BIOLOGIE CELULARĂ
ÎNDRUMĂTOR DE LUCRĂRI PRACTICE
2010
1
CUPRINS
MIJLOACELE TEHNICE DE STUDIERE A MATERIEI VII .................................................................. 5
CILII ................................................................................................................................................................ 37
TRAHEE- EPITELIUL MUCOASEI -CILI VIBRATILI (MOBILI)- COL H.E. ............................................................... 38
MADUVA SPINĂRII- CANALUL EPENDIMAR- STEREOCILI- COL. H.E. ............................................................... 41
FROTIU CU SPERMATOZOIZI-CELULE FLAGELATE-COL. MAY-GRUNWALD GIEMSA (MGG) ........................... 43
CELULE EUCARIOTE UNICELULARE CU CILI SAU FLAGELI ............................................................................... 44
PREPARAT NATIV CU CELULE CILIATE SAU FLAGELATE .................................................................................. 44
ULTRASTRUCTURA CILULUI - MICROSCOPIE ELECTRONICĂ : ................................................. 48
ULTRAFAGOCITOZA ................................................................................................................................. 54
2
MACROFAGUL DIN PLĂMÂN- COL H.E. ŞI GRANULE DE PIGMENT ANTRACOTIC FAGOCITATE .......................... 54
MACROFAGUL DIN PIELE - HISTIOCITUL -COL KERNECHTROT (ROŞU NUCLEAR) ŞI GRANULE DE ALBASTRU DE
TRIPAN FAGOCITATE ...................................................................................................................................... 56
MACROFAGUL DIN FICAT( CELULA KUPFER)- COL H.E.ŞI GRANULE DE TUŞ DE CHINA FAGOCITATE .............. 58
FENOMENE DE TRANSPORT - TRANSPORTUL PRIN VEZICULE - MICROSCOPIE
ELECTRONICĂ: ........................................................................................................................................... 60
MITOZA ......................................................................................................................................................... 83
CELULE VEGETALE DE CEAPĂ - COLORAŢIE HEMATOXILINĂ FERICĂ .............................................................. 83
CELULE ÎN MITOZĂ DIN MERISTEMUL RADICULAR DE CEAPĂ ......................................................................... 86
ETAPELE MITOZEI -MICROSCOPIE ELECTRONICĂ ....................................................................... 89
LIZOZOMII.................................................................................................................................................. 112
MIOCARD DE PERSOANE ÎN VÂRSTĂ - LIZOZOMI LLL (CORPI REZIDUALI) - COL. H.E. .................................... 112
MIOCARD ISCHEMIC - COL. L.I.E. ................................................................................................................ 113
LIZOZOMII - MICROSCOPIE ELECTRONICĂ: .................................................................................. 115
3
RINICHI - TUBI URINIFERI - MITOCONDRII - COL. HEMATOXILINĂ FERICĂ ...................................................... 117
MITOCONDRIA - MICROSCOPIE ELECTRONICĂ: .......................................................................... 119
4
Mijloacele tehnice de studiere a materiei vii
Tipuri de microscoape
Microscoape fotonice
Microscoape electronice
Difracţia cu raze X
Microscoape fotonice
1. Microscopul optic obişnuit
2. Microcopul cu contrast de fază
3. Microscopul cu lumină fluorescentă
4. microscopul cu lumină polarizată
Microscopul optic
5
-şurub -superior pentru mişcări înainte şi înapoi ale
măsuţei
-inferior pentru mişcări laterale
-macrovizele care apropie sau îndepărtează obiectivele de
măsuţă
-tubul microscopului susţine sistemul obiectiv şi ocular
la partea inferioară prezintă revolverul, iar la partea
superioară tuburile oculare
-revolverul are un disc mobil de care se fixeavă obiectivele
şi un disc fix cu un pinten care opreşte fiecare obiectiv în
dreptul axului optic.
2. Partea optică
-sistemul ocular cu lentila înferioară, de câmp, colimatoare
şi lentila superoară.
-sistemul obiectiv compus dintr-un sistem de lentile, cu
puteri de mărire de 6X, 10X, 20X, 40X, pentru obiectivele uscate şi
90X.pentru obiectivul de imersie (obiectiv umed -sau citologic).
-sistemul de transmis lumina, alcătuit din condensor,
oglindă şi sursa de lumină.
6
Puterea rezolutivă sau de separare
d= ----------------
n sin
7
Reguli de microscopizare
8
Microscopul cu contrast de fază prezintă un dispozitiv care
transformă diferenţele de fază la trecerea prin diverse structuri, în
diferenţe de amplitudine, perceptibile vederii.
9
Microscopul electronic
10
ambele cazuri imaginile sunt înregistrate pe fotografii. Microscopul de
baleiaj oferă o imagine tridimensiunală a structurilor studiate.
Prin microscopia de baleiaj se obţin date privind aspectul
suprafeţei unei structuri sau formei ei tridimensionale şi date privind
proprietăţile fizice şi chimice ale preparatului. În hematologie se obţin
date privind proliferările limfocitare de tip T sau B, diferenţierii
histiocitelor macrofage precum şi a altor categorii de celule din seria
mielomonocitară.
