Akta Kimindo Vol. 1 No.

2 April 2006: 99-104 AKTA KIMIA

INDONESIA

Model Fermentasi Lovastatin*

Tigor Nauli**1 dan Linar Z. Udin2

1Pusat Penelitian Informatika - LIPI, Jalan Cisitu, Bandung 40135

2Pusat Penelitian Kimia - LIPI, Jalan Cisitu, Bandung 40135

ABSTRAK
Lovastatin adalah suatu ‘pro-drug’, yang memiliki arti penting secara medis sebagai zat penurun
kadar kolesterol darah dan diindikasikan berguna untuk mengurangi resiko arteriosklerosis. Biosintesis
lovastatin dapat dilakukan melalui fermentasi cair terhadap jamur Aspergillus terreus dengan tersedianya
sumber karbon yang cukup dan kondisi proses yang terjaga pada agitasi 150 rpm dan suhu 28 oC. Produk
dipanen setelah 6 hari fermentasi dan selanjutnya diekstraksi untuk memperoleh lovastatin murni. Profil
pertumbuhan sel Aspergillus terreus selama waktu fermentasi dapat dinyatakan sebagai
d [Sel ] [Sel ]
= k1 × [Sel ] × (1.0 − )
dt k2
dimana k1 adalah 0.09 untuk tahap awal pertumbuhan hingga tahap stasioner, dan k1 adalah -0.058 untuk
tahap kematian sel. Sedangkan nilai k2 untuk semua tahapan adalah 61.57. Dengan menggunakan lima
konsentrasi tepung jagung sebagai sumber karbon, maka laju produksi lovastatin akan mengikuti model
pembentukan
d [Lovastatin ]
= k 3 × [Sel ] + k 4 × [Lovastatin ]
dt
dimana k3 adalah 0.01, 0.06, 0.037, 0.024, dan 0.024 untuk berturut-turut 2.5 %, 5 %, 7.5 %, 10 %, dan
12.5 % tepung jagung. Nilai tetapan kinetika k4 adalah sama untuk semua konsentrasi, yaitu sebesar
0.027. Dalam lingkupan kondisi proses fermentasi yang diteliti, kadar lovastatin tertinggi sebesar 2808 g/L
media dicapai pada penggunaan 5 % tepung jagung. Optimalisasi perolehan lovastatin ini lebih lanjut dapat
diupayakan dengan memanfaatkan model kinetika proses yang telah didapatkan.
Kata kunci: fermentasi, laju reaksi, lovastatin, model kinetika

ABSTRACT
Lovastatin is a pro-drug for reduction of plasma cholesterol. It was indicated as an agent for
preventing arteriosclerosis risk in human. Lovastatin is biosynthetically produced from a liquid fermentation
of Aspergillus terreus with sufficient amount of C-source in a controlled condition of 150 rpm agitation and
28 0C temperature. Product was harvested after 6 days of fermentation and followed by an extraction to
obtain the pure lovastatin.

The cell growth of Aspergillus terreus during the fermentation period can be expressed as

d [ Sel ] [ Sel ]
= k1 × [ Sel ] × (1.0 − )
dt k2
where k1 is 0.09 for the beginning until the stationary phase and k1 is -0.058 for the cell death phase. The
value of k2 is 61.57 for all phases.

* Makalah ini disajikan pada Seminar Nasional Kimia VII,

di Surabaya 9 Agustus 2005
** Corresponding author Phone : (022) 2504711, Fax.:

