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UNIVERSIDAD

VERACRUZANA
FACULTAD DE BIONALISIS
LABORATORIO DE PARASITOLOGIA

MANUAL DE
PARASITOLOGIA

ALUMNAS:
MAGDA ELENA HERNANDEZ HERNANDEZ
SANDRA LUZ HERNANDEZ LOPEZ
* TOMA DE MUESTRA PARA EXAMEN
COPROPARASITOSCOPICO

INTRODUCCION :

Regularmente en el áreade Parasitologia , las muestras más analizadas para


demostrar la presencia de parasitos intestinales del hombre son las heces fecales
; sin embargo , existen otros parásitos cuya presencia se puede evidenciar en
muestras biológicas como : bilis, jugo duodenal, esputo, secreción , biopsia o frotis
perianal , no obstante estas pruebas se harán tomando en cuenta los
antecedentes clínicos específicos del paciente.

A continuación , se hará referencia a los diversos aspectos con los cuales deberán
proceder las muestras a analizar con fines parasitologicos para obtener resultados
reproducibles y de esta manera ayudar eficazmente al médico en el diagnostico,
pronostico , y tratamiento del paciente.

HECES FECALES SOLIDAS:

✔ Condiciones del paciente :

Durante al menos tres días previos a la prueba el paciente deberá evitar


tomar medicamentos (antiparasitarios , antibióticos, antidiarreicos ,
laxantes o purgantes en caso de ser necesario deberán emplearse un
purgante salino, como sulfato de sodio o fosfato y carbonato de sodio. Por
ningún motivo deberán emplearse aceites minerales o compuestos de
bismuto o magnesio, ya que las gotas o cristales procedentes de ellos
pueden confundirse con algunos parásitos o enmascarar su presencia.

✔ Recipiente de recolección :
Frasco estéril de boca ancha , con tapa de rosca.

✔ Cantidad de muestra requerida : 3-6 grs

✔ Toma de muestra :

La muestra deberá ser recolectada de la siguiente


manera :

• Con una abatelenguas tome directamente de la cavidad anal un


volumen de heces aprox. entre 3 -6 grs (equivalente al tamaño de
una nuez )
NOTA: Evite la contaminación de la muestra con orina , papel higiénico. jabón , aguao
tierra.
• Transfiera las heces obtenidas al contenedor estéril.
• Cierre el envase herméticamente de forma inmediata para evitar
contaminaciones bacterianas
• . A continuación identifique. el frasco con una etiqueta autoadhesiva
llenándola claramente con su nombre, apellidos, edad y fecha y hr de
recolección.
NOTA : Pegue la etiqueta al frasco NUNCA en la tapadera .
• Finalmente lleve la muestra al laboratorio lo más pronto posible.
NOTA : Cuando la muestra va a demorar en llegar al laboratorio varias horas o días ,
se recomienda adicionarle liquido fijador y/o conservador ( formalina al 10 % , por
ejemplo )
NOTA :Para aumentar la eficacia de la prueba se recomienda que para estudios
parasitoscoscopicos se recolecten un total de tres muestras en 3 dias consecutivos
ya que la expulsión de parásitos puede ser intermitente .

✔ Criterios de rechazo :

 Que el paciente no haya tomado la muestra respectivamente de forma


adecuada .
 Que la muestra haya sido llevada al laboratorio con mas de 1 hr de
haber sido tomada o no haya sido adecuadamente conservada.
 Que el paciente este recibiendo tratamiento antiparasitario.

HECES FECALES DIARREICAS :

Cantidad de muestra requerida : 10 ml (un volumen similar al de un cuchara


sopera )

NOTA : Estas muestras deben procesarse de inmediato (30 minutos como máximo
después de la deposición) en caso contrario se debe adicionarse algun conservador e
indicarlo en la etiqueta de identificación pues de no rexaminarse dentro de un margen de
tiempo prudencial pues al acidificarse muchos gérmenes patógenos se lisan .

RASPADO PERIANAL :

✔ Condiciones del paciente :

La toma de muestras deberá realizarse preferentemente por la noche o a


primera hora de la mañana antes de que el paciente orine, defeque o se bañe
(lo ideal es hacer la toma antes de levantarse de la cama).

NOTA : Es imprescindible el uso de guantes desechables durante la toma de la muestra y el


avado cuidadoso de las manos tras su realización.

✔ Recipiente de recolección :

Portaobjetos con cinta adhesiva.

✔ Toma de muestra :

1. Se toma un abatelenguas cubierto de cinta


adhesiva transparente, de manera que la
superficie engomada quede expuesta hacia fuera.
2. A continuación , se coloca al paciente en posición
genupectoral donde la región perianal quedara
ampliamente expuesta para realizar varias aplicaciones con el abatelenguas
alrededor de esta zona ; con la fianlidad , de que los huevos qque se
encontrarab presentes queden adheridos a la superficie engomada.
3. Finalmente se pega la muestra la cinta adhesiva sobre una de las caras del
porta objetos (con lo que se recolecto hacia abajo ) y se observa al
microscopio.
JUGO DUODENAL Y YEYUNAL:

Algunos parásitos colonizan el intestino delgado durante alguno de sus estadios,


permaneciendo habitualmente en el área yeyunal y siendo infrecuentemente
detectados en las heces durante estas fases. Este es el caso de los trofozoitos de
Giardia lamblia y las larvas de Strongyloides sp.

NOTA : Los conductos biliares desembocan en duodeno, por lo que también pueden
hallarse huevos de parásitos procedentes del hígado o del árbol biliar en el jugo duodenal
y yeyunal.

✔ Toma de muestra :

Las muestras de jugo duodenal y yeyunal suelen obtenerse mediante sonda


gastrica o bien durante un procedimiento endoscópico, por el medico tratante , las
cuales tras unas adecuada identificación, deberán ser enviadas rápidamente al
laboratorio y procesadas inmediatamente .

✔ Recipiente de recolección :

Frasco estéril de boca ancha , con tapa de rosca.

✔ Cantidad de muestra requerida : 1-2 ml


ESPUTO :

• Condiciones del paciente :

El paciente deberá recolectar la muestra de esputo en ayunas a primera hora de


la mañana ; para lo cual , deberá enjuagarse previamente la boca solamente con
agua para eliminar bacterias que se encuentren en boca y lengua que pudieran
ser parte de la flora normal.
NOTA : Se recomienda que el paciente no este ingiriendo medicamentos.
✔ Recipiente de recolección :

Frasco estéril de boca ancha , con tapa de rosca.


✔ Toma de muestra :

Para recolectar la muestra el paciente deberá toser profundamente (lo mas


que pueda) y depositar el esputo obtenido en un recipiente estéril .

NOTA: Si el paciente no puede expectorar , existen diversas técnicas encaminadas a


favorecer la obtención del esputo;

✔ La inducción de la tos por inhalación con vaporizador.


✔ Lavado bronquial, aspiración mediante aguja transtorácica, o biopsia de pulmón.

✔ Cantidad de muestra requerida : 1- 2 ml

✔ Criterios de rechazo :

 Que la muestra sea “saliva”.


 Que la muestra tenga menos de 25 leucocitos, y mas de 10 células
epiteliales por campo (aumento X 100) .(ya que indicaría que la muestra
no fue adecuadamente tomada

ENVIO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS


Las muestras deben mantenerse en un ambiente fresco y lejos de la luz solar , se
deben evitar las temperaturas extremas o el desecamiento , deben contener
cantidades optimas y estar en frascos o contenedores rotulados y en algunos casos
necesarios en soluciones conservadoras.

