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Estas láminas han sido preparadas por la Dra. Rosa Elena Mejía, Jefe del Laboratorio
Nacional de Parasitología del Departamento de Laboratorios, Secretaría de Salud,
Tegucigalpa, Honduras y Dra. Irina T. Jovel, Profesora Auxiliar de la Escuela de
Microbiología de la Universidad Nacional Autónoma de Honduras
Agradecimiento:
– A los Microbiólogos del Laboratorio Nacional de Malaria Dr. Engels Banegas y Jessica
Henríquez por su valiosa colaboración la logística y administración del proyecto.
– Al Laboratorio del Centro de Salud Alonso Suazo en especial a la Jefe del mismo, Dra.
Mitzi Castro y los técnicos que colaboraron con la proporción de muestras, uso de sus
instalaciones y sus valiosas aportaciones.
Autoras:
Dra. Rosa Elena Mejía
Dra. Irina Jovel
Validado por:
• Dra. Nelly Amador, Laboratorio Departamental de Cortes
• Dra. Olga Lidia García, Laboratorio Departamental de Olancho
• Dra. Dilcia Mata, Laboratorio Departamental de Vallle
• Dr. Melvin espinal, Laboratorio Departamental de Choluteca
• Dra. Carla Mejía, Laboratorio Regional de El Paraíso
• Dr. Roberto Valladares, Laboratorio del Seguro Social
• Dra. Mitzi Castro, Laboratorio del centro de Salud, Alonso Suazo
• Dr. Engels Banegas, Laboratorio Nacional de Malaria
• Dra. Jessica Henríquez, Laboratorio Nacional de Malaria
• Dra. Carla Laínez, Laboratorio Nacional de Malaria
• Dra. Lucy Ordoñez, Laboratorio Nacional de la Enfermedad de Chagas
• Dra. Kenia Martínez, Laboratorio Nacional de la Enfermedad de Chagas
• Dra. Doris Quan, Escuela de Microbiología, UNAH
• Dra. Maritza Canales, Escuela de Microbiología, UNAH
• Dra. Raquel Alejandra Roque, Laboratorio Hospital San Felipe
• Dra. Miriam Aguilera, Colegio de Microbiólogos y Químicos Clínicos de Honduras
La Leishmaniasis es endemica en 88 paises del mundo. Se estima que cada ano hay dos millones de
nuevos casos y el numero de personas afectadas sobrepasa los 12 millones. Puede producir danos
en organos internos, lesiones cutaneas y mutilacion de la nariz y la boca. En ALC, no se dispone de
datos fiables sobre la prevalencia y la incidencia de la Leishmaniasis debido principalmente a que la
transmision de la enfermedad se produce en zonas rurales remotas, numerosos casos no se
diagnostican, existe un gran numero de personas que son asintomaticas, y solo en 33 de los 88
paises endemicos la leishmaniasis es una enfermedad de notificacion obligatoria4.
La Enfermedad de Chagas, producida por el Trypanosoma cruzi, es uno de los mayores problemas de
salubridad en America Latina en la poblacion rural desatendida y postergada, al causar morbi-
mortalidad en aproximadamente 20 millones de personas, con una importante carga de enfermedad
para 21 paises endemicos.
La malaria o el paludismo es una enfermedad endemica en las zonas tropicales y subtropicales del
mundo, es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad a nivel mundial. En 2006 se
registraron segun las estimaciones unos 247 millones de casos de malaria entre 3300 millones de
personas en riesgo, produciendose como resultado casi un millon de muertes, principalmente de
menores de cinco anos. En 2008 habia 109 paises con malaria endemica, (World Malaria Report
2008). El parasito Plasmodium, que produce esta enfermedad es transmitido a traves de la picadura
de la hembra del mosquito Anopheles. Tambien puede ser transmitida por transfusion sanguinea, via
placentaria o durante el parto. Al igual que otras parasitosis las mujeres embarazadas y los ninos
menores de 5 anos son las poblaciones mas susceptibles a esta enfermedad. Manual POE, 2006).
1. Organización Mundial de la Salud (2003)La lucha contra las helmintiasis en los niños en edad escolar. Guía para los administradores de los programas de
lucha. A. Montresor, D.W.T. Crompton, T.W. Gyorkos and L. Savioli . OMS, Ginebra.
2. WHO 2006 Weekly epidemiological record. No. 16, 81, 145164 http://www.who.int/wer
3. Pan American Health Organization. Addressing Poverty and Exclusion in Latin America and the Caribbean: Prevention, Control and Elimination of the
Disease of Poverty. PAHO/WHO Regional Strategic Plan Framework 2006-2015. Documento en preparación. Octubre 2006.