11
Plasmalema- Microscopie electronică:
12
Analog lui din membrane artificiale se obtin lipozomii - structuri extrem
de utile în terapia modernă –gelurile cu aplicare externă.
13
Etapele de obţinere ale unui preparat microscopic
Obţinerea unui preparat microscopic permanent
Recoltarea
Constă în obţinerea de material biologic de la organisme vii când se
numeşte bioptică sau de la organisme moarte persoane decedate sau
animale de experienţă sacrificate numinduse recoltare necroptică.
Tipuri de recoltare bioptică
1. Puncţia bioptică se face prin absorbţia celulară cu un ac special din
cavităţi, pleurală, peritoneală, articulată, medulară. Dacă se aspiră
lichid biologic acesta va trebui centrifugat în prealabil, obţinându-se
un sediment din care se realizează un frotiu.
2. Prin raclaj cu ajutorul unor chiurete sau tampoane speciale se obţin
celule de pe mucoase, bucal, faringian, esofagian, vaginal,uterin din
care se prepară frotiuri.
3. Intraoperator se recoltează fragmente mici de aprox. 1 cm cub care
se plonjează în soluţii fixatorii.
Fixarea
Poate fi prin mijloace fizice, încălzire sau îngheţare cu zăpadă
carbonică, sau prin procese chimice, cu ajutorul soluţiilor de fixatori.
Rolul fixatorilor este de a opri brusc procesele biochimice intracelulare
cu menţinerea structurilior celulare.
Tipuri de fixatori: Cel mai utilizat este formolul in diluţie de 4-15%, dar
se mai folosesc şi metanolul, etanolul sau amestecuri de fixatori.
Există fixatori specifici care au o anumită electivitate pentru diverse
structuri: Bouin pentru acizi nucleici, Regand pentu mitocondrii, Carnoz
pentru cercetări biochimice sau Herovici utilizat în străinatate în locul
formolului.
Timpul de fixare diferă funcţie de fixator de exemplu pentru formol
peste 48 ore.
Fixatorul trebuie să fie în cantitate de 50 de ori mai mare decât piesa.
Spălarea
Opreşte procsul de fixare prin metode chimice şi se realizează sub jet
de apă timp de mai multe ore.
14
Includerea
Are mai multe subetape:
1. Deshidratarea constă în trecerea prin mai multe recipiente cu alcool
etilic ce concentraţii crescânde 70%, 90%, alcool absolut.
2. Clarificarea constă în plonjarea piesei în solvenţi organici, xilen sau
toluen.
3. Impregnarea propriuzisă se realizează prin includerea piesei în
parafină sau paraplast care se găsesc în stare lichidă la 57 grade
Celsius în forme de cuburi cu latura de 2 cm apoi se lasă la
temperatura camerei solidificându-se.
Secţionarea
15
Colorarea
Deshidratarea
constă în trecerea prin mai multe recipiente cu alcool etilic ce
concentraţii crescânde 70%, 90%, alcool absolut.
Clarificarea
Cu benzen, toluen sau xilen după care se lasă să se usuce câteva
minute
16
Montarea
Se face cu răşini sintetice sau naturale de ex. Balsam de Canada cu rol
în creşterea translucidităţii şi protecţia preparatului. Se pune o picărură
pe preparat după care se aplică lamela şi se pune la termostat la 37
grade 24 ore pentru uscare.
Etichetarea
Este ultima etapă a obtinerii unui preparat permanent.
17
Forme celulare
18
19
Celula cubică-Rinichiul -tubi uriniferi-epiteliul - col. H.E.
20
21
22
Celula rotundă- Ovar-Folicul ovarian- Ovocitul- col.H.E.
Ovocitul este celula cea mai mare din organism -la om 250 microni cu
forma adaptată perfect la funcţie, plină cu principii nutritive, substanţe
de rezervă glucidice, lipidice,protidice plus diferite substanţe ionice
care se observă la obiectivul maxim sub formă de granulaţii în
citoplasmă.
Citoplasma este eozinofilă, iar nucleul, şi el foarte mare, este situat
central, colorat în mov cu hematoxilină, şi deschis la culoare încât se
observă foarte bine nucleolul , care este mai închis la culoare şi
voluminos.In jur se vede conturul celulei pentru că peste membrana
citoplasmatică se suprapune o membrană translucidă- membrana
pellucida cu rol de protecţie a ovocitului ce îi conferă un contur intens
eozinofil .
In jurul ovocitului se observă în rânduri concentrice celule ca o coroană
radiară- corona radiata cu rol trofic şi de susţinere. Tot acest complex
ovocitul, membrana pelucida şi corona radiata formează foliculul matur
de Graaf.În preparatul prezentat se pot întâlni foliculi în diferite stadii de
dezvoltare. Cu cât prezintă mai puţine straturi de celule în corona
radiata cu atât foliculul este mai imatur. Foliculii se situează în zona
marginală a ovarului.
23
24
Celula pavimentoasă- mezenterul - impregnaţie argentică
25
Celula stelată-maduva spinării- neuronul multipolar -
col. H.E.
