ISOLASI GLIKOSIDA FLAVONOID DARI DAUN KETELA POHON (Manihot utilissiima Pohl

)
1. Tujuan Praktikum Dapat memahami dan dapat melakukan isolasi flavonoid dari daun ketela pohon. Dapat memahami dan dapat melaksanakan analisis kualitatif golongan senyawa tersebut dengan metode kromatografi lapis tipis. 2. Dasar Teori Percobaan Semua flavonoid, menurut strukturnya, merupakan senyawa induk flavon yang terdapat berupa tepung putih pada tumbuhan Primula, dan semuanya mempunyai sejumlah sifat yang sama. Saat ini dikenal sekitar 20 jenis flavonoid. Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Mereka dapat diekstraksi dengan alkohol 70% dan tetap ada pada lapisan air setelah ekstrak dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid berupa senyawa fenol, karena itu warnanya berubah bila di tambah basa atau amoniak, jadi flavonoid mudah dideteksi pada kromatogram atau dalam larutan. Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonyugasi dan karena itu menunjukan pita serapan kuat pada spektrum UV dan spektrum tampak. Flavonoid umumnya terdapat dalam tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavonoid. Flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan berpembuluh tetapi beberapa kelas lebih tersebar daripada yang lainnya. Penyebaran flavonoid meliputi, Golongan Tumbuhan Bakteri Fungi Ganggang merah Lumut hati Sedikit tipe flavonoid, terutama deoksiantosianin, glikoflavon Equisetum Flavonoid berstruktur sederhana, 33Flavonoid Hampir tidak ada sama sekali

kalkon dan flavanon. sering terdapat campuran yang terdiri atas flavonoid yang berbeda kelas. biflavonil Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai campuran. kuersetin Klasifikasi flavonoid umumnya didasarkan atas inti molekul. Antosianin berwarna yang terdapat dalam daun bunga hampir selalu disertai oleh flavon dan flavonolol tanwarna. skutellarein. jarang sekali dijumpai hanya flavonoid tunggal dalam jaringan tumbuhan.anti oksidant : kuersetin. dan prosianidin . flavonol. leukoantosianidin.anti inflamasi : apigenin. biflavonil Angiospermae Segala jarang macam flavonoid. antosianidin. tangeretin .anti hipertensi : prosianidin .Lycopodium Paku-pakuan Gymnospermae deoksiantosian. *Harbone membagi flavonoid kedalam kelompok . Aktivitas biologi flavonoid antara lain. Disamping itu. taksifolin.anti alergi : nobeletin. flavon.Antosianin . biasanya tipe sederhana. Flavonoid mempunyai rumus umum. mirisetin .Flavonol .anti virus : amentiflavum.anti kanker : kuersetin. .Proantosianidin . luteolin. C 6C3C6. kuersetin . Kebanyakan flavonoid.

Nicotiana tabacum (daun tembakau).flavonoid major : flavon. flavononol dan isoflavon. atau fitogeografi. Hampir setiap tumbuhan tingkat tinggi menunjukkan pola khas glikosida flavon dan flafonol dalam daun atau bunga.Biflavonil *Berdasarkan warna flavonoid *Berdasarkan flavonoid major dan flavonoid minor .Isoflavon . Rheum. dan untuk mempelajari cara ini dianjurkan pertama-tama pada flavonoid yang sudah dikenal.flavonoid minor : khalkon.Glikoflavon . flavanon. penghibridaan. dihidrokhalkon. atau dari populasi tumbuhan. biflavonil . auron. flavonol. Tidak dapat diragukan lagi bahwa dari semua glikosida kuersetin. teh.Khalkon dan auron . Viola. Aesculus hippocastanum. dan Phaseolus vulgaris.Flavanon . Rutin atau kuersetin 3-rutinosida pertama kali diisolasi dari Fagopyrum esculentum dan sampai sekarang tumbuhan ini masih tetap digunakan. Walaupun banyak yang dipelajari dengan membandingkan pola bercak flavonoid dalam kromatogram dua arah dari ekstrak 2 jenis tumbuhan yang berbeda. tetapi tetap perlu diidentifikasi komponen utama yang ada. yaitu rutin yang merupakan glikosida kuersetin. Senyawa tersebut merupakan penanda taksom idel dalam pengkajian masalah penggolongan tumbuhan. rutin paling luas penyebarannya dan mungki terdapat pada 25 % dari flora setempat.. Ini dapat dilakukan dengan menggunakan sederetan cara fitokimia sederhana. Bahan tumbuhan yang diperoleh dari sumber tersebut di atas harus dikumpulkan da . Sumber yang mudah diperoleh termasuk bunga Magnolia.Flavon .