4. OMS Consejo Ejecutivo EB118/4 118ª reunión 11 de mayo de 2006 Punto 5.1 del orden del día provisional.
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Medios Auxiliares para el Diagnostico de
Introducción
Parásitos Intestinales y Tisulares en Honduras
La Enfermedad de Chagas se conoce en el país desde los años sesenta, pero es reconocida como un
problema de salud pública solo a fines de los setenta y comienzos de los ochenta, cuando se
realizaron estudios seroepidemiológicos nacionales, que demuestraron la presencia de R. prolixus y
T. dimidiata, su asociación con el tipo de vivienda y la seroprevalencia de T. cruzi en diferentes zonas
de Honduras. En la actualidad, se estima una prevalencia nacional de infección por T. cruzi de 6,2%
en la población general y de 3% en escolares de áreas rurales5, la mayoría de los casos asociados a
transmisión vectorial. Actualmente la prevalencia serológica en donantes es de 1,4%.
En las áreas rurales de Honduras en el mes de abril de 2006, se detectó un total de 1.502 casos
acumulados de Leishmaniasis de los cuales 7 correspondieron a Leishmaniasis visceral. Sin
embargo, se asume que las cifras pueden ser mayores considerando que muchos casos no se
detectan o se reportan, al no ser de notificación obligatoria.
La malaria en el país es de baja transmisión y de forma estacional. Según los datos del Programa
Nacional de Prevención y Control de la Malaria del 2008 el Índice de Parasitemia Anual (IPA) fue de
1.07 por 1000 habitantes por Detección Pasiva de Casos (DPC). De los casos reportados el 92%
fueron producidos por Plasmodium vivax y 8% por Plasmodium falciparum y menos del 1% fueron
infecciones mixtas. Los departamentos que aportaron la mayor cantidad de casos fueron Gracias a
Dios, Olancho, Yoro, Islas de la Bahía, Colón y Atlántida.
Estos medios auxiliares se han elaborado para el fortalecimiento de la estructura de los laboratorios
de parasitología y el mejoramiento de calidad de los técnicos, microbiólogos y otro personal que
trabaja en el diagnóstico de parásitos en los laboratorios de salud pública en Honduras. En el presente
trabajo se ofrecen fotografías de parásitos intestinales y tisulares propios de Honduras, las cuales han
sido tomadas en laboratorios tanto de salud pública como de enseñanza. Además se presentan
algunos de los métodos utilizados para el diagnostico de los parásitos, los cuales servirán como
referencia en los laboratorios. Se espera que sea una ayuda inmediata y sencilla para el personal
técnico y profesional que trabaja en la Red Nacional de Laboratorios. Además puede ser usada como
una herramienta de capacitación
5. Informe de Actividades y Resultados Programa Nacional de Chagas, Asistencia de JICA Y PROMESAS/ACDI 2004. Secretaría de Salud, República de
Honduras. Http://www.paho.org/sapnish/ad/dpc/cd/dch-hon-pnch-2004.pdf
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Medios Auxiliares para el Diagnostico de
Lamina 1 Protozoos
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Examen Directo Microscópico: Lamina 1
Fundamento:
Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas móviles de parásitos de tamaño
microscópico (trofozoítos, quistes de protozoos; así como larvas o huevos de helmintos)
Procedimiento:
1. Colocar en un extremo de la lámina porta objeto una gota de Solución Salina (suero fisiológico) y con ayuda de un
aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia fecal, mezclar bien y cubrirla con una laminilla cubre objeto.
2. Colocar en el otro extremo de la lámina porta objeto una gota de lugol o MIF y proceder a la aplicación de la muestra
fecal, como en el párrafo anterior.
3. Con la Solución Salina, los trofozoítos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural, y con lugol las
estructuras internas, núcleos y vacuolas.
4. Observar al microscopio con Objetivos de 10x, 40x y 100x. El conteo de huevos de Helmintos se hace con el
objetivo de 10x, y para reportar las estructuras de los protozoos, usar el objetivo de 100x.
5. Recorrer la lámina porta objeto siguiendo un sentido direccional, ejemplo: de derecha a izquierda, o de arriba a
abajo.
Resultado:
Los resultados se deberán reportar en la respectiva boleta y el libro de registro de la siguiente manera:
1. Protozoos: reportar el nombre del parásito y el estadio evolutivo encontrado, solo en el caso de Blastocystis
hominis se reporta mayor o menor de 5 parásitos por campo cuando se observa en 100x.