26
27
Celula prismatică- Epiteliul vezicii biliare- col.H.E.
Vezica biliară prezintă un epiteliu unistratificat format din celule
columnare sau prismatice situat spre lumenul vezicii biliare şi care
constituie primul strat al mucoasei. Sub stratul de celule epiteliale se
găseşte membrana bazală care le desparte de ţesutul conjunctiv, toate
la un loc formând mucoasa .
Prin intermediul membranei bazale se leagă celulele epiteliale de
ţesutul conjunctiv subiacent. Pe secţiune mucoasa are un aspect
ondulat, iar celulele au forma dreptunghiulară. Nucleul acestor celule
are formă alungită, ovalară şi este situat la polul bazal. La polul apical
al celulei se observă o dungă eozinofilă- bordura striată care se va
studia în cadrul altei lucrări.
28
Citoscheletul - Microscopie electronică:
Se observă mai bine după extragerea citoplasmei sub forma unei reţele
care împânzeşte celula şi care are rol şi de osatură percum şi în
mobilizarea diferitelor componente de unde şi denumirea de
motoschelet, toate filamentele care intră în componenţa lui sunt intr-o
continuă mişcare şi transformare prin polimerizare şi depolimerizare se
formează aceste filamente, se scurtează şi trimit organitele sau
macromoleculele necesare hrănirii celulei în diferite direcţii. În
imunofluorescentă anticorpii marcaţi se fixează pe filamentele proteice
de un anumit tip, actină, intermediare sau microtubuli. Când filamentele
se grupează în fascicule tot mai groase acestea poartă denumirea de
fibre de stress. Mai multe filamente intemediare se răsucesc în alfa-
helix pe anumite porţiuni şi formează fascicule- fenomenul de
fasciculare şi defasciculare. Ele la rândul lor se leagă între ele cu
proteine accesorii şi formează reţeaua, fenomenul de reticulare sau
dereticulare.
29
Prelungiri permanente ale celulelor
30
Intestinul subţire- vilozităţi intestinale- col. H.E.
31
Intestinul gros - epiteliul mucoasei- coloraţie albastru
alcian pentru mucopolizaharide (MPZ)
32
33
Ultrastructura bordurii striate- Microscopie
electronică:
34
Microvilozitătile- Microscopie electronică:
35
36
Prelungiri permanente ale celulelor
Cilii
Cilii sunt de două feluri: mobili (vibratili) - de-a lungul mucoaselor
arborelui traheo-bronşic, de la cavitatea nazală, laringe, trahee, bronhii,
şi bronhiole pecum şi în mucoasa oviductelor (trompele uterine)şi
imobili (stereocili)- în urechea internă şi în canalul ependimar
(consideraţi mai recent potrivit funcţiei lor a fi microvilozităţi.
Cilii sunt totdeauna acoperiţi cu un covor de mucus pe care prin
mişcările lor îl rulează şi astfel epurează acest tub respirator. Prin
mişcările permanente de bătaie ale cililor se primeneşte epiteliul
respirator, pentru că în covorul de mucus pe care îl vehiculează rămân
cantonate toate impurităţile pe care organismul vrea să le elimine, fie
că sunt bacterii sau viruşi, fie că sunt diferite celule necrozate, fie că
sunt alte impurităţi din aer care au pătruns - corpusculi mici care trebuie
eliminaţi. Uneori se vor observa pe suprafaţa cililor resturi de
mucozitate eozinofilă .
La trompele uterine mişcările permanente ale cililor dinspre ovar spre
uter ajută la coborârea ovulului.
Celălalt tip de cili sunt numiţi imobili sau stereocili pentru că sunt cili
spaţiali şi întrucât apar lipiţi, aglutinaţi se mai numesc şi cili aglutinaţi.
37
Trahee- epiteliul mucoasei -cili vibratili (mobili)- col H.E.
38
39
40
Maduva spinării- canalul ependimar- stereocili- col. H.E.
Macroscopic se poate observa substanţa cenuşie dispusă in
coarnele anterioare şi posterioare sub forma literei H. La microscop
apar zone mai intens eozinofile unde se găseşte substanţa cenuşie şi
zone mai deschise la culoare şi mai laxe corespunzătoare substanţei
albe. In mijlocul substanţei cenuşii se găseşte canalul ependimar
format dintr-un epiteliu tot pseudostratificat, iar la polul apical al
celuleor din loc în loc se observă cilii aglutinaţi sub forma unor
smocuri.După noile teorii histologice se presupune că ar avea un rol
resorbtiv şi că deci pot fi consideraţi microvilozităţi. In lumenul canalului
ependimar se găseşte o substanţă eozinofilă-lichidul cefalorahidian
(LCR)
Motoneuronii din coarnele anterioare- celule multipolare dispuse
în grupuri au formă stelată şi după cum trece sectiunea aceasta poate
să taie prelungirile lor sau poate să treacă deasupra nucleului şi acesta
se va observa, rezultând cele mai diferite forme.