Kuersetin dosis 750 mg/kg BB dapat menghambat aktivitas sitokrom P-450 yang tinggi karena parasetamol dosis toksik (p<0. Hasil penelitian menunjukkan kadar parasetamol dalam darah tidak dipengaruhi oleh dosis kuersetin yang diberikan. Dari hasil penelitian dapat disimpulkan kuersetin dosis 750 mg/kg BB dapat menurunkan efek hepatotoksik parasetamol. Pergeseran spektrum UV dan spektrum tampak pada rutin Larutan Pita I Etanol Etanol 259 366 bh 363 Geser max (nm) Pita II Pita III Spektrum hipsokrom 12 nm Struktur 3-OH tersulih Pengaruh pada Diagnosis dibandingkan dengan kuersetin (pita III 375 nm) Ditambah 2 tetes NaOH 2M Ditambah 2 tetes AlCl3 5% Ditambah serbuk 272 327 415 Geser batokrom 52 nm (pita III) 4¶-OH bebas 275 303 bh 433 Geser batokrom 70 nm (pita III) 5-OH bebas 271 325 393 Pergeseran 12 nm pada pita I 7-OH bebas .diekstraksi oleh etanol 95 % panas (jaringan segar) atau etanol 70 % (jaringan kering) selama 30 menit. dan menurunkan aktivitas enzim sitokrom P450.rutinosida Kuersetin merupakan salah satu flavonoid yang banyak terdapat di alam dan diketahui mampu menghambat enzim sitokrom P-450 yang berperan dalam metabolisme parsetamol. Derajat nekrosis hati karena pemberian parasetamol dosis toksik lebih rendah pada pemberian kuersetin 750 mg/kg BB (p<0.05).05). Kuersetin 3. lalu ekstrak dipekatkan sampai volumenya tinggal sedikit.

Gelas kimia 100 ml 1 buah .Batang pengaduk 2 buah .Lempeng KLT secukupnya .Kapas secukupnya .NaOAc Ditambah NaOAc dan H3BO 3 262 298 387 Geser batokrom 20 nm (pita III) 3¶.Corong Pisah 250 ml 1 buah .Pipa kapiler 2 buah .4¶-diOH bebas 3.Cawan porselin 2 buah .Hot plate 1 buah .Serbuk daun singkong kering 40 gram .Erlenmeyer 1000 ml 1 buah .Aquadest 300 ml .Corong 2 buah .Tabung reaksi 1 buah .Lampu UV-Vis 1 buah .Water bath 1 buah .Alumunium Foil secukupnya . Materi dan Metode Alat dan Bahan .

Metanol 2 ml .Natrium Sulfat Anhidrat 3 gram Prosedur Kerja .Diatas tabung ditempatkan corong berisi kapas untuk mengurangi penguapan.40 gram serbuk daun singkong kering ditimbang dan dimasukan kedalam Erlenmeyer 1000 ml . . . .Jika rutin telah terbentuk. . .. .Ditambahkan aquadest sebanyak 300 ml kedalam Erlenmeyer tadi. . saring larutan dengan menggunakan kertas saring. dan selanjutnya disaring kembali dengan kertas saring. . dipanaskan dengan hotplate selama 45 menit.Cairan disaring dengan menggunakan kapas dengan bantuan corong.Dimasukan kedalam lemari pendingin hingga terbentuk kristal rutin.Sisa padatan dimasukan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan 10 ml HCl 2 N.Etanol 96% dingin secukupnya . Selanjutnya tabung tersebut dipanaskan dalam waterbath selama 1 jam.Endapan diambil dengan spatel kecil. dan dilarutkan dalam 2 ml campuran metanol dan air sama banyak (sari I).HCl 2 N 10 ml .Endapan yang didapat dicuci dengan etanol dingin.Dietil Eter 75 ml . endapan terdapat dan kertas saring dikeringkan dengan oven pada suhu 400 C selama 3 jam.

