Identificaci n de Amino cidos y Prote nas

Nombre: Denise Moreta Fecha:16/mayo/2011

1. Reacci

n de Ninhidrina

Reaccin para la deteccin de aminocidos, actualmente acoplada a sistemas de valoracin automtica Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminocidos libres. Los aminocidos, en general reaccionan con la ninhidrina cuando son calentados con un exceso de la misma. Todos los aminocidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y forman dixido de carbono, amonaco y un aldehdo que contiene un tomo de carbono menos que el compuesto original. Esta reaccin da lugar a la formacin de un producto color azul o prpura (que posteriormente puede ser utilizado para cuantificar el aminocido). En el caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un grupo imino, la coloracin final es amarilla. El amonaco, la mayora de los polipptidos y las protenas pueden desarrollar coloracin en esta reaccin, pero a diferencia de los aminocidos, no liberan CO2. La coloracin azulada o violeta ser proporcional a la concentracin del aminocido. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) es un oxidante energtico que por una desaminacin oxidativa de los aminocidos conduce a la formacin del aldehdo correspondiente, con liberacin de amoniaco y gas carbnico y formacin de la ninhidrina reducida o hidrindrantina. La molcula de hidridantina, en presencia de otra de ninhidrina, condensa a travs del amoniaco produciendo una estructura denominada indanona o prpura de Ruhemann, manifestando un color rojizo, excepto para la prolina, hidroxiprolina y en menor medida para la histidina. Presenta su mximo de absorbancia a los 570 nm, exceptuando los tres aminocidos reseados anteriormente.

2. Reacci

n de Biuret

El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado formado por la condensacin de dos molculas de urea con eliminacin de amonaco. Esta reaccin est dada por aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. Esta ltima reaccin provoca un cambio de coloracin: violeta prpura o violeta rosado. Debe sealarse que el color depende de la naturaleza de las protenas; protenas y pptidos dan un color rosado; la gelatina da un color azul.

3. Reacci

n de Mill

La reaccin del Milln se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molcula proteica. Cualquier compuesto fenlico que no est sustituido en la posicin 3,5 como la tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reaccin. De estos compuestos, slo la tirosina est presente en las protenas, de manera que slo las protenas que tienen este aminocido ofrecen resultados positivos. En esta prueba los compuestos mercricos en medio fuertemente cido (cido ntrico del reactivo) se condensan con el grupo fenlico formando un compuesto de color rojo ladrillo o rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgnicas en gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Milln es precipitado y se vuelve negativo, razn por la cual este reactivo no se usa para medir albmina en orina. Debe tomarse en cuenta que en el caso de que la solucin a examinar sea muy alcalina, debe ser previamente neutralizada, ya que el lcali precipitara al ion mercurio en forma de xidos amarillos. Adems, protenas como la ovoalbmina producen un precipitado blanco que progresivamente por accin del calor se torna rojo; pero las peptonas dan solamente una solucin de color rojo.

4. Reacci

n de Xantoproteica

Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos (tirosina, fenilalanina, triptfano. Esta reaccin se debe la presencia de un grupo fenilo en la molcula proteica. Los complejos de la molcula proteica que son de importancia en esta reaccin son la tirosina y el triptfano. La fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio. Para esta prueba se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjado en medio fuertemente alcalino (formacin de cido picrmico o trinitrofenol). No puede realizarse esa reaccin para identificar albmina en orina, por el color anaranjado de la reaccin final.

Las protenas que tienen en su composicin estos aminocidos tambin darn la reaccin. La positividad se reconoce por la aparicin de un color amarillo o verde debido a la formacin de nitrocompuestos

5. Prueba de los grupos SH:

Es una prueba para identificar aminocidos azufrados y las protenas que los contienen, se reconocen por la formacin de una coloracin negra o gris.

4. Prueba de Sakaguchi
Esta prueba es positiva para compuestos que contengan el grupo guanidinio como la arginina ya que casi todas las protenas poseen ese aminocido.El reactivo que se utiliza contiene -naftol e hipoclorito sdico, en medio alcalino. La aparicin de una coloracin roja es indicativa de una reaccin positiva. El desarrollo de un color rojo marca la reaccin positiva y se debe a la presencia del grupo guanidina, que caracteriza la arginina.

4. Reacci

n de Xantoproteica

Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos. Esta reaccin se debe la presencia de un grupo fenilo en la molcula proteica. Los complejos de la molcula proteica que son de importancia en esta reaccin son la tirosina y el triptfano. La fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio. Para esta prueba se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formacin de cido picrmico o trinitrofenol). No puede realizarse esa reaccin para identificar albmina en orina, por el color anaranjado de la reaccin final.

5. Prueba de Hopkin-Cole

Implica la reaccin del grupo indol del triptofano con el cido glioxlico y las protenas que lo contienen, en presencia de cido sulfrico concentrado. La positividad se reconoce por la aparicin de un anillo color violeta-rojizo.

6. Prueba de Jaff
Si acontece la aparicin de una coloracin roja, se tratar de una prueba positiva para la creatinina. Puede ser leda a 520 nm, detectndose hasta 5 g/mL.

7. Prueba de coagulaci

n:

Es una prueba para identificar: albminas, globulinas, glutelinas y prolaminas. La positividad se manifiesta por la formacin de un cogulo. No se conoce exactamente el mecanismo de reaccin, se cree que ocurre cierta deshidratacin de la molcula proteica.

8. Prueba de Sulfato de amonio:

Las protenas, como otros coloides son precipitadas por soluciones concentradas de sales de amonio [NaCl. (NH4)2SO4 y NaSO4 ]. Aparentemente la precipitacin se debe a la neutralizacin y deshidratacin de la molcula, seguida de agregacin y precipitacin.

9. Reacci

n de Ehrlich

La presencia de anillos aromticos fenlicos o nitrogenados en la cadena lateral de los Aminocidos se puede identificar mediante la reaccin con cido sulfanlico y nitrito de Sodio por formacin de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo as detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando pptidos y protenas. Bibliografia: http://es.scribd.com/doc/15958125/1-PROPIEDADES-QUIMICAS-YFISICOQUIMICAS-DE-LAS-PROTEINAS