2. Helmintos: Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura y Uncinarias, cuantificar el número de huevos encontrados en
2mg de heces. El resto de los helmintos se reporta únicamente la presencia de huevos o larvas.
Fig. 1 Fig. 2
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4/7/92
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Fig. 4
Fig. 3
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Lamina 2 Protozoos
Parásitos Intestinales y Tisulares en Honduras
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Clave para la identificación de Amebas Comensales Lamina 2
Entamoeba coli
Trofozoito:
15-50 micras
Con pseudópodos cortos, citoplasma granuloso
con numerosas vacuolas y otras inclusiones ,
núcleo con cromatina nuclear irregular y gruesa,
cariosona grande y excéntrico,
Quiste:
5-10 micras
Forma esférica, con vacuolas de glicógeno
difusas, de 1 a 4 núcleos, cuerpos cromatoidales
numerosos de forma variada.
Entamoeba hartmani
Trofozoíto:
4-12 micras
Citoplasma granulado y vacuolado, con
pseudópodos digitiformes; cromatina nuclear
gruesa y cariosoma grande.
Quiste:
5-14 micras
Ovoides, esféricos, citoplasma refringente con
gránulos finos, con 1 a 4 núcleos sin cromatina
periférica y cariosoma grande.
Endolimax nana
Trofozoíto:
6-15 micras
Citoplasma granuloso fino, membrana nuclear
sin cromatina interna, cariosoma grande central
o excéntrico.
Quiste:
5-20 micras
Irregular, vacuola de contorno definido y se tiñe
frecuentemente con lugol, un núcleo con
membrana nuclear poco definida y cariosoma
grande central o excéntrico.
Iodamoeba butschilii
Trofozoíto:
8-20 micras
Citoplasma vacuolar, membrana nuclear sin
gránulos de cromatina, cariosoma grande central
o excéntrico.
Forma Vacuolar:
Esférica de tamaño variable (5-30 micras).
Cuerpo o vacuola central, anillo de gránulos
Blastocystis hominis
periféricos, de 1-4 núcleos. Se observan en las
heces formadas.
Medios Auxiliares para el Diagnostico de
Lamina 3 Protozoos
Parásitos Intestinales y Tisulares en Honduras
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Diferencias entre Entamoeba histolytica Lamina 3
y Entamoeba dispar
En 1993 se publicó una redescripción formal de Entamoeba histolytica distinguiendole de Entamoeba dispar. Esto
sucedió debido a que ambas tienen estadios morfológicamente indistinguibles al microscopio de luz, pero E. histolytica
es capaz de causar enfermedad invasiva intestinal y extraintestinal, ya que es un patógeno de virulencia variable,
mientras que E. dispar se denomina como un patógeno avirulento incapaz de invadir tejidos.
Por mucho tiempo ambas especies venían siendo diagnosticadas como E. histolytica, pero algunos estudios han
demostrado que son dos especies distintas. E. histolytica es capaz de producir enfermedad por mecanismos invasivos
en localizaciones extraintestinales, como absceso hepático e invasión interna de otros órganos y tejidos.
Las infecciones por E. histolytica se producen en todo el mundo, más frecuentemente en regiones tropicales y
subtropicales. En Honduras el hallazgo de quistes en heces se reporta con una frecuencia moderada que oscila entre
el 10 y el 15%; la mayoría de las cuales son infecciones asintomáticas que pudieran ser debidas a cepas virulentas de
E. histolytica o a E. Dispar.
Estas amebas pasan por las siguientes fases en su ciclo vital: trofozoíto, prequiste, quiste, metaquiste y trofozoíto
metaquistico. Pero para fines prácticos solo nos referimos a ellos como trofozoítos, prequistes y quistes.
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Clave para la identificación de Flagelados Lamina 4
Quiste:
Es ovoide y mide de 8 a 12 micras de largo por 7 a 10 micras de
ancho. Su citoplasma es granuloso fino y está separado claramente
de su pared quística. Los quistes inmaduros poseen dos núcleos,
los quistes maduros poseen cuatro núcleos. Los demás organelos:
flagelos: flagelos, disco suctorio, axonema, etc., se retraen y se
incluyen en el quiste.
Trofozoíto:
Los trofozoítos de T. hominis en preparaciones en fresco son
piriformes, miden de 5-14 micras de longitud y su movimiento es
rápido y sin dirección. Posee 4 flagelos anteriores libres y uno más
que bordea la membrana ondulante que le da un movimiento
Trichomonas rotatorio. El axostilo es visible y semirígido y sobresale en el extremo
hominis posterior. Se observa un citostoma opuesto a la membrana
ondulante y un núcleo localizado en la región anterior.