Condiciones de envio de la muestra según el tipo y tiempo de demora en llegar al


laboratorio para el diagnostico parasitologico presuntivo de :

TIEMPO QUE DEMORA EN


LLEGAR AL LABORATORIO
TIPO DE
MUESTRA <24 HRS > 24 HRS AGENTES PARASITARIOS

E. histoltyca, Giardia ,
Formalina 10 % Quistes de Balantidium coli.
HECES T°
PAF; PVA Criptosporidium , Isospora belli. ,
FORMADAS ambiente
Medio de transp : (no muy comúnes en personas inmunocompetentes)
Cary blair Trichuris.Ascaris,Necator,Ancylostoma etc
HECES T°
Formalina 10 % Trofozoito de Balantidium coli etc.
DIARREICAS ambiente
ESPUTO ,
T° Pneumocistis ,
SECRECIÓN Formalina 10 %
ambiente Paragonimus, Fasciola hepatica, ,Giardia.
BILIAR .
Giardia,
CONTENIDO T°
Formalina 10 % Strongyloides,Paragonimus,Fasciola,Ancylostom
DUODENAL ambiente
a, Necator etc.

Huevos de :
T° Enterobius vermicularis
FROTIS PERIANAL T° ambiente
ambiente Ascaris lumbricoides,
Taenia sp.
Hymenolepis nana.
SECRECION T° Frotis en
Trichomona vaginalis.
VAGINAL ambiente lamina
LCR. Naegleria, Acanthamoeba yBalamuthia
SANGRE Tripanosoma,Plasmodium,Leishmania
BIOPSIA DE
4°C Formol 10 % Trichinella spiralis (triquinoscopia)
TEJIDOS

PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNOSTICO


PARASITOLOGICO-HECES,

I. EXAMEN DIRECTO MACROSCOPICO:


FUNDAMENTO : Permite observar directamente las características morfológicas
de los parasitos adultos, enteros o fraccionados , asi como los cambios en las
características organolépticas de las heces eliminadas(color, presencia de sangre
y/o moco, consistencia etc).
MATERIAL
Suero fisiológico
Aplicador
Pinza de metal
Coladera de plástico o malla metalica.

PROCEDIMIENTO :

1. Observar cuidadosamente las características organolépticas de la muestra


a analizar con la finalidad de determinar su :

CONSISTENCIA:
CONSISTENCIA: Deber ser pastosa y dura
COLOR: Marrón oscuro ( *Ver Anexo)

OLOR: Característico ,puede mostrarse fétido (anomalía)

La presencia de moco nos indica gastritis, ulcera o


MOCO: amibiasis.
La sangre nos indica hemorragia intestinal por
SANGRE ulceras perforadas intoxicación con medicamentos
o ácidos, hemorroides y en ocasiones amibiasis
2. Después de ello, es necesario agregar suero fisiológico a la muestra (en
cantidad suficiente ) para homogeneizarla.
3. Finalmente las heces deberán ser cuidadosamente pasadas a través de un
tamiz con la finalidad de aislar gusanos cilíndricos, anillados o aplanados
que pudieran encontrarse en las heces,

RESULTADOS .

Se informará detalladamente aquellas características macroscópicas observadas


durante el análisis coproparasitoscopico así como se deberá hacer referencia en
su caso el aislamiento de algún gusano durante el tamizado especificando su
especie .
TIEMPO QUE DEMORA EN
LLEGAR AL LABORATORIO
TIPOS DE
MUESTRA <24 HRS > 24 HRS TECNICA AGENTES PARASITARIOS
EXAMNES
✔ EXAMEN DIRECTO EN
FRESCO E. histoltyca, Giardia ,
Formalina 10 % ✔ FAUST (FLOTACION) Quistes de Balantidium coli.
HECES T°
PAF; PVA ✔ RITCHIE (SEDIMENTACION) Criptosporidium , Isospora belli. ,
FORMADAS ambiente
COPRO Medio de transp : DEMOSTRACION DE LARVAS: (no muy comúnes en personas inmunocompetentes)
Cary blair ✔ KATO Trichuris.Ascaris,Strongyloides,Necator,Ancylostoma etc
✔ STOLL
HECES T° Trofozoito de Balantidium coli etc.
Formalina 10 % EXAMEN DIRECTO EN FRESCO
DIARREICAS ambiente Trofozoitos
SECRECION T° EXAMEN DIRECTO EN FRESCO
Frotis en lamina Trichomona vaginalis.
VAGINAL ambiente TINCION DE GRAM Y GIEMSA
ESPUTO TINCION DE GRAM Y GIEMSA Pneumocistis ,
✔ EXAMEN DIRECTO EN
T° FRESCO
SECRECIÓN Formalina 10 %
ambiente ✔ FAUST Y RITCHIE Fasciola hepatica, ,Giardia. Paragonimus,
SECRECIONES BILIAR .
✔ CAPSULA DUODENAL DE
BEAL
Giardia,
CONTENIDO T°
Formalina 10 % CAPSULA DUODENAL DE BEAL (Strongyloides,Paragonimus,Fasciola,Ancylostoma,
DUODENAL ambiente
Necator etc.
Hemoprotozooarios
Tripanosoma,(xenodiagnostico)
SANGRE SANGRE FROTIS DIRECTO DE SANGRE, HEMOCULTIVO
FROTE EN GOTA GRUESA DE SANGRE Plasmodium, (Frote grueso)
TINCION DE GIEMSA Leishmania
TEJIDOS BIOPSIA 4°C Formalina 10 % TRIQUINOSCOPIA Trichinella spiralis
Huevos de :
Enterobius vermicularis
EXAMENES FROTIS T° METODO DE GRAHAM
T° ambiente Ascaris lumbricoides,
ESPECIALES PERIANAL ambiente (Raspado perianal)
Taenia sp.
Hymenolepis nana.
TIPOS DE EXAMENES PARASITOLOGICOS:
PARASITOLOGICOS:
SIGNIFICADO CLINICO DEL COLOR DE LAS HECES:

El color de las heces proporciona una significativa información al químico clínico ,


ya que con solo realizar un detallado análisis macroscópico de estas , le puede
orientar en gran parte para detectar alguna patología, disfuncion orgánica,
hemorragia, o bien hacer de su conocimiento el tipo de alimentación o ingestión de
algún medicamento que este presentando el paciente en ese momento .

El color anormal ayuda al médico a seleccionar las pruebas tanto químicas como
microbiológicas necesarias para llegar finalmente a extender un buen diagnostico ,
pronostico y plan de tratamiento adecuados para el paciente.

A continuación se hará referencia a los colores más comunes que pueden


presentar las heces fecales ya sea por alguna patología o bien por algún otro
factor externo :

COLOR SIGNIFICADO
AMARILLO VERDOSO Diarrea abundante.
Se presentan en las "diarreas de fermentación"
AMARILLENTAS
y en las “ esteatorreas .”
Heces procedentes de un tránsito
acelerado a partir de las partes más altas
YEMA DE HUEVO del
intestino delgado.
Heces características de las ictericias
BLANQUECINAS O GRISACEAS
GRISACEAS obstructivas y de la fase aguda de las
hepáticas,.
(ACOLIA) NOTA : La ingestión de papilla de bario
puede producir el mismo efecto.
Diarrea abundante.
Tambien se presentan en las diarreas
duodenales .
Por otra parte se pueden presentar por
una ingestión excesiva de vegetales
clorofílicos los cuales darán un tono
VERDOSAS
verdoso a las heces,
En los lactantes son frecuentes las
diarreas verdes, pero es normal que en
los niños criados al pecho las
deposiciones se tornen verdes al
contacto del aire.
Heces que proceden generalmente de
una hemorragia del aparto
gastrointestinal alto (>100 ml de
sangre).
NEGRO Sin embargo también se pueden
presentar cuando se ingirió una elevada
proporción de carnes en la dieta ,
cerezas, o alimentos con colorante
artificial.
Heces características de un bloqueo del
ARCILLA
conducto biliar común.
Probable hemorragia del aparato
gastrointestinal bajo ( por ejemplo:
MARRON INTENSO
tumores, hemorroides, fisuras, procesos
inflamatorios).
Rojizas, irregularmente, son las
deposiciones que contienen sangre no
transformada, de origen bajo
ROJIZA (hemorroides, tumores de colon distal,
(MELENA) etc.).
Unas heces rojizas también pueden
presentarse por la ingestión abundante
de betabel o tomate .

