EKSTRAK BATANG KENANGA

SEBAGAI ANTI BISA ULAR KOBRA (Naja sputatrix)

November Rianto Aminu, Frederico Tika Putranto, Onesiforus Oniek D.A.

JAVANESE SNAKE (Naja sputatrix) ANTIVENOM

FROM CANANGA ODORATA STEM BARK EXTRACT
November Rianto Aminu, Frederico Tika Putranto, Onesiforus Oniek D.A.

ABSTRAK
Batang dan kulit kenanga diekstrak menggunakan metode maserasi dengan dua fraksi, yaitu fraksi etanol
dan etil asetat dengan tujuan menentukan fraksi yang efektif dalam penghambatan bisa ular menggunakan
metode phospholipase dan procoagulant activity. Protein dari bisa ular diukur dengan metode Lowry.
Protein diukur pada crude, fraksi 0 – 25%, 25 – 40%, 40 – 60%. Masing - masing fraksi kemudian diuji
dengan metode in vitro (procoagulant activity) untuk menentukan fraksi aktivasi dari protein bisa ular.
Pengaruh lemak pada ekstrak etanolik diperiksa karena ditemukan bahwa ekstrak memberikan hasil
negatif ketika lipid dipisahkan terlebih dahulu dari ekstrak (delipidisasi). Lipid yang diperoleh dipisahkan
berdasarkan fraksinya menjadi netrallipid, fospolipid, dan glikolipid. Setiap fraksi dicampur dengan fraksi
etanol dan kemudian diuji kembali dengan metode in vitro (procoagulant activity).

ABSTRACT
Stems and skins cananga odorata extracted using maceration method with two fractions, ethanol and ethyl
acetate, with the aim of determining the fraction that is effective in the inhibition of snake venom use
phospholipase and procoagulant activity methods. Proteins from snake venom was measured by Lowry
method. Protein was measured on crude, fraction 0-25%, 25-40%, 40-60%. Each fraction then tested with
the in vitro method (procoagulant activity) to determine the fraction of activation of snake venom
proteins. Effect of fat in the extract etanolic examined because it was found that the extract gave a
negative result when the lipid extract is separated first from (defatization). Lipid fractions obtained are
separated by a netrallipid, fospolipid, and glycolipid. Each fraction was mixed with ethanol fraction and
then tested again with the in vitro method (procoagulant activity).