Nucleul este rotund , situat de cele mai multe ori central şi prezintă un
nucleol colorat intens în hematoxilină şi o citoplasmă eozinofilă in care
se găsesc corpusculii Nissl (la care se reveni la altă lucrare). In jurul
neuronilor apar punctiforme, o multitudine de nuclee ale celulelor gliale
la care nu se observă bine citoplasma. Celulele gliale sunt în număr
foarte mare şi sunt reprezentate de diferite categorii de astrocite.
41
42
Frotiu cu spermatozoizi-celule flagelate-col. May-
Grunwald Giemsa (MGG)
43
Celule eucariote unicelulare cu cili sau flageli
44
Vorticela este mai rară, emană un peduncul pe care şi-l poate
contracta şi are rol de prindere în plajele de alge. Are cili doar în jurul
stomei numiţi cili peritrihi cu ajutorul cărora dirijează prin curenţii de
apă creaţi microorganismele ce urmează a fi digerate.
45
Amoeba
46
Alge
Apar în colonii mici, verzi , multe, sau alge brune care au striaţiuni
aproape geometrice.
47
Ultrastructura cilului - Microscopie electronică :
Sectiune longitudinală prin cil
48
Secţiune transversală prin cil
49
50
Joncţiunile intercelulare- Microscopie electronică:
51
2) Joncţiunile impermeabile (tight junctions) -zonula occludens-
Se găsesc în epiteliul tubilor contorţi, epiteliul vezicii urinare şi biliare şi
la nivelul barierei hematoencefalice. Sunt alcătuite din şiruri de proteine
integrale gemene care se întrepătrund ca dinţii unui fermoar.
Permeabilitatea lor este modificată de nivelul calcemiei, presiunea
osmotică şi inflamaţie.
52
Complexele joncţionale apar la nivelul celulelor epiteliale cu rol de
transport şi de absorbţie şi sunt alcătuite din joncţiuni strânse, jonctiuni
în bandă şi jonctiuni în spot.
53
Ultrafagocitoza
Ultrafagocitoza constă în fagocitarea unor pulberi foarte fine de către
celule numite macrofage. Macrofagele (fagocitele) din ţesuturi poartă
de obicei numele ţesutului respectiv: macrofagul din ficat, macrofagul
din plămân, macrofagul ţesutului osos etc..
54
55
Macrofagul din piele - histiocitul -col Kernechtrot (roşu
nuclear) şi granule de albastru de tripan fagocitate
56
57
Macrofagul din ficat( celula Kupfer)- col H.E.şi granule
de tuş de China fagocitate
Se caută vena centrolobulară pe secţiune transversală şi numai pe
aceste secţiuni se vede că pornesc de la ea ca nişte raze trabeculele,
cordoanele hepatice ale lui Remack, care prezintă un traiect sinuos şi
au celulele destul de apropiate între ele, încât nu se observă bine
spaţiul dintre ele . Intre cordoanele hepatice spaţiile se numesc capilare
sinusoide şi în ele se află din loc în loc macrofagele ficatului- celulele
Kupfer. In cazul injectării de tuş de China la animalul de experienţă în
vena portă, acesta va fi fagocitat de celulele Kupfer punăndu-le mai
bine în evidenţă sub formă de celule negre mult hipertrofiate.. La
obiective mari se pot observa granulaţile negre de tuş de China. Celula
Kupfer prezintă un nucleu excentric care în cazul fagocitării de tuş de
China poate să nu se vadă fiind acoperit de granulaţii negre.
58
59
Fenomene de transport - Transportul prin vezicule -
Microscopie electronică:
60
61
Exocitoza
62
Forme nucleare
63
Nucleul rotund - Ovocitul - Ovar - col.H.E.
Ovocitul este celula cea mai mare din organism -la om 250 microni cu
forma adaptată perfect la funcţie, plină cu principii nutritive, substanţe
de rezervă glucidice, lipidice,protidice plus diferite substanţe ionice
care se observă la obiectivul maxim sub formă de granulaţii în
citoplasmă.
Citoplasma este eozinofilă, iar nucleul, şi el foarte mare, este situat
central, colorat în mov cu hematoxilină, şi deschis la culoare încât se
observă foarte bine nucleolul , care este mai închis la culoare şi
voluminos.In jur se vede conturul celulei pentru că peste membrana
citoplasmatică se suprapune o membrană translucidă- membrana
pellucida cu rol de protecţie a ovocitului ce îi conferă un contur intens
eozinofil .
In jurul ovocitului se observă în rânduri concentrice celule ca o coroană
radiară- corona radiata cu rol trofic şi de susţinere. Tot acest complex
ovocitul, membrana pelucida şi corona radiata formează foliculul matur
de Graaf.În preparatul prezentat se pot întâlni foliculi în diferite stadii de
dezvoltare. Cu cât prezintă mai puţine straturi de celule în corona
radiata cu atât foliculul este mai imatur. Foliculii se situează în zona
marginală a ovarului.
64
Celula binucleată - ficatul,celula hepatică,coloraţie H. E.