(022) 2504712; e-mail: tigor@lipi.go.id

© Kimia ITS – HKI Jatim 99


By introducing five different concentrations of cornstarch as the C-source, the biosynthesis of lovastatin can
be modeled as
d [ Lovastatin]
= k 3 × [ Sel ] + k 4 × [ Lovastatin]
dt
where k3 are 0.01, 0.06, 0.037, 0.024 and 0.024 for 2.5 %, 5 %, 7.5 %, 10 %, and 12.5 % cornstarch,
respectively. The kinetic constant k4 is 0.027 for all cornstarch concentrations.
The highest production of lovastatin for 2808 g/L medium was discovered in the usage of 5 % cornstarch.
The optimum product recovery of lovastatin can be found by applying these kinetic models.
PENDAHULUAN
Lovastatin adalah suatu pro-drug, yang di
dalam tubuh akan segera terhidrolisis
menghasilkan suatu senyawa yang dapat
menghambat bersaing kerja dari HMG-CoA
reduktase, yaitu sebuah enzim yang
mengkatalisis perubahan HMG-CoA menjadi
mevalonat, yang merupakan sebuah tahap
penting dalam biosintesis kolesterol. Hambatan
enzim ini meningkatkan densitas reseptor LDL
dalam sel hati sehingga terjadi penurunan LDL-
kolesterol. Aktivitas lovastatin ini memiliki arti
penting secara medis sebagai obat anti
hiperkolesterol-emia [Hardmann, et al., 1996] dan
diindikasikan dapat menurunkan resiko
arteriosklerosis [Cottingham, 1998].
Biosintesis Lovastatin
Lovastatin telah diketahui dapat diturunkan
dari asetat melalui lintas poliketida [Moore,
1985]. Biosintesis poliketida di dalam bakteri dan
jamur adalah berkaitan dengan metabolisme
asam lemak meski memiliki perbedaan dimana
beberapa reaksi reduksi atau dehidrasi yang
dikatalisa oleh poliketida sintase (PKS) akan
ditekan pada tahap biosintesis tertentu. Substrat-
substrat selain asetil-CoA dan malonil-CoA dapat
digunakan oleh PKS untuk menyusun suatu rantai
karbon. Dengan menggabungkan produk
metabolisme asam lemak dan modifikasi PKS
maka dimungkinkan diperolehnya berbagai
macam metabolit sekunder yang bersifat biologis
aktif [O’Hagan, 1991].
Aspergillus terreus merupakan salah satu
jamur PKS yang diharapkan dapat menghasilkan
salah satu metabolit sekunder poliketida, yaitu:
Lovastatin. Aspergillus terreus mengalami
metabolisme sekunder ketika sumber makanan
dalam media telah berkurang akibat digunakan
untuk metabolisme primer. Sumber makanan
yang tersisa di dalam media akan digunakan oleh
Aspergillus terreus untuk melakukan
metabolisme sekunder tersebut. Hasil dari
metabolisme sekunder ini disebut sebagai
metabolit sekunder
Proses pembentukan metabolit sekunder
dapat dilakukan dengan cara fermentasi
menggunakan metode batch dengan sistem
terendam, dimana kultur Aspergillus terreus
100
Nauli dan Udin-Model Fermentasi Lovastatin
berada di bawah permukaan media. Melalui cara
ini maka jenis dan konsentrasi komponen dalam
media cair dapat diatur agar mencapai kondisi
optimum pertumbuhan dan pemakaian media
yang lebih efisien. Sehingga akan dapat dicapai
perolehan produk metabolit sekunder yang
maksimum.
Pada proses fermentasi, Aspergillus terreus
memerlukan sumber karbon sebagai sumber
nutrisi untuk dapat tumbuh dan melakukan
metabolisme. Sumber ini dapat diperoleh dari
senyawa yang mengandung karbohidrat (atau
senyawa gula), seperti misalnya glukosa, laktosa,
gliserol, dan tepung dalam berbagai konsentrasi.
Model Fermentasi
Kinetika proses fermentasi dapat dimodelkan
sebagai ekspresi laju reaksi dalam bentuk
persamaan diferensial biasa (ordinary differential
equation). Secara umum, proses batch fermentasi
tersebut dapat diwakili oleh laju pertumbuhan sel
dan laju pembentukan metabolit sekunder.
Ekspresi laju reaksi yang dicocokan
(mathematical fiting) terhadap data percobaan
dapat dicarikan solusinya dengan menggunakan
metoda analisis regresi tak linier (non linear
regression analysis).
Model fermentasi yang terdiri dari sejumlah
persamaan diferensial dapat ditunjukkan dalam
bentuk
Y ′ = g ( x ,Y , b) (1)
dimana Y′ = vektor turunan dari Y, g = vektor dari
fungsi, x = variabel bebas, Y = vektor dari variabel
tak bebas, dan b = vektor dari parameter. Solusi
terhadap model adalah mencari nilai parameter b
dari persamaan diferensial tersebut
[Constantinides, 1987].
Jika kondisi batas dapat terpenuhi dan jika
vektor b dapat diperkirakan, maka persamaan
diferensial (1) dapat diintegrasikan secara
numerik atau analitik menjadi
Y = f ( x , b) (2)
Jumlah kuadrat residu, Φ, diberikan oleh
persamaan
Φ = (Y * − Y − AΔb)T (Y * − Y − AΔb) (3)
© Kimia ITS – HKI Jatim
