Anda di halaman 1dari 1398

Farmacopeia

Brasileira
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
Volume 1
5 edio
Braslia
2010
Copyright 2010 Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria / Fundao Oswaldo Cruz
Todos os direitos reservados. permitida a reproduo parcial ou total desta obra, desde que citada a fonte.
5 edio
Presidente da Repblica
Luiz Incio Lula da Silva
Ministro de Estado da Sade
Jos Gomes Temporo
Diretor-Presidente
Dirceu Raposo de Mello
Adjunto do Diretor-Presidente
Pedro Ivo Sebba Ramalho
Diretores
Dirceu Aparecido Brs Barbano
Jos Agenor lvares da Silva
Maria Ceclia Martins Brito
Adjunto de Diretores
Luiz Roberto da Silva Klassmann
Neilton Araujo de Oliveira
Luiz Armando Erthal
Chefe de Gabinete
Iliana Alves Canoff
Elaborao e edio:
AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA
SIA Trecho 5, rea Especial 57, Lote 200
71205-050, Braslia DF
Tel.: (61) 3462-6000
Home page: www.anvisa.gov.br
Brasil. Farmacopeia Brasileira, volume 2 / Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Braslia: Anvisa, 2010.
546p., 1v/il.
1. Substncias farmacuticas qumicas, vegetais e biolgicas. 2. Medicamentos e correlatos. 3. Especifcaes e mtodos
de anlise. I Ttulo.

Fundao oswaldo Cruz
Presidente
Paulo Gadelha
Vice-Presidente de Ensino, Informao e Comunicao
Maria do Carmo Leal
Editora FioCruz
Diretora
Maria do Carmo Leal
Editor Executivo
Joo Carlos Canossa Mendes
Editores Cientfcos
Nsia Trindade Lima e Ricardo Ventura Santos
Conselho Editorial
Ana Lcia Teles Rabello
Armando de Oliveira Schubach
Carlos E. A. Coimbra Jr.
Gerson Oliveira Penna
Gilberto Hochman
Joseli Lannes Vieira
Lgia Vieira da Silva
Maria Ceclia de Souza Minayo
RESOLUO DA DIRETORIA COLEGIADA - RDC N. 49, DE 23 DE NOVEMBRO DE 2010
Aprova a Farmacopeia Brasileira, 5 edio e d outras providncias.
A Diretoria Colegiada da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, no uso da atribuio que lhe confere o inciso IV do
art. 11 do Regulamento aprovado pelo Decreto n. 3.029, de 16 de abril de 1999, e tendo em vista o disposto no inciso
II e 1 e 3 do art. 54 do Regimento Interno aprovado nos termos do Anexo I da Portaria N 354 da ANVISA, de 11 de
agosto de 2006, republicada no DOU de 21 de agosto de 2006, e ainda o que consta do art. 7 inciso XIX da Lei n. 9.782,
de 26 de janeiro de 1999, em reunio realizada em 11 de novembro de 2010, adota a seguinte Resoluo da Diretoria
Colegiada e eu, Diretor-Presidente, determino a sua publicao:
Art. 1 Fica aprovada a Farmacopeia Brasileira, 5 edio, constituda de Volume 1 Mtodos Gerais e textos e Volume
2 Monografas.
Art. 2 Os insumos farmacuticos, os medicamentos e outros produtos sujeitos vigilncia sanitria devem atender s
normas e especifcaes estabelecidas na Farmacopeia Brasileira.
Pargrafo nico. Na ausncia de monografa ofcial de matria-prima, formas farmacuticas, correlatos e mtodos gerais
na quinta edio da Farmacopeia Brasileira, para o controle de insumos e produtos farmacuticos admitir-se- a adoo
de monografa ofcial, em sua ltima edio, de cdigos farmacuticos estrangeiros, na forma disposta em normas
especfcas.
Art. 3 vedada a impresso, distribuio, reproduo ou venda da Farmacopeia Brasileira, 5 edio sem a prvia e
expressa anuncia da ANVISA.
Pargrafo nico. Sem prejuzo do disposto no caput desse artigo, a ANVISA disponibilizar gratuitamente em seu
endereo eletrnico cpia da quinta edio e de suas atualizaes.
Art. 4 Fica autorizada a Fundao Oswaldo Cruz, por meio da Editora Fiocruz, para a comercializao dos exemplares
da quinta edio da Farmacopeia Brasileira
Art. 5 Ficam revogadas todas as monografas e mtodos gerais das edies anteriores da Farmacopeia Brasileira.
Art. 6 Esta Resoluo entrar em vigor noventa (90) dias aps a sua publicao.
Braslia, em 24 de novembro de 2010
DIRCEU RAPOSO DE MELLO
Diretor-Presidente da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
Publicada no DOU N 224, 24 de novembro de 2010
SUMRIO
Volume 1
1 PREFCIO ______________________________________________________________________________ 7
2 HISTRICO _____________________________________________________________________________ 13
3 FARMACOPEIA BRASILEIRA _____________________________________________________________ 21
4 GENERALIDADES _______________________________________________________________________ 39
5 MTODOS GERAIS ______________________________________________________________________ 59
5.1 Mtodos gerais aplicados a medicamentos ______________________________________________________ 59
5.2 Mtodos fsicos e fsico-qumicos ____________________________________________________________ 81
5.3 Mtodos qumicos _________________________________________________________________________ 162
5.4 Mtodos de farmacognosia __________________________________________________________________ 192
5.5 Mtodos biolgicos, ensaios biolgicos e microbiolgicos _________________________________________ 207
5.6 Mtodos imunoqumicos ___________________________________________________________________ 278
5.7 Mtodos fsicos aplicados a materiais cirrgicos e hospitalares ______________________________________ 279
6 RECIPIENTES PARA MEDICAMENTOS E CORRELATOS ______________________________________ 285
6.1 Recipientes de vidro ______________________________________________________________________ 285
6.2 Recipientes plsticos _______________________________________________________________________ 288
7 PREPARAO DE PRODUTOS ESTREIS ___________________________________________________ 321
7.1 Esterilizao e garantia de esterilidade _________________________________________________________ 321
7.2 Indicadores biolgicos _____________________________________________________________________ 326
7.3 Processo assptico ________________________________________________________________________ 329
7.4 Salas limpas e ambientes controlados associados ________________________________________________ 330
7.5 Procedimentos de liberao _________________________________________________________________ 336
8 PROCEDIMENTOS ESTATSTICOS APLICVEIS AOS ENSAIOS BIOLGICOS ___________________ 338
8.1 Glossrio de smbolos ______________________________________________________________________ 338
8.2 Fundamentos _____________________________________________________________________________ 339
8.3 Valores atpicos ___________________________________________________________________________ 340
8.4 Ensaios diretos ___________________________________________________________________________ 341
8.5 Ensaios indiretos quantitativos _______________________________________________________________ 341
8.6 Mdias mveis ___________________________________________________________________________ 346
8.7 Ensaios indiretos tudo ou nada _____________________________________________________________ 347
8.8 Combinao de estimativas de potncia ________________________________________________________ 347
8.9 Tabelas estatsticas ________________________________________________________________________ 349
8.10 Exemplos de clculos estatsticos aplicados em ensaios biolgicos __________________________________ 359
9 RADIOFRMACOS ______________________________________________________________________ 373
10 EQUIVALNCIA FARMACUTICA E BIOEQUIVALNCIA DE MEDICAMENTOS _________________ 387
11 GUA PARA USO FARMACUTICO ________________________________________________________ 391
12 SUBSTNCIAS QUMICAS DE REFERNCIA _______________________________________________ 399
13 SUBSTNCIAS CORANTES _______________________________________________________________ 401
14 REAGENTES ____________________________________________________________________________ 413
14.1 Indicadores e solues indicadoras ____________________________________________________________ 413
14.2 Reagentes e solues reagentes ______________________________________________________________ 421
14.3 Solues volumtricas _____________________________________________________________________ 501
14.4 Tampes ________________________________________________________________________________ 506
ANEXO A - TABELA PERIDICA DOS ELEMENTOS QUMICOS - NOMES, SMBOLOS
E MASSAS ATMICAS ________________________________________________________________________ 511
ANEXO B - UNIDADES DO SISTEMA INTERNACIONAL (SI) USADAS NA FARMACOPEIA E AS
EQUIVALNCIAS COM OUTRAS UNIDADES ____________________________________________________ 517
ANEXO C SOLVENTES PARA CROMATOGRAFIA _______________________________________________ 523
ANEXO D ALCOOMETRIA ___________________________________________________________________ 525

