Óleo essencial de citronela no controle da bactéria fitopatogênica

Erwinia carotovora
Ciely Melo Guedes Rodrigues Costa1, Michele da Silva Santos2, Helder Morais Mendes Barros2
Pollyanna Freire Montenegro Agra1 e Maria Arlene de Araújo Farias1

2
Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal da Paraíba, Areia, PB.
3
Universidade Federal de Campina Grande, UAEAG/CTRN/UFCG, Campina Grande, PB. E-mail: micheleagricola@yahoo.com.br,
hmmbbr@yahoo.com.br

Resumo - O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da atividade antibacteriana do óleo de citronela no controle da
bactéria Erwinia carotovora, agente causador da podridão mole e responsável por diversas doenças bacterianas no Nordeste
do Brasil. O experimento foi realizado no Laboratório de Microbiologia do Centro de Ciências Agrárias da Universidade
Federal da Paraíba, em Areia, PB, Brasil. Os isolados de bactéria foram obtidos de plantas de alface (Lactuca sativa L.) e
repolho (Brassica oleraceae var. capitata) infectadas com sintomas de podridão mole. O óleo essencial foi preparado nas
concentrações de 0,25; 0,5; 1,0; 2,0; 4,0 e 8,0%. O controle da atividade antimicrobiana dos óleos essenciais foi testado com
tetraciclina, na concentração de 30 µL/mL. O óleo de citronela utilizado puro foi eficiente contra todos os isolados de E.
carotovora, com halos de inibição variando entre 25 e 35 mm, superando o tratamento com tetraciclina (controle), com
halos entre 18 e 25 mm. A concentração inibitória mínima (CIM) do óleo a 1% apresentou alta eficiência sobre a bactéria
Erwinia carotovora.

Palavras-chave: Cymbopogon winterianus, alface, repolho, podridão mole, bactericida natural, halos de inibição

Essential oil of citronella in the control of the phytopathogenic bacterium

Erwinia carotovora
Abstract – The objective of this work was to evaluate the antibacterial activity of the citronella (Cymbopogon winterianus
Jowitt) oil in the control of the bacterium Erwinia carotovora, agent causer of the soft rottenness and responsible for several
bacterial diseases in the Northeast of Brazil. The experiment was carried out at the Laboratory of Microbiology of the Center
of Agrarian Sciences of the Federal University of Paraiba, in Areia, PB, Brazil. The isolated of bacterium were obtained of
plants of lettuce (Lactuca sativa L.) and cabbage (Brassica oleraceae var. capitata) infected with symptoms of soft
rottenness. The essential oil was prepared in concentrations of 0.25; 0.5; 1.0; 2.0; 4.0 and 8.0%. The control of the
antimicrobial activity of the essential oils was tested with tetracycline, in the concentration of 30 µL/mL. The citronella oil
used pure was efficient against all the isolated ones of E. carotovora, with inhibition halos varying between 25 and 35 mm,
overcoming the treatment with tetracycline (control), with halos between 18 and 25 mm. The minimum inhibition
concentration (MIC) of the oil to 1% presented high efficiency on the bacterium Erwinia carotovora.

Keywords: Cymbopogon winterianus, lettuce, cabbage, soft rottenness, bactericide natural, inhibition halos

INTRODUÇÃO devido ao desbalanço nutricional ou Estudos sobre o potencial das

A bactéria Erwinia carotovora ou
pectinolítica ocorre com freqüência em
condições ambientais de alta
temperatura e umidade, sendo
responsável por uma série de doenças
bacterianas na Região Nordeste do
Brasil, onde as condições para seu
desenvolvimento são muito favoráveis
(Lopes & Querazo-Soares, 1997).
Geralmente, a penetração da bactéria se
dá por meio de ferimentos, aberturas
naturais, ou provocadas por insetos,
ventos e equipamentos agrícolas.
Tecidos debilitados fisiologicamente
fitotoxidez por agrotóxicos são mais
propensos ao ataque dessa bactéria. Os
sintomas são, inicialmente, a murcha da
planta e, posteriormente, a podridão
mole em sua base, quando os tecidos
tomam uma coloração verde escura a
negra (Zanbolim et al., 1997).
Para reduzir os prejuízos que
ocorrem pelo aparecimento das
podridões moles, nas hortaliças,
normalmente oriundas do campo é
recomendado o emprego de
bactericidas naturais por não deixarem
resíduos tóxicos a essas hortaliças
(Wilson et al.,1997).
espécies vegetais, visando obter óleos
essenciais para uso na agricultura,
como inseticidas botânicos, vêm
despertando o interesse dos
pesquisadores e agricultores. Esses
óleos devem ser utilizados como um
método de controle eficaz, com
redução dos custos, preservação do
ambiente e dos alimentos da
contaminação química, tornando-se
prática adequada à agricultura
sustentável (Ketoh et al., 2002). Assim,
métodos de controle vêm sendo
pesquisados, dentre os quais pode ser
destacado o uso de produtos