Trofozoíto
Los trofozoítos de Chilomastix mesnilii son asimétricamente
piriformes, aplanándose hacia el extremo posterior, mide de 6 a 20
micras, posee un núcleo esférico situado en la parte anterior; a uno
de los lados del núcleo se ve el citostoma e inmediatamente por
delante del núcleo se encuentran 3 flagelos anteriores libres, 2
cortos y uno largo.
Chilomastix
mesnilii
Quiste
Los quistes tienen forma de pera o de limón, son incoloros y meden
de 7 a 10 micras de ancho con una pared gruesa y resistente: el
citoplasma es densamente granular y por lo general separado de la
pared quística; posee un núcleo, en ocasiones 2, grande vesicular y
a veces se observan las fibrillas a ambos lados del citoplasma.
Trofozoíto
Trichomonas vaginalis es un flagelado cuyo hábitat es la vagina y las
glándulas prostáticas. Solo presenta el estadio de trofozoíto que
mide de 7 a 23 micras; la membrana ondulante es relativamente
Trichomonas corta y el citostoma pequeño. Presenta 4 flagelos libres y un quinto
vaginalis flagelo que bordea la membrana ondulante.
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Método de Flotación por Sheather Lamina 5
Fundamento: Se basa en la flotación de quistes, ooquistes y huevos de parásitos en una solución de azúcar que
posee mayor densidad que ellos. Esta técnica es útil para la concentración de quistes y ooquistes de protozoos y
huevos de helmintos y se usa como método preferencial en el diagnóstico de los coccidios: Cryptosporidium,
Cyclospora, Isospora, etc. El hallazgo de Isospora belli requiere informe inmediato al médico.
Preparación de Reactivos:
Solución concentrada fenolada de azúcar
1. Azúcar en cristales 500g
2. Agua destilada 320ml
3. Fenol en cristales 6.5g
Disolver el azúcar en el agua destilada, usando calor sin dejar llegar a ebullición, dejar enfriar. Filtrar por gasa, agregar
el fenol y agitar hasta disolución, guardar en frasco tapado y rotulado.
Procedimiento:
1. Identificar los portaobjetos con la muestra a examinar
2. Agregar la solución concentrada hasta la mitad del vasito de vidrio
3. Hacer una suspensión de una pequeña porción de heces(1gr) con la ayuda de un aplicador
4. Llenar el vasito con la solución azucarada hasta el borde
5. Colocar un portaobjeto o cubreobjeto previamente rotulado sobre el vasito de vidrio y dejar reposar por
6. 30 minutos.
7. Remover el portaobjeto o cubreobjeto cuidadosamente y cubrir con el cubreobjeto o portaobjeto
8. Examinar la muestra en objetivo de 10x
Método de Formol-Eter
Fundamento: Concentrar huevos y larvas de helmintos, ooquistes y quistes de protozoos en las heces. Se recurre a
este método cuando en el examen directo no se observan parásitos.
Preparación De Reactivos:
Formalina al 10%:
1. Formaldehído 10 ml
2. Solución salina 0.85% 90 ml
Mezclar y guardar en frasco tapado
Procedimiento:
1. Rotular frascos, tubos y laminas con la muestra a examinar
2. Transferir 1-2 gr de heces a un vaso de plástico o cartón y agregar 10 ml de formalina.
3. Suspender completamente las heces con ayuda de aplicadores y dejar fijar por 30 minutos
4. Filtrar con gasa a un tubo cónico
5. Centrifugar a 1500 rpm por 2 minutos
6. Decantar el sobrenadante
7. Agregar más formalina al sedimento agitando este con un aplicador, hasta la mitad del tubo
8. Agregar 2-3 ml de éter
9. Tapar el tubo y agitar vigorosamente por 15 segundos
10. Centrifugar a 1500 rpm por 2 minutos
11. Destapar con cuidado y con un aplicador desprender el tapón de detritus de las paredes del tubo y decantar el
sobrenadante de un solo movimiento
12. Transferir el sedimento a un portaobjetos, cubrir con un cubreobjetos y examinar toda la preparación con objetivo
de 10x, 40x y 100x.