Lapisan eter hasil ekstraksi 1. . Hasil Pengamatan  Massa kristal rutin (tidak murni) yang didapat dari 40 gram daun singkong adalah.Hasil yang diperoleh disemprot dengan penampak bercak uap amoniak.Totolkan sebagai titik A adalah Sari I dan titik B adalah Sari II.0269 gram / 40 gram] x 100%= 7. 4. kedua lapisan yang terbentuk dipisahkan. Massa vial + rutin = 10. . .Residu yang diperoleh dilarutkan dengan 2 ml methanol (Sari II) . Cairan yang diperoleh lalu diuapkan dalam lemari asam.2 dan 3 dicampu rkan lalu disaring melalui kertas saring yang berisi 3 gram Natrium sulfat anhidrat.7.9312 gr .9043 gr = 3. . .Dan dibaca dengan spektrofotometri pada panjang gelombang 254 dan 366 nm.56%  Hasil pengamatan lempeng KLT dengan sinar UV panjang gelombang 254 nm .Eluasi dengan n-heksan ± etilasetat dengan perbandingan 7:3.9312 gr Massa vial kosong = 7.Lapisan air asamnya dikocok lagi dengan dietileter sebanyak 25 ml selama 3 kali pengocokan.0269 gr  Rendemen = [3..Cairan hasil hidrolisis tersebut dimasukan kedalam corong pisah.9043 gr Massa kristal rutin adalah 10. Ditambahkan dietileter sebanyak 25 ml dikocok dengan hati-hati. .

Kuersetin ini termasuk aglikon flavonoid (zat bukan gula) yang . serta jadi zat pengatur tumbuh tanaman. Endapan yang diperoleh disaring dan dicuci dengan menggunakan etanol dingin dengan maksud agar kemurnian filtrate bertambah dan terbebas dari pengotor-pengotor yang tidak ingin diisolasi. termasuk kedalam kelompok glikosida O (molekul gula berikatan dengan O-aglikon).1 = 0.6 / 4.63 Nilai Rf untuk aglikon (kuersetin) 5. Karena sifatnya yang polar maka pengisolasian rutin dilakukan dengan penggunaan pelarut polar yaitu air. Glikosida flavonoid termasuk rutin merupakan salah satu metabolit sekunder yang bersifat polar. Hal ini merupakan salah satu kerugian penggunaan air sebagai pelarut karena. Pembahasan Pada praktikum kali ini adalah untuk mengisolasi rutin (flavonoid-3-glikosida) sebagai salah satu jenis glikosida flavonoid (glikosida flavonol) yang terkandung dalam daun singkong/ketela pohon. dengan penggunaan air yang kemudian dipanaskan membuat semua senyawa polar tertarik bersama filtrate. Sebagian dari endapan ditambahkan HCl untuk proses hidrolisis dimaksudkan agar glikosida flavonoid rutin terhidrolisis sehingga aglikon flavonoid (kuersetein) terpisah dengan molekul gulanya.Didapatkan Rf sebesar = 2. Rutin daun singkong (satu zat aktif) sebagai bahan obat-obatan dan kosmetik. Filtrate yang diperoleh diuapkan hingga didapat filtrate kental dan disimpan dalam lemari pendingin untuk mempercepat pembentukan kristal rutin dan mencegah terjadinya penjamuran. tetapi dengan pencucian ini tidak menyebabkan kristal larut. Karena dengan media air memungkinkan timbulnya jamur atau bakteri jika disimpan di suhu ruang. banyak sekali komponen-komponen polar yang dapat larut bersama air.

