Anda di halaman 1dari 24

DNA dan HIBRIDASI

(Bukti untuk kelaziman hybridization antara Dolly Varden


(Salvelinus malma) dan Sapi jantan ikan trout (Salvelinus
confluentus) di northcentral Columbia Inggris watershed)

Bahan dan metode


Studi situs

Daerah penelitian terdiri dari aliran sungai untuk Thutade Danau


Northcentral British Columbia (Gbr. 2). Danau Thutade dalam Gambar. 1.
Distribusi Dolly Varden trout dan banteng di British Columbia menunjukkan
wilayah aktual atau potensial tumpang tindih relatif terhadap Danau Thutade
DAS. Gambar. 2. Danau Thutade wilayah studi menunjukkan lokasi contoh
(salib) dan lokasi dimana ditemukan hibrida char (dikelilingi salib). Baxter et
al. 423© 1997 Kanada NRC barat daya sistem hulu Sungai Mackenzie dan
menghubungkan ke Mackenzie melalui Finlay atas dan sistem sungai
Perdamaian.
Lokasi penelitian ini terletak di Attichika (dan anak sungai nya, Kemess
Creek ), Attcelley, dan Pass sungai Selatan (semua anak sungai untuk
Thutade Danau).

Gambar 1

Gambar 2
Char koleksi

Char sampel dikumpulkan dari setiap lokasi penelitian oleh electroshocking


pada bulan Agustus-September 1994. Untuk analisis morfologi, char (N =
74) yang diawetkan dalam formalin 10% selama 2 minggu, direndam dalam
air selama 2 hari, dan kemudian disimpan dalam 40% isopropanol. Darah,
hati, dan sirip jaringan dikumpulkan dari subsampel dari char diperiksa
untuk morfologi analisis (N = 33) dan C.°disimpan dalam etanol 95% di 4
Analisis morfologi Di antara karakter morfologi dan meristic dipelajari oleh
Haas dan McPhail (1991), jumlah total sinar insang, sirip dubur sinar nomor,
dan rasio panjang rahang atas dengan panjang standar dapat
mengidentifikasi individu-individu dari dua spesies dari populasi allopatric
dengan akurasi 100% menggunakan analisis LDF. Perbedaan antara spesies
dalam sifat-sifat yang diwarisi, dan hibrida buatan antara mereka secara
morfologis antara; Dolly Varden memiliki kurang insang dan sirip dubur sinar
dan rasio yang lebih rendah dari rahang atas panjang panjang standar
daripada bull trout (Haas dan McPhail 1991). Kami mencetak karakter-
karakter dalam sampel char kita dari Thutade DAS Danau untuk
memperoleh bukti dari char populasi sympatric dan hibrida di antara
mereka di dasar karakterisasi spesies dan hibrida mereka dibuat oleh Haas
dan McPhail (1991). Itu pengukuran dibuat menggunakan kaliper Vernier,
dan jumlah dilakukan di bawah mikroskop bedah. Seperti direkomendasikan
oleh Neff dan Smith (1979), kami menggunakan pokok komponen (PC)
analisis data korelasi matriks (Pimentel 1979) untuk menghasilkan skor
ringkasan multivariat morfologi
variasi antara spesies dan untuk mendapatkan bukti untuk hibrida.
Mengingat perbedaan morfologi dikenal antara allopatric Dolly Varden trout
dan banteng, distribusi bimodal skor PC akan menjadi bukti dari populasi
sympatric dengan skor PC hibrida
menempati posisi tengah (cf. Neff dan Smith 1979; Campton 1987)

Analisis molekuler

Kami menggunakan tiga tes variasi genetik molekuler dalam DNA char untuk
memeriksa pertanyaan tentang hibridisasi antara Dolly sympatric
Varden trout dan banteng. Grewe et al. (1990) memutuskan delapan
mitokondria
DNA (mtDNA) beda dengan situs restriksi enzim untuk enam
memproduksi profil situs restriksi spesies-spesifik untuk Dolly Varden
dan bull trout. Kami menggunakan HindIII enzim untuk membedakan Dolly
Varden trout banteng dari mtDNA. The dimorfisme HindIII hasil
dari perubahan pembatasan situs tunggal antara dua spesies (lima
situs di Dolly Varden dan empat situs di bull trout). Ekstraksi DNA
dari etanol-disimpan jaringan mengikuti pronase, atau proteinase K,
pencernaan dan prosedur ekstraksi fenol-kloroform dijelaskan dalam
Taylor et al. (1996). Sampel DNA genomik (5 mg) telah dicerna
dengan HindIII (New England Biolabs), dielektroforesis dalam agarosa 1,0%
gel, dan Selatan mengusap ke membran nilon seperti yang dijelaskan dalam
Taylor et al. (1996). variasi situs Restriction kemudian diuji menggunakan
hibridisasi DNA-char terikat membran dengan digoxigeninlabelled
C diikuti°pelangi berbau (Osmerus mordax) mtDNA pada 58
oleh deteksi hibrida DNA probe-char oleh chemiluminescence
(Taylor et al 1996

Akibatnya, untuk mengidentifikasi baik Dolly Varden atau


trout banteng mtDNA, kita diuji sebagian besar sampel kami untuk
Situs HindIII perbedaan. Sebagai mtDNA maternal diwariskan (Avise
dan Lansman 1983), analisis ini mendeteksi adanya satu, atau
lain, mtDNA spesies dalam sampel masing-masing, namun tidak dapat
mendeteksi hibrida. Jika
dikombinasikan dengan analisis penanda biparentally warisan,Penanda
molekuler kedua melibatkan pembatasan analisis situs
internal transcribed spacer region pertama dari DNA ribosom
(RDNA) kompleks gen. Ribosomal DNA adalah sebuah kelas tandem
DNA repetitif nuklir terdiri dari coding dan bukan pengkode (spacer
daerah) urutan DNA. Daerah coding rRNA yang menghasilkan
menggabungkan dengan protein ribosom untuk menghasilkan ribosom
(review di
Hillis dan Dixon 1991). Dalam rekonstruksi filogenetik dalam
genus, Pleyte et al. (1992) diurutkan pasangan basa 600 (pb) yang pertama
daerah internal transcribed spacer (ITS 1) terisolasi dari enam jenis
dari Salvelinus. Dolly Varden trout banteng dan berbeda di ITS mereka 1
urutan sekitar 8,6% (Pleyte et al. 1992) dan, yang menarik,
tidak masing-masing keluarga terdekat; Dolly Varden adalah
paling berkaitan erat dengan Arctic char (Cuon Salvelinus, 1,3% perbedaan)
sedangkan bull trout yang paling erat hubungannya dengan Jepang
char (Salvelinus leucomaenis, perbedaan 6,0%).
Perbandingan yang dipublikasikan ITS 1 urutan Dolly Varden
dan trout banteng menunjukkan beberapa enzim restriksi yang akan
mengungkapkan
pembatasan situs perbedaan antara spesies. Untuk mengeksploitasi
perbedaan-perbedaan ini,
kami menggunakan polymerase chain reaction (PCR) untuk memperkuat
ITS 1 wilayah dari ikan menggunakan primer yang ditemukan dalam 18
tahun mengapit
dan coding daerah 5.8S. Primer yang digunakan dalam reaksi PCR
AAA AAG CTT ′ adalah 5 ′ TAC TTG ACA CCC CCG GTC GC 3
′ ′ (ITS 1 maju) dan 5 TTG AGC TCT CGT CTG TCA TCG A 3
(ITS 1 reverse) seperti yang dijelaskan dalam Pleyte et al. (1992)

Reaksi PCR

dijalankan dalam volume reaksi 40 mL bawah kondisi berikut


(Akhir konsentrasi): 1 mg template, 1,5 U Taq polimerase
(Promega), 3 mM MgCl2, dATP, dTTP, dCTP, dan masing-masing di dGTP
200 mmol, 350 pmol primer masing-masing, 1% Triton X-100, 10 mM Tris-
HCl (pH 9,0), dan 50 mM KCl. Selain itu, 1 U dari Perfect Match
enzim (Stratagene) telah ditambahkan untuk setiap reaksi untuk mengurangi
amplifikasi yang
fragmen DNA nontarget (cf. Pleyte et al 1992).. Pengerasan
Reaksi dilakukan dengan bersepeda berikut
kondisi: 30 C selama 1 menit, annealing pada°siklus denaturasi pada 94
C selama 1°55 C selama 1,5 menit, diikuti°menit, dan perpanjangan primer
di 72
dengan siklus C selama 5 menit.°tunggal ekstensi pada 72 .