PENDAHULUAN Binatang ini merupakan bahaya yang terkenal

Ular merupakan salah satu jenis binatang berbisa
yang berbahaya bagi manusia. Tidak kurang dari
5 juta penduduk di dunia terkena gigitan ular
setiap tahunnya (Ahmed, dkk. 2008). Bisa ular
diproduksi oleh kelenjar khusus dari sejumlah
spesies ular tertentu. Kelenjar yang
mensekresikan zootoksin merupakan modifikasi
kelenjar parotisvertebrata lain, dan bisanya
terletak di setiap sisi kepala di bawah dan di
belakang mata, terbungkus selubung otot. Bisa
ular merupakan gabungan sejumlah protein dan
enzim yang berbeda. Banyak dari protein itu
yang tak berbahaya bagi manusia, namun
beberapa protein beracun.
dikalangan para petani, pekerja perkebunan, dan
pekerja lapangan lainnya yang sering kali
menyebabkan kelumpuhan hingga kematian.
Pemanfaatan kekayaan alam berupa tanaman
obat-obatan dapat menjadi salah satu cara untuk
mengatasi keadaan tersebut. Kenanga (Cananga
odorata) adalah nama bunga dari pohon yang
memiliki nama yang sama. Bagian tanaman ini
yang paling terkenal adalah bunganya,
sedangkan bagian batangnya sendiri secara
umum belum banyak dimanfaatkan. Di
Kalimantan Tengah, pemanfaatan pohon
kenanga untuk menetralkan bisa ular dengan
menggunakan bagian dalam kulit pohon yang
masih segar, dikunyah, dan airnya ditelan oleh
orang yang tergigit ular. Kenanga (Cananga
odorata) adalah nama bunga dari pohon yang
memiliki nama yang sama (Anonim1. 2010.
Cananga odorata).
Ada dua jenis kenanga, yakni Cananga odorata
forma macrophylla, yang dikenal sebagai
kenanga biasa dan Cananga odorata forma
genuina atau kenanga filipina, yang juga disebut
ylang-ylang.
Pada percobaan kali ini peneliti akan menguji
apakah ada pengaruh dari ekstrak batang
kenanga terhadap aktifitas bisa ular dengan
metode procoagulant dan phosfolipase activity,
yang mana keduanya merupakan metode uji di
luar tubuh makhluk hidup (In Vitro).
BAHAN DAN METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan metode in vitro (di
luar makhluk hidup) yang terdapat pada India
Journal of Science and Technology (2009),
dengan modifikasi.
Preparasi Sampel
Bagian dalam kulit dan batang pohon kenanga
diekstrak dengan cara maserasi selama 24 jam
menggunakan 2 pelarut untuk masing-masing
bagian yang diteliti, yaitu etanol dan etil asetat.
Metode In Vitro
a. Procoagulant Activity
Darah lengkap EDTA dicentrifuge dengan
kecepatan 2000 rpm selama 10 menit untuk
memperoleh plasmanya. Plasma ini kemudian
dimasukan ke dalam 6 wadah yang kemudian
ditambahkan PBS pH 7,2. Wadah pertama
dijadikan sebagai indikator tidak terjadinya
penggumpalan pada plasma (+). Wadah kedua
dijadikan indikator (-) dengan menambahkan
bisa ular. Wadah ketiga hingga keenam masing-
masing ditambahkan dengan satu macam ekstrak
kemudian ditambahkan bisa ular. Keenam
wadah ini kemudian di inkubasi ke penyangga
air bersuhu 370C selama ± 5 menit, kemudian
wadah ketiga hingga keenam dibandingkan
dengan indikator.
b. Phospholipase Activity
Media uji dari argarose jel (0,8% dalam PBS pH
8,1) dibuat dengan menambahkan 1,2% darah,
1,2% kuning telur, dan 10 mmol CaCl2. Media
ini kemudian di buat sumur sebanyak 6 buah,
dimana sumur pertama ditambahkan dengan
saline sebagai indikator positif ( 0,9% larutan
NaCl) dan pada sumur ke 2 ditambahkan bisa
ular sebagai indikator negatif. Pada sumur ketiga
hingga keenam dimasukan campuran masing-
masing ektrak dengan bisa ular. Media ini
kemudian ditempatkan dalam inkubator besuhu
370C selama 3-4 jam. Amati yang terjadi pada
permukaan disekitar sumur dan bandingkan
dengan indikator.
Uji Aktivitas Protein Bisa Ular
a. Uji Protein Bisa Ular
Kadar protein bisa ular diuji dengan
metode Lowry.
b. Uji Aktivasi Crude Bisa Ular Dan
Fraksinya
Untuk mendapatkan berbagai fraksi
protein bisa ular maka dilakukan
fraksinasi pada berbagai konsentrasi
dengan (NH4)2SO4 sebagai pengendap
yaitu 0-25 %, 25-40%, 40-60%, dan 60-
80%. Fraksi-fraksi yang diperoleh
kemudian didialisis dan diuji dengan
metode in vitro.
Pengaruh Lipid Ekstrak Batang Kenanga
Ekstrak batang kenanga dipersiapkan dengan
metode soxlet dimana terlebih dahulu dilakukan
delipidisasi dengan hexan. Batang kenanga yang
telah mengalami delipidisasi kemudian
diekstraksi kembali dengan etanol. Ekstrak ini
kemudian diuji dengan metode in vitro. Lipida
dari batang kenanga dipisahkan menjadi normal
lipid, phospolipid, dan glikolipid dengan teknik
kromatografi kolom. Hasil dari pemisahan ini
masing-masing ditambahkan pada ekstrak etanol
batang kenanga, yang kemudian diuji kembali
dengan menggunakan metode in vitro.
HASIL
Preparasi Sampel
Tabel 1 Hasil ekstraksi 100 g bahan dengan
metode maserasi (b/b)
Batang(%)*
  Kulit (%)*
*
etanol 10.39 9.94
etil asetat 3.66 0.62
* = pelarut yang digunakan
Keterangan : sebesar 600 ml
** = pelarut yang
digunakan sebesar 650 ml
Metode In Vitro   Medium
a. Procoagulant Activity Saline +
Venom -
V+(K+E) -
V+(K+EA) -
V+(B+EA) -
(i) (ii) V+(B+E) +

