).

Denaturasi enzim, membran sel, DNA, RNA dan ribosom

oleh panas lembab
terjadi lebih cepat dibandingkan panas kering.

Panas kering dapat mengokidasi sel,

bahkan bila panasnya tinggi dapat mereduksinya menjadi abu.
Hubungan metode, intensitas dan waktu dalam sterilisasi panas.

Dry heat Moist heat

Temperature (oC) Waktu Temperature (oC) Waktu

120 480 menit 100 1200 menit

140 150 menit 110 150 menit

160 60 menit 115 50 menit

170 40 menit 121 15 menit

180 20 menit 125 6,5 menit

130 2,5 menit

 Hal-hal yang mempengaruhi sterilisasi panas:

Keasaman (pH): membantu sterilisasi.

Untuk praktisnya dapat ditambahkan 2% Na-bicarbonate
dalam air untuk merebus peralatan.

Konsentrasi tinggi dari bahan organik (gula, protein dan lemak)

meningkatkan resistensi mikroorganisme.

Sedangkan konsentrasi garam dapat menaikkan atau menurunkan

tergantung jenis mikroorganismenya.

Sel yang kering termasuk spora meningkatkan resistensi.

Obyek yang kering memerlukan waktu lebih lama untuk sterilisasi.
 Hal-hal yang mempengaruhi sterilisasi panas:

Spesies dan jenis mikroorganisme.

Dengan panas lembab bentuk vegetatif

umumnya bakteri, jamur dan virus
akan mati dalam pada 80 oC selama 20 ‘,
tetapi N. gonorrhoeae hanya perlu 3 menit,
sedangkan Staph. aureus perlu waktu 60 menit.

Beberapa pengecualian: T. pallidum (43 oC, 10 menit),

Virus poliomyelitis (75 oC, 30 menit),

Virus hepatitis (60 oC, 10 jam),

Spora (121 oC 10 menit).

 Sterilisasi Panas Kering
. Red heat

Merupakan sterilisasi alat-alat logam kecil, misalnya ose, jarum.

Cara: memanaskan diatas api Bunsen sampai berwarna merah.
Nyala api Bunsen dapat mencapai suhu 1.870 oC.

Flaming dan Incineration

Flaming merupakan metode sterilisasi panas kering menggunakan api

atau koil listrik panas atau radiasi infra red.
Suhu yang dapat dicapai berkisar 800 – 6.500 oC.
Terutama digunakan untuk sterilisasi mulut botol atau tabung,
tutup botol atau tabung, pipet.
Cara: melewatkannya beberapa kali di atas api.

Istilah incineration
biasanya digunakan untuk sterilisasi dengan panas tinggi,
di atas 1.000 oC
dengan tujuan untuk menghancurkan bahan infektif berbahaya,
misalnya jarum, sampel, material kultur, verban luka dan sebagainya,
sehingga bahan dan wadahnya hancur jadi abu.
 Hot air oven

Sterilisasi dengan menggunakan oven sehingga yang

bekerja adalah udara panas kering.
Waktu sterilisasi yang biasa digunakan adalah 160 oC –
180 oC dengan waktu selama 2 – 4 jam.

Dengan panas kering bentuk vegetatif bakteri

umumnya terbunuh dengan pemanasan 100 oC selama
60 menit, sedangkan untuk spora jamur 115 oC, spora
bakteri 120 – 160 oC.

Terutama untuk mensterilkan alat-alat gelas, bahan

minyak, kristal (tepung) yang rusak dengan uap dan
alat logam yang korosif bila menggunakan uap.
Metode ini kurang cocok untuk mensterilkan platik, kain
atau kertas.
 c. Hot air oven

Sterilisasi dengan menggunakan oven sehingga yang

bekerja adalah udara panas kering. Waktu sterilisasi yang
biasa digunakan adalah 160oC - 180oC dengan waktu
selama 2 – 4 jam.
Dengan panas kering bentuk vegetatif bakteri
umumnya terbunuh dengan pemanasan 100oC selama 60
menit, sedangkan untuk spora jamur 115oC, spora bakteri
120 – 160oC.
Terutama untuk mensterilkan alat-alat gelas, bahan
minyak, kristal (tepung) yang rusak dengan uap dan alat
logam yang korosi bila menggunakan uap.
Metode ini kurang cocok untuk mensterilkan platik, kain
atau kertas.
Sterilisasi Panas Lembab (Moist Heat)

Sterilisasi Di Bawah 100oC

Pasteurisasi

Inspisasi
 Pasteurisasi

Terutama digunakan untuk makanan segar

seperti susu, jus buah atau anggur,
yang dikawatirkan terkontaminasi saat pemrosesan.
Ada dua metode pasteurisasi:

Flash pasteurization:

suhu dinaikan dengan cepat ke 71 oC, dipertahankan 15 detik,

cepat didinginkan.