13. Para colorear quistes, agregar una gota de lugol
Medios Auxiliares para el Diagnostico de
Lamina 6 Helmintos
Parásitos Intestinales y Tisulares en Honduras
Ascaris lumbricoides
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Método de Kato Katz (Frotis fecal grueso en celofán) Lamina 6
Fundamento: Este método es útil para estimar la intensidad de la infección. Se utiliza para la elaboración de encuestas
de helmintos intestinales. Presenta algunas ventajas como el no diluir las heces, utiliza materiales accesibles, una vez
preparado puede transportarse en el campo y puede guardarse por varios meses.
Procedimiento:
1. Deposite una pequeña cantidad de heces sobre un papel de periódico u otro papel ordinario y colóquese encima la
rejilla, haciendo presión para que parte de las heces pase a través y aparezca en la parte superior (fig. 3)
2. Ráspese la superficie de la rejilla con una espátula plana para recoger las heces que han pasado a través de
aquella. (fig. 4)
4. Retírese con cuidado la plantilla, de manera que el material fecal quede sobre el portaobjeto formando un pequeño
cilindro.
5. Cúbrase el material fecal con una tira de celofán humedecida con glicerina (fig. 6). El celofán debe estar muy
húmedo si las heces son secas y no tanto si las heces son blandas (si hay un exceso de solución de glicerina en la
cara superior de la tira, empápese con papel higiénico). En los climas secos el exceso de glicerina retrasa pero no
impide la desecación.
6. Inviértase el portaobjetos y comprímase bien la muestra fecal contra la tira de celofán hidrófilo sobre otro
portaobjeto o alguna otra superficie lisa. El material fecal deberá quedar uniformemente extendido entre el
portaobjeto y la tira de celofán (fig. 7). Una vez aclarado, los caracteres de imprenta de periódico deben ser visibles
a través del frotis. (Fig. 8).
7. Retírese el portaobjeto, deslizándolo con suavidad hacia un lado para que no se desprenda el celofán, o
levantándolo cuidadosamente. Colóquese el portaobjeto sobre la mesa con el celofán hacia arriba. El agua se
evapora mientras la glicerina aclara las heces.
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Fig. 2
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Fig. 6
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Fig. 3
Medios Auxiliares para el Diagnostico de
Lamina 7 Helmintos
Parásitos Intestinales y Tisulares en Honduras
Uncinarias Uncinarias
Huevo Fértil en 40x Muestra Preservada en Huevo Infértil en 40 x Muestra Preservada con
Formalina MIF
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Estimado de la Intensidad de Infección; Lamina 7
Conteo de Huevos de Nemátodos Transmitidos
por el Suelo
Propósito:
1. Estimar la intensidad de una infección intestinal por Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Uncinarias del
humano en forma práctica, en una cantidad conocida de heces.
2. Evaluar la efectividad de tratamiento terapéutico. Se asume que la producción de huevos estará en relación directa
con el número de hembras fecundas que deponen huevos.
3. Una variable importante para determinar la intensidad puede ser: clínica, epidemiológica, para encuestas,
evaluación terapéutica, etc.
Métodos:
Los más utilizados son:
Método directo, en frotis (2mg) de heces
Método de concentración por Kato- Katz en 41.7 mg de heces
Cuenta directa de gusanos adultos expulsados después del tratamiento
Método de dilución de Stoll, en 1 gr. de heces.
Para fines clínicos; cualquier tipo de infección por Ascaris debe tratarse; infecciones por Trichuris y Necator con
cuentas de 5 huevos/2 mg de heces o menos no tienen importancia clínica (leves); una cuenta de 5 huevos/2mg de
heces para Ancylostoma ya podría ser importante clínicamente; cuentas de más de 25 huevos/2 mg de heces o 2500
huevos/gr para Necator y 40 huevos/2mg o 20,000 huevos/gr para Trichuris (severas) producen síntomas clínicos
importantes. La tendencia actual es tratar todas las infecciones.
Cuadro 1
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Método de Baermann: Lamina 8
Fundamento: Este es un método para la concentración de larvas rabditoides y filariformes. Es un método muy
conveniente para hacer una buena concentración de larvas; en parasitología médica se utiliza para concentrar larvas
de Strongyloides y Uncinarias.
Procedimiento:
1. Se arma el dispositivo
2. Se llena el embudo con agua, que previamente se calentó a 50° C de tal manera que la malla y la gasa Se mojen.
4. Se deja reposar durante 2 horas para que las larvas pasen al agua del embudo.
5. Pasadas las dos horas, se abre la pinza, dejando salir el agua y se recibe en el vaso de precipitados.
6. Con una pipeta Pasteur, se toma una gota del agua y se coloca entre porta y cubre y se examina con el
microscopio.