.( Seperti yang diperkirakan dari urutan mereka diterbitkan (Pleyte et al


1992).,
ketika ITS 1 produk PCR diinkubasi dengan sejumlah
enzim, pembatasan situs perbedaan antara Dolly Varden dan banteng
trout terungkap. Salah satu enzim, SmaI, memotong-bp 825
amplifikasi produk trout jantan menjadi dua fragmen yang lebih kecil (500
dan 325 bp), tetapi fragmen 825-bp tidak dipotong Dolly Varden. Sebagai
rDNA adalah biparentally diwariskan dan terbatas pada satu kromosom
lokasi di Dolly Varden trout dan banteng (Phillips et al 1989).,
hibrida generasi pertama antara spesies akan menghasilkan komposit
SmaI panjang fragmen restriksi perbedaan. Artinya, murni Dolly
Varden akan memiliki fragmen 825-bp tunggal, trout banteng murni akan
memiliki
dua fragmen (500 dan 325 bp), dan hibrida akan memiliki tiga fragmen
(825, 500, dan 325 bp). Salah satu potensi masalah dengan teknik ini
adalah bahwa pencernaan tidak lengkap produk PCR dengan SmaI bisa
keliru untuk pola hibrida.
Produk PCR (2 mL) diinkubasi dengan 20 unit
sesuai enzim (New England Biolabs atau Boehringer
Mannheim). Pembatasan PCR produk tersebut dielektroforesis dalam 2%
gel agarosa dan massa molekul fragmen diperkirakan
dibandingkan dengan standar ukuran massa molekul (BRL
Bisakah 424. J. Ikan. Aquat. Sci. Vol. 54, 1997)
© 1997 NRC Canada
1-kb tangga) yang meliputi fragmen mulai dari ukuran 200 sampai
1000 pb.
ketiga penanda molekuler kami variasi alelik pada dua
hormon pertumbuhan (GH) lokus menggunakan probe cDNA dikembangkan
dari
sockeye salmon (salem nerka) GH gen (Devlin 1993).
cDNA yang menyelesaikan perbedaan panjang fragmen restriksi
(RFLDs) di dua lokus secara simultan (GH1 dan GH2) dalam berbagai
salmonid spesies (R. H. Devlin, data tidak dipublikasikan). Variasi ini
lokus diduplikasi telah diuji oleh hibridisasi selatan HincIIrestricted
genomik DNA. Antara 25 dan 30 ng dari cDNA GH
diberi label dengan [a-32P] dCTP oleh priming acak (Feinberg dan
Vogelstein 1983.

Hybridizations telah dilakukan di 5 3 SSC dan


53 solusi Denhardt's (albumin serum sapi 0,02%, 0,02%
C di hadapan°Ficoll, 0,02% polivinil) pada 60
Betis timus 0,1% sebagai pesaing. mencuci keketatan Final adalah 1%
C.°SSC -0,1% SDS 60 Ketika diuji dengan cara ini, Dolly Varden
dan trout banteng yang homozigot untuk alel alternatif di GH dua
lokus. Pada GH1, semua Dolly Varden diuji untuk tanggal (lihat di bawah)
memperlihatkan
2,9 alel tunggal pasangan kilobase (kb) sedangkan bull trout
memperlihatkan
3,5-kb alel. Di GH2, Dolly Varden memperlihatkan alel 2,5 kb sedangkan
trout banteng memiliki alel 2,2 kb.)

(Komplementer fitur mtDNA dan nuklir dikodekan


spidol telah dimanfaatkan untuk mempelajari sejauh, dan directionality,
dari hibridisasi interspesifik di beberapa spesies lain (misalnya, Baker et
al. 1989; Herke et al. 1990; Bernatchez et al. 1995). Semua seperti analisis
mengasumsikan tidak adanya variasi dalam-spesies untuk penanda
bekerja. Dalam kasus kami, mtDNA yang diterbitkan (Grewe et al. 1990)
dan rDNA (Pleyte et al 1992). perbedaan spesies berdasarkan
geografis terbatas sampling dari populasi dalam spesies.)

).( Untuk mengkonfirmasi


ketiadaan spesies dalam-variasi dalam penanda molekuler kami,
kami memeriksa sampel dari "murni" Dolly Varden allopatric dan
banteng trout dari serangkaian tersebar luas wilayah (Tabel 1): 10
Dolly Varden populasi mulai dari Pulau Vancouver selatan
kepada Ratu Charlotte Kepulauan dan 11 bull trout didistribusikan populasi
Sungai Fraser dari atas ke Sungai Metolius, di Oregon.
Dalam lebih dari 100 allopatric char diuji, tidak ada bukti withinspecies
variasi dalam mtDNA, rDNA, dan spidol GH. Jadi, kami
menyimpulkan bahwa mereka diagnostik untuk masing-masing spesies.
Kami juga
dikonfirmasi warisan ibu dari RFLDs mtDNA, dan
biparental warisan rDNA ITS 1 dan GH RFLDs, masing-masing,
menggunakan DNA dari beberapa hibrida yang dibesarkan di laboratorium
yang diproduksi oleh
Haas dan McPhail (1991).
).( Hasil
Analisis morfologi
Analisis morfologi char dikumpulkan di Danau Thutade
DAS menunjukkan bahwa kedua Dolly Varden trout dan banteng
hadir di seluruh daerah studi. Analisis PC
tiga karakter diringkas 71% dari variasi sepanjang
pertama sumbu (Tabel 2), yang memisahkan menjadi dua spesimen
utama kelompok (Gbr. 3). Kelompok pertama memiliki PC modal 1 skor
dari 20,625 dan sebanding dengan ikan dengan jumlah rendah
insang dan sirip dubur sinar dan rasio rendah dari rahang atas
panjang panjang standar. Kelompok kedua ikan memiliki
PC modal 1 skor 1.2 dan ikan ini dikarakterisasi oleh
tinggi nilai-nilai untuk semua tiga sifat. Kehadiran dua utama
morfologi kelompok char, dan perbedaan antara
mereka, konsisten dengan karakterisasi morfologi
allopatric Dolly Varden trout dan banteng (Gbr. 3; cf Haas dan.
McPhail 1991).

N Kedua modal kelompok char dikaitkan dengan


Tabel 1. Lokasi dan ukuran sampel untuk Dolly Varden trout banteng
allopatric dan diperiksa untuk mtDNA, rDNA,
dan GH RFLD variasi.

).( Variasi molekuler


Sebanyak 33 char yang datanya diambil morfologi
juga tersedia untuk analisis molekuler. Dari 33 ikan
diperiksa untuk selisih mtDNA pembatasan situs HindIII,
20 dilakukan Dolly Varden trout mtDNA dan 13 bull dilakukan
mtDNA (umpamanya, Gambar 4).. Semua ikan dengan Dolly Varden mtDNA
telah
PC 1 skor di bawah 0 (berarti 6 SE = 20,673 6 0,07, N = 20).
Semua kecuali satu ikan trout banteng dengan PC 1 mtDNA memiliki skor
lebih besar dari 0 (1,18 6 0,09, N = 13).