Volume 2
MONOGRAFIAS
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
7 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
a
1
1 PREFCIO
A produo cientfca emanada da quinta edio elevou
a FB 5 a um grau de destaque tcnico-cientfco com
reconhecimento por congneres internacionais.
Nada disso teria sido realizado, no fosse a estrutura
construda pela Comisso Permanente de Reviso da
Farmacopeia Brasileira, responsvel pela quarta edio, que
tem o mrito de ter estabelecido a dinmica necessria para
se elaborar um documento de tamanha responsabilidade
e, principalmente, ter consolidado a mentalidade da real
importncia desse compndio para uma sociedade em
constante evoluo.
Dessa forma, pode a CFB e seus Comits, em consonncia
com a Anvisa, trazer sociedade brasileira um novo cdigo
totalmente revitalizado, apresentado em dois volumes
divididos em Mtodos Gerais e Monografas. Esto
includos cento e setenta e seis mtodos gerais e quinhentas
e noventa e nove monografas, das quais duzentas e setenta
e sete de insumos farmacuticos, duzentas e dez de
especialidades, cinquenta e sete de plantas medicinais, seis
de correlatos, trinta de produtos biolgicos e dezenove de
hemocomponentes e hemoderivados.
No captulo de Generalidades (4), foi realizada a atualizao
das defnies e a incluso de inmeras outras, atendendo
s especifcidades de cada Comit.
Em Procedimentos tcnicos aplicados a medicamentos (5.1)
destacam-se a completa reviso do mtodo de uniformidade
de doses unitrias (5.1.6), agora harmonizado com
novos mtodos publicados pelas principais farmacopeias
internacionais. Outro destaque a incluso do teste de
gotejamento (5.1.8), de grande importncia para os estudos
de equivalncia farmacutica das formas farmacuticas
lquidas de uso oral.
Em Mtodos fsicos e fsico-qumicos (5.2), foi realizada
uma reviso completa dos Mtodos de espectrometria
atmica (5.2.13), bem como dos mtodos de cromatografa
(5.2.17) que foram reescritos e se encontram bem mais
completos. Foi includo texto sobre mtodos de eletroforese
capilar (5.2.22.1) e inmeros outros que passaram ou por
reviso completa ou por modifcao de texto.
Para os Mtodos qumicos (5.3), foi realizada reviso
completa dos ensaios limite, com nfase para a eliminao
do uso de cido sulfdrico e a incluso da espectrometria
atmica no Ensaio limite para metais pesados (5.3.2.3).
Incluiu-se o Ensaio iodomtrico de antibiticos (5.3.3.10),
cujo procedimento era, anteriormente, descrito em cada
monografa passando, agora, a contar com um mtodo
geral prprio.
Os Mtodos de farmacognosia (5.4) foram revistos e
ampliados, com destaque para os Mtodos de preparao
e anlise de extratos vegetais (5.4.3), com o acrscimo de
seis novos mtodos gerais.
Prefaciar uma obra da magnitude de uma farmacopeia
nacional no tarefa fcil. Ao apresentar um trabalho, em
que se teve envolvimento em todo o processo construtivo,
deve se cuidar para emitir uma opinio com a maior
iseno possvel.
Entretanto, um enorme orgulho poder externar, em nome
de uma Comisso e de diversos Comits, as impresses
fnais de uma obra de cunho tcnico e cientfco, a ser
instrumento para aes de sade pblica que se destinam a
proteger a populao de seu pas por meio da preveno do
risco sanitrio. No se deve negligenciar a fora poltica que
a Farmacopeia Brasileira, 5 edio (FB 5) traz para o Pas.
Convocados que fomos, pela Agncia Nacional de
Vigilncia Sanitria (Anvisa), para presidir os trabalhos que
iriam dar forma quinta edio da Farmacopeia Brasileira,
no titubeamos um minuto sequer por conhecermos o
nvel de competncia, compromisso e responsabilidade
dos integrantes da Comisso da Farmacopeia Brasileira
(CFB). Na sequncia, a CFB indicou os coordenadores dos
Comits Tcnicos Temticos (CTT) e esses formaram suas
equipes utilizando o mesmo critrio.
Temos, agora, uma obra que um marco divisor dessa e das
futuras edies, bem como nas relaes profssionais entre
o corpo tcnico-cientfco, o administrativo e a sociedade.
As edies anteriores da Farmacopeia Brasileira no foram,
at ento, revogadas e, portanto, legalmente estavam em
vigor. Alm do prejuzo cientfco, pela defasagem dos
mtodos descritos, traziam certo entrave para as aes
sanitrias que so baseadas nas descries farmacopeicas
quer para a rea de registro, quer para a rea de controle de
qualidade, bem como para a fscalizao.
Por determinao superior, a CFB realizou rduo trabalho
de reviso das mil setecentas e vinte e sete monografas
inseridas nas quatro edies anteriores e props excluses,
reavaliaes textuais, reavaliaes metodolgicas,
atualizaes para procedimentos mais seguros, incluses
de novos textos, dentre outros.
Deu-se incio a projetos fnanciados pela Anvisa com
participao de conceituadas Instituies de Ensino e
Pesquisa em uma forma pioneira de trabalho que envolveu
duas centenas de profssionais da rea da sade, dentre eles
uma boa parte do meio acadmico, fornecendo ao pas mo
de obra qualifcada para atendimento ao setor farmacutico
brasileiro.
O envolvimento com a Academia, como era de se esperar,
levou produo de uma centena de informaes tcnicas e
cientfcas por meio de publicaes de artigos, apresentao
de trabalhos em congressos, discusses em mesas
redondas, palestras em eventos nacionais e internacionais,
elaborao de teses de doutorado, dissertaes de mestrado
e monografas de concluso de cursos de especializao.
8 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
1
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Os Mtodos biolgicos, ensaios biolgicos e
microbiolgicos (5.5) so apresentados com a incluso
de uma srie de Mtodos biolgicos (5.5.1), tais como os
doseamentos de fatores da coagulao sangunea humana,
totalizando dezesseis novos mtodos. Realizou-se o
trabalho de reorganizao; reviso e ampliao dos ensaios
biolgicos (5.5.2) e microbiolgicos (5.5.3).
Em Recipientes para medicamentos e correlatos (6), bem
como em Mtodos de preparao de produtos estreis (7),
foram realizadas reviso completa com reorganizao e
ampliao de textos para medicamentos e correlatos.
Novos exemplos de ensaios foram inseridos e, aqueles
constantes da quarta edio da Farmacopeia Brasileira
foram revisados em Procedimentos estatsticos aplicveis
aos ensaios biolgicos (8).
Trs novos captulos foram includos: Equivalncia
Farmacutica e Bioequivalncia (10); gua para uso
farmacutico (11) e Substncias qumicas de referncia
(12). A incluso de novos captulos foi iniciativa dos
referidos Comits e traz luz informaes de literatura
aliada s experincias profssionais de seus respectivos
membros. O captulo de Substncias corantes (13) foi
revisto e ampliado.
Trabalho especial foi a consolidao do captulo de
Reagentes (14). Nesse captulo foram congregados todos
os indicadores, solues indicadoras, reagentes, solues
reagentes, solues volumtricas e tampes descritos nas
monografas do volume 2 da FB 5. Com isso, eliminou-se
a descrio do reagente na prpria monografa dando uma
leitura mais dinmica por meio da utilizao do captulo
especfco. So descritos, atualmente, mil e cinquenta e um
ttulos que representam um acrscimo acima de cem por
cento em relao edio anterior.
Todos os anexos foram revisados e foi includo o Anexo C,
que trata de solventes comumente empregados em anlises
cromatogrfcas.
No podemos ter a ingenuidade de pensar uma farmacopeia
sem equvocos. Apesar de todos os textos terem sido
submetidos a consulta pblica e a uma reviso criteriosa,
caso ainda tenha sido includa alguma informao
inadequada, que possa levar difculdade compreenso
fnal, haver na Coordenao da Farmacopeia Brasileira
um procedimento para sanar a dvida e providenciar a
substituio, se for o caso, com rapidez. Novos textos ou
correes estaro disponibilizadas no meio eletrnico da
farmacopeia, novidade da presente edio.
No estaramos entregando a FB 5 no fosse a dedicao
extrema de todos os membros da CFB, dos CTT, da
COFAR e de todos os colaboradores. Sem o conhecimento
tcnico-cientfco dessas pessoas e sem a conduo frme
da Diretora Maria Ceclia Brito Martins, nosso caminho
teria sido ainda mais tortuoso.
Apesar de insistir nos agradecimentos, entendemos que
essas pessoas, por se identifcarem com os problemas
sanitrios do Pas, participaram de todo esse processo
imbudos em um esprito cvico j que so, em sua maioria,
voluntrios.
Reiteramos que todo o processo que culminou com a
publicao da FB 5 se perder se no for implementada
uma real poltica de Estado que nos garanta a continuidade
dos trabalhos da Comisso da Farmacopeia Brasileira e dos
CTT responsveis pelos demais produtos: Farmacopeia
Homeoptica, Formulrio Nacional, Denominaes
Comuns Brasileiras, Substncias Qumicas de Referncia
e Formulrio Fitoterpico.
Gerson Antnio Pianetti
Presidente da CFB
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 9 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
a
1
PREFCIO DA PHARMACOPEIA DOS ESTADOS
UNIDOS DO BRASIL, 1 EDIO
At a data da independncia do Brasil - 7 de Setembro
de 1822 - vigorou como cdigo pharmaceutico offcial
a Pharmacopa Geral para o Reino e domnios de
Portugal, de autoria do Dr. Francisco Tavares, professor
da Universidade de Coimbra, e publicada em 1794 por
ordem da rainha fdelssima D. Maria I.
Dessa data em diante, apezar de nossa emancipao
poltica, continuou a ser adoptada no s a mesma
pharmacopeia, como tambm o Codex medicamentarius
francez, aps 1837.
O Regulamento da Junta de Hygiene Publica, mandado
executar pelo Decreto n. 828, de 29 de Setembro de 1851,
sem determinar explicitamente qual a pharmacopeia que
deveria ser seguida, estabeleceu uma lista dos livros que
as pharmacias teriam que possuir e que so os seguintes:
Codex francez, Conspecto das pharmacopeias, por
Jourdan; Materia medica, formulario de Bouchardat;
Pharmacopeia Geral; Pharmacopeia de Foy; Codigo
Pharmaceutico e Pharmacographia do Agostinho Albano
da Silveira Pinto (ultima edio).
A primeira meno legal estabelecendo obrigatoriamente
o Codex francez como pharmacopeia offcial do Brasil
a que consta do artigo 58 do Regulamento que baixou
com o Decreto n. 8.387, de 19 de Janeiro de 1882, cujo
ther o seguinte: para, a preparao dos, remdios
offcinaes seguir-se- a pharmacopeia franceza, at que
esteja composta uma pharmacopeia brasiliense, para o
que nomear o Governo uma Commisso de pessoas
competentes. Depois de publicada por autorizao do
Governo a pharmacopeia brasiliense, os pharmaceuticos
tero os preparados segundo as formulas desta
pharmacopeia, o que no inhibir de tel-os segundo as
formulas de outras para satisfazerem s prescripes dos
facultativos, os quaes podem receitar como entenderem.
Redigido, porm, para um paiz em tudo to differente
do nosso, como a Frana, o Codex medicamentarius
gallicus no poderia satisfazer as nossas necessidades, o
que todos eram accordes em proclamar, sem que os nossos
dirigentes, sempre surdos e indifferentes aos appellos da
classe pharmaceutica, tomassem qualquer iniciativa para
dotar o Brasil de um cdigo pharmaceutico.
Em vista de tal descaso do poder publico as associaes
pharmaceuticas e medicas procuraram por mais de uma
vez levar avante a organizao da nossa pharmacopeia,
tendo, porm, fracassado todas as tentativas por falta de
apoio offcial e devido a impecilhos de toda ordem.
O Brasil, porm, que sempre tem sabido hombrear com as
demais naes civilizadas em todos os ramos das sciencias,
das artes, etc., no podia continuar a ser regido, quanto ao
exerccio da Pharmacia, por um codigo estrangeiro, que,
embora optimo para o seu paiz, no satisfazia em absoluto
as nossas necessidades. Por isso, embora reconhecendo
o arrojo de tal iniciativa, resolvemos arcar com a rdua
tarefa e alta responsabilidade de redigir o nosso futuro
cdigo pharmaceutico, fados em que o nosso grande
amor profsso vencesse todos os obices, transpuzesse
todos os obstculos. Aps mais de dois lustros de paciente
trabalho, tivemos a ventura de apresentar o nosso projecto
de Pharmacopeia Brasileira ao Exmo. Sr. Dr. Carlos
Chagas, ento, director geral do Departamento Nacional
de Sade Publica, solicitando de S. Ex. a nomeao de uma
commisso para julgal-o, a qual fcou assim constituida:
Professores Drs. Antonio Pacheco Leo, Renato de Souza
Lopes e Artidonio Pamplona e Pharmaceuticos Alfredo da
Silva Moreira, Malhado Filho e Isaac Werneck, da Silva
Santos.
Aps exame minucioso da obra, essa commisso resolveu
acceital-a, solicitando do Governo a sua offcializao
como Cdigo nacional pharmaceutico, com a suppresso,
porm, dos artigos seguintes, por dia considerados de
uso asss restricto para serem offcializados: Abacaxi -
Acetato bsico de cobre - Acetylarsanilato de sodio - Acido
chrysophanico -. Acido dipropylobarbiturico - Acido
iodhydrico diluido - Agarico do carvalho- Agua de Carlsbad
artifcial - Agua imperial - Alcoolatura vulneraria - Aloe
liquefeito - Amylo de arroz - Apocyno - Apozemas amargo,
de cusso, de romeira, de semen-contra, estomachico,
purgativo e sudorifco - Bromto de estroncio - Bromto
de lithio - Canna fstula - Carbonato de estroncio - Cardo
santo - Carvalho -. Cataplasma de farinha de mandioca
- Cataplasma de fecula de batata - Caustico de Vienna -
Cerato de espermacete Cerato de moscada - Cereja preta
- Cereja vermelha Chloralformamida - Chlorto de ouro e
de sodio - Chloro-amidto de .mercurio - Citrato de cafeina
effervescente - Citrato de ferro e quinina - Clyster de
amylo - Clyster de camomilla - Clyster laxativo - Collodio
cantharidado - Collodio iodoformado - Conserva de canna
fstula - Coto - Electuarios de caroba composto, de copaba
composto e de senna - Elixir adjuvante - Elixir de ans -
Elixir de antipyrina - Elixir de bucco - Elixir de genciana
Elixir de phosphato ferrico - Elixir de sucupira - Elixir
dentifricio - Emplastro de sabo canforado - Emplastro
de sabo salicylado - Emplastro oxycrocco - Emulso de
essencia de terebinthina - Espirito de zimbro composto
- Essencia de pimenta - Estaphisagria - Ethylocarbonato
de diquinina - Ethylosalicylato de quinina - Extracto de
bistorta - Extracto de cardo santo - Extracto de centaurea
menor - Extracto de cicuta - Extracto de cimicifuga -
Extracto de dce-amarga - Extracto fuido de angelica -
Extracto fuido de calamo aromatico - Extracto fuido de
cannela da China - Extracto fuido de cardo santo Extracto
fuido de carvalho - Extracto fuido de coto - Extracto
fuido de estaphisagria - Extracto fuido de mercurial -
Mellito de mercurial - Mercurial Methylenocitrato de
hexamethylenotetramina - Mostarda branca - Nitrato neutro
de bismutho - Paratoluolsulfonodichloramida - Pastilhas
de balsamo de Tol - de bicarbonato de sodio, de borato de
sodio, de carvo, de chlorato de potassio, de chlorhydrato
de cocaina, do codeina, de enxofre, de hortel-pimenta, de
ipecacuanha, de ipecacuanha opiadas, de kermes, de kermes
opiadas, de phenolphtaleina, de santonina, de santonina
compostas e do tannino - Pediluvio sinapizado - Phosphato
de sodio effervescente - Ps de apocyno, de dce-amarga e
de quebracho - Polpa de canna fstula purifcada - Pomada
do chloroamidto de mercurio - Pomada de tannino - Purga
de cayap - Quebracho - Sal de Carlsbad artifcial - Soluto
10 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
1
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
de acetotartarato de aluminio, de creosoto, de cresol, de
phosphato de sdio composto e de sulfato basico de ferro
- Succo de abacaxi - Succo de cereja - Tintura de coto -
Valerianato de zinco - Vinho aromatico - Vinho de cacau
- Vinho de ipecacuanha - Xarope de abacaxi, de acido
iodhydrico, do cereja, de cip azougue, de dce-amarga,
de espelina, de gengibre, do manac, do mangerona, de
muirapuama e de poejo.
PREFCIO DA FARMACOPEIA DOS ESTADOS
UNIDOS DO BRASIL, 2 EDIO
J se haviam decorrido trinta anos que estava em vigor a
primeira edio da Farmacopeia BRASILEIRA, editada
que fra em 1929. Nesse largo lapso de tempo, tornara-se o
Cdigo Farmacutico Brasileiro antiquado e desatualizado,
em face do imenso progresso que alcanaram as cincias
mdicas e farmacuticas, em todo o mundo.
Releve-se, tambm, que desde 1.950 achava-se a obra
inteiramente esgotada, criando, assim, srias difculdades s
novas Farmcias e Laboratrios Industriais Farmacuticos,
que legalmente no podem funcionar sem a presena dsse
Cdigo Ofcial. Conseqentemente, de tdas as localidades
do Pas eram enviadas aos poderes pblicos constantes
advertncias salientando a necessidade de ser elaborada
uma nova edio, o que mais se avolumou durante os nove
anos de seu total esgotamento.
Eram estas fortes razes para que fsse ativada a elaborao
de uma segunda edio. Entretanto, difculdades de tda
a ordem foram aparecendo, impedindo que fsse levado
a trmo, mais depressa, to almejada obra, a despeito
do empenho e da boa vontade das nossas autoridades
sanitrias.
que se impunha uma completa reviso e atualizao de
todo o contedo da primeira edio, e essa tarefa era, sem
dvida, das mais difceis e delicadas, mxime num Pas
de larga extenso territorial, como o Brasil, quando se
faz mister uma colaborao ou contribuio de carter
nacional, como exigido no caso.
Pouco tempo depois da publicao da Farmacopeia e de
seu uso nos laboratrios farmacuticos, comearam a
surgir crticas, observaes, as quais foram sendo coligidas
e coordenadas pela ASSOCIAO BRASILEIRA DE
FARMACUTICOS, sediada na Capital da Repblica,
de vez que no existia, ainda, Comisso Ofcial para o seu
estudo e reviso.
Em O HISTRICO DA Farmacopeia BRASILEIRA,
inserto na presente edio, se encontra notcia detalhada
das atividades desenvolvidas para a completa reviso e
atualizao desta segunda edio do Cdigo Farmacutico
Brasileiro. Acrescente-se que uma Comisso paritria,
constituda de membros da Capital da Repblica e de
So Paulo, teve a seu cargo a reviso fnal da obra em
impresso, com poderes para dirimir dvidas e falhas
verifcadas, bem como o de dar necessria uniformizao
linguagem farmacopica adotada pela Comisso Revisora
Ofcial.
Na elaborao da presente edio, a COMISSO DE
REVISO DA Farmacopeia seguiu, em princpio,
a mesma orientao adotada pela Farmacopeia
NORTE AMERICANA e, em parte, a da Farmacopeia
INTERNACIONAL, no que diz respeito distribuio
da matria e estudo das monografas; no tocante a ltima
Farmacopeia, levou em conta que foi o Brasil um dos
primeiros pases, que adotaram aqule Cdigo de carter
internacional.
As monografas que constam da primeira edio e que
vo continuar na segunda sofreram uma completa reviso,
de modo a serem atualizadas, quanto aos processos de
ensaio, de doseamento e outros requisitos, a fm de bem
corresponderem s exigncias da tcnica moderna.
Foi mantida a nomenclatura dos medicamentos em
portugus, na ordem alfabtica, como na edio anterior,
bem como os sinnimos e corrigida a nomenclatura ofcial
em latim.
Para os produtos patenteados ou registrados, foram adotados
os nomes pelos quais so conhecidos, assinalando-se com
clssico asterisco (*).
Na 1 Edio da Farmacopeia Brasileira, embora no
houvesse o Brasil assinado os Protocolos de Bruxelas
de 1.906 e 1.929, relativos Unifcao da Frmula
dos Medicamentos Hericos foram acolhidas na quase
totalidade as prescries nles contidas, conforme se
pode verifcar nos quadros comparativos includos na
Farmacopeia.
Pelo novo Protocolo de 20 de Maio de 1.952 foram
derrogados os anteriores, sendo adotadas em substituio as
prescries correspondentes da Farmacopeia Internacional,
da Organizao Mundial de Sade. Acolhida com aplausos
no Brasil a Farmacopeia Internacional, como bem traduziu
sua delegao ao 2 Congresso Pan-Americano de Farmcia
e Bioqumica, realizado no Peru em 1951, a 2 edio da
Farmacopeia Brasileira atendeu tanto quanto possvel s
referidas prescries.
A Comisso de Reviso, aps meticuloso estudo, deliberou
que um grande nmero de drogas e preparaes galnicas
ofcinais diversas, presentemente de pouco emprgo,
fssem suprimidas da 2 edio, sendo includas, em
grande parte, no Formulrio Nacional, a ser em breve
tempo publicado, como complemento da Farmacopeia.
A Comisso, tendo em vista a nulidade de ao teraputica
de muitas drogas e medicamentos, bem como o completo
desuso atualmente de numerosos outros, deliberou, aps
longos interrogatrios a todos os membros da Comisso
Ofcial e das Sub-Comisses Estaduais, a excluso de
monografas cuja relao vai mais adiante.
Tomando em considerao o grande progresso atingido nas
trs ltimas dcadas no campo da Medicina e da Farmcia,
foram includas na presente edio numerosas monografas
de valiosos medicamentos, que presentemente dominam
a teraputica moderna tais como: anti-biticos, sulfas,
hormnios, vitaminas, barbitricos, etc., conforme a
relao que se ver mais adiante.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 11 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
a
1
Por fm vai transcrita a completa relao de tdas as
personalidades, que, com tanto empenho e devotamento,
deram sua valiosa colaborao, para que a nova edio
se tornasse brilhante realidade. Neste ponto, seria injusto
se no fsse destacada especialmente a COMISSO
DE PADRONIZAO FARMACUTICA DE SO
PAULO que, patrioticamente, deu preciosa e constante
contribuio, empregando o mximo de seu esfro para
que a nova edio chegasse a seu trmino, nos moldes das
mais adiantadas Farmacopeias do Mundo.
A Comisso de Reviso da Farmacopeia sentir-se-
recompensada pelo grande esfro despendido, se a nova
edio puder corresponder, como de esperar, sua elevada
fnalidade prtica, que a perfeita seleo das matrias
primas de emprgo medicinal e sua padronizao, condio
precpua da atividade e efcincia dos medicamentos,
prestando destarte, sade pblica do Pas, relevante
servio.
Rio de Janeiro, 22 de fevereiro de 1959
Luis Salgado Lima Filho
Presidente da Comisso de Reviso da Farmacopeia
APRESENTAO DA FARMACOPEIA
BRASILEIRA, 3 EDIO
No contexto dos numerosos eventos que vem assinalando
a execuo dos Planos Nacionais de Desenvolvimento,
como marcos histricos no crescimento global do pas,
no poderia estar ausente o setor Sade e, dentre as
suas realizaes bsicas, o lanamento da Farmacopeia
Brasileira, em edio revista e atualizada, para os tempos
de hoje.
Da a tomada de algumas providncias no frutifcadas,
a partir de 1962, que s se corporifcaram e vieram a ter
culminncia na atual gesto do Ministro Paulo Almeida
Machado, mediante nova iniciativa, concretizada atravs da
Secretaria Nacional de Sade e do seu rgo especfco, o
Servio Nacional de Fiscalizao da Medicina e Farmcia.
Designou o Sr. Ministro a nova Comisso de Reviso da
Farmacopeia, mediante a Portaria 276/75, colegiado esse
que cumpriu a sua misso, em prazo satisfatrio, havendo
contado com a valiosa cooperao do Conselho Federal de
Farmcia.
Aprovando esta 3 edio da Farmacopeia, com a expedio
do Decreto 78.840/76, referendado pelo Ministro da
Sade, o Exmo. Sr. Presidente da Repblica contemplou
o Ministrio da Sade e a classe mdica e farmacutica
do pas, com mais esse importante instrumento farmaco
tcnico e normativo de grande alcance, na sequncia
de outras medidas de operacionalizao que vm sendo
implantadas nesse destacado Setor da vida nacional.
Ao submeter os originais desta 3 edio aprovao do
Presidente Ernesto Geisel, o Ministro no s a obteve, como
pde, e era de seu empenho, comemorar o cinquentenrio
da 1 edio, lanada, exatamente, no dia 25 de novembro
de 1927, dia e ms coincidentes com os desta publicao.
A reviso realizada sobre a edio anterior foi laboriosa e
minuciosa, de molde a que pudessem os meios interessados,
contar com um instrumento de normas e consultas da
maior credibilidade e segurana, o que se evidenciar ao se
examinarem as grandes modifcaes acrescidas no texto atual.
Considerou-se, e muito, que a experincia internacional
ganhou mais fortes convices de que os farmacos
utilizados, e os meios de sua identifcao e controle, cada
vez mais se generalizam. Conquanto legtimo fortalecer-
se os fundamentos dos valores teraputicos regionalizados,
sobressai, por evidente a uniformizao dos controles.
A parte os recursos teraputicos advindos da fora - com
representatividade cada vez menor - a responder pelas
distines locais, crescem os quimioterpicos, no volume e
na qualidade, favorecendo a uniformizao dos mtodos de
identifcao e controle. Decorreram da as Farmacopeias
Europias e Internacional, esta ltima ganhando estatura
de parmetro a respeitar e acolher.
No foi outro o roteiro da Comisso. No quanto foi
possvel, prevaleceram as normas da Organizao Mundial
da Sade. Assim, a nomenclatura latina precedendo a
nacional, o nome qumico e a frmula molecular, e mesmo
os mtodos gerais de anlises.
No se perdeu de vista os recursos laboratoriais dentro
da realidade nacional Por isso mesmo, e quando possvel
e necessrio, adotaram-se mtodos diversos, simples
e sofsticados, para um mesmo exame. Por outro lado,
tendo presente como necessidade incontornvel a
precisa identifcao dos agentes teraputicas constantes
dos ftofrmacos, s foram includos na Farmacopeia
aqueles para os quais j dispomos de mtodos efcazes de
identifcao e doseamento. Edies subseqntes sob a
forma de Suplementos, e o prprio Formulrio Nacional
- que certamente se editar - viro preencher lacunas
existentes.
A vasta listagem de novos agentes teraputicas obriga,
necessariamente, ajuizar sua efetiva necessidade a nvel
nacional.
A indstria farmacutica foi convidada a se manifestar,
oferecendo subsdios por via das entidades representativas,
contribuio essa que mereceu judiciosa triagem da
Comisso.
Acresce, ainda, que a par dessa relao e dos subsdios,
tomou-se por legtimo, tambm, um levantamento dos
medicamentos de maior representatividade no receiturio
e consumo nacionais.
Tem-se, pois, que esse elenco e, mais, as monografas
revistas, remanescentes da 2 edio, constituem, no
todo, o acervo monogrfco da 3 edio da Farmacopeia
Brasileira.
Por certo restaro outras monografas a acrescentar,
tanto como algumas existentes, ou persistentes, talvez
possam estar suscetveis de supresso. Esta evidncia s
12 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
1
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
fala em favor da prpria Farmacopeia, dinmica como a
teraputica, e pendente de atualizaes mais frequentes,
como soe ser a prpria Farmacologia.
Tendo em conta que a 2 edio da Farmacopeia
Brasileira encontra-se esgotada, e que muitas monografas
constantes da mesma, no revistas, representam ainda
fonte bibliogrfca de mrito e com fora legal, decidiu a
Comisso que o 1 Suplemento da 3 edio representar,
no todo e exclusivamente, o constante daquele acervo, a se
publicar em sequncia imediata a desta nova edio.
Crticas, correes e reparos, que se espera, todos sero
compreensivelmente aceitos. E roga-se, desde agora,
que sejam feitos de modo claro e objetivo, para maior
facilidade das edies que se sucedero. Todos eles,
quando construtivos, representaro valioso subsdio para
o aprimoramento da Farmacopeia Brasileira, tanto quanto
este trabalho pretende ser, no confronto natural com a
edio anterior.
PREFCIO DA FARMACOPEIA BRASILEIRA,
4 EDIO
Dando cumprimento s disposies do Decreto Federal
n 78.840, de 25/11/1976, a nova edio da Farmacopeia
Brasileira vem ao encontro dos desejos da comunidade
tcnico-cientfca brasileira, manifestamente interessada
na reviso da edio anterior.
A Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira, constituda pela Portaria n 151/82 do Exmo.
Ministro da Sade, s pde realizar seu trabalho graas
ao apoio decisivo da Secretaria Nacional de Vigilncia
Sanitria - SNVS - do Ministrio da Sade. Acordos
e convnios celebrados entre a SNVS, a Central de
Medicamentos - CEME - do Ministrio da Previdncia
e Assistncia Social - MPAS - e o Conselho Nacional
de Desenvolvimento Cientfco e Tecnolgico - CNPq
-, asseguraram Comisso recursos fnanceiros
indispensveis, incluindo bolsas de estudos para execuo
dos trabalhos.
A elaborao das monografas foi confada a profssionais
com efetiva experincia no assunto; estas monografas
foram revisadas por outros profssionais do mesmo campo
de atividade. Apesar disto, eventuais imperfeies, erros ou
omisses so de responsabilidade exclusiva da Comisso
Permanente de Reviso da Farmacopeia Brasileira, a quem
coube a aprovao do texto fnal.
A 4 Edio da Farmacopeia Brasileira marca o incio de
nova era. Trata-se de edio na qual se adota novo sistema de
apresentao. O rpido avano da tecnologia e a crescente
complexidade das substncias medicinais determinam a
necessidade de frequentes revises da Farmacopeia. Para
facilitar estas revises e possibilitar introduo de novas
monografas e mtodos de anlise necessrios, a Comisso
adotou esta nova forma de apresentao.
O presente volume constitui a Parte I da Farmacopeia e
compreende as generalidades, e os mtodos gerais de
anlise. A Parte II ser constituda de monografas de
matrias-primas e especialidades farmacuticas, publicadas
em fascculos. Um ndice indicar o ttulo das monografas,
seus nmeros de referncia e a data para sua entrada em
vigor.
A Farmacopeia Brasileira em sua 4 edio tem vigncia
em todo o Territrio Nacional. A nomenclatura, os mtodos
de identifcao e anlise e todos os demais dados nela
contidos prevalecem sobre quaisquer outros assinalados
em cdigos farmacuticos diversos. Nos casos omissos,
podem ser utilizados a Farmacopeia Internacional, a
Farmacopeia Europia e outros cdigos farmacuticos em
suas ltimas edies.*
As monografas da Farmacopeia Brasileira 4 edio
estabelecem parmetros que o produto dever satisfazer
a qualquer tempo durante seu perodo de uso e no para
serem interpretados somente como especifcaes para
liberao por parte do fabricante.
A no incluso de um frmaco ou adjuvante de fabricao
na 4 edio da Farmacopeia Brasileira no dispensa estas
substncias de anlise segundo outros cdigos ofciais; assim
como a presena de impureza no descrita especifcamente
na Farmacopeia no signifca que a substncia pode ser
usada pelo simples fato de a Farmacopeia no a especifcar.
Nestes casos, a deciso deve ser tomada com base no bom
senso tcnico e nas boas prticas de fabricao.
A Farmacopeia obra para profssionais devidamente
qualifcados e treinados. Por este motivo, no fornece
explicaes didticas, apresentando as monografas com
redao clara, sucinta e desprovidas de mincias julgadas
desnecessrias pela Comisso.
A Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira torna pblicos seus agradecimentos a todos
aqueles que colaboraram no preparo desta edio e, em
especial, ao Conselho Federal de Farmcia pelo apoio que
possibilitou a publicao ofcial da F. Bras. IV.
* Normas Nacionais extrafarmacopicas devero obter
previamente aprovao da Comisso Permanente de
Reviso da Farmacopeia Brasileira do Conselho Nacional
de Sade.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 13 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2
2 HISTRICO
A terceira edio da Farmacopeia Brasileira esperou
dezessete anos para ser publicada por meio do Decreto N
78.840 de vinte e cinco de novembro de 1976 e refora a
edio anterior ampliando e modernizando o seu contedo.
Da mesma forma que as anteriores, a quarta edio da
Farmacopeia Brasileira foi elaborada a partir de iniciativa
de abnegados profssionais da sade. Os trabalhos foram
iniciados 1982 com a criao da Comisso de Reviso da
Farmacopeia Brasileira (CPRFB) nomeada pelo Diretor da
Secretaria Nacional de Vigilncia Sanitria, Dr. Antnio
Carlos Zanini.
Somente em 1988 foi possvel o lanamento da Parte I da
quarta edio, contendo mtodos gerais, e deu-se incio a
elaborao da Parte II contendo as monografas de frmacos
e especialidades. A entrega do primeiro fascculo se deu
em 1996. A dedicao, persistncia e incansvel trabalho
do Dr. Celso F. Bittencourt, ento Presidente da CPRFB,
contriburam para a criao e manuteno da infraestrutura
necessria ao desenvolvimento dos fascculos da quarta
edio at a sua concluso reforando as bases para o
prosseguimento dos trabalhos at o presente. A participao
do meio acadmico, por meio de universidades pblicas,
foi e continua a ser, intensa e imprescindvel.
Com a criao da Anvisa, em 1999, a reviso permanente
da Farmacopeia Brasileira passa a ser de responsabilidade
administrativa, tcnica e cientfca da agncia. O slido
apoio da Diretoria Colegiada, desde ento, especialmente
por seu primeiro Diretor Presidente Dr. Gonzalo Vecina
Neto, levou a Comisso Permanente de Reviso da
Farmacopeia Brasileira a atingir a maturidade de seus
trabalhos.
Foram construdas metodologias de trabalho baseadas
nas mais modernas e atualizadas referncias mundiais em
consonncia com publicaes de cdigos farmacuticos
realizados por congneres de farmacopeias internacionais
de grande respeitabilidade na esfera farmacutica mundial.
Por meio de contratos e convnios conseguiu-se fnanciar
estudos laboratoriais e pode-se, assim, serem lanados os
fascculos 2 (2000); 3 (2002); 4 (2003); 5 (2004) e 6 (2005)
esse ltimo j na gesto do Diretor-Presidente Dr. Dirceu
Raposo de Mello, completando assim, a quarta edio da
Farmacopeia Brasileira.
Nesse nterim foram ainda publicados, o fascculo 1
da Farmacopeia Homeoptica Brasileira 2 edio, e
o Formulrio Nacional. Foram certifcados 67 lotes
de substncias qumicas de referncia da Farmacopeia
Brasileira e monitorados outros 58 lotes.
O fato de uma nova edio da Farmacopeia Brasileira,
no revogar edies anteriores sempre foi um entrave
para as aes reguladoras de vigilncia sanitria. Decidiu-
se, portanto, trabalhar a quinta edio de forma a realizar
BREVE ATUALIZAO HISTRICA DA
FARMACOPEIA BRASILEIRA, 5 EDIO
A quase centenria Farmacopeia Brasileira ilustra um
ciclo de grande importncia para o pas. Partindo de sua
primeira edio, fruto de laborioso trabalho de um nico
farmacutico, atravessou oito dcadas buscando seu
espao, de fato e de direito, como instrumento fundamental
de apoio s polticas nacionais de sade emanadas de
governos com projetos srios de proteo ao cidado
brasileiro.
Tivessem sido respeitadas as determinaes dos decretos
e resolues que indicavam reviso a cada quinqunio
estar-se-ia publicando a sua dcima stima edio o que
infelizmente no est ocorrendo, certamente por problemas
ocorridos mas sem nenhum demrito ao passado, visto que
o nosso objetivo sempre olhar para frente.
Inicia-se o sculo XX, as boticas so os principais locais
da prtica sanitria e o pas experimenta a convivncia com
a sua jovem repblica. Rodolpho Albino Dias da Silva se
entrega a um trabalho hercleo de repassar para um livro
toda uma vida de pesquisa sobre as drogas vegetais e
animais, descrio de produtos qumicos e de preparaes
ofcinais. Nasce, assim, a primeira edio da Farmacopeia
Brasileira, ofcializada pelo governo federal por meio do
decreto N 17.509 de quatro de novembro de 1926, porm
obrigatria a partir de quinze de agosto de 1929.
Uma grande guerra assola o planeta nos anos quarenta e
em seguida uma grande mudana mundial se faz sentir em
todos os pases desenvolvidos ou em desenvolvimento, e
a nossa primeira edio j no mais cumpre o seu papel.
As boticas so substitudas, gradativamente, por farmcias
que no mais realizam a arte da manipulao magistral e
decretado o incio de um fm do enorme servio prestado
pelo profssional de farmcia populao. O pas invadido
por indstrias multinacionais que, aos poucos, conseguem
eliminar todas as pequenas empresas brasileiras do ramo.
Paralelamente, tem-se incio ao acesso de medicamentos
modernos que exigem controle de qualidade diferenciado
devido produo em grande escala e quantidade de
frmacos sintetizados e originrios de diversas fontes.
A Farmacopeia no escapou do movimento modernista
impresso pelo Presidente Juscelino Kubitschek que, em
1959 assina o Decreto N 45.502 aprovando a segunda
edio da Farmacopeia Brasileira.
J em outra realidade, aquela edio se apresenta voltada
para os insumos e especialidades farmacuticas buscando
padres nacionais de qualidade dos bens de sade a serem
disponibilizados sociedade. As formulaes ofcinais
foram, ento, enviadas para uma publicao futura que
se pretendia publicar como Formulrio Nacional o que
somente ocorreu nos anos oitenta.
14 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
um levantamento exaustivo de todos os textos publicados
nas quatro edies, avaliar necessidades de permanncia,
de substituio de textos e procedimentos com ou sem
avaliao laboratorial, e de excluso de monografas
obsoletas.
Dessa forma, a quinta edio revoga todas as demais edies
e pretende servir de ncleo central de edies futuras
em um processo contnuo de reviso buscando sempre a
insero em uma realidade internacional colocando-a em
destaque entre as melhores farmacopeias. Servir, tambm,
para nortear a proposta de uma farmacopeia conjunta
com pases do Continente sul americano. Atualmente a
Comisso da Farmacopeia Brasileira possui assento como
observador das Farmacopeias Europeia e Internacional e
reconhecimento mtuo com a Farmacopeia Argentina.
A Comisso da Farmacopeia Brasileira e todos seus
comits possuem hoje fortes aliados dentro da Agncia
Nacional de Vigilncia Sanitria com destaque especial
para a Dra. Maria Ceclia Martins Brito, incansvel
batalhadora para que se tornem realidade todas as aes
propostas pelo colegiado da Comisso e dos Comits. No
nos tem faltado posicionamento favorvel, quer seja na
conduo dos processos de aprovao de projetos inerentes
s nossas atividades, bem como nas inmeras necessidades
logsticas para facilitao dos trabalhos da Comisso e dos
Comits compostos por profssionais de alto nvel e que
exerciam a funo por meio do voluntariado.
Ter uma farmacopeia uma questo de segurana nacional,
desenvolvimento tcnico e cientfco, insero em um
patamar de reconhecimento mundial e no est mais na
esfera de simples poltica de Governo e sim de Estado.
Este fato traz CFB tranquilidade em saber que executa
um projeto de interesse nacional sem volta e com agenda
a ser cumprida dentro da poltica sanitria praticada pelo
rgo regulador e pelo Ministrio da Sade.
No se pode ser ingnuo em no se assumir que algumas
falhas nesta quinta edio sero rapidamente identifcadas,
porm est em fase de criao na Coordenao da
Farmacopeia Brasileira, estrutura que visa atender
rapidamente aos questionamentos dos usurios fornecendo
respostas rpidas e objetivas que possam esclarecer dvidas
sobre os textos publicados. Pretende-se, ao fnal de 2011,
lanar o primeiro suplemento trazendo as modifcaes,
correes e incluses.
Faz-se necessrio informar que todos os textos publicados
na quinta edio passaram por consulta pblica para
acesso do cidado e livre manifestao, portanto uma
obra cuja construo foi coletiva com a participao dos
interessados no tema. Todas as manifestaes externas
foram consideradas.
A histria da nossa farmacopeia vem sendo contada, com
primor, pelos nossos decessores e contm dados muito
importantes para a compreenso de toda a sua evoluo.
Optamos em reproduzi-los, com exceo do histrico
no contemplado na 1 edio, sem nenhum retoque para
resguardar a autenticidade e fornecer ao leitor a impresso
de, tambm, estar participando dessa histria.
Como Presidente da Comisso da Farmacopeia Brasileira
resta-nos o espao para externar os sinceros agradecimentos
a todos que ajudaram a construir esta obra e ter a certeza
que continuaremos a trabalhar de forma parceira para
fnalmente conseguirmos manter atualizada e moderna a
FARMACOPEIA BRASILEIRA.
Gerson Antnio Pianetti
Presidente da CFB
HISTRICO DA FARMACOPEIA BRASILEIRA,
2 EDIO
A primeira meno legal estabelecendo obrigatriamente o
Codex francs como Farmacopeia ofcial do Brasil a que
consta do Decreto n 828 de 29 de setembro de 1.851, em
seu artigo 45, cujo teor o seguinte:
vigorou como cdigo farmacutico ofcial a Farmacopeia
Geral para o Reino e Domnios de Portugal, de autoria
do Dr. Francisco Tavares, professor da Universidade de
Coimbra, publicada em 1.794 por ordem da Rainha D.
Maria I.
Dessa data em diante, apesar de nossa emancipao
poltica, continuou a ser adotada a mesma Farmacopeia,
e aps 1.837 tambm o Codex Medicamentarius, francs.
Para a composio dos remdios ofcinais seguir-se-
a Farmacopeia Francesa, at que se ache organizada
uma Farmacopeia Brasiliense, para o que o Govrno
nomear urna Comisso de pessoas competentes. Depois
de publicada a Farmacopeia Brasiliense, que o ser
por autorizao do Govrno, os Boticrios devero,
ter os remdios preparados segundo as frmulas dessa
Farmacopeia, o que no inibe que os possam ter segundo
as frmulas de outras Farmacopeias para satisfazerem s
prescries dos facultativos, os quais podem receitar como
entenderem.
No anexo ao Regulamento, contendo a Tabela dos
medicamentos, vasilhames, instrumentos, utenslios e
livros, organizada para as boticas do Imprio, veio a
lista dos livros que deviam as boticas possuir: - Cdigo
Francs; Conspecto das Farmacopeias, por Jourdan;
Matria mdica e Formul rio de Bouchardat; Farmacopeia
Geral; Farmacopeia de Foy; Cdigo Farmacutico e
Farmacografa de Agostinho Albano da Silveira Pinto
(ltima edio).
O artigo 58 do Decreto n 8.387, de 19 de janeiro de 1.882,
reproduziu as determinaes do artigo 45 do Decreto n
828 de 1.851; apenas houve a modifcao de algumas
palavras e da lista de livros, de cuja ltima edio, o
farmacutico devia sempre possuir um exemplar. Alm
do Codex francs, eram exigidos mais os formulrios
de Dorvault, Bouchardat. Fosagrives, Jeannel, Rveil,
Gallois, Chernoviz, Langaard, Farmcia prtica de
Deschamps (dAvallon), Anurio de Mhu, Guia prtico de
Le Page e Patrouillaud, Tratado de Farmcia de Soubeiran,
Dicionrio de alteraes e falsifcaes de Chevalier e
Baudrimont, Vademecum de Ferrand.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 15 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2
Durante o longo perodo de 1.851 a 1.929 foi obrigatrio o
Codex francs, para a confeco dos preparados ofcinais,
at que estivesse organizado o Cdigo Farmacutico
Brasileiro. Assim determinaram todos os regulamentos
sanitrios, entre les os dos Decretos n 169 de 1.890; n
1.172, de 1.892; n 1.647, de 1.894; n 2.449, de 1.897,
cuja tabela de livros foi reduzida ao Codex francs e
aos Formulrios de Dorvault, Bouchardat, Chernoviz e
Langaard; n 2.458 de 1.897; 5.156 de 1.904; 14.189 e
14.354, de 1.920 (D. N. S. P.); 15.003, de 1.921 e 16.300,
de 31-12-1923.
No entanto, o desejo de possurem os farmacuticos
brasileiros seu Cdigo Nacional foi manifestado em muitas
oportunidades pelos rgos cientfcos de classe. Vrias
comisses foram nomeadas para sua elaborao, sem
resultado.
Foram vos os esforos de Ezequiel Corra dos Santos,
de Silva Costa, de Corra Dutra, Oliveira Fausto, Almeida
Rego, Eugnio Marques de Hollanda, Eduardo Julio
Janvrot e outros.
Smente em 1.887, atendendo s solicitaes dos centros
cientfcos nacionais, o Govrno Imperial procurou resolver
o problema, instituindo uma comisso, da qual faziam
parte, entre outros, Ezequiel Corra dos Santos Filho,
Agostinho Jos de Souza Lima e Marques de Hollanda.
Dessa comisso, porm, nada de prtico resultou, de sorte
que, passados dez anos, em 1.897, o Ministro do Interior
e Justia, Amaro Cavalcanti, nomeou outra comisso com
a mesma fnalidade e da qual faziam parte os professres
Agostinho de Souza Lima, Csar Diogo e Orlando Rangel.
Fracassou tambm a nova tentativa.
O Brasil, porm, que sempre tem sabido ombrear com as
demais naes civilizadas em todos os ramos das cincias,
das artes, etc., no podia continuar a ser regido, quanto ao
exerccio da Farmcia, por um cdigo estrangeiro, que,
embora timo para o seu pas, no satisfazia em absoluto
s novas necessidades. Por isso, embora reconhecendo
o arrjo de tal iniciativa, resolvemos arcar com a rdua
tarefa e alta responsabilidade de redigir o nosso futuro
cdigo farmacutico, fados em que o nosso grande amor
profsso vencesse todos os bices, transpusesse todos
os obstculos. (*) O Farmacutico, na ocasio ainda de
nome pouco conhecido, Rodolpho Albino Dias da Silva,
em 1.924, aps mais de dez anos de paciente trabalho, pde
apresentar seu projeto de Farmacopeia Brasileira ao Dr.
Carlos Chagas, Diretor Geral do Departamento Nacional
de Sade Pblica. Para julgar sse trabalho, nomeou o
Dr. Chagas uma comisso, constituda pelos Professres
Doutores Antnio Pacheco Leo, Renato de Souza Lopes
e Artidnio Pamplona, e Farmacuticos Alfredo da Silva
Moreira, Jos Malhado Filho e Isaac Werneck da Silva
Santos.
Aps exame minucioso da obra, essa Comisso resolveu
aceit-la, solicitando do Govrno a sua ofcializao, como
Cdigo Nacional Farmacutico, com a supresso, porm,
de certos artigos por ela considerados de uso assaz restrito
para serem ofcializados, os quais vm enumerados no
prefcio da primeira edio.
Em 4 de novembro de 1.926, pelo Decreto n 17.509,
assinado pelo Presidente da Repblica, Dr. Arthur da Silva
Bernardes, e pelo Ministro do Interior e Justia, Dr. Affonso
Penna Junior, nos termos do artigo 252 do Decreto n.
16.300, de 31 de dezembro de 1923, foi aprovada e adotada
como Cdigo Farmacutico Brasileiro a Farmacopeia
Brasileira, elaborada pelo Farmacutico Rodolpho Albino
Dias da Silva, com as emendas da comisso revisora. O
Cdigo entraria em vigor 60 dias depois da publicao da
primeira edio ofcial, fcando sua execuo a cargo do
Departamento Nacional de Sade Pblica, por intermdio
da Inspetoria de Fiscalizao do Exerccio da Medicina.
Executou a obra, mediante concorrncia publica, a
Companhia Editra Nacional, de So Paulo, que terminou
sua publicao em 1.929. Ficou obrigatria a Farmacopeia
a partir de 15 de agsto de 1.929.
Afnal, tinha o Brasil sua Farmacopeia, obra de um
s homem, obra que era, no julgamento de eminentes
farmaclogos do mundo, um dos mais adiantados e
atualizados cdigos farmacuticos do seu tempo.
Rodolpho Albino, natural do Estado do Rio de Janeiro,
nascido na cidade de Cantagalo, faleceu prematuramente
no Rio de Janeiro, aos 42 anos de idade, a 7 de outubro de
1931.
Todos os cdigos farmacuticos so revistos
peridicamente; e assim, a fm de coligir, coordenar e
estudar sugestes, de modo a proporcionar facilidades para
uma futura reviso, em 1.932, por proposta feita em uma
das sesses da Associao Brasileira de Farmacuticos, foi
nomeada uma comisso para tal fm, cabendo a presidncia
ao Prof. Joo Vicente de Souza Martins, que elaborou uni
regimento interno, criando vrias seces. Esta comisso
trabalhou at 1.938, quando o presidente da Associao
Brasileira de Farmacuticos, Prof. Virglio Lucas, dirigiu
ao Ministro da Educao e Sade o pedido de nomeao
de uma comisso ofcial para proceder reviso do nosso
Cdigo, visto j haver matria bastante a estudar e deliberar.
Essa Comisso, nomeada pela Portaria n 1.21-A, de 23
de junho de 1.938, pelo Ministro Gustavo Capanema, foi
constituda pelos sete membros seguintes: Profs. Renato
Guimares de Souza Lopes, Oswaldo de Almeida Costa,
Virglio Lucas e Abel Elias de Oliveira; Farms. Antnio
Caetano de Azevedo Coutinho e Oswaldo de Lazzarini
Peckolt e mdico Sebastio Duarte de Barros. Pela portaria
n 141, de 22 de abril de 1.939, foi a comisso acrescida de
mais dois membros, o Prof. Artidnio Pamplona e o Farm.
Jos Eduardo Alves Filho.
Essa Comisso, a despeito das difculdades encontradas,
realizou alguma coisa de til, propondo excluses de
drogas obsoletas e incluses de outras de maior intersse,
conforme o relatrio apresentado pelo Farm. Oswaldo
Peckolt ao Terceiro Congresso Brasileiro de Farmcia,
reunido em Belo Horizonte, de 14 a 21 de abril de 1.939.
O Decreto n 810, de 1 de julho de 1.942, que aprovou
o Regimento do Servio Nacional de Fiscalizao da
Medicina, imprimindo nova feio a sse rgo, considerou
adstritas ao mesmo, sob a presidncia do respectivo
diretor, a Comisso de Biofarmcia e a de Reviso da
16 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Farmacopeia; passou ento esta a ser constituda de um
professor da Faculdade Nacional de Farmcia ou de
outra a ela equiparada, um mdico clnico, um biologista
lotado no Instituto Oswaldo Cruz, um qumico, um tcnico
da indstria farmacutica e um farmacutico lotado no
S.N.F.M.F.
Em consequncia, o Diretor Geral do Departamento
Nacional de Sade, pela Portaria n 136, de 11 de julho do
mesmo ano, designou para essas funes o Prof. Oswaldo de
Almeida Costa, o mdico Dr. Sebastio Duarte de Barros, o
biologista Dr. Gilberto Guimares Vilela; o qumico Farm.
Oswaldo de Lazzarini Peckolt, o tcnico Prof. Virgilio
Lucas e o Farm. assistente Antnio Caetano de Azevedo
Coutinho, funcionando na presidncia o Diretor do Servio,
Dr. Roberval Cordeiro de Farias, e como Coordenador dos
trabalhos o Dr. Sebastio de Barros; posteriormente, o
Dr. Gilberto Vilela foi substitudo, a pedido, pelo tambm
biologista Dr. Tito Arcoverde de Albuquerque Cavalcanti,
e o Farm. Caetano Coutinho, que se aposentara do Servio
Pblico, teve como substituto o seu colega de repartio,
Farm. Flvio Frota, que passou a exercer funes de
secretrio, de acrdo com as disposies regimentares.
A nova Comisso, com a experincia recolhida das
comisses anteriores e com a da sua prpria atividade,
publicou o Primeiro Suplemento da Farmacopeia, psto
em vigor pela Portaria n 42, de 2 de maro de 1.943.
Prosseguiram os estudos, bem coordenados e com bom
rendimento, constituindo boa prova o aparecimento do
Segundo Suplemento e do Terceiro Suplemento, aprovados,
respectivamente, pelas Portarias n 24, de 14 de abril de
1.945, e n 39, de 13 de junho de 1.950.
Essas publicaes se apresentaram assaz interessantes, sob
vrios aspectos, entre les a incluso de drogas nacionais
como sucedneas de similares importadas, o registro de
novas frmulas e a substituio, em outras, de substncias
estrangeiras por nacionais, tudo isso sem comprometimento
das respectivas aes teraputicas.
O Regimento Interno baixado com o Decreto n 21.339, de
20 de junho de 1.946, e modifcado pelo Decreto n 29.828,
de 30 de julho de 1.951, tendo por fnalidade a organizao
e a competncia dos diversos rgos de sade pblica, no
alterou substancialmente as disposies que haviam sido
estabelecidas anteriormente, continuando a Comisso a
funcionar regularmente.
A Portaria n 147, de 6 de novembro de 1.951, aprovando as
Instrues sugeridas pelo Servio Nacional de Fiscalizao
da Medicina, de acrdo com o Regimento citado, e
modifcando a orientao at ento seguida, determinou a
nomeao, para a Comisso de Reviso da Farmacopeia
e suas subcomisses, de cientistas de todo o pas,
especializados nas matrias em estudo e incumbindo-a de
reeditar decenalmente a Farmacopeia; transformou ainda o
primitivo rgo em Comisso Executiva, coordenadora e
principal responsvel por todos os trabalhos.
Assim foram confrmados na qualidade de membros da
Comisso Executiva os antigos componentes da Comisso
Revisora, ocorrendo posteriormente a substituio do
presidente, Dr. Roberval Cordeiro de Farias, pelo Dr.
Vasco Barcelos e depois pelo Dr. Benoni Laurindo Ribas,
que o haviam sucedido tambm na Diretoria do Servio;
outrossim, nos impedimentos ocasionais dos respectivos
titulares, ocupou a presidncia o Dr. Luiz Salgado Lima
Filho, que posteriormente passou a ser seu presidente
efetivo.
Foram ento escolhidos os membros das subcomisses
tcnicas, recaindo a preferncia em profssionais do
Rio e dos Estados, farmacuticos, mdicos, qumicos e
professres, sendo depois aumentado o nmero, em virtude
de ulteriores designaes.
As subcomisses, em nmero de 10, fcaram assim
organizadas: Incluses, Excluses e Posologia;
Farmacognosia; Qumica Orgnica; Qumica Inorgnica;
Farmcia Galnica; Ensaios Biolgicos, Hormnios e
Vitaminas; Sros, Vacinas, Antibiticos e Esterilizao;
Generalidades, Ensaios, Reagentes e Tabelas;
Planejamento Geral; Redao; tendo como coordenadores,
respectivamente, o Dr. Sebastio de Barros, da primeira,
stima, nona e dcima; Prof. Oswaldo Costa, da segunda e
quarta; Farm. Oswaldo Peckolt, da terceira e oitava: Prof.
Virgilio Lucas, da quinta, e Dr. Tito Cavalcanti, da sexta.
Nessa mesma oportunidade foram criadas Comisses
Regionais nos Estados do Paran, Minas Gerais, Rio
Grande do Sul e So Paulo.
Neste Estado os trabalhos tiveram grande impulso, por
ter sido na sua Capital instalada, para fns idnticos, uma
Comisso de Padronizao Farmacutica, por comum
acrdo entre o Instituto Adolfo Lutz, a Universidade de
S. Paulo, a Fiscalizao do Exerccio Profssional e as
associaes estaduais representativas da indstria e do
comrcio da Farmcia, integrando-a as fguras de maior
evidncia rios meios cientfcos daquela unidade da
Federao, presidindo-a e secretariando-a o Dr. Ariosto
Bller Souto e o Farm. Jlio Sauerbronn de Toledo,
respectivamente.
Quando se reuniu, na cidade de So Paulo, o V Congresso
Brasileiro de Farmcia, conjuntamente com o III Congresso
Farmacutico e Bioqumico Pan-Americano, de 1 a 8 de
dezembro de 1954, a contribuio paulista se concretizou
num ante-projeto da Farmacopeia, apresentado quele
certmen, sendo dados novos rumos aos trabalhos.
O Congresso, ratifcando moo aprovada no III Congresso
Brasileiro de Farmcia, realizado em Belo-Horizonte de 14
a 21 de abril de 1.939, e o voto expresso no II Congresso
Farmacutico e Bioqumico Pan-Americano, levado a
efeito em Lima de 1 a 8 de dezembro de 1.951, recomendou
a organizao de um Formulrio Nacional, como unidade
complementar, do qual passariam a constar as drogas e os
medicamentos de emprgo usual que no constassem da
Farmacopeia.
Dos debates realizados resultou a deliberao de exame em
conjunto, pelas comisses do Rio e de So Paulo, de todo o
material de estudo at ento reunido, de modo a possibilitar
o trmino da reviso em curto prazo.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 17 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2
Encerrado o V Congresso, foi organizada nova
subcomisso tcnica de Planejamento e Reviso, assim
constituda: Antnio Caetano de Azeredo Coutinho,
Flvio Frota, Militino Cesrio Rosa, Oswaldo de Almeida
Costa, Oswaldo de Lazzarini Peckolt, Tito Arcoverde
de Albuquerque Cavalcanti, Virglio Lucas e Sebastio
Duarte de Barros, do Rio; Ariosto Bller Souto, Cendy de
Castro Guimares, Germnio Nazrio, Henrique Tastaldi,
Hrcules Vieira de Campos, Quintino Mingoja, Richard
Wasicky e Jlio Sauerbronn de Toledo, de So Paulo,
exercendo as funes de coordenador o Dr. Sebastio
Duarte de Barros e continuando na presidncia o Dr. Benoni
Ribas. Mses depois, os Drs. Oswaldo de Almeida Costa
e Tito Arcoverde de Albuquerque Cavalcanti cederam
seus lugares aos Professres Jayme Pecegueiro Gomes
da Cruz e Raymundo Moniz de Arago, temporriamente
substitudo pelo Almirante Vicente de Paulo Castilho.
Com a volta do Dr. Moniz de Arago coincidiu a incluso
no rgo paritrio de mais quatro elementos: o Prof. Carlos
Henrique R. Liberalli e o Farm. Vicente Ferreira Greco,
de So Paulo, e o Prof. Abel Elias de Oliveira e o Alm.
Farm. Vicente de Paulo Castilho, do Rio.
Por essa poca, o Dr. Sebastilio de Barros, que continuou
a integrar o grupo do Rio, deixou o cargo de coordenador,
sendo sucedido pelo Farm. Oswaldo de Lazzarini Peckolt
e, por ltimo, pelo Farm. Flvio Frota.
Dos trabalhos desta subcomisso, realizados no Rio e
em So Paulo, resultou ser possvel apresentar, em 1
de setembro de 1.955, ao Ministro da Sade, Dr. Aramis
Athayde, a 2 edio da Farmacopeia, nos seus originais,
sendo na mesma data assinado pelo Presidente da
Repblica, Dr. Joo Caf Filho, o Decreto n 37.843 de 1
de setembro de 1.955 que a ofcializou.
Atravs do Dr. Luiz Salgado Lima Filho, o Ministro da
Sade Mano Pinotti apresentou ao Presidente da Repblica,
Dr. Juscelino Kubitschek, decreto com novas incluses
e modifcaes e que tornou obrigatria a Farmacopeia
nas farmcias, laboratrios industriais farmacuticos e
estabelecimentos congneres. ste decreto tomou o n
45.502 de 27 de fevereiro de 1959.
Aqui se encontram a codifcao dos frmacos e frmulas
de atualidade, a normalizao das tcnicas empregadas
nas diversas prticas farmacuticas, a padronizao dos
mtodos, ensios, reagentes e tabelas, necessrios ao
exerccio profssional.
Da primeira edio muito se aproveitou, to sbiamente
fra ela redigida; numerosas monografas dela retiradas
passaro a constar do Formulrio Nacional, cuja feitura
j se encontra em fase de concluso, esperando-se sua
publicao em curto prazo, como segundo volume do
Cdigo Farmacutico Brasileiro.
(*) Rodolpho Albino Dias da Silva - Farmacopeia dos
Estados Unidos do Brasil- Prefcio, pg. VIII, 1 edio,
1.929.
Falecido.
HISTRICO DA FARMACOPEIA BRASILEIRA,
3 EDIO
A importncia das farmacopeias - assim considerados
os cdigos ofciais, ou ofcialmente reconhecidos, onde
se estabelecem a identifcao e os padres de qualidade
das substncias empregadas em farmacologia - cresce na
proporo do desenvolvimento cultural da Farmcia e da
Medicina.
Consignada sua primeira existncia no sculo III da nossa
Era, foi desde meados do sculo passado que as farmacopeias
ganharam ntidas caractersticas de necessidade nacional,
corporifcando o esforo do ajustamento dos recursos de
identifcao e controle das substncias teraputicas
natureza regional dos prprios frmacos, eis que, em sua
grande maioria, advinham da fora, usualmente nativa e
local, de rgos animais, e dos minerais admitidos como
prprios para fns teraputicos.
Caudatrio de Portugal na cincia e na tcnica, nosso Pas
sujeitou-se, ao tempo da Colnia, Farmacopeia Geral
para o Reino e Domnios, de Portugal, editada em 1.794.
Com a Independncia do Brasil, em 1.822, ocorreram
aberturas para outras infuncias culturais, e com facilidade
nosso Pas perflou-se orientao francesa, prevalecente
na poca para o mundo ocidental. Tanto assim que, em
1.851, por Decreto, foi estabelecida a obrigatoriedade da
Farmacopeia Francesa como cdigo ofcial para o Brasil.
De 1.851 a 1.929 toda a legislao sanitria brasileira
sustentou a mesma obrigatoriedade para a confeco
dos preparados ofcinais, at que estivesse organizado o
Cdigo Farmacutico Brasileiro.
Quinze de agosto de 1.929 foi o marco dessa redeno,
porquanto a partir daquela data passou a vigorar a
Farmacopeia dos Estados Unidos do Brasil, em todo o
territrio nacional, conquista amplamente festejada, ainda
mais porque se exaltava tambm o grande responsvel pela
mesma, o extraordinrio farmacutico Rodolfo Albino
Dias da Silva, que consumira doze anos inteiros, num
labor silencioso e beneditino, na composio das pginas
iluminadas de saber que haveriam de se erigir em brevirio
para os da sua grei, to harmonioso a ponto de se lhe
incluir como um dos melhores entre os coetneos, embora
devido competncia de artfce nico, feito difcil de ser
repetido.
Quanto ao mais da histria dos cdigos farmacuticos, a
2 edio da Farmacopeia Brasileira constitui repositrio
de mrito irrefutvel, at ao tempo daquela edio, motivo
plausvel para no remontarmos detalhes j conhecidos.
prprio das Farmacopeias, por melhor que sejam
elaboradas, sua reviso peridica, natural caracterstica
decorrente da evoluo da Farmacologia.
Da porque o Decreto Federal n 45.502, de 27 de fevereiro
de 1959, ao aprovar a Segunda Edio da Farmacopeia
Brasileira, j fxava sua reviso a cada dez anos,
independente das edies intermedirias de Suplementos.
18 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Tanto assim que a 13 de Junho de 1962, mediante Portaria
n 82 do Departamento Nacional de Sade; uma primeira
comisso foi constituda para os trabalhos de reviso,
para ela nomeados os Drs. Fernando Luz Filho, Lauro
Sollero, Maria Alzira Ferreira Nobrega, Laerte Manhes
de Andrade, Ansio Faria e Souza, Mrio Victor de Assis
Pacheco, Nilson dos Reis Rodrigues, e EIza Magalhes
Pcego como Secretria. Os trabalhos dessa comisso
fcaram adstritos a providncias preliminares, dando azo
a que em 16.4.68, pela Portaria n 28 do Departamento
Nacional de Sade, una nova comisso fosse constituda,
dela constando os Drs. Lcio Costa, Maria Alzira Ferreira
Nobrega, Lauro Sollero, Gobert de Arajo Costa, Emlio
Diniz da Silva, Joo Haikal Helou e Anbal da Rocha
Nogueira Jnior, e Josepha Paul como Secretria, com
desenvolvimento de trabalho semelhante ao da comisso
anterior.
A Portaria Ministerial n 112 de 20 de maro de 1972
criou um grupo de trabalho, composto pelos Drs. Evaldo
de Oliveira, Moacir Nogueira, Caio Romero Cavalcante e
Ten. Cel. Farm. Ex. Jlio Fernandes Silva, grupo este que
fxou algumas bases de trabalho, descontinuados em face
de razes aleatrias e contingentes.
Finalmente, a 25 de junho de 1975, por fora da Portaria
Ministerial n 266, foi constituda uma nova Comisso
de Reviso da Farmacopeia, dela participando os Drs.
Fernando Ayres da Cunha, Diretor do Servio Nacional
de Fiscalizao da Medicina e Farmcia, e Presidente da
Comisso, talo Suassuna, Maria Alzira Ferreira Nobrega,
Evaldo de Oliveira, Jos Aleixo Prates e Silva, Lauro
Sollero, Paulo Dias da Costa e, como Secretria, Dora
Alves Gonalves Cruz.
Disposta, desde o incio dos trabalhos, a concluir sua
misso em curto prazo, a Comisso, reunida pela primeira
vez a 5 de agosto de 1975, decidiu promover reunies
semanais na sede do Servio Nacional de Fiscalizao da
Medicina e Farmcia, Rio de Janeiro.
De princpio, absteve-se de constituir sub-comisses,
optando pela solicitao de colaboradores especiais para
os assuntos em que a prpria Comisso se julgasse incapaz
ou insufcientemente segura para decidir.
Com esta orientao, as etapas foram superadas
paulatinamente, e ganhando celeridade medida em que a
problemas se delineavam mais claros.
Na impossibilidade material e tcnica de resolver a todos
os problemas, a Comisso valeu-se da experincia de
outras comisses e rgos Tcnicos, e de Farmacopeias,
notadamente no que respeitava s orientaes da
Organizao Mundial da Sade. Aceitou, tambm,
oportunamente, o apoio do Conselho Federal de Farmcia
que, para uma colaborao mais integrada, montou todo
um dispositivo tcnico de servio permanente, facilitando
sobremaneira as diversas etapas do trabalho. Desde a
reavaliao da listagem primitiva das monografas, visando
atualiz-las, ao exaustivo esforo de alcanar unidade
redacional e tcnica s colaboraes advindas de relatores
de todos os recantos do Pas, afora tradues.
de muita pertinncia ressaltar o signifcativo fato de
que a colaborao profssional para relatar: monografas
representou um movimento de sentido nacional, acorrendo
adeses de todos os quadrantes do Pas.
Desse esforo conjunto - Ministrio da Sade (pelo
Servio Nacional de Fiscalizao da Medicina e Farmcia),
Comisso de Reviso da Farmacopeia (pelo esprito
de equipe presente em todos os estgios de trabalho),
Conselho Federal de Farmcia (que favoreceu infra-
estrutura material e humana para imprimir velocidade
ao trabalho) e relatores - foi possvel vencer o desafo
inicial de conquistar aprovao dos originais no evento do
cinquentenrio da 1 edio da Farmacopeia Brasileira.
A fxao dessa data, sobre ser justa homenagem, passou
a confgurar um prazo impossvel de ser prorrogado,
emprestando a todo o trabalho, por consequncia, clima
favorvel e dinmico, exigente de objetividade.
Temos, ao fnal, que das 770 monografas constantes da
2 edio subsistiram 280, mediante reviso de seu texto,
sendo que para tanto de muito valeram os reparos publicados
pelo Prof. Dr. Joo Haikal Helou. Foram incorporados 205
novas monografas, naturalmente aquelas que representam
novos agentes teraputicos, atendidas as normativas fxadas
pela Comisso e j referidas no Prefcio desta edio.
Admite-se que talvez coubessem outras monografas;
admite-se, por igual, que algumas no coubessem mais.
Mas ser preciso ter; presente que a Comisso adotou
critrios prprios, sujeitos realidade nosolgica e
teraputica nacional. Estes critrios, e no as monografas
podero suscitar pertinncias ou no. Naturalmente, a
Comisso nica e exclusiva responsvel pelos mesmos,
sem compartilhar com outros os mritos ou demritos de
sua orientao.
De mxima relevncia, a ter-se em conta, o fato de,
consoante os termos do ato que aprovou a 3 edio, as
monografas anteriores, no expressamente canceladas
nesta Farmacopeia, subsistem com validade para todos os
efeitos legais.
Admite-se, fnalmente, que no se ignora a tendncia
universal de corporifcar farmacopeia e formulrio num
s texto. Tentada desde logo a isso, a Comisso, decidiu,
entretanto, optar por um trabalho parcelado, disposta a
elaborar, logo a seguir, o Formulrio Nacional. Ainda
assim, esta segunda providncia nada mais representar
seno o desdobramento de um trabalho que se visa unifcar
na etapa subsequente elaborao do Formulrio, e que se
pretende, efetivamente cumprir.
HISTRICO DA FARMACOPEIA BRASILEIRA,
4 EDIO
So de natureza efmera os livros desta ordem, destinados
a espelharem um dos lados da farmacologia, cincia que
vai percorrer atualmente a fase mais acelerada da sua
evoluo. SOUZA MARTINS, in Relatrio de Introduo
da 3
a
edio da Farmacopeia Portuguesa, 1876.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 19 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2
O vocbulo Farmacopeia provm da aglutinao de
dois termos gregos, a saber, u = medicamento
ou veneno, e = fabricante e fabricao. As
Farmacopeias constituem cdigos farmacuticos ofciais
ou ofcialmente adotados, nos quais se estabelecem a
identifcao, os padres de qualidade e os mtodos de
anlise dos frmacos em uso. Existentes desde o sculo
III, os primeiros compndios eram de carter regional,
pois os frmacos de ento eram provenientes de rgos de
animais, de minerais e, sobretudo, da fora local e nativa.
Alguns chegaram a ser ofcializados, embora em carter
regional, como, por exemplo, o formulrio da Escola de
Salerno Regimen Sanitatis, de 1066, adotado em 1240
por Frederico II, Rei das Duas Siclias. As tentativas
empreendidas individualmente por diversos autores
no sentido de unifcar a descrio e identifcao dos
frmacos mais importantes datam do fnal do sculo XVII,
e do sculo XVIII. Entre outras obras, merecem citao
a Pharmacopeia Internationalis de Lmery (1690), as
Farmacopeias de James (1747), de De Quincy (1758),
de Triller (1764) e, especialmente, a Pharmacopeia
Universalis, de Jourdan (1828), que compilava dados de
quase 50 Farmacopeias e compndios diferentes. Nenhum
destes trabalhos, entretanto, possua carter ofcial.
As Farmacopeias nacionais, de carter ofcial e adoo
obrigatria, comeam a surgir no fnal do sculo XVIII e
incio do sculo XIX. Assim, foram publicadas as primeiras
edies das Farmacopeias, portuguesa (1794), holandesa
(1805), francesa (1818) e americana (1820).
O Brasil Colnia adotava a Pharmacopia Geral para o
Reino e Domnios de Portugal, de 1794, cuja autoria
atribuda a Francisco Tavares, professor da Universidade
de Coimbra.
Com a Independncia, volta-se o Brasil orientao
cultural francesa e, no campo da Farmcia, o Codex
Medicamentarius francs adquire fora legal. O
Regulamento da Junta de Higiene Pblica, mandado
executar pelo Decreto n
o
828 de 29/09/1851, sem especifcar
qual a Farmacopeia a ser cumprida, estabelece lista de
livros que as farmcias deveriam possuir, constando dela,
entre outros, a Farmacopeia Portuguesa de 1794, o Codex
Francs e o Cdigo Farmacutico Lusitano, da autoria de
Agostinho Albano da Silveira Pinto, cuja primeira edio
foi publicada em 1835 e hoje considerada como a 2
a
edio
da Farmacopeia Portuguesa.
J o Decreto n
o
8.387 de 19/01/1882 estabelece
textualmente: para a preparao dos remdios ofciais
seguir-se- a Farmacopeia francesa, at que esteja
composta uma Farmacopeia brasileira..., situao esta
que iria perdurar at 1926, quando o Decreto n
o
17.509 de
04/11/1926 aprovou a primeira Farmacopeia Brasileira,
de autoria de Rodolpho Albino Dias da Silva, tornada
obrigatria a partir de 15 de agosto de 1929.
A primeira edio da Farmacopeia Brasileira ombreava com
as Farmacopeias da poca, dos pases mais desenvolvidos,
revelando-se notvel pela preciso das monografas e,
sobretudo, pelo grande nmero de incluses de frmacos
obtidos da fora brasileira, no existentes em nenhuma
outra Farmacopeia.
A constante evoluo da farmacologia, a introduo de
novos frmacos na teraputica, o surgimento de novos
mtodos de anlise, mais modernos e precisos, e a
necessidade de especifcaes atualizadas para o controle
de matria-prima e produtos farmacuticos so fatores
fundamentais determinantes da obsolescncia dos cdigos
farmacuticos e da necessidade de revis-los e atualiz-
los periodicamente. O Decreto que aprovou a primeira
edio da Farmacopeia Brasileira foi omisso quanto s
revises; assim, a segunda edio veio luz quase 30 anos
aps a primeira e representou cinco anos de trabalho de
dez subcomisses especializadas. A 2
a
edio incorporou
as aquisies decorrentes da prpria atualizao da
farmacologia. No conseguiu, contudo, ser mais rica e
precisa do que a primeira edio, fruto de um s autor.
O Decreto Federal n
o
45.502 de 27/02/1959, ao aprovar
a 2
a
edio da Farmacopeia Brasileira, fxou sua reviso
a cada dez anos. Infelizmente, empecilhos diversos no
permitiram o cumprimento desse Decreto. Mais de 15 anos
decorreram, at que se cogitasse de uma nova edio.
Assim que, em 25 de novembro de 1976, foi ofcializada,
pelo Decreto n
o
78.840, a terceira edio da Farmacopeia
Brasileira. O mesmo Decreto fxou em cinco anos o prazo
para sua reviso. Realizada em tempo determinado e muito
curto, tarefa possvel de levar a termo somente graas ao
apoio do Conselho Federal de Farmcia, a obra despertou
sensveis manifestaes da comunidade tcnico-cientfca,
a recomendarem rpida reviso do seu texto, independente
do dispositivo legal.
Assim, a 4
a
edio surge com algum atraso. Procurou-se,
nesta edio, sanar as defcincias da anterior. Procurou-se,
tambm, adotar mtodos modernos de anlise, compatveis,
porm, com a realidade nacional. A publicao desta parte
e a adoo de uma nova sistemtica de apresentao que
possibilita sua contnua atualizao atravs de revises
permanentes so as metas prioritrias que a Comisso
Permanente de Reviso da Farmacopeia Brasileira se
prope alcanar.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
21 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
3 FARMACOPEIA BRASILEIRA
PRESIDENTES DAS EDIES ANTERIORES DA FARMACOPEIA BRASILEIRA
RODOLPHO ALBINO DIAS DA SILVA 1 edio
LUIZ SALGADO LIMA FILHO 2 edio
FERNANDO AYRES CUNHA 3 edio
JOO GILVAN ROCHA 4 edio Parte I
CELSO FIGUEIREDO BITTENCOURT 4 edio Parte II
COMISSO DA FARMACOPEIA BRASILEIRA - CFB
PRESIDENTE
GERSON ANTNIO PIANETTI
VICE-PRESIDENTE
MIRACY MUNIZ DE ALBUQUERQUE
MEMBROS
ADRIANO ANTUNES DE SOUZA ARAJO
Universidade Federal de Sergipe - UFS
ANTONIO CARLOS DA COSTA BEZERRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
CLVIA FERREIRA DUARTE GARROTE
Universidade Federal de Gois - UFG
EDUARDO CHAVES LEAL
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade INCQS / FIOCRUZ
ELFRIDES EVA SCHERMAN SCHAPOVAL
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
RICO MARLON DE MORAES FLORES
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
GERSON ANTNIO PIANETTI
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
JOO CARLOS PALAZZO DE MELLO
Conselho Federal de Farmcia - CFF
JOS CARLOS TAVARES
Universidade Federal do Amap - UNIFAP
22 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
KTIA REGINA TORRES
Ministrio da Sade - MS
LAURO DOMINGOS MORETTO
Sindicato da Indstria de Produtos Farmacuticos no Estado de So Paulo - Sindusfarma
LEANDRO MACHADO ROCHA
Universidade Federal Fluminense - UFF
LUIZ ALBERTO LIRA SOARES
Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN
MIRACY MUNIZ DE ALBUQUERQUE
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
ONSIMO ZARA PEREIRA
Associao Brasileira da Indstria Farmoqumica e de Insumos Farmacuticos - ABIQUIFI
SILVANA TERESA LACERDA JALES
Associao dos Laboratrios Farmacuticos Ofciais do Brasil - ALFOB
VLADI OLGA CONSIGLIERI
Universidade de So Paulo - USP
COORDENAO DA FARMACOPEIA BRASILEIRA
AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA - Anvisa
ANTONIO CARLOS DA COSTA BEZERRA - Coodenador
Especialistas em Regulao e Vigilncia Sanitria
ANDREA REZENDE DE OLIVEIRA
JAIMARA AZEVEDO OLIVEIRA
MARIA LCIA SILVEIRA MALTA DE ALENCAR
SILVNIA VAZ DE MELO MATTOS
COMITS TCNICOS TEMTICOS DA COMISSO
DA FARMACOPEIA BRASILEIRA - CTT
ANA MARIA SOARES PEREIRA
Universidade de Ribeiro Preto - UNAERP
BERTA MARIA HEINZMANN
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
ELFRIEDE MARIANNE BACCHI
Universidade de So Paulo - USP
EMIDIO VASCONCELOS LEITO DA CUNHA
Universidade Estadual de Campina Grande - UECG
APOIO POLTICA NACIONAL DE PLANTAS
MEDICINAIS E FITOTERPICOS
JOS CARLOS TAVARES CARVALHO - Coordenador
Universidade Federal do Amap - UNIFAP
ANA CECLIA BEZERRA CARVALHO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
ANA CLAUDIA FERNANDES AMARAL
Instituto de Tecnologia de Frmacos - Farmanguinhos /
FIOCRUZ
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 23 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
LUIZ ANTNIO BATISTA DA COSTA
Centro de Excelncia em Sade Integral do Paran - CESIP
NILTON LUZ NETTO JNIOR
Universidade Catlica de Braslia - UCB
ROSANE MARIA SILVA ALVES
Ministrio da Sade MS
WAGNER LUIZ RAMOS BARBOSA
Universidade Federal do Par - UFPA
CORRELATOS DE MEDICAMENTOS
TEREZINHA DE JESUS ANDREOLI PINTO -
Coordenadora
Universidade de So Paulo - USP
ADRIANA BUGNO
Instituto Adolfo Lutz - IAL
ALBA VALRIA DOS SANTOS
Baxter Hospitalar Ltda
DHALIA GUTEMBERG
Cmara Brasileira de Diagnstico Laboratorial - CBDL
IRENE SATIKO KIKUCHI
Universidade de So Paulo - USP
MICHELE FEITOSA SILVA
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
RENATA ARACELLI PIRES
Baxter Hospitalar Ltda
WALFREDO DA SILVA CALMON
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
DENOMINAES COMUNS BRASILEIRAS
AULUS CONRADO BASILE - Coordenador
Universidade de So Paulo USP
CARLOS CZAR FLORES VIDOTTI
Conselho Federal de Farmcia CFF
ELFRIEDE MARIANNE BACCHI
Universidade de So Paulo - USP
ONSIMO ZARA PEREIRA
Associao Brasileira da Indstria Farmoqumica e de
Insumos Farmacuticos - ABIQUIFI
PAULO CHANEL DEODATO DE FREITAS
Universidade de So Paulo - USP
RICARDO CHIAPPA
Unio Educacional do Planalto Central - UNIPLAC
ROSANA MIGUEL MESSIAS MASTELARO
Sindicato da Indstria de Produtos Farmacuticos no
Estado de So Paulo - Sindusfarma
SILVNIA VAZ DE MELO MATTOS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria Anvisa
EQUIVALNCIA FARMACUTICA E
BIOEQUIVALNCIA DE MEDICAMENTOS
SLVIA STORPIRTIS - Coordenadora
Universidade de So Paulo - USP
CHANG CHIANN
Universidade de So Paulo - USP
GERSON ANTNIO PIANETTI
Universidade Federal Minas Gerais - UFMG
JACQUELINE DE SOUZA
Universidade Federal de Ouro Preto - UFOP
LEONARDO DE SOUZA TEIXEIRA
Instituto de Cincias Farmacuticas de Estudos e Pesquisas
ICF
RAQUEL LIMA E SILVA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
RODRIGO CRISTOFOLETTI
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
SOLANGE MARIA COUTINHO BRANDO
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
TERESA CRISTINA TAVARES DALLA COSTA
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
ESPECIALIDADES FARMACUTICAS
ELFRIDES EVA SCHERMAN SCHAPOVAL -
Coordenadora
Universidade Federal do Rio Grande do Sul UFRGS
ANIL KUMAR SINGH
Universidade de So Paulo - USP
HRIDA REGINA NUNES SALGADO
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho -
UNESP
JAIR CALIXTO
Sindicato da Indstria de Produtos Farmacuticos no
Estado de So Paulo - Sindusfarma
24 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
LUCIANE VARINI LAPORTA
Centro Universitrio Franciscano - UNIFRA
MNICA DA LUZ CARVALHO SOARES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria Anvisa
NADIA MARIA VOLPATO
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
RUTH RIESINGER STRATTMANN
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
EXCIPIENTES E ADJUVANTES
PEDRO JOS ROLIM NETO - Coordenador
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
DLEY ANTONINI NEVES DE LIMA
Universidade Federal do Amazonas - UFAM
FABIANA CREMASCHI PALMA
Associao Brasileira dos Distribuidores e Importadores
de Insumos Farmacuticos, Cosmticos, Veterinrios,
Alimentcios e Aditivos - ABRIFAR
FABRICIO CARNEIRO DE OLIVEIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
GABRIELA GONALVES DA SILVA
Associao Brasileira dos Distribuidores e Importadores
de Insumos Farmacuticos, Cosmticos, Veterinrios,
Alimentcios e Aditivos - ABRIFAR
GEISIANE MARIA ALVES PRESMICH
Laboratrio Industrial Farmacutico de Alagoas LIFAL
JOS LAMARTINE SOARES SOBRINHO
Universidade Federal do Piau - UFPI
ROSALI MARIA FERREIRA DA SILVA
Universidade Federal do Par UFPA
FARMACOGNOSIA
AMLIA TERESINHA HENRIQUES - Coordenadora
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
CID AIMBIR DE MORAES SANTOS
Universidade Federal do Paran - UFPR
EVELIN ELFRIEDE BALBINO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
JOS ANGELO SILVEIRA ZUANAZZI (Ad hoc)
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
LILIAN AULER MENTZ
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
LUIZ ALBERTO LIRA SOARES
Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN
MARIA DAS GRAAS LINS BRANDO
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
RODNEY ALEXANDRE FERREIRA RODRIGUES
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
TATIANE PEREIRA DE SOUZA
Universidade Federal do Amazonas - UFAM
GASES MEDICINAIS
ALADE ALINE XAVIER LEAL - Coordenadora
Instituto de Tecnologia em Imunobiolgicos - Bio
Manguinhos FIOCRUZ
CRISTIANE RODRIGUES AUGUSTO
Instituto Nacional de Metrologia, Normatizao e
Qualidade Industrial - INMETRO
DESIRE MICHELS CORTEZ
Linde Gases Ltda.
HEITOR CONRADO
Air Liquide do Brasil Ltda
JOO PAULO SILVRIO PERFEITO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
KOICHI MIZUTA
Instituto de Pesquisas Tecnolgicas do Estado de So
Paulo - IPTSP
SLVIO FILGUEIRAS
Linde Gases Ltda.
HEMOCOMPONENTES E HEMODERIVADOS
JLIO CSAR CARESTIATO - Coordenador
Universidade Federal Fluminense - UFF
DENISE FERREIRA LEITE
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria Anvisa
HELDER TEIXEIRA MELO
Ministrio da Sade - MS
JANANA DUQUE DE SOUZA
Bio Manguinhos - FIOCRUZ
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 25 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
MARISA COELHO ADATI
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
MELNIA DE FTIMA CORDELINO
Baxter Hospitalar Ltda
NEEMIAS SILVA DE ANDRADE
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
SEVERINO BARBOSA
Universidade Federal do Pernambuco - UFPE
HOMEOPATIA
LEANDRO MACHADO ROCHA - Coordenador
Universidade Federal Fluminense - UFF
BIANCA RODRIGUES DE OLIVEIRA (Ad hoc)
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
CARLA HOLANDINO QUARESMA
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
EZEQUIEL PAULO VIRIATO
Laboratrio Homeoptico Almeida Prado Ltda
FRANCISCO JOS DE FREITAS
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
MARCELO CAMILO MORERA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MARIA DIANA CERQUEIRA SALES
Faculdade Brasileira - UNIVIX
RICARDO CHIAPPA
Unio Educacional do Planalto Central - UNIPLAC
RINALDO FERREIRA
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
INGREDIENTES FARMACUTICOS ATIVOS
MIRACY MUNIZ DE ALBUQUERQUE - Coordenadora
Universidade Federal de Pernambuco UFPE
ADRIANO ANTUNES SOUZA DE ARAJO
Universidade Federal de Sergipe UFS
ANDR AUGUSTO GOMES FARACO
Universidade Federal de Minas Gerais UFMG
DANIEL KARL RESENDE
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria Anvisa
LCIA DE FTIMA FRANCELINO DA SILVA
Laboratrio Central de Sade Pblica de Pernambuco -
LACEN
SAID GONALVES DA CRUZ FONSECA
Universidade Federal do Cear UFC
SEVERINO GRANJEIRO JNIOR
Laboratrio Farmacutico do Estado de Pernambuco
LAFEPE
TRCIO PASCHKE OPPE
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
MARCADORES PARA FITOTERPICOS
JOO CARLOS PALAZZO DE MELLO - Coordenador
Universidade Estadual de Maring UEM
ALBERTO JOS CAVALHEIRO
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho
UNESP
CECLIA ELENA DE FIGUEIREDO OGNIBENE
Associao dos Laboratrios Farmacuticos Nacionais
ALANAC
FERNO CASTRO BRAGA
Universidade Federal de Minas Gerais UFMG
MARIA DO CARMO VASQUES GARCIA
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
VALQUIRIA LINCK BASSANI
Universidade Federal do Rio Grande do Sul UFRGS
VALDIR FLORNCIO DA VEIGA JUNIOR
Universidade Federal Amazonas UFAM
SILVIA PAREDES FONTES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria Anvisa
MICROBIOLOGIA
CLVIA FERREIRA DUARTE GARROTE -
Coordenadora
Universidade Federal de Gois - UFG
ANA CRISTINA REGIS DE BARROS CORREIA
Universidade Federal de Pernambuco UFPE
CLAUDIO KIYOSHI HIRAI
Biolab Sanus Farmacutica Ltda
MARTIN STEPPE
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
26 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
MIRIAM DE FTIMA VIANNA LEONEL
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
ROSEMARIE APARECIDA DE ARAJO BONATTO
Merck Sharp & Dohme Farmacutica Ltda
SILSIA DE SOUZA AMORIM
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
TEREZINHA DE JESUS ANDREOLI PINTO
Universidade de So Paulo - USP
NORMATIZAO DE TEXTOS E IDENTIDADE
VISUAL DA FARMACOPEIA BRASILEIRA
ANTNIO BASLIO PEREIRA - Coordenador
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
FERNANDO HENRIQUE ANDRADE NOGUEIRA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
ISABELA DA COSTA CSAR
Instituto de Cincias Farmacuticas de Estudos e Pesquisas
ICF
JOS ANTNIO DE AQUINO RIBEIRO
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria - EMBRAPA
LAS SANTANA DANTAS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
PAULA CRISTINA REZENDE ENAS
Universidade Federal de Minas Gerais UFMG
PRODUTOS BIOLGICOS
EDUARDO CHAVES LEAL - Coordenador
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
DANIELA MARRECO CERQUEIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
DARCY AKEMI HOKAMA
Instituto de Tecnologia em Imunobiolgicos - Bio
Manguinhos FIOCRUZ
HISAKO GONDO HIGASHI
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho -
UNESP
LILIA RIBEIRO SERDIO
Instituto Vital Brazil - IVB
MARA EL-CORAB MOREIRA DE OLIVEIRA
Ministrio da Sade - MS
MARCO ANTONIO STEPHANO
Universidade de So Paulo - USP
ORLANDO SILVA
Serono Produtos Farmacuticos Ltda.
PRODUTOS MAGISTRAIS E OFICINAIS
VLADI OLGA CONSIGLIERI - Coordenadora
Universidade de So Paulo - USP
ELISABETE PEREIRA DOS SANTOS
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
JOS ANTONIO DE OLIVEIRA BATISTUZZO
Faculdades Oswaldo Cruz
LETCIA NORMA CARPENTIERI RODRIGUES
Universidade Federal de So Paulo - UNIFESP
GUILHERME DINIZ TAVARES
Universidade de So Paulo USP
MRCIA MACIEL ANTUNES
Farmcia de Manipulao de Cosmticos Ltda - FACIAL
PATRICIA HAUSCHILDT DE OLIVEIRA MENDES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
PAULA RENATA APARECIDA NIGRO RIVERA
CARAZZATTO
Associao Nacional de Farmacuticos Magistrais -
ANFARMAG
ROBERTO PONTAROLO
Universidade Federal do Paran - UFPR
RADIOFRMACOS
ELOY JULIUS GARCIA - Coordenador
Universidade Estadual do Rio Grande do Sul - UERGS
ANA MARIA SILVEIRA BRAGHIROLLI
Instituto de Engenharia Nuclear - IEN-CNEN
ELAINE BORTOLETI DE ARAJO
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
LUIZ CLUDIO MARTINS ALEIXO
Instituto de Engenharia Nuclear - IEN-CNEN
MARYANGELA REZENDE MASCARENHAS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MARYCEL ROSA FELISA FIGOLS DE BARBOSA
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 27 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
NEUZA TAEKO OKASAKI FUKUMORI
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
RALPH SANTOS OLIVEIRA
Instituto de Engenharia Nuclear - IEN-CNEN
SUBSTNCIA QUMICA DE REFERNCIA
PEDRO EDUARDO FREHLICH - Coordenador
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
RICO MARLON DE MORAES FLORES
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
JAIMARA AZEVEDO OLIVEIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MARIA ALICE BCKELMANN
Cristlia Produtos Qumicos Farmacuticos Ltda
MARIA DO CARMO VASQUES GARCIA
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
RENATA BARBOSA DE OLIVEIRA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
VALRIA PEREIRA DE SOUSA
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
AMADEU CARDOSO JUNIOR
Universidade Federal Fluminense - UFF
AMANDA THOMAS BARDEN
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
AMARILIS SCREMIN PAULINO
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
AMLIA TERESINHA HENRIQUES
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
ANA CAROLINA ZAVAREZI
Universidade Federal Fluminense - UFF
ANA CECLIA BEZERRA CARVALHO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
ANA CLAUDIA FERNANDES AMARAL
Instituto de Tecnologia de Frmacos - Farmanguinhos /
FIOCRUZ
ANA CRISTINA REGIS DE BARROS CORREIA
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
ANA ELISA DE OLIVEIRA
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
ANA GABRIELA REIS SOLANO
Universidade Federal de So Joo Del Rei - UFSJ
ANA LAURA ESCARRONE
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
ANA LCIA ABOY
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
ADILSON SARTORATTO
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
DLEY ANTONINI NEVES DE LIMA
Universidade Federal do Amazonas - UFAM
ADRIANA BUGNO
Instituto Adolfo Lutz - IAL
ADRIANA DA SILVA SANTOS DE OLIVEIRA
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
ADRIANA PASSOS OLIVEIRA
Universidade Federal Fluminense - UFF
ADRIANO ANTUNES SOUZA DE ARAJO
Universidade Federal de Sergipe - UFS
ALADE ALINE XAVIER LEAL
Instituto de Tecnologia em Imunobiolgicos Bio-
Manguinhos / FIOCRUZ
ALBA VALRIA SANTOS
Baxter Hospitalar Ltda
ALBERTO JOS CAVALHEIRO
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho -
UNESP
ALICE SIMON
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
ALINE LIMA HERMES MLLER
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
ALLAN WEBERLING MATOS
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
COLABORADORES DA 5 EDIO DA FARMACOPEIA BRASILEIRA
28 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
ANA MARIA BERGOLD
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
ANA MARIA SILVEIRA BRAGHIROLLI
Instituto de Engenharia Nuclear - IEN-CNEN
ANA MARIA SOARES PEREIRA
Universidade de Ribeiro Preto - UNAERP
ANDR AUGUSTO GOMES FARACO
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
ANDR LIMA DE OLIVEIRA COSTA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
ANDR LUIS GEMAL
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
ANDREA REZENDE DE OLIVEIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
ANDREJUS KOROLKOVAS (In memoriam)
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
ANDRESSA BLAINSKI
Universidade Estadual de Maring - UEM
ANDRESSA DALMAS NARVAEZ
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
ANGELA CRISTINA LEAL BADAR TRINDADE
Universidade Federal do Paran - UFPR
ANGELICA GARCIA COUTO
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
ANGELO JOS COLOMBO
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
ANIL KUMAR SINGH
Universidade de So Paulo - USP
ANNA KAROLINA PASTOREK
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
ANTNIA MARIA CAVALCANTI DE OLIVEIRA
Universidade Federal Fluminense - UFF
ANTNIO BASLIO PEREIRA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
ANTNIO CARLOS DA COSTA BEZERRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
ARMANDO DA SILVA CUNHA JNIOR
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
ARTHUR LUIZ CORRA
Universidade Federal Fluminense - UFF
ATANA MPALANTINOS DA SILVA
Universidade Federal Fluminense - UFF
AULUS CONRADO BASILE
Universidade de So Paulo - USP
UREA SILVEIRA CRUZ
Instituto Adolfo Lutz - IAL
BERTA MARIA HEINZMANN
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
BEATRIZ PINHEIRO BEZERRA
Universidade Federal do Cear - UFC
BIANCA FERNANDES GLAUSER
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
BIANCA RODRIGUES DE OLIVEIRA
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
BRUNA TRINDADE DE CARVALHO
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
BRUNO VALENTE
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
CAIO PINHO FERNANDES
Universidade Federal Fluminense - UFF
CAMILA ADOLFO GONALVES
Centro Universitrio Franciscano - UNIFRA
CARLA HOLANDINO QUARESMA
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
CARLOS CZAR FLORES VIDOTTI
Conselho Federal de Farmcia - CFF
CARLOS EDUARDO DE OLIVEIRA PEREIRA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
CAROLINA DOS SANTOS PASSOS
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
CAROLINA LUPI DIAS
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
CSSIA VIRGINIA GARCIA
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
CECLIA ELENA DE FIGUEIREDO OGNIBENE
Associao dos Laboratrios Farmacuticos Nacionais -
ALANAC
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 29 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
CLIA DE FREITAS GUIMARES PRAA
Universidade Federal do Cear - UFC
CELINA ROCHA FILGUEIRAS
Universidade Federal Fluminense - UFF
CELSO FIGUEIREDO BITTENCOURT
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
CSAR ALEXANDRE JUNQUEIRA
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
CHANG CHIANN
Universidade de So Paulo - USP
CHARISE DALLAZEM BERTOL
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
CHRISTIANE SOUTO MORAES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
CID AIMBIR DE MORAES SANTOS
Universidade Federal do Paran - UFPR
CLARICE MITIE SANO YUI
Medley S.A. Indstria Farmacutica
CLARISSA MARQUES MOREIRA DOS SANTOS
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
CLARISSE MADALENA BUENO ROLIM
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
CLUDIA MARIA OLIVEIRA SIMES
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
CLAUDIA SEIDL
Universidade Federal do Paran - UFPR
CLAUDIO KIYOSHI HIRAI
Biolab Sanus Farmacutica Ltda
CLSIO SOLDATELI PAIM
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
CLVIA FERREIRA DUARTE GARROTE
Universidade Federal de Gois - UFG
CRISTIANE DA SILVA
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
CRISTIANE DE BONA DA SILVA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
CRISTIANE RODRIGUES AUGUSTO
Instituto Nacional de Metrologia, Normatizao e
Qualidade Industrial - INMETRO
CRISTIANNE DA SILVA GONALVES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
CRISTINA DUARTE VIANNA SOARES
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
CYPRIANO CARDOSO FILHO
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
DANIEL KARL RESENDE
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
DANIELA MARRECO CERQUEIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
DANIELE DE SOUZA TEIXEIRA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
DANILE RUBERT PEREIRA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
DARCY AKEMI HOKAMA
Instituto de Tecnologia em Imunobiolgicos - Bio
Manguinhos FIOCRUZ
DEISE CRISTINA DA SILVA
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
DENILSON DA SILVA SANTOS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
DENISE FERREIRA LEITE
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
DESIRE MICHELS CORTEZ
Linde Gases Ltda.
DHALIA GUTEMBERG
Cmara Brasileira de Diagnstico Laboratorial - CBDL
DIEGO LEONEL DA COSTA VIEIRA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
DIOGO POMPU DE MORAES
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
ECIO GEOVANI NETO
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
DER LISANDRO DE MORAES FLORES
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
EDSON IRINEU MLLER
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
EDUARDO AUGUSTO MOREIRA
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
30 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
EDUARDO CHAVES LEAL
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
EDUARDO SCHMIDT DE SOUZA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
ELAINE BORTOLETI DE ARAUJO
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
ELDA AZEVEDO GUERRA
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
ELFRIDES EVA SCHERMAN SCHAPOVAL
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
ELFRIEDE MARIANNE BACCHI
Universidade de So Paulo - USP
ELIANA NUNES
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
ELIANE COUTINHO DE MEDEIROS
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
ELISABETE PEREIRA DOS SANTOS
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
ELIZABETH IGNE FERREIRA
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
ELIZABETH MARIA ROCHA LOBO
Universidade Federal Fluminense - UFF
ELIZABETH VALVERDE DOS SANTOS
Universidade Federal Fluminense - UFF
ELOY JULIUS GARCIA
Universidade Estadual do Rio Grande do Sul - UERGS
ELZA ANDERS SAAD
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
ELZRIA DE AGUIAR NUNAN
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
EMANUELA ANSELMO VIEIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
EMIDIO VASCONCELOS LEITO DA CUNHA
Universidade Estadual de Paraba UEPB
RICO MARLON DE MORAES FLORES
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
EVELIN ELFRIEDE BALBINO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
EZEQUIEL PAULO VIRIATO
Laboratrio Homeoptico Almeida Prado Ltda
FABIANA CREMASCHI PALMA
Associao Brasileira dos Distribuidores e Importadores
de Insumos Farmacuticos, Cosmticos, Veterinrios,
Alimentcios e Aditivos - ABRIFAR
FABIANA ERNESTINA BARCELLOS DA SILVA
Universidade Federal do Pampa - UNIPAMPA
FABIANE GOLDCHMIDT ANTES
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
FBIO ANDREI DUARTE
Universidade Federal do Rio Grande - FURG
FBIO SEIGI MURAKAMI
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
FABRICIO CARNEIRO DE OLIVEIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
FVERO REISDORFER PAULA
Universidade Federal do Pampa - UNIPAMPA
FELIPE DA ROSA NOBRE
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
FELIPE REBELLO LOURENO
Universidade de So Paulo - USP
FERNANDA HERMSDORFF DAS NEVES
Universidade Federal Fluminense - UFF
FERNANDO HENRIQUE ANDRADE NOGUEIRA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
FERNO CASTRO BRAGA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
FLBIO DA ROSA PONS JNIOR
Centro Universitrio Franciscano - UNIFRA
FLVIA DIAS MARQUES MARINHO
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
FLVIA NEVES ROCHA ALVES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
FRANCINETE RAMOS CAMPOS
Universidade Federal do Paran - UFPR
FRANCISCA MARIA BARROS SOUSA
Universidade Federal do Cear - UFC
FRANCISCO JOS DE FREITAS
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 31 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
GABRIELA GONALVES DA SILVA
Associao Brasileira dos Distribuidores e Importadores
de Insumos Farmacuticos, Cosmticos, Veterinrios,
Alimentcios e Aditivos - ABRIFAR
GEISIANE MARIA ALVES PRESMICH
Laboratrio Industrial Farmacutico de Alagoas - LIFAL
GERALDO FENERICH
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
GERSON ANTNIO PIANETTI
Universidade Federal Minas Gerais - UFMG
GILBERTO DOLEJAL ZANETTI
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
GILSON ANDRADE RAMALDES
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
GIOVANA SECRETTI VENDRUSCOLO
Universidade Comunitria da Regio de Chapec -
UNOCHAPEC
GISELE DA SILVA BOTAS
Universidade Federal Fluminense - UFF
GISELY CRISTINY LOPES
Universidade Estadual de Maring - UEM
GISLAINE CARMO ROESCH
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
GISLAINE KUMINEK
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
GIZELE SCOTTI DO CANTO
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
GLYN MARA FIGUEIRA
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
GUILHERME DINIZ TAVARES
Universidade de So Paulo - USP
GUSTAVO RODRIGUES DE REZENDE
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
HRIDA REGINA NUNES SALGADO
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho -
UNESP
HIDELGARDO SEIBERT FRANA
Universidade Federal Fluminense - UFF
HISAKO GONDO HIGASHI
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho -
UNESP
IARA COUTINHO DESMARAIS
Universidade Federal Fluminense - UFF
ILIO MONTANARI JNIOR
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
INGRID BEZERRA
Universidade Federal do Cear - UFC
IRENE SATIKO KIKUCHI
Universidade de So Paulo - USP
ISABEL CRISTINA FRAO DIEFENBACH
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
ISABELA DA COSTA CSAR
Instituto de Cincias Farmacuticas de Estudos e Pesquisas
- ICF
ISABELLA PIAZZA
Universidade Federal Fluminense - UFF
JACQUELINE DE SOUZA
Universidade Federal de Ouro Preto - UFOP
JAIMARA AZEVEDO OLIVEIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
JAIR CALIXTO
Sindicato da Indstria de Produtos Farmacuticos no
Estado de So Paulo - Sindusfarma
JAIR CSSIO FARIA
Colaborador Independente
JANANA DUQUE DE SOUZA
Bio Manguinhos - FIOCRUZ
JARBAS FARIAS LEAL
Universidade Federal Fluminense - UFF
JOO BATISTA DA SILVA JNIOR
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
JOO CARLOS PALAZZO DE MELLO
Universidade Estadual de Maring - UEM
JOO CLEVERSON GASPARETTO
Universidade Federal do Paran - UFPR
JOO DIMAS RIBEIRO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
32 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
JOO FERREIRA MARTINS
Instituto Nacional de Controle da Qualidade em Sade
INCQS / FIOCRUZ
JOO MXIMO DE SIQUEIRA
Universidade Federal do Mato Grosso do Sul - UFMS
JOO PAULO SILVRIO PERFEITO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
JONATHAS FELIPE REVOREDO LOBO
Universidade Federal Fluminense - UFF
JOS ALEIXO PRATES E SILVA
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
JOS ANGELO SILVEIRA ZUANAZZI
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
JOS ANTNIO DE AQUINO RIBEIRO
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria - EMBRAPA
JOS ANTONIO DE OLIVEIRA BATISTUZZO
Faculdades Oswaldo Cruz
JOS CARLOS BARBRIO
Genese Produtos Diagnsticos Ltda.
JOS CARLOS TAVARES CARVALHO
Universidade Federal do Amap - UNIFAP
JOS LAMARTINE SOARES SOBRINHO
Universidade Federal do Piau - UFPI
JOS LOURENO DE FREITAS NETO
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
JOS MARIA BARBOSA FILHO
Universidade Federal da Paraba - UFPB
JOS MURADIAN FILHO
Pall do Brasil Ltda.
JOSEANE MARIA BEZERRA DE MENEZES
Vigilncia Sanitaria - RN
JOSIANE DE CARVALHO VITORINO
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
JULIA APARECIDA LOURENO DE SOUZA
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
JULIANA ASSUMPO DA SILVA
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
JULIANA SEVERO FAGUNDES PEREIRA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
JULIANO DE MORAIS FERREIRA SILVA
Universidade de So Paulo USP
JULIANO SMANIOTO BARIN
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
JLIO CSAR CARESTIATO
Universidade Federal Fluminense - UFF
KARINA ALVES DA SILVA
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
KATIA ANDREA DOMINGOS DE MORAIS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
KATIA REGINA TORRES
Ministrio da Sade - MS
KATIA SUZI DA SILVEIRA SILVA
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
KOICHI MIZUTA
Instituto de Pesquisas Tecnolgicas do Estado de So
Paulo - IPTSP
LAS SANTANA DANTAS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
LARISSA SAKIS BERNARDIS
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
LAURA JANE MOREIRA SANTIAGO
Universidade Estadual do Norte Fluminense - UENF
LAURA TERUMI UEDA HERNANDES MELERO
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
LAUREN ROSA CROSSETTI VAUCHER
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
LAURO DOMINGOS MORETTO
Sindicato da Indstria de Produtos Farmacuticos no
Estado de So Paulo - Sindusfarma
LEANDRO MACHADO ROCHA
Universidade Federal Fluminense - UFF
LEANDRO SOARES PINHEIRO
Universidade Federal Fluminense - UFF
LEILA BRASIL FERREIRA
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
LEILA SCHREINER DELGADO
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
LENISE DE LIMA SILVA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 33 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
LEONARDO BAHIA TAVARES
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
LEONARDO DE SOUZA TEIXEIRA
Instituto de Cincias Farmacuticas de Estudos e Pesquisas
- ICF
LEONARDO PAES CINELLI
Universidade Federal do Rio de Janeiro UFRJ
LEOPOLDO CLEMENTE BARATTO
Universidade Federal do Paran - UFPR
LETCIA LENZ SFAIR
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
LETICIA NORMA CARPENTIERI RODRIGUES
Universidade Federal de So Paulo UNIFESP
LETCIA SCHERER KOESTER
Universidade Federal do Rio Grande do Sul UFRGS
LIDIANE BUENO DE MORAES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
LGIA MARIA MOREIRA DE CAMPOS
Universidade Federal de Minas Gerais UFMG
LILIA RIBEIRO SERDIO
Instituto Vital Brazil - IVB
LILIAN AULER MENTZ
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
LIVIA DUARTE PEREIRA
Universidade Federal Fluminense - UFF
LORENA FRATINI
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
LUANA LENZI
Universidade Federal do Paran - UFPR
LUANA MARTINS DA LUZ
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
LUCLIA MAGALHES DA SILVA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
LCIA DE FTIMA FRANCELINO DA SILVA
Laboratrio Central de Sade Pblica de Pernambuco -
LACEN
LUCIANA CATIA BLOCK
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
LUCIANA CRISTINA MOTA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
LUCIANE VARINI LAPORTA
Centro Universitrio Franciscano - UNIFRA
LUS CARLOS BRGIDO MOURA
Universidade Federal do Cear - UFC
LUIS CARLOS DE ALENCAR SAMPAIO FILHO
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
LUIZ ALBERTO LIRA SOARES
Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN
LUIZ ANTNIO BATISTA DA COSTA
Centro de Excelncia em Sade Integral do Paran - CESIP
LUIZ ARMANDO ERTHAL
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
LUIZ CLUDIO MARTINS ALEIXO
Instituto de Engenharia Nuclear - IEN-CNEN
LUIZ FERNANDO SECIOSO CHIAVEGATTO
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
LUIZ GUSTAVO TORRES
Naturofarma Produtos Naturais Ltda.
LUIZA DE CASTRO MENEZES CANDIDO
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
LUMA WOSCH
Universidade Federal do Paran UFPR
LUZIA DE FTIMA PEREIRA
Alko do Brasil Ind e Com LTDA
MAGDA RHAYANNY ASSUNO FERREIRA
Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN
MAIQUE WEBER BIAVATTI
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
MANUELA DA COSTA SOLIZ
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
MARA EL CORAB MOREIRA DE OLIVEIRA
Ministrio da Sade - MS
MARCELA ZART AREND
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
MARCELE GIACOMIN GONALVES
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
MARCELO CAMILO MORERA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
34 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
MRCIA FOSTER MESKO
Universidade Federal de Pelotas - UFPel
MRCIA VIGNOLI DA SILVA
Universidade Federal de Cincias da Sade de Porto
Alegre - UFCSPA
MRCIO LABASTIE (In memorian)
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
MARCO ANDR CARDOSO
Universidade Federal do Paran - UFPR
MARCO ANTONIO STEPHANO
Universidade de So Paulo - USP
MARCOS ANTONIO SEGATTO SILVA
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
MARCOS ROBERTO DOS SANTOS
Centro Universitrio Franciscano - UNIFRA
MARGARETH LINDE ATHAYDE
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
MARGARETH MIE NAKAMURA MATSUDA
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
MARIA ALICE BCKELMANN
Cristlia Produtos Qumicos Farmacuticos Ltda.
MARIA AUGUSTA TRAVASSOS LEMOS
Universidade Federal Fluminense - UFF
MARIA AUXILIADORA MILANEZE GUTIERRE
Universidade Estadual de Maring - UEM
MARIA CRISTINA DICIAULA
Universidade Estadual de Maring - UEM
MARIA DAS GRAAS LINS BRANDO
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
MARIA DIANA CERQUEIRA SALES
Faculdade Brasileira - UNIVIX
MARIA DO CARMO ESTANISLAU DO AMARAL
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
MARIA DO CARMO VASQUES GARCIA
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
MARIA DO ROSRIO SILVEIRA BRITTO
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
MARIA ELISA GIRO MOREIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MARIA ELISABETE AMARAL DE MORAES
Universidade Federal do Cear - UFC
MARIA ELIZABETE DALMORA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
MARIA JOS CARNEIRO DO NASCIMENTO
Empresa Brasileira de Hemoderivados e Biotecnologia -
HEMOBRAS
MARIA LCIA SILVEIRA MALTA DE ALENCAR
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MARIA TERESINHA KREINEKER DRESH
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
MARIANE GEHLEN PERIN
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
MARINGELA TORCHIA DO NASCIMENTO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MARIBETE HOMRICH HOLZSCHUH
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
MARILI VILLA NOVA RODRIGUES
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
MARILIA DE MORAES CASTRO
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
MARINA DAUMAS NEVES DUARTE
Universidade Federal Fluminense - UFF
MARINA SCOPEL
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
MARINS JOST E SOUZA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MRIO LUIS RIBEIRO MOURA
Universidade Federal do Cear - UFC
MRIO SRGIO PIANTAVINI
Universidade Federal do Paran - UFPR
MARISA COELHO ADATI
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
MARISA DE MOURA SOUZA DA LUZ
Laboratrio de Controle de Qualidade e Pesquisa - LCQPq
MARISA KEIKO UEMA
Eurofarma Comercial e Importadora Ltda
MARTA CRISTINA TEIXEIRA DUARTE
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 35 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
MARTHA ANA GATTUSO
Universidade Nacional de Rosrio, Argentina
MARTIN STEPPE
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
MARY ANN FOGLIO
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
MARYANGELA REZENDE MASCARENHAS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MARYCEL ROSA FELISA F. BARBOSA
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
MAURO FERREIRA WITZEL
Blanver Farmoquimica Ltda
MAX WEBER PEREIRA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MELNIA DE FTIMA CORDELINO
Baxter Hospitalar Ltda
MELNIA PALERMO MANFRON
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
MERIANE PIRES CARVALHO
Universidade Federal Fluminense - UFF
MICHELE FEITOSA SILVA
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
MICHELI WRASSE SANGI
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
MIGUEL DE LUCCA NETO
Medley S.A. Industria Farmacutica
MILENA BANDEIRA BARROZO
Universidade Federal do Cear - UFC
MIRACY MUNIZ DE ALBUQUERQUE
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
MIRIAM ANDERS APEL
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
MIRIAM DE FTIMA VIANNA LEONEL
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
MIRIAN PARENTE PINHEIRO
Universidade Federal do Cear - UFC
MNICA DA LUZ CARVALHO SOARES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
MONIKA TAGLIARI
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
NADIA LIMA DIAS CABRAL
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
NADIA MARIA VOLPATO
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
NAIALY FERNANDES ARAJO REIS
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
NARA DEITOS BITTENCOURT
Universidade Federal de Santa Maria UFSM
NEEMIAS SILVA DE ANDRADE
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
NELIO DE BASTOS MORAIS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
NELISE GONALVES DUARTE E DUARTE
Universidade Federal Fluminense - UFF
NEUZA TAEKO OKASAKI FUKUMORI
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
NIKOLAI SHARAPIN (In memoriam)
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
NILTON LUZ NETTO JNIOR
Universidade Catlica de Braslia - UCB
NIRLA RODRIGUES ROMERO
Universidade Federal do Cear - UFC
ONSIMO ZARA PEREIRA
Associao Brasileira da Indstria Farmoqumica e de
Insumos Farmacuticos - ABIQUIFI
ORLANDO FATIBELLO FILHO
Universidade Federal de So Carlos - UFSCar
ORLANDO SILVA
Serono Produtos Farmacuticos Ltda
PAOLA DE AZEVEDO MELLO
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
PATRCIA DE ANDRADE MARTINS
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
PATRICIA HAUSCHILDT DE OLIVEIRA MENDES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
PAULA CRISTINA REZENDE ENAS
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
36 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
PAULA REGINA ALVES DE SIQUEIRA
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
PAULA RENATA APARECIDA NIGRO RIVERA
CARAZZATTO
Associao Nacional de Farmacuticos Magistrais -
ANFARMAG
PAULA ROCHA CHELLINI
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
PAULO ANTONIO DE SOUZA MOURO
Universidade Federal do Rio de Janeiro UFRJ
PAULO CHANEL DEODATO DE FREITAS
Universidade de So Paulo - USP
PAULO EDUARDO MAYORGA BORGES
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
PAULO RENATO DE OLIVEIRA
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
PAULO VICTOR PIRES DOS SANTOS
Universidade Estadual de Maring - UEM
PEDRO EDUARDO FREHLICH
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
PEDRO JOS ROLIM NETO
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
PEDRO MELILO DE MAGALHES
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
POLIANA BERNARDES GONALVES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
POLIANA DE FTIMA HILRIO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
PRISCILLA STUDART
Universidade Federal do Cear - UFC
RAFAEL DEITOS BEGNIS
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
RAFAEL NICOLAY PEREIRA
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
RAFAELA MARIN
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
RAFAELLA GOMES BEZERRA
Universidade Federal do Cear - UFC
RALPH SANTOS OLIVEIRA
Instituto de Engenharia Nuclear - IEN-CNEN
RAPHAEL DE ANDRADE LUCAS E SILVA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
RAQUEL LIMA E SILVA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
REBECA RIBEIRO DE MOURA
Universidade Federal do Cear - UFC
RENATA APARECIDA DIAS
Sindicato da Indstria de Produtos Farmacuticos no
Estado de So Paulo - Sindusfarma
RENATA ARACELLI PIRES
Baxter Hospitalar Ltda
RENATA BARBOSA DE OLIVEIRA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
RENIERE HENRIQUE DA SILVA
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
RICARDO CHIAPPA
Unio Educacional do Planalto Central - UNIPLAC
RICARDO PEREIRA LOURO
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
RINALDO FERREIRA
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
ROBERTO PONTAROLO
Universidade Federal do Paran - UFPR
ROCHELE CASSANTA ROSSI
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
ROCHELE SOGARI PICOLOTO
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
RODNEY ALEXANDRE FERREIRA RODRIGUES
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
RODRIGO ALVES SOARES CRUZ
Universidade Federal Fluminense - UFF
RODRIGO CRISTOFOLETTI
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
RODRIGO FERNANDES ALEXANDRE
Ministrio da Sade - MS
RONALDO FERREIRA DA SILVA
Universidade Federal Fluminense - UFF
ROSA NORIKO YAMAMOTO
Universidade de So Paulo - USP
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 37 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
ROSALI MARIA FERREIRA DA SILVA
Universidade Federal do Par - UFPA
ROSANA MIGUEL MESSIAS MASTELARO
Sindicato da Indstria de Produtos Farmacuticos no
Estado de So Paulo - Sindusfarma
ROSANE MARIA SILVA ALVES
Ministrio da Sade - MS
ROSANGELA ANDRADE
Linde Gases Ltda.
ROSANGELA BOLZAN
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa.
ROSE VANESSA BANDEIRA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
ROSEMARIE APARECIDA DE ARAJO BONATTO
Merck Sharp & Dohme Farmacutica Ltda
ROSILENE RODRIGUES SANTIAGO
Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN
ROSIMAR LEITENBERG DA SILVEIRA
Centro Universitrio Franciscano - UNIFRA
ROSIMEIRE PEREIRA ALVES DA CRUZ
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
RUBENS RAPHAEL SIMES DE OLIVEIRA
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
RUTH RIESINGER STRATTMANN
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
SAID GONALVES DA CRUZ FONSECA
Universidade Federal do Cear - UFC
SALVADOR ALVES PEREIRA (In memoriam)
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
SLVIO FILGUEIRAS
Linde Gases Ltda.
SAMANTA CARDOSO MOURO
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
SAULO FERNANDES DE ANDRADE
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
SEBASTIO BAETA HENRIQUE
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
SERGIO LUIZ DALMORA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
SERGIO ROBERTO MORTARI
Centro Universitrio Franciscano - UNIFRA
SEVERINO BARBOSA
Universidade Federal do Pernambuco - UFPE
SEVERINO GRANJEIRO JNIOR
Laboratrio Farmacutico do Estado de Pernambuco -
LAFEPE
SILAS GOUVEIA
Fundao Ezequiel Dias - FUNED
SILSIA DE SOUZA AMORIM
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
SILVANA TERESA LACERDA JALES
Associao dos Laboratrios Ofciais Brasileiros - ALFOB
SILVNIA VAZ DE MELO MATTOS
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
SILVIA DEBENEDETTI
Universidade Nacional Argentina
SILVIA HELENA MIOLLO BORGMANN
Universidade Federal de Santa Catarina UFSC
SILVIA PAREDES FONTES
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
SLVIA STORPIRTIS
Universidade de So Paulo - USP
SIMONE CRISTINA BENOVIT
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
SIMONE GONALVES CARDOSO
Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC
SOLANGE MARIA COUTINHO BRANDO
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
SUSANA JULIA GATTUSO BITTEL
Universidade Nacional de Rosrio, Argentina
SUZANA MACHADO DE VILA
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
TAILANE SANTANNA MOREIRA
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
TALITA GESSER CESCA
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
TANIA MARI BELL BRESOLIN
Universidade do Vale do Itaja - UNIVALI
38 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
3
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
TATIANE PEREIRA DE SOUZA
Universidade Federal do Amazonas - UFAM
TAYOMARA DE SOUSA NASCIMENTO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
TELMA MARY KANEKO
Universidade de So Paulo - USP
TRCIO PASCHKE OPPE
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
TERESA CRISTINA TAVARES DALLA COSTA
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
TEREZINHA DE JESUS ANDREOLI PINTO
Universidade de So Paulo - USP
THAIS MARTINS GUIMARES DE FRANCISCO
Universidade Federal do Paran - UFPR
THAIS MESQUITA DO COUTO ARAUJO
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
THELMA DE BARROS MACHADO
Universidade Federal Fluminense - UFF
THEREZA CRISTINA VESSONI PENNA
Universidade de So Paulo - USP
THEREZINHA COELHO BARBOSA TOMASSINI
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
THIELE FACCIN DE BRUM
Centro Universitrio Franciscano - UNIFRA
TIAGO ASSIS MIRANDA
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
VALDIR FLORNCIO DA VEIGA JUNIOR
Universidade Federal Amazonas - UFAM
VALRIA PEREIRA DE SOUSA
Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
VALQUIRIA LINCK BASSANI
Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS
VERA LCIA GARCIA REHDER
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
VIVIANE DE OLIVEIRA GARCIA
Universidade Federal de Santa Maria - UFSM
VLADI OLGA CONSIGLIERI
Universidade de So Paulo - USP
VOLKER BITTRICH
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
WAGNER LUIZ RAMOS BARBOSA
Universidade Federal do Par - UFPA
WALFREDO DA SILVA CALMON
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - Anvisa
WILSON CAMARGO
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade -
INCQS / FIOCRUZ
WILSON REINHARDT FILHO
Comisso Permanente de Reviso da Farmacopeia
Brasileira 4 edio
YASMIN LOURENZO FIGUEIREDO
Vigilncia Sanitria e Ambiental - BA
YEDO ALQUINI
Universidade Federal do Paran - UFPR
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 39 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
4 GENERALIDADES
considerada fortemente alcalina quando se cora de azul
por uma gota de timolftaleina SI (pH 9,3 a 10.5) ou de
vermelho por uma gota de fenolftaleina SI (pH 10,0 a 13,0).
Adesivo
o sistema destinado a produzir um efeito sistmico
pela difuso do(s) princpio(s) ativo(s) numa velocidade
constante por um perodo de tempo prolongado.
gua para injetveis
gua para injetveis o insumo utilizado na preparao
de medicamentos para administrao parenteral, como
veculo ou na dissoluo ou diluio de substncias ou de
preparaes.
gua para uso farmacutico
Considera-se como gua para uso farmacutico os diversos
tipos de gua empregados na sntese de frmacos, na
formulao e produo de medicamentos, em laboratrios
de ensaios, diagnsticos e demais aplicaes relacionadas
rea da sade, inclusive como principal componente na
limpeza de utenslios, equipamentos e sistemas.
gua purifcada
gua purifcada a gua potvel que passou por algum
tipo de tratamento para retirar os possveis contaminantes
e atender aos requisitos de pureza estabelecidos na
monografa.
gua ultrapurifcada
gua ultrapurifcada a gua purifcada que passou por
tratamento adicional para retirar os possveis contaminantes
e atender aos requisitos de pureza estabelecidos na
monografa.
guas aromticas
So solues saturadas de leos essenciais ou outras
substncias aromticas em gua. Possuem odor
caracterstico das drogas com as quais so preparadas,
recebendo, tambm, o nome delas.
Banho-maria e banho a vapor
um banho de gua fervente, a no ser que a monografa
especifque outra temperatura. As expresses gua quente
e gua muito quente indicam temperaturas aproximadas
entre 60
o
C e 70
o
C e entre 85
o
C e 95
o
C respectivamente.
TTULO
O ttulo completo desta obra Farmacopeia da Repblica
Federativa do Brasil, 5 edio. Pode ser denominada
Farmacopeia Brasileira, 5 edio ou FB 5.
DEFINIES
Ao, uso e doses
So as constantes do relatrio para registro do produto no
rgo sanitrio, atualizadas mediante reviso bibliogrfca
nacional e internacional, quando for o caso.
Quando indicadas nas monografas, as doses representam
a quantidade do medicamento usualmente prescrita
que tenha efccia teraputica, para pacientes adultos. O
prescritor habilitado, a seu critrio e sob sua exclusiva
responsabilidade, considerando a farmacocintica e
farmacodinmica, poder variar as quantidades e a
frequncia de administrao de qualquer medicamento.
Entretanto, a prescrio de doses muito superiores s
usuais, estabelecida em literatura, obriga o farmacutico
a confrmar, com o prescritor da receita, as doses
estabelecidas.
Acidez e alcalinidade - ensaios rpidos
Uma soluo considerada neutra quando no modifca a
cor dos papis azul e vermelho de tornassol, ou quando o
papel indicador universal adquire as cores da escala neutra,
ou quando 1 mL da mesma soluo se cora de verde com
uma gota de azul de bromotimol SI (pH 7,0).
considerada cida quando cora em vermelho o papel
azul de tornassol ou 1 mL se cora de amarelo por uma gota
de vermelho de fenol SI (pH 1,0 a 6,6).
considerada fracamente cida quando cora levemente de
vermelho o papel azul de tornassol ou 1 mL se cora de
alaranjado por uma gota de vermelho de metila SI (pH 4,0
a 6,6).
considerada fortemente cida quando cora de azul o
papel vermelho de congo ou 1 mL se cora de vermelho
pela adio de uma gota de alaranjado de metila SI (pH
1,0 a 4,0).
considerada alcalina quando cora de azul o papel
vermelho de tornassol ou 1 mL se cora de azul por uma
gota de azul de bromotimol SI (pH 7,6 a 13,0).
considerada fracamente alcalina quando cora de azul o
papel vermelho de tornassol ou 1 mL se cora de rosa por
uma gota de vermelho de cresol SI (pH 7,6 a 8,8).
40 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Banho a vapor signifca exposio ao vapor fuente ou
outra forma de calor, correspondendo em temperatura do
vapor fuente.
Biodisponibilidade
Indica a velocidade e a extenso de absoro de um
princpio ativo em uma forma de dosagem, a partir de sua
curva concentrao/tempo na circulao sistmica ou sua
excreo na urina.
Bioequivalncia
Consiste na comprovao de equivalncia farmacutica
entre produtos apresentados sob a mesma forma
farmacutica, contendo idntica composio qualitativa
e quantitativa de princpio(s) ativo(s), e que tenham
comparvel biodisponibilidade, quando estudados sob um
mesmo desenho experimental.
Cpsula
a forma farmacutica slida em que o princpio ativo e os
excipientes esto contidos em um invlucro solvel duro
ou mole, de formatos e tamanhos variados, usualmente,
contendo uma dose nica do princpio ativo. Normalmente
formada de gelatina, mas pode, tambm, ser de amido ou
de outras substncias. Abreviatura: cap.
Cpsula dura
a cpsula que consiste de duas sees cilndricas pr-
fabricadas (corpo e tampa) que se encaixam e cujas
extremidades so arredondadas. tipicamente preenchida
com princpios ativos e excipientes na forma slida.
Normalmente formada de gelatina, mas pode tambm ser
de outras substncias. Abreviatura: cap. dura
Cpsula dura de liberao prolongada
a cpsula que consiste de duas sees cilndricas
pr-fabricadas (corpo tampa) que se encaixam e cujas
extremidades so arredondadas. tipicamente preenchida
com princpios ativos e excipientes na forma slida.
Normalmente formada de gelatina, mas pode tambm
ser de outras substncias. Vide defnio geral de liberao
prolongada. Abreviatura: cap. dura. lib. prol.
Cpsula dura de liberao retardada
a cpsula que consiste de duas sees cilndricas pr-
fabricadas (corpo e tampa) que se encaixam e cujas
extremidades so arredondadas. tipicamente preenchida
com princpios ativos e excipientes na forma slida.
Normalmente formada de gelatina, mas pode tambm
ser de outras substncias. Vide defnio geral de liberao
retardada. Abreviatura: cap. dura lib. ret.
Cpsula mole
a cpsula constituda de um invlucro de gelatina, de
vrios formatos, mais malevel do que o das cpsulas duras.
Normalmente so preenchidas com contedos lquidos ou
semisslidos, mas podem ser preenchidas tambm com ps
e outros slidos secos. Abreviatura: cap. mole
Cpsula mole de liberao prolongada
a cpsula constituda de um invlucro de gelatina, de
vrios formatos, mais malevel do que o das cpsulas duras.
Normalmente so preenchidas com contedos lquidos ou
semisslidos, mas podem ser preenchidas tambm com ps
e outros slidos secos. Vide defnio geral de liberao
prolongada. Abreviatura: cap. mole lib.prol.
Cpsula mole de liberao retardada
a cpsula constituda de um invlucro de gelatina, de
vrios formatos, mais malevel do que o das cpsulas duras.
Normalmente so preenchidas com contedos lquidos ou
semisslidos, mas podem ser preenchidas tambm com ps
e outros slidos secos. Vide defnio geral de liberao
retardada. Abreviatura: cap. mole lib. ret.
Cilindro de gs
o recipiente metlico, perfeitamente fechado, de paredes
resistentes, destinado a conter gs sob presso, obturado
por vlvula regulvel, capaz de manter a sada do gs em
vazo determinada.
Colrio
a preparao farmacutica lquida destinada aplicao
sobre a mucosa ocular. Abreviatura: col.
Complexo protrombnico humano total lioflizado
uma frao de protenas plasmticas que contm
obrigatoriamente os Fatores II, VII, IX e X da coagulao
humana.
Comprimido
a forma farmacutica slida contendo uma dose nica
de um ou mais princpios ativos, com ou sem excipientes,
obtida pela compresso de volumes uniformes de partculas.
Pode ser de uma ampla variedade de tamanhos, formatos,
apresentar marcaes na superfcie e ser revestido ou no.
Abreviatura: comp.
Comprimido de liberao modifcada
o Comprimido que tem uma liberao modifcada. Deve ser
classifcado como de liberao modifcada apenas quando as
classifcaes liberao retardada e liberao prolongada
no forem adequadas. Abreviatura: comp. lib. mod.
Comprimido de liberao prolongada
o comprimido cujos excipientes so destinados
especifcamente a modifcar a liberao do princpio
ativo nos fuidos digestivos. Veja defnio de liberao
prolongada. Abreviatura: comp. lib. prol.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 41 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Comprimido efervescente
o comprimido contendo, em adio aos ingredientes
ativos, substncias cidas e carbonatos ou bicarbonatos, os
quais liberam dixido de carbono quando o comprimido
dissolvido em gua. destinado a ser dissolvido ou
disperso em gua antes da administrao. Abreviatura:
comp. efer.
Comprimido mastigvel
o comprimido formulado para que possa ser mastigado,
produzindo um sabor residual agradvel na cavidade oral.
Abreviatura: comp. mast.
Comprimido orodispersvel
o comprimido que desintegra ou dissolve, rapidamente,
quando colocado sobre a lngua. Abreviatura: comp. orodis.
Comprimido para colutrio
o comprimido que deve ser dissolvido em gua para a
preparao do colutrio, que um lquido destinado ao
enxgue bucal de ao sobre as gengivas e as mucosas da
boca e da garganta. No deve ser deglutido. Abreviatura:
comp. colu.
Comprimido para soluo
o comprimido destinado a ser dissolvido na gua antes
da administrao. A soluo produzida pode ser levemente
leitosa devido aos excipientes utilizados na fabricao dos
comprimidos. Abreviatura: comp. sol.
Comprimido para suspenso
o comprimido que quando em contato com um
lquido, rapidamente produz uma disperso homognea
(suspenso). destinado a ser disperso antes da
administrao. Abreviatura: comp. susp.
Comprimido revestido
o comprimido que possui uma ou mais camadas fnas
de revestimento, normalmente, polimricas, destinadas a
proteger o frmaco do ar ou umidade; para frmacos com
odor e sabor desagradveis; para melhorar a aparncia dos
comprimidos, ou para alguma outra propriedade que no
seja a de alterar a velocidade ou extenso da liberao do
princpio ativo. Abreviatura: comp. rev.
Comprimido revestido de liberao prolongada
o comprimido que possui uma ou mais camadas fnas
de revestimento, normalmente polimricas, destinadas
a modifcar a velocidade ou extenso da liberao dos
princpios ativos. Veja a defnio de liberao prolongada
Abreviatura: comp. rev. lib. prol.
Comprimido revestido de liberao retardada
o comprimido que possui uma ou mais camadas fnas
de revestimento, normalmente polimricas, destinadas
a modifcar a velocidade ou extenso da liberao dos
princpios ativos, apresentando uma liberao retardada
do princpio ativo. Veja defnio de liberao retardada.
Abreviatura: comp. rev. lib. ret.
Comprimido sem revestimento
o comprimido em que excipientes usados no so
destinados, especifcamente, a modifcar a liberao do
princpio ativo nos fuidos digestivos. Abreviatura: comp.
sem rev.
Controle de qualidade
o conjunto de medidas destinadas a garantir, a qualquer
momento, a produo de lotes de medicamentos e demais
produtos, que satisfaam s normas de identidade,
atividade, teor, pureza, efccia e inocuidade.
Corantes
So substncias adicionais aos medicamentos, produtos
dietticos, cosmticos, perfumes, produtos de higiene e
similares, saneantes domissanitrios e similares, com o
efeito de lhes conferir cor e, em determinados tipos de
cosmticos, transferi-la para a superfcie cutnea e anexos
da pele. Para seu uso observar a legislao Federal e as
resolues editadas pela Anvisa.
Correlato
Produto para a sade, tal como equipamento, aparelho,
material, artigo ou sistema de uso ou aplicao mdica,
odontolgica ou laboratorial, destinado preveno,
diagnstico, tratamento, reabilitao ou anticoncepo
e que no utiliza meio farmacolgico, imunolgico ou
metablico para realizar a sua principal funo em seres
humanos podendo, entretanto, ser auxiliado em suas
funes por tais meios.
Cosmticos
So produtos para uso externo; destinados proteo, ou ao
embelezamento das diferentes partes do corpo, tais como
ps faciais; talcos; cremes de beleza; creme para as mos
e similares; mscaras faciais; loes de beleza; solues
leitosas; cremosas e adstringentes; loes para as mos;
bases de maquilagem e leos cosmticos; ruges; blushes;
batons; lpis labiais; preparados antisolares; bronzeadores
e simulatrios; rimeis; sombras; delineadores; tinturas
capilares; agentes clareadores de cabelos; preparados para
ondular e para alisar cabelos; fxadores de cabelos; laqus;
brilhantinas e similares; loes capilares; depilatrios e
epilatrios; preparados para unhas e outros.
42 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Creme
a forma farmacutica semisslida que consiste de
uma emulso, formada por uma fase lipoflica e uma
fase hidroflica. Contm um ou mais princpios ativos
dissolvidos ou dispersos em uma base apropriada e
utilizada, normalmente, para aplicao externa na pele ou
nas membranas mucosas.
Crioprecipitados do plasma fresco humano
So constitudos pelas fraes insolveis a frio contendo
principalmente os Fatores I (140 a 250 mg ) e VIII (70 a
120 UI) da coagulao humana por unidade de coleta de
sangue humano. Outros fatores da coagulao tambm
so encontrados em menores concentraes junto ao
crioprecipitado como o Fator de Von Willebrand (40 a
70%) e o Fator XIII (20 a 30%).
Denominao Comum Brasileira (DCB)
a denominao do frmaco ou princpio farmacologica-
mente ativo, aprovada no rgo federal responsvel pela
vigilncia sanitria.
Denominao Comum Internacional (DCI)
a denominao do frmaco ou princpio farmacologicamen-
te ativo, recomendada na Organizao Mundial de Sade.
Densidade de massa e densidade relativa
Densidade de massa () de uma substncia a razo de sua
massa por seu volume a 20
o
C.
A densidade relativa usualmente adotada ( ) defnida
como a relao entre a massa de uma substncia ao ar
a 20
o
C