7. Si la muestra está positiva, el agua que se encuentra en el vaso de precipitados se centrifuga durante 5 minutos a
1500 rpm y se toman los sedimentos y se buscan las larvas. De encontrarse son muy móviles, por lo que se
recomienda agregar una gota de lugol para facilitar la observación.
Agua
Vaso de
sedimentación
Medios Auxiliares para el Diagnostico de
Lamina 9 Protozoos
Parásitos Intestinales y Tisulares en Honduras
Leishmania
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En Honduras ocurren las tres formas clínicas de Lamina 9
leishmaniasis: cutánea, mucocutánea y visceral.
1. Leishmaniasis cutánea ulcerada:
Se presenta con lesiones únicas o múltiples con diferentes manifestaciones clínicas (lesiones ulcerosas, nodulares,
costrosas, verrucosas). Las lesiones pueden ser pequeñas o de gran extensión. Es una enfermedad estigmatizante
por las cicatrices que quedan una vez tratada. El promedio anual de casos es de 1500 notificados, aún cuando existe
un sub-registro. Los primeros casos fueron reportados en 1928 en la Costa Atlántica. Es causada por Leishmania
braziliensis y Leishmania panamensis y posiblemente por Leishmania mexicana. Las zonas endémicas más
importantes comprenden municipios de los departamentos de Olancho, Yoro, El Paraíso, Santa Bárbara, Cortés,
Atlántida, Colón y Gracias a Dios.
2. Leishmaniasis mucocutánea:
Generalmente es una consecuencia a una leishmaniasis cutánea ulcerada reciente o padecida mucho tiempo atrás.
Causa una severa destrucción, particularmente de la mucosa orofaringea y/o nasal. Los pacientes requieren atención
especializada y muchas veces necesitan cirugía reconstructiva Es causada por Leishmania braziliensis, y Leishmania
panamensis. En Honduras ocurre en las mismas áreas endémicas de leishmaniasis cutánea ulcerada y se observa
con más frecuencia y severidad en varios municipios de los departamentos de Yoro, Olancho y El Paraíso.
3. Leishmaniasis Visceral:
Es la forma más grave, afecta particularmente a niños menores de 5 años, la mayoría menores de 2 años en los que se
desarrolla un cuadro febril con una hiperplasia reticuloendotelial, los parásitos invaden el bazo, hígado y médula ósea
dando lugar a una esplenomegalia, hepatomegalia y pancitopenia (anemia, leucopenia y trombocitopenia). De no ser
diagnosticada oportunamente y tratada adecuadamente, tiene una mortalidad mayor al 90.0 %. En Honduras se
conoce desde 1974, y hasta la fecha se han registrado aproximadamente 300 casos y es causada por Leishmania
chagasi. Las zonas endémicas comprenden municipios de los departamentos de Choluteca, Valle El Paraíso,
Francisco Morazán, La Paz, Intibucá y Lempira.
Relacionada con la forma visceral, también se presenta en el país una forma cutánea no ulcerada conocida desde
1991. Es una enfermedad de evolución clínica muy lenta con lesiones no ulceradas en forma de pequeños nódulos o en
algunos casos de placas extensas, que afecta principalmente población de 6 a 15 años y que también se conoce en
otros países de América Central y del Mediterráneo. (Lancet 337: 67-70. 1991). Desde que se describió en el país se
tiene un registro de aproximadamente 6000 casos. Es causada por Leishmania chagasi y ocurre en las mismas áreas
endémicas de leishmaniasis visceral.
N
Leishmaniasis Cutanea
W E ulcerada y Mucocutánea
Leishmaniasis Cutanea no
S ulcerada y visceral
Medios Auxiliares para el Diagnostico de
Lamina 10 Protozoos
Parásitos Intestinales y Tisulares en Honduras
Trypanosoma cruzi
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Coloración de Wright: Lamina 10
Solución de Wright:
Wright en polvo (certificado) 3 g
Alcohol metílico absoluto 970 mL
Glicerina 30 mL
En un mortero colocar el Wright agregar la glicerina poco a poco; macerar hasta obtener una pasta homogénea suave.
Transferir a un frasco color ámbar diluyendo con alcohol metílico hasta eliminar todo el colorante del mortero. Agitar el
frasco ámbar para lograr una mezcla completa, dejar madurar por una semana (se logra una mejor maduración si se
incuba a 37o C). Mezclar por lo menos dos veces al día durante la maduración. Filtrar antes de su uso y almacenar de
manera fraccionada en frascos ámbar, bien identificados y enumerados. La solución que está en uso se debe colocar
en un frasco gotero. Para colorear utilizar solución amortiguadora de pH 6.8.
