Nama : Mutia Yuli Farida

NIM : J2B009012

TUGAS MIKRO TERAPAN

Koliform merupakan suatu grup bakteri yang digunakan sebagai indicator adanya
polusi kotoran dan kondisi yang tidak baik terhadap air, makanan, susu, dan produk-produk
susu. Koliform sebagai suatu kelompok dicirikan sebagai bakteri berbentuk batang, gram
negatif, tidak membentuk spora, aerob dan anaerob fakultatif yang memfermentasi laktosa
dengan menghasilkan asam dan gas dalam waktu 48 jam pada suhu 35 oC. Adanya bakteri
koliform di dalam makanan/minuman menunjukkan kemungkinan adanya mikroba yang
bersifat enteropatogenik dan atau toksigenik yang berbahaya bagi kesehatan. Bakteri
koliform dapat dibedakan menjadi 2 grup yaitu: koliform fekal misalnya Escherichia coli dan
koliform non fekal misalnya Enterobacter aerogenes.

Escherichia coli merupakan bakteri yang berasal dari kotoran hewan atau manusia,
sedangkan Enterobacter aerogenes biasanya ditemukan pada hewan atau tanaman-tanaman
yang sudah mati. Jadi, adanya Escherichia coli dalam air minum menunjukkan bahwa air
minum itu pernah terkontaminasi feses manusia dan mungkin dapat mengandung pathogen
usus. Oleh karena itu, standar air minum mensyaratkan Escherichia coli harus nol dalam 100
ml. untuk mengetahui jumlah koliform di dalam sampel digunakan metode Most Probable
Number (MPN), pemeriksaan kehadiran bakteri koli dari air dilakukan berdasarkan
penggunaan medium lactose broth yang ditempatkan di dalam tabung reaksi berisi tabung
Durham (tabung kecil yang letaknya terbaik, digunakan untuk menangkap gas yang terjadi
akibat fermentasi laktosa menjadi asam dan gas).

Metode MPN (Most Probable Number) adalah metode yang digunakan untuk
menghitung koliform di dalam air dengan menggunakan pengujian fermentasi dalam tabung.
Tiga pengujian itu diantaranya adalah uji penduga (Presumtive Test), uji penguat (Confirmed
Test), dan uji pelengkap (Completed Test).

1. Uji Penduga (Presumtive Test)

Uji penduga merupakan tes pendahuluan tentang ada tidaknya kehadiran

bakteri koliform berdasarkan terbentuknya asam dan gas yang disebabkan karena
 fermentasi laktosa oleh bakteri golongan koli. Terbentuknya asam dilihat dari
kekeruhan pada media laktosa, dan gas yang dihasilkan dapat dilihat dalam tabung
Durham berupa gelembung udara. Dinyatakan positif jika terbentuk gas sebanyak
10% atau lebih dari volume di dalam tabung Durham. Banyaknya kandungan bakteri
Escherichia coli dapat dilihat dengan menghitung tabung yang menunjukkan reaksi
positif terbentuknya asam dan gas dan dibandingkan dengan tabel MPN. Metode
MPN dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba di dalam sampel yang berbentuk
cair. Bila inkubasi 1 x 24 jam hasilnya negatif, maka dilanjutkan dengan inkubasi 2 x
24 jam pada suhu 35oC.jika dalam waktu 2 x 24 jam tidak terbentuk gas dalam tabung
Durham, dihitung sebagai hasil negatif. Jumlah tabung yang positif dihitung pada
masing-masing seri, MPN penduga dapat dihitung dengan melihat tabel MPN.

2. Uji Penguat

Hasil uji penduga dilanjutkan dengan uji penguat. Dari tabung yang positif
terbentuk asam dan gas terutama pada masa inkubasi 1 x 24 jam, suspensi
diinokulasikan pada media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA) secara aseptic dengan
menggunakan jarum inokulasi. Koloni bakteri Escherichia coli tumbuh berwarna
merah kehijauan dengan kilap metalik atau koloni berwarna merah muda dengan
lendir untuk kelompok koliform lainnya.

3. Uji Pelengkap

Pengujian selanjutnya dilanjutkan dengan uji pelengkap untuk menentukan

bakteri Escherichia coli. Dari koloni yang berwarna pada uji penguat diinokulasikan
ke dalam medium Lactose Broth dan medium agar miring Nutrient Agar (NA),
dengan jarum inokulasi secara aseptic. Diinkubasi pada suhu 37 oC selama 1 x 24 jam.
Bila hasilnya positif terbentuk asam dan gas pada Lactose Broth, maka sampel positif
mengandung bakteri Escherichia coli. Dari media agar miring NA dibuat pewarnaan
Gram dimana bakteri Escherichia coli merupakan Gram negatif berbentuk batang
pendek. Untuk membedakan bakteri golongan koli dari bakteri golongan koli fekal
(berasal dari tinja hewan berdarah panas), pekerjaan dibuat duplo, dimana satu seri
diinkubasi pada suhu 37oC (untuk golongan koli) dan satu seri diinkubasi pada suhu
42oC (untuk golongan koli fekal), bakteri golongan koli tidak dapat tumbuh baik pada
suhu 42oC, sedangkan golongan koli fekal dapat tumbuh dengan baik pada suhu 42oC.
DAFTAR PUSTAKA

Widiyanti, Ni Luh Putu Manik dan Ni Putu Ristianti. 2004. Analisis Kualitatif Bakteri
Koliform pada Depo Air Minum Isi Ulang di Kota Singaraja Bali.

CAWST. 2005. Most Probable Number.

Anonymous. 2006. Presumptive Test.