MEDICAMENTOS QUE PROVOCAN CAMBIOS EN LA COLORACIÓN DE LAS


HECES :

• Negro: Sales de hierro, Sales de bismuto, carbón.


• Verde: cloruro de mercurio, indiometicina, calomel.
• Verde a azul: ditiazanina.
• Marrón: antraquinonas.
• Rojo: fenolftaleína, pamoato de pirivino, tetraciclinas em jarabe,
bromosulfaleína.
• Amarillo: santonina, antibióticos.
• Claro a blancuzco: bário, antiácidos.
• Naranja rojizo: fenazopiridina.
• Rosa a rojo a negro: anticoagulantes dosis excesivas, salicilatos.

Como se pude observar la historia clínica del paciente , los antecedentes


dietéticos y el tratamiento bajo el cual se encuentre el paciente , son aspedctos
sumamente importantes que debe saber el Qumico clínico para poder distinguir
anormalidades importantes en las heces fecales de simples interferencias.
I
EXAMENES PARASITOLOGICOS :
* EXAMEN MACROSCOPICO : CARACT. DE LAS HECES : ✔ Consistencia

TAMIZADO ✔ Color
✔ Mucus,
(Nematodos adultos y huevos de Taenia)
✔ Sangre
✔ Especímenes
SOLUCION SALINA: Trofozoitos y Quistes al natural

ideal para buscar trofozoitos móviles ó larvas LUGOL : Estructuras internas , núcleos y vacuolas .
Huevos y lavas

FLOTACION FAUST (ZnSO4)


TUBO
MUESTRA: II * EXAMEN MICROSCOPICO : METODOS (Útil para quistes y huevos)

DE POR SEDIMENTACION -FLOTACION RITCHIE


✔ Heces
✔ Esputo , CONCENTRACION (Útil para quistes ooquistes y

✔ Contenido huevos)

duodenal COPA BAERMAN (Útil para larvas de Strongyloides Necator y Ancylostoma)


✔ Secreción biliar

POR DILUCIÓN STOLL


III * EXAMEN CUANTITATIVO Ideal para huevos de Ancylostoma y Necator
(Recuento de huevos ) FROTIS GRUESO KATO
Ideal para huevos de helmintos

GRAHAM Útil para huevos de Enterobius ,Ascaris,Trichuris,Hymenolepis,y Taenia

CÁPSULA DUODENAL DE BEAL(Útil para trofozoitos de Giardia, larvas de Strongyloides


IV huevos de Uncinarias)
EXAMENES ESPECIALES: HARADA MORI
HEMOCULTIVO (Útil para Uncinarias y Strongyloides)
Hemoflagelados

METODO DIRECTO
Tripanosomiasis.
*DIAGRAMA DE FLUJO DE UNA :

FROTIS
POSITIVO
NEGATIVO
SEDIMENTO
Coccidios MUESTRA
CENTRIFUGAR
BAERMAN
SIN
CON
ZIEHL-NEELSEN
EXAMEN
HEMATOXILINA
*MOCO
MEZCLAR
MOCO
DIARREICAS
**TROFOZOITOS:
Larvas
Trofozoito LIQUIDAS
DELEN FRESCA DE
SEDIMENTO
FRESCO
Strongyloides
de Entamoeba
Útil para Ooquistes de
E.histolytica
Quistes de G,lamblia
FERRICA
Y HECES O
**
I, belli
Giardia lamblia
CENTRIFUGAR
TRICROMICA
:
Balantidium coli
QUISTES
Balantidium coli
Giardia lamblia
OOQUISTES:
Cryptosporidium
I. belli
B, hominis
Cyclosporidium
LARVAS:
S, stercolaris
HUEVOS :
H, nana
* TAMIZADO

GENERALIDADES:

La técnica de tamizado Permite observar directamente las características


morfológicas de los parásitos adultos, enteros o fraccionados. tal es el caso de los
helmintos: Taenia solium y T. saginata
Es un parásito importante del hombre en aquellos lugares donde el
consumo frecuente de la carne de cerdo y de res cruda o insuficientemente
cocida, ya que la carne de estos animales puede contener las fases larvarias de
las tenias mencionadas, las cuales se denominan metacéstodos o cisticercos.
Fases de desarrollo:

Adulto (de T. solium.) Mide de 2 a 7 metros de longitud y posee escólex o


cabeza cuadrangular de aproximadamente 1 mm de diámetro, con cuatro
ventosas musculares grandes en forma de copa que miden 0.5 mm de diámetro y
rostelo prominente, redondeado y armado con una doble corona de ganchos en
número de 22 a 32. Luego sigue el cuello y la cadena estrobilar compuesta por
unos 1,000 a 2,000 segmentos o proglótidos.
Metacéstodo, cisticerco, etc. Existen dos tipos fundamentales el de T.
solium, también denominado Cysticercus cellulosae, el cual es una vesícula
blanquecina de 0.5 a 1.5 cm de ancho, con escólex invaginado y armado con
doble corona de ganchos, al igual que el adulto, y el de T. saginata, denominado
Cysticercus bovis, más o menos con las mismas características que el anterior,
pero sin corona de ganchos en el escólex.
Huevos: Los huevos que producen los adultos de ambas especies de
Taeniason semejantes e indistinguibles al examen microscópico. Son esféricos,
miden de 30 a 45 micras de diámetro y poseen una cápsula gruesa radiada y una
membrana hialina de origen embrionario. En su interior, se encuentra el embrión
(oncosfera o embrión hexacanto) que generalmente posee tres pares de ganchos.

EXAMENES DE LABORATORIO:
Después de la expulsión espontánea de proglótidos, estos se pueden
recuperar por medio de la técnica de TAMIZADO en heces expulsadas durante 24
horas. En caso de obtenerse proglótidos, deben comprimirse entre dos
portaobjetos y observarlos a contraluz o en un microscopio estereoscópico.
Hay que estudiar los proglótidos grávidos y contar el número de ramas
uterinas, ya que en caso de pertenecer a la especie T. solium son poco numerosas
(8 a 12), y si se trata de T. saginata, generalmente son numerosas (12 a 24).
Mediante el TAMIZADO de las heces también es posible recuperar el
escólex, sobre todo después de los tratamientos, el cual se observará bajo el
microscopio para determinar sus características morfológicas.
Ocasionalmente se pueden encontrar huevos de Taenia sp. por los
exámenes coproparasitoscópicos de flotación como el Faust, Ferreira, etc, o de
sedimentación, como el Ritchie, o a buscar huevos de Enterobius vermicularis
mediante el método de Graham.
Es importante decir, que el hallazgo de los huevos de Taenia sp. por
cualquiera de los métodos empleados de ninguna manera permiten realizar el
diagnóstico de una especie de tenia, y sólo se informan como
"huevos de Taenia sp."
Recientemente, se ha desarrollado la detección de coproantígenos de
Taenia; pero tampoco permiten discriminar la especie.