Tecnol. & Ciên. Agropec., João Pessoa, v.2., n.2, p.11-14, jun. 2008 11
alternativos, como: pós, extratos
botânicos e óleos essenciais de origem
vegetal.
A citronela é uma planta aromática
parecida com a capim-cidreira, sendo
conhecida por ser retirado de suas
folhas um óleo com propriedades
repelentes, tendo como constituintes
principais mais de 80 componentes,
entre eles: citronelal, geraniol,
limonemo. Os teores de óleo essencial
na matéria seca e na matéria fresca são
1,4% e 0,84%, respectivamente.
Segundo Ketoh et al. (2002), o óleo
essencial de C. martinii contém 70 a
90% de geraniol.
Levando-se em conta as poucas
informações existentes sobre a ação do
óleo essencial de citronela como agente
bactericida fitopatogênico e
considerando a importância da bactéria
Erwinia carotovora, agente causador
da podridão mole, o presente trabalho
teve como objetivo estudar os efeitos
inibitórios do óleo essencial de
Cymbopogon winterianus Jowitt
(citronela) comparado com antibiótico
Tetraciclina sobre o desenvolvimento
dessa bactéria in vitro, isolada a partir
de plantas infectadas de Lactuca sativa
L. (alface) e de Brassica oleraceae var.
capitata (repolho).
MATERIAL E MÉTODOS
imediatamente com a finalidade de de cultura BDA, permitindo a
cultivo e isolamento. Para se proceder apreciação do formato das células
aos isolamentos dessa bactéria a partir bacterianas e sua motilidade. As
do material doente, seguiram-se reações tintoriais foram determinadas
técnicas rotineiras de laboratório. O pelo método de gram.
ensaio foi incubado a 28 ºC ,durante 48 As características bioquímicas
horas, para o crescimento do foram verificadas por meio da
microorganismo. As colônias crescidas assimilação dos carboidratos como a
e com características de bactérias foram celulose e maltose, a liquefação da
isoladas e mantidas a 4 ºC para gelatina, produção de indol e a
posterior identificação. produção de gás a partir de glucose.
Para o reconhecimento de cada Os componentes utilizados no meio
isolado, usou-se uma codificação com de cultura foram dissolvidos em banho
letras e algarismos, indicando o Maria, agitando-se a mistura
patógeno, o hospedeiro e a localidade vagarosamente com bastão de vidro. O
(Tabela 1). Para cada isolado foram pH foi ajustado para 7, o meio foi
distribuído em tubos de ensaios
realizadas quatro repetições.
utilizando-se um volume de 5 mL que,
Os caracteres morfofisiológicos,
culturais e tintoriais foram observados em seguida, foram autoclavados a 120
a partir de isolados crescidos no meio ºC, durante 20 minutos.
Tabela 1. Isolados de bactéria Erwinia carotovora utilizados nos ensaios.
Codificação do
Hospedeiro Localidade
isolado de bactéria
Areia
EAAR1 Lactuca sativa (Alface)
Lagoa Seca
EALS2 Lactuca sativa (Alface)
Bananeiras
EABN3 Lactuca sativa (Alface)
Areia
ERAR1 Brassica oleraceae (Repolho)
Lagoa Seca
ERLS2 Brassica oleraceae (Repolho)
ERBN3 Brassica oleraceae (Repolho) Bananeiras