Cara ini lebih menguntungkan karena perubahan rasa lebih kecil,

membunuh mikroorganisme tahan panas lebih baik,
waktu lebih cepat sehingga untuk sterilisasi poduksi makanan
lebih menguntungkan.

Batch pasterization:

dipanaskan 63-66 oC selama 30 menit.

 Inspisasi

Metode ini terbatas penggunaanya, terutama pada laboratorium,

yaitu untuk pembuatan media
yang bahan tersebut akan rusak dengan suhu tinggi.
Panas yang digunakan adalah 75 – 85oC, selam 1 jam untuk telur,
dan 2 jam untuk serum.
 Ultrahigh temperature (UHT)

merupakan metode lain untuk sterilisasi susu.

Dengan cara ini susu akan lebih tahan lama dari proses
pembusukan.

Caranya adalah dengan pemanasan 134 oC selama 1 – 2 detik.

 Pasteurisasi

Merupakan proses menurunkan populasi mikroba dengan panas ringan.

Jadi tidak semua mikroorganisme terbasmi,

tetapi kebanyakan mikroba pathogen yang tidak membentuk spora,
yang sering ditularkan melalui makanan,
seperti bakteri Salmonella sp. (keracunan makanan),
Campylobacter jejuni (gastroenteritis),
Listeria monovytogenes (Listeriosis),
Brucella sp (undulans fever),
Coxiella burnetii (Q fever),
M. tuberculosis dan M. bovis (tuberculosis)
dan beberapa penyakit enterik lain.

Selain itu juga untuk menunda pembusukan.

Sterilisasi Pada 100oc

Perebusan

Penguapan
 Perebusan

perebusan selama 30 menit,

semua jenis patogen akan terbunuh, kecuali bentuk spora.

Metode ini dapat digunakan

untuk sanitasi peralatan untuk bayi, makanan dan pakaian.
 Penguapan

Uap air akan bersuhu 100 oC pada 76mmHg.

Dengan metode penguapan ini penetrasi uap panas

akan lebih mudah menjangkau daerah-daerah tersembunyi
material yang didisinfeksi asal tempatnya tertutup rapat.

Keuntungan lain adalah material yang disterilkan

tidak terendam dalam cairan, sehingga tidak terlalu basah.

Banyak digunakan untuk

disinfeksi peralatan logam, gelas, maupun kain.

Alat yang biasa digunakan: Arnold sterilizer.

 STERILISASI BERTINGKAT (INTERMITEN)

Sterilisasi bertingkat digunakan dengan

cara perebusan atau penguapan
dengan suhu maksimal 100oC selama 30 – 60 menit.
Kemudian bahan tersebut dibiarkan pada suhu normal selama 24 jam.

Dalam suhu normal tersebut

bentuk spora akan berubah menjadi bentuk vegetatif,
kemudian dipanaskan lagi dengan cara yang sama
dan secara intermiten selama 3 hari.

Metode ini terutama cocok untuk sterilisasi

bahan bentuk laruan,
misalnya media pertumbuhan bakteri,
dan kurang cocok untuk peralatan dan pakaian,
 Sterilisasi Di Atas 100 oC

Tekanan udara di permukaan laut adalah 1 atm atau 76 cmHg,

atau 15 pound per square inch (psi).
Pada tekanan normal ini
suhu yang dapat dicapai oleh uap maksimal adalah 100 oC.
Peningkatan tekanan udara akan meningkatkan suhu uap.
Peningkatan tekanan menjadi 15 psi akan meningkatkan suhu 109 oC,
25 psi meningkatkan 115 oC,
30 psi (2 atm) meningkatkan 121oC.

Dari penelitian menunjukkan bahwa

dengan suhu 121 oC selama 10 – 40 menit
cukup untuk membasmi seluruh jenis mikroorganisme,
termasuk bentuk spora.
 Sterilisasi panas lembab bertekanan
dapat dilakukan dengan autoclave.