Se caută vena centrolobulară pe secţiune transversală şi numai pe
aceste secţiuni se vede că pornesc de la ea ca nişte raze trabeculele,
cordoanele hepatice ale lui Remack, care prezintă un traiect sinuos şi
au celulele destul de apropiate între ele, încât nu se observă bine
spaţiul dintre ele . Intre cordoanele hepatice spaţiile se numesc capilare
sinusoide şi în ele se află din loc în loc macrofagele ficatului care se vor
studia la altă lucrare.
Coloraţia hepatocitelor: citoplasma în roz, cu eozină iar nucleul în mov,
cu hematoxilină. Nucleul este rotund situat central şi prezintă unul sau
mai mulţi nucleoli. Pot exista celule cu doi nuclei din loc în loc , pentru
că este organul cu cea mai mare putere de regenerare .
Vena centolobulară prezintă hematii în lumen care au culoarea ocrului
şi ajută la recunoaşterea ei. Postoperator pot apare zone cu zeci de
celule binucleate aceasta fiind semnul de regenerare rapidă.
65
Nucleul turtit - fibra musculară striată - celula
multinucleată - col hematoxilină ferică
66
67
68
Nucleul ovalar- epiteliul prismatic al vezicii biliare
col.H.E.
Vezica biliară prezintă un epiteliu unistratificat format din celule
columnare sau prismatice situat spre lumenul vezicii biliare şi care
constituie primul strat al mucoasei. Nucleul acestor celule are formă
alungită, ovalară şi este situat la polul bazal. La polul apical al celulei
se observă o dungă eozinofilă- bordura striată care se va studia în
cadrul altei lucrări.
Sub stratul de celule epiteliale se găseşte membrana bazală care
le desparte de ţesutul conjunctiv, toate la un loc formând mucoasa .
Prin intermediul membranei bazale se leagă celulele epiteliale de
ţesutul conjunctiv subiacent. Pe secţiune mucoasa are un aspect
ondulat, iar celulele au forma dreptunghiulară.
69
Nucleul în pecete-ţesutul adipos-adipocitul-coloratie HE.
70
Frotiul sanguin - coloraţie May Grunwald Giemsa (MGG)
Hematiile ocupă intregul câmp microscopic şi apar sub forma
unor celule rotunde, sub formă de disc biconcav, de culoare roşie
cărămizie, uneori dispuse în fişicuri.
Printre hematii din loc în loc apar celule cu nuclee colorate în mov
numite leucocite clasificate după forma nucleului în polimorfonucleare,
pentru că nucleii lor au mai mulţi lobi şi mononucleare.
Polimorfonuclearele sau granulocitele au fost numite în trecut
polinucleare, deoarece sa crezut că ar avea mai mulţi nuclei, astăzi
denumirea fiind evitată .
Granulocitele se clasifică după tipul de granulaţii secundare :
Neutrofilele prezintă granulaţii secundare care nu se colorează
nici cu coloranţii acizi şi nici bazici. Granulaţiile granulocitului eozinofil
reacţionează numai cu coloranţii acizi de unde şi denumirrea de
granlocit acidofil, iar culoarea acestor granule este un roşu cărămiziu
ca şi icrele de Manciuria. Granulaţiile bazofilului se colorează cu
coloranţii bazici .
Neutrofilul prezintă un nucleu care poate avea 2 sau mai mulţi
lobi, până la 5 lobi, precum şi uneori o prelungire fină, ca un băţ de
toboşar - drum stik leucocitar- un filament de cromatilă care reprezintă
corpusculul Barr, sau al 2-lea cromozom X inactivat la femei. Acesta
apare doar la 3% dintre neutrofilele acestora. Neutrofilele sunt primele
celule care fagocitează, ele merg la focarul de infecţie unde atacă
microbii şi începe necroza ţesuturilor, eliberează acolo echipamentul
enzimatic pe care îl conţin în lizozomi, o mulţime de enzime
antimicrobiene de tipul lizozimului, mieloperoxidazei, d-
aminioxidazei,care ajută la digerarea acestor microbi. Mai conţin şi alte
substanţe în granulele lor secundare cum este fosfataza alcalină care
pot fi evidenţiate cu ajutorul coloraţiilor speciale, şi fagocitine cu acţiune
importantă în acţiunea lor antibacteriană. PMN rămân la locul de
invazie şi împreună cu ţesuturile necrozate formează puroiul. În mod
normal apar în proporţie de 40 până la 75% în sângele circulant, fiind
fagocitele din prima linie de atac.
71
Eozinofilele care deşi se găsesc în cantitate redusă de 1-6%au
un rol important în reacţiile imune de tip alergic la diferiţi alergeni :
polenuri (febra de fân până la astm alergic), la persoanele care
prezintă parazitoze (oxiuri sau helminţi ) .Dacă pătrund în organism duc
la creşterea numărului acestor eozinofile. Granulele lor specifice roşu
cărămizii, ca icrele de Manciuria, pot să acopere nucleul care este
bilobat, cu formă de desagă.Eozinofilele conţin şi: enzime cu ajutorul
cărora digeră complexele antigen - anticorp, precum şi histaminaze (
substanţe care inactivează histamina) şi alte substanţe vasoactive
secretate de bazofile . De aceea la alergici unde histamina se
eliberează în cantitate mare trebuie să crească şi numărul de
eozinofile. La microscopie electronică spre deosebire de neutrofile
unde se găseste un bogat echipament lizozomal la eozinofile se
observă un bogat echipament granular, cu granulele îmbrăcate în
membrane proprii, cu un centru cristaloid, bogate în histaminaze. şi mai
puţin în alte tipuri de organite.