.( 33 char diuji untuk variasi mtDNA juga


diuji untuk variasi situs restriksi SmaI dari PCRamplified
ITS 1 fragmen dan variasi di situs HincII
GH lokus. Dua puluh dua char memiliki ITS 1 dan GH RFLDs
diagnostik Dolly Varden dan sembilan telah RFLDs diagnostik
bull trout (Gambar 5 dan 6). Semua karakter dengan spidol nuklir
diagnostik Dolly Varden juga memiliki Dolly Varden
mtDNA sedangkan semua ikan trout banteng dengan spidol nuklir dilakukan
bull trout mtDNA.)

(Dua ikan, bagaimanapun, telah tiga-banded


pola rDNA sesuai dengan fragmen kedua diagnostik
spesies (jalur 5 dan 6, Gambar 5).. Salah satu ikan ini adalah heterozigot
untuk Dolly Varden trout banteng dan GH RFLDs pada kedua lokus,
comfirming statusnya sebagai hibrida F1 (jalur 3, Gambar 6).. Itu
char lain dengan fenotipe rDNA tiga-banded (lajur 6,
Tabel 2. Komponen nilai koefisien untuk analisis PC char
dari DAS Danau Thutade.
Sifat PC 1 PC 2 PC 3
BRN 0,429 0,023 -1,441
AFRN 0,383 0,899 0,846
UPJ: SL 0,379 -0,934 0,778
% Dari total varian 70,6 19,5 9,8
Catatan: BRN, jumlah sinar insang; AFRN, jumlah sirip dubur sinar;
dan UPJ: SL, rasio panjang rahang atas dengan panjang standar. Juga
diberikan
persentase variasi morfologis total yang dicatat oleh
sumbu masing-masing komponen)

(Dua ikan, bagaimanapun, telah tiga-banded


pola rDNA sesuai dengan fragmen kedua diagnostik
spesies (jalur 5 dan 6, Gambar 5).. Salah satu ikan ini adalah heterozigot
untuk Dolly Varden trout banteng dan GH RFLDs pada kedua lokus,
comfirming statusnya sebagai hibrida F1 (jalur 3, Gambar 6).. Itu
char lain dengan fenotipe rDNA tiga-banded (lajur 6,
Tabel 2. Komponen nilai koefisien untuk analisis PC char
dari DAS Danau Thutade.
Sifat PC 1 PC 2 PC 3
BRN 0,429 0,023 -1,441
AFRN 0,383 0,899 0,846
UPJ: SL 0,379 -0,934 0,778
% Dari total varian 70,6 19,5 9,8
Catatan: BRN, jumlah sinar insang; AFRN, jumlah sirip dubur sinar;
dan UPJ: SL, rasio panjang rahang atas dengan panjang standar. Juga
diberikan
persentase variasi morfologis total yang dicatat oleh
sumbu masing-masing komponen)
(Gambar. 4. Mitokondria fragmen restriksi DNA haplotype digunakan untuk
membedakan trout banteng dan Dolly Varden. Haplotype diselesaikan
dengan membatasi DNA genom dengan HindIII diikuti dengan hibridisasi
dengan C.°digoksigenin-label mordax O. mtDNA pada 58 Bull trout:
lajur 1, Metolius Sungai (Oregon), jalur 2, Thompson Sungai Utara
(Atas Fraser River, BC); jalur 3, Attycelley Creek (Thutade Lake,
SM); jalur 4, Pass Selatan Creek (Thutade Lake, SM), jalur 5, Utara
Kemess Creek (Danau Thutade, sebelum Masehi). Dolly Varden: jalur 6,
Attycelley
Creek (Thutade Lake, SM); jalur 7, Cowichan Danau (Vancouver
Pulau, SM); jalur 8, Honna Sungai (Queen Charlotte Islands, SM).
kb, massa molekul penanda ukuran.
Bisakah 426. J. Ikan. Aquat. Sci. Vol. 54, 1997
© 1997 Kanada NRC)
Gambar. 5) menunjukkan perbedaan intensitas bromida etidium
bernoda RFLDs; massa fragmen molekul yang lebih tinggi
diagnostik Dolly Varden lebih kuat daripada dua
molekul rendah bull trout massa fragmen. Char ini juga
memiliki sebuah GH RFLD rekombinan; itu adalah homozigot untuk
trout banteng alel GH1, tapi heterozigot untuk Dolly Varden
dan banteng fragmen restriksi trout di GH2, menunjukkan bahwa
ini merupakan hibrid pasca-F1-generasi atau silang balik (jalur 4, Gambar 6)..
F1 hibrida dan hibrida generasi selanjutnya atau silang balik
individu kedua memiliki skor morfologi menengah sepanjang
PC 1 (20,254 dan 0,440 masing-masing, Gambar 3)..
Dua ikan itu dengan PERUSAHAAN hibrida silang balik 1 dan GH RFLDs
dan morfologi antara ditampilkan bull trout HindIII
mtDNA RFLD (misalnya, membandingkan jalur 4 dan 5 pada Gambar 4
dengan.
jalur 5 dan 6 pada Gambar. 5 dan dengan jalur 3 dan 4 dalam Gambar. 6).
Dolly Varden mungkin memasuki DAS Danau Thutade
dari sistem Sungai Skeena. Ketinggian tanah antara
yang Thutade Danau (Mackenzie Basin) DAS dan Sustut
Sungai dalam sistem Skeena (Pacific Basin) relatif
rendah, dan adanya kokanee (O. nerka) di Thutade
Danau menyiratkan transfer fauna postglacial antara
Drainase.
Ketika ia dibangkitkan trout banteng sebagai suatu spesies terpisah
dari Dolly Varden, Cavender (1978) menyatakan bahwa di mana
mereka berkisar tumpang tindih dua spesies mungkin berhibridisasi. saran
ini
didasarkan pada dua ikan morfologis antara
dikumpulkan dari Sungai Skeena atas (Swan dan Morrison
danau). Sejak 1978, bukti telah akumulasi untuk hibridisasi
di antara banyak spesies Salvelinus (misalnya, Leary et al.
1983; Hammer et al. 1989; Markle 1992; Wilson dan Hebert
1993; Bernatchez et al. 1995). Oleh karena itu, tidak mengherankan bahwa
Dolly Varden trout banteng dan silang, namun data kami
menunjukkan bahwa hibridisasi di char mungkin melampaui
F1 generasi (cf. Hammer et al 1991) Lebih lanjut, data kami menunjukkan
bahwa intermediacy morfologi saja belum tentu
bukti yang dapat diandalkan hibridisasi.