e a massa de igual volume de gua na mesma
temperatura.
Desinfetantes
So produtos destinados a destruir, indiscriminada ou
seletivamente, micro-organismos, quando aplicados em
objetos inanimados ou ambientes.
Detergentes
So produtos destinados a dissolver gorduras; higiene de
recipientes e vasilhas e a aplicaes de uso domstico.
Doadores de sangue
So indivduos saudveis e cuidadosamente selecionados
que, aps exames mdicos, testes sanguneos laboratoriais
e estudo de sua histria mdica, estejam ausentes de
agentes infecciosos transmissveis podem ser aceitos e
utilizados para coleta de seu sangue total ou das suas
fraes celulares ou plasmticas para fns proflticos,
curativos ou de fracionamento.
Drgeas
So comprimidos revestidos com camadas constitudas por
misturas de substncias diversas, como resinas, naturais
ou sintticas, gomas, gelatinas, materiais inativos e
insolveis, aucares, plastifcantes, poliis, ceras , corantes
autorizados e, s vezes, aromatizantes e princpios ativos.
Abreviatura: drag.
Elixir
a preparao farmacutica, lquida, lmpida, hidroalco-
lica, de sabor adocicado, agradvel, apresentando teor al-
colico na faixa de 20% a 50%.
Os elixires so preparados por dissoluo simples e devem
ser envasados em frascos de cor mbar e mantidos em lu-
gar fresco e ao abrigo da luz.
Embalagem
o invlucro, recipiente ou qualquer forma de
acondicionamento, removvel ou no, destinada a cobrir,
empacotar, envasar, proteger ou manter, especifcamente
ou no, os medicamentos, as drogas, os insumos
farmacuticos e correlatos, os cosmticos, os saneantes e
outros produtos. As condies de acondicionamento so
descritas nas monografas individuais utilizando-se os
termos relacionados a seguir.
Embalagem primria
a que est em contato direto com seu contedo durante
todo o tempo. Considera-se material de embalagem
primria: ampola, bisnaga, envelope, estojo, faconete,
frasco de vidro ou de plstico, frasco-ampola, cartucho,
lata, pote, saco de papel e outros.
No deve haver qualquer interao entre o material de
embalagem primria e o seu contedo capaz de alterar
a concentrao, a qualidade ou a pureza do material
acondicionado.
Embalagem secundria
a que possibilita total proteo do material de
acondicionamento nas condies usuais de transporte,
armazenagem e distribuio. Considera-se embalagem
secundria: caixas de papelo, cartuchos de cartolina,
madeira ou material plstico ou estojo de cartolina e outros.
Emplasto
a forma farmacutica semisslida para aplicao externa.
Consiste de uma base adesiva contendo um ou mais
princpios ativos distribudos em uma camada uniforme
num suporte apropriado feito de material sinttico ou
natural. Destinada a manter o princpio ativo em contato
com a pele atuando como protetor ou como agente
queratoltico. Abreviatura: emp.