72
ai nucleului. Granulele lor mari, bogate în histamină, împreună cu alte
tipuri de amine cum ar fi slow reactive substances of anafilaxy (SRSA)
şi heparina se eliberează în sângele alergicilor când aceştia vin în
contact cu alergenii. Aminele cresc permeabilitatea capilară şi dau
fenomenele de exudat la nivelul bronhiilor, cavităţii nazale, sau eriteme
la nivel tegumentar datorită congestiei vasculare şi toate reacţiile
caracteristice alergicilor . Se găsesc în sângele circulant în cantitate
mică,normal sub 1%.
73
Monocitul a doua categorie de mononucleare, este un macrofag.
După ce neutrofilele merg primele la focarul de invazie, se apropie prin
mişcări ameboidale lente se apropie monocitele care vor digera
resturile celulare mari rămase în zona de agresiune inclusiv corpurile
neutrofilelor, şi microbiene care se găsesc în acea zonă. Monocitele
sunt prevăzute cu un bogat echipament enzimatic lizozomal, pe care îl
eliberează în momentul atacului şi emană pseudopode. Nucleul lor este
uşor incizat reniform, asemănat şi cu o boabă de fasole se găseste
uşor excentric şi e inconjurat de citoplasmă azurofilă bazofilă. Se
găsesc în cantitate de 2-10% şi pe măsură ce migrează în ţesuturi se
transformă în macrofagele din respectivele ţesuturi cunoscute, celule
Kupffer, histiocite, sau alte tipuri de macrofage. Monocitele din sânge
împreună cu macrofagele din ţesuturi formează marele sistem
monocito - macrofagic de apărare în invaziile microbiene.
Tot în sângele circulant se pot observa mici fragmente, plachetele
sangvine, trombocitele care se găsesc între 150.000 - 400.000/ mm
cub, care provin dintr-o celulă mare numită megacariocit din măduva
hematogenă, din care se desprind. Prin aglomerare formează trombul
alb, şi realizează coagularea sângelui.
74
Frotiu de sânge col. Albastru brillant crezil
75
Ficat - hepatocite -coloraţie verde metil pironină
76
Nucleul -Microscopie electronică:
Nucleul este alcătuit din :
Învelişul nuclear
-Membrana externă- prevăzută cu ribozomi, se continuă
cu RE rugos pe faţa sa externă
-Membrana internă- formează cu cea externă spaţiul
intermembranar
-Lamina nucleară (Lamina densă internă) formată
dintr-un strat fin fibros, aderă la memebrana internă
Cromatină- Se clasifică în :
Eucromatină, metabolic activă, slab colorată, care poate fi
trascrisă. Ea formează o reţea foarte fină în interiorul nucleului.
Heterocromatină, metabolic inactivă, condensată, mai închisă la
culoare .Din ea se formează la sexul feminin corpusculul Barr. Se
dispune frecvent periferic, sau în jurul nucleolului sau poate forma
grunji mari (cariozomi) .
77
* -Porii nucleari- formaţi din 8 proteine dispuse octogonal care
delimitează un spaţiu liber sau opturat de un diafragm fin.Străbat
învelişul nuclear în vederea transportului transmambranar.
78
Forme de nuclee : -rotund
-ovalar
-polilobat
79
Nucleolul
Nucleolul este cea mai densă structură corpusculară din interiorul
nucleului, prezent în interfază.
Prezintă mai multe zone:
80
81
Fusul de divizune-Microscopie electronică
Apare în profază şi este alcătuit din zecile de microtubuli (polari şi
cinerocorici ) de care se prind cromozomii
-sectiune longitudinală
-secţiune transversală
82
Mitoza
83
3. Metafaza Are loc clivarea longitudinală a fiecărui cromozom în 2
cromatide, fiecare prevăzută cu cinetocorul ei, şi din cei 46
cromozomi se ajunge la 92 cromozomi şi deci dedublarea genomul.
Toţi cromozomii stau în această etapă la mijlocul fusului de diviziune
la ecuatorul său, motiv pentru care formaţiunea se numeşte placă
ecuatorială sau placă metafazică. Pe preparat se poate observa
placa ecuatorială dar nu se poate distinge fiecare cromozom în
parte.
84
6. Citodiereza sau citochineza constă în clivarea citoplasmei
împreună cu nucleul corespunzător ei, astfel încât dintr-o celulă
mamă să apară 2 celule fiice care vor avea acelaşi material genetic
cu celula mamă, şi vor semăna mai mult sau mai puţin cu aceasta.
În citochineză se formează la mijlocul celulei sub plasmalemă un inel
contractil în care apar filamente de actină care se scurtează, trag şi
astfel îngustează inelul de la mijlocul celulei şi în final citoplasma se
va fragmenta în 2 celule fiice.