II. EXAMEN MICROSCÓPICO:

* COPROPARASITOSCOPICO DIRECTO

FUNDAMENTO : Este método permite buscar principalmente en muestras frescas


, la presencia de formas evolutivas móviles de parásitos de tamaño microscópico
( trofozoitos, quistes de protozoos: Entamoeba histolytica,Giardia lamblia
(duodenalis) ,Balantidium coli etc, así como larvas o huevos de helmintos:
Strongyloides stercolaris, Ancylostoma duodenale, Necator americanus,
Paragonimus,Fasciola etc)
MATERIALy EQUIPO
Aplicadores de madera
Portaobjetos de 25 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solución salina isotónica
Lugol
Microscopio
METODO:
a) En un portaobjetos limpio y desengrasado, se colocan separadamente, una
gota de solución salina y otra de lugol.
b) Con el aplicador de madera se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces 8 en
muestras con sangre y moco elegir esa parte para estudiar) y se mezcla con la
solución, con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos
gruesos, procurando hacer una suspensión no un frotis.
c) Colocar el cubreobjetos.
d) Repetir estas operaciones en la gota de lugol.
e) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X. No es recomendable usar
objetivo de inmersión (100 x) , pues se puede ensuciar el microscopio.
Recorrerla lamina siguiendo un sentido direccional , ejemplo :de derecha a
izquierda , o de arriba abajo.
NOTA:Con el suero fisiológico, los trofozoitos y quistes de los protozooarios se observan
en forma natural , y con lugol , las estructuras internas , núcleos y vacuolas.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Se informará detalladamente la presencia de alguna forma parasitaria observada
durante el análisis coproparasitoscopico , indicando su especie y estado evolutivo
(trofozoito, quiste en caso de un protozoo) ó (huevo , larva en caso de un
helminto)

* COPROPARASITOSCÓPICO MEDIATO O INMEDIATO CON


COLORANTES VITALES

FUNDAMENTO: Este método nos permite diferenciar correctamente los diferentes


protozoos basándose en las características morfológicas de cada uno de ellos
observando sus núcleos, endosomas, etc .mediante la utilización de los
colorantes vitales ( azul de metileno, rojo congo, eosina, verde de malaquita, verde
de Janus, Safranina)

MATERIALy EQUIPO
Aplicadores de madera
Portaobjetos de 25 X 76 mm
Puente de tinción
Lámpara de alcohol
Azul de metileno al 3.5%
Agua destilada
Microscopio

METODO:
a) En un portaobjetos se coloca una gota de azul de metileno al 3.5%
b) Se toma una porción pequeña de heces fecales con un aplicador y se
realiza una suspensión homogénea con el colorante.
c) Se deja actuar el colorante por 3 minutos o bien se flamea pero sin que
hierva la muestra, sólo hasta la emisión de vapores. Observar al
microscopio con objetivos de 10X y 40X.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se
deberáanotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio
evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso
de helmintos)

* MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACION


FAUST

FUNDAMENTO: Se basa en que los quistes y/o huevos de los parásitos flotan en
la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya
densidad es 1180. Es útil para la búsqueda de quistesy/o huevos de parásitos y
excepcionalmente se observan larvas. Se recomienda controlar la densidad del
sulfato de zinc y usar agua filtrada para el lavado previo de la muestra.

MATERIALy EQUIPO
Vaso de precipitado de 50 ml
Tubos de ensaye de 15 X 100 mm
Gradilla
Embudo de polietileno
Gasa cortada en cuadros de 15 cm por lado
Portaobjetos de 76 X 26 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Aplicadores de madera
Asa de alambre terminada en círculo de 3 a 5 mm
de diámetro y formando ángulo recto con el resto
del alambre.
Solución de Sulfato de Zinc 1.180° Baumé
Lugol
Microscopio
Centrífuga
METODO:

a) Se hace una suspensión homogénea con 1 g de materia fecal y 10 ml de


agua.
b) Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo,
colectando el filtrado directamente en el tubo.
c) Se centrifugan los tubos a 2000 rpm durante 1 min.
d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con agua. Se
centrífuga nuevamente, repitiendo la misma operación hasta que el
sobrenadante se observe limpio.
e) Se decanta el último sobrenadante, se resuspende el sedimento y se
agrega Sulfato de Zinc 1.180° Baumé y se centrífuga a 2000 rpm durante 1
min.
f) Con el asa se recoge la muestra de la película superficial que se encuentra
en el menisco, dos o tres ocasiones y se deposita sobre el portaobjetos; se
añade una gota de lugol, se mezcla con el ángulo del cubreobjetos y se
cubre con el mismo.
g) Se observa la preparación con objetivos de 10 X y 40 X.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se
deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su
estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva
en caso de helmintos)
* METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACIÓN
RITCHIE

FUNDAMENTO: Se basa en la concentración de los quistes y huevos por


sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para
separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas
parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada
antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación
de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIALy EQUIPO
Centrífuga
Tubos de ensaye cónicos de 15 ml
Gasa cortada en cuadros de 15 cm
por lado
Embudos de polietileno
Vasos de precipitado de 50 ml
Aplicadores de madera
Pipetas Pasteur con bulbo
Portaobjetos de 26 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solución salina isotónica
Solución de formaldehido al 10%
Microscopio
METODO
a) Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia
fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml de solución salina y se
homogeniza.
b) Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo,
recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
c) Se centrífuga la suspensión durante 1 min a 2000 rpm.
d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solución
salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias
hasta que el sobrenadante sea claro.
e) Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehído al 10%,
se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
f) 6.- Se añaden después 5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de
caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.
g) Se centrífuga durante 2 minutos a 1500 rpm.
h) Después de centrifugar se observan 4 capas:

➢ éter en la superficial,
➢ un tapón de restos fecales,
➢ formaldehído,
➢ sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

i) Se introduce la pipeta Pasteur hasta la capa d, se extrae con cuidado una


gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
j) Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos,
se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.
k) Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se
deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su
estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva
en caso de helmintos)

III. EXAMEN CUALITATIVO :

* MÉTODO DE DILUCION DE STOLL

FUNDAMENTO: Este método se basa en los principios de saponificación,


homogenización y aclaración. El NaOH 0.1 N al ponerse en contacto con las
grasas de las heces se saponifica, hace que los huevos de los parásitos sean
menos pegajosos, desinfecta y deodoriza la muestra.

MATERIALy EQUIPO
Probeta graduada de 100 ml con
tapón esmerilado
Pipetas de Stoll o graduadas de 2 ml
en 0.01 ml.
Varilla de vidrio de 20 cm de longitud
Perlas de vidrio
Portaobjetos de 74 X 38 mm
NaOH 0.1 N
Microscopio
METODO:
a) Se coloca en la probeta Hidróxido de Sodio 0.1 N hasta la marca de 56 ml.
b) Con la varilla de vidrio, se añade materia fecal hasta aforar a 60 ml.
c) Si las heces son duras, se espera un tiempo a que se reblandezcan.
d) Se añaden 15 perlas de vidrio, se tapa la probeta, se agita fuertemente, de
arriba abajo, durante 1 minuto, hasta formarse una suspensión homogénea.
e) Los huevos y restos empiezan a precipitar en cuanto cesa la agitación. Con
la pipeta se toma inmediatamente 0.075 o 0.15 ml del centro de la
suspensión. Se recomienda el segundo volumen, que da una muestra
mayor para el recuento. Llevando la punta de la pipeta al centro del matraz,
el error debido a la precipitación de los huevos disminuye.
f) Se pasa la totalidad del contenido de la pipeta a un portaobjetos y se cubre
la gota con el cubreobjetos.
g) Se examina la preparación sistemáticamente con el objetivo seco débil y se
cuentan todos los huevos y larvas presentes cuidando no contar dos veces
la misma estructura.

CALCULOS:
El número de huevos y larvas contados se multiplica por:
 100, si la materia fecal es dura.
 200, si la materia fecal es pastosa.
 400, si la materia fecal es líquida.