A pesquisa foi conduzida no
Laboratório de Microbiologia do
Departamento de Fitotecnia, Setor de
Fitossanidade, do Centro de Ciências
Agrárias da Universidade Federal da
Paraíba, em Areia, PB, Brasil.
Os isolados da bactéria utilizados
nos ensaios foram obtidos a partir de
plantas infectadas com sintomas de
podridão mole de Brassica oleraceae
var. capitata (repolho) e de Lactuca
sativa (alface), em propriedades
agrícolas dos municípios de Areia,
Bananeiras e Lagoa Seca, PB.
O patógeno foi a bactéria
fitopatogênica Erwinia carotovora, que
se encontra associada freqüentemente
às hortaliças. O material infectado
chegado ao laboratório com sinais da
doença podridão mole foi processado
Foi semeada a amostra do
microrganismo alvo e incubado à
temperatura de 36 a 37 ºC, utilizando
um tubo controle, sem inoculação
(testemunha). Após o crescimento do
microrganismo, foram colocados todos
os cultivos em refrigeração até a
solidificação: teste positivo (presença
da bactéria): meio liquefeito, teste
negativo (ausência da bactéria): meio
não liquefeito.
Foi selecionado o óleo essencial
oriundo da espécie Cymbopogon
winterianus Jowitt (citronela), o qual
foi adquirido em casa especializada de
venda de produtos naturais, na cidade
de Recife, PE.
O óleo essencial foi preparado nas
concentrações 0,25; 0,50; 1,00; 2,00;
4,00 e 8,00%, de acordo com a técnica
de Allegrini et al. (1973). Em tubos de
ensaios estéreis de 70 x 10 mm foi
repassado 0,4 mL do óleo, uma gota de
Tween 80 e quantidade suficiente de
água destilada estéril (ADE) para um
volume final de 5 mL, tudo
homogeneizado por cinco minutos e,
em seguida, as diluições foram feitas
seriadas à razão 2.
Do primeiro tubo foram repassados
2,5 mL para o segundo, o qual já
continha 2,5 mL de água destilada
estéril, sempre acompanhando a
agitação e homogeneização e, assim,
sucessivamente, até a obtenção da
última diluição.
O controle da avaliação das
atividades antimicrobianas dos óleos
essenciais foi testado com tetraciclina
(Sensidisco. CECON/SP), na
concentração de 30 µ L/mL.