85
Celule în mitoză din meristemul radicular de ceapă
Vârful germinativ al rădăcinii de ceapă ( meristemul ) furnizează un
sistem adecvat studiului mitozei, deoarece aici se pot surprinde un
număr mare de celule aflate în diferite faze ale mitozei. Mitoza se
desfăşoară asemănător la celulele animale şi vegetale,iar materialul de
studiu este uşor de preparat.
* Recoltarea se prelevează vârfurile rădăcinii de ceapă, având
dimensiuni de 5-10 mm.
* Fixarea se introduc în soluţie de fixator 3:1 alcool etilic, acid acetic
glacial, timp de 24-48 ore.
* Colorarea cu colorant carmin acetic care se prepară astfel:
-Se dizolvă 1 g carmin într-un amestec de 45 ml acid acetic
glacialşi 55ml apă distilată
-Se fierbe câteva minute după care se lasă să se răcească
-Se filtrează
-Se păstrează la frigider în sticle colorate
Carminul acetic colorează nucleul şi cromozomii.
Se scot rădăcinuţele din fixator şi se introduc într-o eprubetă, peste
care se toarnă carmin acetic.
Se încălzeste până la fierbere câteva secunde.
Se toarnă într-o placă Petri de unde se scoate câte o rădăcinuţă şi se
aplică pe o lamă .
Se secţionează cu un bisturiu la 3 mm de vârf, lăsând pe lamă numai
vârful.
Se aplică o lamelă care se bate delicat cu un băţ de chibrit pentru
etalarea straturilor celulare.
Se urmăresc fazele mitozei la microscop.
86
87
88
Etapele mitozei -Microscopie electronică
89
90
91
Cariotipul uman
Se stabileste la cromozomii în metafază şi se ordonează în funcţie de
mărime şi morfologie, în ordine descrescândă pe perechi. Se
formează 7 grupe notate de la A la G în ordine descrescătoare a
dimensiunilor lor şi cromozomul Y separat.
92
Fenomenul de bandare
93
Solenoidul este unitatea următoare de împachetare a cromatinei fiind
alcătuit din 6 nucleozomi şi având o grosime de 30 nm. În continuare
filamentul prezintă bucle care contribuie şi ele la condensarea
cromatinei care la rândul lor se răsucesc ducând la dispoziţia în benzi
clare şi întunecate vizibile la nivelul cromozomilor.
94
95
Fenomenul de bandare ajută la cartografierea genelor. Se poate studia
pe cromozomii uriaşi de Drosophila melanogaster.
96
Ribozomii şi Reticulul endoplasmatic rugos
97
Neuronul - corpusculii Nissl -maduva spinării- col. H.E.
Se caută în substanţa cenuşie motoneuronii din coarnele anterioare-
celule multipolare dispuse în grupuri .
Neuronii au formă stelată şi după cum trece sectiunea aceasta poate
să taie prelungirile lor sau poate să treacă deasupra nucleului şi acesta
se va observa, rezultând cele mai diferite forme.
Nucleul este rotund şi prezintă un nucleol colorat în hematoxilină şi o
citoplasmă eozinofilă in care se găsesc corpusculii Nissl, granulaţii
bazofile (corespondenţii corpusculilor Berg de la ficat). Ei reprezintă
conglomerate de RER şi ribozomii ataşaţi lor, care dau un aspect de
tigru sau de panteră şi se numesc şi corpii tigroizi.
98
Neuronul - corpusculii Nissl -maduva spinării- col.
albastru de toluidină
Asemănător cu preparatul anterior,neuronii au formă stelată după cum
trece sectiunea poate să taie din coarnele lor, poate să treacă
deasupra nucleului . Nucleul este rotund şi prezintă un nucleol colorat
în albastru mai intens, iar citoplasma are nuanţă albastru deschis şi
prezintă corpusculii Nissl, granulaţii bazofile (în albastru închis). Ei sunt
conglomerate de RER şi ribozomii ataşaţi lor, care dau un aspect de
tigru sau de panteră şi se numesc corpii tigroizi. Se vizualizează mai
bine decât în coloraţia H.E.
99
Pancreasul - Acini pancreatici - col. H.E.
Acinii pancreatici constituie componenta exocrină a pancreasului care
secrtă complexul de enzimele digestive pancreatice şi sunt mai greu
de diferenţiat la obiectivele mici . La obiective mai mari se observă 6-7
celule situate în cerc cu un lumen care poate să fie liber sau umplut cu
substanţa secretată de aceste celule (granulele de zimogen ).Celulele
au o citoplasmă colorată diferit: în jurul nucleului şi la periferia lor spre
polul bazal, datorită acumulării de reticul endoplasmatic şi ribozomi
care sintetizează intens proteine, există o citoplasmă bazofilă, iar spre
lumenul acinului citoplasma este mai eozinofilă, datorită maturării
materialului secretat sub formă de granule de zimogen. Mai mulţi acini
se unesc şi îşi varsă conţinutul intr-un canalicul colector, mult mai
mare decât acinul şi mai deschis colorat decât acesta.