1. Cuando el extendido fino se colorea con coloración de Wright, no es necesario fijarlo con metanol puesto que la
solución de Wright contiene suficiente cantidad de metanol para fijar y colorear la muestra simultáneamente.
2. Agregue el número de gotas de colorante que sean necesarias para cubrir la muestra. Coloree por 1-3 minutos (el
tiempo óptimo de coloración variará con cada botella de colorante).
3. Agregue un número igual de gotas de solución amortiguadora pH 6.8 sobre la muestra, asegurándose que el
colorante y la solución se mezclan (puede ayudar soplando sobre la superficie). Colorear durante 4-8 minutos
4. Lavar con agua corriente del grifo o con una pizeta. Dejar secar y observar al microscopio con el objetivo de
inmersión.
Las láminas portaobjetos son suministradas en cajas de 50 o 72 unidades. Aunque en la caja se describan como
“lavadas” o “pre-limpiadas”, las láminas deben ser lavadas adecuadamente, secadas y envueltas. No es posible hacer
gotas gruesas o extendidos finos de buena calidad sobre láminas sucias. Las muestras que se preparan sobre láminas
sucias o grasosas, se desprenderán fácilmente durante la coloración. Por lo tanto, no se deben utilizar láminas que
tengan una sombra iridiscente o que aparecen opacas, que no estén limpias o que estén viejas, con rayones en su
superficie o bordes astillados. Para limpiar las láminas portaobjetos se necesita:
1) Un recipiente grande de material plástico,
2) gasa,
3) detergente de buena calidad en polvo o líquido,
4) dos a cuatro retazos de tela de algodón seca, limpia y que no forme pelusa, y
5) agua limpia.
Láminas nuevas: Todas las láminas nuevas deben lavarse con detergente y agua limpia. Después de ser puestas en
remojo por un período de 30-60 minutos, las láminas deben ser lavadas bajo agua corriente o en varios cambios de
agua limpia. Cada lámina debe ser secada y pulida individualmente con un retazo de tela seca, limpia y que no forme
pelusa. Las láminas limpias solamente deben manejarse tocándolas de los bordes para evitar que se deposite sucio o
grasa en su superficie.
Láminas usadas: Para lavarlas se deben sumergir por uno o dos días en agua con detergente. Cuando sea posible se
debe utilizar agua caliente. Después deben limpiarse uno por uno con la gasa. Se deben remover todos los restos de
muestra, colorante y aceite de inmersión. No se deben dejar las láminas en detergente por más del tiempo indicado. Si
el agua se evapora, el detergente se deposita en la superficie de las láminas y es casi imposible removerlo. Después de
limpiadas, las láminas deben colocarse en una solución nueva de Agua y detergente y después de una hora ser
lavadas bajo agua corriente o varios cambios de agua limpia.
Cada lámina debe ser secada y pulida individualmente como descrito arriba. Las láminas que se clasifiquen
inapropiadas (rayadas, opacas, bordes astillados), deben descartarse.
Las láminas limpias deben empacarse en paquetes de 10 láminas envueltas en papel. Cada paquete puede
Asegurarse con bandas elásticas o cinta adhesiva. Los paquetes pueden colocarse en las cajas de láminas para ser
enviados al campo. Las láminas deben almacenarse en lugares secos. Si se almacenan en lugares calientes y
húmedos, las láminas se pegaran entre ellas después de unas semanas y solo será posible separarlas si se lavan
nuevamente y son secadas. No deben secarse al fogón
Medios Auxiliares para el Diagnostico de
Lamina 11 Protozoos
Parásitos Intestinales y Tisulares en Honduras
Plasmodium vivax
aría de S
et
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r
Sec
ud
B
MICROBIOLOGIA
U N A H
Honduras
Coloración de Giemsa: Lamina 11
Preparación de colorantes y soluciones: Giemsa y Solución Amortiguadora
Mezclar el Giemsa en polvo poco a poco con la glicerina en un mortero. Recoger en un frasco resistente al calor
(erlenmeyer o beaker) que contenga unas 50 perlas de vidrio y disolver a baño maría a una temperatura de 55 a 60 o C
por dos horas; agitar suavemente a intervalos de 30 minutos. Con una parte del alcohol metílico se lava los restos de
reactivo que quedaron en el mortero y se recogen en una botella obscura que contenga perlas de vidrio y que pueda
cerrarse herméticamente. Esperar que la mezcla del baño maría se enfríe para agregarle el resto del alcohol. Mezclar
bien y agregarlo a la botella obscura, continuar agitando. Almacenar durante al menos 2 semanas antes de usarlo.