Autoclave merupakan peralatan berbentuk silinder matal

dengan tutup rapat yang dilengkapi dengan rak
untuk penempatan material yang disterilkan di atas air bahan dasr uap,
dan kelep-kelep pengatur tekanan dan suhu.

Adanya udara dalam ruang sterilisasi akan mengakibatkan:

•Turunnya suhu pemanasan.

•Udara akan menghambat penetrasi uap ke pori-pori material.

•Kondensi udara yang lebih padat dari uap

cenderung membentuk lapisan bawah autoclave
sehingga menghambat pemanasan yang adekuat.
. Autoclave sederhana dengan bahan bakar gas.
 Pengaruh Dingin dan Pengeringan
Pada Kontrol Mikroorganisme

Prinsip dari pemanfaatan suhu rendah dalam kontrol mikroorganisme

adalah untuk menghambat pertumbuhan mereka
selama menunggu pemrosesan
atau untuk penyimpanan.

Dengan suhu dingin ini, aktivitas seluler mereka berhenti.

Beberapa memang terbunuh dengan cara ini,
tetapi sebagian besar hanya menghentikan aktivitas selulernya,
dan dapat aktif kembali pada suasana yang sesuai.
 Pengeringan atau desikasi

akan membunuh kebayakan bakteri patogen,

tetapi beberapa bakteri seperti staphylococcus,
streptococcus dan M. tuberculosis relative tahan
terhadap suasana kering,
khusunya bila terlindung oleh nanah
atau sputum yang mengering.

Resistensi terhadap kekeringan

juga terjadi pada spora (jamur dan bakteri)
dan virus (khusunya yang tidak berselubung).
 Lyophilization

merupakan teknik gabungan pendinginan dan pengeringan,

digunakan untuk menyimpan mikroorganisme
sehingga tahan bertahun-tahun.
Liofilisasi dikerjakan dengan cara mendinginkan mikroorganisme
dengan es kering
yang kemudian dilanjutkan dengan vakum tekanan tinggi
untuk mengisap airnya.
 Sterilisasi Radiasi

energi yang dipancarkan oleh aktivitas atomik

dan dapat menembus benda atau ruang.

Pancaran radiasi dapat berupa gelombang atau partikel.

Radiasi gelombang elektromagnet

berkisar antara gelombang pendek

dengan energi tinggi dari sinar gamma
dan gelombang radio yang mempunyai gelombang sangat panjang.

Dari berbagai jenis gelombang elektromagnet ini

hanya sinar gamma,
sinar X
dan sinar ultra violet
yang dapat digunakan sebagai alat kontrol mikroorganisme
 Radiasi partikel

terdiri atas partikel subatomik,

seperti elektron, proton dan netron
yang dibebaskan oleh atom.
Partikel radiasi yang dapat digunakan sebagai antimikroba
adalah elektron
yang mempunyai kecuali tinggi,
yang disebut juga sebagai partikel β atau sinar katoda.
Kedua jenis radiasi ini bisa didapatkan di alam
atau dapat dihasilkan dengan alat buatan manusia.
 Panjang Gelombang Dalam nm

Ionizing radiation NonIonizing radiation

10-8 10-3 10-1 100 400 800 10 106 109

X-rays Radiowaves
Ultraviolet Infrared/Heat rays
Radar
Gamma rays
Visible Television

Cosmis rays Microwaves

Radio

Shorter wavelengths Longer wavelengths

 Sterilisasi dengan Gelombang Suara (Ultrasonic)

Gelombang suara frekuensi tinggi (ultrasonic)

diketahui dapat merusak sel.

Mikroba yang paling sensitif terhadap metode sterilisasi ini

adalah kuman bentuk batang Gram-negatif,
sedangkan yang paling resisten adalah kokus Gram-positif,
spora jamur dan spora bakteri.
 Sterilisasi Filtrasi

Prinsip sterilisasi metode filtrasi sangat sederhana,

yaitu dengan melewatkan cairan yang akan disterilkan
melalui saringan yang mempunyai lubang cukup kecil,
sehingga mikroba tidak mampu melewatinya.

Sterilisasi filtrasi terutama digunakan untuk

mensterilkan cairan yang tidak tahan panas,
misalnya serum, vaksin, obat, enzim dan sebagainya.
Filtrasi juga digunakan untuk menyaring udara ruangan,
misalnya HEPA (high efficiency particulate air) filters.