NOTA:
• Estos factores dependen de la cantidad de agua que las muestras
contengan.
• El resultado se expresa en huevos o larvas por ml de heces ( H.ml.H)
• Los quistes únicamente se reportan, sin cuantificarse.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se
deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su
estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva
en caso de helmintos)

* METODO CUANTITATIVO DE FROTIS GRUESO KATO

FUNDAMENTO: Es un método cuantitativo de helmintos. El cual se basa en la acción


que tiene la glicerina como aclarador de los huevos de helmintos y el verde de malaquita
como colorante de contraste.

MATERIAL y EQUIPO
Aplicadores de madera
Malla de alambre
Papel celofán de grosor medio, no
resistente a la humedad
recortado en cuadros de 22 X 40 ó 22 X
30 mm
Recipiente conteniendo glicerol
Verde de malaquita al 3%
Microscopio
METODO:

a) Con un abatelenguas, pasar 50- 60 mg de materia fecal a un portaobjetos a través


de la malla metálica.
b) Cubrir la muestra con el cubreobjetos de celofán embebido en la solución de verde
de malaquita y glicerol. Invertir la preparación, presionar sobre una hoja de papel
filtro contra la superficie de la mesa de trabajo, para lograr la extensión de la
muestra hasta cubrir un área de 20 a 25 mm de diámetro.
c) Dejar reposar la preparación con el cubreobjetos de papel celofán hacia arriba
durante una hora a temperatura ambiente o 30 minutos a 34-40°C. Esto motivará
el aclaración de las heces, sin que se aclaren los huevos de helmintos.
d) Observar al microscopio, hacer el conteo de los huevos que se encuentren en la
preparación. Para obtener la cifre total, cada cuenta alcanzada, multiplicarla por el
factor correspondiente para expresarla en huevos por gramo de heces (h.g.h) Si
se pesaron 50 mg , multiplicar por 20 que es un factor constante y el producto será
la cifra a reportar.
e) Debe evitarse exceder el tiempo de aclaración porque esto dificultaría la
observación de los huevos de helmintos. Si fuese necesario demorar la
observación puede detenerse el proceso de aclaración invirtiendo la preparación
es decir colocarla con el papel celofán hacia abajo hasta el momento que se vaya
a observar.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)

IV. EXAMENES ESPECIALES :

* METODO DE GRAHAM (RASPADO PERIANAL)

FUNDAMENTO: Esta técnica se basa en que la hembra adulta de Enterobius


vermicularis habitualmente no deposita sus huevos en el interior del intestino, sino
que por lo general emigra durante la noche, hacia las márgenes del ano,
depositando los huevos en los pliegues perianales. Es por esto que la toma debe
efectuarse en la mañana indicando que debe ir a defecar y no debe bañarse.
Ocasionalmente se pueden encontrar huevos de Ascaris umbricoides, Trichuris
trichiura, Hymenolepis nana, Taenia sp.
MATERIALy EQUIPO
Portaobjetos De 26 X 76 mm
Abatelenguas
Cinta de celulosa Scotch
Microscopio

METODO:
a) Sobre un extremo del abatelenguas se coloca la cinta Scotch con la parte
adherente hacia fuera, sujetándola con los dedos pulgar e índice.
b) Se presiona la superficie sobre la región perianal hacia uno y otro lado,
finalmente se hace un frote perianal.
c) Separar cuidadosamente la cinta del abatelenguas y adherirlo sobre un
portaobjetos.
d) Observar con objetivo de 10X.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se
deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su
estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva
en caso de helmintos)

* MÉTODO DE HARADA MORI

FUNDAMENTO: este método permite Realizar un cultivo de huevos para obtener


desarrollo de larvas y así poder precisar la especie.

MATERIAL Y EQUIPO:
Agua Destilada
Tubos de ensaye de punta cónica de 15 ml
Gradilla
Abatelenguas o aplicadores de madera
Tiras de papel filtro de 13 X 120 mm
Portaobjetos de 26 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Pipetas Pasteur con bulbo
Sol. De lugol o ácido acético al 20%
Microscopio

METODO:

a) Se extiende una fina película de heces ( de 1 a 2 mm) en un lado del tercio medio
de una tira de papel filtro.
b) Se coloca el papel en un tubo de ensaye con 3 ml de agua destilada forzando la
tira hasta aproximadamente el nivel de 1 cm y presionando el lado limpio contra la
pared del tubo.
c) Se conserva el cultivo a temperatura ambiente (24-28°C) en la oscuridad durante
un periodo de 1-5 días añadiendo agua según se vaya necesitando para mantener
el nivel bastante por encima del extremo inferior del papel filtro.
d) El flujo capilar del agua que sube a través del papel y la película fecal mantiene
húmedas las heces y transporta sus elementos solubles hacia la parte superior del
papel, donde se evaporan o acumulan en un depósito oscuro.
e) Al alcanzar la fase infecciosa, las larvas migran hacia abajo contra la corriente del
flujo del agua, y al alcanzar el nivel de ésta se sumergen hacia el fondo, donde
pueden verse con una lupa y tomarse con una pipeta para su examen
microscópico.
f) La tira de papel filtro puede transferirse a un tubo limpio lleno de agua para
recoger las larvas que hayan podido quedar en la película fecal.
g) Algunas especies de larvas tienen tendencia a no migrar hacia abajo. Antes de
retirarlas, las larvas pueden inmovilizarse introduciendo el tubo a baño María (50-
60°C) o añadiendo una cantidad de ácido Acético al 20%.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)

* METODO DE BAERMAN

Fundamento: Se basa en los tropismos positivos: geotropismo, termotropismo e


hidrotropismo de los trofozoítos de protozoos y larvas de helmintos. Es útil
principalmente para Balantidium coli y larvas de Strongyloides stercoralis.

MATERIAL Y EQUIPO:
Embudo de vidrio
Gasa
Coladera metalica
Pipeta pasteur
Portaobjetos
Solución salina
Microscopio
Estufa

METODO:

a) Colocar la coladera metálica con la gasa doblada dentro del embudo


b) Colocar dentro de la gasa de 3 a 4 grs de heces
c) Verter solución salina a 370C en cantidad suficiente
d) Dejar a temperatura o en la estufa a 280C – 370C de 30 a 50 minutos.
e) Sacar la coladera o rejilla y con ayuda de una pipeta Pasteur, obtener un
mililitro de sedimento.
f) Colocar dicho sedimento en un portaobjetos y observar al microscopio.
g) Se deberán reportar los estadios evolutivos de los parásitos encontrados.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
*ESTUDIO DE AMIBAS DE VIDA LIBRE

GENERALIDADES:
Las amebas de vida libre son numerosas y se encuentran en la naturaleza,
en medios como: agua, suelos y vegetación. Los géneros Naegleria y
Acanthamoeba ; tienen importancia en salud pública ya que pueden producir
enfermedades de tipo mortal como la meningoencefalitis.

La puerta de entrada para estas amebas al ser humano es a través de la piel o de


las mucosas, así como también la inhalación de agua o aire contaminados con
estos patógenos. Una vez en el organismo, aparece una lesión y a través del
sistema circulatorio, las amebas pueden alcanzan el sistema nervioso central. En
este tipo de infección las lesiones se caracterizan por formar gránulos o
tumoraciones en los tejidos.

Naegleria fowleri; causa una infección llamada meningoencefalitis


amebiana primaria (MEAP). Esta infección se adquiere por la inhalación de agua
con amebas. Una vez en las fosas nasales las amebas viajan rápidamente a
través de los tejidos olfatorios llegando al cerebro y concentrándose en el
encéfalo. Dado que la invasión es muy rápida y las amebas se reproducen
aceleradamente, comienza la destrucción masiva del cerebro y ocurren
numerosas hemorragias en gran parte del sistema nervioso central, y la muerte
sobreviene en el lapso de tres y siete días, dependiendo del manejo y resistencia
del paciente, así como de la virulencia del microorganismo invasor. infección se
adquiere por la inhalación de agua con amebas.
Las amebas del género Acanthamoeba son capaces de producir un
padecimiento llamado encefalitis amebiana granulomatosa (EAG) o
acantamebiosis, además de otras enfermedades en ojo, oídos, piel, pulmón,
hígado, próstata y útero entre otros órganos.

DIAGNOSTICO EN EL LABORATORIO:

Para identificar las amebas de Naegleria fowleri;se deberán realizar frotes


de LCR y teñir con Wright o Giemsa. Es importante decir, que en estas
preparaciones, las amibas muestran abundante citoplasma azulado y un nucleo
pequeño y delicado de color rosa.El LCR en estos casos es purulento o
sanguinolento, con leucocitos, principalmente neutrofilos hasta más de
20,0007mm3, la glucosa es baja y el contenido de proteínas alto.

Para la identificación de Acanthamoeba en LCR se deben Observar de manera


directa de la formas trofozoiticas. En tejido nervioso se deben observar las formas
quísticas.

* ESTUDIO DE PROTOZOARIOS CILIADOS INTESTINALES

FUNDAMENTO: Este método permite hacer la identificación por medio de un


examen coproparasitoscópico directo del trofozoito en heces diarreicas y el quiste
en heces formadas del parásito Balantidium coli.

MATERIAL Y EQUIPO
Aplicadores de madera
Portaobjetos de 25 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solución Salina isotónica
Lugol
Agua destilada
Microscopio
Materia fecal porcina
METODO
a) Colocar en un lado del portaobjetos una gota de solución salina y del otro
extremo una gota de lugol.
b) Agregar una porción de materia fecal porcina y homogeneizar.
c) Colocar el cubreobjetos procurando no hacer vacíos.
d) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X.
e) Hacer los dibujos y anotar resultados.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se
deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su
estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva
en caso de helmintos)

* ESTUDIO DE PROTOZOARIOS CILIADOS EN CAVIDADES

FUNDAMENTO: Este método permite demostrar la presencia de protozoarios flagelados


en exudados vaginales y uretrales y en orina por medio de examen directo. El parasito
más comúnmente encontrado es Trichomonas vaginalis.

MATERIAL Y EQUIPO
Microscopio
Hisopo
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tubo de ensaye con sol. Isotónica estéril
Espejo vaginal
Puente de tinción
Pipeta Pasteur con bulbo
Aceite de inmersión
Colorante de Wright
Secreción vaginal, uretral u orina
Pizeta con agua destilada

METODO:
a) Se coloca a la paciente en posición ginecológica.
b) Introducir con cuidado el espejo vaginal.
c) Con un hisopo tomar la muestra del fondo de saco posterior.
d) Depositar la primera toma en un portaobjetos limpio y hacer un extendido.
e) La segunda toma depositarla en un tubo de ensaye con solución salina
conservando a 37°C.
f) Una vez seco el extendido se procede a teñir con el colorante de Wright de 1 a 3
min.
g) Se observa al microscopio con objetivos de 10X, 40X y 100X agregando a éste
último aceite de inmersión.
h) Con una pipeta Pasteur se toma una gota del fondo del tubo de ensaye y se
deposita en un portaobjetos y se cubre.
i) Examinar con objetivos de 10X y 40X.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos).

* ESTUDIO DE EXPECTORACION PARA LA BUSQUEDA DE


PARASITOS PULMONARES
FUNDAMENTO: este método consiste en investigar en secreciones pulmonares,
presencia de protozoarios.

MATERIAL Y EQUIPO
Microscopio
Portaobjetos 25 X 76 mm
Aplicador de madera
Mechero
Puente de tinción
Colorante de Giemsa
Sol. Buffer ph 7.0-7.2
Aceite de inmersión
Frasco con expectoración o material de aspiración
bronquial

METODO:

a) En un portaobjetos limpio y desengrasado hacer un frotis de la


expectoración.
b) Dejar secar 5 minutos.
c) Proceder a teñir cubriendo el frotis con sol. colorante de Giemsa por 30
minutos, escurrir y lavar con sol. buffer, escurrir y dejar secar.
d) Observar al microscopio con objetivos de 10X, 40X y 100X agregando a
esta última observación aceite de inmersión.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se
deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su
estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva
en caso de helmintos).
* ESTUDIO DE PLASMODIUM

GENERALIDADES:
El procedimiento para el diagnóstico de protozoos en sangre circulante es el
estudio al microscopio de preparaciones en portaobjetos las cuales son la
extensión fina y la gruesa. La extensión fina ideal es la que tiene el grosor de una
célula y en la que los elementos celulares aparecen algo aplanados. La extensión
fina es útil para estudiar detalles de los hematíes y de los parásitos de la sangre,
su principal limitación es que la cantidad de sangre presente en la muestra es
pequeña.La extensión gruesa contiene 6-20 veces más sangre por unidad de
superficie que la extensión fina. Es fundamental que no se fije antes de la tinción
ya que los hematíes tienen que deshemoglobinizarse durante el procedimiento.

La rotura de los hematíes y la pérdida de su hemoglobina permite la visión


microscópica de las demás estructuras, incluidos los parásitos sanguíneos,
aunque se encuentren en la parte más profunda de la extensión. La extensión
gruesa resulta útil para el diagnóstico rápido de las parasitemias demasiado leves
para apreciarse en la extensión fina, pero no sirve para estudios anatómicos finos.

La toma de sangre periférica para Plasmodium vivax y P. Malarie deben


efectuarse cuando el paciente presenta escalofríos para la búsqueda de
esquizontes maduros. Para P. Falciparum se debe tomar la muestra después del
acceso febril para observar los eritrocitos con varios trofozoitos antes que estos
desaparezcan en capilares de órganos internos.

Con el colorante Giemsa las estructuras se tiñen de la siguiente manera:

➢ Plasmodium: Citoplasma azul o azul grisáceo.


➢ Eritrocitos: Azulosos, grisáceos y en ocasiones rosados.
➢ Núcleo de los Leucocitos: Violeta o morado.
➢ Plaquetas: Violeta ligero o rosa pálido.
* COLORACION DE HEMATOXILINA FERRICA DE HEIDENHAIN

FUNDAMENTO:Esta tinción permite colorear estructuras internas de especímenes


adultos o fragmentadas del mismo . Se usa en casos de cestodos y trematodos.

MATERIAL Y EQUIPO:
portaobjetos
Cubreobjetos
Frasco coplin o placas Petri
Colorante de hematoxilina
Cytoseal o bálsamo de Canadá
Alcoholes 50%, 70%, 85%, 95%
Solución Schaudinn
Solución mordiente de sulfato de fierro y amonio
Tintura de yodo
Solución fisiológica
Microscopio binocular

METODO:
a) Preparar un set de placas petri 100 x 150 mm o el frasco Coplin con los reactivos
correspondientes y con ayuda de un estilete o pinza curva hacer un frotis fino en la
lámina o la laminilla, esta última sujeta al porta-laminilla.
b) Si la muestra es dura, hacer una emulsión previa en solución fisiológica, realizar el
frotis y pasaren solución Schaudinn por 3 a 5 minutos.
c) Pasar por alcohol 70% más 1 a 2 gotas de tintura de yodo por 5 minutos
d) Pasar por alcohol 70% y 50% de 5 a 10 minutos cada vez.-Pasar por agua
corriente por 5 a 10 minutos
e) Pasar por la solución mordiente 2% de 5 a 10 minutos y enjuagar con agua
corriente.
f) Pasar por colorante por 5 a 10 minutos (1 mL de solución colorante hematoxilina y
9 mL de agua)
g) Lavar con agua y pasar por una segunda solución de mordiente al 2% para
decolorar, observandola intensidad de la coloración
h) Lavar con agua corriente a chorro continuo de 10 a 15 minutos
i) Deshidratar pasando por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, de 10 a 15 minutos
cada uno
j) Aclarar con xilol agitando el frotis, montar con cytoseal o bálsamo de Canadá y
observar al microscopio.
k) Informar el nombre del parásito y el estadio evolutivo

NOTA:
Observar con objetivo de inmersión 1000x. El citoplasma de los parásitos se observan de
color azul oscuro y los núcleos de color morado intenso a negruzco.