20
20
d
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 43 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Emulso
a forma farmacutica lquida de um ou mais princpios
ativos que consiste de um sistema de duas fases que
envolvem pelo menos dois lquidos imiscveis e na qual
um lquido disperso na forma de pequenas gotas (fase
interna ou dispersa) atravs de outro lquido (fase externa
ou contnua). Normalmente estabilizada por meio de um
ou mais agentes emulsifcantes. Abreviatura: emu.
Emulso aerossol
a emulso embalada sob presso contendo um gs
propelente e ingredientes terapeuticamente ativos que so
liberados aps a ativao de um sistema apropriado de
vlvulas. Abreviatura: emu. aer.
Emulso gotas
a emulso destinada administrao na forma de gotas.
Abreviatura: emu. go.
Emulso injetvel
a emulso estril. Abreviatura: emu. inj.
Emulso para infuso
a emulso estril com gua como a fase contnua,
normalmente, isotnica com o sangue e utilizada
principalmente para administrao em grande volume.
Abreviatura: emu. inf.
Emulso spray
a emulso administrada na forma de lquido fnamente
dividido por um jato de ar ou vapor. Abreviatura: emu. spray
Ensaios biolgicos
So procedimentos destinados a avaliar a potncia
de princpios ativos contidos nas matrias-primas e
preparaes farmacopeicas, utilizando reagentes biolgicos
tais como micro-organismos, animais, fuidos e rgos
isolados de animais.
Esprito
a forma farmacutica lquida alcolica ou hidroalcolica,
contendo princpios aromticos ou medicamentosos e
classifcados em simples e compostos. Abreviatura: esp.
Os espritos so obtidos pela dissoluo de substncias
aromticas em etanol, geralmente na proporo de 5%
(p/v).
Esterilidade
Esterilidade a ausncia de micro-organismos viveis.
Extrato
a preparao de consistncia lquida, slida ou
intermediria, obtida a partir de material animal ou vegetal.
O material utilizado na preparao de extratos pode sofrer
tratamento preliminar, tais como, inativao de enzimas,
moagem ou desengorduramento. Abreviatura: ext.
O extrato preparado por percolao, macerao ou outro
mtodo adequado e validado, utilizando como solvente
lcool etlico, gua ou outro solvente adequado. Aps a
extrao, materiais indesejveis podem ser eliminados.
Extrato fuido
a preparao lquida obtida de drogas vegetais ou
animais por extrao com liquido apropriado ou por
dissoluo do extrato seco correspondente, em que,
exceto quando indicado de maneira diferente, uma parte
do extrato, em massa ou volume corresponde a uma parte,
em massa, da droga, seca utilizada na sua preparao. Se
necessrio, os extratos fudos podem ser padronizados em
termos de concentrao do solvente; teor de constituintes,
ou de resduo seco. Se necessrio podem ser adicionados
conservantes inibidores do crescimento microbiano.
Devem apresentar teor de princpios ativos e resduos
secos prescritos nas respectivas monografas. Abreviatura:
ext. fu.
Extrato mole
a preparao de consistncia pastosa obtida por
evaporao parcial de solvente utilizado na sua preparao.
So utilizados como solvente, unicamente, lcool etlico,
gua, ou misturas alcol etlico/gua em proporo
adequada. Apresentam, no mnimo, 70% de resduo seco
(p/p). Se necessrio podem ser adicionados conservantes
inibidores do crescimento microbiano. Abreviatura: ext.
mole
Extrato seco
a preparao slida; obtida por evaporao do solvente
utilizado na sua preparao. Apresenta, no mnimo, 95%
de resduo seco, calculado como porcentagem de massa.
Podem ser adicionados de materiais inertes adequados.
Abreviatura: ext. seco
Os extratos secos padronizados tm o teor de seus
constituintes ajustado pela adio de materiais inertes
adequados ou pela adio de extratos secos obtidos com o
mesmo frmaco utilizado na preparao.
Fabricao
So todas as operaes que se fazem necessrias para a
obteno dos produtos para a sade.
Faixa de destilao
Faixa de destilao o intervalo de temperatura corrigida
para a presso de 101,3 kPa (760 mm de Hg), dentro do
44 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
qual o lquido, ou frao especfca do lquido, destila
inteiramente.
Faixa de fuso
Faixa de fuso de uma substncia o intervalo de
temperatura compreendido entre o incio (no qual a
substncia comea a fuidifcar-se) e o trmino da fuso
(que evidenciado pelo desaparecimento da fase slida).
Frmaco
Veja Insumo farmacutico ativo.
Farmacopeico
A expresso farmacopeico substitui as expresses: ofcial e
ofcinal, utilizadas em edies anteriores, equivalendo-se a
essas expresses para todos os efeitos.
Fator VII da coagulao sangunea humana, lioflizado
a frao protica do plasma que contm o Fator VII
(um derivado glicoprotico de cadeia simples), podendo
igualmente conter pequenas quantidades da sua forma
ativada (o derivado de 2 cadeias ou Fator VIIa).
Fator VIII da coagulao sangunea de origem humana,
lioflizado
a frao proteica do plasma que contm uma glicoprotena
chamada Fator VIII da coagulao e, em funo do mtodo
de purifcao, quantidades variveis do Fator de Von
Willebrand. preparado a partir de uma mistura de plasma
humano para fracionamento obtido de doadores sadios.
Fibrinognio humano, lioflizado
a frao solvel do plasma humano, obtida a partir do
Plasma humano para fracionamento, que por adio da
trombina, transforma-se em fbrina. A preparao pode
conter aditivos (sais, tampes ou estabilizantes) e quando
reconstituda (adio do diluente) deve conter no mnimo,
10 g/L de fbrinognio.
Forma farmacutica
o estado fnal de apresentao dos princpios ativos
farmacuticos aps uma ou mais operaes farmacuticas
executadas com a adio ou no de excipientes apropriados
a fm de facilitar a sua utilizao e obter o efeito
teraputico desejado, com caractersticas apropriadas a
uma determinada via de administrao.
Gel
a forma farmacutica semisslida de um ou mais princpios
ativos que contm um agente gelifcante para fornecer
frmeza a uma soluo ou disperso coloidal (um sistema
no qual partculas de dimenso coloidal tipicamente entre
1 nm e 1 um so distribudas uniformemente atravs do
lquido). Um gel pode conter partculas suspensas.
Gel hidrofbico
o gel que consiste, usualmente, de parafna lquida com
polietileno ou leos gordurosos com slica coloidal ou
sabes de alumnio ou zinco.
Gel lipoflico
o gel resultante da preparao obtida pela incorporao
de agentes gelifcantes tragacanta, amido, derivados de
celulose, polmeros carboxivinlicos e silicatos duplos de
magnsio e alumnio gua, glicerol ou propilenoglicol.
Glbulo
a forma farmacutica slida que se apresenta sob a forma
de pequenas esferas constitudas de sacarose ou de mistura
de sacarose e lactose. So impregnadas pela potncia
desejada e com lcool acima de 70%.
Goma de mascar
a forma farmacutica slida de dose nica contendo um
ou mais princpios ativos, que consiste de material plstico
insolvel, doce e saboroso. Quando mastigado, libera o
princpio ativo.
Granulado
a forma farmacutica slida contendo uma dose nica
de um ou mais princpios ativos, com ou sem excipientes.
Consiste de agregados slidos e secos de volumes
uniformes de partculas de p resistentes ao manuseio.
Abreviatura: granu.
Granulado efervescente
o granulado contendo, em adio aos ingredientes
ativos, substncias cidas e carbonatos ou bicarbonatos,
os quais liberam dixido de carbono quando o granulado
dissolvido em gua. destinado a ser dissolvido ou
disperso em gua antes da administrao. Abreviatura:
granu. efer.
Granulado para soluo
o granulado destinado a ser dissolvido na gua antes da
administrao. A soluo produzida pode ser levemente
leitosa devido aos excipientes utilizados na fabricao dos
granulados. Abreviatura: granu. sol.
Granulado para suspenso
o granulado que em contato com um lquido, rapidamente,
produz uma disperso homognea (suspenso). destinado a
ser disperso antes da administrao. Abreviatura: granu. susp.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 45 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Granulado revestido
o granulado que possui uma ou mais camadas fnas de
revestimento, normalmente polimricas, destinadas a
proteger o frmaco do ar ou umidade, para frmacos com
odor e sabor desagradveis, para melhorar a aparncia
dos granulados ou para alguma outra propriedade que no
seja a de alterar a velocidade ou extenso da liberao do
princpio ativo. Abreviatura: granu. rev.
Granulado revestido de liberao prolongada
o granulado que possui uma ou mais camadas fnas
de revestimento, normalmente polimricas, destinadas
a modifcar a velocidade ou extenso da liberao dos
princpios ativos. Vide defnio de liberao prolongada.
Abreviatura: gran. rev. lib. prol.
Granulado revestido de liberao retardada
o granulado que possui uma ou mais camadas fnas
de revestimento, normalmente polimricas, destinadas
a modifcar a velocidade ou extenso da liberao dos
princpios ativos, apresentando uma liberao retardada do
princpio ativo. Vide defnio geral de liberao retardada.
Abreviatura: granu. rev. lib. ret.
Imunoglobulina humana contra a hepatite A
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
Imunoglobulina humana contra a hepatite B
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, imunoglobulina humana contra a
hepatite B principalmente a imunoglobulina G.
Imunoglobulina humana contra a hepatite B para uso
intravenoso
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
Imunoglobulina humana contra a raiva
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
Imunoglobulina humana contra a rubola
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
Imunoglobulina humana contra a varicela
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
Imunoglobulina humana contra a varicela para uso
intravenoso
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
Imunoglobulina humana contra o antgeno D
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
Imunoglobulina humana contra o sarampo
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
Imunoglobulina humana contra o ttano
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G.
obtida a partir do plasma contendo anticorpos especfcos
contra a toxina do Clostridium tetani.
Imunoglobulina humana normal
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
principalmente IgG. Outras protenas, tambm, podem
estar presentes.
Imunoglobulina humana normal para administrao por
via intravenosa
uma preparao estril; lquida, ou lioflizada contendo
imunoglobulinas, principalmente a imunoglobulina G
(IgG). Podem estar presentes outras protenas. Contm
anticorpos IgG de indivduos normais.
Indicador biolgico
uma preparao caracterizada de micro-organismo
especfco que possui resistncia defnida e estvel a um
determinado processo de esterilizao.
ndice de refrao
O ndice de refrao (n) de uma substncia a relao entre
a velocidade da luz no vcuo e sua velocidade no interior
da substncia.
Para fns prticos mede-se a refrao com referncia ao ar e
substncia e no com referncia ao vcuo e substncia.
Pode-se defnir o ndice de refrao como a relao entre
o seno do ngulo de incidncia e o seno do ngulo de
refrao, isto , n = sen i / sen r.
Injetvel
a preparao estril destinada administrao parenteral.
Apresenta-se como soluo, suspenso, ou emulso.
Abreviatura: inj.
46 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Inseticidas
So produtos para usos externos, destinados preveno e
ao controle dos insetos, em habitaes, recintos e lugares
de uso pblico e suas cercanias.
Insulina
Insulina uma protena que afeta o metabolismo da glicose.
Ela obtida do pncreas de bovinos e sunos saudveis, ou
ambos, utilizados como alimento pelos humanos.
Insulina humana
Insulina humana uma protena correspondente a um
princpio ativo elabora no pncreas humano que afeta o
metabolismo dos carboidratos (particularmente glicose),
lpides, e protenas.
Insulina humana isfana suspenso
Insulina humana isfana suspenso uma suspenso estril
de cristais de insulina humana zinco e sulfato protamina
na gua tamponada para a injeo, combinados de uma
maneira tal que a fase slida da suspenso composta por
cristais de insulina humana, protamina, e zinco.
Insulina humana isfana suspenso e injeo insulina
humana
Insulina humana isfana suspenso e insulina humana
injeo uma suspenso estril tamponada de insulina
humana, complexada com sulfato de protamina, em uma
soluo de insulina humana.
Insulina humana zinco suspenso
uma suspenso estril de insulina humana em gua
tamponada para a injeo, modifcada pela adio de um sal
de zinco adequado de modo que a fase slida da suspenso
constituda por uma mistura de insulina cristalina e
amorfa em uma razo de cerca de 7 partes de cristais e de 3
partes de material amorfo.
Insulina humana zinco suspenso estendida
uma suspenso estril de insulina humana em gua
tamponada para a injeo, modifcada pela adio de um
sal de zinco adequado de modo a que a fase slida da
suspenso predominantemente cristalina.
Insulina injetvel
Insulina injetvel uma soluo isotnica e estril de
insulina.
Insulina lispro
idntica em estrutura insulina humana, exceto
que ela tem de lisina e prolina nas posies 28 e 29,
respectivamente, da cadeia B, enquanto esta sequncia
invertida em insulina humana. Insulina lispro produzida
por sntese microbiana atravs de um processo de DNA
recombinante.
Insumo farmacutico ativo
uma substncia qumica ativa, frmaco, droga, ou
matria-prima que tenha propriedades farmacolgicas
com fnalidade medicamentosa utilizada para diagnstico,
alvio, ou tratamento, empregada para modifcar ou
explorar sistemas fsiolgicos ou estados patolgicos em
benefcio da pessoa na qual se administra.
Quando se destinada a emprego em medicamentos,
devem atender s exigncias previstas nas monografas
individuais.
Isoladores
So equipamentos que empregam tecnologia usada para
dupla proposta, de proteger o produto da contaminao
do ambiente e pessoas durante envase e fechamento e de
proteger pessoas de produtos txicos ou deletrios que so
produzidos.
Liberao convencional
o tipo de liberao de formas farmacuticas que no
so modifcadas intencionalmente por um desenho de
formulao especial e/ou mtodo de fabricao.
Liberao paramtrica
defnida como a liberao de carga ou lotes de
produtos submetidos esterilizao terminal, por meio
do cumprimento de parmetros crticos do processo de
esterilizao, sem a necessidade de realizao do teste de
esterilidade.
Liberao prolongada
o tipo de liberao modifcada de formas farmacuticas
que possibilita pelo menos uma reduo na frequncia de
dose quando comparada com o medicamento apresentado
na forma de liberao convencional. obtida por meio
de um desenho de formulao especial e/ou mtodo de
fabricao.
Liberao retardada
o tipo de liberao modifcada de formas farmacuticas
que apresenta uma liberao retardada do princpio ativo.
A liberao retardada obtida por meio de um desenho
de formulao especial e/ou mtodo de fabricao. As
preparaes gastrorresistentes so consideradas formas de
liberao retardada, pois so destinadas a resistir ao fuido
gstrico e liberar o princpio ativo no fuido intestinal.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 47 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Loo
a preparao lquida aquosa ou hidroalcolica, com
viscosidade varivel, para aplicao na pele, incluindo o
couro cabeludo. Pode ser soluo, emulso ou supenso
contendo um ou mais princpios ativos ou adjuvantes.
Lote ou partida
a quantidade de um medicamento, ou outro produto, que
se produz em um ciclo de fabricao e cuja caracterstica
essencial a homogeneidade.
Material de embalagem
Compreende-se por material de embalagem o recipiente;
envoltrio; invlucro; ou qualquer outra forma de proteo,
removvel ou no, usado para envasar; proteger; manter;
cobrir; ou empacotar, especifcamente, ou no, matrias-
primas; reagentes e medicamentos. Abreviatura: mat. emb.
Matrias-primas
Substncias ativas ou inativas que se empregam na
fabricao de medicamentos e de outros produtos, tanto
as que permanecem inalteradas quanto as passveis de
sofrerem modifcaes.
Media fll
um teste para simulao das operaes asspticas em
que o produto substitudo por um meio de cultura e serve
para assegurar que os processos utilizados so capazes de
produzir produtos estreis.
Medicamento
o produto farmacutico, tecnicamente, obtido, ou
elaborado, que contm um ou mais frmacos e outras
substncias, com fnalidade profltica; curativa; paliativa;
ou para fns de diagnstico.
Medicamento de referncia
o produto inovador registrado no rgo federal Brasileiro,
responsvel pela vigilncia sanitria e comercializado
no pas, cuja efccia, segurana e qualidade foram
comprovados, cientifcamente, no rgo federal
competente, por ocasio do registro.
Medicamento genrico
o medicamento similar a um produto de referncia ou
inovador, que pretende ser com esse intercambivel,
geralmente produzido aps a expirao ou renncia da
proteo patentria ou de outros direitos de exclusividade,
comprovada a sua efccia, segurana e qualidade, e
designado pela DCB ou, na sua ausncia, pela DCI.
Medicamento intercambivel
o medicamento equivalente teraputico de um
medicamento de referncia, comprovados, essencialmente,
os mesmos efeitos de efccia e segurana.
Medicamento magistral
todo medicamento cuja prescrio pormenoriza a
composio, a forma farmacutica e a posologia.
preparado na farmcia, por um profssional farmacutico
habilitado ou sob sua superviso direta.
Medicamento pressurizado
o medicamento acondicionado em frascos mantidos
sobre presso, contendo um gs propelente e ingredientes,
terapeuticamente ativo que liberado aps a ativao de
sistema apropriado de vlvulas.
Medicamento similar
aquele que contm o mesmo ou os mesmos princpios
ativos, apresenta a mesma concentrao, forma
farmacutica, via de administrao, posologia e indicao
teraputica, e que equivalente ao medicamento registrado
no rgo federal, responsvel pela vigilncia sanitria,
podendo diferir somente em caractersticas relativas
ao tamanho e forma do produto, prazo de validade,
embalagem, rotulagem, excipientes e veculo, devendo
sempre ser identifcado por nome comercial ou marca.
Meia-vida biolgica
o tempo necessrio para um organismo remover, por
eliminao biolgica, metade da quantidade de uma
substncia administrada.
Meia-vida efetiva
o tempo necessrio para um radionucldeo em um
organismo diminuir sua atividade pela metade como
um resultado combinado da eliminao biolgica e do
decaimento radioativo. A meia-vida efetiva importante
para o clculo da dose tima do radiofrmaco a ser
administrada e no monitoramento da quantidade de
exposio radiao.
Mtodos imunoqumicos
So mtodos que se baseiam numa ligao seletiva,
reversvel e no covalente entre antgenos e anticorpos.
Misturas de plasma humano excedente tratado por
inativao viral
Preparao congelada ou lioflizada, estril, apirognica,
obtida a partir de plasma humano excedente proveniente
de doadores do mesmo grupo sanguneo ABO e Rh(D
u
).
A preparao descongelada ou reconstituda antes
48 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
de seu uso de modo a obter uma soluo injetvel. O
plasma humano utilizado deve satisfazer s exigncias da
monografa Plasma humano para fracionamento.
Nvel de garantia de esterilidade
o grau de garantia que o processo em questo esterilizauma
populao de itens, sendo expresso como a probabilidade
de um item no estril naquela populao.
Nome qumico
o nome da substncia farmacopeica, de acordo com a
nomenclatura preconizada pela Unio Internacional de
Qumica Pura e Aplicada (IUPAC).
Nmero do lote
Designao impressa na rotulagem de um medicamento e de
outros produtos que permita identifcar o lote ou a partida a
que pertenam e, em caso de necessidade, localizar e rever
todas as operaes de fabricao e inspeo praticadas
durante a produo.
Nutrimentos
So substncias constituintes dos alimentos de valor
nutricional, incluindo protenas, gorduras, hidratos de
carbono, gua, elementos minerais e vitaminas.
Osmolalidade
uma forma prtica que d uma medida total da
contribuio de vrios solutos numa soluo pela presso
osmtica da soluo. A unidade de osmolalidade osmol
por kilograma (osmol/kg), mas o submltiplo miliosmol
por kilograma (mosmol/kg) normalmente usado.
vulo
a forma farmacutica slida, de dose nica, contendo
um ou mais princpios ativos dispersos ou dissolvidos em
uma base adequada que tem vrios formatos, usualmente,
ovide. Fundem na temperatura do corpo.
Padres de referncia da Farmacopeia Brasileira
De acordo com defnio da OMS, padres de referncia
farmacopeicos (PRef) so produtos de uniformidade
reconhecida, destinados ao uso em ensaios onde uma ou
mais de suas propriedades ser(o) comparada(s) com
a(s) da substncia em exame. Possuem um grau de pureza
adequado ao uso ao qual se destinam.
O PRef estabelecido e distribudo por autoridades
farmacopeicas, cujo valor atribudo a uma ou mais de suas
propriedades aceito sem necessitar comparao com
outro padro, destinado ao uso em ensaios especfcos
descritos nas monografas farmacopeicas. Incluem
substncias qumicas de referncia, produtos biolgicos,
extratos e ps vegetais, radiofrmacos, entre outros. A
expresso relacionada mais usada : Substncia Qumica
de Referncia Farmacopeica.
Pasta
a pomada contendo grande quantidade de slidos
em disperso (pelo menos 25%). Devero atender as
especifcaes estabelecidas para pomadas.
Pastilha
a forma farmacutica slida que contm um ou mais
princpios ativos, usualmente, em uma base adocicada e
com sabor. utilizada para dissoluo, ou desintegrao
lenta na boca. Pode ser preparada por modelagem, ou por
compresso. Abreviatura: pas.
Pastilha dura
Pastilha rgida para ser dissolvida lentamente. Abreviatura:
pas. dura
Pastilha gomosa
Pastilha fexvel e macia de misturas contendo polmeros
sintticos ou naturais. Abreviatura: pas. go.
Perfume
o produto de composio aromtica obtida base de
substncias naturais ou sintticas, que, em concentraes
e veculos apropriados, tenham como principal fnalidade a
odorizao de pessoas ou ambientes, includos os extratos,
as guas perfumadas, os perfumes cremosos, preparados
para banho e os odorizantes de ambientes, apresentados em
forma lquida, geleifcada, pastosa ou slida.
Plasma fresco congelado
a parte liquida remanescente de uma unidade de sangue
total obtida aps centrifugao e separao de suas
fraes celulares que dever ser totalmente congelado at
4 horas aps coleta do sangue total que lhe deu origem,
assegurando a manuteno da integridade e concentraes
dos fatores lbeis da coagulao.
Plasma humano para fracionamento
a parte lquida remanescente do sangue total aps
separao das fraes celulares sanguneas mediante o uso
de sistemas fechados apropriados de coleta ou centrifugao,
que contem os fatores lbeis da coagulao. Contm
soluo anticoagulante, conservadora e preservadora,
sendo armazenado a uma temperatura de 30 C ou inferior.
Destina-se preparao de hemoderivados de acordo com
as Boas Prticas de Fabricao de Medicamentos.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 49 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
P
a forma farmacutica slida contendo um ou mais
princpios ativos secos e com tamanho de partcula
reduzido, com ou sem excipientes.
P aerossol
o p embalado sob presso contendo um gs propelente
e ingredientes terapeuticamente ativos que so liberados
aps a ativao de um sistema apropriado de vlvulas.
Abreviatura: p aer.
P efervescente
o p contendo, em adio aos ingredientes ativos,
substncias cidas e carbonatos ou bicarbonatos, os quais
liberam dixido de carbono quando o p dissolvido em
gua. destinado a ser dissolvido ou disperso em gua
antes da administrao. Abreviatura: p efev.
P lioflizado para soluo injetvel
o p estril destinado adio subsequente de lquido
para formar uma soluo. Preparado por lioflizao, um
processo que envolve a remoo de gua dos produtos
pelo congelamento a presses extremamente baixas.
Abreviatura: p liof. sol. inj.
P lioflizado para suspenso injetvel
o p estril destinado adio subsequente de
lquido para formar uma suspenso. Preparado por
lioflizao, um processo que envolve a remoo
de gua dos produtos pelo congelamento a presses
extremamente baixas. Abreviatura: p liof. sus. inj.
P lioflizado para suspenso injetvel de liberao
prolongada
o p estril destinado adio subsequente de lquido
para formar uma suspenso. Preparado por lioflizao,
um processo que envolve a remoo de gua dos produtos
pelo congelamento a presses extremamente baixas. Veja
defnio geral de liberao prolongada. Abreviatura: p.
liof. sus. inj. lib. prol.
P para colutrio
o p que deve ser dissolvido em gua antes do uso para
o preparo do colutrio, que um lquido destinado ao
enxgue bucal para agir sobre as gengivas e as mucosas da
boca e da garganta. No deve ser deglutido. Abreviatura:
p colu.
P para soluo
o p destinado a ser reconstitudo para formar uma
soluo. Abreviatura: p sol.
P para soluo injetvel
o p estril destinado adio subsequente de lquido
para formar uma soluo. Abreviatura: p sol. inj.
P para soluo para infuso
o p estril destinado reconstituio para formar uma
soluo para uso por infuso. Essa soluo , normalmente,
isotnica com o sangue e utilizada principalmente para
administrao em grande volume. Abreviatura: p sol. inf.
P para suspenso
o p destinado a ser reconstitudo para formar uma
suspenso. Abreviatura: p sus.
P para suspenso injetvel
o p estril destinado adio subsequente de lquido
para formar uma suspenso. Abreviatura: p sus. inj.
P para suspenso injetvel de liberao prolongada
o p estril destinado adio subsequente de lquido
para formar uma suspenso. Veja defnio de liberao
prolongada. Abreviatura: p sus. inj. lib.prol.
Pomada
a forma farmacutica semisslida, para aplicao na
pele ou em membranas mucosas, que consiste da soluo
ou disperso de um ou mais princpios ativos em baixas
propores em uma base adequada usualmente no aquosa.
Abreviatura: pom.
Prazo de validade
o tempo durante o qual o produto poder ser usado,
caracterizado como perodo de vida til e fundamentada
nos estudos de estabilidade especfcos. Abreviatura: val.
O prazo de validade dever ser indicado nas embalagens
primrias e secundrias. Quando indicar ms e ano,
entende-se como vencimento do prazo o ltimo dia desse
ms. As condies especifcadas, pelo fabricante, de
armazenamento e transporte devem ser mantidas.
Preparao tpica semisslida
a preparao prevista para aplicao na pele ou em
certas mucosas para ao local ou penetrao percutnea
de medicamentos, ou ainda por sua ao emoliente ou
protetora.
Processo assptico
aquele projetado de forma a prevenir a contaminao
dos componentes estreis por micro-organismos viveis ou
ainda na fase intermediria da produo.
50 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Produto de higiene
o produto para uso externo; antissptico ou no; destinado
ao asseio ou desinfeco corporal, compreendendo
o sabonete, xampu, dentifrcio, enxaguatrio bucal,
antiperspirante, desodorante, produto para barbear e aps o
barbear, estptico e outros. Abreviatura: pro. hig.
Produto diettico
o produto tecnicamente elaborado para atender s ne-
cessidades dietticas de pessoas em condies fsiolgicas
especiais. Abreviatura: pro. diet.
Produto semielaborado
toda substncia ou mistura de substncias ainda sob o
processo de fabricao.
Pureza
Grau em que um frmaco, matria-prima contm outros
materiais estranhos.
Raticida
a preparao destinada ao combate a ratos, camundongos
e outros roedores, em domiclios, embarcaes, recintos
e lugares de uso pblico, contendo substncias ativas,
isoladas ou em associao, que no ofeream risco vida
ou sade do homem e dos animais teis de sangue quente,
quando aplicados em conformidade com as recomendaes
contidas em sua apresentao.
Reaes qumicas de identifcao
So reaes usadas no auxlio da caracterizao de uma
substncia. Embora especfcas, s sero sufcientes
para estabelecer ou confrmar a identidade da substncia
quando consideradas em conjunto com outros testes e
especifcaes constantes na monografa.
A no ser que a monografa especifque diferentemente,
as reaes qumicas so feitas em tubos de ensaio de
aproximadamente 15 mm de dimetro interno. Utilizam-
se 5 mL do lquido ou soluo a examinar, adicionando-
se trs gotas de reagente ou de cada reagente. O exame
do contedo do tubo de ensaio deve ser feito sobre toda a
camada lquida, observando de cima para baixo, no sentido
do eixo longitudinal dos tubos, aps cinco minutos de
repouso.
Usualmente, apresentada na monografa a ordem de
preferncia dos testes de identifcao. Quando no
constar a ordem, todos os testes de identifcao devem ser
realizados.
Reagentes
So substncias utilizadas em testes, reaes, ensaios
e doseamentos farmacopeicos, quer como tais ou em
solues.
Recipiente bem fechado
aquele que protege seu contedo de perdas e
contaminao por slidos estranhos, nas condies usuais
de manipulao, armazenagem, distribuio e transporte.
Recipiente hermtico
aquele impermevel ao ar, ou qualquer outro gs,
nas condies usuais de manipulao, armazenagem,
distribuio e transporte.
Recipiente opaco
aquele que impede a visualizao do contedo,
abrangendo todas as cores. Constitui barreira de proteo
luminosidade.
Recipiente para dose nica
o recipiente hermtico que contm determinada
quantidade do medicamento destinada a ser administrada
de uma s vez e que depois de aberto, no poder ser
fechado com garantia de esterilidade.
Recipiente para doses mltiplas
o recipiente hermtico que possibilita a retirada de pores
sucessivas de seu contedo, sem modifcar a concentrao,
a pureza e a esterilidade da poro remanescente.
Recipiente perfeitamente fechado
aquele que protege seu contedo de perdas e de
contaminao por slidos, lquidos e vapores estranhos,
eforescncia, deliquescencia, ou evaporao nas condies
usuais de manipulao, armazenagem, distribuio, e
transporte.
Recipiente translcido
aquele que possibilita a visualizao parcial do contedo,
abrangendo todas as cores exceto o mbar.
Recipiente transparente
aquele que possibilita a visualizao total do contedo,
abrangendo todas as cores exceto o mbar.
Registro
a inscrio, em livro prprio aps o despacho concessivo
do dirigente do rgo do Ministrio da Sade, sob nmero de
ordem, dos produtos, com a indicao do nome, fabricante,
da procedncia, fnalidade e dos outros elementos que os
caracterizem.
Resistncia hidroltica ou alcalinidade
o ensaio que quantifca a intensidade da reao qumica
entre a gua e os elementos alcalinos existentes no vidro,
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 51 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
especialmente sdio e potssio. Essa resistncia determina
a classifcao do tipo de vidro.
Rtulo
a identifcao impressa ou litografada, bem como
os dizeres pintados ou gravados a fogo, a presso ou
autoadesiva, aplicados diretamente sobre recipientes;
invlucros; envoltrios; cartuchos; ou qualquer outro
protetor de embalagem, externo ou interno, no podendo
ser removido ou alterado durante o uso do produto e
durante seu transporte, ou seu armazenamento.
A confeco dos rtulos dever obedecer s normas
vigentes do rgo federal de Vigilncia Sanitria.
Sala limpa
Sala na qual a concentrao de partculas em suspenso
no ar controlada. construda e utilizada de maneira a
minimizar a introduo, gerao e reteno de partculas
dentro da sala, na qual os outros parmetros relevantes
como, por exemplo, temperatura, umidade e presso, so
controlados conforme necessrio.
Saneante domissanitrio
a substncia ou preparao destinada higienizao;
desinfeco ou desinfestao domiciliar; de ambientes
coletivos, particulares ou pblicos, em lugares de uso
comum e no tratamento da gua.
Sangue humano
um tecido vivo, circulante, conjuntivo, de natureza celular,
plasmtica e ou protica, que se encontra contido dentro
do aparelho cardiovascular, desempenhando mltiplas e
complexas funes que assegurem ao organismo humano a
manuteno da vida.
Sangue humano transfusional
o sangue total humano in vitro proveniente de doadores
saudveis colhido em sistemas de envase para coleta,
armazenamento e processamento do sangue humano
contendo soluo anticoagulante conservadora e
preservadora.
Sistema fechado
Sistema de administrao de solues parenterais que,
durante todo o preparo e administrao, no permite o
contato da soluo com o meio ambiente.
Sistemas de envase para coleta, armazenamento e
processamento do sangue humano ou sistemas fechados
de coleta de sangue humano
So recipientes conhecidos ou denominados por bolsas
plsticas contendo ou no uma soluo anticoagulante,
conservadora e preservadora, destinados a coleta,
armazenamento, fracionamento e administrao do sangue
humano ou de seus derivados. So atxicos, estreis,
apirognicos e descartveis, podendo ser fabricados a
partir de um ou vrios polmeros, e conforme os casos,
de certos aditivos e so validados pelos seus respectivos
mtodos analticos.
Soluo forma farmacutica
a forma farmacutica lquida; lmpida e homognea, que
contm um ou mais princpios ativos dissolvidos em um
solvente adequado ou numa mistura de solventes miscveis.
Abreviatura: sol.
Soluo colorimtrica
a soluo utilizada na preparao de padres
colorimtricos para fns de comparao. So designadas
por SC.
Soluo de albumina humana
Soluo de albumina humana uma soluo protica,
estril e apirognica obtida do plasma humano que est de
acordo com as exigncias da monografa Plasma Humano
para Fracionamento.
Soluo molal
a soluo que contm um mol do soluto por kilograma
de solvente.
Soluo molar
a soluo que contm uma molcula-grama do soluto em
1000 mL da soluo. Os mltiplos e submltiplos da soluo
molar, tambm, so designados por nmeros inteiros ou
fraes decimais como: 2 M; M; 0,5 M; 0,1 M; etc.
Soluo normal
a soluo que contm um equivalente grama do soluto em
1000 mL da soluo. Os mltiplos e submltiplos da soluo
normal, tambm, so designados por nmeros inteiros ou
fraes decimais como 2 N, N; 0,5 N, 0,1 N, etc.
Soluo volumtrica
a soluo de reagentes, de concentrao conhecida,
destinada ao uso em determinaes quantitativas. Na FB 5
as concentraes das solues volumtricas so expressas
em molaridade. So designadas por SV.
Solues anticoagulantes conservadoras e preservadoras
do sangue humano
So solues destinadas coleta do sangue humano
objetivando no s torn-lo incoagulvel, mas tambm
assegurar a manuteno e a integridade morfofuncionais
e proticas de seus constituintes celulares e plasmticos.
52 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Solues indicadoras
So solues de indicadores em solventes especfcos e
concentraes defnidas. So designadas por SI.
Solues reagentes
So solues de reagentes em solventes especfcos e
concentraes defnidas. So designadas por SR.
Soros hiperimunes para uso humano
Os soros hiperimunes so preparaes contendo
imunoglobulinas purifcadas, de origem animal, que
neutralizam especifcamente toxinas bacterianas, bactrias,
vrus ou componentes txicos do veneno de uma ou mais
espcies de animais peonhentos.
Substncia adjuvante
a substncia com fnalidade especfca adicionada s
preparaes injetveis. Essa substncia deve ser selecionada
tendo em vista o aumento da estabilidade do produto; no
interferncia na efccia teraputica nem no doseamento do
principio ativo; tampouco causar toxicidade na quantidade
administrada ao paciente. A substncia adjuvante pode
ser solubilizante; antioxidante; agente quelante; tampo;
agente antibacteriano; agente antifngico; agente anti-
espumante e outros, quando especifcado na monografa
individual. Abreviatura: subs. adj.
A presena de substncia adjuvante deve ser, claramente,
indicada nos rtulos das embalagens primrias e
secundrias, em que o produto entregue para o consumo.
Se no houver contra indicao expressa, o ar dos
recipientes pode ser substitudo por dixido de carbono ou
nitrognio. No permitida a adio de substncia corante.
Esto relacionados a seguir os limites mximos para alguns
adjuvantes, a menos que a monografa especifque de outra
forma:
a) para agentes contendo mercrio ou compostos
tensoativos catinicos 0,01%;
b) para agentes do tipo clorobutanol, cresol e fenol
0,5%;
c) para dixido de enxofre, ou quantidade equivalente de
sulfto, bissulfto ou metabissulfto de potssio ou sdio
0,2%.
Substncia qumica caracterizada
SQR utilizada na inexistncia de uma SQR Farmacopeica.
Essa SQR deve ser caracterizada por meio de ensaios
adequados e os valores obtidos devem ser devidamente
documentados.
Substncia Qumica de Referncia da Farmacopeia
Brasileira (SQR.FB)
estabelecida e disponibilizada pela Direo da
Farmacopeia Brasileira, seguindo os princpios da OMS,
e ofcializada pela Anvisa, sendo o seu uso obrigatrio
em todo territrio nacional. Na ausncia de uma SQR.
FB permitido o uso de SQR estabelecida por outras
farmacopeias reconhecidas, conforme legislao vigente.
Os padres para Espectrofotometria de Absoro Atmica
so identifcados por meio da denominao do metal,
seguida da sigla SRA (Soluo Reagente para Absoro
Atmica).
Substncia qumica de trabalho
estabelecida por comparao com uma SQR
Farmacopeica, por meio de ensaios farmacopeicos,
ou devidamente validados, e registrados pelo prprio
laboratrio que ir utiliz-la. Nessa situao, devero ser
mantidos os registros analticos e realizados controles
peridicos, empregando-se uma SQR Farmacopeica.
Substncias insaponifcveis
Substncias insaponifcveis so aquelas remanescentes
reao de saponifcao, no volteis a 100 - 105 C e que
foram carreadas no processo de extrao da substncia a
ensaiar.
Supositrio
a forma farmacutica slida de vrios tamanhos e
formatos adaptados para introduo no orifcio retal,
vaginal ou uretral do corpo humano, contendo um ou
mais princpios ativos dissolvidos numa base adequada.
Eles, usualmente, se fundem, derretem ou dissolvem na
temperatura do corpo Abreviatura: supo.
Suspenso
a forma farmacutica lquida que contm partculas
slidas dispersas em um veculo lquido, no qual as
partculas no so solveis. Abreviatura: sus.
Suspenso aerossol
a suspenso embalada sob presso contendo um gs
propelente e ingredientes terapeuticamente ativos que so
liberados aps a ativao de um sistema apropriado de
vlvulas. Abreviatura: sus. aer.
Suspenso de liberao prolongada
a forma farmacutica lquida que contm partculas
slidas dispersas em um veculo lquido, no qual as
partculas no so solveis. Veja defnio de liberao
prolongada. Abreviatura: sus. lib. prol.
Suspenso de liberao retardada
a forma farmacutica lquida que contm partculas
slidas dispersas em um veculo lquido, no qual as
partculas no so solveis. Veja defnio de liberao
retardada. Abreviatura: sus. lib. ret.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 53 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Suspenso gotas
a suspenso destinada administrao na forma de gotas.
Abreviatura: sus. go.
Suspenso injetvel
a suspenso estril. Abreviatura: sus. inj.
Suspenso injetvel de liberao prolongada
a suspenso estril. Veja defnio de liberao
prolongada. Abreviatura: sus. inj. lib. prol.
Suspenso spray
a suspenso administrada na forma de lquido fnamente
dividido por um jato de ar ou vapor. Abreviatura: sus. spray.
Tablete
a forma farmacutica slida preparada a partir de uma
massa feita com soluo hidroalcolica, o princpio ativo
e lactose, ou da prpria triturao umedecida em soluo
hidroalcolica. moldada em tableteiros e frgil e
quebradia.
Tampo
a preparao base de sais que so capazes de suportar
variaes na atividade de ons hidrognio.
Temperatura ou ponto de congelamento
Temperatura ou ponto de congelamento de lquido ou de
slido fundido a mais alta temperatura na qual ele se
solidifca.
Para substncias puras que fundem sem decomposio, o
ponto de congelamento do lquido igual a seu ponto de
fuso.
Temperatura ou ponto de ebulio
Temperatura ou ponto de ebulio de um lquido a
temperatura corrigida na qual o lquido ferve sob presso
de vapor de 101,3 kPa (760 mm de Hg).
Temperatura ou ponto de fuso
Temperatura ou ponto de fuso de uma substncia a
temperatura na qual esta se encontra completamente
fundida.
Tintura
a preparao alcolica ou hidroalcolica resultante da
extrao de drogas vegetais ou animais ou da diluio dos
respectivos extratos. classifcada em simples e composta,
conforme preparada com uma ou mais matrias-primas.
Abreviatura: tin.
A menos que indicado de maneira diferente na monografa
individual, 10 mL de tintura simples correspondem a 1 g
de droga seca.
Vacinas
Produtos biolgicos que contem uma ou mais substncias
antignicas que, quando inoculadas, so capazes de induzir
imunidade especfca ativa e proteger contra doena
causada pelo agente infeccioso que originou o antgeno.
Valor D (tempo de reduo decimal)
o tempo, em minutos, necessrio para reduzir a populao
microbiana em 90% ou um ciclo logartmico.
Valor F
o
uma medida da efccia esterilizante, isto , o nmero de
minutos de esterilizao trmica por vapor determinada
temperatura fornecida a um recipiente ou unidade de
produto, num dado valor Z.
Valor Z
a elevao de temperatura, em graus, necessria para
reduzir o Valor D em 90% ou produzir a reduo de um
ciclo logartmico na curva de resistncia trmica.
Vias de administrao
o local do organismo por meio do qual o medicamento
administrado.
Viscosidade
a expresso da resistncia de lquidos ao escoamento,
ou seja, ao deslocamento de parte de suas moleculas sobre
moleculas vizinhas. A viscosidade dos lquidos vem do
atrito interno, isso , das foras de coeso entre molculas
relativamente juntas. Com o aumento da temperatura,
aumenta a energia cintica mdia das molculas, diminui
(em mdia) o intervalo de tempo que as molculas passam
umas junto das outras, menos efetivas se tornam as foras
intermoleculares e menor a viscosidade.
A unidade dinmica, Sistema CGS, de viscosidade o poise.
O Sistema CGS de unidades um sistema de unidades de
medidas fsicas, ou sistema dimensional, de tipologia LMT
(comprimento, massa tempo), cujas unidades base so o
centmetro para o comprimento, o grama para a massa e o
segundo para o tempo.
Xarope
a forma farmacutica aquosa caracterizada pela alta
viscosidade, que apresenta no menos que 45% (p/p) de
sacarose ou outros acares na sua composio. Os xaropes
geralmente contm agentes favorizantes. Abreviatura: xpe.
54 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Quando no se destina ao consumo imediato, deve ser
adicionado de conservadores antimicrobianos autorizados.
INFORMAES GERAIS
gua
A gua mencionada nos testes, reaes e ensaios gua
purifcada. Para preparaes injetveis, deve-se utilizar
gua para injetveis, descrita em monografa individual.
Quando for prescrito o uso de gua isenta de dixido
de carbono, utilizar gua purifcada fervida durante, no
mnimo, cinco minutos e protegida do ar atmosfrico
durante o resfriamento e armazenagem.
Aparelhos volumtricos
Os aparelhos volumtricos so empregados nas medidas
de volume nos testes, nos ensaios e nos doseamentos
farmacopeicos, e devem estar aferidos temperatura de
25 C. Caso o aparelho volumtrico no tenha sido aferido
a 25 C, as medidas de volume devem ser realizadas na
temperatura nele indicada.
Nas medies de volume, o nvel inferior do menisco
do lquido contido nos aparelhos volumtricos deve
tangenciar a parte superior da linha de referncia, com
a linha de viso no mesmo plano. Nos casos de lquidos
fortemente corados, ou opacos utiliza-se como referncia
a borda superior do menisco, no plano horizontal de viso.
Os aparelhos volumtricos para transferncia de lquidos
(pipetas; ou buretas), em virtude de terem sido aferidos com
gua, s podero fornecer exatamente o volume indicado
quando os lquidos a medir tiverem, aproximadamente, a
viscosidade, a tenso superfcial e a densidade da gua.
Conservao
As substncias farmacopeicas devem ser conservadas
sob condies tais que evitem sua contaminao ou
deteriorao. As condies de conservao de substncias
farmacopeicas fguram nas respectivas monografas.
Proteger da luz signifca que a substncia deve ser
conservada em recipiente opaco ou capaz de impedir a
ao da luz.
Proteger da poeira signifca que a substncia deve ser
mantida em frasco arrolhado e usar capuz protetor.
Na monografa podem estar defnidas as condies de
temperatura em que a substncia deve ser conservada,
utilizando-se termos descritos a seguir.
Em congelador Em temperatura entre -20 C e 0 C.
Em refrigerador Em temperatura entre 2 C e 8 C.
Local fresco Ambiente cuja temperatura permanece entre
8 C e 15 C.
Local frio Ambiente cuja temperatura no excede 8 C.
Temperatura ambiente Temperatura, normalmente,
encontrada em um ambiente de trabalho, entre 15 C e 30 C.
Local quente Ambiente cuja temperatura permanece
entre 30 C e 40 C.
Calor excessivo Indica temperaturas acima de 40 C.
Quando for necessrio conservar um frmaco em local
fresco, pode-se conserv-lo em refrigerador, a menos que
indicado de maneira diferente na monografa individual.
Quando na monografa no forem especifcadas condies
de conservao, elas incluem proteo contra a umidade,
congelamento e calor excessivo.
Descrio de substncia
As informaes referentes descrio de uma substncia
so genricas e destinam-se avaliao preliminar da sua
integridade. A descrio, por si, no indicativa da pureza,
devendo ser associada a outros testes farmacopeicos
para assegurar que a substncia esteja de acordo com a
monografa.
Dessecao at peso constante
Essa expresso signifca que a secagem deve prosseguir
at que duas pesagens consecutivas no difram em mais
de 0,5 mg por grama da substncia em exame, sendo que
a segunda pesagem deve ser efetuada aps uma hora de
secagem adicional nas condies especifcadas.
Dessecador
Compreende-se por dessecador um recipiente que possa
ser perfeitamente fechado, de formato e dimenses
adequadas que possibilitam manter atmosfera de baixo
teor de umidade por meio de agentes dessecantes nele
introduzidos, tais como: slica-gel; cloreto de clcio anidro;
pentxido de fsforo; cido sulfrico; dentre outros.
Dessecador presso reduzida o que possibilita manter
atmosfera de baixa umidade presso reduzida de no
mais que 6,7 kPa (aproximadamente 50 mm de mercrio),
ou presso indicada na monografa.
Doseamento e determinao da potncia
Quando o resultado de um ensaio ou de um doseamento
expresso em relao substncia seca; em relao
substncia; ou qualquer outra base especfca, a
determinao da perda por secagem, do teor de gua ou de
outra propriedade designada efetuada segundo o mtodo
descrito no respectivo ensaio na monografa da substncia
em causa, ou segundo o descrito na rotulagem.
Ensaios de identifcao
Os ensaios de identifcao possibilitam verifcar, com um
nvel de certeza aceitvel, que a identidade do material
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 55 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
sob exame est de acordo com o rtulo de sua embalagem.
Embora especfcos, eles no so, necessariamente,
sufcientes para estabelecer prova absoluta de identidade.
Entretanto, o no cumprimento dos requerimentos de um
ensaio de identifcao pode signifcar erro de rotulagem
do material. Outros testes e especifcaes na monografa
contribuem para a confrmao da identidade do artigo sob
exame.
Alguns ensaios de identifcao devem ser considerados
conclusivos como; infravermelho; espectrofotometria
com absoro especfca e cromatografa a lquido de alta
efcincia acoplada a espectrofotometria. Esses ensaios
devem ser realizados em complemento ao ensaio do contra
on, quando aplicvel.
Estrutura das monografas
As monografas de matrias-primas so identifcadas por
suas denominaes comuns Brasileiras (DCB), grafadas
em caixa alta e centralizadas. Alm disso, so includos,
tambm:
sempre que possvel, a denominao em latim proposta
pelo INN International Non-proprietary Names
Nomes genricos internacionais da Organizao
Mundial da Sade;
a frmula estrutural da substncia;
frmula molecular seguida da massa molar;
Denominao Comum Brasileira e seu respectivo
nmero;
nome qumico, segundo a ACS American Chemical
Society;
registro CAS Chemical Abstracts Service;
texto da monografa.
As monografas das preparaes farmacuticas so
identifcadas pelo nome da matria-prima correspondente,
seguido do nome da forma farmacutica.
Expresso de concentraes
As concentraes em porcentagem so expressas como
segue.
Por cento p/p (peso em peso) ou % p/p Expressa o nmero
de g de um componente em 100 g de mistura.
Por cento p/v (peso em volume) ou % p/v Expressa o
nmero de g de um componente em 100 mL de soluo.
Por cento v/v (volume em volume) ou % v/v Expressa o
nmero de mL de um componente em 100 mL de soluo.
Por cento v/p (volume em peso) ou % v/p Expressa o
nmero de mL de um componente em 100 g de mistura.
A expresso por cento, usada sem outra atribuio,
signifca: mistura de slidos e semisslidos, por cento p/p;
para solues ou suspenses de slidos em lquidos, por
cento p/v; para solues de lquidos, por cento v/v; para
solues de gases em lquidos, por cento p/v; para expressar
teor de leos essenciais em drogas vegetais, por cento v/p.
Impurezas
Os testes descritos nas monografas limitam as impurezas
a quantidades que assegurem qualidade ao frmaco. O fato
dos ensaios no inclurem uma impureza pouco frequente
no signifca que ela possa ser tolerada.
Incinerao at peso constante
Essa expresso signifca que a incinerao deve prosseguir
a 800 25 C, ou em outra temperatura indicada na
monografa, at que duas pesagens consecutivas no
difram em mais de 0,5 mg por grama da substncia em
exame, sendo que a segunda pesagem deve ser efetuada
depois de quinze minutos de incinerao adicional.
Interpretao da preciso dos dados numricos e limites
de tolerncia
A preciso desejada nos testes; reaes e ensaios
farmacopeicos indicada pelo nmero de decimais que
se apresenta no texto. Por exemplo, o valor numrico 20
indica valores no menores que 19,5 e no maiores que
20,5; o valor numrico 2,0 indica valores no menores que
1,95 e no maiores que 2,05; o valor numrico 0,20 indica
valores no menores que 0,195 e no maior que 0,205.
Os limites de tolerncia, expressos, numericamente,
por um valor mximo e mnimo, indicam a pureza de
uma substncia farmacopeica. Esses valores podem ser
expressos em porcentagem ou nmeros absolutos.
A faixa da variao deve ser estritamente observada, no
sendo tolerados valores fora dos limites mximo e mnimo.
Material de embalagem primria e secundria
Compreende-se por material de embalagem o recipiente;
envoltrio; invlucro ou qualquer outra forma de proteo;
removvel ou no; usado para envasar; proteger; manter;
cobrir ou empacotar, especifcamente ou no, matrias-
primas; reagentes e medicamentos.
Material de embalagem primria o que est em contato
direto com seu contedo durante todo o tempo. Considera-
se material de embalagem primria: ampola; bisnaga;
envelope; estojo; faconete; frasco de vidro ou de plstico;
frasco-ampola; cartucho; lata; pote; saco de papel e outros.
Embalagem secundria a que se destina total proteo
do material de acondicionamento nas condies usuais
de transporte, armazenagem e distribuio. Considera-
se embalagem secundria: caixas de papelo; cartuchos
de cartolina; madeira ou material plstico ou estojo de
cartolina e outros. No deve haver qualquer interao entre
o material de embalagem primria e o seu contedo capaz de
alterar a concentrao; a qualidade; ou a pureza do material
acondicionado. As condies de acondicionamento so
descritas nas monografas individuais, utilizando-se os
termos relacionados a seguir.
Recipiente bem fechado aquele que protege seu
contedo de perdas e contaminao por slidos estranhos,
56 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
nas condies usuais de manipulao; de armazenagem; de
distribuio e de transporte.
Recipiente perfeitamente fechado aquele que protege
seu contedo de perdas e de contaminao por slidos,
lquidos e vapores estranhos, eforescncia, deliquescencia,
ou evaporao nas condies usuais de manipulao;
armazenagem; distribuio e transporte.
Recipiente hermtico aquele impermevel ao ar, ou
qualquer outro gs, nas condies usuais de manipulao;
armazenagem; distribuio e transporte,
Cilindro de gs o recipiente metlico, perfeitamente
fechado, de paredes resistentes, destinado a conter gs sob
presso, obturado por vlvula regulvel, capaz de manter a
sada do gs em vazo determinada.
Recipiente para dose nica o recipiente hermtico que
contm determinada quantidade do medicamento destinada
a ser administrada de uma s vez e que depois de aberto,
no poder ser fechado com garantia de esterilidade.
Recipiente para doses mltiplas o recipiente hermtico
que permite a retirada de pores sucessivas de seu
contedo, sem modifcar a concentrao; a pureza e a
esterilidade da poro remanescente.
Medidas de presso
A expresso pascal (Pa), usada para medidas de presso
como a arterial; a atmosfrica ou a interna de um aparelho,
refere-se ao uso de manmetros ou barmetros calibrados
em relao presso exercida pela fora de 1 Newton
uniformemente distribuda sobre uma superfcie plana de
1 m
2
de rea perpendicular direo da fora; 1 pascal
equivale a 7,5 10
-3
mm de mercrio.
Odor
As expresses: inodora; praticamente inodora; leve odor
caracterstico; ou suas variaes, so usadas examinando-
se a amostra depois de exposta ao ar por quinze minutos,
quando se tratarem de embalagens de at 25 g abertas
recentemente. No caso de embalagens maiores, transferir
amostras de aproximadamente 25 g para cpsula de 100
mL de capacidade.
A caracterizao do odor apenas descritiva e no pode
ser considerada como padro de pureza, exceto nos casos
em que um odor particular, no permitido, seja indicado na
monografa individual.
Preparao de solues
Todas as solues utilizadas em testes, ensaios e reaes
so preparadas com gua purifcada, a menos que seja
indicado de maneira diferente na monografa individual.
A expresso recentemente preparada, referente ao preparo
de solues utilizadas em testes, ensaios e reaes, indica
que a soluo deve ser preparada, no mximo, 24 horas
antes da realizao do ensaio.
Presso reduzida
A expresso presso reduzida signifca presso menor ou
igual a 6,7 kPa (aproximadamente 50 mm de mercrio), a
menos que indicado de maneira diferente na monografa.
Quando na monografa for indicada dessecao sob
presso reduzida sobre agente dessecante, a operao
deve ser feita sob presso reduzida em dessecador ou outro
aparelho adequado.
Processos de fabricao
Qualquer que seja o mtodo utilizado, o produto fnal deve
corresponder s especifcaes includas na Farmacopeia
Brasileira, 5 edio.
Na fabricao de produtos injetveis; comprimidos;
cpsulas; ou de outras preparaes farmacopeicas,
permitido o uso de substncias adjuvantes, descritas nas
monografas e adicionadas com fnalidade especfca. Elas
devem ser incuas e no devem ter infuncia adversa
sobre a efccia teraputica da substncia ativa contida na
preparao, nem interferir nos ensaios e determinaes.
Prova em branco
As expresses: executar branco paralelo; fazer prova em
branco; ou efetuar ensaio em branco, signifca repetir a
determinao em condies idnticas e com quantidades
idnticas de reagentes, omitindo-se, apenas, a substncia
em exame.
Recipientes para injetveis
Os recipientes para preparaes injetveis devem ser
fabricados com materiais que no provoquem interao
com o contedo e possuam transparncia sufciente para
permitir inspeo visual. As tampas, quando usadas,
tampouco podem infuir na composio ou na conservao
do medicamento, oferecendo perfeita vedao, mesmo
depois de perfuradas vrias vezes.
Os recipientes para preparaes injetveis so classifcados em:
recipientes para dose nica;
recipientes para dose mltipla;
recipientes para perfuso.
Os recipientes para dose nica: ampolas e cartuchos de
uso odontolgico, so frascos de vidro ou de material
plstico adequado; fechados pela fuso do vidro ou com
a utilizao de oprculos fxos ou mveis. O contedo s
deve ser utilizado em uma nica dose, no podendo ser
reaproveitado.
Os recipientes para dose mltipla so frascos de vidro de
paredes resistentes que, depois de cheios com preparaes
lquidas ou com slidos para serem dissolvidos ou
suspensos, so selados com tampa de outro material.
O contedo desses frascos pode ser removido para
administrao em uma nica ou em vrias doses.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 57 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
4
Os recipientes para perfuso so frascos com mais de 50
mL de capacidade, podendo atingir 1000 mL, selados com
tampa de outro material ou no, fabricados de vidro ou
de plstico. Os medicamentos envasados nesses tipos de
recipientes devem ser administrados em uma nica vez,
com a utilizao de equipos estreis, e no podem conter
agentes bactericidas ou antifngicos. O uso de outros tipos
de adjuvantes deve ser considerado cuidadosamente.
Solubilidade
A solubilidade indicada no deve ser tomada no sentido
estrito de constante fsica, porm, complementa e corrobora
com os demais ensaios, podendo ter um valor defnitivo
caso a substncia no apresente a solubilidade mnima
exigida, principalmente, no solvente gua.
As indicaes sobre a solubilidade referem-se s
determinaes feitas temperatura de 25 C. A expresso
solvente refere-se gua, a menos que indicado de maneira
diferente na monografa individual.
A expresso partes refere-se dissoluo de 1 g de um
slido no nmero de mililitros do solvente estabelecido no
nmero de partes.
As solubilidades aproximadas constantes nas monografas
so designadas por termos descritivos cujos signifcados
esto relacionados na Tabela 1.
Tabela 1 - Termos descritivos de solubilidade e seus signifcados
Solvente Termo descritivo
Muito solvel menos de 1 parte
Facilmente solvel De 1 a 10 partes
Solvel De 10 a 30 partes
Ligeiramente solvel De 30 a 100 partes
Pouco solvel De 100 a 1000 partes
Muito pouco solvel De 1000 a 10 000 partes
Praticamente insolvel
ou insolvel
mais de 10 000 partes
Temperatura
Todas as temperaturas constantes na FB 5. so expressas na
escala Celsius, e as medidas so feitas a 25 C, exceto para
medida de densidade e a menos que indicado de maneira
diferente na monografa individual.
Unidades de medida
So adotadas nessa Farmacopeia as unidades constantes
do Sistema Internacional de Unidades (SI), conforme
relacionado no Anexo B.
Veculos aquosos
Usa-se, geralmente, gua para injetveis como veculo
para injetveis aquosos. Solues de cloreto de sdio
ou soluo de Ringer ou outras solues adequadas,
preparadas com gua para injetveis, podem ser usadas
em parte ou totalmente ao invs de somente gua para
injetveis, a menos que a monografa especifque de outra
forma.
Veculos no aquosos
Veculos no aquosos utilizados parcial ou totalmente na
obteno de preparaes injetveis podem ser miscveis ou
imiscveis com a gua. Entre os veculos miscveis com a
gua, os mais usados so os polilcoois e os polmeros do
xido de etileno. Entre os imiscveis com a gua, os mais
usados so os leos fxos de origem vegetal e os mono e
diglicerdeos de cidos graxos.
Os leos fxos so inodoros ou quase inodoros e seu odor e
sabor no devem lembrar os de rano. Devem satisfazer s
exigncias especifcadas nas monografas e apresentar as
caractersticas descritas a seguir.
a) teste de resfriamento transferir quantidade de leo
fxo, previamente dessecado a 105 C por duas horas
e resfriado temperatura ambiente em dessecador
contendo slica-gel, para recipiente de vidro incolor
cilndrico, com dimetro interno de aproximadamente
25 mm. Fechar o recipiente e mergulhar durante
quatro horas em gua mantida a 10 C. O lquido
deve permanecer sufcientemente lmpido, para que
possa facilmente ser vista uma linha negra de 0,5 mm
de espessura, quando mantida verticalmente atrs do
cilindro e contra fundo branco;
b) ndice de saponifcao entre 185 e 200 (5.5.29.8);
c) ndice de iodo entre 79 e 128 (5.5.29.10);
d) substncias insaponifcveis refuxar em banho-maria
10 mL do leo com 15 mL de hidrxido de sdio (1:16)
e 30 mL de lcool etlico, agitando ocasionalmente
at que a mistura se torne clara. Transferir a mistura
para cpsula de porcelana, evaporar o lcool etlico em
banho-maria e misturar o resduo com 100 mL de gua.
Deve resultar soluo;
e) cidos graxos livres os cidos graxos livres em
10 g do leo devem consumir, no mximo, 2 mL de
hidrxido de sdio 0,02 M.
Os mono ou diglicerdeos sintticos de cidos graxos
devem obedecer s seguintes exigncias:
a) so lquidos e permanecem lmpidos quando resfriados
a 10 C;
b) ndice de iodo no superior a 140 (5.5.29.10).
Os veculos no aquosos devem ser selecionados com
especial cuidado, pois no podem ser irritantes, txicos
ou sensibilizantes e no devem interferir na efccia
teraputica da preparao.Em casos excepcionais, nomes
muito difundidos, porm diferentes dos adotados pela
Denominao Comum Brasileira para Frmacos podem ser
citados como outra denomi nao.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
59 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
PROCEDIMENTO PARA PRODUTOS EM DOSE
UNITRIA
Para produtos em dose unitria, o teste permite verifcar se
as unidades de um mesmo lote apresentam uniformidade
de peso. Para realizar o teste, necessrio determinar,
previamente, o peso mdio de unidades do lote.
Comprimidos no revestidos ou revestidos com flme
Pesar, individualmente, 20 comprimidos e determinar o
peso mdio. Pode-se tolerar no mais que duas unidades
fora dos limites especifcados na Tabela 1, em relao ao
peso mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo
do dobro das porcentagens indicadas.
Comprimidos com revestimento aucarado (drgeas)
Pesar, individualmente, 20 drgeas e determinar o peso
mdio. Pode-se tolerar no mais que cinco unidades fora
dos limites especifcados na Tabela 1, em relao ao peso
mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do
dobro das porcentagens indicadas.
Cpsulas duras
Pesar, individualmente, 20 unidades, remover o contedo
de cada uma, limpar adequadamente e pesar novamente.
Determinar o peso do contedo de cada cpsula pela
diferena de peso entre a cpsula cheia e a vazia. Com os
valores obtidos, determinar o peso mdio do contedo.
Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora dos limites
especifcados na Tabela 1, em relao ao peso mdio do
contedo, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo
do dobro das porcentagens indicadas.
Cpsulas moles
Proceder como descrito para Cpsulas duras. Para
determinar o peso mdio do contedo, cortar as cpsulas
previamente pesadas e lav-las com ter etlico ou outro
solvente adequado. Deixar os invlucros expostos ao ar,
em temperatura ambiente, at completa evaporao do
solvente. Pesar novamente.
Supositrios e vulos
Pesar, individualmente, 20 supositrios ou vulos e
determinar o peso mdio. Pode-se tolerar no mais que
duas unidades fora dos limites especifcados na Tabela 1,
em relao ao peso mdio, porm, nenhuma poder estar
acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas.
Ps estreis, ps lioflizados e ps para injetveis
Realizar o teste com 20 unidades. Remover os lacres
metlicos, no caso de frascos-ampola. Retirar rtulos que
possam sofrer danos durante o teste. Secar, se necessrio, a
superfcie externa dos recipientes. Pesar, individualmente,
as 20 unidades, com as respectivas tampas. Remover o
contedo e lavar os respectivos recipientes utilizando gua
e em seguida etanol. Secar em estufa a 105 C, por 1 hora, ou
em temperaturas inferiores a essa, dependendo da natureza
do material, at peso constante. Resfriar temperatura
ambiente, recolocar a tampa e pesar novamente. A
diferena entre as duas pesagens representa o peso do
contedo. Determinar o peso mdio do contedo das 20
unidades. Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora
dos limites especifcados na Tabela 1, em relao ao peso
mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do
dobro das porcentagens indicadas.
Ps para reconstituio (uso oral)
Proceder conforme descrito para Ps estreis, ps
lioflizados e ps para injetveis. Pode-se tolerar no mais
que duas unidades fora dos limites especifcados na Tabela
1, em relao ao peso mdio, porm, nenhuma poder estar
acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas.
5 MTODOS GERAIS
5.1 MTODOS GERAIS
APLICADOS A
MEDICAMENTOS
5.1.1 DETERMINAO DE PESO
O teste se aplica a formas farmacuticas slidas em dose
unitria (comprimidos no revestidos, comprimidos
revestidos, pastilhas, cpsulas duras e moles e supositrios),
formas farmacuticas slidas acondicionadas em recipientes
para dose unitria (ps estreis, ps lioflizados, ps para
injetveis e ps para reconstituio de uso oral) e a formas
farmacuticas slidas e semisslidas acondicionadas em
recipientes para doses mltiplas (granulados, ps, gis,
cremes, pomadas e ps para reconstituio).
As pesagens so feitas em balanas de sensibilidade
adequada.
60 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
PROCEDIMENTO PARA PRODUTOS EM DOSES
MLTIPLAS
Para produtos acondicionados em recipientes para doses
mltiplas, o teste permite verifcar a homogeneidade no
envase.
Ps para reconstituio (uso oral e parenteral)
Pesar, individualmente, 10 unidades. Remover o contedo
e lavar os respectivos recipientes utilizando solvente
adequado. Secar, esfriar temperatura ambiente e pesar
novamente. A diferena entre as duas pesagens representa
o peso do contedo.
Determinar o peso mdio do contedo das 10 unidades. Os
valores individuais no diferem de 10% em relao ao
peso mdio.
Tabela 2 Critrios de avaliao da determinao de peso para formas farmacuticas em doses mltiplas.
Formas farmacuticas em doses mltiplas Peso declarado
Porcentagem mnima em
relao ao peso declarado
Granulados, ps, gis, cremes e pomadas
at 60 g 90,0%
acima de 60 g e at 150 g 92,5%
acima de 150,0 g 95,0%
Ps estreis, ps lioflizados e ps para injetveis mais que 40 mg* 10,0%
Ps para reconstituio (uso oral) menos que 300 mg 10,0%
300 mg ou mais 7,5%
_______________
(*) Se o peso mdio for de 40 mg ou menos, submeter ao teste de Uniformidade de doses unitrias (5.1.6).
Tabela 1 Critrios de avaliao da determinao de peso para formas farmacuticas slidas em dose unitria.
Formas farmacuticas em dose unitria Peso mdio Limites de variao
Comprimidos no revestidos ou revestidos com flme,
comprimidos efervescentes, comprimidos sublinguais,
comprimidos vaginais e pastilhas
80 mg ou menos 10,0%
mais que 80 mg e menos que 250 mg 7,5%
250 mg ou mais 5,0%
Comprimidos com revestimento aucarado (drgeas) 25 mg ou menos 15,0%
mais que 25 mg e at 150 mg 10,0%
mais que 150 mg e menos que 300 mg 7,5%
300 mg ou mais 5,0%
Cpsulas duras e moles, cpsulas vaginais menos que 300 mg 10,0%
300 mg ou mais 7,5%
Supositrios e vulos independente do peso mdio 5,0 %
Granulados, ps, gis, cremes e pomadas
Nota: para realizar o teste, necessrio conhecer a
quantidade nominal do envase.
Pesar, individualmente, 10 unidades. Remover o contedo
e lavar os respectivos recipientes utilizando solvente
adequado. Secar, esfriar temperatura ambiente e pesar
novamente. A diferena entre as duas pesagens representa
o peso do contedo.
Determinar o peso mdio do contedo das 10 unidades. O
peso mdio dos contedos no inferior ao peso declarado
e o peso individual de nenhuma das unidades testadas
inferior porcentagem indicada na Tabela 2, em relao
ao peso declarado.
Caso no seja cumprida essa exigncia, determinar o peso
individual do contedo de 20 unidades adicionais. O peso
mdio do contedo das 30 unidades no inferior ao peso
declarado, e o peso individual de no mais que uma unidade
em 30 inferior porcentagem indicada na Tabela 2, em
relao ao peso declarado.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 61 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
5.1.2 DETERMINAO DE
VOLUME
O teste de determinao de volume requerido para
produtos lquidos em recipientes para doses mltiplas e
produtos lquidos em recipientes para dose nica. O teste
se aplica tanto a preparaes lquidas quanto a preparaes
lquidas obtidas a partir de ps para reconstituio. O teste
no requerido para produtos lquidos em recipientes
para dose nica quando, na monografa individual, constar
requerimento para Uniformidade de doses unitrias (5.1.6).
PROCEDIMENTO
Produtos lquidos em recipientes para doses mltiplas
(exceto injetveis)
Separar 10 unidades. Remover os lacres metlicos, quando
for o caso. Retirar rtulos que possam sofrer danos
durante o teste. Pesar, individualmente, cada recipiente
com as respectivas tampas. Homogeneizar, remover e
reunir os contedos e reservar para a determinao da
densidade de massa. Lavar os recipientes e as tampas
com gua e, em seguida, com etanol. Secar em estufa a
105 C, por uma hora, ou em temperatura compatvel
com o material do recipiente, at peso constante. Esfriar
temperatura ambiente, recolocar a tampa e outras partes
correspondentes e pesar novamente. A diferena entre as
duas pesagens representa o peso do contedo. Determinar
os volumes individuais correspondentes (V), em mL,
utilizando a expresso:

m
V =
em que
m = peso do contedo, em g;
= densidade de massa do produto, em g/mL, determinada
a 20 C, conforme descrito em Determinao da densidade
de massa e densidade relativa (5.2.5).
A partir dos valores obtidos, calcular o volume mdio
das unidades testadas. O volume mdio no inferior ao
volume declarado e o volume individual de nenhuma das
unidades testadas inferior a 95,0% do volume declarado.
Produtos lquidos em recipientes para doses mltiplas
obtidos a partir de ps para reconstituio (exceto
injetveis)
Separar 10 unidades. Reconstituir cada unidade conforme
indicado no rtulo. Proceder conforme descrito em
Produtos lquidos em recipientes para doses mltiplas
(exceto injetveis).
A partir dos valores obtidos, calcular o volume mdio
das unidades testadas. O volume mdio no inferior ao
volume declarado e o volume individual de nenhuma das
unidades testadas inferior a 95,0% ou superior a 110,0%
do volume declarado.
Produtos lquidos em recipientes para dose nica (exceto
injetveis)
Separar 10 unidades. Verter, separadamente, o contedo de
cada unidade em provetas secas calibradas de capacidade
que no exceda 2,5 vezes o volume a ser medido, tomando
precaues para evitar a formao de bolhas. Deixar o
lquido escoar por 5 segundos, a menos que indicado de
maneira diferente na monografa individual. Efetuar a
medio.
A partir dos valores obtidos, calcular o volume mdio
das unidades testadas. O volume mdio no inferior ao
volume declarado, e o volume individual de nenhuma das
unidades testadas inferior a 95,0% ou superior a 110,0%
do volume declarado.
Produtos lquidos injetveis
O teste se aplica a produtos lquidos injetveis
acondicionados em recipientes como ampolas, frascos-
ampola, bolsas plsticas, frascos plsticos, carpules ou
seringas pr-carregadas. Os recipientes so preenchidos
com pequeno excesso volume, de acordo com as
caractersticas do produto, para permitir a administrao
do volume declarado. Os excessos mnimos de volume
recomendados na Tabela 1 geralmente so sufcientes para
permitir a retirada e a administrao do volume declarado.
Tabela 1 Excesso de volume recomendado
para produtos lquidos injetveis.
Volume declarado (mL)
Excesso mnimo de
volume recomendado
mveis / mL viscosos / mL
0,5 0,10 0,12
1,0 0,10 0,15
2,0 0,15 0,25
3,0 0,20 0,35
4,0 0,25 0,45
5,0 0,30 0,50
10,0 0,50 0,70
20,0 0,60 0,90
30,0 0,80 1,20
50,0 ou mais 2% 3%
Suspenses e emulses devem ser agitadas antes da
retirada do contedo e antes da determinao da densidade.
Preparaes oleosas ou muito viscosas podem ser
aquecidas, se necessrio, segundo as indicaes do rtulo
ou a 37 C, e agitadas vigorosamente antes da retirada do
contedo. Os contedos so ento esfriados entre 20 C e
25 C antes da medio do volume.
Para injetveis em recipientes para dose nica, testar 6
unidades se o volume declarado igual ou superior a 10
mL, 10 unidades se o volume declarado superior a 3 mL
e inferior a 10 mL, ou 12 unidades se o volume declarado
igual ou inferior a 3 mL. Remover o contedo total de cada
unidade com auxlio de seringa de capacidade que no
exceda 3 vezes o volume a ser medido, munida de agulha
62 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
nmero 21 com no menos que 2,5 cm de comprimento.
Eliminar bolhas eventualmente existentes na agulha e na
seringa e transferir o contedo da seringa, sem esvaziar a
agulha, para proveta seca calibrada de capacidade que no
exceda 2,5 vezes o volume a ser medido. Alternativamente,
o contedo da seringa pode ser transferido para bquer seco
tarado, sendo o volume calculado pelo peso do lquido,
em gramas, dividido pela sua densidade. Para recipientes
com volume declarado de 2 mL ou menos, os contedos
dos recipientes podem ser reunidos para obter o volume
necessrio para a medio, devendo-se utilizar seringas e
agulhas secas separadas para cada recipiente. O contedo de
recipientes com volume declarado de 10 mL ou mais pode
ser determinado esvaziando-se o contedo de cada recipiente
diretamente em provetas calibradas ou bqueres tarados.
O volume de cada recipiente examinado no inferior ao
volume declarado. No caso de recipientes com volume
declarado de 2 mL ou menos, o volume dos contedos
reunidos no inferior soma dos volumes declarados dos
recipientes utilizados no teste.
Para injetveis em recipientes para doses mltiplas
rotulados para conter um nmero especfco de doses de um
determinado volume, selecionar uma unidade e proceder
conforme descrito para injetveis em recipientes para dose
nica, utilizando nmero de seringas e agulhas separadas
equivalente ao nmero de doses especifcadas no rtulo.
O volume dispensado por cada seringa no inferior ao
volume declarado por dose.
Para injetveis em cartuchos ou seringas pr-carregadas,
testar uma unidade se o volume declarado igual ou
superior a 10 mL, 3 unidades se o volume declarado
superior a 3 mL e inferior a 10 mL ou 5 unidades se o
volume declarado igual ou inferior a 3 mL. Ajustar aos
recipientes os acessrios necessrios para sua utilizao
(agulha, mbolo, corpo de seringa), quando for o caso, e
transferir o contedo de cada recipiente, sem esvaziar a
agulha, para bquer seco tarado, empurrando o mbolo
lenta e regularmente. Calcular o volume, em mililitros,
dividindo o peso do lquido, em gramas, pela sua
densidade. O volume de cada recipiente no inferior ao
volume declarado.
Para preparaes injetveis de grande volume (infuses
parenterais), selecionar duas unidades e transferir o contedo
de cada recipiente para provetas secas calibradas de capacidade
que no exceda 2,5 vezes o volume a ser medido. O volume
de cada recipiente no inferior ao volume declarado.
5.1.3 DETERMINAO DE
RESISTNCIA MECNICA EM
COMPRIMIDOS
Os testes de resistncia mecnica, tais como dureza e
friabilidade, so considerados ofciais dentro do contexto
legal desta Farmacopeia, constituindo-se em elementos
teis na avaliao da qualidade integral dos comprimidos.
Estes testes visam demonstrar a resistncia dos comprimidos
ruptura provocada por quedas ou frico.
5.1.3.1 TESTE DE DUREZA
O teste de dureza permite determinar a resistncia do
comprimido ao esmagamento ou ruptura sob presso
radial. A dureza de um comprimido proporcional fora de
compresso e inversamente proporcional sua porosidade.
O teste se aplica, principalmente, a comprimidos no
revestidos.
O teste consiste em submeter o comprimido ao de
um aparelho que mea a fora, aplicada diametralmente,
necessria para esmag-lo. A fora medida em newtons (N).
APARELHAGEM
Podem ser utilizados diferentes tipos de aparelhos, os quais
diferem basicamente quanto ao mecanismo empregado para
exercer a presso. A fora pode ser exercida manualmente
ou mecanicamente. medida que a presso aumenta, um
mbolo, uma placa ou um pisto aplica determinada fora
sobre o comprimido, apoiado em base fxa. O aparelho
calibrado com preciso de 1 N.
PROCEDIMENTO
O teste realizado com 10 comprimidos, eliminando
qualquer resduo superfcial antes de cada determinao. Os
comprimidos so testados, individualmente, obedecendo
sempre mesma orientao (considerar a forma, presena
de ranhura e gravao). Expressar o resultado como a
mdia dos valores obtidos nas determinaes. O resultado
do teste informativo.
5.1.3.2 TESTE DE FRIABILIDADE
O teste de friabilidade permite determinar a resistncia
dos comprimidos abraso, quando submetidos ao
mecnica de aparelhagem especfca. O teste se aplica,
unicamente, a comprimidos no revestidos.
O teste consiste em pesar com exatido um nmero
determinado de comprimidos, submet-los ao do
aparelho e retir-los depois de efetuadas 100 rotaes.
Aps remover qualquer resduo de p dos comprimidos,
eles so novamente pesados. A diferena entre o peso
inicial e o fnal representa a friabilidade, medida em funo
da porcentagem de p perdido.
APARELHAGEM
O aparelho (Figura 1) consiste de um cilindro rotativo,
com 287,0 4,0 mm de dimetro e 38,0 2,0 mm
de profundidade, constitudo de polmero sinttico
transparente com faces internas polidas de baixa atividade
esttica, o qual gira em torno de seu eixo a uma velocidade
de 25 1 rotaes por minuto. Uma das faces do cilindro
removvel. Os comprimidos so recolhidos a cada volta
do cilindro por uma projeo curva com raio interno de
80,5 5,0 mm que se estende do centro parede externa
do cilindro, e levados a uma altura de 156,0 2,0 mm, de
onde caem repetidamente.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 63 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Figura 1 Aparelho para teste de friabilidade (friabilmetro).
PROCEDIMENTO
Para comprimidos com peso mdio igual ou inferior a 0,65
g, utilizar 20 comprimidos. Para comprimidos com peso
mdio superior a 0,65 g, utilizar 10 comprimidos. Pesar,
com exatido, os comprimidos, introduzi-los no aparelho.
Ajustar a velocidade para 25 rotaes por minuto e o
tempo de teste para 4 minutos. Decorrido o prazo, remover
qualquer resduo de p da superfcie dos comprimidos e
pesar novamente. Nenhum comprimido pode apresentar-
se, ao fnal do teste, quebrado, lascado, rachado ou partido.
So considerados aceitveis os comprimidos com perda
igual ou inferior a 1,5% do seu peso ou a porcentagem
estabelecida na monografa. Se o resultado for duvidoso
ou se a perda for superior ao limite especifcado, repetir o
teste por mais duas vezes, considerando-se, na avaliao, o
resultado mdio das trs determinaes.
5.1.4 TESTES DE
DESINTEGRAO
5.1.4.1 TESTE DE DESINTEGRAO
PARA COMPRIMIDOS E CPSULAS
O teste de desintegrao permite verifcar se comprimidos
e cpsulas se desintegram dentro do limite de tempo
especifcado, quando seis unidades do lote so submetidas
ao de aparelhagem especfca sob condies
experimentais descritas.
O teste se aplica a comprimidos no revestidos, revestidos
com flme ou com revestimento aucarado (drgeas),
comprimidos com revestimento entrico, comprimidos
sublinguais, comprimidos solveis, comprimidos
dispersveis, cpsulas duras e cpsulas moles. Pode
ser aplicado a comprimidos mastigveis, nesse caso as
condies e critrios de avaliao constaro na monografa
individual. O teste no se aplica a pastilhas e comprimidos
ou cpsulas de liberao controlada (prolongada).
A desintegrao defnida, para os fns desse teste, como
o estado no qual nenhum resduo das unidades testadas
(cpsulas ou comprimidos) permanece na tela metlica do
aparelho de desintegrao, salvo fragmentos insolveis de
revestimento de comprimidos ou invlucros de cpsulas.
Consideram-se, tambm, como desintegradas as unidades
que durante o teste se transformam em massa pastosa,
desde que no apresentem ncleo palpvel.
APARELHAGEM
Consiste de sistema de cestas e tubos (Figura 1), de
recipiente apropriado para o lquido de imerso (um bquer
com capacidade de 1 litro), de termostato para manter o
lquido a 37 1 C e de mecanismo para movimentar
verticalmente a cesta e os tubos no lquido de imerso,
com frequncia constante e percurso especfco. O volume
do lquido de imerso dever ser sufciente para que, ao
atingir o ponto mais alto do percurso, a parte inferior da
cesta fque, no mnimo, a 25 mm abaixo da superfcie do
lquido, e que no ponto mais baixo fque, no mnimo, a
25 mm do fundo do bquer. Os movimentos ascendente e
descendente devero ter a mesma velocidade e a mudana
do sentido do movimento deve ser suave.
64 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
A cesta consiste em seis tubos de vidro ou acrlico
transparente, abertos em ambos os lados. As dimenses
dos tubos so: comprimento 77,5 2,5 mm, dimetro
interno entre 20,7 mm e 23,0 mm e espessura das paredes
aproximadamente 2 mm.
Os tubos so mantidos verticalmente, adaptando-se
em cada extremidade da cesta um disco de material
transparente adequado, com dimetro entre 88,0 mm e
92,0 mm e espessura entre 5,0 mm e 8,5 mm, possuindo
seis orifcios nos quais so introduzidos os tubos. Os seis
orifcios eqidistam do centro de cada disco, estando
igualmente espaados. Na face externa do disco inferior
encontra-se uma tela de arame (dimetro de 0,635 0,030
mm) de ao inoxidvel, com abertura entre 1,8 mm e 2,2
mm, presa por meio de trs parafusos.
Para o teste de desintegrao de cpsulas, uma tela de
arame de ao inoxidvel, semelhante quela adaptada ao
disco inferior da cesta, ou outro dispositivo adequado pode
ser adaptado face externa do disco superior para evitar
que as cpsulas escapem dos tubos durante o teste.
As partes que constituem a cesta so montadas e mantidas
frmemente unidas mediante eixo metlico central, com
dimetro de cerca de 5 mm. A extremidade superior do eixo
central deve ter dispositivo para fxar a cesta ao mecanismo
que produz o movimento vertical do sistema.
Quando indicado, deve ser adicionado em cada tubo
da cesta um disco cilndrico de material transparente
adequado, com densidade relativa entre 1,18 e 1,20,
dimetro de 20,70 0,15 mm, e espessura de 9,50 0,15
mm. Cada disco possui cinco orifcios, cada um com 2 mm
de dimetro, sendo um orifcio no eixo do cilindro e os
outros quatro eqidistantes, dispostos sobre um crculo
de 6 mm de raio relativo ao centro do disco. A superfcie
lateral do disco possui quatro mossas eqidistantes, com
profundidade de 2,6 0,1 mm, em forma de V, as quais,
no lado superior do disco, medem 9,4 0,2 mm de largura,
e no lado inferior, 1,6 mm. Todas as superfcies do disco
so lisas. O desenho e montagem da cesta podem variar
desde que as especifcaes para os tubos e abertura das
telas sejam mantidas.
Figura 1 Aparelho para teste de desintegrao de
comprimidos e cpsulas (dimenses em mm).
PROCEDIMENTO
Comprimidos no revestidos
Utilizar seis comprimidos no teste. Colocar um comprimido
em cada um dos seis tubos da cesta, adicionar um disco a
cada tubo e acionar o aparelho, utilizando gua mantida
a 37 1 C como lquido de imerso, a menos que outro
lquido seja especifcado na monografa do medicamento.
Ao fnal do intervalo de tempo especifcado, cessar o
movimento da cesta e observar o material em cada um dos
tubos. Todos os comprimidos devem estar completamente
desintegrados. Se os comprimidos no se desintegrarem
devido aderncia aos discos, repetir o teste com seis
outros comprimidos, omitindo os discos. Ao fnal do
teste, todos os comprimidos devem estar completamente
desintegrados. O limite de tempo estabelecido como
critrio geral para a desintegrao de comprimidos no
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 65 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
revestidos de 30 minutos, a menos que indicado de
maneira diferente na monografa individual.
Comprimidos com revestimento aucarado (drgeas) ou
revestidos com flme
Utilizar seis comprimidos no teste. Colocar um comprimido
em cada um dos seis tubos da cesta. Colocar um disco em
cada tubo e acionar o aparelho, utilizando gua mantida
a 37 1 C, como lquido de imerso. Ao fnal do
intervalo de tempo especifcado, cessar o movimento da
cesta e observar o material em cada um dos tubos. Se os
comprimidos no estiverem completamente desintegrados,
testar outros seis comprimidos, substituindo a gua por
cido clordrico 0,1 M, mantido a 37 1 C, como lquido
de imerso. Ao fnal do intervalo de tempo especifcado,
cessar o movimento da cesta e observar o material em
cada um dos tubos. Todos os comprimidos devem estar
completamente desintegrados. Se os comprimidos no
se desintegrarem devido aderncia aos discos, repetir
o teste com seis outros comprimidos, omitindo os
discos. Ao fnal do teste, todos os comprimidos devem
estar completamente desintegrados. O limite de tempo
estabelecido como critrio geral para a desintegrao de
comprimidos revestidos com flme de 30 minutos, e para
comprimidos com revestimento aucarado (drgeas) de
60 minutos, a menos que indicado de maneira diferente na
monografa individual.
Comprimidos ou cpsulas com revestimento entrico
(gastro-resistentes)
Utilizar seis unidades no teste. Colocar uma unidade
em cada um dos seis tubos da cesta. Acionar o aparelho,
sem adicionar os discos, utilizando cido clordrico 0,1
M mantido a 37 1 C como lquido de imerso, por 60
minutos ou o tempo especifcado na monografa individual.
Cessar o movimento da cesta e observar os comprimidos
ou cpsulas. Nenhuma unidade pode apresentar qualquer
sinal de desintegrao, rachadura ou amolecimento, que
possibilite o extravasamento do seu contedo. Colocar
um disco em cada tubo e acionar o aparelho, utilizando
soluo tampo fosfato pH 6,8 mantido a 37 1 C como
lquido de imerso. Decorridos 45 minutos ou o tempo
especifcado na monografa, cessar o movimento da cesta
e observar o material em cada um dos tubos. Todos os
comprimidos ou cpsulas devem estar completamente
desintegrados, podendo restar apenas fragmentos de
revestimento insolveis. Se os comprimidos ou cpsulas
no se desintegrarem devido aderncia aos discos, repetir
o teste com seis outras unidades, omitindo os discos. Ao
fnal do teste, todos os comprimidos ou cpsulas devem
estar completamente desintegrados. O teste no se aplica
a cpsulas no revestidas que contm preparao de
liberao entrica.
Comprimidos sublinguais
Realizar o teste conforme descrito para Comprimidos no
revestidos, omitindo o uso de discos. Aps 5 minutos,
todos os comprimidos devem estar completamente
desintegrados.
Comprimidos solveis e comprimidos dispersveis
Realizar o teste conforme descrito para Comprimidos
no revestidos, utilizando gua mantida entre 15 C e 25
C, como lquido de imerso. Aps 3 minutos, todos os
comprimidos devem estar completamente desintegrados.
Cpsulas gelatinosas (duras)
Realizar o teste conforme descrito para Comprimidos
no revestidos, omitindo o uso dos discos. Utilizar uma
tela com abertura de 1,8 mm a 2,2 mm, de arame de ao
inoxidvel adaptada tampa da cesta, conforme descrito no
item Aparelhagem. Observar as cpsulas aps 45 minutos
ou conforme especifcado na monografa do medicamento.
Todas as cpsulas devem estar completamente
desintegradas, ou restando, na tela, apenas fragmentos
insolveis de consistncia mole.
Cpsulas moles
Realizar o teste conforme descrito para Comprimidos
no revestidos, utilizando os discos. Observar as
cpsulas aps 30 minutos ou conforme especifcado na
monografa do medicamento. Todas as cpsulas devem
estar completamente desintegradas, ou restando, na tela,
apenas fragmentos insolveis de consistncia mole. Se
as cpsulas no se desintegrarem devido aderncia aos
discos, repetir o teste com seis outras unidades, omitindo
os discos. Ao fnal do teste, todas as cpsulas devem estar
completamente desintegradas.
5.1.4.2 TESTE DE DESINTEGRAO
DE SUPOSITRIOS, VULOS E
COMPRIMIDOS VAGINAIS
Este teste permite verifcar a maior ou menor capacidade
dessas formas farmacuticas de amolecerem ou se
desagregarem em meio lquido, no espao de tempo
prescrito.
Considera-se desintegrao completa quando o supositrio
ou vulo apresentar:
a) dissoluo completa;
b) separao completa de seus componentes, acumulando-
se substncias graxas fundidas na superfcie do lquido,
depositando-se os ps insolveis no fundo do recipiente e
dissolvendo-se os componentes solveis da amostra, sendo
que a distribuio dos componentes ocorre de um ou mais
dos modos descritos acima;
c) amolecimento da amostra que pode ser acompanhado
pela mudana da sua forma sem que ocorra separao
completa de seus componentes; o amolecimento deve ser
tal que, ao pressionar a amostra amolecida com basto de
vidro, no se perceba existncia de camada mais dura na
sua superfcie;
d) ruptura da cpsula gelatinosa de vulos, permitindo
liberao de seus componentes;
66 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
e) ausncia de resduo sobre o disco perfurado ou, quando
houver, tenha a consistncia de massa mole que no oferea
resistncia presso de basto de vidro.
APARELHAGEM
A aparelhagem (Figura 1) consiste de cilindro de vidro ou
plstico, transparente, com paredes de espessura apropriada,
em cujo interior se encontra preso, por trs ganchos de
metal, um dispositivo metlico que consiste de dois discos
perfurados de ao inoxidvel, contendo cada um 39 orifcios
de 4 mm de dimetro cada. O dimetro de cada disco
tal que permite a sua introduo no cilindro transparente,
fcando os discos afastados de, aproximadamente, 30 cm. A
determinao levada a efeito utilizando-se trs aparelhos,
contendo cada um uma nica amostra. Cada aparelho
introduzido no interior de bquer de, pelo menos, 4 litros de
capacidade, contendo gua temperatura de 36 C a 37 C,
a menos que indicado de maneira diferente na monografa
individual. O bquer provido de agitador que opere em
velocidade lenta e dispositivo que permita inverter o cilindro
sem retir-lo da gua.
Figura 1 Aparelho para teste de desintegrao de supositrios,
vulos e comprimidos vaginais (dimenses em mm).
PROCEDIMENTO
Supositrios e vulos
Utilizar trs supositrios ou vulos. Colocar cada um deles
sobre o disco inferior do dispositivo, introduzir e fxar o
disco no interior do cilindro. Inverter o aparelho a cada
10 minutos. Examinar as amostras depois de decorrido
o tempo prescrito na monografa. O teste considerado
satisfatrio se todas as amostras se apresentarem
desintegradas. O limite de tempo estabelecido como
critrio geral para a desintegrao de 30 minutos para
supositrios, vulos e comprimidos vaginais com base
hidrofbica, e de 60 minutos para supositrios com base
hidroflica, a menos que indicado de maneira diferente na
monografa individual.
Comprimidos vaginais
Utilizar o aparelho descrito em Desintegrao de
supositrios e vulos, montado conforme Figura 2.
Introduzir o cilindro em bquer de dimetro adequado
contendo gua entre 36 C e 37 C que deve cobrir
uniformemente as perfuraes do disco. Utilizar trs
aparelhos, colocando em cada um deles um comprimido
vaginal sobre o disco superior. Cobrir o aparelho com
uma placa de vidro para assegurar a umidade adequada.
Examinar o estado de cada amostra depois de decorrido
o tempo prescrito na monografa. O teste considerado
satisfatrio se todas as amostras se apresentarem
desintegradas.
Figura 2 Aparelho para teste de desintegrao de
supositrios, vulos e comprimidos vaginais.
_______________
A, placa de vidro; B, comprimido vaginal;C, superfcie da gua; D, gua;
E, fundo do recipiente.
5.1.5 TESTE DE DISSOLUO
O teste de dissoluo possibilita determinar a quantidade de
substncia ativa dissolvida no meio de dissoluo quando
o produto submetido ao de aparelhagem especfca,
sob condies experimentais descritas. O resultado
expresso em porcentagem da quantidade declarada no
rtulo. O teste se destina a demonstrar se o produto atende
s exigncias constantes na monografa do medicamento
em comprimidos; cpsulas e outros casos em que o teste
seja requerido.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 67 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
APARELHAGEM PARA OS MTODOS 1 E 2
O aparelho de dissoluo consiste de um sistema de trs
componentes, descritos a seguir.
(1) Recipientes abertos de forma cilndrica e fundo
hemisfrico (cubas), feitos em vidro boro silicato, plstico
ou outro material transparente e inerte, aos quais pode
ser adaptada tampa de material inerte, com aberturas
adequadas para o agitador, coleta de amostras e insero
de termmetro. As cubas podem apresentar as seguintes
dimenses e capacidades: 185 25 mm de altura e 102 4
mm de dimetro interno para uma capacidade nominal de
um litro; 290 10 mm de altura e 102 4 mm de dimetro
interno para uma capacidade nominal de dois litros; 290
10 mm de altura e 150 5 mm de dimetro interno para
uma capacidade nominal de quatro litros.
(2) Hastes em ao inoxidvel para prover agitao do meio,
que podem apresentar sob duas formas: cestas (Mtodo
1) ou ps (Mtodo 2) (Figuras 1 e 2). A haste deve ser
centralizada de tal forma que, ao ser acionada, seu eixo
de rotao no se afaste mais de 2 mm em relao ao eixo
vertical do recipiente contendo o meio de dissoluo.
(3) Um motor que possibilita ajustar a velocidade de rotao
da haste quela especifcada na monografa individual,
mantendo-a nos limites de 4%. A rotao no deve produzir
efeitos indesejveis na hidrodinmica do sistema.
As cubas so imersas em banho de gua termostatizado,
de material transparente e tamanho adequado, em que
a temperatura seja mantida a 37 C 0,5 C durante a
execuo do teste. O aparelho deve ser isento de qualquer
fonte de vibrao, inclusive externa, que possa infuir na
hidrodinmica do sistema. De preferncia, o aparelho deve
possibilitar a visualizao das amostras e dos agitadores
durante o teste.
Mtodo 1: Cestas
Quando especifcado na monografa, utiliza-se como
agitador uma haste de ao inoxidvel, em cuja extremidade
se adapta uma cesta do mesmo material (Figura 1). A tela
padro utilizada na confeco da cesta possui dimetro de
fo de 0,25 mm e abertura de malha quadrada de 0,40
0,04 mm (mesh 40), salvo especifcao em contrrio na
monografa individual. A amostra deve ser colocada dentro
da cesta seca, antes do incio do teste. Durante sua execuo,
uma distncia de 25 2 mm deve ser mantida entre a parte
inferior da cesta e o fundo interno do recipiente que contm
o meio de dissoluo.
Figura 1 Mtodo 1 (Cestas). A cesta e a cuba no esto na mesma proporo.
68 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Mtodo 2: Ps
Quando especifcado na monografa, utiliza-se como
agitador uma haste de ao inoxidvel, revestida ou no de
material inerte, cuja extremidade apresenta a forma de p
(Figura 2), capaz de girar suavemente e sem desvio de eixo
durante o tempo e velocidade especifcados na monografa
correspondente. A amostra deve ser adicionada, sempre que
possvel, antes do incio do teste. Durante sua execuo,
uma distncia de 25 2 mm deve ser mantida entre o
extremo inferior das ps e o fundo interno do recipiente
que contm o meio de dissoluo.
importante que as amostras no futuem no meio de
dissoluo. Pode-se recorrer a um dispositivo apropriado,
confeccionado em fo de ao espiralado em poucas voltas
e em dimetro sufciente para a prisionar a cpsula ou o
comprimido sem deform-los nem reduzir a rea de contato
com o meio.
Figura 2 Mtodo 2 (Ps). A p e a cuba no esto na mesma proporo.
APARELHAGEM PARA O MTODO 3
Mtodo 3: Cilindros Alternantes
O aparelho de dissoluo para o Mtodo 3 consiste de
uma srie de frascos cilndricos de fundo plano; uma srie
de cilindros de vidro com sistema de fecho de material
inerte (ao inoxidvel ou outro material adequado) e telas
confeccionadas de material no adsorvente e no reativo,
destinadas a serem acopladas nas partes: superior e inferior
dos cilindros. Um motor e um dispositivo de encaixe dos
cilindros devem possibilitar movimento alternante vertical,
ascendente e descendente, dos cilindros nos frascos e,
tambm, propiciar deslocamento horizontal do cilindro
para outro frasco disposto em uma fla diferente.
Os frascos permanecem parcialmente imersos em um
banho de gua, de dimenses adequadas, que possibilita
a termo estatizao a 37 C 0,5 C durante o perodo de
ensaio. O aparelho deve estar isento de qualquer vibrao,
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 69 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
interna ou externa, que possa infuir no movimento suave
ascendente e descendente dos cilindros. O aparelho deve
possuir dispositivo de ajuste da velocidade de movimento
alternante, de acordo com o preconizado na monografa
individual, com variao mxima de 5%.
Preferentemente, o aparelho deve possibilitar a visualizao
dos cilindros e das amostras em anlise em seu interior. Os
frascos possuem tampa adequada, a qual deve permanecer
fxa durante a realizao do ensaio. Os componentes do
conjunto possuem as dimenses apresentadas na Figura
3, a menos que haja alguma especifcao diferenciada na
monografa.
Figura 3 Mtodo 3 (Cilindros alternantes).
As dimenses indicadas so em milmetros.
MEIO DE DISSOLUO
Utiliza-se o meio de dissoluo especifcado na monografa
do produto, previamente desgaseifcado por procedimento
conveniente, quando necessrio, para evitar a formao de
bolhas que possam interferir na velocidade de dissoluo
a ser medida. Quando o meio de dissoluo for soluo
tampo, o pH deve ser ajustado a 0,05 unidades do valor
do pH especifcado na monografa do produto.
TEMPO DE DISSOLUO
Quando um nico tempo for especifcado na monografa do
produto, ele representa o tempo mximo dentro do qual deve
ser dissolvida a quantidade mnima, em porcentagem, de
substncia ativa nela estabelecida. Quando mais de um tempo
for especifcado na monografa, devem ser tomadas alquotas,
adequadamente medidas, ao fnal de cada tempo indicado.
PROCEDIMENTO GERAL PARA OS MTODOS 1 E 2
Montar e verifcar a aparelhagem conforme especifcaes
mencionadas anteriormente, a fm de reduzir, ao mnimo,
fatores que alterem signifcativamente a hidrodinmica
do sistema (desvio de eixo, vibrao, etc.). Adicionar o
volume medido do Meio de dissoluo especifcado na
monografa do produto, convenientemente desgaseifcado,
caso necessrio, ao recipiente da aparelhagem de
dissoluo. Manter a temperatura do meio a 37 C 0,5
C, retirando o termmetro antes de iniciar a agitao.
No caso do Mtodo 1, colocar a amostra dentro da cesta
seca. No caso do Mtodo 2, colocar a amostra dentro do
recipiente de dissoluo, como descrito anteriormente.
Em ambos os casos, ao observar formao de bolhas na
superfcie das amostras, quando em contato com o meio
de dissoluo, verifcar sua infuncia no resultado. Iniciar
imediatamente a agitao, conforme velocidade pr-fxada.
Em intervalo(s) de tempo especifcado(s) na monografa do
produto, retirar alquota para anlise da regio intermdia
entre a superfcie do meio de dissoluo e a parte superior
do cesto ou ps, a no menos que 1 cm da parede interna do
recipiente (Figuras 1 e 2). Durante a retirada da alquota,
manter a agitao. Filtrar imediatamente as amostras,
caso no esteja utilizando fltros acoplados ao sistema de
amostragem. Os fltros empregados devem ser inertes,
no adsorver poro signifcativa do frmaco e possuir
porosidade adequada. De acordo com o especifcado na
monografa do produto, o volume de amostra retirado
pode ou no ser reposto. Se necessria a reposio, o
mesmo meio de dissoluo aquecido a 37 C deve ser
utilizado. Caso a reposio do meio de dissoluo no seja
realizada, corrigir o volume nos clculos. Aps fltrao e
diluio (quando necessrio) da alquota, a quantifcao
do frmaco efetuada mediante a tcnica indicada na
monografa do produto. Repetir o teste com doses unitrias
adicionais, conforme necessrio, considerando os Critrios
de aceitao.
Dissoluo de cpsulas: caso se obtenha resultado
insatisfatrio, repetir o teste da seguinte forma: quando o
meio de dissoluo for gua ou tampo com pH inferior a
6,8, utilizar o mesmo meio de dissoluo especifcado com
70 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
adio de pepsina purifcada com atividade de, no mximo,
750 000 unidades/ 1000 mL. Para meio de dissoluo com
pH igual ou superior a 6,8, adicionar pancreatina de, no
mximo, 1750 unidades de protease/ 1000 mL.
PROCEDIMENTO PARA FORMAS FARMACUTICAS
DE LIBERAO RETARDADA
Empregar o Mtodo A ou o Mtodo B ou o mtodo indicado
na monografa individual.
Mtodo A
Estgio cido: utilizar 750 mL de HCl 0,1 M como Meio
de dissoluo nas cubas quando empregando os Mtodos
1 e 2. Montar o aparelho de dissoluo conforme descrito
em Aparelhagem para os Mtodos 1 e 2 e adicionar uma
unidade de ensaio em cada cuba ou cesta, conforme o
caso. Proceder ao teste com a velocidade especifcada na
monografa por 2 horas. Ao fnal deste tempo, retirar uma
alquota do Meio de dissoluo e, imediatamente, executar
o Estgio tampo pH 6,8. Determinar a quantidade de
frmaco dissolvido na alquota amostrada, empregando
mtodo analtico adequado.
Estgio tampo pH 6,8: executar o preparo do estgio tampo
e ajuste do pH em 5 minutos. Com o aparelho de dissoluo
operando na velocidade especifcada para o produto,
adicionar ao Meio de dissoluo do Estgio cido 250 mL
de soluo de fosfato de sdio tribsico 0,20 M previamente
climatizado a 37 C 0,5 C. Ajustar, se necessrio, o pH
para 6,8 0,05 com HCl 2 M ou NaOH 2 M. Continuar
operando o aparelho de dissoluo por 45 minutos, ou o
tempo especifcado na monografa. Ao fnal deste tempo,
retirar alquota do Meio de dissoluo do Estgio tampo
pH 6,8 e determinar a quantidade de frmaco dissolvido,
empregando mtodo analtico adequado.
Mtodo B
Estgio cido: utilizar 1000 mL de HCl 0,1 M como Meio
de dissoluo nas cubas e montar o aparelho de dissoluo
conforme descrito em Aparelhagem para os Mtodos 1
e 2. Adicionar uma unidade de ensaio em cada cuba ou
cesta, conforme o caso. Proceder ao teste com a velocidade
especifcada na monografa por 2 horas. Ao fnal desse
tempo, retirar uma alquota do Meio de dissoluo e,
imediatamente, executar o Estgio tampo pH 6,8.
Determinar a quantidade de frmaco dissolvido na alquota
amostrada, empregando mtodo analtico adequado.
Estgio tampo pH 6,8: empregar tampo fosfato pH 6,8
previamente climatizado a 37 C 0,5 C. Drenar o meio de
dissoluo do Estgio cido das cubas e adicionar 1000 mL de
meio de dissoluo tampo fosfato pH 6,8. Como alternativa
pode-se remover cada cuba com o meio do Estgio cido do
aparelho de dissoluo e substituir por outra cuba com o meio
do Estgio tampo pH 6,8, transferindo cuidadosamente a
unidade de ensaio do medicamento em teste. Continuar
operando o aparelho de dissoluo por 45 minutos, ou o
tempo especifcado na monografa. Ao fnal desse tempo,
retirar alquota do meio de dissoluo do Estgio tampo
pH 6,8 e determinar a quantidade de frmaco dissolvido,
empregando mtodo analtico adequado. O tampo pH 6,8
pode ser preparado pela mistura de 3 volumes de HCl 0,1 M
e 1 volume de soluo de fosfato de sdio tribsico 0,20 M,
ajustando, se necessrio, o pH para 6,8 0,05 com HCl 2 M
ou NaOH 2 M.
PROCEDIMENTO PARA O MTODO 3
Formas farmacuticas de liberao imediata: empregando
o Mtodo 3, adicionar o volume do Meio de dissoluo
especifcado na monografa do produto em cada frasco
do aparelho, dispor os frascos no banho do instrumental
para climatizar a 37 C 0,5 C e remover os termmetros
antes de iniciar o teste. Colocar uma unidade de dosagem
da amostra em cada um dos seis cilindros alternantes,
evitando a formao de bolhas de ar na superfcie do
material, e, imediatamente, iniciar a operao do aparelho
de acordo com o especifcado na monografa individual do
produto. Durante o movimento ascendente e descendente
dos cilindros, a amplitude em altura deve situar-se entre
9,9 e 10,1 cm. No(s) intervalo(s) de tempo especifcado(s)
na monografa individual, erguer os cilindros e amostrar
uma alquota do Meio de dissoluo de cada frasco, da
regio intermdia entre a superfcie do lquido e o fundo
do frasco. Aps fltrao e diluio (quando necessrio) da
alquota, realizar anlise quantitativa do frmaco dissolvido
de acordo com o preconizado na monografa individual
do produto. Se necessrio, repetir o teste com unidades
adicionais do medicamento. Repor o volume de meio
amostrado com igual volume de Meio de dissoluo fresco
mantido a 37 C ou, em situaes onde comprovadamente
no seja necessria a reposio do meio, efetuar a correo
da alterao do volume durante os clculos. Manter os
frascos cobertos com suas respectivas tampas durante a
execuo do teste e verifcar periodicamente a temperatura
do meio. Para o meio e o tempo de dissoluo seguir as
orientaes gerais indicadas em Meio de dissoluo e
Tempo de dissoluo.
Formas farmacuticas de liberao prolongada:
empregando o Mtodo 3, executar o procedimento
conforme descrito em Formas farmacuticas de liberao
imediata e seguir as orientaes gerais indicadas em Meio
de dissoluo e Tempo de dissoluo. Os tempos so
expressos em horas e normalmente so indicados pelo
menos 3 intervalos de tempo.
Formas farmacuticas de liberao retardada:
empregando o Mtodo 3, tomar como base o procedimento
indicado em Mtodo B para Formas farmacuticas de
liberao retardada, empregando uma fla de frascos para
o Estgio cido e a fla sucessiva de frascos para o estgio
com soluo tampo pH 6,8, adicionando o volume de
meio especifcado na monografa (usualmente 300 mL). Os
tempos de coleta so os especifcados na monografa ou os
gerais indicados em Mtodo B para Formas farmacuticas
de liberao retardada.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 71 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
CRITRIOS DE ACEITAO PARA FORMAS FARMACUTICAS DE LIBERAO IMEDIATA
O produto cumpre o teste se os resultados atenderem as exigncias descritas na Tabela 1, salvo especifcao em contrrio
na monografa individual.
Tabela 1 Critrios de aceitao para o teste de dissoluo de formas farmacuticas de liberao imediata.
Estgios
N de amostras
testadas
Critrios de aceitao
E
1
06 Cada unidade apresenta resultado maior ou igual a Q + 5%
E
2
06
Mdia de 12 unidades (E
1
+ E
2
) igual ou maior que Q e nenhuma unidade apresenta
resultado inferior a Q 15%.
E
3
12
Mdia de 24 unidades (E
1
+ E
2
+ E
3
) igual ou maior do que Q, no mais que duas
unidades apresentam resultados inferiores a Q 15% e nenhuma unidade apresenta
resultado inferior a Q 25%.
inferior a Q 15%, o produto est em conformidade com
o especifcado, no sendo necessrio efetuar o Estgio E
3
.
Estgio E
3
Caso o critrio para o Estgio E
2
ainda no seja atendido,
repetir o teste com mais 12 unidades. Se a mdia das 24
unidades testadas (Estgios E
1
, E
2
e E
3
) maior ou igual a Q,
no mximo duas unidades apresentam resultados inferiores
a Q 15% e nenhuma unidade apresentar resultado
inferior a Q 25%, o produto est em conformidade com
o especifcado. Caso o critrio para o Estgio E
3
ainda no
seja atendido, o produto considerado insatisfatrio.
CRITRIOS DE ACEITAO PARA FORMAS
FARMACUTICAS DE LIBERAO PROLONGADA
O produto cumpre o teste se os resultados preencherem as
exigncias apresentadas na Tabela 2, salvo especifcao
em contrrio na monografa individual. Os termos Q1 e Q2
correspondem quantidade mnima e mxima de frmaco
dissolvido em cada intervalo de tempo especifcado na
monografa, expressos como porcentagem da quantidade
declarada. No ltimo tempo a especifcao pode ser
apresentada apenas com um valor de Q mnimo. Os
termos L
1
, L
2
e L
3
referem-se aos trs possveis estgios de
avaliao da liberao (L).
O termo Q corresponde quantidade dissolvida de
frmaco, especifcada na monografa individual, expressa
como porcentagem da quantidade declarada. Os valores
5%, 15% e 25% tambm representam porcentagens da
quantidade declarada.
Em circunstncias especiais, a porcentagem mxima de
dissoluo deve ser estabelecida experimentalmente.
Nesses casos, assegurar um valor de Q (quantidade
dissolvida em tempo infnito) verifcando que duas
dosagens consecutivas no diferem entre si mais de 2%
aps 10 minutos.
Estgio E
1
No Estgio E
1
so testadas seis unidades. Se cada unidade,
individualmente, apresentar resultado igual ou maior
do que Q + 5%, o produto est em conformidade com o
especifcado, no sendo necessrio efetuar o Estgio E
2
.
Estgio E
2
Caso o critrio para o Estgio E
1
no seja atendido, repetir
o teste com mais seis unidades. Se a mdia das doze
unidades testadas (Estgios E
1
e E
2
) maior ou igual a Q
e, se nenhuma das unidades testadas apresentar resultado
72 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Tabela 2 - Critrios de aceitao para o teste de dissoluo (liberao) realizado para formas farmacuticas de liberao prolongada.
Estgios
N
o
de unidades
testadas
Critrios de aceitao
L
1
6 Cada resultado individual se insere no intervalo estabelecido (Q1 e Q2) para cada
determinado tempo e nenhum resultado individual inferior ao Q do ltimo tempo.
L
2
6 A mdia de 12 unidades (E
1
+ E
2
) se insere no intervalo estabelecido (Q1 e Q2) para
cada determinado tempo e no inferior ao Q do ltimo tempo.
Nenhuma unidade individual apresenta resultado que supera os limites de Q1 e Q2
em 10% da quantidade declarada, para cada determinado tempo, e nenhum resultado
individual fornece valor inferior ao Q do ltimo tempo que supera em 10% a quantidade
declarada.
L
3
12 A mdia de 24 unidades (E
1
+ E
2
+ E
3
) se insere no intervalo estabelecido (Q1 e Q2) para
cada determinado tempo e no inferior ao Q do ltimo tempo.
No mais que 2 unidades das 24 testadas apresentam resultados que superam os limites
de Q1 e Q2 em 10% da quantidade declarada, para cada determinado tempo, e no mais
que 2 unidades das 24 testadas apresentam resultados com valor inferior ao Q do ltimo
tempo que superem em 10% a quantidade declarada.
Nenhuma unidade individual apresenta resultado que supera os limites de Q1 e Q2
em 20% da quantidade declarada, para cada determinado tempo, e nenhum resultado
individual fornece valor inferior ao Q do ltimo tempo que supera em 20% a quantidade
declarada.
salvo especifcao em contrrio na monografa individual.
Empregar o valor de Q indicado na monografa do produto
e, quando no especifcado, empregar 75% como valor de Q
no Estgio tampo pH 6,8. Os termos A
1
, A
2
e A
3
referem-
se aos trs possveis estgios de avaliao no Estgio cido
(A) e os termos B
1
, B
2
e B
3
referem-se aos trs possveis
estgios de avaliao no Estgio tampo pH 6,8 (B).
CRITRIOS DE ACEITAO PARA FORMAS
FARMACUTICAS DE LIBERAO RETARDADA
O produto cumpre o teste se os resultados preencherem
as exigncias apresentadas na Tabela 3 no Estgio cido
(Mtodos A ou B) e, tambm, as exigncias indicadas na
Tabela 4 no Estgio tampo pH 6,8 (Mtodos A ou B),
Tabela 3 - Critrios de aceitao para o Estgio cido do teste de dissoluo (Mtodos
A ou B) realizado para Formas farmacuticas de liberao retardada.
Estgios
N
o
de unidades
testadas
Critrios de aceitao
A
1
06 Nenhuma unidade individual apresenta quantidade dissolvida superior a 10%
do declarado.
A
2
06 A mdia de 12 unidades no superior a 10% do declarado e nenhuma unidade
individual apresenta quantidade dissolvida superior a 25% do declarado.
A
3
12 A mdia de 24 unidades no superior a 10% do declarado e nenhuma unidade
individual apresenta quantidade dissolvida superior a 25% do declarado.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 73 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Tabela 4 Critrios de aceitao para o Estgio tampo pH 6,8 do teste de dissoluo (Mtodos
A ou B) realizado para Formas farmacuticas de liberao retardada.
Estgios
N
o
de unidades
testadas
Critrios de aceitao
B
1
06 Cada unidade apresenta resultado maior ou igual a Q + 5%
B
2
06 Mdia de 12 unidades (B
1
+ B
2
) igual ou maior que Q e nenhuma unidade apresenta
resultado inferior a Q 15%.
B
3
12 Mdia de 24 unidades (B
1
+ B
2
+ B
3
) igual ou maior do que Q, no mais que duas
unidades apresentam resultados inferiores a Q 15% e nenhuma unidade apresenta
resultado inferior a Q 25%.
s formas farmacuticas com um nico frmaco ou com
mais de um componente ativo. A menos que indicado
de maneira diferente na monografa individual, o teste
se aplica, individualmente, a cada componente ativo do
produto.
A uniformidade das doses unitrias de formas farmacuticas
pode ser avaliada por dois mtodos: Variao de peso e
Uniformidade de Contedo. A aplicao de cada mtodo
considerando a forma farmacutica, dose e proporo do
frmaco apresentada na Tabela 1.
5.1.6 UNIFORMIDADE DE
DOSES UNITRIAS
Para assegurar a administrao de doses corretas, cada
unidade do lote de um medicamento deve conter quantidade
do componente ativo prxima da quantidade declarada. O
teste de uniformidade de doses unitrias permite avaliar a
quantidade de componente ativo em unidades individuais
do lote e verifcar se esta quantidade uniforme nas
unidades testadas. As especifcaes deste teste se aplicam
Tabela 1 Aplicao do mtodo de Uniformidade de Contedo (UC) ou de Variao de
peso (VP) de acordo com a forma farmacutica, dose e proporo do frmaco.
Forma Farmacutica Tipo Subtipo
Dose e proporo
do frmaco
25 mg e
25%
< 25 mg ou
< 25%
Comprimidos no revestidos VP UC
revestidos flme VP UC
outros UC UC
Cpsulas duras VP UC
moles suspenses, emulses ou gis UC UC
solues VP VP
Slidos acondicionados
em recipientes
para dose nica
componente nico VP VP
mltiplos componentes soluo lioflizada no
recipiente fnal
VP VP
outros UC UC
Solues acondicionadas
em recipientes
para dose nica
VP VP
Outros UC UC
O mtodo de Uniformidade de Contedo para preparaes
em doses unitrias baseia-se no doseamento do contedo
individual do componente ativo de um nmero de doses
unitrias para determinar se o contedo individual est
dentro dos limites especifcados. O mtodo de Uniformidade
de Contedo pode ser aplicado em todos os casos.
O mtodo de Variao de peso pode ser aplicado s
seguintes formas farmacuticas:
1. solues acondicionadas em recipientes para dose nica
e em cpsulas moles;
74 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2. slidos (incluindo ps, grnulos e slidos estreis)
acondicionados em recipientes para dose nica que no
contm outras substncias adicionadas, sejam elas ativas
ou inativas;
3. slidos (incluindo slidos estreis) acondicionados em
recipientes para dose nica, contendo ou no substncias
ativas ou inativas adicionadas, que tenham sido preparados
a partir de solues homogneas lioflizadas nos recipientes
fnais, e sejam rotulados de modo a indicar este modo de
preparao;
4. cpsulas duras, comprimidos no revestidos ou revestidos
com flme, contendo 25 mg ou mais da substncia ativa
compreendendo 25% ou mais, em peso, da dose unitria
ou, no caso de cpsulas duras, o contedo da cpsula,
exceto que a uniformidade de outras substncias ativas
presentes em menores propores deve ser demonstrada
pelo mtodo de Uniformidade de Contedo.
O mtodo de Uniformidade de Contedo exigido
para todas as formas farmacuticas que no atendem s
condies especifcadas para aplicao do mtodo de
Variao de peso.
UNIFORMIDADE DE CONTEDO
Para determinar a uniformidade de doses unitrias
pelo mtodo de uniformidade de contedo separar, no
mnimo, 30 unidades e proceder conforme descrito para
as formas farmacuticas indicadas. Quando a quantidade
de componente ativo de uma dose unitria for diferente do
especifcado no doseamento, fazer os ajustes de diluio
das solues e/ou o volume das alquotas de modo a obter
a concentrao do componente ativo na soluo fnal
semelhante do doseamento. No caso de doseamento por
titulao, utilizar titulante com concentrao diferente, se
necessrio, para consumo de volume adequado de titulante.
Considerar qualquer modifcao das diluies para efetuar
os clculos.
Quando houver procedimento especial para o teste de
uniformidade de contedo na monografa individual, fazer
a correo necessria dos resultados obtidos conforme
descrito a seguir.
1. Pesar quantidade de unidades do produto sufciente para
efetuar o doseamento e o procedimento especial do teste
de uniformidade de contedo apresentados na monografa
individual. Reduzir os comprimidos a p fno (ou misturar
os contedos das cpsulas, solues, suspenses, emulses,
gis ou slidos em recipientes para dose nica) para obter
mistura homognea. Se no for possvel obter mistura
homognea desta forma, usar solventes apropriados ou
outros procedimentos para obter soluo contendo o
frmaco. Empregar alquotas apropriadas desta soluo
para os ensaios especifcados.
2. Analisar, separadamente, pores da amostra, medidas
com preciso, conforme o procedimento indicado para o
doseamento (D) e o procedimento especial indicado para
uniformidade de contedo (E), descritos na monografa
individual.
3. Calcular a quantidade de frmaco por peso mdio
utilizando os resultados obtidos pelo procedimento de
doseamento (D) e pelo procedimento especial (E).
4. Calcular o fator de correo (F) segundo a equao:
F = D/E
em que
D = quantidade do componente ativo por peso mdio
da forma farmacutica obtida pelo procedimento de
doseamento;
E = quantidade do componente ativo por peso mdio da
forma farmacutica obtida pelo procedimento especial.
Se (100|D E|)/D for superior a 10, no vlido o uso de F.
1. Se F estiver entre 0,970 e 1,030, no h necessidade de
correo.
2. A correo ser aplicada quando o valor de F estiver
entre 0,900 e 0,970 e entre 1,030 e 1,100 e deve ser efetuada
calculando-se a quantidade do frmaco em cada unidade,
multiplicando-se as quantidades obtidas no procedimento
especial pelo fator de correo F.
Formas farmacuticas slidas
Analisar, individualmente, 10 unidades conforme indicado na
monografa individual para o doseamento, a menos que um
procedimento especial para uniformidade de contedo seja
descrito na monografa. Calcular o Valor de Aceitao (VA).
Formas farmacuticas lquidas
Analisar, individualmente, 10 unidades conforme indicado
na monografa individual para o doseamento, a menos
que um procedimento especial para uniformidade de
contedo seja descrito na monografa. Conduzir o teste,
individualmente, em quantidade homognea do material
que removida de cada recipiente em condies normais
de uso. Expressar o resultado como quantidade dispensada
por unidade. Calcular o Valor de Aceitao (VA).
Valor de Aceitao para Uniformidade de Contedo
Calcular o Valor de Aceitao (VA) segundo a equao:
cujos termos so defnidos na Tabela 2.
VARIAO DE PESO
Para determinar a uniformidade de doses unitrias pelo
mtodo de variao de peso separar, no mnimo, 30 unidades
e proceder conforme descrito para as formas farmacuticas
indicadas. A quantidade de frmaco por unidade
estimada a partir do resultado do doseamento e dos pesos
individuais, assumindo-se distribuio homognea do
componente ativo. As quantidades individuais estimadas
(x
i
) so calculadas segundo a equao:
x
i
= p
i
A/P
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 75 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
em que
p
i
= pesos individuais das unidades ou dos contedos das
unidades testadas;
A = quantidade de componente ativo, expressa em
porcentagem da quantidade declarada, determinada no
doseamento;
P = peso mdio das unidades utilizadas no doseamento.
Comprimidos no revestidos ou revestidos com flme
Pesar, exatamente e individualmente, 10 comprimidos. A
partir do resultado do doseamento e do peso individual de
cada comprimido, estimar a quantidade de componente
ativo em cada unidade e expressar os resultados individuais
em porcentagem da quantidade declarada. Calcular o Valor
de Aceitao (VA).
Cpsulas duras
Pesar, exatamente e individualmente, 10 cpsulas,
preservando a identidade de cada uma. Remover,
cuidadosamente, o contedo e pesar as cpsulas vazias.
Calcular o peso do contedo de cada cpsula e, a partir
do resultado do doseamento, estimar a quantidade de
componente ativo em cada cpsula. Expressar os resultados
individuais em porcentagem da quantidade declarada.
Calcular o Valor de Aceitao (VA).
Cpsulas moles
Pesar, exatamente e individualmente, 10 cpsulas,
preservando a identidade de cada uma. Cortar as cpsulas
com lmina e retirar o contedo, lavando os invlucros com
solvente adequado. Deixar os invlucros temperatura
ambiente, por 30 minutos, para completa evaporao do
solvente, tomando precaues para evitar adio ou perda
de umidade. Pesar as cpsulas vazias e calcular o peso
do contedo de cada cpsula. Estimar a quantidade de
componente ativo em cada cpsula a partir do resultado
do doseamento e do peso do contedo de cada cpsula.
Calcular o Valor de Aceitao (VA).
Formas farmacuticas slidas (exceto comprimidos e
cpsulas)
Proceder como indicado em Cpsulas duras. Calcular o
Valor de Aceitao.
Formas farmacuticas lquidas
Pesar, exatamente e individualmente, a quantidade de
lquido que removida de cada um de 10 recipientes em
condies normais de uso. Se necessrio, calcular o volume
equivalente do contedo removido aps a determinao da
densidade. Estimar a quantidade de componente ativo em
cada recipiente a partir do resultado do doseamento e do
peso do contedo removido dos recipientes individuais.
Calcular o Valor de Aceitao.
Valor de Aceitao para Variao de Peso
Calcular o Valor de Aceitao conforme descrito em Valor
de Aceitao para Uniformidade de Contedo, exceto
que as quantidades individuais de componente ativo nas
unidades so substitudas pelas quantidades individuais
estimadas.
CRITRIOS
Aplicar os critrios a seguir, tanto para Uniformidade
de Contedo como para Variao de peso, a menos que
indicado de maneira diferente na monografa individual.
Formas farmacuticas slidas e lquidas
O produto cumpre o teste de uniformidade de doses
unitrias se o Valor de Aceitao calculado para as 10
primeiras unidades testadas no maior que L1. Se o Valor
de Aceitao for maior que L1, testar mais 20 unidades e
calcular o Valor de Aceitao. O produto cumpre o teste de
uniformidade de doses unitrias se o Valor de Aceitao
fnal calculado para as 30 unidades testadas no maior
que L1 e a quantidade de componente ativo de nenhuma
unidade individual menor que (1 L2 0,01)M ou maior
que (1 + L2 0,01)M. A menos que indicado de maneira
diferente na monografa individual, L1 15,0 e L2 25,0.
76 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Tabela 2 Termos e expresses para o clculo do Valor de Aceitao (VA).
Varivel Defnio Condies Valores
X
Mdia dos contedos
individuais (x
1
, x
2
,..., x
n
),
expressa como porcentagem
da quantidade declarada.
x
1
, x
2
,..., x
n
Contedos individuais das
unidades testadas, expressos
como porcentagem da
quantidade declarada.
n Nmero de unidades testadas
k Constante de aceitabilidade Se n = 10, ento k = 2,4
Se n = 30, ento k = 2,0
s Desvio padro da amostra
M a ser utilizado
quando
T 101,5 (caso 1)
Valor de referncia Se 98,5% X 101,5%, ento
Se X < 98,5%, ento
Se X > 101,5%, ento % 5 , 101 = M
M a ser utilizado
quando
T > 101,5 (caso 2)
Valor de referncia Se 98,5 X T, ento X M =
Se X < 98,5%, ento
Se X > T, ento
T M =
Valor de
Aceitao (VA)
Frmula geral:
Os clculos so especifcados
acima para os diferentes casos
L1 Valor mximo permitido
para o valor de aceitao
L1 = 15,0 a menos
que especifcado de
forma diferente na
monografa individual
L2 Desvio mximo permitido para
cada unidade testada em relao
ao valor de M utilizado nos
clculos do valor de aceitao.
Nenhum resultado individual
menor que
(1 L2 0,01)M ou maior
que (1 + L2 0,01)M
L2 = 25,0 a menos
que especifcado de
forma diferente na
monografa individual
T Mdia dos limites especifcados
na monografa individual para a
quantidade ou potncia declarada,
expressa em porcentagem.
T igual a 100% a menos que
outro valor tenha sido aprovado
por razes de estabilidade; nestes
casos, T maior que 100%.
|M-X|+ks
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 77 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
5.1.7 CONTAMINAO POR
PARTCULAS
5.1.7.1 PARTCULAS SUB-VISVEIS
A contaminao de injetveis por partculas a presena
de materiais insolveis, estranhos e mveis que no sejam
bolhas de ar.
As especifcaes exigidas para as preparaes
farmacuticas encontram-se descritas nas monografas
especfcas.
A contaminao, por partculas, das preparaes para uso
parentrico e das preparaes para perfuso constituda
de partculas estranhas no solveis e mveis, alm das
bolhas de gs que se encontram, involuntariamente, nessas
preparaes. Para a determinao da contaminao por
partculas especifcam-se a seguir 2 mtodos: mtodo
1 (ensaio de contagem de partculas por bloqueio da
luz) e mtodo 2 (ensaio de contagem de partculas por
microscopia ptica). Para a determinao de partculas
no visveis nas preparaes injetveis e nas preparaes
para perfuso utilize de preferncia o mtodo 1. Em
determinadas preparaes, entretanto, pode ser necessrio
realizar ensaios de contagem de partculas por bloqueio da
luz em primeiro lugar e s depois por microscopia ptica
para poder concluir quanto conformidade dos resultados
obtidos.
A pesquisa das partculas no visveis efetuada aplicando
um destes mtodos, ou mesmo os dois, no possvel para
todas as preparaes injetveis. Quando o mtodo 1 no
aplicvel, por exemplo no caso das preparaes pouco
lmpidas ou muito viscosas, o ensaio realizado pelo
mtodo 2 (caso das emulses, das solues coloidais e das
preparaes de lipossomas). Do mesmo modo, um ensaio
de contagem de partculas por microscopia ptica pode
igualmente ser exigido no caso de produtos que formem
bolhas de ar ou de gs quando passam atravs do detector.
Se a viscosidade da preparao tal que o exame por um
ou outro dos mtodos impossvel, pode efetuar-se uma
diluio quantitativa com um diluente apropriado de modo
a reduzir a viscosidade at o grau considerado sufciente
para permitir o ensaio.
Os resultados obtidos quando se examina uma unidade
ou um grupo de unidades no pode ser extrapolado
com confabilidade a outras unidades que no foram
analisadas. Por consequncia, convm estabelecer planos
de amostragem estatisticamente vlidos se quiser tirar
concluses vlidas, a partir dos dados recolhidos, para
determinar o grau de contaminao particulado de um
grande grupo de unidades.
A gua utilizada nos ensaios livre de partculas. gua livre
de partculas pode ser obtida por fltrao em membrana de
porosidade de 0,22 m.
MTODO 1 CONTAGEM DE PARTCULAS POR
BLOQUEIO DA LUZ
Equipamento
Utilizar contador de partculas com funcionamento
baseado no princpio de bloqueio de luz que possibilite
a determinao do tamanho das partculas e seu nmero
conforme suas dimenses.
Calibrao
Calibrar o equipamento com o auxlio de partculas
esfricas padres de tamanho compreendido entre 10 a 25
m. Essas partculas padres so dispersas em gua livre
de partculas. Evitar a agregao das partculas durante a
disperso.
Precaues
Realizar o teste em condies de contaminao limitada,
preferencialmente, em capela de fuxo laminar. Lavar
a vidraria e o equipamento de fltrao utilizado, com
exceo das membranas fltrantes, com soluo detergente
morna e enxaguar com gua at que todo o detergente
seja removido. Imediatamente antes do uso, enxaguar o
equipamento da parte superior para a inferior, interna e
externamente com gua livre de partculas.
Observar para no introduzir bolhas de ar na amostra a
ser analisada, especialmente quando alquotas de amostra
esto sendo transferidas para o acessrio de leitura.
Para verifcar a adequabilidade do ambiente, da vidraria
e da gua utilizada, efetuar a contagem de partculas
em cinco amostras de 5 mL de gua livre de partculas,
de acordo com o mtodo descrito nesse captulo. Caso o
nmero de partculas maiores do que 10 m exceder a 25,
para o volume total de 25 mL, o ambiente no apresenta
condies para realizar o teste.
Procedimento
Homogeneizar a amostra por meio de 25 inverses
consecutivas lentas e suaves do recipiente. Eliminar as
bolhas deixando a amostra em repouso por 2 minutos.
Transferir quatro pores no menores que 5 mL, e
determinar o nmero de partculas com tamanho igual ou
maior que 10 e 25 m. Desconsiderar o resultado obtido
com a primeira alquota, e calcular o nmero mdio de
partculas para a amostra sob exame.
Avaliao
Empregar o teste A, teste B ou teste C, assim como, o
nmero de amostras, conforme indicado na monografa
especfca, da forma farmacutica.
Teste A - Solues para injetveis em recipientes, com volume
declarado, maior que 100 mL. A amostra cumpre o teste se
o nmero mdio de partculas, com tamanho igual ou maior
78 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
que 10 m, presentes nas unidades testadas no exceda 25
partculas por mL e o nmero de partculas com tamanho
iguais ou maiores que 25 m no exceda a 3 por mL.
Teste B - Solues para injetveis em recipientes, com
volume declarado, igual ou menor que 100 mL. A amostra
cumpre o teste se o nmero mdio de partculas, com
tamanho igual ou maior que 10 m, presentes nas unidades
testadas no exceda 6 000 partculas por recipiente e o
nmero de partculas com tamanho iguais ou maiores que
25 m no exceda a 600 partculas por recipiente.
Teste C - Ps para injetveis em recipientes, com volume
declarado, igual ou menor que 100 mL. A amostra
reconstituda com gua ou diluente apropriado livre de
partculas cumpre o teste se o nmero mdio de partculas,
com tamanho iguais ou maiores que 10 m, presentes
nas unidades testadas no exceda 10 000 partculas por
recipiente e o nmero de partculas com tamanho igual
ou maiores que 25 m no exceda a 1000 partculas por
recipiente.
MTODO 2 CONTAGEM DE PARTCULAS POR
MICROSCOPIA
Equipamento
Utilize um microscpio binocular apropriado, um
dispositivo de fltrao para reter a contaminao particular
e uma membrana fltrante. O microscpio equipado com
um micrmetro ocular calibrado, com um micrmetro de
objetiva, uma platina de movimentos cruzados capaz de
manter e de atravessar toda a superfcie de fltrao da
membrana fltrante, dois iluminadores apropriados que
permitem iluminao episcpica e iluminao oblqua,
ajustado para ampliao de 100 10 vezes.
O micrometro ocular um retculo circular e compreende
um grande crculo dividido em quadrantes, por linhas
cruzadas, crculos de referncia pretos e transparentes de
dimetro de 10 m e de 25 m com um aumento de 100
e uma escala linear graduada de 10 em 10 m (Figura 1).
O grande crculo denominado campo de viso do
retculo. So necessrios dois iluminadores, um iluminador
episcpico para fundo claro, interno do microscpio, e
um iluminador auxiliar externo regulvel, ajustvel para
permitir uma iluminao oblqua refetida segundo um
ngulo de 10-20. O dispositivo de fltrao destinado a
reter a contaminao particular compreende um suporte de
fltro de vidro ou outro material conveniente, uma fonte de
vcuo e uma membrana fltrante adequada. A membrana
fltrante, de dimenses apropriadas, de cor preta ou cinza
escura; coberta ou no com uma grelha e o tamanho dos
poros inferior ou igual a 1,0 m.
Figura 1 - Retculo circular.
Calibrao
calibrado com um micrometro de objetiva certifcado
por uma organizao internacional ou nacional de
normalizao. aceitvel um erro relativo de 2% para a
escala linear do retculo.
Precaues gerais
Realizar o teste em condies de contaminao limitada,
preferencialmente, em capela de fuxo laminar. Lavar
a vidraria e o equipamento de fltrao utilizado, com
exceo das membranas fltrantes, com soluo detergente
morna e enxaguar com gua at que todo o detergente seja
removido. Imediatamente antes do uso, lave os dois lados
da membrana fltrante enxaguar o equipamento da parte
superior para a inferior, interna e externamente com gua
livre de partculas.
Para verifcar a adequabilidade do ambiente, da vidraria e
da gua utilizada, efetuar a contagem de partculas em 50
mL de gua livre de partculas, de acordo com o mtodo
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 79 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
descrito neste captulo. Caso o nmero de partculas de 10
m ou maiores exceder a 20, ou se mais de 5 partculas de
25 m ou maiores estiverem presentes , o ambiente no
apresenta condies para realizar o teste.
Procedimento
Homogeneizar a amostra por meio de 25 inverses
consecutivas lentas e suaves do recipiente. Se necessrio,
retire com cuidado o dispositivo de fechamento. Lave as
superfcies exteriores da abertura do frasco com um jato
de gua isenta de partculas e retire o fechamento evitando
qualquer contaminao do contedo.
No caso das preparaes parenterais de grande volume,
efetue o ensaio em unidades separadas. No caso de
preparaes parenterais de grande volume ou de pequeno
volume igual ou superior a 25 mL, podem ser sufcientes
para o ensaio menos de 10 embalagens de acordo com um
plano de amostragem apropriado. Quanto s preparaes
parenterais de pequeno volume, cujo volume seja inferior
a 25 mL rena o contedo de 10 unidades ou mais num
recipiente limpo de modo a obter um volume mnimo de
25 mL; em casos justifcados e autorizados, a soluo
problema pode ser preparada misturando o contedo de
um nmero apropriado de frascos e completando 25 mL
com gua isenta de partculas R ou um solvente apropriado
isento de contaminao particular, quando a gua isenta de
partculas R no for apropriada. As preparaes parenterais
de pequeno volume cujo volume for superior ou igual a 25
mL podem ser examinadas individualmente.
No caso dos ps para uso parenteral, reconstitua a
preparao com gua isenta de partculas ou um solvente
apropriado isento de contaminao particular, quando a
gua isenta de partculas no for apropriada.
Umedecer o interior do suporte do fltro munido da
membrana fltrante com alguns mililitros de gua isenta
de partculas. Passe para o fltro a totalidade da amostra
(mistura das tomadas de ensaio ou a unidade em ensaio)
e aplique o vcuo. Se necessrio, junte, pouco a pouco,
pores da soluo at que o volume total seja fltrado.
Aps a ltima adio, comece a lavagem das paredes
internas do suporte do fltro utilizando um jato de gua
isenta de partculas. Mantenha o vcuo at que a superfcie
da membrana fltrante fque isenta de lquido.
Coloque o fltro numa placa de Petri e seque ao ar deixando
a placa ligeiramente aberta. Quando o fltro estiver seco,
coloque a placa de Petri na platina do microscpio, efetue a
varredura de toda a membrana fltrante sobre a luz refetida
do iluminador e conte o nmero de partculas de tamanho
superior ou igual a 10 m e o nmero de partculas de
tamanho superior ou igual a 25 m. igualmente possvel
efetuar contagem parcial e determinar por clculo o nmero
total de partculas retidas no fltro. Calcule o nmero
mdio de partculas presentes na amostra. Para determinar
o tamanho das partculas com auxlio do retculo circular,
proceda transformao da imagem de cada partcula num
crculo e depois compare-a com os crculos de referncia
do retculo de 10 m e de 25 m. Assim, as partculas
mantm a sua posio inicial no interior do campo de
viso do retculo e no se sobrepem aos crculos de
referncia para fns de comparao. O dimetro interior
dos crculos de referncia transparentes do retculo
utilizado para determinar o tamanho das partculas brancas
ou transparentes enquanto que o tamanho das partculas
escuras determinado com o dimetro exterior dos crculos
de referncia pretos e opacos do retculo. Quando realizar
um ensaio de contagem de partculas ao microscpio no
procure medir ou enumerar matrias amorfas, semi-lquidas
ou morfologicamente indistintas que se assemelham a uma
mancha ou zona descorada da membrana fltrante. Estes
materiais podem apresentar um brilho fraco ou nulo e
assumir aspecto gelatinoso ou a aparncia de uma pelcula.
A interpretao da avaliao pode ser facilitada realizando
um ensaio de contagem das partculas por reteno da luz
sobre uma amostra da soluo.
Avaliao
Empregar os critrios abaixo, de acordo com o volume das
amostras ou conforme indicado na monografa especfca,
da forma farmacutica.
Nas preparaes acondicionadas em recipientes de
contedo nominal superior a 100 mL, a preparao satisfaz
ao ensaio se o nmero mdio de partculas presentes nas
unidades examinadas no for superior a 12 por mililitro
para as partculas de tamanho superior ou igual a 10 m
e no exceder de 2 partculas por mililitro para as de
tamanho superior ou igual a 25 m.
Nas preparaes acondicionadas em recipientes de
contedo nominal igual ou inferior a 100 mL, a preparao
satisfaz ao ensaio se o nmero mdio de partculas
presentes nas unidades examinadas no for superior a 3000
por recipiente para as partculas de tamanho superior ou
igual a 10 m e a 300 por recipiente para as partculas de
tamanho superior ou igual a 25 m.
5.1.7.2 PARTCULAS VISVEIS
A contaminao por partculas das preparaes injetveis e
das preparaes injetveis para perfuso constituda por
partculas estranhas, no dissolvidas e mveis, alm das
bolhas de gs, e que se encontram involuntariamente nestas
solues. A fnalidade do ensaio fornecer um mtodo
simples de avaliao visual da qualidade das solues no
que respeita s partculas visveis. Podem utilizar-se outros
mtodos validados.
Aparelhagem
O aparelho (Figura 1) composto por um posto de
observao, compreendendo: um painel preto opaco, de
dimenses apropriadas, colocado em posio vertical,
um painel branco antirrefexo de dimenses apropriadas,
colocado em posio vertical ao lado do painel preto, uma
rampa de iluminao ajustvel, com uma fonte de luz
branca protegida e um difusor apropriado (um sistema de
iluminao contendo 2 lmpadas fuorescentes de 13 W, com
comprimento de onda de 525 nm cada uma, apropriado).
80 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
A intensidade da iluminao no ponto de observao
mantida entre 2000 e 3750 lux sendo aconselhvel uma
intensidade mais elevada para recipientes de vidro corado
ou de plstico.
Figura 1 - Aparelho para partculas visveis.
Procedimento
Retire eventualmente os rtulos, lave e seque o exterior do
recipiente. Agite suavemente e inverta cada recipiente com
precauo, evitando a formao de bolhas de ar e observe-o
durante cerca de 5 segundos contra o painel branco. Repita
este procedimento, observando o recipiente contra o painel
preto. Anote a presena de qualquer partcula.
5.1.8 TESTE DE GOTEJAMENTO
O teste de gotejamento destina-se a determinar a relao
do nmero de gotas por mililitro e a quantidade de frmaco
por gota em formas farmacuticas lquidas acondicionadas
em recipientes com dispositivo dosador integrado. Para
realizar o teste necessrio conhecer o nmero declarado
de gotas por mililitro, ou a quantidade declarada de frmaco
em massa por gota.
PROCEDIMENTO
Determinao do nmero de gotas por mililitro
O gotejamento deve ser realizado com o frasco invertido
na posio vertical ou conforme o ngulo de gotejamento
declarado pelo fabricante, permitindo o fuxo por
gravidade, a uma taxa constante, sem qualquer tipo de
presso adicional. Uma leve presso pode ser aplicada em
frascos de polietileno.
Separar 30 unidades. Proceder ao teste utilizando 10
unidades, em ambiente com temperatura controlada de 20
2 C. Para cada unidade determinar a massa relativa ao
nmero de gotas correspondente a 1 mililitro, conforme
declarado pelo fabricante. Se esta relao no estiver
declarada, utilizar 20 gotas para o teste.
Calcular o nmero de gotas por mililitro para cada unidade
testada (N
t
) segundo a equao:
( )
i
t
m
N
N

=
1
em que
N
1
= nmero de gotas utilizado no teste, que pode ser o
nmero de gotas declaradas por mililitro (N
d
) ou 20 gotas;
= densidade de massa do produto, em g/mL, determinada
a 20 C, conforme descrito em Determinao de densidade
de massa e densidade relativa (5.2.5);
m
i
= massa, em g, correspondente ao nmero de gotas
utilizado no teste.
Determinao da quantidade de frmaco por gota
Calcular a quantidade do frmaco, em mg/gota, para cada
unidade testada (q
t
), segundo a equao:
t
t
N
Q
q =
em que
Q = quantidade de frmaco, em mg/mL, determinada no
doseamento;
N
t
= nmero de gotas por mililitro calculado para cada
unidade testada.
Calcular a porcentagem em relao quantidade declarada,
para cada unidade testada (%Q
t
ou %q
t
), empregando uma
das equaes abaixo:

100
) / (
% =
d
t
t
N Qd
q
Q
ou 100 % =
d
t
t
q
q
q
em que
q
t
= quantidade do frmaco, em mg/gota, calculada para
cada unidade testada;
Q
d
= quantidade declarada do frmaco, em mg/mL;
N
d
= nmero declarado de gotas por mililitro;
q
d
= quantidade declarada do frmaco em mg/ gota.
Calcular a mdia das porcentagens individuais obtidas
( Q % ) e o desvio padro relativo (DPR) segundo as
equaes:
Q
s
DPR
%
100
=
em que
%Q
t
= porcentagem em relao quantidade declarada
calculada para cada unidade testada;
s = desvio padro;
n = nmero de unidades testadas.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 81 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
CRITRIOS
O produto cumpre os requisitos do teste se as porcentagens
individuais, para cada uma das 10 unidades testadas, esto
situadas entre 85,0% e 115,0% da quantidade declarada e o
desvio padro relativo (DPR) no maior que 6,0%.
Se uma unidade estiver fora da faixa de 85,0% a 115,0%
da quantidade declarada, ou se o DPR for maior que 6,0%,
ou se ambas as condies forem observadas, testar mais 20
unidades.
O produto cumpre o teste se no mximo uma unidade est
fora da faixa de 85,0% a 115,0% da quantidade declarada,
nenhuma unidade est fora da faixa de 75,0% a 125,0% e
o DPR das 30 unidades testadas no maior que 7,8%.
5.2 MTODOS FSICOS E
FSICO-QUMICOS
5.2.1 DETERMINAO DA
MASSA
Para se efetuar a medio da massa, as balanas devem
apresentar capacidade e sensibilidade de acordo com o
grau de preciso requerido e certifcado de calibrao
atualizado.
Tratando-se de atividades que exijam pesagens exatas,
na determinao de massas iguais ou maiores que 50 mg
utilizar balana analtica de 100 a 200 g de capacidade e
0,1 mg de sensibilidade. Para quantidades inferiores a 50
mg utilizar balana analtica de 20 g de capacidade e 0,01
mg de sensibilidade.
APARELHAGEM
As balanas analticas a serem utilizadas nesse ensaio
devem ser de prato nico, preferencialmente eletrnicas.
As balanas devem possuir dispositivo adequado que
possibilite a verifcao da carga aplicada, desde que
sejam calibradas periodicamente por meio de massas de
referncia aferidas.
As balanas analticas devem apresentar as seguintes
caractersticas:
- armrio ou caixa de proteo, com aberturas apropriadas
para possibilitar operaes em seu interior e excluir
correntes de ar;
- estar instalada sobre base de material compacto e resistente
(mrmore, granito, metal ou borracha, por exemplo);
- indicador de nvel (gravimtrico ou hidrulico) e
dispositivo que possibilite seu nivelamento;
- estar instalada sobre sistema amortecedor (magntico,
pneumtico ou hidrulico, por exemplo) para restabelecer
prontamente o equilbrio;
- sistema que possibilite a leitura da massa (por intermdio
de mostradores e/ou projeo ptica de escala etc.).
Devem, tambm, suportar sua carga total sem sofrer tenses
inadequadas que possam comprometer sua sensibilidade
em pesagens sucessivas nessas condies.
A balana no deve ser sobrecarregada.
Localizao da balana analtica
A balana analtica deve assentar-se nivelada sobre mesa
ou prateleira frme e pesada, protegida por amortecedores
de choque, como esteiras de cortia ou lminas de borracha,
ou ainda sobre bancada de concreto, apoiada a pilares que
estejam fxos no cho ou conectados aos elementos da
construo do prdio a fm de impedir vibraes. Deve
estar em local isolado, que oferea segurana e estabilidade
medida, em ambiente de atmosfera relativamente seca,
protegida do ataque de gases e vapores cidos, distncia
de fontes de calor (luz solar direta, fornos, estufas, mufas
etc.) e de correntes de ar.
Conservao e limpeza
O prato e demais partes da balana, inclusive sua caixa
de proteo, devem permanecer limpos, isentos de p e
substncias que acidentalmente caiam no prato da balana
ou no piso da caixa. Tais materiais devem ser removidos
imediatamente.
Os corpos a serem pesados no devem ser colocados
diretamente sobre o prato. Para tanto, utilizam-se papis
ou recipientes adequados massa, como bqueres, vidros
de relgios, cadinhos, cpsulas de porcelana e pesa-fltros
com ou sem tampa.
As partes mveis da balana e os pesos no devem
ser tocados com as mos. Usa-se, para este fm, pina
apropriada, que deve ser guardada na caixa de pesos.
Agentes dessecantes, tais como slica-gel ou cloreto de
clcio, podem ser colocados no interior da caixa de proteo,
para manuteno de atmosfera relativamente seca.
Quando a balana no estiver em uso, suas portas devero
permanecer fechadas e travadas.
A sensibilidade da balana analtica deve ser,
periodicamente, inspecionada e aferida por tcnico
habilitado.
Utilizao da balana analtica
O material a ser pesado deve estar em equilbrio trmico
com o ar do interior da caixa de proteo da balana a fm
de evitar erros devido s correntes de conveco, alm da
condensao da umidade sobre os corpos frios.
82 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
A balana deve estar nivelada na ocasio de seu uso. A
posio de equilbrio com ou sem carga deve ser conferida
vrias vezes com 10% da carga total e com a carga total. A
diferena de equilbrio, encontrada em duas determinaes
sucessivas, feitas com pesos iguais, no deve exceder a 0,1
mg para balanas analticas (mximo 200 g) e 0,01 mg para
balanas analticas (mximo 20 g).
Tanto os pesos quanto o material a ser pesado devem ser
depositados no centro do prato. Durante as operaes
de pesagem, as portas da caixa de proteo devem estar
fechadas.
5.2.2 DETERMINAO DO
PONTO OU INTERVALO DE
FUSO
Temperatura ou ponto de fuso de uma substncia
a temperatura corrigida na qual esta se encontra
completamente fundida.
Intervalo de fuso de uma substncia aquela
compreendida entre a temperatura corrigida na qual a
substncia comea a fuidifcar-se ou a formar gotculas na
parede do tubo capilar e a temperatura corrigida na qual
est completamente fundida, o que evidenciado pelo
desaparecimento da fase slida.
Existem, basicamente, quatro mtodos para determinao
do ponto ou intervalo de fuso.
MTODO I - MTODO DO CAPILAR
Geralmente aplicado para substncias facilmente
transformadas em p.
Aparelhagem
Consiste do aparelho apresentado na Figura 1.
Figura 1 aparelho para determinao do ponto
ou intervalo de fuso pelo mtodo do capilar.
O bquer deve ter capacidade de 150 mL e conter
lquido apropriado para o banho de imerso de acordo
com a temperatura desejada. Esses lquidos podem ser:
parafna liquida de alto ponto de ebulio, silicona fuida
de alto ponto de ebulio, cido sulfrico concentrado,
etilenoglicol ou gua.
O agitador deve misturar o lquido rapidamente, mantendo
homognea a temperatura do meio. O termmetro,
calibrado at sua marca de imerso, deve abranger uma
faixa de -10 a 360
o
C, com divises de 1
o
C e colocado a 2
cm do fundo do bquer.
O capilar de vidro borossilicato deve ser fechado em uma
das extremidades e ter aproximadamente 8 a 9 cm de
comprimento, 0,8 a 1,2 mm de dimetro interno e paredes
com 0,10 a 0,30 mm de espessura. Para observar o tubo
capilar deve-se empregar lente de aumento. Como fonte de
calor, utilizar bico de gs ou chapa eltrica.
Procedimento
Pulverizar a substncia em anlise e dessecar em estufa
a vcuo sobre slica-gel, pentxido de fsforo ou outro
agente dessecante durante 24 horas.
Introduzir poro do p no tubo capilar seco e compact-lo,
batendo o capilar sobre superfcie dura de modo a formar
coluna de aproximadamente 3 a 4 mm de altura.
Aquecer o banho rapidamente, sob agitao constante.
Quando a temperatura atingir 10
o
C abaixo da pressuposta
faixa de fuso, regular a velocidade de aumento da
temperatura para 1 a 2
o
C por minuto, dependendo da
estabilidade da substncia sob ensaio.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 83 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Quando o banho estiver 10
o
C

abaixo da faixa de fuso,
introduzir o capilar no banho, de forma que sua parte inferior
esteja bem prxima do meio do bulbo do termmetro.
As temperaturas obtidas so corrigidas mediante adaptao
de termmetro auxiliar ao dispositivo anterior, de forma
que seu bulbo encoste no termmetro do banho, na
zona mdia da coluna emergente de mercrio, quando a
substncia funde, lendo-se nesta altura a temperatura t
marcada no termmetro auxiliar.
O clculo da correo a ser adicionada a cada uma das
temperaturas, que defnem o ponto de fuso, efetuado
atravs da expresso
0,00015 N(T-t)
em que
N = nmero de graus correspondentes coluna emergente,
T = temperatura lida no termmetro padro,
t = temperatura lida no termmetro auxiliar.
O equipamento deve ser calibrado atravs do emprego de
padres de ponto de fuso dentre aqueles reconhecidos
internacionalmente ou outros.
MTODO II - MTODO DO CAPILAR ABERTO
Geralmente aplicado para substncias que no so
facilmente transformadas em p.
Aparelhagem
Deve-se empregar aparelho semelhante ao descrito no
Mtodo do Capilar, com as seguintes modifcaes:
- o banho de aquecimento deve ser a gua;
- o termmetro deve ser graduado em 0,2
o
C, abrangendo
faixa de -10 a 100
o
C; e
- o tubo capilar. semelhante quele empregado no Mtodo
do Capilar, deve ser aberto em ambas as extremidades.
Procedimento
Fundir a substncia rapidamente temperatura no superior
a 10
o
C acima do ponto de fuso completo. Agitar e, se
necessrio, fltrar atravs de fltro de papel seco.
Inserir a substncia fundida na extremidade do capilar at
formar coluna de 8 a 12 mm de altura. Esfriar o capilar
contendo a amostra temperatura de 15
o
C, mantendo-a,
no mnimo, por 16 horas. Prender o tubo capilar no
termmetro de forma tal que a coluna de substncia se
localize na parte mdia do bulbo de mercrio. Colocar o
sistema em banho de gua a 15
o
C, profundidade de 3
cm da superfcie da gua. Aquecer com agitao constante
para que a temperatura aumente 2
o
C por minuto.
A temperatura na qual a substncia comea a ascender no
capilar o ponto de fuso.
MTODO III - MTODO DA GOTA
Geralmente aplicado para determinao do ponto de fuso
de substncias graxas de consistncia pastosa.
Aparelhagem
Deve-se empregar aparelhagem semelhante ao do Mtodo
I, com as seguintes diferenas:
- termmetro com leitura at 100
o
C graduado em 1
o
C
- no utiliza capilar
- o lquido de imerso a gua.
Procedimento
Fundir a amostra, agitando at atingir uma temperatura
de 90 a 92
o
C e imediatamente deixar a amostra fundida
resfriar at uma temperatura de 8 a 10
o
C acima do ponto
de fuso esperado. Resfriar o bulbo de um termmetro at
5
o
C, secar e, enquanto estiver frio, submergi-lo na amostra
fundida at a altura da metade do bulbo, aproximadamente.
Retirar imediatamente e mant-lo em posio vertical
at que a superfcie da amostra depositada sobre o bulbo
solidifque, mantendo-o em banho de gua durante
aproximadamente 5 minutos a uma temperatura no maior
que 16
o
C. Adaptar o termmetro com a amostra dentro de
um tubo de ensaio por meio de uma rolha de borracha ou
cortia, de modo que seu extremo inferior fque cerca de
15 mm acima do fundo do tubo de ensaio. Suspender o
tubo de ensaio em um banho de gua a uma temperatura
de 16
o
C e elevar a temperatura do banho at 30
o
C a uma
velocidade de 2
o
C por minuto e depois a uma velocidade
de 1
o
C por minuto, at que a primeira gota se desprenda do
termmetro. A temperatura na qual isto ocorre representa o
ponto de fuso.
Para cada determinao empregar uma poro recm
fundida da amostra. Se a variao de trs determinaes for
menor que 1
o
C, calcular a mdia. Se a variao for maior
que 1
o
C realizar mais duas determinaes e determinar a
mdia das cinco leituras.
MTODO IV - MTODO DO BLOCO METLICO
AQUECIDO
De aplicao generalizada na determinao do ponto ou
intervalo de fuso de substncias.
Aparelhagem
Consiste de bloco metlico de elevada condutividade
trmica, resistente s substncias sob anlise e de superfcie
plana e polida, como bronze, ao inoxidvel e similares.
O bloco deve conter cavidade cilndrica interna, paralela
sua superfcie superior e a cerca de 3 mm desta, com
dimenses adequadas para acomodar termmetro
calibrado.
84 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
O bloco deve ser uniformemente aquecido atravs de
resistncia eltrica ou chama microajustvel. O aparelho
deve ser calibrado constantemente com substncias
apropriadas e de comprovado grau de pureza.
Procedimento
Aquecer o bloco rapidamente at temperatura de 10
o
C abaixo do ponto de fuso previsto e, ento, ajustar o
aquecimento para incrementos de temperatura da ordem de
1
o
C por minuto.
Em intervalos regulares, colocar algumas partculas da
amostra, previamente pulverizada e seca, sobre a superfcie
metlica, na regio imediatamente acima do bulbo do
termmetro. Limpar a superfcie aps cada ensaio. Anotar
a temperatura (t
1
)

na qual a substncia funde imediatamente
aps o contato com o metal. Interromper o aquecimento.
Durante o resfriamento, colocar novamente algumas
partculas da amostra, a intervalos regulares, no mesmo
local do bloco, limpando a superfcie aps cada ensaio.
Anotar a temperatura (t
2
)

na qual a substncia solidifca
instantaneamente ao contato com o metal.
O ponto de fuso instantneo da amostra calculado
mediante a seguinte expresso:
5.2.3 DETERMINAO DA
TEMPERATURA DE EBULIO
E FAIXA DE DESTILAO
Temperatura ou ponto de ebulio de um lquido a
temperatura corrigida na qual o lquido ferve sob presso
de vapor de 101,3 kPa (760 mm de Hg).
Faixa de destilao o intervalo de temperatura corrigida
para a presso de 101,3 kPa (760 mm de Hg), no qual o
lquido, ou frao especfca do lquido, destila inteiramente.
APARELHAGEM
Usar aparelho como o sugerido na Figura 1 em que A um
balo de destilao com capacidade de 100 mL conectado
ao condensador B. Na extremidade inferior de B se acopla
o adaptador C. Uma proveta de 50 mL graduada em 0,2 mL
utilizada como coletor. O termmetro deve ser adaptado
ao balo de forma que o sensor de temperatura situe-se no
centro do gargalo e a cerca de 5 mm abaixo do nvel do
tubo lateral. O aquecimento (a gs, eltrico ou atravs de
banho) deve ser selecionado de acordo com a natureza da
substncia.
Figura 1 - Aparelho para determinao da faixa de destilao (dimenses em mm). A, balo de destilao; B, condensador; C, adaptador.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 85 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
PROCEDIMENTO
Adicionar ao balo cerca de 50 mL da amostra de modo a
no escoar para o tubo lateral. Adicionar prolas de vidro
ou outro material poroso adequado. Adaptar o termmetro
ao balo e aquecer, lentamente, protegendo o sistema
contra corrente de ar.
Registrar a temperatura na qual forem coletadas as cinco
primeiras gotas do destilado. Ajustar o aquecimento para
obter o destilado vazo de 3 a 4 mL por minuto. Anotar
a temperatura na qual a ltima gota evaporar do balo de
destilao ou quando a frao especifcada for coletada.
Manter o destilado mesma temperatura na qual o lquido
foi originalmente medido e anotar o volume do destilado.
Comparar os valores obtidos do ponto de ebulio, faixa
de destilao e volume do destilado com as respectivas
especifcaes das monografas.
Corrigir as leituras em funo da presso atmosfrica
utilizando a frmula:
t
1
= t
2
+ k (101,3 b)
Onde:
t
1
= temperatura corrigida;
t
2
= temperatura observada a presso atmosfrica b;
k = fator de converso (Tabela 1), a menos que esse fator
no seja considerado;
b = presso atmosfrica, expressa em quilopascal, durante
a destilao.
Tabela 1 - Fatores de correo para
diferentes temperaturas de destilao.
Temperatura de destilao Fator de correo k
At 100
o
C
Acima de 100
o
C e at 140
o
C
Acima de 140
o
C e at 190
o
C
Acima de 190
o
C e at 240
o
C
Acima de 240
o
C
0,30
0,34
0,38
0,41
0,45
Nota 1: quando o lquido puro, a maior parte destila
a temperatura constante (em uma faixa de 0,5
o
C). Essa
temperatura o ponto de ebulio do lquido.
Nota 2: lquidos que destilam abaixo de 80 C devem
ser resfriados a 10-15 C antes de se medir o volume e a
proveta que recebe o destilado deve estar imersa em banho
de gelo.
Nota 3: quando o ponto de ebulio superior a 140-
150 C, pode-se substituir o condensador de gua por
condensador de ar.
5.2.4 DETERMINAO
DA TEMPERATURA DE
CONGELAMENTO
Temperatura ou ponto de congelamento de lquido ou de
slido fundido a mais alta temperatura na qual ocorre
solidifcao.
Para substncias puras que fundem sem decomposio,
o ponto de congelamento do lquido igual ao ponto de
fuso.
APARELHAGEM
O aparelho (Figura 1) consiste em tubo de ensaio de
aproximadamente 25 mm de dimetro interno e 150 mm de
comprimento suspenso por intermdio de rolha adequada
dentro de um segundo tubo maior de 40 mm de dimetro
interno e 160 mm de comprimento formando uma camisa de
ar que evita mudana brusca de temperatura. Esse sistema
fxo por garra no centro do bquer com capacidade de
1000 mL contendo gua ou soluo refrigerante.
O tubo interior vedado com rolha de modo a conter
haste agitadora e termmetro com divises de 0,2 C. O
sensor de temperatura do termmetro deve estar fxo a
aproximadamente 15 mm do fundo do tubo. O agitador
um basto de vidro adaptado com anel na sua extremidade
inferior (Figura 1).
Figura 1 - Aparelho para determinao do
ponto de congelamento
86 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
PROCEDIMENTO
Transferir a amostra em quantidade sufciente para
atingir 30 mm no tubo interno. Transferir para o bquer
a mistura refrigerante adequada a 5 C abaixo do ponto
de congelamento esperado. Quando a amostra estiver
resfriada a cerca de 5 C acima do ponto de congelamento,
mover verticalmente o agitador entre a superfcie e o fundo
por, aproximadamente, 20 ciclos por minuto e registrar
a temperatura do termmetro de 30 em 30 segundos.
Interromper a agitao quando a temperatura permanecer
constante ou apresentar leve aumento. Registrar a
temperatura de 30 em 30 segundos por no mnimo 3 minutos
aps a temperatura comear a diminuir novamente.
Registrar o mximo na curva da temperatura-tempo que
ocorre aps a temperatura permanecer constante, ou
apresentar leve aumento, e antes da temperatura comear
a diminuir novamente. O ponto de congelamento
atribudo mdia de no menos que trs pontos mximos
consecutivos que estejam dentro de uma faixa de 0,4 C.
Nota 1: se a substncia slida a temperatura ambiente,
fundir a substncia e aquecer at no mximo 20 C acima
da temperatura de congelamento esperada antes de
transferir para o tubo interno.
Nota 2: se a substncia lquida a temperatura ambiente
utilizar banho a 15 C abaixo da temperatura de
congelamento esperada.
5.2.5 DETERMINAO DA
DENSIDADE DE MASSA E
DENSIDADE RELATIVA
Densidade de massa () de uma substncia a razo de
sua massa por seu volume a 20 C. A densidade de massa
da substncia (
t
) em uma determinada temperatura (t)
calculada a partir de sua densidade relativa (
t
t
d ) pela
frmula:

t
= d
(gua)

t
t
d + 0,0012
expressa em g/mL ou kg/L.
Quando a temperatura, for exemplo, 20 C a frmula
expressa por:
Tabela 1 - Densidade da gua de 0 a 40 C.
Temp. (C)
Densidade
(g/mL)
Temp. (C)
Densidade
(g/mL)
Temp. (C)
Densidade
(g/mL)
Temp. (C)
Densidade
(g/mL)
0 0,99984 10 0,99970 20 0,99820 30 0,99565
1 0,99990 11 0,99961 21 0,99799 31 0,99534
2 0,99994 12 0,99950 22 0,99777 32 0,99503
3 0,99996 13 0,99938 23 0,99754 33 0,99470
4 0,99997 14 0,99924 24 0,99730 34 0,99437
5 0,99996 15 0,99910 25 0,99704 35 0,99403
6 0,99994 16 0,99894 26 0,99678 36 0,99368
7 0,99990 17 0,99877 27 0,99651 37 0,99333
8 0,99985 18 0,99860 28 0,99623 38 0,99297
9 0,99978 19 0,99841 29 0,99594 39 0,99259
10 0,99970 20 0,99820 30 0,99565 40 0,99222
Densidade relativa de uma substncia a razo de sua
massa pela massa de igual volume de gua, ambas a 20 C
(
20
20
d
) ou por massa de igual volume de gua a 4 C (
20
4
d
):

