Separasi Enzim Papain

dari
Carica papaya
 Tentang Enzim Papain
• Enzim cysteine protease yang mengkatalisis degradasi protein
dan peptida
• Biasa ditemukan tanaman papaya (Carica papaya) sehingga
dikenal juga dengan nama papaya proteinase I
 Tentang Sumber Enzim
Enzim ini dapat ditemukan pada
pepaya yang mentah/muda

Semakin hijau buah pepayanya,

semakin aktif enzim papain ini

Getah/Latex dari pepaya inilah yang

banyak mengandung enzim papain
 Tentang Proses Separasi
• Enzim papain ini diseparasi dari getah pepaya dengan metode presipitasi
• Getah ini dicampurkan dengan 0,04M cysteine pada pH 7 lalu difiltrasi
• Filtrate dari campuran tersebut dinaikkan pH nya hingga pH 9 dan
disentrifugasi pada suhu 4°C
• Supernatan dari produk sentrifugasi itu dipresipitasi dengan penambahan
larutan acetone 70% (v/v)
• Hasil presipitasi dilarutkan dengan 0,02M cysteine pada pH 7
• Larutan tersebut kemudian dipresipitasi lagi dengan penambahan larutan
NaCl 20% (v/v)
 Tentang Analisis Aktivitas Enzim
• Analisis yang dilakukan dengan metode hidrolisis casein
• 0,1 ml dari enzim yang telah dipurifikasi dicampurkan dengan 1,1
ml casein 1% yang mengandung 12 mM cysteine dalam buffer 0,1
M Tris-HCl (pH 8,5)
• Proses reaksi dilakukan pada suhu 42°C selama2 menit
• Reaksi dihentikan dengan penambahan 1,8 ml trichloroacetic acid
5%
• Hasil reaksi disentrifugasi pada 3000 g selama 20 menit
• Absorbansi supernatan diukur pada 280 nm
 Literature
• Liggieri, Constanza et al. 2008. Biochemical analysis of a papain-
like protease isolated from the latex of Asclepias curassavica L.
Acta Biochim Biophys Sin (2009): 154–162
• Nitsawang, Sarote et al. Comparision of the Separation of Papain
from Local Carica papaya Latex by Precipitation Technique.
• Monti, Rubens. 2000. Purification of Papain from Fresh Latex of
Carica papaya. Brazilian Archives of Biology and Technology, v.43,
n.5, p. 501-507
• http://staff.unud.ac.id/~semadiantara/wp-
content/uploads/2011/03/Enzyme-Usage-in-Meat-Industries.pdf
Thank You