INTERPRETACION DE RESULTADOS :En caso de encontrar algún parasito en la


tinción se deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su
estadio evolutivo .

* TÉCNICA DE ZIEHL NEELSEN


(MODIFICADA PARA OBSERVAR COCCIDIAS:
CRIPTOSPORIDIUM)

FUNDAMENTO: Se basa en el comportamiento acido-resistente de la cubierta de estos


parásitos , los cuales se tiñen de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul ,
dependiendo del colorante de contraste usado.

MATERIAL Y EQUIPO:
Portaobjetos
Cubreobjetos
Puente para tinción
Fucsina fenicada
Verde de malaquita o azul de metileno acuoso
Metanol
Hidróxido de sodio al 4%
Alcohol acido

METODO:
a) Realizar un frote de heces en el portaobjetos y dejar secar.
b) Colocar las laminas sobre el puente de tinción
c) Fijar la lamina con alcohol metílico de 2 a 3 minutos y dejar secar
d) Agregar hidróxido de sodio, sobre el preparado por un minuto y eliminar el
exceso con agua de la llave.
e) Cubrir la lamina con fucsina fenicada (previa agitación del frasco que
contiene dicho reactivo). Por 5 minutos. Es importante recordar que la
fucsina debe ser diluida previamente con agua al tercio (1 ml de colorante
mas 2 ml de agua)
f) Lavar suavemente la lamina con agua corriente
g) Cubrir el portaobjetos con alcohol acido por unos segundos hasta quitar el
colorante.
h) Lavar suavemente la lamina con agua corriente
i) Colocar el colorante de contraste a la lamina que puede ser verde de
malaquita al 1% o azul de metileno al 1.4%, durante 5 minutos( diluidas
previamente al tercio)
j) Lavar suavemente la lamina con agua corriente y secar a temperatura
ambiente.
k) Realizar el montaje con cytoseal, bálsamo de Canadá o Permount, cubrir
con un portaobjetos.
l) Observar al microscopio.

NOTA:

Los ooquistes de Cryptosporidium, Isospora y Cyclospora, aparecen de un


color rojo fucsina, sobre un fondo verdoso (verde de malaquita). En algunos no se
colorean bien, pero la refringencia característica permite diferenciarlos.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito acido alcohol resistente en la tinción se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo .
*PROTOZOOARIOS INTESTINALES:

ENTAMOEBAS :

QUIST
TROF
OZOIT
E
Entamoeba :
O
*AMIBAS DE VIDA LIBRE :

FLAGELADO
AMEBA TROFOZOITO QUISTE
TRANSITORIO

Naegleria fowleri

Acanthamoeba
sp..

Balamuthia
mandrillaris..

*PROTOZOOARIOS FLAGELADOS :
*PROTOZOOARIOS INTESTINALES CILIADOS ,
COCCIDIOS Y BLASTOCYISTIS:

* HELMINTOS :
HUEVOS DE NEMATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :

*PROTOZOOARIOS INTESTINALES CILIADOS ,


COCCIDIOS Y BLASTOCYISTIS:
* HELMINTOS :
HUEVOS DE NEMATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :

* HUEVOS DE TREMATODOS PRESENTES EN LAS HECES


ETAPAS JUVENILES , DE UNCINARIAS Y STRONGYLOIDES :

* PROGLOTIDOS GRAVIDOS Y ESCOLICES DE CÉSTODOS.


*
E
T
A
P
A
S

RABDITOIDES Y FILARIFORMES DE UNCINARIAS Y STRONGYLOIDES:


*NOTA :
LARVA RABDITOIDE : Larva de vida libre (viven en el ambiente )
LARVA FILARIFORME : Tipo de forma larvaria en la cual se transforma una
larva rabditoide al encontrar un hospedero a quien parasitar
* TAMAÑO COMPARATIVO DE HUEVOS DE HELMINTOS :

* HEMOFLAGELADOS :

Tripanosoma y Leishmania :

AMASTIGOTE PROMASTIGOTE TRIPOMASTOGOTE


EPIMASTIGOTE
ó ò òò
LEISHMANIA LEPTOMONA TRIPANOSOMA
CRITHIDIA
Cinetoplasto Flagelo Cinetoplasto Flagelo
Cinetoplasto Flagelo

Cinetoplasto *Forma infectante al


hombre

Gránulos de
votulina

CuerpoB Membrana
asal ondulante

Membrana Núcleo
ondulante

Núcleo Núcleo
Núcleo
*Forma transitoria

* Plasmodium
FASE ERITROCITARIA :
JOVEN VIEJO INMADURO MADURO MASCULINO FEMENINO
TROFOZOITOS EZQUIZONTES GAMETOCITOS
* FIJADORES y/o CONSERVADORES

Los fijadores sirven para preservar protozoarios, sin que se modifiquen las
estructuras internas, sobre todo cuando las muestras no pueden ser procesadas
inmediatamente.
El conservador mas utilizado en el laboratorio por económico y eficaz es la
Solución de formalina al 10 % también conocido como formol , aldehído fórmico
o formaldehido.

Sin embargo a continuación se hará referencia a diversos conservadores que


también se utilizan ampliamente dentro del laboratorio de Parasitologia :

I. PAF (phenol-alcohol-formol):

UTILIDAD:
Conserva las estructuras de los parásitos (trofozoítos, quistes, huevos y
larvas), pudiéndose incluso observarse en semanas o meses (6) sin que haya
ocurrido deterioro alguno. Es recomendable mantener el fijador preparado en
frascos color ámbar. Además, permite observar el material al microscopio.

MATERIAL:
Fijador PAF
Tionina o azure A
Agua destilada.
Hisopo.
Tubos de centrífuga de 15 mL.
Aplicadores.
Tritón NE. Éter.
Embudo de vidrio.
Solución fisiológica

PROCEDIMIENTO:
a) La muestra de heces se mezcla con el fijador en un recipiente en la
proporción 1:1.
b) Para la observación microscópica. Mezclar bien la muestra fijada en PAF y
con ayuda de un embudo y una gasa doblada en un tubode 15 mL, colar
de 3 a 4 mL del material fijado
c) Agregar solución salina hasta un volumen de 12 mL y centrifugar a 1800
r.p.m. por 3 minutos.
d) Decantar el sobrenadante y obtener un sedimento de 0,5 mL; si es menor,
agregar de la muestra filtrada una cantidad suficiente y volver a centrifugar
para obtener el volumen del sedimento deseado.
e) Decantar el sobrenadante y completar 12 mL con solución fisiológica,
emulsionar con el aplicador centrifugar a 1800 r.p.m. por 3 minutos.
f) Repetir el centrifugado y lavar de 2 a 3 veces más.
g) Agregar 2 mL de solución fisiológica al sedimento final, emulsionar y
obtener una gota del sedimento con una pipeta Pasteur y colocarla en una
lámina portaobjetos
h) Agregar una gota del colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla
cubreobjetos y examinar al microscopio.
i) Al sedimento emulsionado y sobrante del procedimiento anterior, agregar
10 mL de solución fisiológica y una gota de Triton NE.
j) Mezclar, agregar 2 mL de éter, tapar con un tapón de jebe o de corcho,
agitar suavemente y destapar.
k) Centrifugar a 2 000 r.p.m. por 3 minutos, decantar y eliminar los detritus de
las paredes del tubo mediante un aplicador cubierto de algodón.
l) Agregar al sedimento 1 ó 2 gotas de solución fisiológica, mezclar y obtener
del fondo del tubo con una pipeta Pasteur una gota que se colocará en una
lámina portaobjeto.
m) Agregar una gota de colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla y
observar al microscopio
NOTA:
• Se deberán observar los elementos parasitarios: el citoplasma se ve de
color azul y el núcleo azul oscuro.