berdasarkan strukturnya dapat digolongkan menjadi flavonol. kuersetin mempunyai khasiat sebagai antiinflamasi. Maka seluruh senyawa kuersetin akan tertarik kedalam pelarut eter. eter digunakan karena memiliki kepolaran yang sama dengan aglikon flavonoid (kuersetin). larutan dipartisi dengan pelarut eter dengan menggunakan corong pisah. Setelah dihidrolisis. sehingga larutan benar-benar murni eter dan aglikon flavonoid. antikanker dan antioksidant. Seluruh fase eter yang dicampur disaring dengan tambahan Na sulfat anhidrat agar molekul air yang ada dalam eter dapat tertarik. Fase eter ini diuapkan dan selanjutnya residu yang ada ditambahkan methanol sebagai pelarut (sari II) untuk dilakukan KLT. ekstraksi dilakukan sebanyak 3 kali untuk memaksimalkan pengisolasian. Proses hidrolisis rutin menjadi kuersetin berjalan menurut reaksi berikut: HCl Hidrolisis + Rutin Kuersetin Glukosa .

Kesimpulan Rutin merupakan salah satu jenis glikosida flavonoid yang bersifat polar.027% (b/b).16%(b/b) dan secara gravimetri kadar rutin daun singkong muda adalah 0.71% (b/b).) muda.32%(b/b) dan daun singkong kuning tidak terdeteksi. . dan Rf yang dihasilkan dapat dibandingkan dan dapat terlihat proses hidrolisis berjalan dengan sempurna atau tidak.35%(b/b) dan daun singkong kuning 0. dibandingkan dengan senyawa non-polar ataupun semipolar. tetapi karena kedua spot terelusi maka hidrolisis yang dilakukan tidak berjalan dengan sempurna. Dan kristal rutin yang terbentuk sangat sedikit sekali. methanol atau etanol. Dengan digunakannya eluen yang bersifat polar maka senyawa polar akan terelusi lebih dulu dan memiliki Rf yang lebih tinggi. 6. ataupun ada pengotor lainnya yang terelusi dengan pelarut polar. Filtrate yang didapat dari hasil penyarian didinginkan untuk mempercepat pembentukan kristal. Pada penelitian sebelumnya terhadap pemeriksaan kadar rutin pada daun singkong (Manihot utilissima Pohl. Sari I dan sari II dilakukan pengujian dengan KLT menggunakan eluen etanol 96%. Telah dilakukan pula isolasi rutin dari daun singkong muda dengan cara maserasi dengan natrium hidroksida 1% dan rutin yang didapat dari maserasi ini adalah 0. Pada KLT ini yang diuji adalah senyawa polar yaitu glikosida flavonoid (rutin) dan senyawa non-polar yaitu aglikon glikosida (kuersetin). tua dan kuning.56% (b/b). dan tercampur dengan endapan lainnya. daun singkong tua 0. seperti air. daun singkong tua 0. Dari hasil KLT ini.Sisa endapan yang tidak dihidrolisis juga dilarutkan dengan methanol untuk selanjutnya di KLT bersama dengan sari II. hasil ini menunjukan adanya kuersetin yang sudah terpisah dari rutin. Pada praktikum kali ini digunakan daun singkong yang sudah agak tua sehingga kadar yang didapat tidak maksimal. Secara KLT-spektrofotodensitometri kadar rutin daun singkong muda adalah 0. kedua senyawa terelusi dan pada titik B ada senyawa yang tidak terelusi dan tetap berada pada dasar lempeng KLT. sehingga dapat diekstraksi dengan pelarut polar. Dan untuk terbentuknya kristal rutin dibutuhkan waktu yang sangat lama sekali kurang lebih selama 2 minggu.

dan menggunakan eluen tertentu sesuai dengan kepolaran senyawa yang dianalisa.R. J. 1988 . K. Metode Fitokimia penuntun cara modern menganalisis tumbuhan terbitan kedua.Pemisahan aglikon dan glikosidanya dapat dilakukan dengan hidrolisis asam. 1987. Markham. seperti menggunakan HCl. Analisa dari aglikon dan glikosida ini dapat dilakukan dengan menggunakan kromatografi lapis tipis. Akan didapat hasil berupa kuersetin dan glukosa dari hidrolisis rutin.B. Daftar Pustaka Harbone. Bandung: ITB. Bandung: ITB.Cara mengidentifikasi Flavonoid. .

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful