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73 Quimiossistemtica: uma nova fonte de PROVAS PARA A classificao da flora endmica das MAURCIA NR Lai Fang, T e G Bahorun Khittoo Faculdade de Cincias da Universidade de Maurcio RESUMO Quimiossistemtica pode ser vista como uma cincia hbrida que complementa disponveis dados morfolgicos para melhorar a sistemtica das plantas. Polifenis esto entre os marcadores qumicos mais amplamente utilizado em botnicos estudos chemosystematic. Anlise preliminar da migrao cromatogrfica de flavonides perfis de quatro maurcio espcies endmicas de Eugenia tm mostrado que pollicina E, E fasciculata, e E orbiculata esto mais intimamente relacionados uns aos outros em relao a E elliptica. Perfis de flavonides tambm foram utilizados de forma eficiente para a identificao de uma espcie Trochetia, que devido indisponibilidade dos rgos reprodutivos, foi erroneamente suspeita de ser a provavelmente extinta T parviflora. Palavras-chave: Quimiossistemtica, fenlicos, flavonides, Eugenia, Syzygium, Trochetia.

INTRODUO Com o desenvolvimento da qumica de produtos naturais, os cientistas tm mostrado que fitoqumico constituintes podem ser utilizados para caracterizar, descrever e classificar as espcies em taxa. Correlaes entre tradicionais classificaes morfolgicas e qumicas podem ser rastreados j em 1699 (Fairbrothers 1968). No entanto, um interesse genuno na compreenso de possveis relaes entre a planta constituintes e sistemtica mais recente. Interesse por este aspecto da sistemtica aumentou com a desenvolvimento de rpidas e precisas tcnicas analticas, e no h um consenso de que os dados de quantas fontes quanto possvel deve ser empregado na classificao de plantas (Stace 1980 citado em Datta, 1988). Evidncias de constituintes qumicos j levou reconsiderao da taxa de muitas plantas. Para exemplo, um nmero de famlias taxonomicamente difcil ter sucesso agrupados com base em seu metablito secundrio perfis. O Bonnetiaceae, que consiste em os dois gneros e Bonnetia Archytaeae de fato melhor associado ao Guttiferae do que com o Theaeceae como a presena de xanthones sugeriria (Waterman, 1998). Colocao do Bretschneideraceae na Capparales em vez de no Sapindales suportado pela ocorrncia de glicosinolatos (Waterman, 1998). Em menores nveis taxonmicos, vrios metabolitos tm-se revelado til no estabelecimento de relaes taxonmicas.

A distribuio de indole, e carbazol alcalides, 8-prenilados cumarinas e monoterpeno ou sesquiterpeno dominado leos volteis foram combinados para confirmar a diviso do gnero Murraya (Rutaceae) em dois txons. Na verdade, trs grandes categorias de constituintes qumicos de plantas so normalmente utilizados para fins sistemticos. Estes incluem os metablitos primrios, metablitos secundrios, isto , aqueles que no esto envolvidos no ensino bsico metabolismo da clula, e os semantides, que so informaes de transporte de molculas como o DNA (Primrio), RNA (secundrio) e protenas (tercirio). s vezes, uma outra categorizao da marcadores sistemticos tambm podem ser definidas, onde os metablitos primrios e secundrios so referidos como micromolculas e semantides juntamente com os polissacardeos maiores como macromolculas. Este classificao ltimo levou diviso da sistemtica qumica-se em duas entidades. Assim quimiossistemtica, no sentido mais amplo da palavra, envolve tanto micromolculas e macromolculas como marcadores sistemticos. No entanto, muitas vezes, o termo restrito a sistemtica micromolecular, envolvendo primrio e com mais freqncia os metablitos secundrios. Do ponto de vista taxonmico, fenlicos tm se mostrado o mais popular tipo de secundrio metablito (Smith, 1976), e o nmero de estudos chemosystematic com base nesses marcadores tm extensivamente foram relatados. A principal razo para sua popularidade sua extrao rpida e simples a partir de material vegetal. Tambm so relativamente fceis de separar por cromatografia, e so facilmente identificados por reagentes localizao (Smith 1976). Entre os diferentes grupos fenlicos, flavonides tm sido os mais utilizados com sucesso chemosystematic marcadores. Numerosos exemplos onde as investigaes foram chemosystematic com base em flavonides tm sido relatados. Estes incluem o levantamento dos flavonides de 5 gneros da Calyceraceae (Bohm et al. 1995), o estudo dos flavonides de Bignoniaceae do "cerrado" e sua importncia taxonmica (Blatt et al. 1998), o trabalho realizado em tribos Podalyriae e Lipariae com base em flavonides semente (De Nysschen et al. 1998), eo estudo da distribuio e significado quimiotaxonmicos de flavonides em Aloe (Viljoen et al. 1998) so alguns exemplos. Harborne (1973) flavonides qualificado como sendo provavelmente a classe mais til da planta secundria constituintes de um ponto de vista sistemtico. Nos ltimos 30 anos, os flavonides tm se mostrado determinante em todos os nveis da taxonomia vegetal (Van Sumere et al. 1993). Nesta base de plantas, todo famlias foram includos ou excludos ordens especficas. Tambm foi possvel atribuir determinados padres de flavonides no nvel da famlia e espcie (Harborne 1973). Flavonides tm mesmo provou ser significativa na identificao de hbridos naturais de plantas, tais como Baptisia (Harborne, 1973) e o reconhecimento de cultivares de plantas, como Azalia e lpulo (Van Sumere et al. 1985, 1988 citado em Van Sumere 1993). Flavonides apresentam variao estrutural enorme. Eles podem ser divididos em uma dzia de subclasses, cada deles variando no grau de metilao hidroxilao e glicosilao. Conseqentemente flavonides fornecer, pelo menos, como muitos personagens scorable como qualquer outro grupo de substncias secundrias. Eles tambm tm a vantagem de ser mais amplamente distribudas do que a maioria das outras substncias secundrias. Flavonides ocorrem universalmente em angiospermas, gimnospermas e pteridfitas e, portanto, seu uso como marcadores chemosystematic no restrito. Alm disso flavonides parecem estar entre os mais estvel caracteres qumicos em plantas.

Variao qualitativa ao nvel de espcie muito limitada. Alm disso, quando se trata de facilidade e velocidade de identificao, os flavonides so novamente altamente cotados (Harborne 1967). Maurcio conhecido por possuir uma flora muito diversificada composta por mais de 700 espcies de plantas indgenas dos quais cerca de 300 (cerca de 60%) so endmicas (Guho 1988). Com tal uma flora diversificada, juntamente com um alta proporo de endemismo, a vegetao da ilha oferece muito espao para taxonmica e estudos filogenticos. No entanto, a taxonomia da flora endmica da Ilha Maurcia tem sido at agora exclusivamente com base em caractersticas morfolgicas tradicionais. Embora taxonomia morfolgica tradicional ajudou na compreenso da flora da Ilha Maurcia, ainda h muito trabalho a ser feito. Por exemplo, muitos taxa continuam a ser problemticas com casos de heterophylly, heteroblasty, hibridao, e com naturais semelhanas morfolgicas. Alm disso, na maioria das vezes, partes reprodutivas no esto disponveis a partir dessas plantas, tornando os mtodos tradicionais morfolgicas confivel. Embora um nmero de investigaes da fitoqumica das plantas endmicas maurcio existem, eles tm mais a ver aspectos tradicionais da planta e as atividades biolgicas do seu extrato, em vez de a sistemtica destas plantas. Entre os poucos chemosystematic pesquisa realizada em maurcio plantas endmicas, devemos notar estudo Bate-Smith, em 1977, de flavonides do Cunoniaceae onde 3 espcies de Weinmannia: W. laevis Lamk, W. macrostachys DC. e W. tinctoria Sm., foram considerados. Elgico cido, kaempferol, quercetina e cianidina foram identificados a partir dessas amostras (Stuessy 1998). A necessidade de ter mais informaes sobre a sistemtica da vegetao da ilha ainda mais importante considerando o fato de que uma alta proporo das plantas maurcio indgenas j sido classificados como ameaadas ou em perigo e sejam susceptveis de desaparecer antes de qualquer estudo iniciado em -los. Em tais casos, a taxonomia baseada em ambos os dados chemosystematic e tradicionais morfolgicas quando disponvel, vai certamente ajudar para uma melhor gesto da conservao dessas espcies ameaadas. Alm disso, as pesquisas sobre a flora chemosystematic maurcio endmica pode provar ser informativo em a triagem de produtos naturais biologicamente ativos mais particularmente o polifenis ao qual um ampla gama de propriedades, incluindo antivirais (Jurd et al. 1971, Zhou et al. 1992), antibacteriana (Didry et al. 1982), antifngicos (Ravn et al. 1984, Weidenborner et al. 1993), anti-inflamatrios (Bide et al. 1987), anticarcinognicos (Hertog et al. 1992, Das et al. 1994, Kasai et al. 2000) e antioxidantes (Yuting et al. 1990, Bahorun et al. 1994, 1996, Liu et al. 2000, Martinez et al. 2000) as atividades j sido atribuda. Neste artigo, relatamos a investigao preliminar chemosystematic em quatro Eugenia endmicas espcies (E. elliptica, E. fasciculata, E. pollicina, E. orbiculata) ea identificao de um indivduo de o Trochetia gnero em nvel de espcie com base em componentes qumicos. MATERIAIS E MTODOS Material vegetal Amostras de folhas foram coletadas de E. elliptica, E. pollicina, E. fasciculata e E. orbiculata. Para o identificao das espcies Trochetia suspeito de ser T. parviflora, foram coletadas folhas de espcies de T. blackburniana, T. boutoniana, T. triflora, T. uniflora, e as espcies no identificadas Trochetia. A folha de T. parviflora, foi gentilmente fornecido pela Herbarium Maurcio. Preparao de amostras

Na investigao dos perfis cromatogrficos das 4 espcies Eugenia, massas fixas de folhas de cada espcie foram misturadas em acetona / gua (70/30 v / v) e esquerdo durante a noite a 4 0 C antes de ser filtrada. Os resduos foram extrados durante a noite, finalmente, outra vez em 4 0 C com MeOH 100%. Os filtrados foram concentrados sob presso reduzida para eliminar solventes orgnicos. O restante aquosa extratos foram ento lavadas com diclorometano para remover clorofilas antes da liofilizao. Alquotas de liofilizados extratos totais de cada espcie foram dissolvidos em 100 ml de gua destilada e soluo extrada exaustivamnte com acetato de etila. As fases de acetato de etila foram ento desidratadas com sulfato de sdio anidro (Na 2 SO 4 ) Antes de ser de baixa presso evapora-se e tomadas em metanol absoluto para produzir uma relao de 1:2,5 (peso planta fresca / volume). Para a anlise de espcies Trochetia, 5g de folhas de Trochetia boutoniana, Trochetia blackburniana, Trochetia triflora, Trochetia uniflora e as espcies no identificadas Trochetia e 0.0421g de tecido foliar de T. parviflora (modelo de herbrio) foram fundamentadas em nitrognio lquido e deixou a macerar durante 24 h 4 o C em acetona / gua (70/30 v / v), e finalmente em metanol absoluto. Os filtrados foram coletados concentrada sob presso reduzida para eliminar solventes orgnicos. As fases restantes aquosa foram lavadas com diclorometano para remover clorofilas antes de ser liofilizado (Para T. parviflora, o extrato aquoso foi evaporado secura). Os resduos obtidos foram ento dissolvidos ou retomada em etanol 15% para obter um 1 / 5 ratio (peso planta fresca / volume). Anlise cromatogrfica Extratos de folhas das quatro espcies de Eugenia foram examinadas por unidimensional cromatografia em camada delgada em placas de slica gel revestidas (K6F, Whatmann). Flavonides foram separadas em acetato de etila / frmico cido / cido actico glacial / gua (100/11/11/26) e visualizado por 1% 2minoethyldiphenyl borinate soluo em metanol, seguido pelo polietileno glicol 4000 de 5% em etanol absoluto a 365 nm (Wagner Bladt e 1996). Extratos de folhas das espcies Trochetia, foram analisadas porCromatografia Lquida de Alta Eficincia. A HP 1100 series sistema de cromatografia lquida compreendendo desgaseificador de vcuo, bomba quaternria, auto- sampler, compartimento termostatizado coluna e detector de arranjo de diodos foi usado. Anlise foi realizada fora a 25 o C aps a filtrao dos extratos em Millipore (0,22 nm) e injeo (30 l) em um LiChrosorb RP coluna 18 (0,5 m; 4,6 mm de dimetro x 150 mm; 25 o C) por um gradiente acidificados acetonitrila-gua. Eluio (taxa de fluxo: 0,7 ml / min) foi realizada na seguinte ordem: 00-30 minutos, 0-15% em B A; 30-50 minutos, 15% em B A; 50-60 minutos, 15-25% B em A; 60-90 minutos, 15-100 B% no A; 9-10 minutos B, 100-0% em um solvente [A: acetonitrila / gua, 09/01 v / v, pH 2,6; B Solvente: acetonitrila / gua, 01/01 v / v, pH 2,6]. Comprimento de onda de absoro foi selecionado em 360 nm para a deteco de flavonides. RESULTADOS E DISCUSSO A Tabela 1 apresenta os valores de Rf e as identidades tentativa de alguns dos flavonides detectados em E. elliptica, E. pollicina, E. fasciculata, e E. orbiculata. Nossos resultados mostram que um padro de flavonide mais ou menos semelhante ocorre nas quatro espcies de Eugenia. Quatro

dos cinco compostos flavonides foram detectados comumente, nas quatro espcies apoiando a sua classificao dentro do mesmo gnero Eugenia. No entanto, entre essas quatro espcies, E. elliptica aparece como o membro mais distantes como o composto flavonide F4 (Rf0.7), que destaque no E. fasciculata, E. pollicina, e E. orbiculata, no foi detectada em E. elliptica. Alm disso, o perfil cromatogrfico de E. elliptica parece ser menos complexo em termos de composio de flavonides comparao com o 3 outras espcies Eugenia. Esta diferena parece estar de acordo com dados morfolgicos. Folhas de E. elliptica, por exemplo, so maiores do que as de E. pollicina, E. fasciculata, e E. orbiculata que so elas prprias quase semelhante em tamanho. Tambm folhas de E. elliptica so agudas no pice, enquanto as de E. pollicina, E, fasciculata, e E. orbiculata tm pices obtusos. Com mais freqncia, folhas de E. elliptica ter mais de 10 pares de nervuras laterais, enquanto que os dos outros trs espcies geralmente tm menos (Bosser 1987). Tabela 1 Distribuio de flavonides detectados por cromatografia em camada fina (Acetato de etilo / Perfis flavonides tambm provaram ser eficientes ferramentas analticas para a identificao correta na espcies de nvel. Isto claramente exemplificado na Trochetia gnero onde um Trochetia no identificado espcie de "L'Crownland tard" perto "Le Pouce", era suspeito de ser o T. provavelmente extinta parviflora. Esta foi baseada principalmente na morfologia das folhas como as flores no estavam disponveis, e em o local de ocorrncia da planta. Literatura dados (Bosser 1987) indicao clara dos possveis ocorrncia de T. parviflora na regio de "Le Pouce". O perfil de flavonides do extrato da folha do espcie no identificada Trochetia, obtidos por cromatografia foi comparado com os dos outros Espcies Trochetia. Comparao tambm foi feita com o T. provavelmente extinta parviflora. HPLC padres de flavonides da espcie no identificada e T. uniflora foram encontrados para ser muito semelhantes. O sobreposio de seus cromatogramas (Figura 1) mostra a impressionante semelhana em seus perfis. Estes resultados ilustram claramente que a espcie no identificada Trochetia mais provvel que seja T. uniflora si e no o provavelmente "extinta" T. parviflora como a morfologia da folha levados a crer anteriormente. Na verdade, a flavonide baixo similaridade de padro entre T. parviflora e as espcies no identificadas Trochetia tende a sugerem fortemente que estas duas espcies so diferentes (Figura 2). Alm disso, o perfil dos flavonides no identificados Espcies Trochetia foi encontrado para ser consideravelmente diferentes daqueles das outras trs espcies de Trochetia, ou seja, T. blackburniana, T. boutoniana, T. triflora. Os resultados, consequentemente, aponta que o Trochetia no identificado de "L'Crownland tard" no provvel que seja uma dessas trs espcies. Figura 1 Diagrama de sobreposio de perfis de HPLC flavonides (extratos de folhas total) e de T.uniflora Trochetia espcies de crownland l'tard. Cromatogramas foram registrados em 360 nm. 77 Figura 2 Diagrama de sobreposio de perfis de HPLC flavonides (extratos de folhas total) de T. parviflora e Trochetia espcies de crownland l'tard. Cromatogramas foram registrados em 360 nm.

CONCLUSO Padres de flavonides de extratos de folhas com base no TLC demonstraram prontamente que E. elliptica bem diferente das espcies relacionadas de E. orbiculata, E. pollicina, e E. fasciculata que compartilham similares perfis cromatogrficos. Isto parece forte correlao com caractersticas morfolgicas. Dada a acentuada semelhana dos perfis de flavonides da espcie no identificada e que Trochetia do T.uniflora razovel acreditar que eles so da mesma espcie. A diferena de HPLC flavonides padres entre as espcies no identificadas Trochetia e T. parviflora indicam claramente que eles estavam espcies diferentes. Taxonomia morfolgica tradicional s pode ser limitada em alguns casos, e para isso fontes razo particular de outras informaes como dados chemosystematic pode definitivamente melhorar a sistemtica da flora endmica da Ilha Maurcia. Semelhante ao caso Trochetia retratado neste artigo no Existem inmeros relatos onde polifenis tm sido utilizados para a classificao precisa, dentro do gnero onde as classificaes morfolgicas e anatmicas foram complicadas. Entre os conhecidos exemplos so Attalea (Williams et al. 1983a), Lupinus (Williams et al. 1983b), Vicia (Webb e Harborne 1991), Ostericum e Angelia (Harborne et al. 1986), Hieracium (Petrovic et al. 1999) e Betula L. espcies (Keinnen et al. 1999). Enquanto quimiossistemtica no pode substituir o tradicional sistemtica com base na morfologia e anatomia, ele certamente vai proporcionar uma importante fonte de novos personagens e informaes para complementar estes mtodos para a taxonomia de confiana. Isto levar a uma compreenso mais abrangente da sistemtica, evoluo, ecologia e a elaborao de melhor estratgias de conservao da flora endmica da ilha Maurcia. AGRADECIMENTOS Os autores agradecem ao Servio Florestal do Ministrio da Agricultura, Tecnologia de Alimentos e Natural Recursos para fornecer amostras de folhas e do Herbrio Mauritius para abastecer o Trochetia parviflora amostras de folhas de herbrio. O trabalho foi financiado pela Universidade de Maurcio de Pesquisa Grant Scheme e da Comisso de Ensino Superior.
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