Misalnya, dari sembilan


morfologis antara char dari danau Thutade
Gambar. 6. Hormon pertumbuhan genotipe digunakan untuk membedakan
bull trout,
Dolly Varden, dan hibrida mereka. Genotipe diselesaikan oleh
hibridisasi DNA genomik HincII-dibatasi dengan suatu sockeye
salmon (O. nerka) C.°GH cDNA pada 60 Lane 1, trout banteng; lajur 2,
Dolly Varden; jalur 3, F1 hibrida; jalur 4, hibrida pasca-F1 atau silang balik.
Perkiraan molekul massa (kb) diberikan di sebelah kiri.
Gambar. 5. Ribosomal DNA genotipe digunakan untuk membedakan Dolly
Varden, trout banteng, dan hibrida mereka. Genotipe diselesaikan oleh
pemotongan PCR-amplified PERUSAHAAN char 1 rDNA dengan SmaI dan
electrophoresing
sampel dalam gel agarosa 2,0%. Dolly Varden: lajur 1, Cowichan
Danau (Vancouver Island, BC), lajur 2, Honna Sungai (Ratu
Charlotte Islands, SM), jalur 3, Kumealon Lake (pusat SM
pantai); jalur 4, Attycelley Creek (Thutade Lake, SM). Hybrid char:
jalur 5, Pass Selatan Creek (Thutade Lake, SM), jalur 6, Utara
Kemess Creek (Thutade Lake, SM); trout Bull: jalur 7, Attycelley
Creek (Thutade Lake, SM); jalur 8, Metolius Sungai (Oregon); jalur
9, Thompson Sungai Utara (atas Fraser River, BC). Danau Thutade
individu dalam jalur 4-7 adalah sama dengan yang di jalur 6, 5, 4, dan 3,
masing-masing, pada Gambar. 4. kb, massa molekul penanda ukuran.
Baxter et al. 427
© 1997 Kanada NRC) DAS yang telah kita bahas untuk variasi molekuler,
hanya dua
menunjukkan rDNA dan bukti GH dari hibridisasi. Hal ini menunjukkan
bahwa, di daerah sympatry, perbedaan morfologis
yang handal dalam allopatry harus ditafsirkan dengan hati-hati,
dan independen analisis (berdasarkan biparentally warisan
marker molekuler) yang diperlukan untuk mengidentifikasi hibrida. Ini
terutama benar ketika introgression ini terjadi karena seperti
populasi biasanya menghasilkan mosaik jenis morfologi,
dan hibrida dan backcrosses dapat menyerupai salah satu atau kedua
para orangtua spesies (Gbr. 3; Neff dan Smith 1979; Campton
1987).)
Data kami menunjukkan bahwa untuk intensitas char pasca-F1 hibrida yang
dari Dolly Varden rDNA RFLD jauh lebih besar daripada
bahwa fragmen bull trout (Gbr. 5). The nondispersed
organisasi Dolly Varden trout banteng dan rDNA array
(Phillips et al 1989). Berarti bahwa unit berulang diwarisi
dasarnya sebagai lokus tunggal. Intensitas diferensial dari
fragmen spesies-spesifik mungkin, Namun, hasil dari persimpangan
di dalam array mengulang rDNA untuk meningkatkan proporsi
dari rDNA satu spesies 'di beberapa gamet hibrida. Itu
kombinasi morfologi, rDNA, dan analisis RFLD GH
menunjukkan bahwa hibridisasi dan mungkin setidaknya beberapa
introgression ini terjadi antara Dolly Varden dan banteng
trout di DAS Danau Thutade. Misalnya, pasca-
status F1-generasi dari salah satu individu hibrida dikonfirmasi
oleh analisis RFLD GH; itu adalah homozigot untuk
alel bull trout di GH1, tapi heterozigot untuk Dolly Varden
dan bull trout alel di GH2 (Gbr. 6).

GH ini genotipe

hanya bisa hasil dari perkawinan baik antara hibrida F1 atau


antara hibrida F1 atau generasi kemudian dan trout banteng (yaitu,
sebuah silang balik). Mengingat kelangkaan relatif hibrida di
Thutade DAS Danau, adalah lebih mungkin bahwa hibrida F1
akan silang balik dengan salah satu spesies lebih banyak orangtua
daripada kawin dengan hibrida lain. Selanjutnya, diberikan nomor yang sama
genotipe orang tua dan tidak ada seleksi gamet, maka karakter
yang homozigot untuk alel GH1 bull trout dan heterozigot
untuk Dolly Varden trout banteng dan alel GH2 adalah dua kali sebagai
bull trout × mungkin memiliki dampak dari hibrida silang balik
hibrida hibrida.× daripada dari perkawinan Potensi silang balik
identitas hibrida char ini konsisten dengan yang morfologis
skor pada PC 1 (0,440), yang mengungsi ke arah
bull trout akhir distribusi (Gbr. 3).)
Ini char identifed sebagai hibrida kedua dipamerkan bull trout
mtDNA HindIII pola fragmen restriksi (Gambar 4, 5, dan
6). Mengingat warisan ibu mtDNA, ini berarti
perkawinan antara laki-laki dan Dolly Varden trout banteng betina
(Untuk hibrida F1) atau, untuk hybrid generasi selanjutnya atau silang balik
individu, antara trout lembu jantan dan betina hibrida
atau antara laki-laki dan perempuan hibrida. Meskipun kami terus-menerus
sampling dapat mengungkapkan hibridisasi dua arah, apa yang
dikenal dari biologi dari dua spesies dalam Thutade
DAS Danau konsisten dengan hibridisasi simetris
bertanggung jawab atas hibrida F1. Misalnya,
meskipun trout banteng dewasa jarang di DAS atas
(Mana belum matang dan dewasa Dolly Varden mendominasi,
Tabel 3), beberapa ikan yang bertelur di sana banteng (Bustard dan
Royea 1995))

Bull trout laki-laki yang agresif selama pemijahan


(McPhail dan Murray 1979; Sexauer Leggett 1980;
1994; J.S. Baxter, pengamatan pribadi). Biasanya, kecil
laki-laki kehilangan pertemuan ini agresif (McPhail dan Murray
1979), dan di DAS Danau Thutade, Dolly
laki-laki Varden trout jauh lebih kecil daripada banteng dewasa
(Tabel 3). Dalam berbagai salmonids, termasuk Dolly Varden
dan bull trout (McPhail dan Murray 1979; Bruto 1984,
1985; Hutchings dan Myers 1985; Maekawa et al. 1993;
Kitano et al. 1994; Sexauer 1994), laki-laki kecil resor untuk
"Menyelinap" perilaku sebagai cara untuk mendapatkan fertilizations.
Data kami menunjukkan bahwa hibrida di DAS Danau Thutade
bisa hasil dari kecil laki-laki Dolly Varden menyelinap
fertilizations selama spawnings bull trout. Menyelinap serupa
mekanisme telah disarankan untuk memperhitungkan interspesifik
hibridisasi di salmonids lainnya (misalnya, McGowan dan
Davidson 1992; Kitano et al. 1994).

Tabel 3. Ringkasan riwayat hidup perbedaan antara Dolly Varden trout


sympatric dan banteng di DAS Danau Thutade (Bustard dan
Royea 1995; J.S. Baxter, pengamatan pribadi).
Sifat Dolly Varden trout Bull
Panjang pada pemijahan (cm) 12-21 (mean = 15) 58-83 (mean = 72)
Pemijahan periode awal September hingga pertengahan Oktober Mid-
Agustus-September awal
menggunakan DAS residen di hulu sungai sungai bermigrasi dari Thutade
Lake
menelur (adfluvial)
Redd Upper lokasi DAS, daerah rembesan air tanah Sepanjang DAS, daerah
meliputi tinggi
Redds per situs Dikelompokkan Single
Redd area (m2) 0,1 1,6
Air kecepatan pada redds (cm s-1) 16/01 38-40
kedalaman air di redds (cm) 50-10 27-30
Redd kerikil ukuran (cm) <02-04 Februari
Kelompok distribusi Spawner pasangan Single pasangan
Bisakah 428. J. Ikan. Aquat. Sci. Vol. 54, 1997
© 1997 Kanada NRC)