20
4
d
= 0,998234
20
20
d
PROCEDIMENTO
A densidade relativa da substncia pode ser determinada
atravs de picnmetro, balana hidrosttica ou densmetro.
O uso desses dois ltimos condicionado ao tipo de
aparelhagem disponvel.
MTODO DO PICNMETRO
Utilizar picnmetro limpo e seco, com capacidade de,
no mnimo, 5 mL que tenha sido previamente calibrado.
A calibrao consiste na determinao da massa do
picnmetro vazio e da massa de seu contedo com gua,
recentemente destilada e fervida, a 20 C.
Transferir a amostra para o picnmetro. Ajustar a
temperatura para 20 C, remover excesso da substncia,
se necessrio, e pesar. Obter o peso da amostra atravs da
diferena de massa do picnmetro cheio e vazio. Calcular
a densidade relativa (
20
20
d
) determinando a razo entre a
massa da amostra lquida e a massa da gua, ambas a 20
C. Utilizar a densidade relativa para calcular a densidade
de massa ().
5.2.6 DETERMINAO DO
NDICE DE REFRAO
ndice de refrao (n) de uma substncia a relao entre a
velocidade da luz no vcuo e sua velocidade na substncia.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 87 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Quando um raio de luz monocromtica passa de um meio
transparente para outro de densidade ptica diferente
esse refetido ou refratado, exceto quando incide
perpendicularmente a interface. A relao entre o seno do
ngulo de incidncia (sen i) e o seno do ngulo de refrao
(sen r) constante. Essa relao equivale ao ndice de
refrao (n).
Para fns prticos mede-se a refrao com referncia ao ar e
substncia e no com referncia ao vcuo e substncia,
porquanto as diferenas entre os valores obtidos com ambas
as medidas no so signifcativas para fns farmacopeicos.
Em substncias isotrpicas, o ndice de refrao
caracterstica constante em determinado comprimento de
onda, temperatura e presso. Por essa razo, esse ndice
til no s para identifcar a substncia, mas, tambm,
para detectar a presena de impurezas. empregado para
caracterizar principalmente gorduras, leos graxos, ceras,
acares e solventes orgnicos, bem como para identifcar
certos frmacos. igualmente usado para determinar a
pureza de leos volteis.
Geralmente determina-se o ndice de refrao em funo
da luz de sdio no comprimento de onda 589,3 nm (raia
D) e a 20 0,5
o
C. Da expressar-se o valor do ndice de
refrao como
20
D
n .
REFRATMETROS
Os refratmetros utilizados normalmente em anlise
farmacopeica usam luz branca, mas so calibrados de modo
a fornecer o ndice de refrao em termos de comprimento
de onda correspondente ao da luz da raia D de sdio.
O refratmetro Abb mede a faixa de valores de ndice
de refrao das substncias farmacuticas. Outros
refratmetros de maior ou igual preciso podem ser
empregados.
Visto que o ndice de refrao varia signifcativamente com a
temperatura, durante a leitura deve-se ajustar e manter a 20
o
C.
A calibrao do aparelho realizada com padro fornecido
pelo fabricante. Para controle da temperatura e limpeza do
equipamento deve-se determinar o ndice de refrao da
gua destilada cujos valores so 1,3330 a 20 C e 1,3325 a
25 C.
5.2.7 DETERMINAO DA
VISCOSIDADE
Viscosidade a expresso da resistncia de lquidos ao
escoamento, ou seja, ao deslocamento de parte de suas
molculas sobre molculas vizinhas. A viscosidade dos
lquidos vem do atrito interno, isto , das foras de coeso
entre molculas relativamente juntas. Com o aumento
da temperatura, aumenta a energia cintica mdia das
molculas, diminui (em mdia) o intervalo de tempo que as
molculas passam umas junto das outras, menos efetivas se
tornam as foras intermoleculares e menor a viscosidade.
A unidade dinmica, Sistema CGS, de viscosidade o poise.
O Sistema CGS de unidades um sistema de unidades de
medidas fsicas, ou sistema dimensional, de tipologia LMT
(comprimento, massa tempo), cujas unidades-base so o
centmetro para o comprimento, o grama para a massa e o
segundo para o tempo.
A unidade dinmica anloga no Sistema Internacional de
Unidades (SI) o pascal segundo. O poise frequentemente
utilizado com o prefxo centi; um centipoise (cP) um
milipascal segundo (mPas) em unidades SI.
Sistema CGS poise (P)
1 P = 1 g cm
1
s
1
Por defnio, poise a fora, em dinas, necessria ao
deslocamento de camada plana de lquido, com rea de 1
cm
2
, sobre outra camada idntica, paralela e distanciada
da primeira em 1 cm, velocidade de 1 cm/s. O poise ,
contudo, demasiado grande para a maioria das aplicaes,
recorrendo-se da ao centipoise, cP, correspondente a
um centsimo de poise. s vezes conveniente utilizar-
se a viscosidade cinemtica, que consiste na relao
entre a viscosidade dinmica e a densidade. Nesse caso,
no sistema CGS, a unidade o stoke. A exemplo do que
ocorre com viscosidade absoluta (medida em poise),
mais conveniente exprimir-se viscosidade cinemtica em
centistokes (100 centistokes = 1 stoke) para caracterizar a
maioria dos lquidos usuais em Farmcia e Qumica.
Sistema Internacional de Unidades pascal segundo(Pas)
1 Pas = 1 kg m
1
s
1
= 10 P
Pascal segundo equivale a 10 poise, mas, normalmente,
mais utilizado milipascal segundo (mPas)
Na Tabela 1 est registrada a viscosidade de alguns
lquidos.
Tabela 1 Viscosidade de alguns lquidos.
Lquido
Viscosidade
(P)
a
Unidades
CGS
Viscosidade
N s m
Unidades SI
Viscosidade
cP = mPa.s
gua 0,0101 (298 K) 0,00101 0,890
Acetona 0,00316 0,000316 0,306
Etanol 0,01200 0,001200 1,074
Glicerina 14,9 1,49 934
____________________
a
1 poise (P) = 1 dina. s. cm-2 = 0,1 N s m-2. cP = centi-poise = mPa.s =
mili Pascal vezes Seg.
A determinao da viscosidade ensaio para o qual a
especifcao da temperatura imprescindvel devido
sua infuncia decisiva sobre o resultado (em geral, a
viscosidade inversamente proporcional temperatura) -
efetuada com base em propriedades diversas. O mtodo
mais frequente baseia-se no tempo de escoamento de
lquidos atravs de capilares (viscosmetros de Ostwald,
88 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Ubbelohde, Baum e Engler) devido simplicidade e ao
preo acessvel dos aparelhos. Viscosmetros que tm como
princpio de funcionamento a determinao do tempo de
queda livre de esferas atravs de tubos contendo o liquido
sob ensaio (Hoppler) ou a velocidade de rotao de eixos
metlicos imersos no liquido (Brookfeld, entre outros) so
igualmente empregados.
Diversas metodologias que podem ser empregadas:
resistncia de lquidos ao escoamento, tempo de vazo
de um lquido atravs de um capilar (viscosmetro de
Oswald, Ubbelohde, Baum e Engler);
medida do tempo de queda de uma esfera atravs de
tubos contendo o lquido sob ensaio (Hppler);
medindo a resistncia ao movimento de rotao de
eixos metlicos quando imersos no lquido (remetro
de Brookfeld).
Embora seja possvel a determinao de viscosidade
absoluta, com base nas dimenses exatas do viscosmetro
empregado, mais frequente a prtica da calibrao
prvia do aparelho com lquido de viscosidade conhecida,
permitindo, por comparao, avaliao relativa da
viscosidade do lquido sob ensaio. Assim, empregando-
se viscosmetro de Ostwald ou similar, determinam-se
os tempos de escoamento t
1
e t
2
de volumes iguais dos
lquidos de referncia e amostra, de densidade d
1
e d
2
,
respectivamente. Sendo n
2
a viscosidade do lquido de
referncia, a viscosidade absoluta (cP) do, lquido amostra,
pode ser calculada pela equao:
ou melhor
O quociente
2
/t
2
.d
2
possui valor constante, k, para cada
lquido de referncia, no mesmo viscosmetro. Assim,
conhecido esse valor (geralmente, encontrado no manual
do aparelho), simplifca-se a equao:
O valor de k pode, tambm, ser determinado,
experimentalmente, medindo-se o tempo de escoamento
de lquido padro, puro, e aplicando-se a equao:
Empregando-se gua como padro, usual para determinao
de lquidos de baixa viscosidade, adotam-se os valores
de viscosidade registrados na Tabela 2, conforme a
temperatura do ensaio:
Tabela 2 Valores de viscosidade, de acordo
com a temperatura do ensaio.
Temperatura (
o
C) n(cP)
15 1,140
16 1,110
17 1,082
18 1,055
19 1,029
20 1,004
21 0,980
22 0,957
23 0,936
24 0,915
25 0,895
Para lquidos muito viscosos (glicerina e leos em geral),
pode-se determinar a viscosidade relativa pelo mtodo da
velocidade da queda de bolas atravs do lquido, usando
o viscosmetro de Hppler. Esse mtodo, tambm,
apropriado para determinar a viscosidade absoluta de
lquidos, aplicando-se a equao:
Onde:
t = tempo de queda da bola (seg).
K = cte especfca da bola (mPcm
3
), fornecido pelo
fabricante.
d
S
= densidade da bola (g/cm
3
).
d
L
= densidade do lquido (g/cm
3
).
A densidade do lquido (d
L
), para uma certa temperatura,
pode ser obtida em livros de referncia (como handbooks),
ou determinada experimentalmente.
A viscosidade relativa no mtodo de Hppler pode ser
determinada aplicando-se a equao:
onde , d e t so, respectivamente, o coefciente de
viscosidade dinmica, a massa especfca e o tempo de
escoamento de igual volume dos lquidos 1 e 2.
VISCOSMETRO DE OSTWALD
O princpio operacional do viscosmetro de Stokes
baseia-se na determinao da velocidade de queda livre
de uma esfera atravs do fuido do qual se deseja obter a
viscosidade.
O viscosmetro de Ostwald o mais simples e popular
dentre os aparelhos disponveis. Consta de tubo dobrado
em U (Figura 1), com um dos ramos munido de ampola
terminada em capilar. H dois traos de referncia, um
imediatamente acima da ampola e o outro sobre o capilar.
O outro ramo sufcientemente largo para permitir seu
enchimento com o lquido sob ensaio at a altura de cerca
de 5 mm abaixo do trao de referncia inferior. Para
possibilitar maior variedade de viscosidades, passveis de
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 89 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
determinao, empregam-se colees de viscosmetros,
com diferentes calibres. O aparelho indicado para
determinada avaliao o que possibilita escoamento da
amostra em perodo no inferior a 60 segundos.
Para a determinao propriamente dita, transferir para
o viscosmetro escolhido, lavado e seco, quantidade
sufciente de lquido para atingir nvel da ordem de 5 mm
abaixo do trao de referncia inferior. Fixar o aparelho
em termostato (20
o
C), aps aguardar que o liquido no
interior do aparelho adquira a temperatura controlada,
aspirar o lquido pelo tubo capilar/ampola (por meio de
tubo de borracha fxado na extremidade) at que o nvel do
lquido exceda ligeiramente o trao de referncia superior.
Soltar ento o tubo e, no instante em que o menisco
atingir o trao de referncia superior, acionar cronmetro
de preciso, retravando-o quando o menisco passar pelo
trao de referncia inferior. Registrar o tempo decorrido
e repetir o ensaio diversas vezes com intervalos de alguns
minutos at que tempos sucessivos no difram em mais de
0,5 segundos Determinar a densidade do liquido sob ensaio
(5.2.5), corrigindo o valor para a densidade relativa gua,
a 20
o
C, e calcular a viscosidade do lquido amostra pela
frmula indicada, empregando a constante k fornecida ou
determinada por procedimento similar.
Figura 1 Viscosmetro de Ostwald
(dimenses em mm).
VISCOSMETRO DE HPPLER
O sistema de medida Hppler, mede o tempo que uma
esfera slida precisa para percorrer uma distncia entre
dois pontos de referncia dentro de um tubo inclinado
com amostra. Os resultados obtidos so considerados
como viscosidade dinmica na medida estandardizada no
Sistema Internacional (mPa.s). Determina a viscosidade
de lquidos Newtonianos e gases (com uma bola especial
para gases), com preciso. Entre suas aplicaes fguram
a investigao, o controle de processos e o controle de
qualidade, utilizado principalmente para substncias de
baixa viscosidade, entre 0,6 e 100 000 mPa.s.
O Viscosmetro de Hppler composto por um tubo de
vidro com duas marcas (A e B) espaadas de 10 mm entre
si na coluna, as quais defnem a distncia de medio. Uma
bola (em vidro, liga de nquel e ferro ou ao), com dimetro
compatvel com o calibre do tubo de vidro instalada no topo
do seu contedo lquido. O tubo envolvido por um cilindro
de vidro cheio com gua em circulao, sob temperatura
controlada. Todo o conjunto se encontra disposto em posio
ligeiramente inclinada (10% na vertical), podendo ser girado
180
o
em torno de um eixo perpendicular a ambos os tubos,
para possibilitar a repetio das determinaes e o retorno
da bola posio inicial. A tcnica consiste, em cronometrar
o tempo (de queda) que uma esfera (com densidade e
dimetro variveis com a respectiva constituio estrutural)
leva a percorrer o espao entre aquelas duas marcas (A e
B) existentes nas extremidades do tubo de vidro. Quanto
maior for a viscosidade maior ser o tempo que a bola
levar a percorrer aquele espao. O tipo de esfera a utilizar
escolhido em funo do valor presumvel da viscosidade
do lquido em observao. No caso do sangue so utilizadas
esferas de vidro. Os resultados da viscosidade, dos lquidos
newtonianos so expressos em unidades absolutas padres
internacionais (milipascal. segundo, mPa.s).
Para a determinao propriamente dita, enxaguar o
viscosmetro, escolhido, lavado e seco, com o lquido que
for usado para determinar a viscosidade. Ajustar o prumo
do aparelho. Escolher a esfera adequada para cada lquido
(gua = esfera de vidro). Encher completamente o tubo
interno do viscosmetro com gua. Anotar o tempo de
queda da esfera entre as marcas A e B no viscosmetro.
Fazer mais duas determinaes para obter a melhor mdia.
VISCOSMETRO BROOKFIELD
A viscosidade de uma forma farmacutica pode ser
determinada por um viscosmetro de Brookfeld, que mede
a viscosidade pela fora necessria para girar o spindle no
lquido que est sendo testado.
Para utilizar esse aparelho, deve-se proceder da seguinte
forma:
adicionar a amostra a ser analisada no recipiente coletor
do aparelho, at a marca desejada;
programar o aparelho, escolhendo um nmero de
spindle e uma rotao a serem testados, de acordo com
metodologia especfca;
imergir o spindle na amostra a ser analisada;
acionar o aparelho e, aps estabilizao do valor, que
aparecer no display do aparelho, anotar esse valor que
ser expresso em centipoise (cP);
caso no haja estabilizao do valor, teste novamente,
utilizando outro nmero de spindle ou outra rotao.
90 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
VISCOSMETRO DE EFLUXO - MODELO TIPO FORD
Selecionar o orifcio adequado. A diretriz para a seleo do
orifcio deve ser a obteno de um tempo de escoamento
do lquido em teste ao redor de 60 segundos. Deve-se ter
um tempo de escoamento entre 20 e 100, segundos, para a
amostra a 25 C.
A amostra deve ser, perfeitamente, homogeneizada. No
momento do ensaio, o viscosmetro e o material a ser
ensaiado devem estar a 25 0,1 C. Fechar o orifcio com
lmina de vidro plana e preencher o copo com amostra
at o nvel mais elevado. Verter a amostra, lentamente,
evitando a formao de bolhas. Nivelar a amostra no
copo utilizando placa de vidro plana. Retirar a lmina do
orifcio. A amostra fcar retida dentro do copo. Remova
a placa de vidro plana e acione o cronmetro quando a
amostra comear a escoar pelo orifcio. Quando ocorrer
a primeira interrupo do fuxo de escoamento, parar o
cronmetro e anotar o tempo transcorrido em segundos.
Realizar o ensaio, no mnimo, em triplicata. A viscosidade
ser a mdia dos valores obtidos, expressa em mm
2
/s ou
Centistokes, sendo permitido um desvio padro mximo
3%. A converso de segundos para mm
2
/s ou Centistokes
dada de acordo com o manual do equipamento utilizado.
5.2.8 DETERMINAO
DO PODER ROTATRIO
E DO PODER ROTATRIO
ESPECFICO
Muitas substncias farmacuticas so opticamente ativas,
logo desviam a luz plano-polarizada de modo que a luz
transmitida desviada em um determinado ngulo em
relao incidente.
Substncias com a mesma estrutura contendo um ou mais
centros quirais as quais so imagens especulares no
superponveis uma da outra so denominadas enantimeros.
Um dos enantimeros desvia a luz plano-polarizada para
a direita (+) e chamado de dextrgiro, ou d; o antpoda
desvia para a esquerda (-) e conhecido como levgiro
ou l. O ngulo desse desvio igual em mdulo para os
enantimeros, porm com sinais opostos.
As propriedades fsico-qumicas dos enantimeros como
densidade, ndice de refrao, momento dipolo-dipolo,
pontos de ebulio e fuso so idnticas j que o ambiente
qumico no qual est inserido cada tomo igual para os
enantimeros.
A polarimetria, isso , a medio do poder rotatrio de
uma substncia com polarmetro um dos mtodos mais
prtico para distinguir os enantimeros e, portanto, um
importante critrio de identifcao, caracterizao e de
determinao de pureza enantiomrica dos frmacos.
O poder rotatrio varia com a temperatura, o comprimento
de onda da luz incidente, o solvente utilizado, a natureza da
substncia e sua concentrao. Se a soluo contiver duas
substncias opticamente ativas e estas no reagirem entre
si, o ngulo de desvio ser a soma algbrica dos ngulos de
desvio de ambas.
Polarmetro
Historicamente, a polarimetria foi realizada utilizando
um instrumento em que o poder rotatrio estimado pela
visualizao da intensidade de campos divididos. Por essa
razo, a linha-D da lmpada de sdio no comprimento de
onda visvel a 589 nm foi o mais frequentemente utilizado.
O poder rotatrio especfco determinado na linha D
expresso, na maioria das vezes, pelo smbolo:
O uso de comprimentos de onda mais baixos como os
disponveis com as linhas de lmpada de mercrio isolados
por meio de fltros de transmitncia mxima a cerca de 578,
546, 436, 405 e 365 nm em um polarmetro fotoeltrico
mostraram maior sensibilidade; consequentemente houve
uma reduo na concentrao da substncia no ensaio.
Em geral, o poder rotatrio observado em 436 nm
aproximadamente o dobro e em 365 nm cerca de trs
vezes maior que o em 589 nm.
Poder rotatrio e poder rotatrio especifco
A equao geral usada em polarimetria :
Em que [] o poder rotatrio especfco no comprimento
de onda e na temperatura t, a o poder rotatrio observado
em graus (), l o caminho ptico em decmetros e c a
concentrao da substncia em g por 100 mL. Assim, []
100 vezes para uma soluo contendo 1 g em 100 mL
em uma clula com um caminho ptico de 1,0 decmetro
sob condies defnidas do comprimento de onda da luz
incidente e da temperatura.
Procedimento
O poder rotatrio especfco de um frmaco um valor de
referncia e deve ser calculado a partir do poder rotatrio
observado para a soluo da amostra ou para o lquido
conforme especifcado na monografa. As medidas do poder
rotatrio so realizadas a 589 nm a 20 C exceto quando
especifcado. Sempre que um polarmetro fotoeltrico
usado, uma nica medida corrigida pelo branco realizada.
Para um polarmetro visual empregada a mdia de pelo
menos cinco determinaes corrigidas pelo branco. Em
ambos os casos, o solvente utilizado para o preparo da
soluo da amostra deve ser utilizado como branco ou o tubo
vazio no caso de lquidos. A temperatura experimental deve
ser mantida em 0,5 C em relao ao valor especifcado.
Usar o mesmo tubo do polarmetro na mesma orientao
angular para a amostra e o branco. Posicionar o tubo para
que a luz passe por ele na mesma direo cada vez.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 91 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
O poder rotatrio das solues deve ser determinado dentro
de 30 minutos aps a preparao. Nos casos nos quais
ocorre racemizao ou mutarrotao todas as condies
devem ser padronizadas desde o tempo de preparo da
soluo e o de medida no polarmetro.
O poder rotatrio e o poder rotatrio especfco referem-se
substncia seca, anidra ou isenta de solvente em todas as
monografas em que se fornecem os valores da umidade,
perda por dessecao ou contedo de solvente.
5.2.9 DETERMINAO DA
PERDA POR DESSECAO
Esse ensaio se destina a determinar a quantidade de
substncia voltil de qualquer natureza eliminada nas
condies especifcadas na monografa. No caso de ser a
gua a nica substncia voltil, basta determinar seu teor
segundo um dos mtodos descritos em Determinao de
gua (5.2.20).
Para os demais casos, o procedimento adotado o descrito
abaixo, sendo o mtodo a ser adotado especifcado nas
monografas.
PROCEDIMENTO
Mtodo Gravimtrico
Reduzir a substncia a p fno, caso se apresente na
forma de cristais volumosos. Pesar, exatamente, cerca
de 1 a 2 g e transferir para pesa-fltro chato previamente
dessecado durante 30 minutos nas mesmas condies a
serem empregadas na determinao. Aps resfriamento
em dessecador, pesar o pesa-fltro, tampado, contendo a
amostra. Agitar o pesa-fltro brandamente para distribuir
a amostra da maneira mais uniforme possvel, a uma
altura ideal de 5 mm. Colocar o pesa-fltro na estufa,
retirar a tampa, deixando-a tambm na estufa. Secar a
amostra (geralmente a 105
o
C) e por um determinado prazo
(geralmente 2 horas) especifcado na monografa. Esfriar
at temperatura ambiente em dessecador. Pesar. Repetir a
operao at peso constante.
Observao: No caso de a substncia fundir a uma
temperatura mais baixa que a especifcada para a
determinao, manter o pesa-fltro com seu contedo por
1 a 2 horas temperatura de 5 a 10
o
C abaixo do ponto de
fuso, antes de sec-la temperatura especifcada. Quando
a substncia se decompe a temperatura de 105
o
C, ela deve
ser dessecada em uma temperatura mais baixa. Em ambos
os casos, pode-se realizar a secagem presso reduzida,
em dessecador.
A porcentagem de perda por dessecao dada pela
equao
em que
Pa = peso da amostra,
Pu = peso do pesa-fltro contendo a amostra antes da
dessecao,
Ps = peso do pesa-fltro contendo a amostra aps a
dessecao.
Balana por infravermelho ou utilizando lmpada
halogenada
O procedimento deve ser realizado como a seguir.
Retirar a umidade do equipamento;
pesar cerca de 1g da substncia a ser analisada e
distribuir o material uniformemente no coletor de
alumnio contido dentro do aparelho;
defnir o tempo e temperatura de secagem segundo
descrito na monografa da respectiva substncia. Na
maioria das vezes, utiliza-se um (1) minuto a 105 C.
acionar o aparelho e anotar o valor da umidade, em
percentual, que aparecer no display do aparelho.
Termogravimetria
Proceder conforme descrito em Anlise Trmica (5.2.27).
5.2.10 DETERMINAO
DE CINZAS SULFATADAS
(RESDUO POR INCINERAO)
Cinzas sulfatadas compreendem o resduo no voltil
incinerao na presena de cido sulfrico, conforme a
tcnica especifcada. Em geral, o ensaio visa a determinar o
teor de constituintes ou impurezas inorgnicas contidos em
substncias orgnicas. Tambm se destina determinao
de componentes inorgnicos em misturas e da quantidade
de impurezas contidas em substncias inorgnicas
termolbeis.
PROCEDIMENTO
Pesar exatamente de 1 a 2 g (ou a quantidade especifcada
na monografa) de substncia pulverizada, transferir para
cadinho (como exemplo: platina, porcelana, slica, quartzo)
previamente calcinado, esfriado em dessecador e tarado,
e adicionar cerca de 1 mL de cido sulfrico. Aquecer
brandamente at carbonizao em temperatura no
superior a 600
o
C 50
o
C. Esfriar e adicionar lentamente
cerca de 1 mL de cido sulfrico para umedecer o resduo,
carbonizar e incinerar com aquecimento gradativo at 600
o
C 50
o
C. Esfriar, pesar novamente e incinerar por mais
30 minutos. Repita este procedimento at que a diferena
entre duas pesagens sucessivas no seja maior que 0,5
mg. Um equipamento calibrado, por exemplo mufa, deve
ser utilizado para o controle da temperatura. Calcular a
92 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
porcentagem de cinzas sulfatadas em relao substncia
sob ensaio, utilizando o seguinte clculo:
em que:
P
1
= Peso do cadinho aps a calcinao e esfriamento (tara
do cadinho);
P
2
= Peso do cadinho com amostra aps a calcinao e
esfriamento em dessecador;
P
3
= Peso da amostra inicial
100 = Fator de porcentagem.
5.2.11 DETERMINAO DA
GRANULOMETRIA DOS PS
O grau de diviso ou a granulometria de ps expresso pela
referncia abertura nominal da malha do tamis utilizado.
Os tamises empregados so de ao inoxidvel, lato, no
sendo permitido o revestimento dos fos.
Na descrio dos ps so utilizados os termos abaixo:
P grosso - aquele cujas partculas passam em sua
totalidade pelo tamis com abertura nominal demalha de
1,70 mm e, no mximo, 40% pelo tamis com abertura
nominal de malha de 355 um.
P moderadamente grosso - aquele cujas partculas
passam em sua totalidade pelo tamis com abertura nominal
de malha de 710 um e, no mximo, 40% pelo tamis com
abertura nominal de malha de 250 um.
P semifno - aquele cujas partculas passam em sua
totalidade pelo tamis de abertura nominal de malha de 355
um e, no mximo, 40% pelo tamis com abertura nominal
de malha de 180 um.
P fno - aquele cujas partculas passam em sua totalidade
pelo tamis com abertura nominal de malha de 180 um.
P fnssimo - aquele cujas partculas passam em sua
totalidade pelo tamis com abertura nominal de malha de
125 um.
A determinao da granulometria de ps feita pelo
processo descrito abaixo, com o auxilio de tamises, cujas
caractersticas esto padronizadas na tabela anexa.
PROCEDIMENTO
A granulometria determinada com o auxlio de tamises
operados por dispositivo mecnico. Este tipo de dispositivo
reproduz os movimentos horizontais e verticais da operao
manual, atravs da ao mecnica uniforme. Para utilizar
este dispositivo, proceda da seguinte forma:
Separar, pelo menos, 4 tamises que estejam descritos na
Tabela 1, de acordo com as caractersticas da amostra.
Montar o conjunto com o tamis de maior abertura sobre
o de abertura menor. Colocar o conjunto sobre o receptor
de tamises.
Pesar cerca de 25 g da amostra (dependendo da natureza
do material, densidade do p ou grnulo e do dimetro dos
tamises a serem utilizados). Transferir a amostra para o
tamis superior, distribuindo uniformemente o p. Tampar
o conjunto.
Acionar o aparelho, por cerca de 15 minutos, com vibrao
adequada. Aps o trmino deste tempo, utilizando um
pincel adequado, remover toda a amostra retida na superfcie
superior de cada malha para um papel impermevel, e
pesar o p. Pesar tambm o p retido no coletor.
Calcular o percentual retido em cada tamis, utilizando o
seguinte clculo:
onde:
P
1
= Peso da amostra retida em cada tamis (em gramas);
P
2
= Soma dos pesos retidos em cada tamis e no coletor
(em gramas);
100 = Fator de porcentagem.
Tabela 1 - Abertura de malha dos tamises.
Nmero do tamis
(ABNT/ ASTM)
Orifcio do tamis
2 9,5 mm
3,5 5,6 mm
4 4,75 mm
8 2,36 mm
10 2 mm
20 850 m
30 600 m
40 425 m
50 300 m
60 250 m
70 212 m
80 180 m
100 150 m
120 125 m
200 75 m
230 63 m
270 53 m
325 45 m
400 38 m
500 25 m
635 20 m
_____________
* O nmero do tamis corresponde classifcao da Associao
Brasileira de Normas Tcnicas ABNT (1984), ISO 3310 1:2000.
5.2.12 COR DE LQUIDOS
A avaliao da cor de lquidos executada por comparao
da soluo sob anlise - preparada conforme instrues
da monografa - e solues-padro de cor (SC). Tais
solues encontram emprego como referncia para alguns
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 93 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
frmacos e em testes de carbonizao com cido sulfrico
especifcados em diversas monografas.
O processo comparativo, salvo especifcao em contrrio,
deve ser executado em tubos de ensaio de vidro transparente
e fundo chato, com dimetro da ordem de 16 mm, do tipo
empregado em ensaio limite de impurezas. Os tubos devem
ser os mais uniformes possveis.
Para a avaliao, utilizar volumes de 10 mL tanto para
a preparao amostra quanto para a preparao padro,
assegurando altura aproximada de 50 mm para os lquidos
nos tubos. Observar os tubos transversalmente contra fundo
branco, sob luz difusa. importante comparar as solues
nas mesmas condies, inclusive de temperatura (25
o
C).
A preparao amostra preparada de modo a apresentar
colorao semelhante da preparao de referncia
especifcada.
PADRES BSICOS
As solues de referncia de cor (SC) so obtidas a partir
de trs solues bsicas, a serem preparadas e armazenadas
em frascos hermticos. Dessas - com base na Tabela 1,
contendo indicaes de volumes para a preparao de 20
solues-padro de cor (SC) designadas com as letras
do alfabeto, de A a T - preparar a soluo ou solues
especifcadas para a comparao. Transferir os volumes
indicados (deixar a gua por ltimo) e homogeneizar,
diretamente, nos tubos de comparao.
Soluo base de cloreto de cobalto II
Preparar soluo de 25 mL de cido clordrico e 975
mL de gua. Dissolver 65 g de cloreto de cobalto(II) em
aproximadamente 900 mL dessa soluo e completar o
volume para 1000 mL com o mesmo solvente. Transferir,
usando pipeta, 5 mL dessa soluo para frasco de iodo de
250 mL, juntar 5 mL de perxido de hidrognio SR e 15
mL de hidrxido de sdio 5 M. Ferver durante dez minutos,
resfriar e adicionar 2 g de iodeto de potssio e 20 mL de
cido sulfrico 0,26 M. Titular com tiossulfato de sdio 0,1
M SV, juntando 3 mL de amido SI como indicador. Corrigir
o volume de titulante consumido por determinao em
branco. Cada mL de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale
a 23,79 mg de CoCl
2
.6H
2
O. Ajustar o volume da soluo
adicionando quantidade sufciente de soluo de cido
clordrico e gua para obter soluo contendo exatamente
59,5 mg de CoCl
2
.6H
2
O por mL de soluo.
Soluo base de sulfato cprico
Preparar soluo de 25 mL de cido clordrico e 975 mL
de gua. Dissolver 65 g de sulfato cprico (CuSO
4
.5H
2
O)
em 900 mL dessa soluo e completar o volume para 1000
mL com a mesma soluo. Transferir, usando pipeta, 10
mL dessa soluo para frasco de iodo de 250 mL, juntar
40 mL de gua, 4 mL de cido actico glacial, 3 g de
iodeto de potssio e 5 mL de cido clordrico. Titular o
iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,1 M SV, juntando
3 mL de amido SI como indicador. Corrigir o volume de
titulante consumido por determinao em branco. Cada
mL de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale a 24,97 mg
de CuSO
4
.5H
2
O. Ajustar o volume da soluo adicionando
quantidade sufciente de mistura de cido clordrico e
gua para obter soluo contendo exatamente 62,4 mg de
CuSO
4
.5H
2
O por mL de soluo.
Soluo base de cloreto frrico
Preparar soluo de 25 mL de cido clordrico e 975 mL de
gua. Dissolver cerca de 55 g de cloreto frrico (FeCl
3
.6H
2
O)
em aproximadamente 900 mL dessa soluo e completar o
volume para 1000 mL com a mesma soluo. Transferir,
utilizando pipeta, 10 mL dessa soluo para frasco de iodo de
250 mL, adicionar 15 mL de gua, 3 g de iodeto de potssio
e 5 mL de cido clordrico. Deixar em repouso durante 15
minutos. Completar o volume da soluo para 100 mL com
gua e titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,1 M
SV, juntando 3 mL de amido SI como indicador. Corrigir o
volume de titulante consumido por determinao em branco.
Cada mL de tiossulfato de sdio 0.1 M SV equivale a 27,03
mg de FeCl
3.
6H
2
O. Ajustar o volume da soluo adicionando
quantidade sufciente de soluo de cido clordrico e
gua para obter soluo contendo exatamente 45,0 mg de
FeCI
3.
6H
2
O por mL de soluo.
Tabela 1 - Composio das solues-padro de cor (SC).
SC
Partes de
Soluo
base de
cloreto de
cobalto II,
em mL
Soluo
base de
cloreto
frrico,
em mL
Soluo
base de
sulfato
cprico,
em mL
gua,
para
completar
10 mL.
A 0,1 0,4 0,1 4,4
B 0,3 0,9 0,3 8,5
C 0,1 0,6 0,1 4,2
D 0,3 0,6 0,4 3,7
E 0,4 1,2 0,3 3,1
F 0,3 1,2 0,0 3,5
G 0,5 1,2 0,2 3,1
H 0,2 1,5 0,0 3,3
I 0,4 2,2 0,1 2,3
J 0,4 3,5 0,1 1,0
K 0,5 4,5 0,0 0,0
L 0,8 3,8 0,1 0,3
M 0,1 2,0 0,1 2,8
N 0,0 4,9 0,1 0,0
O 0,1 4,8 0,1 0,0
P 0,2 0,4 0,1 4,3
Q 0,2 0,3 0,1 4,4
R 0,3 0,4 0,2 4,1
S 0,2 0,1 0,0 4,7
T 0,5 0,5 0,4 3,6
94 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5.2.13 ESPECTROMETRIA
ATMICA
5.2.13.1 ESPECTROMETRIA DE
ABSORO ATMICA
A espectrometria de absoro atmica utilizada para a
determinao de diversos elementos da tabela peridica e
consiste, basicamente, de quatro tcnicas: absoro atmica
com chama, gerao de hidretos, gerao de vapor frio e
forno de grafte. As tcnicas que utilizam chama e forno
de grafte como atomizadores permitem a determinao de
cerca de 70 elementos sendo a maioria metais. A tcnica
de gerao de hidretos permite a determinao de arsnio,
antimnio, selnio, bismuto, telrio, chumbo, ndio,
estanho, germnio e tlio; j a gerao de vapor frio
utilizada, basicamente, para a determinao de mercrio.
Para a determinao da concentrao do analito por
absoro atmica, a radiao de uma fonte de comprimento
de onda especfco de acordo com o elemento analisado
incide sob o vapor atmico contendo tomos livres desse
elemento no estado fundamental. A atenuao da radiao
proporcional concentrao do analito segundo a lei de
Lambert-Beer.
A instrumentao para absoro atmica consiste,
basicamente, de fonte de radiao, atomizador,
monocromador, detector e sistema de processamento de
dados. Como fontes de luz utilizam-se lmpadas de ctodo
oco e lmpadas de descarga sem eletrodo que emitem
radiao intensa de mesmo comprimento de onda que a
absorvida pelo elemento a ser determinado. O atomizador
pode ser constitudo de uma chama ou um forno de
grafte. O monocromador responsvel pela separao
do comprimento de onda desejado. A radiao incide no
monocromador por uma fenda estreita; em seguida,
separada em seus diferentes comprimentos de onda em
uma rede de difrao e, posteriormente, direcionada ao
detector. O detector, geralmente, um fotomultiplicador,
que transforma a energia luminosa em corrente eltrica, a
qual amplifcada e, posteriormente, interpretada por um
sistema de leitura.
PROCEDIMENTO
Para operar os espectrmetros de absoro atmica,
recomenda-se seguir as instrues do fabricante. As
determinaes so feitas por comparao com solues de
referncia contendo concentraes conhecidas do analito.
As determinaes podem ser efetuadas pelo Mtodo de
calibrao direta (Mtodo I) ou pelo Mtodo de adio
padro (Mtodo II). Recomenda-se o Mtodo I, salvo
quando especifcado.
Mtodo de calibrao direta (Mtodo I): preparar no
mnimo quatro solues de referncia do elemento a
ser determinado utilizando a faixa de concentrao
recomendada pelo fabricante do equipamento para o
analito. Todos os reagentes empregados no preparo da
amostra devem ser igualmente includos, nas mesmas
concentraes, no preparo das solues de referncia. Aps
a calibrao do equipamento com solvente, introduzir no
atomizador trs vezes cada uma das solues de referncia
e, aps a leitura, registrar o resultado. Lavar o sistema
de introduo da amostra com gua aps cada operao.
Traar a curva analtica para a mdia das absorvncias das
trs leituras para cada soluo referncia com a respectiva
concentrao. Preparar a amostra conforme indicado na
monografa ajustando sua concentrao para que essa situe-
se na faixa de concentrao das solues de referncia para
o analito. Introduzir a amostra no atomizador, registrar a
leitura e lavar o sistema de introduo da amostra com
gua. Repetir essa sequncia duas vezes. Determinar a
concentrao do elemento pela curva analtica utilizando a
mdia das trs leituras.
Mtodo de adio padro (Mtodo II): adicionar a, no
mnimo, quatro bales volumtricos volumes iguais
da soluo da substncia a ser determinada preparada
conforme indicado na monografa. Aos bales, exceto
em um, adicionar volumes determinados da soluo de
referncia especifcada de modo a obter uma srie de
solues contendo quantidades crescentes do analito.
Completar o volume de cada balo com gua. Aps calibrar
o espectrmetro com gua, registrar trs vezes as leituras
de cada soluo. Traar a curva analtica para a mdia das
absorvncias das trs leituras para cada soluo versus a
respectiva quantidade do analito adicionada soluo.
Registrar a quantidade do analito em mdulo na amostra
por extrapolao da curva analtica no eixo das abcissas.
5.2.13.1.1 Espectrometria de absoro atmica
com chama
O sistema consiste de uma cmara de pr-mistura na qual
o combustvel e o oxidante so misturados e do queimador
que recebe a mistura combustvel-oxidante. A soluo
introduzida atravs de um nebulizador pneumtico, no qual
gerado um fno aerossol que conduzido at a chama. A
quantidade de energia que pode ser fornecida pela chama
para a dissociao e atomizao da amostra proporcional
temperatura. Se uma chama de baixa temperatura
utilizada, a soluo pode no ser convertida em tomos
neutros. Por outro lado, se uma chama com temperatura
muito elevada for empregada poder ocorrer a formao de
grande quantidade de ons que no absorvem radiao da
fonte. Atravs da modifcao da proporo de oxidante e
combustvel utilizados para cada tipo de chama, possvel
alterar signifcativamente sua temperatura. As chamas mais
popularmente utilizadas so as produzidas por ar-acetileno
(2100 - 2400

C) e acetileno-xido nitroso (2650 - 2850
C). A mistura ar-acetileno utilizada para elementos com
temperaturas de atomizao inferiores como Na, K, Mg,
Cd, Zn, Cu, Mn, Co, etc. A chama gerada por acetileno-
xido nitroso aplicada a elementos refratrios como Al,
V, Ti, Si, U, entre outros.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 95 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
INTERFERNCIAS
Interferncias fsicas: a utilizao da preparao amostra
com propriedades fsicas como viscosidade e tenso
superfcial diferentes da preparao padro pode resultar
em diferenas em relao aspirao e nebulizao
levando a leituras incorretas. Deve-se sempre que possvel
utilizar as preparaes com as mesmas propriedades fsicas
e constituintes de matriz.
Interferncia de ionizao: ocorre, normalmente, para
elementos alcalinos e alcalinos terrosos que so facilmente
ionizveis. Quanto maior o grau de ionizao menor a
absorvncia. Para minimizar interferncias de ionizao,
possvel utilizar chamas com temperaturas mais baixas
ou usar supressores de ionizao que so elementos
como o csio que se ionizam mais facilmente que o
analito aumentando, assim, o nmero de tomos no estado
fundamental.
Interferncias qumicas: a formao de compostos
termicamente estveis na chama como os xidos de alguns
elementos (Ca, Ti, Cr, V, Al, etc) reduz a populao de
tomos no estado fundamental. Isso pode ser resolvido
pelo aumento da temperatura da chama o que resulta na
dissociao desses compostos. Outra possibilidade a
utilizao de um agente supressor ou libertador que
possui maior afnidade pelo oxignio em relao ao analito
evitando a formao dos xidos. A soluo contendo cloreto
de csio e cloreto de lantnio, Soluo de Schinkel, a
mais comumente empregada.
Interferncias espectrais: ocorrem por meio da absoro
ou espalhamento da radiao selecionada para o analito.
As interferncias espectrais causadas por tomos so
pouco comuns e podem ser resolvidas alterando a linha
espectral utilizada. As interferncias causadas por espcies
moleculares so mais graves mas, normalmente, so
contornadas atravs da correo de fundo.
5.2.13.1.2 Espectrometria de absoro atmica
com gerao de hidretos
A espectrometria de absoro atmica com gerao de
hidretos uma tcnica utilizada para a determinao
de elementos formadores de hidretos volteis mais
comumente para As, Se, Sb, Bi, Ge, Sn, Pb e Te. O processo
constitudo de trs etapas principais: gerao, transporte
e atomizao dos hidretos. O sistema pode ser construdo
em batelada ou em fuxo. A gerao dos hidretos consiste
da reao do analito, normalmente em meio cido, com um
redutor (NaBH
4
). O transporte dos hidretos do frasco de
reao at a cela de quartzo feito atravs de um gs inerte
de arraste tal como argnio ou nitrognio. Para elementos
que absorvem em comprimento de onda inferior a 200 nm,
antes da etapa de gerao dos hidretos, deve-se efetuar uma
purga para remoo dos gases atmosfricos a fm de evitar
que esses gases absorvam a radiao da fonte. A atomizao
feita em uma cela de quartzo aquecida eletricamente ou
com um queimador tpico de sistemas de atomizao com
chama; a temperatura interna da cela de 850 a 1000
o
C.
O sinal obtido, normalmente, do tipo transiente; cerca de
20 segundos so necessrios para total integrao do sinal
para quase todos os elementos.
INTERFERNCIAS
Infuncia do Estado de Oxidao: os analitos possuem,
normalmente, mais de um estado de oxidao. Arsnio e
antimnio, por exemplo, possuem estados de oxidao III
e V e selnio e telrio possuem estados de oxidao IV

e
VI, respectivamente. Os estados de oxidao superiores,
em geral, so inertes para a converso a hidretos volteis;
necessria, portanto, a pr-reduo antes da determinao
nesses casos.
Elementos Formadores de Hidretos: interferncias mtuas
podem ocorrer entre os elementos formadores de hidretos,
como por exemplo, entre arsnio e selnio. Nesses casos,
a cintica de volatilizao e atomizao decisiva no
processo.
Elementos de Transio: alguns ons metlicos como
Cu
2+
e Ni
2+
, se presentes em elevadas concentraes, so
reduzidos formando precipitados que podem adsorver os
hidretos volteis.
5.2.13.1.3 Espectrometria de absoro atmica
com gerao de vapor frio
A espectrometria de absoro atmica com gerao de
vapor frio utilizada para a determinao de mercrio. O
equipamento e os reagentes so os mesmos utilizados no
sistema de gerao de hidretos, porm a cela de quartzo
no precisa ser aquecida, pois o mercrio reduzido a
mercrio metlico que voltil a temperatura ambiente.
No entanto, vapor dgua pode ser transportado pelo gs de
arraste e interferir na determinao. Para solucionar esse
problema, utiliza-se uma lmpada de infravermelho para
aquecer a cela de quartzo, prevenindo a condensao de
vapor dgua. Nesse caso, normalmente no necessrio
efetuar a purga, pois o comprimento de onda utilizado para
a determinao de Hg 253,7 nm no qual rara a absoro
de radiao por gases da atmosfera.
5.2.13.1.4 Espectrometria de absoro atmica
com forno de grafte
A espectrometria de absoro atmica com forno de grafte
uma tcnica abrangente que possui elevada sensibilidade.
O forno consiste de um tubo de grafte de 3 a 5 cm de
comprimento e de 3 a 8 mm de dimetro revestido com
grafte piroltico. A quantidade de amostra injetada no forno
varia de 5 L a 50 L e geralmente introduzida por um
sistema automatizado. O forno aquecido eletricamente
atravs da passagem de corrente eltrica de modo
longitudinal ou transversal. Fluxos de gases inertes como
argnio so mantidos externamente e internamente para
evitar a combusto do forno. Alm disso, o fuxo interno
expulsa o ar atmosfrico do forno e tambm os vapores
gerados durante as etapas de secagem e pirlise. Um forno
96 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
de grafte apresenta durabilidade de, aproximadamente,
300 ciclos dependendo do modelo.
A anlise com o forno de grafte pode ser dividida nas
seguintes etapas: secagem da amostra, pirlise, atomizao
e limpeza. A passagem de uma etapa para outra
marcada pelo o aumento da temperatura, portanto um
programa especial de aquecimento deve ser planejado.
Primeiramente realizada a secagem da amostra; nessa
etapa os solventes e cidos residuais so evaporados.
Aps a secagem, a temperatura elevada para remoo
da matriz (etapa de pirlise). Em seguida, o aumento da
temperatura leva atomizao do analito para posterior
quantifcao. Finalmente realizada a limpeza do forno
em alta temperatura (p. ex. 2600 C) durante poucos
segundos. A temperatura e a durao de cada etapa de
aquecimento podem ser controladas; isso essencial para
o desenvolvimento de metodologias analticas.
Curvas de atomizao e pirlise so usadas para otimizao
das temperaturas para tais processos. A curva de pirlise
permite determinar a temperatura mxima em que no
ocorre perda do analito. A curva de atomizao permite
determinar a temperatura mnima de atomizao do analito
com adequada sensibilidade. Recomenda-se que as curvas
de pirlise e atomizao sejam feitas sempre que uma
amostra desconhecida for analisada.
O processo de atomizao em um forno de grafte
complexo e depende de vrios fatores como o material
do forno e da plataforma, a atmosfera dentro do tubo, a
velocidade de aquecimento, a temperatura e a natureza
das substncias. Para a obteno de melhores resultados
recomenda-se o uso da plataforma de LVov no interior do
tubo e aquecimento transversal. O sinal obtido do tipo
transiente; so necessrios, no mximo, 12 segundos para
a integrao do sinal.
INTERFERNCIAS
Interferncias espectrais: interferncias causadas por
sobreposies de linhas entre tomos so pouco comuns.
A atenuao do feixe de radiao por espcies geradas
durante o processo de atomizao decorrentes da matriz
so mais frequentes. Para solucionar tal problema deve-se
eliminar efcientemente a matriz. O uso de um modifcador
de matriz e de um corretor de fundo so essenciais para a
confabilidade dos resultados.
Formao de substncias volteis: em amostras com
elevados teores de halognios (especialmente Cl) existe
a possibilidade de formao de substncias volteis do
analito que podero ser perdidas em temperaturas baixas
ocasionando em erro na anlise. Nesse caso, o uso de
um modifcador qumico capaz de formar complexos
termicamente estveis com o analito minimiza a formao
de substncias volteis. Alm disso, quando o modifcador
qumico combinado com a plataforma de Lvov, os
efeitos de interferncia de matriz so bastante reduzidos.
importante salientar que um determinado modifcador
qumico pode ser muito efcaz para alguns elementos,
porm inefciente para outros.
5.2.13.2 ESPECTROMETRIA DE EMISSO
ATMICA
Espectrometria de emisso atmica o mtodo que permite
determinar a concentrao de um elemento em uma amostra
pela medida da intensidade de uma das linhas de emisso
do elemento. A determinao feita no comprimento de
onda correspondente a essa linha de emisso. As fontes
de emisso em espectrometria de emisso atmica devem
possuir energia para gerar atmos neutros e para excitar os
elementos de interesse.
5.2.13.2.1 Fotometria de chama
A fotometria de chama uma tcnica que apresenta boa
sensibilidade sendo utilizada, principalmente, para a
determinao de metais alcalinos. O equipamento consiste
de uma chama normalmente produzida por mistura ar-gs
liquefeito de petrleo, um monocromador e um detector.
O solvente de escolha para o preparo da soluo amostra e
solues de referncia deve ser, preferencialmente, aquoso.
Os solventes orgnicos podem ser usados, desde que no
interfra na estabilidade da chama.
INTERFERNCIAS
As interferncias que ocorrem na fotometria de chama so
muito semelhantes s observadas na Espectrometria de
absoro atmica (5.2.13.1). No entanto, podem ocorrer
interferncias espectrais causadas pela emisso de bandas
de rotao-vibrao molecular, tais como OH (310-330
nm), NH (em torno de 340 nm), N
2
+
(em torno de 390 nm),
C
2
(em torno de 450 nm), etc.
SOLVENTES
O solvente deve ser selecionado com cautela. Se houver
diferena signifcativa de tenso superfcial ou viscosidade
entre amostra e soluo de referncia ocorrero variaes
nas taxas de aspirao e nebulizao e, em consequncia,
diferenas signifcativas nos sinais produzidos. Assim,
o solvente empregado no preparo das amostra e das
referncias deve ser o mais similar possvel.
PROCEDIMENTO
O equipamento deve ser operado de acordo com as
instrues do fabricante e no comprimento de onda
especifcado. Ajustar o zero com o solvente. Em seguida,
injetar a soluo de referncia mais concentrada e ajustar
a sensibilidade desejada. As determinaes so feitas
por comparao com solues de referncia contendo
concentraes conhecidas do analito. As determinaes
podem ser realizadas pelo Mtodo de calibrao direta
(Mtodo I) ou pelo Mtodo de adio padro (Mtodo II)
conforme descrito em Espectrometria de absoro atmica
(5.2.13.1).
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 97 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
5.2.13.2.2 Espectrometria de emisso tica com
plasma indutivamente acoplado
A espectrometria de emisso tica com plasma
indutivamente acoplado uma tcnica bastante abrangente
que possui elevada sensibilidade e com caracterstica
multielementar. De maneira geral, na espectrometria com
plasma indutivamente acoplado, o aerossol da amostra
introduzido em uma fonte de plasma, onde evaporado
e dissociado em tomos e ons livres que so excitados.
O plasma consiste de um gs parcialmente ionizado de
elevada temperatura (6000 a 10 000 C), eletricamente
neutro e com boa condutividade eltrica. Devido
alta temperatura do plasma gerada uma radiao
policromtica decorrente da emisso de vrios elementos e
ons presentes na amostra. Portanto, necessrio o uso de
um monocromador com elevada capacidade de resoluo
para separao dos comprimentos de onda caractersticos
para cada elemento. A deteco da radiao gerada por
comprimentos de onda especfcos pode ser aplicada para
anlise qualitativa e as intensidades destes comprimentos
de onda podem ser usadas para anlise quantitativa.
INSTRUMENTAO
Os instrumentos utilizados na espectrometria com plasma
indutivamente acoplado consistem basicamente do gerador
e do processador de sinal. O gerador formado por fonte
plasma e sistema de introduo de amostra (bomba
propulsora e nebulizador). O processador de sinal
compreendido por sistemas pticos e eletrnicos e unidade
de aquisio de dados.
Fontes de plasma: a mais comum o plasma indutivamente
acoplado. O plasma gerado em uma tocha que consiste
em trs tubos concntricos geralmente de quartzo.
Fluxos de gs geralmente argnio so mantidos nos trs
compartimentos formados pelos tubos concntricos. No
compartimento externo, o gs utilizado para a formao
do plasma. O compartimento intermedirio carreia o gs
auxiliar que responsvel por manter o plasma afastado
do compartimento interno e prevenir deposio de carbono
e sais provenientes da amostra nesse compartimento. O
fuxo de argnio interno carreia o aerossol da amostra
para o centro do plasma. Quando uma determinada
potncia (entre 700 e 1500 W) aplicada pelo gerador
de radiofrequncia na bobina de induo uma corrente
alternada gerada na bobina em uma frequncia de 27
ou 40 MHz. Essa oscilao na bobina resulta em um
intenso campo eletromagntico na extremidade da tocha.
Com o argnio fuindo pela tocha uma descarga eltrica
de alta voltagem aplicada no gs gerando eltrons e ons
argnio. Os eltrons so acelerados pelo campo magntico
e colidem com mais tomos de argnio gerando mais ons
e eltrons. A ionizao do argnio continua em uma reao
em cadeia gerando o plasma que consiste de tomos de
argnio, eltrons e ons argnio.
Sistema de deteco para espectrometria de Emisso
tica com Plasma Indutivamente Acoplado: todos os
elementos presentes no plasma emitem radiao ao
mesmo tempo, logo necessrio o uso de um sistema
de deteco multielementar. Os espectrmetros podem
ser simultneos ou sequenciais. Para a espectrometria de
emisso tica com plasma indutivamente acoplado, tanto
os espectrmetros sequenciais quanto os simultneos
so amplamente utilizados. A confgurao mais comum
para espectrmetros sequenciais a Czerny-Turner. J os
espectrmetros simultneos so encontrados, basicamente,
com as confguraes Echelle e Paschen-Runge.
INTERFERNCIAS
A sobreposio das linhas de emisso uma das principais
interferncias para espectrometria de emisso ptica com
plasma indutivamente acoplado. Este tipo de interferncia
pode ser eliminado com o uso de espectrmetros de alta
resoluo e procedimentos de correo de fundo. Muitas
interferncias espectrais so observadas na faixa de 200 a
400 nm, na qual mais de 200 000 linhas de emisso atmica
e bandas moleculares so observadas.
As interferncias fsicas so semelhantes aquelas em
Espectrometria de absoro atmica com chama
(5.2.13.1.1).
SOLVENTES
O solvente ideal para a espectrometria de emisso tica com
plasma indutivamente acoplado interfere o menos possvel
nos processos de emisso. O tipo de solvente deve ser
selecionado com cautela. Se houver diferena signifcativa
de tenso superfcial ou viscosidade entre amostra e
soluo de referncia, ocorrero variaes nas velocidades
de aspirao e nebulizao e, em consequncia, diferenas
signifcativas nos sinais produzidos. Assim, os solventes
empregados no preparo das amostras e das solues de
referncia devem ser o mais similar possvel.
PROCEDIMENTO
O equipamento deve ser operado de acordo com as
instrues do fabricante e no comprimento de onda
adequado para cada elemento. As determinaes so feitas
por comparao com solues de referncia contendo
concentraes conhecidas dos analitos. As determinaes
podem ser feitas pelo Mtodo de calibrao direta
(Mtodo I) ou pelo Mtodo de adio padro (Mtodo II)
conforme descrito em Espectrometria de absoro atmica
(5.2.13.1).
5.2.13.3 ESPECTROMETRIA DE MASSAS
COM PLASMA INDUTIVAMENTE
ACOPLADO
A espectrometria de massas com plasma indutivamente
acoplado utilizada para a determinao de diversos
elementos com elevada sensibilidade, na faixa de ppt, e
com capacidade multielementar.
98 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
INSTRUMENTAO
Assim como na espectrometria de emisso ptica
com plasma indutivamente acoplado (5.2.13.2.2), a
espectrometria de massas com plasma indutivamente
acoplado consiste de duas unidades principais: o gerador
de sinal e o processador de sinal. A diferena fundamental
que na espectrometria de massas com plasma indutivamente
acoplado o processador de sinal compreendido por
uma interface, um separador de massa e uma unidade
de aquisio de dados. A interface responsvel pela
amostragem e o transporte efciente dos ons do plasma a
presso atmosfrica (760 Torr) at o separador de massa
(10
-6
Torr) feita pela reduo de presso atravs da
aplicao de vcuo. A interface consiste em dois cones
metlicos com orifcios muito pequenos (da ordem de 1
mm de dimetro). Aps a gerao dos ons no plasma, eles
passam pelo primeiro cone (cone de amostragem) e, logo
aps, pelo segundo cone (skimmer). Aps a passagem dos
ons pelo skimmer, devido expanso, h a necessidade de
que os mesmos sejam focados para garantir sua chegada
at o analisador de massas. Os ons so focados pela ao
de uma lente inica ou conjunto de lentes inicas, que
consiste de um cilindro (ou uma srie de cilindros ou placas
perfuradas) metlico oco submetido a uma diferena de
potencial (normalmente na faixa de 2 a 15 V de corrente
contnua). Grande parte dos espectrmetros de massas
com plasma indutivamente acoplado comercializados
atualmente utiliza o quadrupolo como separador de
massas. O quadrupolo consiste em quatro barras metlicas
cilndricas ou hiperblicas de mesmo comprimento e
dimetro. Pela aplicao combinada de corrente contnua
(cc) e de corrente alternada (ca) aos eletrodos (quadrupolo),
somente os ons com uma determinada razo massa/carga
(m/z) so conduzidos atravs do quadrupolo. Os demais
ons colidem com os eletrodos ou so removidos do interior
do quadrupolo. Desta forma, os ons so sequencialmente
separados pelo quadrupolo. Vrios tipos de detectores
podem ser utilizados para coletar os ons na sada do
quadrupolo e converter em sinal eltrico, mas os mais
populares so os de dinodos discretos, copo de Faraday
(Faraday Cup) e Chaneltron.
INTERFERNCIAS
Assim como em outras tcnicas espectromtricas, a
espectrometria de massas com plasma indutivamente
acoplado possui interferncias espectrais e no espectrais.
As interferncias espectrais so dependentes da espcie
presente e podem ser divididas em quatro tipos principais:
poliatmicas, isobricas, ons de carga dupla e ons
de xidos refratrios. Este tipo de interferncia pode
ser corrigida pela simulao da composio da matriz,
pela escolha de outro istopo (quando possvel) ou pelo
uso de cela de reao e/ou coliso. Em alguns casos, as
interferncias espectrais podem ser corrigidas com o uso
de um programa de computador apropriado.
As interferncias no espectrais podem surgir por vrios
motivos: deposio sobre os cones da interface, presena de
outro elemento facilmente ionizvel, efeito espao carga,
entre outros. No entanto, a maioria das interferncias no-
espectrais pode ser corrigida pelo uso de padro interno.
Neste caso, o padro interno deve possuir razo massa/
carga e potencial de ionizao semelhante ao analito.
Escndio e Rdio, por exemplo, so amplamente utilizados
como padro interno para elementos com baixa e alta razo
massa/carga, respectivamente.
SOLVENTES
O solvente ideal para a espectrometria de massas com
plasma indutivamente acoplado deve interferir o menos
possvel nos processos de ionizao. O tipo de solvente
deve ser selecionado com cautela. Se houver diferena
signifcativa de tenso superfcial ou viscosidade entre
amostra e soluo de referncia, ocorrero variaes nas
velocidades de aspirao e nebulizao e, em consequncia,
diferenas signifcativas nos sinais produzidos. Assim,
os solventes empregados no preparo das amostras e das
solues de referncia devem ser o mais similar possvel.
PROCEDIMENTO
O equipamento deve ser operado de acordo com as
instrues do fabricante e com o istopo adequado para
cada elemento. Ajustar o zero com o solvente injetado no
equipamento. As determinaes so feitas por comparao
com solues de referncia, contendo concentraes
conhecidas dos analitos. As determinaes podem ser
feitas pelo Mtodo de Calibrao Direta (Mtodo I), pelo
Mtodo de Adio Padro (Mtodo II) ou pelo Mtodo de
Padro Interno (Mtodo III).
Mtodo de Calibrao Direta (Mtodo I). Preparar
ao menos quatro solues de referncia dos analitos,
abrangendo a faixa de concentraes recomendada pelo
fabricante do equipamento para os elementos em anlise.
Todos os reagentes empregados no preparo da soluo
amostra devem ser igualmente includos, nas mesmas
concentraes, s solues de referncia. Aps a calibrao
do equipamento com solvente, injetar, trs vezes, cada
uma das solues de referncia e, aps a estabilizao
da leitura, registrar o resultado, lavando o sistema com
o solvente aps cada injeo. Traar a curva analtica,
plotando a mdia das leituras de cada grupo de trs, com a
respectiva concentrao. Preparar a soluo da substncia
a ser determinada conforme indicado na monografa,
ajustando sua concentrao para que esta fque dentro
da faixa das concentraes das solues de referncia.
Introduzir a amostra no equipamento, registrar a leitura e
lavar o sistema com solvente. Repetir esta sequncia duas
vezes e, adotando a mdia de trs medies, determinar a
concentrao do analito pela curva analtica.
Mtodo de Adio Padro (Mtodo II). Adicionar a cada
um de, ao menos, quatro bales volumtricos similares,
volumes iguais de soluo da substncia a ser determinada,
preparada conforme indicado na monografa. Juntar a
todos os bales, com exceo de um, volumes medidos da
soluo de referncia especifcada, de modo a obter uma
srie de solues contendo quantidades crescentes dos
analitos. Diluir convenientemente o volume de cada balo
com gua. Aps calibrar o espectrmetro com gua, como
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 99 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
indicado acima, registrar trs vezes as leituras de cada
soluo.
Mtodo de Padro Interno (Mtodo III). Preparar ao menos
quatro solues de referncia dos analitos, abrangendo
a faixa de concentraes recomendada pelo fabricante
do equipamento para os analitos. Todos os reagentes
empregados no preparo da soluo amostra devem ser
igualmente includos, nas mesmas concentraes, s
solues de referncia. O padro interno deve ser adicionado
em todas as solues (solvente, solues de referncia e
amostras), com concentrao fxa e na mesma ordem de
grandeza dos analitos. Aps a calibrao do equipamento
com solvente, injetar, trs vezes, cada uma das solues
de referncia e, aps a estabilizao da leitura, registrar
o resultado, lavando o sistema com o solvente aps cada
injeo. Traar a curva analtica, plotando um grfco da
razo entre a mdia das intensidades das leituras de cada
grupo de trs e a intensidade do padro interno, com a
respectiva concentrao. Preparar a soluo da substncia
a ser determinada conforme indicado na monografa,
ajustando sua concentrao para que esta fque dentro
da faixa das concentraes das solues de referncia.
Injetar a amostra no equipamento, registrar a leitura e
lavar o sistema com solvente. Repetir esta sequncia duas
vezes e, adotando a mdia de trs medies, determinar a
concentrao do analito pela curva analtica.
5.2.14 ESPECTROFOTOMETRIA
NO ULTRAVIOLETA,VISVEL E
INFRAVERMELHO
As tcnicas espectrofotomtricas esto fundamentadas
na absoro da energia eletromagntica por molculas
que depende tanto da concentrao quanto da estrutura
das mesmas. De acordo com o intervalo de frequncia da
energia eletromagntica aplicada, a espectrofotometria
de absoro pode ser dividida em ultravioleta, visvel e
infravermelho, podendo ser utilizada como tcnica de
identifcao e quantifcao de substncias.
RADIAO ELETROMAGNTICA
A radiao eletromagntica uma forma de energia que se
propaga como ondas e, geralmente, pode ser subdividida
em regies de comprimento de onda caracterstico.
Ainda, pode ser considerada, tambm, como um fuxo
de partculas denominadas ftons (ou quanta). Cada
fton contm determinada energia cuja magnitude
proporcional frequncia e inversamente proporcional
ao comprimento de onda. O comprimento de onda () ,
geralmente, especifcado em nanmetros, nm (10
-9
m), e
em alguns casos em micrmetros, um (10
-6
m). No caso
do infravermelho a radiao eletromagntica pode ser,
tambm, descrita em termos de nmero de onda e expressa
em cm
-1
. As faixas de comprimento de onda de energia
eletromagntica de interesse para a espectrofotometria so
as descritas na Tabela 1.
Tabela 1 Faixas de comprimento de onda
de interesse para a espectrofotometria.
Regio
Faixa de comprimento de
onda
Ultravioleta (UV) 190 380 nm
Visvel (VIS) 380 780 nm
Infravermelho prximo (NIR) 780 2500 nm (12800 4000 cm
-1
)
Infravermelho mdio (MIR) 4 25 um (2500 400 cm
-1
)
Infravermelho distante 25 300 um (400 33 cm
-1
)
INTERAO ENERGIA-MATRIA
A energia total da molcula envolve a energia derivada
da vibrao (energia vibracional, devida ao movimento
relativo de tomos ou grupos de tomos constituintes da
molcula); da rotao (energia rotacional, devida rotao
da molcula em torno de um eixo) e, normalmente, da
energia eletrnica, gerada pela confgurao de eltrons na
molcula.
As molculas ao absorverem energia sofrem uma transio
para um estado de maior energia ou estado excitado. A
passagem ao estado excitado no de natureza contnua
realizando-se, geralmente, em etapas chamadas de
transies. Na regio do ultravioleta e visvel as transies
so eletrnicas e ocorrem em pores da molcula
chamadas de cromforos. Estas transies compreendem
promoes de eltrons de orbitais moleculares ocupados,
geralmente, o e ligantes e no ligantes, para os orbitais
de energia imediatamente superiores, antiligantes * e o*.
Na regio do infravermelho mdio (MIR) ocorrem
somente transies de energia vibracional por ser a
radiao nesta regio insufcientemente energtica para
promover transies eletrnicas. As vibraes induzidas
por radiao infravermelha compreendem estiramentos e
tensionamentos de ligaes inter-atmicas e modifcaes
de ngulos de ligaes.
Os espectros no infravermelho prximo (NIR) so
caracterizados pela absoro da radiao por sobretons
e combinao de modos vibracionais fundamentais de
ligaes como C-H, N-H, O-H e S-H. As bandas de um
espectro NIR, so, geralmente, mais fracas que as bandas
do espectro MIR. Informaes qumicas e fsicas, de
caracterstica qualitativa e quantitativa, podem ser obtidas
a partir do espectro NIR. Porm, a comparao direta entre
o espectro da amostra e da substncia qumica de referncia
no recomendada.
A espectrofotometria NIR amplamente utilizada
para anlises fsicas e qumicas, como por exemplo:
quantifcao e identifcao de princpios ativos
e excipientes, identifcao de formas cristalinas e
polimorfas, determinao do tamanho de partcula, padro
de desintegrao e controle de processo.
MODOS DE AQUISIO DOS ESPECTROS
Os espectros podem ser obtidos utilizando-se diferentes
modos de aquisio. No caso da espectrofotometria
UV/VIS o principal modo a transmisso. No caso da
100 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
espectrofotometria NIR e MIR os espectros podem ser
adquiridos utilizando o modo transmisso e refexo. Esta
ltima subdivide-se em refexo difusa e refexo total
atenuada. H ainda a possibilidade da combinao dos
modos de transmisso e refexo, chamada de transrefexo.
Transmisso: a medida da diminuio da intensidade da
radiao em determinados comprimentos de onda quando
a radiao passa atravs da amostra. A amostra disposta
no feixe ptico entre a fonte e o detector. A transmisso (T)
pode ser calculada pela frmula abaixo:
0
I
I
T =
I
0
= intensidade da radiao incidente
I = intensidade da radiao transmitida.
Os espectros em transmisso podem ser convertidos para
absorvncia:
Refexo difusa: a medida da razo da intensidade da luz
refetida pela amostra e a luz refetida por uma superfcie
refetiva de referncia. A radiao no absorvida refetida
em direo ao detector.
Refexo total atenuada: a radiao infravermelha propaga-
se no interior de um elemento de refexo interna (alto
ndice de refrao) atravs de refexes nas paredes deste
elemento. A amostra colocada em contato com a parede
deste elemento de refexo onde interage com a radiao
infravermelha (onda evanescente).
Transrefexo: esse modo a combinao dos modos de
transmisso e refexo. Na medida por transrefexo um
espelho ou uma superfcie refetiva usado para refetir
a radiao transmitida atravs da amostra, incidindo uma
segunda vez na mesma para, ento, dobrar o caminho
ptico. A radiao no absorvida e refetida em direo ao
detector.
INSTRUMENTAO UTILIZADA NO ULTRAVIOLE-
TA (UV) E VISVEL (VIS)
Espectrofotmetros utilizados na regio do ultravioleta
e visvel so dotados, fundamentalmente, de fonte de
radiao; seletor de comprimento de onda; celas de
absoro (cubetas), para insero de solues de amostras
no feixe de luz monocromtica; detector de radiao e uma
unidade de leitura e de processamento de sinal.
As lmpadas mais empregadas como fonte de radiao na
espectrofotometria na regio do ultravioleta e visvel so de
deutrio e tungstnio, que fornecem radiao compreendida
entre 160 a 380 nm e 320 a 2500 nm, respectivamente. Os
instrumentos para as regies do UV/VIS so, geralmente,
equipados com um ou mais dispositivos para restringir
a radiao que est sendo medida dentro de uma banda
estreita que absorvida ou emitida pelo analito. A maioria
dos equipamentos utiliza um monocromador ou fltro
para isolar a banda de comprimento de onda desejada de
forma que somente a banda de interesse seja detectada e
medida. Os monocromadores, geralmente, possuem uma
rede de difrao, enquanto que os fltros podem ser de
interferncia ou de absoro. Os fotmetros ou colormetros
so instrumentos mais simples que utilizam um fltro para
seleo do comprimento de onda e so utilizados, geralmente,
na regio do visvel. Os espectrofotmetros, por sua vez,
utilizam monocromadores para seleo do comprimento de
onda e so utilizados nas regies do UV/VIS.
O compartimentos utilizados para receber a amostra so
denominados de cubetas que devem apresentar janelas que
sejam transparentes na regio espectral de interesse. Para a
regio do UV so necessrias cubetas de quartzo enquanto
que, para a regio do VIS, pode-se empregar cubetas de
vidro ou acrlico.
Os principais tipos de detectores so os fototubos, os
arranjos de fotodiodos e os dispositivos de transferncia
de carga. Os fototubos so os detectores mais simples e
sua resposta est baseada no efeito fotoeltrico. O detector
de arranjo de diodos permite que todos os comprimentos
de onda possam ser monitorados simultaneamente. Os
dispositivos de transferncia de carga tm sido empregados
em nmero crescente em instrumentos espectroscpicos.
Os espectrofotmetros podem ser encontrados na
confgurao de feixo nico, feixe duplo e multicanal.
Os instrumentos de feixe duplo apresentam a vantagem
de compensar qualquer futuao na potncia radiante da
fonte, quando comparados com os instrumentos de feixe
simples. J os instrumentos multicanal so mais recentes,
utilizam detectores do tipo arranjo de diodo e dispositivos
de transferncia de carga e permitem a obteno do espectro
total de uma amostra em menos de um segundo. Nestes
instrumentos o sistema dispersivo um espectrgrafo de
rede colocado aps a clula da amostra.
Espectrofotmetros podem dispor de registradores grfcos
que permitem a obteno de espectros de absoro.
Tal recurso importante para fns de caracterizao da
substncia a partir da obteno dos comprimentos de
onda onde se obtm as maiores absorvncias (
mximo
).
Atualmente, a maior parte dos espectrofotmetros
apresenta conexo a um microcomputador e programa
apropriado, que permitem a obteno dos espectros de
absoro das substncias em meio digital.
INSTRUMENTAO UTILIZADA NO INFRAVERME-
LHO MDIO (MIR) E INFRAVERMELHO PRXIMO
(NIR)
Os espectrofotmetros utilizados para aquisio de
espectros no infravermelho mdio e prximo consistem
de uma fonte de luz, monocromador ou interfermetro e
detector, e permitem a obteno de espectros na regio
compreendida entre 750 a 2500 nm (13300 a 400 cm
-1
).
Atualmente, os espectrofotmetros no infravermelho
mdio (4000 a 400 cm
-1
) utilizam o interfermetro ao
invs do monocromador e a radiao policromtica incide
sob a amostra e os espectros so obtidos no domnio da
frequncia com auxlio da transformada de Fourier.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 101 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Clulas de transmisso, acessrios para refexo difusa e
refexo total atenuada so os acessrios mais comuns para
a aquisio dos espectros.
A espectrofotometria no infravermelho prximo (NIR)
uma tcnica que permite a obteno de espectros na regio
compreendida entre 13300 a 4000 cm
-1
(750 a 2500 nm).
Os espectrofotmetros na regio do NIR so constitudos
de fonte de radiao apropriada, monocromador ou
interfermetro e detector. Cubetas convencionais, fbras
pticas, clulas de transmisso e acessrios para refexo
difusa so os acessrios mais comuns para aquisio dos
espectros.
IDENTIFICAO POR ESPECTROFOTOMETRIA
A identifcao de diversas substncias farmacuticas
pode ser feita utilizando as regies ultravioleta, visvel,
infravermelho mdio e infravermelho prximo. De maneira
geral, a espectrofotometria nas regies UV/VIS requer
solues com concentrao na ordem de 10 ug mL
-1
da
substncia enquanto que para o MIR e NIR so necessrias
concentraes na ordem de 100 mg mL
-1
. Apesar de mais
sensvel os espectros obtidos nas regies do UV/VIS
apresentam menor especifcidade quando comparados com
os espectros na regio do MIR. No caso do MIR as medidas
realizadas utilizando os modos de refexo (difusa e total
atenuada) fornecem informao espectral equivalente
quela obtida pelo modo de transmisso. Quando possvel
deve ser feita a comparao do espectro obtido frente ao
espectro da substncia qumica de referncia.
Ultravioleta (UV) e visvel (VIS)
Diversas monografas incluem espectros de absoro no
ultravioleta como prova de identifcao. Nestes casos,
haver especifcao da extenso da varredura, solvente,
concentrao da soluo e espessura da cubeta. Alguns
frmacos requerem o uso de padres de referncia. As
leituras de padro e amostra so efetuadas simultaneamente
e em condies idnticas quanto a comprimento de onda,
tamanho de cubeta, etc.
Para a caracterizao utilizando a espectrofotometria UV/
VIS, o frmaco dissolvido utilizando solvente apropriado.
Muitos solventes so apropriados incluindo gua, alcois,
teres e solues cidas e alcalinas diludas. Deve-se
observar para que os solventes no absorvam na regio
espectral que est sendo utilizada.
Infravermelho mdio (MIR)
A espectrofotometria no MIR um ensaio de identifcao
por excelncia sendo capaz de diferenciar substncias com
diferenas estruturais. Das trs regies do infravermelho
(prximo, mdio e distante) a regio compreendida entre
4000 a 400 cm
-1
(infravermelho mdio) a mais empregada
para fns de identifcao.
Os espectros de transmisso de amostras slidas so
obtidos a partir da sua disperso em leo mineral ou
mediante a preparao de pastilhas de haletos de potssio e
sdio. Disperses da amostra so preparadas triturando-se
cerca de 5 mg da substncia em uma gota de leo mineral
de grau espectroscpico. A pasta obtida espalhada entre
duas janelas de brometo de potssio ou cloreto de sdio.
Para o preparo das pastilhas cerca de 1 mg da amostra
triturada com aproximadamente 300 mg de brometo de
potssio de grau espectroscpico.
Para amostras slidas em p opacas a transmisso da
radiao infravermelha, o espectro pode ser, tambm,
adquirido mediante a utilizao de acessrio para
refexo difusa. Neste acessrio a radiao infravermelha
incide diretamente na amostra em p. Parte da radiao
absorvida e em seguida refetida de forma difusa em
direo ao detector. Neste caso a amostra na forma de p
misturada com brometo de potssio, aproximadamente,
5% (p/p) e disposta no acessrio de refexo difusa.
Por fm, o espectro de amostras slidas em p e pastosas,
pode ser obtido utilizando acessrio para refexo total
atenuada. A amostra na forma de p disposta sob o cristal
de alto ndice de refrao onde entra em contato com a
radiao infravermelha no exigindo preparo prvio da
amostra.
UTILIZAO QUANTITATIVA DA ESPECTROFOTO-
METRIA
Espectrofotometria no UV/VIS
A anlise espectrofotomtrica quantitativa por absoro
tem como princpio a relao direta existente entre a
quantidade de luz absorvida e a concentrao da substncia,
tambm conhecida como lei de Beer.
Quando a concentrao (c) expressa em mol. L
-1
e o
caminho ptico (b) em centmetro, a equao torna-se:
A = c b c
em que
A = absorvncia, logaritmo do inverso da transmitncia (A
= - log T)
c = absortividade molar.
T = transmitncia
Sabendo-se que a transmitncia o quociente entre a
intensidade da radiao transmitida pela soluo (I
0
) e a
intensidade da radiao incidente (I), tem-se:
log
10
(I
0
/I) = A = c b c
A intensidade da absoro da luz ultravioleta por
substncias cromforas , em geral, expressa como
absortividade molar, nas condies de mxima absoro.
Se a massa molar da substncia no for conhecida,
possvel expressar a intensidade de absoro pela equao
da absortividade especfca A (1%, 1 cm):
A (1%, 1 cm) = A / b c
em que A(1%, 1 cm) corresponde a absorvncia da soluo
a 1% (p/v) da substncia quando o caminho ptico 1 cm.
102 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Para evitar possveis desvios na lei de Beer deve-se
procurar trabalhar com solues diludas (da ordem de
0,01 M), evitando associaes entre as molculas, e com
radiaes monocromticas.
Espectrofotometria no Infravermelho prximo
A quantifcao atravs da espectrofotometria no NIR pode
ser realizada utilizando dados obtidos de um mtodo de
referncia ou a partir de um conjunto de calibrao com
amostras de composio conhecida. Os espectros podem ser
obtidos utilizando os modos de transmisso e refexo com
o auxlio de acessrios adequados. Num primeiro momento
os dados espectrais so tratados atravs de transformaes
matemticas com o objetivo de reduzir fontes de variaes
indesejadas antes da etapa de calibrao. O processo de
calibrao consiste na construo de um modelo matemtico
que relaciona a resposta do espectrofotmetro a uma
propriedade da amostra. Existe uma srie de algoritmos
quimiomtricos que podem ser utilizados na calibrao.
Geralmente, estes algoritmos esto disponveis em
softwares e disponibilizados junto com o espectrofotmetro.
Os principais algoritmos de calibrao so: regresso linear
mltipla (do ingls, multiple linear regression - MLR),
mnimos quadrados parciais (do ingls, partial least squares
- PLS) e regresso de componentes principais (do ingls,
principal component regression - PCR).
A validao de uma metodologia que emprega a
espectrofotometria NIR semelhante quela requerida
para qualquer procedimento analtico e, geralmente,
estabelecida a partir de ferramentas quimiomtricas. Os
principais parmetros a serem avaliados so: especifcidade,
linearidade, faixa de trabalho, exatido, preciso e robustez.
A extenso da especifcidade dependente do procedimento
utilizado. A demonstrao da especifcidade dos mtodos
NIR pode ser feita atravs das seguintes formas: (i) os
comprimentos de onda utilizados nos modelos de calibrao
devem corresponder a bandas do analito de interesse; (ii)
para calibrao utilizando PLS os coefcientes devem ser
plotados e as regies de maior coefciente comparadas com
o espectro do analito; (iii) variaes na matriz da amostra
no devem afetar de forma signifcativa a quantifcao do
analito.
A validao da linearidade do mtodo NIR envolve a
demonstrao da resposta linear da tcnica para amostras
distribudas atravs de uma faixa defnida de calibrao.
O coefciente de correlao, r, no uma ferramenta
adequada para verifcao de linearidade, mas a medida
da variao dos dados que adequadamente modelada pela
equao. A melhor maneira de demonstrar a linearidade
dos mtodos NIR atravs da avaliao estatstica dos
valores da inclinao e intercepto obtidos para o conjunto
de validao.
A faixa de trabalho dos valores de referncia do analito do
conjunto de validao defne a faixa de trabalho do mtodo
NIR. Controles devem ser estabelecidos para garantir que
os resultados fora da faixa de trabalho no sejam aceitos. A
validao de um mtodo NIR deve gerar um valor anmalo
quando uma amostra contendo analito fora da faixa de
trabalho for analisada.
A exatido de um mtodo NIR demonstrada pela
correlao dos resultados NIR com os dados da tcnica
de referncia. Alm disso, a exatido pode ser verifcada
a partir da proximidade do erro padro de predio (SEP)
com o erro do mtodo de referncia. O erro do mtodo
de referncia deve ser conhecido com base nos valores
histricos. Diferentes mtodos estatsticos podem ser
utilizados para verifcar diferenas estatsticas entre
os resultados obtidos pelo mtodo NIR e o mtodo de
referncia.
A preciso de um mtodo NIR expressa a concordncia
entre uma srie de medidas obtidas sob condies pr-
determinadas. H dois nveis de preciso que podem ser
considerados: a repetitividade e a preciso intermediria. A
preciso de um mtodo NIR tipicamente expressa como
coefciente de variao.
A robustez do mtodo NIR pode ser verifcada atravs
de mudanas de parmetros do mtodo como: condies
ambientais, temperatura da amostra, caractersticas da
amostra e mudanas instrumentais.
5.2.15 ESPECTROFOTOMETRIA
DE FLUORESCNCIA
Algumas substncias podem ser analisadas com
maior sensibilidade e especifcidade por meio de
mtodos fuorimtricos do que por outras tcnicas
espectrofotomtricas. A espectrofotometria de
fuorescncia, ou espectrofuorimetria, compreende a
medida da fuorescncia emitida quando estas substncias
- ditas fuorescentes - so expostas radiao ultravioleta,
visvel ou outras tambm de natureza eletromagntica.
Tais radiaes promovem a excitao de eltrons da
molcula para nveis energticos mais elevados. Aps
curta permanncia no estado excitado - cerca de 10
-8
a 10
-4