Uji Aktivitas Protein Bisa Ular

Kurva standar :
(iii) (iv) y = 0.962x + 0.105
Gambar 1. Ekstrak Etanol Kulit (i), Ekstrak Etil Asetat
Kulit (ii), Ekstrak Etil Asetat Batang (i), Ekstrak Etanol R2 = 0.993
Batang (ii),
Batas bawah = 0.162
Tabel 2 Hasil Pengujian Metode
Procoagulant Activity Batas atas = 1.042
Panjang gelombang = 750
V+PBS(pH 7.2)
(K+E)+P - Tabel 4 Pengukuran kadar protein dalam
(K+EA)+P - bisa ular dengan metode Lowry
(B+E)+P +
(B+EA)+P -
Ulangan (absorbansi)
Keterangan: V = Venom Fraksi bisa
1 2 3
P = Plasma darah
K = Kulit
Crude* 0.181 0.182 0.188
B = Batang
E = Etanol 0 - 25** 0.204 0.204 0.204
EA = Etil Asetat
PBS = Phospate Base 25 - 40*** 0.446 0.446 0.446
Solution
- = tidak menghambat bisa 40 - 60**** 0.345 0.345 0.345
ular
+ = menghambat bisa ular 60 - 80** 0.199 0.199 0.199
b. Phospholipase Activity *= pengenceran
Keterangan : 1000x
**= tanpa
Saline
Venom pengenceran
***= pengenceran
20x
V+(K+E)
V+(K+EA) ****= pengenceran
10x
V+(B+EA) Berdasarkan data di atas diperoleh konsentarasi
V+(B+E) protein sebagai berikut:
Tabel 5 Konsentrasi Protein pada Berbagai
Gambar 2. Hasil Pengujian Phospholipase Activity
Fraksi Bisa Ular
Tabel 3 Hasil Percobaan Phospholipase Activity Fraksi (%) Konsentrasi (M)
 Crude 79.0021
0 – 25 0.1029
25 – 40 7.0894
40 – 60 2.4948
60 – 80 0.0977
Tabel 6 Hasil Uji Aktivasi Berbagai Fraksi Bisa
Ular dengan Metode Procoagulant Gambar 3.Anti bisa yang mengalami delipidisasi
25 - 40 – 60 - (pengujian hanya dilakukan pada darah lengkap).
  Crude 0 -25 40 60 80

PB - - - - -

S - - - - -

P + - + - -
PB= Pure
Keterangan: Blood Gambar 4. Penambahan netral lipid (dari kiri ke kanan :
darah lengkap, plasma darah, serum dimana pada bagian
S= Serum kana pada masing-masing gambar merupakan kontrol
negatif).
P= Plasma

Tabel 7 Massa masing-masing fraksi bisa ular (dari

2 ml bisa)

Fraksi (%) 0 – 25 25 – 40 40 – 60
Gambar 5. Penambahan Phosfolipid (dari kiri ke kanan :
Massa (x 10-3 g/l) 0.5 1.095 0.31 darah lengkap, plasma darah, serum dimana pada bagian
kana pada masing-masing gambar merupakan kontrol
Tabel 8 Lipid dari batang kenanga (32.69 gram) negatif).
Lemak Netral
Jenis lemak Kasar lipid
0.46
Jumlah (g) 0.65
(70.77%)
Phospolipi
Jenis Lemak Glikolipid
d
0.14 0.05 Gambar 6. Penambahan glikolipid (dari kiri ke kanan :
Jumlah (g) darah lengkap, plasma darah, serum dimana pada bagian
(21.54%) (7.69%)
kana pada masing-masing gambar merupakan kontrol
negatif).
Ekstrak etanol yang diperoleh setelah
delipidisasi sebesar 2.43% Tabel 9 Hasil Uji Procoagulant Activity pada
Berbagai fraksi Lipida yang Ditambahkan pada
Efek Penambahan Fraksi Lipida Terhadap Anti Bisa
Aktivitas Anti Bisa Ular yang Mengalami
Anti Bisa Hasil
Delipidisasi
Delipidisasi -
Delipidisasi + Netral Lipid -
Delipidisasi + Posfolipid +
Delipidisasi + Glikolipid +
PEMBAHASAN
Batang dan kulit kenanga diekstrak
menggunakan metode maserasi dengan dua
fraksi, yaitu fraksi etanol dan etil asetat dengan
tujuan menentukan fraksi yang efektif dalam
penghambatan bisa ular menggunakan metode
phospholipase dan procoagulant activity. Hasil
yang diperoleh menunjukkan bahwa fraksi
etanol dari batanglah yang efektif dalam
penghambatan aktivitas bisa ular.
Mekanisme kerja dari anti bisa ular ekstrak
batang kenanga berdasarkan percobaan yang
dilakukan adalah menghambat koagulasi pada
darah yang terkena bisa ular. Koagulasi pada
umumnya terjadi dikarenakan prothrombin,
yang tersekresi dalam plasma darah karena
stimulasi dari tromboplastin dan ion kalsium,
berubah menjadi thrombin dimana thrombin
akan mengubah fibrinogen menjadi benang-
benang fibrin pada saat terjadi luka.