Meskipun bukti kami hibridisasi dan introgression


antara Dolly Varden trout dan banteng, spesies
tampaknya dapat menjaga diri mereka sebagai genom yang berbeda dalam
Danau yang Thutade DAS, mereka sebagian besar tetap diidentifikasi
dalam ekologi, morfologi, dan sifat-sifat genetika molekuler.
diferensiasi seperti dalam menghadapi aliran gen menyiratkan bahwa
hibrida di beberapa kelemahan atau ekologi reproduksi
relatif terhadap spesies orangtua. Kedua spesies, oleh karena itu,
mungkin tidak sepenuhnya introgress jika mereka di beberapa
bentuk keseimbangan aliran gen-seleksi di Danau Thutade
DAS. Ekologi perbedaan antara Dolly Varden
dan bull trout di DAS Danau Thutade (Tabel 3) mungkin
mencerminkan perbedaan genetik poligenik dan hibrida akan
mungkin akan ekologis menengah. Seperti intermediacy dari
hibrida antara Dolly Varden trout banteng dan dapat mengurangi
kebugaran mereka relatif terhadap spesies orangtua dan menstabilkan
introgression
pada tingkat tertentu atau membatasi ke habitat tertentu patch
(Arnold dan Hedges 1995). Memang, kemampuan mereka untuk
mempertahankan
diri mereka sebagai kolam gen yang berbeda dalam menghadapi hibridisasi
dan beberapa aliran gen adalah bukti terkuat bahwa Dolly
Varden dan trout banteng adalah spesies terpisah.)
(Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada D. Bustard dan R. Bendungan (David Bustard
dan Associates),
Royea D. (Knight Hallam Piésold Ltd), dan El Condor
Resources Ltd untuk izin belajar char di
Danau Thutade DAS. Kami juga berterima kasih kepada sebelum Masehi
Kementerian Lingkungan Hidup, Pertanahan, dan Taman (Perikanan
Cabang, Prince George) untuk izin untuk mengumpulkan sampel
dari daerah Danau Thutade. Kami menghargai komentar
versi sebelumnya dari tulisan ini melalui timur laut Down, G.R. Haas, J.R.
Roome, C. E. Thompson, G.R. Smith, E.J. Crossman, dan
F.M. Mengucapkan. Kami sangat berterima kasih kepada G.R. Haas untuk
jaringan dari laboratorium-dipelihara hibrida antara Dolly
Varden trout dan banteng, untuk D. O'Brien, K. Kostow, M.
Rosenau, G. Thorpe, dan M. Potyrala untuk menyediakan jaringan
Danau Thutade sampel dari luar, dan C. Biagi untuk bantuan
di laboratorium. Penelitian ini didanai sebagian oleh
hibah dari sebelum Masehi Kementerian Lingkungan Hidup, Tanah, dan
Taman (Bagian Research) dan Pusat Perikanan UBC (untuk
JSB) dan dari Teknik dan Ilmu Pengetahuan Alam
Dewan Riset Kanada (untuk EBT dan JDM).)
References
HIBRIDASI

RINGKASAN: Dalam tinjauan ini empat metode yang berbeda telah


digunakan untuk budidaya ikan breeds baru
pertanian penting dibahas. Mereka adalah: 1. Alam dan seleksi buatan, 2.
Buatan seksual
hibridisasi, 3. Nuklir transplantasi dan 4. Gene transfer. Di antara mereka,
alam dan buatan pilihan
dan hibridisasi seksual tradisional, seksual dan non-biotechnical metode.
Mereka populer dan berhasil
digunakan dalam praktek budidaya ikan dalam sejarah. Tetapi aplikasi lebih
lanjut mereka terbatas karena kesulitan
komposisi kombinasi jauh seksual antara spesies yang terkait. Selanjutnya
identifikasi dan
komposisi karakteristik yang muncul dalam ikan hibrida menyajikan banyak
masalah. Nuklir
transplantasi dan transfer gen adalah dua metode yang baru dikembangkan
untuk mencoba untuk membudidayakan ras baru
ikan. Bioteknologi sehingga menawarkan kesempatan mentransfer bahan
genetik atau molekul antara ikan yang berbeda
spesies. Diharapkan bahwa kedua metode ini pada akhirnya akan
menggantikan metode seksual untuk memperoleh lebih
stabil, diprediksi ikan hibrida. Karena tidak ada batasan spesies-spesifik akan
muncul dalam pengalihan genetik
kombinasi dan gen target yang merupakan ikan yang baru dikembangkan
dengan cara yang unik. Beberapa penting
pendekatan telah dilakukan di daerah-daerah penelitian, tetapi beberapa
masalah khusus, secara teoritis atau teknis,
harus diselesaikan sebelum metode-metode biotechnical berhasil dapat
diterapkan untuk budidaya ikan pada komersil
sisik.
Kata Kunci: pembibitan Ikan, hibridisasi.
Pasal Review
Dalam literatur beberapa macam metode yang
telah baik sudah diterapkan atau dimaksudkan untuk
digunakan untuk budidaya bibit baru dalam hewan dari pertanian
pentingnya telah dicatat. Ini termasuk:
I. seleksi alam dan buatan
Untuk artifisial memilih hewan yang lebih baik dari alami
ada jenis hewan yang salah satu metode tradisional
untuk tujuan ini. Mereka terpilih mewakili hewan
mutan terakumulasi dalam jangka panjang alam lingkungan
situasi. karakteristik mereka berhasil
dimodifikasi. Melalui pemuliaan seksual di antara orang-orang,
keturunan mereka generasi yang dihasilkan oleh generasi
dan akhirnya beberapa keturunan baru, varietas atau spesies
segala binatang yang diperoleh. Ini merupakan
'Domestikasi'.
Karena frekuensi mutasi alami sangat rendah
dan untuk mendapatkan keturunan baru atau varietas biasanya akan
mengambil
lama waktu sejarah evolusi. Misalnya, ketika
spesies yang sama hewan didistribusikan di berbagai wilayah
dipengaruhi oleh lingkungan lokal yang berbeda
faktor untuk waktu yang lama, pertama beberapa dari mereka dan mereka.

BIBIT IKAN DAN BIOTEKNOLOGI


Jurnal Akademi Ilmu Pengetahuan Islam 6:03, 220-242, 1993 220
* Dari Institut Pengembangan Biologi, Akademi Ilmu Pengetahuan Cina,
Beijing, Cina.
** Dari Departemen Fisiologi dan Biofisika, Fakultas Kedokteran,
Universitas Çukurova, Adana, Türkiye.
221 Jurnal Akademi Ilmu Pengetahuan Islam 6:03, 220-242, 1993
BIBIT IKAN DAN Yan BIOTEKNOLOGI, ÖZGÜNEN
keturunan dapat mengubah fenotip mereka, tetapi tanpa
modifikasi untuk genotipe mereka. Fenomena ini
adopsi domestik disebut sebagai hasil ''. Dalam beberapa
kasus, ketika pengaruh lingkungan lama adalah akumulasi
cukup kuat, sebagian dari mereka juga dapat
perubahan genotipe mereka pada frekuensi sangat rendah, yakni
semacam 'mutagenesis'.
Sejak orang-orang keturunan baru atau varietas, baik dengan
fenotipe yang berbeda atau genotipe, muncul di
spesies hewan yang sama di lokasi yang berbeda
diyakini disebabkan oleh pengaruh jangka panjang dari geologi,
iklim, makanan dan faktor lain yang tidak dikenal di berbagai
kondisi ambient. Cara mereka dibentuk adalah
sehingga berdasarkan jangka panjang dari 'alam' dan 'buatan
seleksi '.)

(Namun, faktor lingkungan yang mungkin


menginduksi 'adopsi domestik' atau 'mutagenesis' hewan
sangat rumit. Ini akan sangat sulit untuk menjelaskan
faktor-faktor tersebut secara terperinci atau untuk mencoba mensimulasikan
mereka secara buatan
kondisi untuk memproduksi bibit baru atau varietas
hewan secara reproducible.
Oleh karena itu, masyarakat manusia harus mencari
lain kemungkinan untuk budidaya bibit baru dari hewan
penting pertanian dalam rangka memenuhi lebih banyak dan
lebih tuntutan untuk memproduksi makanan yang lebih baik dan lainnya
hidup persediaan. Di antara mereka kemungkinan, seksual
hibridisasi telah menjadi metode yang paling berguna.