II. PVA (alcohol polivinílico):

UTILIDAD:
Fija y preserva, principalmente los trofozoítos y quistes de protozoarios, por
tiempo muy prolongado sin modificación importante de su morfología.

MATERIAL:
Solución fijadora
Conservador de PVA
Aplicador
Viales de vidrio de 3 a 4 mL.
Portaobjetos

PROCEDIMIENTO:
a) Colocar en una lámina portaobjetos 1 ó 2 mg de muestra,
b) Secar el frotis, agregar 2 ó 3 gotas de PVA y secar o guardar hasta por 3
meses para colorearlos,
c) Agregar al frasco que contiene la muestra v/v 1 a 4 mL. Generalmente se
puede preservar por meses y cuando se considere conveniente se realizará
la coloración con Trichrome Gomori Wheatley.

III. MIF (merthiolate - yodo - formol):

UTILIDAD:
Fija y colorea simultáneamente los quistes y huevos de parásitos,
permitiendo la observación inmediata de la muestra.
MATERIAL:
Solución MIF
Viales de vidrio de 3 a 4 mL.
Aplicador

PROCEDIMIENTO:
a) Colocar 1 ó 2 mL de la solución MIF en el vial con ayuda del una pipeta.
b) Para la observación microscópica, colocar 1 ó 2 mL o su equivalente de la
muestra fresca de heces.
c) Mezclar y observar al microscopio.

NOTA:
• Se deberán observar los parásitos teñidos de color amarillo oro.

IV. FIJADORES PARA PRESERVAR HELMINTOS ADULTOS:

UTILIDAD:

Conserva ejemplares adultos para su estudio morfológico, su preservación en


museos o para contar con muestras de referencia.
Los más usados suelen ser formol al 10%, AFA (Ácido acético - Formol- Alcohol) o
SAF (Acetato sodio - ácido acético - formol)

.
MATERIAL:
Formol 10%
Solución AFA
Alcohol 70%
Glicerina 5%
Láminas portaobjetos.
Pabilo o pesas de metal según modelo
Frascos boca ancha 150 – 200 mL.
Placas petri 150 x 100 mm y 240 x 200 mm.
PROCEDIMIENTO:
Colección y lavado de los helmintos:

a) Todo espécimen aislado del hospedero debe mantenerse fresco (agua o


suero fisiológico) en un frasco con tapa.
b) Los adultos colectados son lavados varias veces con solución fisiológica,
para eliminar la mucosidad y otras sustancias adheridas al cuerpo del
helminto.
c) Finalmente, se lava con agua para permitir el relajamiento del parásito-
Calentar a 55ºC de temperatura, alcohol de 70%, formol 10% ó AFA, para
que con la fijación los ejemplares queden estirados y pueda observarse sus
estructuras internas.

Fijación:

d) Para una conservación apropiada usar formol 10% (para céstodos y


tremátodos) o una mezcla de alcohol 70% (para nemátodos), ambos con
glicerina 5%.
e) Todos los frascos deben ser rotulados, indicando el nombre del parásito,
procedencia, localización y fecha de colección.
f) Para la identificación, en ocasiones se requiere hacer el aclaramiento con
lactofenol.

Aplanamiento:

g) Útil para céstodes y tremátodes, los cuales se colocan entre láminas y se


les ajusta con el pabilo para favorecer su aplanamiento
h) Se sumerge en formol 10% o AFA de 1 a 3 días, luego del cual se puede
colorear o conservar como pieza de museo en formol 10% y glicerina 5%.
i) Los tremátodes como Fasciola y/o Paragonimus pueden prepararse y
conservarse siguiendo los pasos dados para los céstodos.
 AFA: Fijador conteniendo alcohol, formol y ácido acético.
 CÁPSULA OVÍGERA: Vesícula que contiene huevos.
 CESTODO: Gusano o helminto platelminto de forma acintada.
 COLORANTE VITAL: Colorante que permite ver la estructura interna del
parásito vivo.
 COPRO-ANTÍGENO: Antígeno presente en las heces.
 CRISTAL DE CHARCOT - LEYDEN: Cristales de proteínas provenientes
de los gránulos de eosinófilos, que se destruyen en el intestino.
 DIAFANIZAR: Aclarar para facilitar la visualización microscópica
 DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO: Demostración directa o indirecta de
alguna forma o estadio evolutivo del parásito.
 ENTEROPARÁSITO: Parásito que tiene por hábitat el tubo digestivo,
especialmente el intestino.
 ESPORA: Esporoquiste aislado.
 ESPOROQUISTE: Quiste con cubierta definida que contiene esporozoítos.
 ESTRÓBILA: Porción del cuerpo de las tenias o céstodes formadas por
una cadena de proglótidos.
 FIJACIÓN: Conservación de la estructura del parásito.
 HECES: Mezcla de productos de excreción y secreción que se eliminan por
el intestino.
 HELMINTO: Ser pluricelular con exoesqueleto flexible, ausencia de
apéndices y con movimientos reptantes.
 HPG: Número de huevos por gramo de heces.
 HUEVO: Producto de la fecundación con potencialidad de desarrollar un
nuevo ser.
 LARVA: Estadio evolutivo de algunos seres vivos como los helmintos y los
artrópodos en quienes aún no se han desarrollado los aparatos genitales.
 MIF: Fijador que contiene merthiolate, yodo y formol.
 MONTAR: Colocar el espécimen entre lámina y laminilla con bálsamo de
Canadá para su conservación permanente.
 NEMATODO: Gusano o helminto de forma cilíndrica.
 OOQUISTE: Quiste que contiene el huevo o cigoto.
 PAF: Fijador y/o conservador conteniendo fenol, alcohol y formol para
muestras con parásitos, sobretodo protozoario.
 PVA: Alcohol polivinílico, fijador para conservar los parásitos en muestras
fecales.
 PARÁSITO: Ser vivo de escala zoológica inferior que vive a expensas de
otro de escala superior.
 PATOGENICIDAD: Capacidad de producir daño.
 PROTOZOARIO: Ser unicelular.
 PROGLÓTIDE: Segmento o anillo de la estróbila de las tenias o céstodes y
que puede ser inmaduro, maduro o grávido, según el estadío de desarrollo
de sus aparatos genitales.
 QUISTE: Forma de resistencia de los protozoos, los cuales se rodean de
una membrana dura e impermeable.
 SOLUCIÓN SOBRESATURADA: Solución en la cual el soluto está en su
máxima concentración.
 TROFOZOÍTO: Forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos.
 TREMÁTODE: Gusano aplanado o platelminto, que presenta su cuerpo
indivisible.

BIBLIOGRAFIA:

• http://groups.msn.com/parasitologia1
• http://www.invdes.com.mx/anteriores/Febrero2002/htm/amebas.html
• http://www.drscope.com/privados/pac/generales/parasitologia/teniasis.html
• http://www.scribd.com/doc/2362490/Manual-parasitologia-laboratorio-parte-I
• http://www.scribd.com/doc/2362916/MANUAL-PARASITOLOGIA-
LABORATORIO-PARTE-II
• http://www.scribd.com/doc/995852/165-NT37

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