Protein dari bisa ular diukur dengan metode Bisa ular mengandung enzim pengaktivasi
Lowry. Protein diukur pada crude, fraksi 0 – prothrombin (tabel 9) dimana enzim ini akan
25%, 25 – 40%, 40 – 60%. Konsentrasi terbesar mengaktifkan prothrombin secara berlebih yang
dari bisa ular didapatkan dari fraksi 25-40. menyebabkan penggumpalan darah menjadi
Masing - masing fraksi kemudian diuji dengan tidak terkendali sehingga pada akhirnya terjadi
metode in vitro (procoagulant activity) untuk penyumbatan aliran darah yang berujung pada
menentukan fraksi aktivasi dari protein bisa kematian. Enzim ini tebagi menjadi Grup A dan
ular. Berdasarkan hasil pengujian ditemukan B yang merupakan aktivator protrombin
bahwa fraksi aktif dari protein bisa ular ini yaitu metaloproteinase dan mengkonversi
pada fraksi 25 – 40%. Hal ini dikarenakan hanya prothrombin untuk meizothrombin (Rosing dan
pada fraksi tersebut dapat menggumpalkan Tans 1992) serta Grup C dan aktivator
plasma darah, sementara pada fraksi lainnya protrombin D adalah proteinase serin dan
tidak menggumpalkan darah. Berdasarkan kedua mengkonversi prothrombin untuk thrombin
data di atas dapat disimpulkan bahwa aktifitas (Kini, 2008). Anti bisa dari batang kenanga ini
protein pada bisa ular terjadi pada fraksi 25-40% berfungsi sebagai inhibitor enzim pengaktivasi
dimana konsentrasi protein pada fraksi tersebut prothrombin tersebut.
merupakan konsentrasi tertinggi dari semua Tabel 10 Kandungan dalam Bisa Ular
fraksi yang diteliti. Enzymes Phospholipase A2
(lecithinase), 5¢-nucleotidase,
Pengaruh lemak pada ekstrak etanolik diperiksa collagenase, L-amino acid
karena ditemukan bahwa ekstrak memberikan oxidase,
hasil negatif ketika lipid dipisahkan terlebih proteinases,hyaluronidase,
dahulu dari ekstrak (delipidisasi). Lipid yang acetylcholine esterase*,
diperoleh dipisahkan berdasarkan fraksinya phospholipase B*,
menjadi netrallipid, fospolipid, dan glikolipid. endopeptidase , kininogenase†,
†

Setiap fraksi dicampur dengan fraksi etanol dan Factor X†, prothrombin
kemudian diuji kembali dengan metode in vitro activating enzyme†
(procoagulant activity) menggunakan Nonenzyme Polysynaptic (a) neurotoxin
perbandingan antara bisa ular fraksi 25 – 40% polypeptides (α- bungarotoxin and
dan anti bisa 1 : 4. Hasil pengujian menunjukan cobrotoxin), presynaptic (b)
fraksi fospolipid dan glikolipid memberikan neurotoxin (β- bungarotoxin,
hasil positif menghambat aktivitas bisa ular. crotoxin, and taipoxin)
cardiotoxin, crotamine
Pengujian terhadap fraksi – fraksi lipid tanpa Peptides Pyroglutamylpeptide
ditambahkan ekstrak etanolik dari batang Nucleosides Adenosine, guanosine, inosine
kenanga masih belum dilakukan. Pengaruh Lipids Phospholipids, cholesterol
lipida terhadap penghambatan bisa ular sendiri
Amines Histamine, serotonin, spermin
masih belum diketahui serta memerlukan
penelitian lebih lanjut. Metals Copper, zinc, sodium,
magnesium
*
In Elapids
†
In Vipers
Sumber : J Emerg Trauma Shock. 2008 Jul–Dec;
1(2): 97–105.

DAFTAR PUSTAKA

Ahmed, Syed Moied. 2008. Emergency

treatment of a snake bite: Pearls from
literature, Journal of Emergencies,
Trauma and Shock.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articl
es/PMC2700615/.
Anonim1. 2010. Cananga odorata.
tnalaspurwo.org/media/pdf/kea_canangi
um_odoratum.pdf
Kini,Manjunatha. 2008. Snake Venom
Prothrombin Activators Similar to
Blood Coagulant Factors.
http://www.scitopics.com/Snake_Veno
m_Prothrombin_Activators_Similar_to_
Blood_Coagulant_Factors.html
Meenatchisundaram, S. 2009. Indian Journal of
Science and Technology : Studies on
antivenom activity of Andrographis
paniculata and Aristolochia indica plant
extracts against Daboia russelli venom
by in vivo and in vitro methods.
http://indjst.org/archive/vol.2.issue.4/apr
09meenatchi.pdf
Rosing,J. and G.Tans. 1991. "Inventory of
exogenous prothrombin activators. For
the Subcommittee on Nomenclature of
Exogenous Hemostatic Factors of the
Scientific and Standardization
Committee of the International Society
on Thrombosis and Haemostasis. "
Thromb.Haemost. 65:627-630.