Akta Kimindo Vol. 1 No. 2 Oktober 2005: 99-104
dimana Y* = vektor dari variabel tak bebas hasil
pengamatan percobaan, A = matriks Jacobi dari
turunan parsial Y terhadap b yang dihitung
terhadap semua titik pengamatan percobaan.
Dengan mengambil turunan parsial Φ terhadap
Δb dan membuat ruas persamaan menjadi nol,
dan Δb diselesaikan, maka diperoleh
Δb = ( AT A) −1 AT (Y * − Y ) (4)
dimana Δb = vektor koreksi yang digunakan untuk
memperkirakan nilai b dalam pendekatan vektor
parameter yang baru
bbaru = blama + Δb (5)
Metoda Gauss-Newton digunakan untuk
melakukan iterasi terhadap persamaan (5)
dengan setiap kali memasukan nilai Δb dari
persamaan (4) yang dihitung dari data percobaan,
sehingga berakhir pada saat Φ tidak berubah lagi
atau Δb menjadi sangat kecil. Pada akhir iterasi
tersebut, maka bbaru adalah vektor parameter
yang dicari.
Dalam penelitian ini akan dilakukan
biosintesis lovastatin melalui fermentasi cair
terhadap jamur Aspergillus terreus.
Serta akan ditentukan model kinetika
pertumbuhan sel dan pembentukan metabolit
sekundernya.
BAHAN DAN METODE
Mikroorganisme
Jamur Aspergillus terreus ATCC 20542 yang
digunakan dalam percobaan, diperoleh dari
koleksi Pusat Penelitian Kimia - LIPI.
Media Fermentasi
Media fermentasi cair steril terdiri dari laktosa
9 g; pepton 0.6 g; corn steep liquor 1 g; gliserol 3
g; susu skim 0.42 g; tepung jagung (dalam
beberapa konsentrasi) dan aquades. pH media
diatur sebesar 6.8 dengan penambahan NaOH
1.125 N atau HCl 25 %, lalu media disterilisasi
pada 121 °C selama 15 menit.
Fermentasi Aspergillus terreus
Produksi metabolit sekunder dari Aspergillus
terreus dilakukan melalui metode fermentasi
kultur curah atau media cair dengan melakukan
peragaman konsentrasi tepung jagung yaitu 2.5,
5, 7.5, 10, dan 12.5 %. Inokulum 10 % dengan
usia 30 jam diinokulasikan ke dalam tabung
Erlenmeyer 500 mL yang berisi 100 mL media
fermentasi cair steril. Biakan dikocok dengan
pengocok orbital kecepatan 150 rpm, suhu 28 °C
selama 144 jam (atau 6 hari).
Ekstraksi Hasil Fermentasi
Hasil fermentasi disentrifugasi dengan
kecepatan 2500 rpm, suhu 4 °C, selama 20
© Kimia ITS – HKI Jatim
menit. Filtrat dipisahkan dari endapannya dan
diekstraksi 2 kali dengan heksana (perbandingan
volume 1 : 1) menggunakan corong pisah, agar
bersih dari pengotor minyak. Fasa air dipisahkan
dan diekstraksi dengan pelarut etil asetat dengan
menggunakan dua metoda pemisahan. Fraksi
akhir etil asetat kemudian dipisahkan dan
dievaporasi. Ekstraknya disimpan dalam botol
sampel dan dibiarkan mengering pada suhu
kamar, untuk selanjutnya diukur kadar produk
(lovastatin) nya dengan HPLC.
Analisa Kualitatif Lovastatin
Analisa kualitatif terhadap ada/tidaknya
lovastatin dilakukan dengan cara
membandingkan waktu retensi puncak yang
muncul pada kromatogram dengan waktu retensi
lovastatin standar, menggunakan TLC. Rf sampel
hasil ekstraksi dan kristal putih dibandingkan
dengan Rf standar lovastatin (SIGMA).
Penentuan Kadar Lovastatin
Penentuan kadar lovastatin dilakukan dengan
menggunakan HPLC, pada kolom C18, fase gerak
metanol : air (9 : 1), panjang gelombang (λ) 254
nm, dan flow/pressure 1/88 kg cm m-1, terhadap
ekstrak hasil pemisahan dengan etil asetat. Kadar
lovastatin diperoleh dengan membandingkan luas
area lovastatin sampel dengan luas area
lovastatin standar, yaitu:
Csampel = (Lsampel / Lstandar) x Cstandar.
Kinetika Fermentasi
Ditetapkan model pertumbuhan sel Aspergillus
terreus dan model pembentukan lovastatin dalam
bentuk persamaan-persamaan laju reaksi. Solusi
terhadap kedua persamaan simultan ini dicari
dengan menggunakan analisis regresi tak linier
berganda (multiple non-linear regression)
terhadap data percobaan dengan memasukan
hasil fermentasi sebagai variabel tak bebas dan
waktu fermentasi sebagai variabel bebasnya.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan sel Aspergillus terreus
Ketika mikroorganisme Aspergillus terreus
tumbuh di dalam fermentor dalam kondisi yang
terjaga, maka sel akan bertambah dengan laju
yang dapat dimodelkan sesuai kaidah logistik,
yaitu:
dy1 y
= k1y1 (1.0 − 1 ) (6)
dt k2
dimana y1 adalah konsentrasi (atau banyaknya)
sel dalam satuan gram berat kering atau satuan
kekeruhan larutan.
Selama masa fermentasi berlangsung,
perubahan konsentrasi sel yang diamati pada
setiap 6 jam sekali, memberikan profil
pertumbuhan seperti yang terdapat pada
101
 Nauli dan Udin-Model Fermentasi Lovastatin

Gambar 1. Profil yang ditunjukkan oleh percobaan Pembentukan Metaboliut Sekunder Lovastatin
ini merupakan model normal yang umum terjadi Laju pembentukan metabolit sekunder
pada suatu pertumbuhan sel. Disana terlihat lovastatin secara matematis dapat dikuantifikasi
dengan jelas adanya fasa awal pertumbuhan (6 melalui persamaan
jam pertama), fasa eksponensial (hingga hari
dy 2
kedua fermentasi), fasa stasioner (antara hari = k 2 y1 + k3y 2 (9)
kedua hingga hari ketiga), dan fasa kematian sel dt
(melewati hari ketiga fermentasi). dimana y2 adalah konsentrasi lovastatin dalam
g/mL media dan y1 adalah banyaknya sel yang
70
berasal dari persamaan (6) sebelumnya.
60 Dengan pemakaian lima macam konsentrasi
50 tepung jagung sebagai sumber karbon di dalam
media fermentasi, maka diperoleh gambaran
Sel (% T)

40
mengenai laju pembentukan lovastatin seperti
30 pada Gambar 2. Kurva laju tersebut hanya terlihat
20
sebanyak empat buah, karena kinetika laju
pembentukan lovastatin dengan penggunaan
10
10% dan 12.5% tepung jagung adalah tepat sama
0 besarnya (atau kedua kurva saling berhimpitan).
0 24 48 72 96 120 144 168
Waktu fermentasi (jam)
2.5% 5% 7.5% 10% 12.5% tepung jagung
Gambar 1. Profil pertumbuhan sel 3500
Aspergillus terreus.
3000