100
101
Reticulul endoplasmatic: rugos şi neted-
Microscopie electronică:
Reticulul endoplasmatic rugos este o formă funcţională implicată în
sinteza substanţelor proteice alcătuit din tubi sau canalicule pe care se
găsesc ataşaţi ribozomii ca nişte granule . Din loc în loc tubii sau
canaliculele se lărgesc şi formează cisterne sau saci.
102
Ribozomii-Microscopie electronică
Ribozomii - corpusculii lui Palade sunt organitele in care se
realizează sinteza proteică propriuzisă . Ei sunt alcătuiţi din 2
corpusculi (subunităţi) notaţi după gradientul la care centrifughează :
corpusculul mare (subunitatea 50S) şi corpusculul mic (subunitatea
30S). Aceştia sunt uniţi prim intermediul filamentului de m ARN ( aspect
de mărgele înşirate pe o aţă) alcătuind unităţi morfofuncţionale numite
ergozomi sau poliribozomi.Se observă poliribozomii existenţi în
citoplasmă în 2 forme : fie ataşaţi memebranelor RER, fie liberi.
103
Complexul Golgi
104
105
Ganglion vegetativ - neuron vegetativ - impregnaţie
argentică Cajal
Impregnaţie argentică Cajal este o combinaţie de coloranţi pentru că
pe lângă nitratul de argint care precipită şi dă o culoare neagră
aparatului Golgi propruzis, se colorează în roşu nucleolul. În jurul
nucleului se evidenţiază în negru canalicule sau cisterne Golgi care
vor fi secţionate transversal. Impregnaţia deşi conferă culoare neagră
structurilor pe care precipită sărurile de argint, datorită balsamului de
Canada ce se suprapune, va apărea o nuanţă brună la nivelul
citoplasmei. Ganglionul vegetativ este format din neuroni, celule mai
puţin stelate, şi în jurul lor ţesutul conjunctiv care se retractă formează
un halou (artefact).
106
107
Complexul Golgi - Microscopie electronică:
Complexul Golgi (dichtiozomul) este situat frecvent în preajma
nucleului şi întotdeauna în apropierea unui RER. Partea centrală a
complexului, aparatului Golgi propriuzis, este formată din saci sau
cisterne turtite. La aparatul Golgi vine materialul sintetizat de RER sub
formă de mici vezicule (de ordinul Angstromilor),care vor pătrunde prin
faţa cis- partea convexă (ce priveşte spre RE şi deseori şi spre nucleu)
, vor fi îmbogăţite, prelucrate, modificate biochimic şi condensate în
partea centrală şi după ce vor fi sortate şi învelite în membrane, vor
ieşi prin partea trans sub formă de vezicule de secreţie(de exemplu
granule de zimogen) mult mai mari (ordinul nanometrilor). Prin
capetele laterale mult dilatate se desprind vezicule care sunt lizozomi
primari ce rămân în citoplasmă.
108
109
110
Fenomenul de secreţie celulară- Microscopie
electronică:
111
Lizozomii
112
Miocard ischemic - col. L.I.E.
Coloraţia L.I.E. este o coloraţie specială care pune în evidenţă fibrele
miocardice ichemice la pacienţii care au decedat prin moarte subită
urmare a infarctului miocardic complicat cu fibrilatie ventriculară.
Acest preparat e foarte important în medicina legală, pentru că este
singura dovadă a cauzei de deces prin infarct miocardic la persoanele
care au decedat subit.
Zonele cu celule miocardice ischemice se colorează în galben, iar
zonele neischemice, normale apar colorate in roşu.
113
114
Lizozomii - Microscopie electronică:
Lizozomii se împart în :
* lizozomi primari, omogeni, bogaţi în echipament enzimatic dar încă
nedigerând particule. a
* lizozomi secundari, în care începe fagocitoza propriuzis, în
momentul în care înglobează particule, şi atunci se transformă în
fagolizozomi:
heterofagolizozomi- care inglobează particule străine celulei
pentru a le digera cu enzimele cu care sunt echipaţi. c
autofagolizozomi- care fagocitează organite proprii celulei, de
exemplu mitocondrii, sau întregi zone din citoplasma propriei
celule, care sunt digerate de aceşti autofagolizozomi. e
* lizozomii terţiari(telolizozomii), conţin resturile care nu au fost
digerate sub formă de corpi reziduali. f
Heterofagolizozom Autofagolizozom
115
116
Mitocondria
117
118
Mitocondria - Microscopie electronică:
Mitocondria (condriomul) este cel mai mare organit după nucleu.Are
o membrană externă şi o membrană internă care formează invaginaţii
numite creste mitocondriale. Spaţiul din interiorul crestelor se continuă
cu spaţiul dintre cele 2 membrane.
Între creste se găseşte matricea granulară. În organele în care este
nevoie de multă energie creşte numărul de mitocondrii şi mărimea
lor,observându-se mitocondrii gigante, ovalare sau de alte forme.
119
Peroxizomii-Microscopie electronică
120
Imagine de ansamblu a celulei
121
BIBLIOGRAFIE
122