Mantenerse siempre bien cerrado y filtrar la solución antes de usarla (papel Whatman No. 1). Cuando se prepara una
mayor cantidad, se recomienda fraccionar el colorante en varias botellas de 500 mL bien rotuladas y enumeradas. En
el Cuadro No. 1 se señalan las proporciones para preparar diferente volumen del colorante.
2. Soluciones amortiguadoras
Solución amortiguadora A
NaH2PO4 (H2O) (Solución ácida) 9.2 g
Agua destilada 1000 mL
Disolver la sal (fosfato sódico monobásico) en una pequeña cantidad de agua destilada. Una vez disuelta agregar
agua hasta completar 1000 mL. Mezclar bien e identificar. Esta sal se puede sustituir por fosfato potásico (KH2PO4).
Solución amortiguadora B
Na2HPO4 (Solución básica o alcalina) 9.5 g
Agua destilada 1000 mL
Disolver la sal (fosfato sódico dibásico) en una pequeña cantidad de agua destilada. Una vez disuelta agregar agua
hasta completar 1000 mL. Mezclar bien y guardar en frasco rotulado.
La solución amortiguadora para la coloración con Giemsa se prepara a partir de estas dos soluciones mezcladas en
proporciones que producen un pH en el rango de 7.0 a 7.2. En el Cuadro No. 2 se señalan las proporciones.
Ejemplo: para preparar 100 mL de solución amortiguadora pH 7.0, las proporciones son: 6.1 mL de solución alcalina y
3.9 mL de solución ácida y completar a 100 mL con agua destilada.
Medios Auxiliares para el Diagnostico de
Lamina 12 Protozoos
Parásitos Intestinales y Tisulares en Honduras
Plasmodium falciparum
aría de S
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Sec
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B
MICROBIOLOGIA
U N A H
Honduras
Preparación y coloración de la gota gruesa y Lamina 12
el extendido fino
Preparación de la gota gruesa: Tener todos los materiales listos. Es importante que las láminas portaobjetos se
encuentren limpias, libres de grasa que pueda interferir con la adhesión de la sangre al portaobjetos o con el
deslizamiento de la misma en el caso del extendido.
1. Frotar enérgicamente la yema del dedo del paciente (se prefiere el tercer dedo de la mano izquierda, talón en caso
de niños pequeños ó lóbulo de la oreja) con algodón humedecido con alcohol al 70%. Secar con algodón seco. El
dedo se sostiene enérgicamente (importante en caso de niños) y se pincha en forma rápida. La primera gota de
sangre se seca con el algodón seco.
2. Se utilizan dos láminas portaobjetos. En el centro de una de ellas se deposita la gota de sangre que se obtiene por
presión leve en el dedo. Sobre la superficie de trabajo y usando la esquina de la segunda lámina se extiende la
sangre de manera que forme un rectángulo de grosor uniforme, con dimensiones de 1.0 x 1.5 cm.
3. Dejar secar la muestra y si es posible, intensificar el proceso de secado agregando calor moderado.
1.5 1.5
cm cm
1.5cm 1.5cm
1.0
cm A 1.0
cm A
1.0 1.0
cm cm
01
B 01
080137
B
2.0cm
Elaborado por:
Dra. Rosa Elena Mejía
Dra. Irina Jovel
Diseño:
Josue Rodriguez
Impreso en:
Publigraficas S. de R.L.
Tel.: (504) 234-8225
Tegucigalpa, M.D.C.
Honduras C. A.
Es un organismo cooperante en nuestro país que en
el área de control de parásitos ha contribuido en el
fortalecimiento de la Red Nacional de
Laboratorios, a través de la Sección de
Parasitología, del Laboratorio Nacional de
Vigilancia de la Salud, de la Secretaría de Salud,
por medio de capacitaciones y financiamiento para
la realización de manuales, material educativo,
capacitaciones y evaluación externa del
desempeño mediante su programa de
seguimiento. En esta oportunidad y en
colaboración con la Escuela de Microbiología de la
UNAH hemos elaborado los medios auxiliares que
serán una herramienta que vendrá a fortalecer el
diagnostico microscópico de parásitos intestinales
y tisulares en nuestro país.
aría de S
et
M
al
r
Sec
ud
B
MICROBIOLOGIA
U N A H
Honduras