Panjangnya selang waktu pada setiap fasa 2500

Lovastatin (g/L media)

adalah khas untuk setiap sel dan bergantung pula

pada pengaturan kondisi fermentasi yang 2000
dilakukan. Informasi yang diperoleh ini akan
1500
menjadi pertimbangan pada fermentasi
berikutnya, apabila perolehan produk fermentasi 1000
tidaklah sesuai dengan yang telah diperkirakan.
500
Dari hasil perhitungan kinetika terhadap data
percobaan, maka laju pertumbuhan sel 0
Aspergillus terreus hingga fasa stasioner dapat 0 24 48 72 96 120 144 168

dimodelkan menjadi Waktu fermentasi (jam)

d [Sel ] [Sel ] Gambar 2. Laju pembentukan lovastatin pada

= 0.09 × [Sel ] × (1.0 − ) (7)
dt 61.57
Sedangkan setelah fasa stasioner, model
pertumbuhan sel Aspergillus terreus adalah
d [Sel ] [Sel ]
= −0.058 × [Sel ] × (1.0 −
dt 61.57
Nilai tetapan kinetika k1 yang negatif (pada
persamaan 8) menyatakan laju pertumbuhan sel
yang menurun, yaitu pada saat sel-sel mulai
berhenti tumbuh setelah melewati hari ketiga
fermentasi. Waktu itu merupakan saat dimana
sel-sel Aspergillus terreus mulai membentuk
metabolit-metabolit sekunder, terutama
lovastatin. Konfirmasi terhadap peristiwa sintesis
metabolit sekunder terlihat nyata pada kurva-
kurva laju pembentukan (dalam Gambar 2) yang
menaik secara tajam setelah hari ketiga (atau 72
jam) fermentasi. Kemudian kurva tersebut
mencapai maksimumnya pada hari ke enam
fermentasi, dimana sel sudah tidak ada lagi yang
tumbuh.
102
lima kondisi fermentasi.
Dari perhitungan terhadap kadar metabolit
sekunder yang terbentuk selama perioda
fermentasi, maka dapat dimodelkan laju
) (8) pembentukan lovastatin sebagai
d [Lovastatin ]
=
dt (10)
k 3 × [Sel ] + k 4 × [Lovastatin ]
dimana nilai dari tetapan kinetika k3 adalah 0.01,
0.06, 0.037, 0.024, dan 0.024 untuk berturut-
turut pemakaian 2.5%, 5%, 7.5%, 10%, dan
12.5% tepung jagung. Dan nilai tetapan kinetika
k4 adalah sama untuk semua konsentrasi, yaitu
sebesar 0.027.
Model kinetika pembentukan lovastatin
(persamaan 10) memperlihat-kan bahwa laju
pembentukan ditentukan oleh banyaknya sel
pada satu waktu fermentasi dan ditentukan oleh
banyaknya lovastatin yang telah dihasilkan pada
saat itu. Dalam keadaan konsentrasi lovastatin
tertentu (yang diekspresikan oleh parameter k4
yang tetap), maka faktor penentu laju lebih
© Kimia ITS – HKI Jatim
 Akta Kimindo Vol. 1 No. 2 Oktober 2005: 99-104

dominan pada banyaknya sel (yang dinyatakan
oleh tetapan laju k3 yang bervariasi).
Laju pembentukan paling rendah, dimana k3 =
0.01, terjadi pada proses fermentasi dengan
menggunakan 2.5% tepung jagung. Sedangkan
laju pembentukan tertinggi, dimana k3 = 0.06,
teramati pada pemakaian 5% tepung jagung.
perolehan lovastatin pada pemakaian 2.5%
tepung jagung.
Pada perancangan penelitian yang berikutnya,
dapat diupayakan variasi konsentrasi yang lebih
cermat pada selang 2.5% hingga 7.5% tepung
jagung, agar dapat ditemukan secara akurat
perolehan lovastatin yang maksimum.