12 Tecnol. & Ciên. Agropec., João Pessoa, v.2, n.2, p.11-14, jun. 2008
RESULTADOS E DISCUSSÃO
As características morfológicas,
fisiológicas e tintoriais dos isolados
bacterianos de Lactuca sativa (alface) e
Brassica oleraceae var. capitata
(repolho) estão relatadas na Tabela 2
comparativamente com os caracteres
expressos para Erwinia carotovora
registrados no Bergey's Manual of
Determinative Bacteriology (Krieg &
Holt, 1984).
Todas as características que foram
apresentadas nesta Tabela, como:
exigências a fatores de crescimento,
podridão mole, coloração de gram (-)
negativa, liquefação da gelatina (+)
positiva, a produção de gás a partir da
glucose, a produção de indol, utilização
de celobiose e a utilização da maltose
coincidiram com as referências do
Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology, segundo Krieg & Holt
(1984), com exceção da característica
crescimento a 36-37 ºC que apresentou
sinal negativo.
Quanto à morfologia, verificou-se
que Erwinia carotovora caracteriza-se
como sendo bastonetes retos, medindo
de 0,5-1,0 x 1,0-3,0 micra; são móveis
por meio de flagelos peritriquios e por
apresentarem-se como anaeróbios
facultativos. Estas verificações
coincidem com os referenciais da 8ª
edição do Manual de Bergey (Krieg &
Holt, 1984), que descreve espécies do
gênero Erwinia como sendo bastonetes
retos, medindo 0,5-1,0 x 1,0-3,0 micra,
móveis por meio de flagelos
peritriquios, gram-negativas,
anaeróbias facultativas, catalase
positiva, geralmente associados como
patógenos de plantas.
Na Tabela 3, verifica-se que o óleo
de Cymbopogon winterianus
(citronela) quando utilizado puro
mostrou-se eficiente contra todos os
isolados de E. carotovora testados
(EAAR1, EALS2, EABN3, ERAR1,
ERLS2, ERBN3), com halos de
inibição variando entre 25 e 35 mm,
suplantando o tratamento controle com
a Tetraciclina, cujos halos foram entre
18 e 25 mm. Resultados concordantes
com os do presente estudo foram
obtidos por diversos pesquisadores.
Tabela 2. Características morfológicas, fisiológicas e tintoriais de isolados de
Erwinia carotovora patogênica à Lactuca sativa (alface) e Barssica oleraceae var.
capitata (repolho), comparativamente aos referenciais registrados no Bergey's
Manual of Determinative Bacteriology (Krieg & Holt, 1984).
Características dos isolados Referencial de E. carotovora
Exigências a fatores de crescimento ...... + Exigências a fatores de crescimento ...... +
Podridão mole ...................................... + Podridão mole ...................................... +
Coloração de gram ................................. - Coloração de gram .................................. -
Liquefação da gelatina ........................ + Liquefação da gelatina ........................ +
Produção de gás a partir de glucose ...... - Produção de gás a partir de glucose ...... -
Produção de indol ................................ - Produção de indol ................................ -
Crescimento a 36-37 ºC ......................... - Crescimento a 36-37 ºC ......................... +
Utilização de celobiose ......................... + Utilização de celobiose .......................... +
Utilização de maltose .............................. - Utilização de maltose .............................. -
Tabela 3. Diâmetros médios dos halos de inibição (mm) do óleo essencial de
citronela utilizado puro e da Tetraciclina sobre E. Carotovora.
Isolados de E. carotovora
Tratamentos
EAAR1 EALS2 EABN3 ERAR1 ERLS2 ERBN3
Cymbopogon winterianus 35 28 29 33 27 25
Tetraciclina (Testemunha) 25 22 20
18 20 24
Pattnaik et al. (1996) trabalhando fitoconstituinte denominado de
com óleos essenciais de C. winterianus, terpineno que é responsável pelo
C. flexuosus e C. martini e mais outros antagonismo de Erwinia amylovora,
sete óleos contra 22 espécies de uma bactéria não pectinolítica
bactérias e 12 espécies de fungos fitopatogênica.
verificaram que C. winterianus O óleo essencial foi analisado puro
mostrou-se eficiente contra quinze para avaliar suas atividades
espécies bacterianas e dentre os fungos antimicrobianas sobre os isolados de
citam-se alguns fitopatogênicos. Erwinia carotovora. Pelos dados da
Dikshit & Husain (1984) pesquisaram o Tabela 4, constata-se que o óleo de C.
óleo essencial de C. winterianus winterianus (citronela) na
extraído das folhas, onde foi verificado concentração de 1% foi ativo sobre
sua eficácia na concentração de 400 todos os isolados de E. carotovora, com
ppm sobre fungos patogênicos ao valores médios dos halos de inibição
homem e aos animais. Esse mesmo óleo entre 10 e 12 mm de diâmetro. A
obtido de folhas numa concentração de concentração inibitória mínima (CIM)
0,25 µL microlitro apresentou atividade desse óleo essencial, também se
sobre Entamoeba histolitica, conforme mostrou eficiente contra todos os
De-blasi et al. (1990). isolados em níveis de 1%.
Begum et al. (1993) também Deste modo, fica evidenciado a
verificaram que óleo de C. winterianus importância do óleo de C. winterianus
inibe o crescimento de vários fungos no controle de Erwinia carotovora em
fitopatogênicos, concordando com os Brassica oleraceae var. capitata
resultados deste estudo. Scortichini & (repolho) e em Lactuca sativa (alface),
Rossi (1991) comprovaram que o óleo bem como de outros agentes
de C. winterianus possui um fitopatogênicos.
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Tabela 4. Diâmetros médios dos halos de inibição da CIM (Concentração bruchid Callosobruchus maculates
Inibitória Mínima) do óleo essencial de C. winterianus (citronela) sobre E. (Coleoptera: Bruchidae) and its parasitoid
carotovora. Dinarmus basalis (Hymenoptera
:Pteromalidae) to three essential oils.
Journal of Economic Entomology, v. 95,
Óleo essencial Isolados de E. carotovora n. 1, p.174-184, 2002.
de citronela (%) EAAR1 EALS2 EABN3 ERAR1 ERLS2 ERBN3
KRIEG, N. R.; HOLT, J. G. E. Bergey's
8,0 22 18 20 22 20 22 manual of systematic bacteriology.
4,0 16 16 14 16 16 14 Baltimore: Williams & Wilkins, 1984. v. 2.
2,0 14 12 14 14 14 14 p.1104-1207.
1,0 12 12 10 12 12 10
0,5 0 0 0 0 0 0 LOPES, C. A.; QUERAZO-SOARES, A.
0,25 M. Doenças bacterianas de hortaliças.
0 0 0 0 0 0
Brasília, DF: EMBRAPA-CNPH, 1997.

PATTNAIK, S.; SUBRAMANYAN, V. R.;

CONCLUSÕES
Os resultados obtidos no presente
trabalho permitiram concluir que:
O óleo essencial de citronela
proporciona maior efeito no controle de
Erwinia carotovora, com halos de
inibição maiores do que a Tetraciclina.
A concentração inibitória mínima do
óleo essencial de citronela a 1%
apresenta alta eficiência sobre essa
bactéria.
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Recebido em fevereiro de 2008 e aprovado em maio de 2008

14 Tecnol. & Ciên. Agropec., João Pessoa, v.2, n.2, p.11-14, jun. 2008