(II. Hibridisasi seksual Buatan


hibridisasi seksual adalah suatu metode tradisional untuk budidaya
hewan yang baru melahirkan atau varietas. Atas dasar
alam dan buatan seleksi, beberapa individu hewan
dengan berbagai karakteristik yang ideal dapat dipilih dan
diperoleh dari beberapa taxonomally berbeda tetapi erat
spesies yang terkait. Untuk membuat 'seksual hibridisasi'
antara mereka dapat menghasilkan hibrida baru dengan beberapa
'Kekuatan hibrida'. Artinya, dengan karakter dominan yang lebih baik
akan muncul dalam keturunan hibrida mereka yang mungkin
meningkatkan nilai hewan asli mereka orangtua.
hibridisasi seksual kadang-kadang dapat terjadi di
alam. Tapi sebagian besar dilakukan secara buatan. Prinsip
dari hibridisasi seksual buatan adalah untuk memaksakan
gamet jantan dan betina hewan yang berbeda untuk sekering
bersama-sama sebagai zigot dengan metode buatan yang tidak
terjadi dalam kondisi alam. Lalu orang-orang 'hibrida
'Zigot, dalam beberapa kasus, akan berkembang menjadi hibrida dengan
beberapa memperbaiki karakteristik. Menurut modern
terminologi ilmiah, metode ini dapat dikenali
sebagai kelompok yang berbeda rekombinasi gen yang
berasal dari dua genom diploid dari laki-laki yang berbeda dan
Gambar 1: Gambar dari ikan mas (Cyprinus carpio, genus Cyprinus Linnaeus,
2N = 100) (A), sebuah crucian ikan mas (Carassius auratus, genus
Carassius Jarocki, 2N = 100) (B), ikan satu tahun hibrida tua seksual (C)
diperoleh pada kombinasi ♀ ikan mas x crucian
♂ ikan mas dan ikan satu tahun hibrida tua seksual (D) diperoleh pada
kombinasi ♀ ♂ x crucian ikan mas ikan mas.
Jurnal Akademi Ilmu Pengetahuan Islam 6:03, 220-242, 1993)

BIBIT IKAN DAN Yan BIOTEKNOLOGI,

perempuan dengan latar belakang genetik binatang jelas berbeda.


Fenotip diubah muncul di orang-orang
hibrida yang dijelaskan sebagai hasil 'hibriditas
ekspresi 'dari genom baru kembali dari
individu hewan.
Umum berbicara, ketika penggolongan / taksonomi erat terkait
varietas atau spesies hewan digunakan dalam seksual
hibridisasi, F1 hibrida dengan 'semangat hibrida' dapat
diperoleh. Generasi berikutnya mereka progeni akan, bagaimanapun,
dihasilkan mengikuti hukum warisan Mendel.
Artinya, karakter dengan perbedaan asli
bentuk binatang induk jantan dan betina akan memisahkan
dan akhirnya akan muncul kembali dalam keturunan setelah
generasi kedua (F2) ketika orang-orang hibrida F1 adalah
kawin di antara mereka sendiri.
Oleh karena itu, dalam berbagai jenis hewan, seksual
hibridisasi sangat berguna untuk memproduksi lebih baik F1
hibrida hewan. Ini akan, bagaimanapun, tidak dilakukan sebagai
cara yang efisien untuk memupuk breeds stabil benar-benar 'baru
atau varietas 'hewan.)

(Selain itu, karena alam, yang tidak kompatibel biologis


antara spesies yang berbeda dari hewan yang paling (yang
mekanisme yang tepat dari orang-orang yang tidak kompatibel masih
tidak diketahui), sejenis hibridisasi seksual hanya dapat
dilakukan antara taxonomally spesies erat terkait.
Ketika laki-laki dan perempuan yang berasal dari gamet
jauh spesies terkait yang digunakan dalam hibridisasi,
beberapa dari mereka mungkin tidak mampu memadukan bersama-sama.
Hanya di
kasus yang jarang terjadi mereka dapat menyatu sebagai zigot hibrida tapi
telur-telur hibrida yang mematikan dan tidak bisa berkembang menjadi
orang dewasa, atau mereka dapat berkembang menjadi dewasa steril karena
untuk perkembangan gonad miskin. Prinsip ini telah terbukti
sangat benar di hampir semua hewan tingkat tinggi dari
kelas amfibi untuk mamalia. Sebuah contoh yang baik dari ini
jenis hibridisasi seksual adalah seekor kuda betina
dan seekor keledai jantan dapat hibridisasi seksual untuk menghasilkan
hibrida 'bagal'. Yang diperoleh beberapa karakter yang lebih baik
dari kedua orang tua, tetapi tidak subur.
Namun, ada beberapa pengecualian dalam kasus-kasus yang lebih rendah
spesies vertebrata. Dalam hibridisasi ikan, seksual tidak
hanya dapat berhasil dibuat antara erat terkait
spesies untuk mendapatkan hibrida yang lebih baik dalam budidaya ikan
praktek, tetapi juga dapat berlaku bagi spesies ikan yang
milik spesies agak jauh terkait. Sebagai contoh,
kita telah mendapatkan beberapa jenis hibrida seksual orang dewasa,
larva ikan, atau embrio antara genera yang berbeda, subfamilies,
keluarga dan perintah. Berikut adalah beberapa
contoh:
1. Inter-genus seksual hibridisasi
a. mas (Cyprinus carpio, genus Cyprinus
Linnaeus, 2N = 100) ♀ x crucian ikan mas
222
Gambar 2: Gambar dari ikan mas rumput (idellus Ctenopharyngoden, Leusin
subfamili, keluarga Cyprinidae, 2N = 48) (A), sebuah ikan air tawar moncong
tumpul
(Megalobrama amblycephala, Abramidinae subfamili, keluarga Cyprinidae,
2N = 48) (B) dan ikan dua tahun hibrida tua seksual (C)
diperoleh pada kombinasi ikan mas rumput ♀ x-moncong tumpul ♂ ikan air
tawar.
223 Jurnal Akademi Ilmu Pengetahuan Islam 6:03, 220-242, 1993
BIBIT IKAN DAN Yan BIOTEKNOLOGI, ÖZGÜNEN
(Carassius auratus, genus Carassius Jarocki,
2N = 100) ♂. Ikan dewasa hibrida diperoleh.
Mereka tampak seperti ikan mas. Hibrida laki-laki
yang tidak subur. Gambar 1 menunjukkan gambar dari
umum ikan mas (A), sebuah ikan mas crucian (B) dan
satu tahun ikan hibrida tua seksual (C) yang diperoleh di
kombinasi ini.
b. ikan mas Crucian x ♀ ♂ ikan mas. Dewasa
ikan hibrida diperoleh. Mereka tampak seperti crucian
ikan mas. Hibrida laki-laki tidak subur. Tokoh
1 (d) menunjukkan gambar satu tahun
ikan hibrida seksual yang diperoleh dalam kombinasi ini.
2. Inter-subfamily seksual hibridisasi
a) Rumput ikan mas (Ctenophryngoden idellus, busfamily
Leucinae, keluarga Cyprinidae, 2N = 48) ♀
x Blunt-moncong ikan air tawar (Megalobrama amblycephala,
subfamili Abramidinae, keluarga
Cyprinidae, 2N = 48) ♂. Dewasa ikan hibrida
diperoleh. Kedua hibrida laki-laki dan perempuan
subur. Gambar 2 menunjukkan sebuah gambar rumput
ikan mas (A), sebuah ikan air tawar moncong tumpul (B) dan twoyear
ikan hibrida tua (C) yang diperoleh dari
kombinasi.)
(b. Dace (Lobeo rohita, Labeoninae subfamili,
keluarga Cyprinidae, ikan mas 2N = 50) ♀ x umum
(Cyprinus carpio, Cyprininae subfamili, keluarga
Cyprinidae, 2N = 100) ♂. Dewasa ikan hibrida
diperoleh. Kedua hibrida laki-laki dan perempuan
subur. Gambar 3 menunjukkan gambar sebuah dace
(A), sebuah ikan mas (b) dan satu tahun
hibrid ikan (c) yang diperoleh dari kombinasi ini.
larva ikan seksual atau embrio lain juga
diperoleh. Sebagai contoh: Dalam rangka antar kombinasi
(1) Goldfish (Carassius auratus, Cypriniformes ketertiban,
2N = 100) ♀ x nila (Oreochromis nilotica,
order Perciformes, 2N = 44) ♂. Seksual ikan muda hibrida
diperoleh. Gambar 4 menunjukkan gambar dari ikan nila (A),
ikan mas (B) dan ikan 15-hari hibrida seksual (C)
diperoleh dari kombinasi ini.
(2) macracantha (Paramisgurnus dabryanus, urutan
Cypriniformes, 2N = 48) ♀ x nila (Oreochromis nilotica,
order Perciformes, 2N = 44) ♂, dan kembali silang
kombinasi. Seksual gastrula hibrida diperoleh.
Gambar 5 menunjukkan gambar dari ikan nila (A), macracantha a (B),
sebuah
60 jam ikan hibrida seksual diperoleh pada kombinasi
macracantha ♀ ♂ x nila (C), dan gastrula hibrida seksual
diperoleh pada kombinasi nila ♀ ♂ macracantha x (D).
Gambar mikroskopik elektron-6 menunjukkan foto
proses sperma menembus ke dalam telur ikan nila macracantha.
Gambar 7 pronuclei sperma ikan nila dan macracantha menunjukkan
telur akan menyatu bersama-sama (A). Sebuah metafase pic-
Gambar 3: Gambar dari rohita Labeo Dace (, Labeoninae subfamili, keluarga
Cyprinidae, 2N = 50) (A), sebuah ikan mas (Cyprinus carpio, subfamily
Cyprininae, keluarga Cyprinidae, 2N = 100) (B) dan ikan satu tahun hibrida
tua seksual (C) diperoleh pada kombinasi Dace
♀ ♂ x ikan mas.
Jurnal Akademi Ilmu Pengetahuan Islam 6:03, 220-242, 1993)

BIBIT IKAN DAN Yan BIOTEKNOLOGI,

mendatang dari foom embrio hibrida kombinasi macracantha


telur dan sperma ikan nila (B). A 432 jam larva ikan hibrida
diperoleh dari kombinasi beberapa.
Menurut contoh di atas, ada beberapa
baik bukti yang menunjukkan bahwa, adalah mungkin untuk
membuat beberapa hybridizations berhasil seksual buatan
jauh di antara spesies ikan yang terkait. Jika kita dapat meningkatkan
hibridisasi metode-metode tradisional seksual, mereka
mungkin membuat beberapa kontribusi lebih lanjut untuk budidaya ikan
praktek di masa depan.
Di sisi lain, banyak spesies ikan yang ada
pentingnya pertanian merosot karena panjang
sejarah silang antara individu-individu dari mereka sendiri
strain yang berbeda spesies tetapi dalam praktek budidaya ikan.
Jadi, untuk mencoba membuat kombinasi lebih berhasil oleh
seksual hibridisasi antara ikan dari varietas yang berbeda,
spesies, dan bahkan lebih jauh dengan spesies
tampaknya baik perlu dan mungkin.
Namun, masih sangat sulit untuk diatasi alam
penghalang antara spesies ikan jauh hanya terkait
dengan menggunakan metode tradisional buatan hibridisasi seksual.
Artinya, "hanya untuk campuran sperma dan telur
bersama in vitro sistem "untuk memproduksi hibrida
tidak cukup.

Detil mekanisme yang mencegah jauh


terkait dengan spesies hewan dari sukses seksual
hibridisasi tidak jelas. Ini diamati bahwa ada
beberapa langkah biologis yang terlibat dalam
hibridisasi seksual. Gangguan dari berbagai langkah-langkah
dapat membuat hibridisasi seksual antara jauh
spesies hewan terkait gagal:
a. Dalam kebanyakan kasus, langkah pertama yang paling sulit di
hibridisasi seksual antara jauh terkait
spesies hewan adalah kegagalan sperma asing
untuk menembus telur. Sebagai contoh, di beberapa
kasus, mereka tidak dapat melewati mikro
Pyle dari chorion telur ikan dan zona itu
pellucida telur pada mamalia.
b. Dalam kasus lain, sperma asing dapat memasukkan
telur tetapi akan merosot dan menghilang dalam
sitoplasma telur tanpa melakukan apapun penting
fungsi. )
.( c. Dalam beberapa kasus, sperma asing dapat memasukkan
telur dan memperbesar sebagai pronukleus laki-laki tetapi
tidak dapat sekering dengan pronukleus telur untuk membentuk
inti zigot.
d. Dalam namun kasus lain, sperma asing dapat memasukkan
telur, memperbesar sebagai pronukleus laki-laki, menyatu dengan
pronukleus telur sebagai inti zigot dan
terbagi dalam koordinasi dengan telur sitoplasma
divisi. Dalam hal ini, proses pemupukan
dari hibridisasi seksual antara sperma dan
224
Gambar 4: Gambar ikan nila yang (Oreochromis nilotica, order Perciformes,
2N = 44) (A), ikan mas (Carassius auratus, Cypriniformes ketertiban,
2N = 100) (B) dan ikan berumur 15-hari muda seksual hibrida (C) diperoleh
dalam kombinasi x nila ♀ ♂ ikan mas.
225 Jurnal Akademi Ilmu Pengetahuan Islam 6:03, 220-242, 1993

BIBIT IKAN DAN Yan BIOTEKNOLOGI,


telur selesai dan hibrida dibuahi
telur mulai berkembang menjadi embrio. Namun,
karena tidak kompatibel alam yang tidak diketahui
yang ada antara sperma dan
telur yang diperoleh dari jauh
terkait spesies hewan, terutama dalam kasus
kapan harus sekering laki-laki dan perempuan pronukleus
dengan nomor yang berbeda atau pasang kromosom,
inti zigot hibrida, akan menjadi
heteroploid. Embrio hibrida selalu berkembang
abnormal.)
.( Sampai sekarang, tidak ada metode praktis yang telah tersedia
untuk mengatasi hambatan alam tersebut di atas dalam
hibridisasi seksual untuk ikan. Namun, beberapa baru
biotechnical metode seperti injeksi, sel
fusi atau elektroporasi dapat digunakan untuk membantu asing
sperma untuk memasukkan telur. Selain itu, untuk memilih sperma
dan telur ikan yang berbeda dengan kromosom yang sama atau mirip
nomor juga dapat membantu untuk mencapai ini
tujuan. Semua kemungkinan perlu penyelidikan lebih lanjut.
Kerugian yang paling jelas seksual
hibridisasi untuk mendapatkan hibrida hewan adalah bahwa kita
tidak dapat memprediksi jenis baru diubah karakteristik
akan muncul dalam ikan hibrida. Jadi, pembatasan untuk
menggunakan metode ini untuk memenuhi kebutuhan lebih banyak dan
lebih
dari tujuan aqua-kultural jelas. Oleh karena itu, dari
sudut pandang praktis, metode lain yang diperlukan untuk
mengembangkan program-program penangkaran hewan baru.
Kedua seleksi buatan dan hibridisasi seksual
metode tradisional dan non-biotechnical untuk budidaya
hewan breeds. Namun, beberapa baru biotechnical
teknik dapat diterapkan untuk buatan seksual
hibridisasi dalam rangka mengatasi kesulitan melakukan
metode ini dalam taxonomally jauh terkait
spesies hewan.)

III. Nuklir transplantasi

Selama dua dekade terakhir transplantasi, nuklir


telah menjadi salah satu metode yang mungkin untuk budidaya
breeds baru tidak hanya di ikan tetapi juga pada mamalia.
Konsep transplantasi nuklir (untuk mentransfer
inti diploid menjadi telur enucleated untuk menyelidiki
peran inti dalam memulai perkembangan embrio)
pertama kali diusulkan oleh embryologist Jerman,
Hans Spemann, awal tahun 1938.
Pada tahun 1950-an, sejumlah ahli biologi yang bekerja di
bidang penelitian genetik fundamental membuat pertama
penemuan bahwa dengan menggunakan transplantasi nuklir menghasilkan
organisme uniseluler strain dengan beberapa karakter baru.
Misalnya, untuk mentransfer inti satu jenis
amuba amuba enucleated ke jenis lain
(8), beberapa sistem amuba direkonstruksi dengan
Gambar 5: Gambar ikan nila yang (Oreochromis nilotica, order Perciformes,
2N = 44) (A), sebuah macracantha (dabyranus Paramisgurnus, Cypriniformes
ketertiban,
2N = 48) (B) dan ikan berusia 60-jam larva seksual hibrida (C) diperoleh
pada kombinasi macracantha x nila ♀ ♂ dan
gastrula hibrida seksual (D) diperoleh pada kombinasi terbalik, kombinasi
nila ♀ ♂ x macracantha.
Jurnal Akademi Ilmu Pengetahuan Islam 6:03, 220-242, 1993)

BIBIT IKAN DAN Yan BIOTEKNOLOGI, ÖZGÜNEN

karakteristik dari kedua galur induk atau amuba


menengah yang diperoleh.
Sejak itu, kelompok lain juga embriolog
menegaskan bahwa, baik dalam amfibi (19) atau ikan (40),
ketika embrio sel inti satu varietas atau spesies
yang dicangkokkan ke telur enucleated dari yang lain,
beberapa hibrida nucleo-sitoplasma (kaya) individu dengan
karakteristik intermediate .
Untungnya, seperti hibridisasi seksual pada ikan,
metode transplantasi nuklir dapat digunakan untuk membuat
hibridisasi non-seksual pada ikan tidak hanya antara yang berbeda
varietas atau spesies, tetapi juga antara mereka yang
milik spesies lebih jauh terkait seperti
antara subfamilies berbeda, keluarga dan perintah. Sebelumnya,
transplantasi nuklir hanya dilakukan antara
berbeda beberapa spesies amfibi dan berbeda
strain pada mamalia.
Karena inti yang digunakan dalam transplantasi nuklir
percobaan yang diploid, metode ini dapat dikenali
sebagai pengalihan suatu 'genom utuh' (49).
Metode ini diperkenalkan ke dalam ikan pada awal
1960-an. Sejauh ini beberapa jenis kombinasi antar-spesies
dari inti dan sitoplasma, untuk menghasilkan nucleocytoplasmic
hibrida dalam ikan, telah berhasil
dibuat. Identifikasi peran genetik yang berbeda
nukleus dan sitoplasma dalam transplantasi nuklir
sistem ikan menjadi lebih mudah dan lebih layak daripada
yang telah diamati dalam amfibi karena inti
dan sitoplasma dapat dikombinasikan dari berbagai jenis
ikan dengan jelas karakteristik yang berbeda.
Berikut adalah beberapa contoh transplantasi nuklir
di ikan yang diperoleh dari kombinasi
blastula inti sel dan telur enucleated dari
spesies yang berbeda:)
Gambar 6: Gambar menunjukkan proses sperma menembus ke dalam telur
ikan nila macracantha diamati oleh mikroskop elektron. SEM dari
de-chorionated macracantha telur pada 5 detik setelah inseminasi untuk
menunjukkan kepala sperma ikan nila dikelilingi oleh mikrovili dari
permukaan telur di tempat sperma masuk kutub hewan (panah kecil) dekat
lokasi badan kutub pertama telur
(Panah besar) (A), SEM telur macracantha dechorionated pada 20 detik
setelah inseminasi untuk menunjukkan kepala sperma ikan nila memiliki
tertanam dalam sitoplasma telur macracantha. Sebagian dari bagian tengah
sperma masih tetap di luar telur. Tebal adalah
yang mengelilingi kepala sperma menunjukkan panah adalah bagian
unremoved chorion telur (B), SEM telur macracantha dechorionated
Pada tanggal 30 detik setelah inseminasi untuk menunjukkan kepala sperma
ikan nila tertanam seluruhnya dalam sitoplasma macracantha telur. Hanya
sedikit
bagian dari bagian tengah yang tetap di luar permukaan telur (C) dan SEM
telur macracantha de-chorionated pada 40 detik setelah
inseminasi untuk menunjukkan sperma ikan sepenuhnya dimasukkan ke
dalam sitoplasma telur. Situs penetrasi sperma masih terlihat
sebagai sepetak mikrovili (D).
227 Jurnal Akademi Ilmu Pengetahuan Islam 6:03, 220-242, 1993

BIBIT IKAN DAN Yan BIOTEKNOLOGI, ÖZGÜNEN

genus Cyprinus Linnaeus, 2N = 100) + sitoplasma dari


crucian ikan mas (Carassius auratus, genus Carassius
Jarocki, 2N = 100). Dewasa kaya ikan dengan esensi
ikan mas ditambah beberapa fenotipe intermediate dan
sitoplasma dipengaruhi karakter pada morfologi,
fisiologis dan biokimia diperoleh tingkat
(40). Baik laki-laki dan perempuan hibrida diperoleh dan
mereka subur. Gambar 8 menunjukkan gambar yang umum
ikan mas (A), sebuah ikan mas crucin (B), dan ikan kaya (C) diperoleh
dengan cara ini.)
2. Inter-subfamily kombinasi
Inti dari ikan mas rumput (idellus Ctenopharyngodon,
Leucinae subfamili, 2N = 48) + sitoplasma dari
tumpul-moncong ikan air tawar (amblycephala Megallobrama, subfamily
Abramidinae, 2N = 48). Dewasa kaya ikan dengan
penting dari fenotipe ikan mas dan rumput beberapa biokimia,
immuno-elektroforesis perubahan darah
serum diperoleh (45). Hibrida jantan subur
tetapi hibrida perempuan tidak dapat diidentifikasi sebelum
mereka hilang atau meninggal dunia karena budaya ceroboh dalam ikan
tambak (ikan mas betina rumput biasanya perlu satu lagi
tahun daripada laki-laki menjadi dewasa. Artinya, mereka
membutuhkan sekitar empat tahun budaya. Gambar 9 menunjukkan gambar
dari ikan mas rumput (A), sebuah ikan air tawar moncong tumpul (B), dan
ikan kaya (C) diperoleh dengan cara ini.
Lain dewasa kaya, larva ikan dan embrio memiliki
juga mendapat (47-49). Sebagai contoh, dalam sebuah Interorder
kombinasi: Inti dari ikan nila (Perciformes ketertiban,
2N = 44) + sitoplasma dari macracantha (urutan
Cypriniformes, 2N = 48). Akhir seperti larva ikan kaya
nila atau macracantha jenis morfologi diperoleh
(49).)