Perolehan Lovastatin KESIMPULAN

Profil pertumbuhan sel Aspergillus terreus Dari hasil percobaan fermentasi
yang terlihat normal (pada Gambar 1), dapat Aspergillus terreus menggunakan tepung jagung
menyatakan bahwa proses fermentasi telah sebagai sumber karbon, maka disimpulkan
berjalan secara baik. Sehingga dapat diharapkan bahwa:
akan diperolehnya metabolit sekunder lovastatin
dalam jumlah yang menggembirakan. 1. Profil pertumbuhan Aspergillus terreus
Perolehan lovastatin pada lima batch terlihat mengikuti kaidah logistik umum dan
fermentasi ditunjukkan pada Gambar 3 berikut dapat dimodelkan sebagai
ini. Kecenderungannya adalah mirip dengan laju
d [Sel ] [Sel ]
pembentukannya, dimana terlihat lonjakan yang = 0.09 × [Sel ] × (1.0 − )
tajam antara penggunaan 2.5% dan 5% tepung dt 61.57
jagung. Dan menurun kembali hingga stagnan pada fasa awal pertumbuhan hingga fasa
pada pemakaian tepung jagung yang lebih tinggi stasioner. Dan dapat dimodelkan sebagai
lagi.
d [Sel ] [Sel ]
= −0.058 × [Sel ] × (1.0 − )
2808
dt 61.57
3000
pada fasa kematian sel.
2500
2. Laju pembentukan lovastatin selama
Lovastatin (g/L media)

2000 1804
enam hari (atau 144 jam) fermentasi cair
1500 dapat dimodelkan sebagai
1060 1060
1000
d [ Lovastatin]
500
484
=
dt
0
k 3 × [Sel ] + k 4 × [ Lovastatin]
2.5 5.0 7.5 10.0 12.5
Konsentrasi tepung jagung (%)
dengan tetapan k3 adalah 0.01, 0.06, 0.037,
Gambar 3. Perolehan lovastatin pada lima 0.024, dan 0.024 untuk pemakaian 2.5%, 5%,
kondisi fermentasi. 7.5%, 10%, dan 12.5% tepung jagung. Dan
tetapan k4 adalah 0.027 untuk semua
Aspergillus terreus menggunakan tepung konsentrasi.
jagung secara optimal pada konsentrasi 5%
(5 g/100 mL). Penam-bahan konsentrasi tepung 3. Dalam kondisi percobaan yang telah
jagung lebih besar dari 5% ternyata justru dilakukan, kadar lovastatin tertinggi
menurunkan konsentrasi lovastatin yang sebesar 2808 g/L media dicapai pada
dihasilkan. Peristiwa ini mirip seperti kinetika penggunaan 5 % tepung jagung.
enzimatis substrat tunggal, dimana penambahan
substrat yang lebih banyak dari suatu konsentrasi DAFTAR PUSTAKA
tertentu akan dapat menurunkan jumlah Constantinides, A., 1987, Applied Numerical
produknya [Laidler, 1973]. Methods with Personal Computers, McGraw-
Disini kemungkinan telah terjadi suatu Hill Book Co., New York, 563-571.
peristiwa inhibisi balik (feed-back inhibition), Cottingham, J., 1998, Lovastatin/ Mevacor™:
dimana penambahan konsentrasi tepung jagung Cholesterol Control, The Parkins List Drug
yang melebihi dari kadar optimalnya justru akan Database Index, 1-3.
menghambat terbentuknya lovastatin, sehingga Hardmann, J.G. et al., Eds., 1996, Goodman and
akhirnya jumlah lovastatin yang dihasilkan akan Gilman’s The Pharmaceutical Basis of
menjadi lebih sedikit. Therapeutics, McGraw-Hill Book Co., New York,
Dari kondisi fermentasi yang telah ditetapkan 885-887.
dalam percobaan ini, maka perolehan tertinggi Laidler, K.J., Bunting, P.S., 1973, The Chemical
produk lovastatin adalah sebanyak 2808 g/L Kinetics of Enzyme Action, Clarendon Press,
media. Perolehan ini hampir enam kali lipat Oxford.
© Kimia ITS – HKI Jatim 103
 Nauli dan Udin-Model Fermentasi Lovastatin

Moore, R.N. et al., 1985, Biosynthesis of the O’Hagan, D., 1991, The Polyketide Metabolites,
hypocholesterolemic agent mevinolin by Ellis Horwood, New York.
Aspergillus terreus. Determination of the origin
of carbon, hydrogen, and oxygen atoms by
carbon-13 NMR and mass spectrometry, J. Am.
Chem. Soc. 107:12, 3694-3701.

104 © Kimia ITS – HKI Jatim