Construção de Bancos Genômicos e de cDNA

Prof. Dr. Luiz Artur Mendes Bataus

O quê é um banco genômico?
Qual a diferença para um banco de cDNA?
Quando escolher um ou outro?
Quais as vantagens/características de cada um deles?
Banco genômico : É um conjunto de vetores recombinantes,
contendo parcial ou o totalmente, o genoma de um organismo.

Banco parcial também é denominado de sub-banco.

Banco de cDNA: É um conjunto de vetores recombinantes
contendo seqüências de DNA obtidas a partir do mRNA de um
organismo. (DNA complementar ao conjunto de mRNA de um
determinado organismo, em um dado momento).

Conterá seqüências de DNA daquele organismo que foram

transcritas nas condições do experimento.
Banco Genômico:
1 – trabalhar com procariotos
2 – em trabalhos envolvendo eucariotos no qual se deseja
estudar as regiões regulatórias e/ou visualizar/caracterizar
os íntrons
Banco de cDNA :
1- trabalhos envolvendo eucariotos no qual se pretende
clonar algum gene
2 – estudar os genes transcritos em determinadas
condições.
Banco Genômico:
1 – insertos são muito grandes (milhares de pares de bases)
2 – para se ter um banco representativo é necessário se ter
muitos clones recombinantes independentes, carregando
grandes insertos. Fórmula de Clark & Carbon (1976).
Banco de cDNA :
1 – ele só representa os transcritos naquelas condições.
2 – genes transcritos em poucas cópias em geral não são
encontrados.
3 – tem que clonar o genômico para caracterizar/confirmar
os resultados.
Vetores:
São moléculas de DNA que irão introduzir o DNA
(cDNA) da célula hospedeira na célula receptora.
Principais tipos:
1 – Plasmídeos
2 – Fagos
3 – Cosmídeos
4 – BAC (cromossomo artificial de bactéria)
5 – YAC (cromossomo artificial de levedura)
Construção de um banco genômico
1 – escolha do vetor
2 – escolha do doador
3 – escolha do receptor
4 – extração do DNA do doador
5 – extração do DNA do vetor
6 – digestão dos DNAs obtidos com a mesma enzima de
restrição
7 – produção de vetores recombinantes
8 – análise do banco produzido.
Construção de um banco cDNA
1 – escolha do vetor
2 – escolha do doador
3 – escolha do receptor
4 – extração do mRNA do doador
5 – produção do cDNA
6 – extração do DNA do vetor
7 – digestão dos DNAs obtidos com a mesma enzima de restrição
8 – produção de vetores recombinantes
9 – análise do banco produzido.
MM INT EcoRI
MM INT EcoRI
 Controle de ligação

MM 1 2 3 4 5 6 7 8

Plasmídeo

LIGASE + - + - + - + -
 Transformar célula hospedeira
Introduzir o DNA exógeno dentro da célula.
Diferentes plasmídeos recombinantes
Diferentes Bancos Genômicos Produzidos
Análise do tamanho dos insertos através de digestão com EcoRI
Alguns plasmídeos de clones isolados
Análise do tamanho dos insertos de plasmídeos isolados de
diferentes clones, através de digestão com EcoRI/HindIII
Síntese de cDNA
Síntese de cDNA