segundos - os eltrons retornam ao estado fundamental por
meio de processo no radioativo, denominado desativao
por coliso, aliado a processo radioativo chamado
luminescncia (fuorescncia ou fosforescncia), ao
contrrio do que ocorre com a maioria das substncias em
que o retorno ao estado menos energtico no compreende
emisso de luz. Na desativao por coliso, a energia se
perde como calor nos choques entre as molculas. No
processo radiante, o excesso de energia reemitido com
intensidade mxima em comprimento de onda maior (em
cerca de 20 a 30 nm) que o da radiao excitatria absorvida,
devido perda energtica que acontece no processo.
Sendo de natureza fuorescente, a radiao emitida pela
substncia cessa quando a fonte de energia retirada e esta
caracterstica a distingue da fosforescncia, que prossegue
por algum tempo aps o trmino da excitao.
A intensidade da luz emitida por uma soluo fuorescente
, em determinadas condies, proporcional
concentrao do soluto e, em consequncia, utilizada para
fns analticos. A medida da intensidade de fuorescncia
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 103 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
no pode ser usada diretamente para a determinao da
concentrao do analito. Por isso, a determinao feita
atravs da comparao da intensidade de fuorescncia
obtida para uma soluo amostra com solues padro,
cujas concentraes so conhecidas. O fundamento
da espectrofuorescncia consiste, pois, em excitar a
substncia com radiao no comprimento de onda de
mxima absoro e medir comparativamente a intensidade
da luz fuorescente emitida frente a um padro.
DEFINIES
Intensidade de fuorescncia: Expresso emprica
da atividade fuorescente, em unidades arbitrrias
proporcionais resposta do detector.
Espectro de excitao de fuorescncia: Representao
grfca do espectro de ativao, apresentando a intensidade
da radiao emitida por substncia ativada (ordenada) e
o comprimento de onda da radiao incidente excitatria
(abcissa).
Espectro de emisso de fuorescncia: Representao
grfca da distribuio espectral da radiao emitida por
substncia ativada, apresentando a intensidade da radiao
emitida como ordenada e o comprimento de onda como
abcissa.
EQUIPAMENTO
A determinao da intensidade de fuorescncia pode ser
efetuada em simples fuormetro de fltro (fuormetro),
em espectrofotmetros de absoro adaptados ou em
espectrofotmetro de fuorescncia (espectrofuormetro).
O fuormetro de fltro compreende fonte de luz, fltro
primrio, cmara de amostra, fltro secundrio e sistema de
deteco. Nos fuormetros deste tipo, o detector encontra-
se disposto a 90
o
em relao luz incidente. Tal disposio
em ngulo reto permite que a luz incidente atravesse a
soluo da amostra sem interferir com o sinal fuorescente
captado pelo detector. Tal mecanismo no impede que
parte da luz difusa atinja o detector devido s propriedades
difusoras inerentes s solues ou em funo da presena
de partculas slidas suspensas. Esta disperso residual
controlada com emprego de fltros. O fltro primrio
seleciona a radiao de comprimento de onda apropriado
excitao da amostra enquanto o fltro secundrio seleciona
a radiao fuorescente de comprimento de onda maior,
bloqueando o acesso da radiao dispersa ao detector.
Em sua maioria, os detectores de fuormetros de fltro so
equipados com vlvulas fotomultiplicadoras, havendo,
contudo, diferenas entre tipos de equipamentos quanto
regio espectral de mxima sensibilidade. Amplifcada
a corrente eltrica gerada no fotomultiplicador, obtm-
se leitura correspondente em instrumento analgico ou
digital.
Espectrofotmetros de fuorescncia, por sua vez,
diferenciam-se de fuormetros por no disporem de fltros e
sim de monocromadores de prisma ou de grade de difrao,
proporcionando maior seletividade de comprimento de
onda e fexibilidade.
Tanto fuormetros como espectrofotmetros de
fuorescncia permitem emprego de diversas fontes de luz.
Lmpadas de mercrio ou tungstnio, embora comuns,
so substitudas com vantagem pela lmpada de arco de
xennio alta presso, pois esta proporciona, ao contrrio
das demais, espectro contnuo desde o ultravioleta at o
infravermelho. De qualquer forma, a radiao muito
intensa e no deve jamais ser observada com os olhos
desprotegidos, sob risco de leses permanentes.
Os monocromadores, por sua vez, dispem de ajuste
de largura de fenda. Fendas estreitas propiciam maior
resoluo e menor rudo espectral enquanto fendas largas
asseguram maior intensidade de luz em detrimento destas
caractersticas. A largura de fenda a ser adotada funo da
diferena entre os comprimentos de onda da luz incidente
e emitida, assim como do nvel de sensibilidade necessrio
anlise.
A cmara de amostra geralmente permite uso de tubos
redondos e cubetas quadradas, semelhantes s empregadas
em espectrofotometria de absoro, salvo pela necessidade
de as quatro paredes verticais serem polidas. Volumes de
amostra da ordem de 2 a 3 mL so adequados embora alguns
instrumentos possam estar dotados de cubetas pequenas,
com capacidade para 0,1 a 0,3 mL ou ainda de suportes
para capilares que requerem volumes ainda menores.
Calibrao do equipamento
Fluormetros e espectrofuormetros devem ser calibrados
com substncias fuorforas, estveis, de modo a assegurar
resultados reprodutveis. As variaes so, em geral,
devidas a alteraes na intensidade das lmpadas ou na
sensibilidade do tubo fotomultiplicador. O fuorforo
pode ser a amostra pura da substncia a ser analisada ou
qualquer outra substncia fuorescente de fcil purifcao,
cujos comprimentos de onda de absoro e fuorescncia
sejam semelhantes aos da substncia em anlise. Por
exemplo, quinina em cido sulfrico 0,05 M um
padro adequado para fuorescncia azul. Por outro lado,
fuorescena em hidrxido de sdio 0,1 M apropriada para
fuorescncia verde e rodamina fuorforo de escolha na
fuorescncia vermelha. A escala de comprimentos de onda
do espectrofotmetro de fuorescncia tambm requer
calibrao peridica.
PREPARO DAS SOLUES
A escolha do solvente utilizado na preparao de solues
fuorescentes requer precaues. Natureza, pureza e pH
do solvente so parmetros relevantes na intensidade e
distribuio espectral da fuorescncia. Em consequncia,
recomendvel ater-se ao volume especifcado em mtodos
estabelecidos. Muitas substncias apresentam fuorescncia
em solventes orgnicos, mas so praticamente no
fuorescentes quando dissolvidas em gua. Assim, cabe a
experimentao em diversos solventes para determinar a
propriedade fuorescente de uma substncia.
104 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Para fns quantitativos, fundamental que a intensidade
da fuorescncia guarde relao linear com a concentrao
da amostra dentro de limites compatveis com a tcnica.
Se a soluo for muito concentrada, parte signifcativa da
luz incidente ser absorvida na periferia da cubeta e menor
ser a quantidade de radiao a alcanar a regio central.
Isto signifca que a prpria substncia atuar como fltro
interno. Todavia, tal fenmeno raro, considerando-se
que a espectrofotometria de fuorescncia uma tcnica de
elevada sensibilidade, permitindo o emprego de solues
de concentraes da ordem de 10
-5
a 10
-7
M.
Devido aos limites de concentrao usualmente estreitos
nos quais a fuorescncia proporcional concentrao
da substncia, tem-se como regra a obedincia relao
(c-d)/(a-b) = 0,40 a 2,50. Neste caso, a a intensidade de
fuorescncia da soluo de referncia, b a intensidade
do branco correspondente, c a intensidade da soluo-
amostra e d a intensidade do branco correspondente.
As determinaes de fuorescncia so sensveis
presena de partculas slidas nas solues. Tais impurezas
reduzem a intensidade do feixe incidente, produzindo
falsas leituras elevadas devido a refexes mltiplas na
cubeta. , portanto, necessrio eliminar estes slidos por
centrifugao ou fltrao antes da leitura, levando em
considerao, contudo, que alguns papis de fltro podem
conter impurezas fuorescentes.
A presena de oxignio dissolvido no solvente exerce
efeito atenuador sobre a intensidade da fuorescncia e cabe
elimin-lo usando, por exemplo, passagem de corrente
de nitrognio, hlio ou qualquer gs inerte na soluo,
previamente leitura.
O controle de temperatura tambm importante. Em
algumas substncias, a emisso de fuorescncia pode
diminuir de 1 a 2% a cada aumento de temperatura de 1
o
C.
Em vista disso, quando for necessria mxima preciso,
recomendado o emprego de cubetas termostatizadas.
Entretanto, para anlise de rotina, no h necessidade
deste recurso desde que as determinaes sejam feitas
com rapidez sufciente para evitar aquecimento devido
exposio da soluo luz intensa.
Algumas substncias fuorescentes so sensveis luz
e, quando expostas radiao luminosa intensa do
espectrofotmetro de fuorescncia, podem se decompor
em produtos mais ou menos fuorescentes. Tal efeito pode
ser detectado observando-se a resposta do detector em
relao ao tempo e atenuado com a reduo da intensidade
luminosa incidente pela utilizao de fltros.
5.2.16 TURBIDIMETRIA E
NEFELOMETRIA
Turbidimetria e nefelometria - variantes de
espectrofotometria - destinam-se avaliao quantitativa
de substncias em funo da turbidez de suas suspenses,
proporcional a seu poder de difrao sobre luz incidente
(efeito Tyndall).
Na turbidimetria, tambm conhecida por opacimetria,
mede-se a intensidade da luz transmitida no mesmo
sentido de direo da luz incidente. Embora existam
turbidmetros, destinados especifcamente medida de
turbidez, colormetros e espectrofotmetros convencionais
so satisfatrios medida da luz transmitida desde que
ajustados para comprimento de onda apropriado.
A nefelometria (ou difusimetria), por sua vez, compreende
a medida da intensidade de luz difundida (refetida)
pelas partculas em suspenso, em ngulo reto ao feixe
de luz incidente. Mais uma vez, alm de nefelmetros,
possvel o emprego de colormetros e espectrofotmetros
na medida nefelomtrica. Para tanto, cabe modifc-los
de forma a permitir a captao perpendicular ao ngulo
da luz incidente, seja por transferncia da fonte de luz,
seja por alterao de posio do detector. Fluormetros,
a exemplo de nefelmetros, destinam-se medida de luz
dispersa (posicionamento do detector em ngulo de 90

em
relao luz incidente) sendo, portanto, compatveis com
a nefelometria.
Turbidncia
Turbidncia (S) em analogia transmitncia (T), defnida
em Espectrofotometria de absoro no utlravioleta, visvel
e infravermelho (5.2.14) a expresso ofcial de disperso
da luz produzida por partculas suspensas. E determinvel
por turbidimetria ou nefelometria, correspondendo
equao
em que
P
0
= intensidade de radiao incidente;
P = intensidade de radiao transmitida;
b = espessura da amostra (cubeta);
C = concentrao da amostra;
d = dimetro mdio das partculas;
= comprimento de onda;
k = constante de proporcionalidade, dependente da natureza
da suspenso e do mtodo de medida.
Uma suspenso avaliada em dado instrumento, sob luz
monocromtica, apresenta turbidncia que corresponde
ao produto da concentrao C por uma constante de
proporcionalidade k, que combina os demais parmetros
da equao acima. Tem-se, portanto, S = kC, expresso
da lei de Lambert-Beer, permitindo que procedimentos
turbidimtricos e nefelomtricos sejam anlogos aos
adotados em espectrofotometria. , contudo, relevante
observar que a proporcionalidade s verdadeira para
suspenses muito diludas, pois refexes secundrias
provocam excessivo desvio de linearidade quando o nmero
de partculas em suspenso ultrapassa determinado limite.
Outra fonte de erro em medidas turbidimtricas e
nefelomtricas a decantao das partculas em suspenso.
Tal ocorrncia pode ser minimizada com o aumento da
viscosidade, com a incorporao de colide protetor
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 105 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
- gelatina, goma arbica ou amido - ao meio lquido da
suspenso.
PROCEDIMENTO
O procedimento bsico para o emprego de tcnicas
turbidimtricas ou nefelomtricas obedece aos princpios
das tcnicas espectrofotomtricas, compreendendo a
preparao das solues de referncia com suspenses
de concentrao conhecida, Na prtica, permissvel
a plotagem contra valores de transmitncia em vez de
turbidncia.
As etapas do procedimento compreendem, em resumo:
(1) ajustar o instrumento no comprimento de onda
especifcado na monografa (para colormetros, na falta
de especifcao, empregar fltro que fornea luz na
faixa azul); (2) preencher a cubeta com a suspenso mais
concentrada e ajustar a leitura de transmitncia para 100%
(transmitncia oferece mais linearidade que absorvncia);
(3) medir a transmitncia das demais suspenses-padro
e traar reta de calibrao (com emprego do mtodo dos
mnimos quadrados) e (4) medir a transmitncia da amostra
determinando sua concentrao pela reta de calibrao.
Comparao visual
Medidas de turbidez podem ser executadas por comparao
visual, tcnica pela qual a suspenso de amostra
confrontada com suspenso ou suspenses-padro. Para
tanto, empregar tubos de ensaio idnticos, de fundo plano
com 70 mL de capacidade e cerca de 23 mm de dimetro
interno. Os tubos devem ser comparados horizontalmente
sobre fundo escuro, com incidncia de luz lateral.
5.2.17 CROMATOGRAFIA
5.2.17.1 CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA
Consiste no sistema cromatogrfco em que a separao
dos componentes de uma mistura ocorre atravs da
migrao diferencial sobre uma fase estacionria composta
por uma fna camada de adsorvente aplicado sobre um
suporte plano, o qual pode ser constitudo de diversos
materiais tais como vidro, alumnio ou polister. A fase
mvel por sua vez constituda por diversas misturas de
solventes e permanece no interior de um recipiente ou
cuba de material transparente e inerte, geralmente vidro,
permanecendo vedada onde se deposita a cromatoplaca em
posio vertical sob uma atmosfera saturada da fase mvel.
EQUIPAMENTOS E PROCEDIMENTOS:
Os equipamentos utilizados para a cromatografa em
camada delgada consistem em: placa, cuba ou cmara de
eluio, fase estacionria, fase mvel, sistema revelador.
As placas geralmente so de vidro, alumnio ou material
plstico. Os tamanhos variam conforme a seguir: 20 cm x
20 cm; 10 cm x 20 cm; 10 cm x 10 cm; 5 cm x 10 cm.
Fase estacionria (adsorventes)
Slica o adsorvente mais amplamente utilizado
na CCD. um adsorvente amorfo, poroso. usado
tambm na cromatografa em coluna, entretanto a slica
utilizada em CCD mais fna. A slica preparada por
espontnea polimerizao e desidratao do cido silcico.
As substncias so adsorvidas pela slica via ponte de
hidrognio e interao dipolo-dipolo. Uma slica de
condio satisfatria aquela com 11 a 12% de gua
em peso. Um nvel de 11 a 12% de umidade alcanado
quando a slica est em equilbrio com o ar, a uma umidade
relativa de 50% e uma temperatura de 20 C.
As slicas comerciais possuem tamanhos de poros variveis
entre 40 a 150 ngstrons. Os tamanhos de partculas variam
de 5 a 40 m, com mdia de 10 a 15 m, dependendo do
fabricante.
Reduzindo o tamanho da partcula, aumenta-se a efcincia
da slica. Partculas de tamanho de 5 a 6 m so utilizadas
para preparar CCDAE (Cromatografa em camada delgada
de alta efcincia). Os tamanhos de poros afetam a
seletividade e, portanto, podem ser utilizados para as taxas
de migrao e resoluo dos componentes das amostras.
Os tamanhos de poros de slica mais comuns
comercialmente so 40, 60, 80 e 100 ngstrons. Sendo a
slica 60 ngstrons, a mais verstil e amplamente utilizada.
As slicas so utilizadas para a separao de compostos
lipoflicos como aldedos, cetonas, fenis, cidos graxos,
aminocidos, alcaloides, terpenides e esteroides, usando
o mecanismo de adsoro.
Alumina Depois da slica, o adsorvente mais utilizado.
As propriedades fsicas da alumina so similares s da slica
em termos de tamanho de partcula, dimetro mdio do
poro e superfcie. So disponveis comercialmente alumina
cida (pH 4,0 - 4,5), neutra (7,0 - 8,0) e bsica (9,0 - 10,0).
Assim como a slica, a alumina separa os componentes das
amostras por polaridade, pontes de hidrognio ou foras
dipolo. A seletividade da alumina na CCD de adsoro
similar slica-gel, portanto a alumina um adsorvente
melhor que a slica para separao de substncias cidas
lipoflicas. A alumina de carter cido atrai fortemente
compostos bsicos, enquanto a alumina de carter bsico
atrai mais fortemente compostos cidos. A alumina retm
compostos aromticos mais fortemente que a slica-gel.
Tem o inconveniente de promover a catlise de algumas
reaes de substncias lbeis. empregada na separao
de vitaminas lipossolveis, alcaloides, certos antibiticos,
hidrocarbonetos policclicos.
Kieselguhr - a Terra de Diatomcea termicamente tratada
de granulao de 5 a 40 m. Seu principal constituinte
SiO
2
. Uma variedade de outros compostos inorgnicos
tambm esto presentes. Os tamanhos dos poros so muito
variveis, suas caractersticas a tornam adequada para a
separao de acares, aminocidos e outras substncias
polares similares.
106 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Celulose - A celulose um polissacardeo altamente
polimerizado por monmeros de celobiose. A presena de
grande nmero de grupos hidroxila livre permite a ligao
de hidrognio com lquidos de baixo peso molecular
como gua e lcoois. Celulose , portanto, adequada
para a separao de substncias hidroflicas, tais como
carboidratos e aminocidos.
Poliamida - Em contraste com a celulose, a poliamida
uma resina sinttica. Dois tipos de poliamida so
utilizadas: poliamida 6 e poliamida 11. A poliamida 6
vem da aminopolicaprolactama, enquanto a poliamida
11 preparada a partir do cido poliaminoundecanico.
Poliamidas so utilizadas para a separao de compostos
polares que so capazes de interagir com o grupo
amida por ligaes de hidrognio devido sua estrutura
molecular. Dentre elas esto aminocidos e derivados,
benzodiazepnicos, cidos carboxlicos, ciclodextrinas,
cidos graxos, favonoides, conservantes, praguicidas.
Silicato de magnsio - ideal para separao de acares,
antraquinonas, favonas, glicosdeos, esteroides, lipdeos,
resduos de praguicidas, vitaminas, carbazis, acetato de
hidrocortisona.
Reveladores e mtodos de deteco
Aps o desenvolvimento da cromatografa e a evaporao
dos solventes, passa-se ao mtodo de revelao das
manchas. Este por sua vez, pode ser fsico ou qumico. Os
mtodos fsicos compreendem: luz ultravioleta (lmpadas
com emisso de radiao entre 254 a 366 nm), no caso de
substncias que se tornam fuorescentes, quando excitadas
por luz UV ou visvel. Os mtodos qumicos compreendem
utilizao de reagentes cromgenos. H uma ampla lista de
reveladores apropriados para cada grupo de compostos.
Identifcao
A posio fnal de cada mancha designada pelo Rf. Aps
a revelao da cromatoplaca, mede-se a distncia atingida
por cada mancha a partir da origem. Essa distncia uma
frao da distncia total percorrida pelo solvente na fase
estacionria.
Rf = (distncia atingida pela mancha a partir da origem) /
(distncia percorrida pelo solvente desde a origem)
5.2.17.2 CROMATOGRAFIA EM PAPEL
tiliza para a separao e identifcao das substncias ou
componentes da mistura a migrao diferencial sobre a
superfcie de um papel de fltro de qualidade especial (fase
estacionria). A fase mvel pode ser um solvente puro ou
uma mistura de solventes.
No papel cromatogrfco, o adsorvente uma camada
de papel de textura e espessura adequadas. A separao
cromatogrfca procede atravs da ao da fase mvel
lquida semelhante ao processo da adsoro em
cromatografa em coluna. Devido ao contedo de gua
intrnseco do papel, ou inibio seletiva do componente
hidroflico da fase lquida pelas fbras de papel, que pode
ser considerado como fase estacionria, um mecanismo
de partio pode contribuir signifcativamente para a
separao.
O cromatograma desenvolvido pela passagem lenta da
fase mvel sobre a camada. O desenvolvimento pode ser
ascendente, no caso de solvente carreado para cima atravs
de foras capilares, ou descendente, no caso em que o fuxo
do solvente auxiliado por fora da gravidade.
A forma mais simples da cromatografa em papel a
cromatografa ascendente que utiliza uma tira de papel
de comprimento e largura variveis, em funo da cuba
cromatogrfca a ser utilizada.
Este mtodo muito til para separar substncias
muito polares, como acares e aminocidos. Possui
o inconveniente de se poder aplicar pouca quantidade
de substncia de cada vez. Deve-se procurar trabalhar
nas condies mais prximas possveis, de qualidade e
quantidade, entre padro e amostra, usando-se o mesmo
papel, fase mvel, temperatura, etc.
EQUIPAMENTO E PROCEDIMENTOS
Consiste em cmara ou cuba cromatogrfca de vidro,
provida de bordas e tampa esmerilhadas e de dimenses
adequadas para conter o papel cromatogrfco, que pode ser
adaptado para cromatografa ascendente ou descendente.
importante que no deixe escapar os vapores da fase mvel.
Utilizar papel de fltro especial para cromatografa, cortado
no sentido das fbras em tiras de comprimento varivel
e largura no inferior a 2,5 cm. Existem vrios tipos de
papel para cromatografa com fnalidades diferentes
para separao de substncias hidrflas ou hidrofbica,
orgnicas ou inorgnicas, anfteras ou com muitas
hidroxilas, entre outras.
Para cromatografa descendente, utilizar cuba com tampa
provida de orifcio central, fechado por rolha de vidro ou
outro mateiral inerte. Na parte superior da cuba, h uma
cubeta suspensa, que contm dispositivo para prender o
papel (geralmente haste ou basto de vidro). De cada lado
da cubeta h guias de vidro, que sustentam o papel, de
modo a no tocar nas paredes da cuba cromatogrfca. A
largura do papel cromatogrfco no pode ser superior da
cubeta suspensa e a altura deve ser aproximadamente igual
altura da cmara cromatogrfca.
Para cromatografa ascendente, na parte superior da cuba
h dispositivo que permite sustentar o papel cromatogrfco
e que pode descer sem abrir a cmera cromatogrfca.
Manipula-se o papel com cuidado e pelas pontas, e cortam-
se tiras em tamanhos que possam ser contidos nas cubas.
importante cortar o papel seguindo o eixo das fbras, pois
a celulose est orientada neste sentido, o que facilitar a
passagem da fase mvel. A tira de papel no deve tocar as
paredes da cuba.
Ao adicionar o papel na cuba (no se deve demorar a
colocar o papel para no haver perda de saturao), cuidar
para que a amostra no entre em contato direto com o
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 107 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
eluente, deixando que ascenda ou descenda pela superfcie
do papel, apenas por capilaridade.
Quando a tcnica utilizada for a de cromatografa
ascendente, traar linha fna com lpis a 3 cm da borda
inferior do papel; se a cromatografa descendente, traar
linha distncia, tal que a mesma fque poucos centmetros
abaixo da vareta que prende o papel na cubeta do eluente.
Deve-se marcar tambm a linha de chegada da fase mvel
(ou frente do solvente), geralmente distando 10 cm do
ponto de partida.
Aplicar as solues na forma de manchas circulares
(utilizam-se tubos capilares ou micropipetas), contendo
de 1 a 20 g da amostra, sendo que cada mancha deve
Figura 1 - Diferentes tipos de cromatografa em papel de acordo
com as tcnicas de desenvolvimento.
___________
FM: Fase Mvel; PP: Ponto de Partida; LC: Linha de Chegada; dr1 e dr2: distncias percorridas pelas substncias; dm: distncia de migrao da fase mvel
CROMATOGRAFIA DESCENDENTE
Na cromatografa descendente, a fase mvel possui um
fuxo voltado para baixo e conta com a ao da gravidade.
Introduzir na cmara uma camada de eluente especifcado
na monografa, tampar e deixar em repouso por 24 horas.
Aplicar a amostra no papel, colocando-o adequadamente
sobre as guias de maneira que a extremidade superior
permanea dentro da cubeta suspensa e prend-lo com a
vareta de vidro. Fechar a cuba e deixar em repouso por
1 hora e meia. Em seguida, atravs do orifcio na tampa
introduzir o eluente na cubeta. Desenvolver o cromatograma
at a distncia ou tempo prescritos, protegendo o papel
da incidncia de luz direta. Remover o papel, marcar
o percurso da fase mvel, secar e visualizar da maneira
prescrita na monografa.
CROMATOGRAFIA ASCENDENTE
O fuxo ascendente da fase mvel sobre o papel
cromatogrfco permitido pela ao da capilaridade.
Colocar no fundo da cmara recipiente contendo o eluente,
fechar a cuba e mant-la em repouso por 24 horas. Aplicar
a amostra no papel introduzindo-o na cuba e deixar em
repouso por 1 hora e meia. Sem abrir a cmera, baixar
o papel de modo a colocar sua extremidade inferior em
contato com o eluente e desenvolver o cromatograma at
a distncia ou tempo prescritos. Retirar o papel, marcar o
percurso do eluente, secar e visualizar da maneira prescrita
na monografa.
5.2.17.3 CROMATOGRAFIA EM COLUNA
Cromatografa preparativa em coluna um mtodo
de separao que desempenha um papel importante
na purifcao de compostos de valor na investigao,
na operao de planta piloto e produo de produtos
farmacuticos. um mtodo que pode ser utilizado,
de maneira rpida e econmica, para a obteno de
substncias com pureza elevada. Na prtica, adsorventes
padronizados so utilizados, pois fornecem um alto grau de
confabilidade do mtodo, a transferncia direta de escala
de anlise e um processamento otimizado. Os tipos de
cromatografa em coluna podem ser: por adsoro (lquido-
slido), por partio (lquido-lquido) ou por troca inica.
produzir uma largura entre 6 a 10 mm sobre a linha
traada com lpis. Dependendo da largura do papel, pode-
se colocar apenas uma alquota do padro ou da amostra,
centralizando-se esta aplicao na linha de partida. No
caso da possibilidade de colocar-se mais de uma alquota
no ponto de partida, deixa-se 2 cm de distncia das bordas
laterais e um intervalo entre os pontos de aplicao de 3
cm. Se cada mancha produzida for maior que 6 a 10 mm,
aplicar a amostra em pores, deixando-se evaporar o
solvente antes de aplicar a poro seguinte.
O nvel da fase mvel deve fcar abaixo do ponto de partida
da substncia, devendo, sempre, haver uma boa vedao da
cuba cromatogrfca para que no se perca o vapor desta
fase. No fnal da corrida, esperar secar o papel e submet-lo
a algum processo de revelao.
108 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
EQUIPAMENTO
Os aparelhos utilizados para procedimentos em colunas
cromatogrfcas consistem de um tubo cromatogrfco
cilndrico, em posio vertical, de vidro (ou outro
material inerte e transparente especifcado em monografa
individual) de comprimento e dimetros variveis em cuja
parte inferior h estrangulamento (de passagem reduzida)
e torneira para regulagem da vazo dos vrios tipos de
solventes ou sistemas de eluio utilizados. Em algumas
colunas, a parte inferior apresenta em sua base, um disco
de vidro poroso cuja fnalidade evitar a sada da fase fxa
(slica-gel). As colunas tm dimenses variveis, porm, em
anlise farmacutica, as faixas mais comumente utilizadas
so de 10 a 30 mm de dimetro ao longo do tubo e de 3
a 6 mm na sua parte inferior, onde a torneira encontra-se
acoplada. O comprimento do tubo usualmente de 150 a
400 mm. Na parte superior da coluna poder haver uma
dilatao de forma esfrica, destinada a conter um maior
volume de solvente seguido de uma conexo esmerilhada,
cilndrica tamponada por uma rolha cilndrica de plstico,
de vidro, ao inoxidvel, alumnio (ou outro material
especifcado em monografa individual) frmemente fxada
veia. A veia da haste substancialmente menor que o
dimetro da coluna e possui, no mnimo, 5 cm a mais em
relao ao efetivo comprimento da coluna. A rolha tem um
dimetro menor em aproximadamente 1 mm em relao ao
dimetro interno da coluna.
PROCEDIMENTO
Cromatografa em coluna por adsoro
Iniciar o preparo da coluna, se necessrio, tamponando-
se a parte inferior, prxima torneira, com um pedao de
algodo ou l de vidro na base do tubo a fm de impedir a
passagem do material adsorvente e a entrada de ar (evitando
formao de bolhas). Preencher ento uniformemente
o tubo (conforme altura especifcada) com esse material
adsorvente (tal como alumina ativada ou slica-gel, slica
diatomceas ou slica calcinada) previamente suspensa
na fase mvel (sistema de solventes), realizando retirada
do excesso de eluente. Aps sedimentao do material
adsorvente, aplicar a mistura de substncias previamente
solubilizada em uma pequena quantidade de solvente no
topo da coluna at que penetre no material adsorvente.
Uma certa quantidade de solvente pode ser adicionada ao
topo para ajudar na adsoro das substncias no material
adsorvente, deixando-se, em seguida, sedimentar por
ao da gravidade ou pela aplicao de presso positiva
de ar fcando a mistura adsorvida em uma estreita faixa
horizontal no topo da coluna. A taxa de movimentao de
uma determinada substncia determinada ou afetada por
diversas variveis, incluindo a baixa ou alta adsortividade
do material adsorvente, o tamanho de partcula e a rea
superfcial (superfcie de contato), a natureza e polaridade
do solvente, a presso aplicada e a temperatura do sistema
cromatogrfco.
Um cromatograma de fuxo amplamente utilizado e
obtido por um processo em que solventes percorrem
a coluna, at que a substncia seja separada em soluo
efuente, conhecido como eluato. O eluato controlado,
recolhendo-se fraes conforme especifcado na
monografa e examinando-se cada frao por mtodo
adequado. A substncia pode ser determinada no eluato
por vrios mtodos: titulao, colorimetria, espectrometria
ou ser isolada (purifcada) quando da evaporao do
solvente. A efcincia da separao pode ser aferida por
cromatografa em camada delgada (CCD) de cada frao
recolhida ao longo da corrida cromatogrfca.
Cromatografa em coluna por partio
Na cromatografa de partio, as substncias a serem
separadas so repartidas entre dois lquidos imiscveis, um
dos quais, a fase fxa, adsorvido em um suporte slido,
apresentando assim uma rea de superfcie bastante ampla
para o solvente circulante ou fase mvel. O elevado nmero
de sucessivos contatos entre lquido-lquido permite uma
separao efetiva, a qual no ocorre atravs da extrao
lquido-lquido habitual.
O suporte slido geralmente polar, enquanto a fase
fxa adsorvente mais polar do que a fase mvel. O
suporte slido mais utilizado consiste em terra silicosa
cromatogrfca cujo tamanho de partcula satisfatrio
para a vazo apropriada do eluente. Na cromatografa de
partio de fase reversa, a fase adsorvida fxa menos
polar do que a fase mvel, e o adsorvente slido, torna-
se apolar por tratamento com um agente silanizante (ex.:
diclorodimetilsilano; parafnas), para produzir uma areia
cromatogrfca silanizada.
A amostra a ser cromatografada geralmente inserida em
um sistema cromatogrfco de duas maneiras: (a) uma
soluo da amostra em um pequeno volume da fase mvel
no topo da coluna; ou (b) uma soluo da amostra em um
pequeno volume da fase fxa misturada com o suporte
slido e transferida para a coluna formando uma camada
transversal sobre o material adsorvente.
O desenvolvimento e a eluio so atingidos atravs da
corrida do solvente circulante. O solvente (fase mvel)
geralmente saturado com o solvente (fase fxa) antes do uso.
No caso de cromatografa de partio lquido-lquido
convencional, o grau de partio de um determinado
composto entre as duas fases lquidas expresso atravs
de seu coefciente de partio ou distribuio. No caso
de compostos que se dissociam, pode-se controlar a
distribuio ao modifcar o pH, constante dieltrica, fora
inica, e outras propriedades das duas fases. A eluio
seletiva dos componentes da mistura pode ser atingida
com a mudana bem-sucedida da fase mvel para uma que
proporcione um coefciente de partio mais favorvel,
ou alterando o pH da fase fxa in situ com uma fase fxa
constituda da soluo de um cido ou uma base apropriados
em um solvente orgnico.
Salvo disposio contrria da monografa individual,
ensaios e testes empregando cromatografa de partio em
coluna so realizados em consonncia com os mtodos
convencionais descritos a seguir.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 109 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Suporte slido Utilizar areia de slica purifcada. Para
fase reversa de cromatografa de partio, utilizar areia de
slica cromatogrfca.
Fase estacionria Utilizar o solvente ou soluo
especifcada na monografa individual. Se for utilizada uma
mistura de lquidos na fase estacionria, misturar antes de
introduzir o suporte slido.
Fase mvel Utilizar o solvente ou soluo especifcados
na monografa individual. Equilibrar com gua, se a fase
estacionria for uma soluo aquosa; se a fase estacionria
for um fuido polar orgnico, equilibrar com este fuido.
Preparao de uma Coluna Cromatogrfca O tubo
cromatogrfco mede cerca de 22 mm de dimetro interno
e de 200 a 300 mm de comprimento, sem disco de vidro
poroso, no qual acoplado um tubo de distribuio,
sem torneira, com cerca de 4 mm de dimetro interno e
aproximadamente 50 mm de comprimento. Introduzir um
tampo delgado de l de vidro na base do tubo. Adicionar
a quantidade especifcada de suporte slido em um
bquer (proveta) de 100-250 mL e misturar at produzir
uma pasta homognea. Transferir a mistura para o tubo
cromatogrfco, tampar, pressionando-o levemente, at
obter uma massa uniforme. Se a quantidade de suporte
slido especifcada for mais de 3 g, transferir a mistura para
a coluna em pores de aproximadamente 2 g, tampando
cada poro. Se o ensaio ou teste requisitar uma coluna
multissegmentada, com uma fase estacionria diferente
para cada segmento, tampar aps a adio de cada
segmento, e adicionar cada segmento seguinte diretamente
ao anterior. Se uma soluo do analito for incorporada na
fase estacionria, completar a transferncia quantitativa
para o tubo cromatogrfco atravs da lavagem do bquer
utilizado para a preparao da mistura de ensaio com uma
mistura de aproximadamente 1 g de suporte slido e vrias
gotas do solvente utilizado para preparar a soluo de
ensaio. Introduza um tampo delgado de l de vidro em
cima da coluna de enchimento completa. A fase mvel fui
atravs de uma coluna adequadamente preenchida como
uma corrente moderada ou, se for utilizada a cromatografa
de fase reversa, lentamente, gota a gota.
Transferir a fase mvel para o espao da coluna sobre
a coluna de preenchimento, e deixe-a fuir atravs da
coluna sob ao da gravidade. Umedecer a ponta da
coluna cromatogrfca com cerca de 1 mL da fase mvel
antes de cada mudana de composio da fase mvel
e aps completar a eluio. Se o analito for introduzido
na coluna como uma soluo da fase mvel, deixe-o
passar completamente pela coluna de preenchimento,
ento adicione a fase mvel em vrias pores menores,
permitindo que cada uma seja completamente removida
antes de adicionar a fase mvel estocada.
Cromatografa em coluna por troca inica
Utilizar como fase estacionria resina de troca inica. A
troca de ons consiste em intercmbio reversvel de ons
presentes na soluo com ons do polmero resinoso (celulose
modifcada ou suporte de slica-gel). A escolha da resina, forte
ou fraca, aninica ou catinica, depender em grande parte
do pH no qual dever ocorrer a troca inica e da natureza
dos ons (nions ou ctions) a serem trocados. As resinas
fortemente cidas e fortemente bsicas so convenientes para
a maioria das aplicaes analticas. Emprega-se, na prtica,
grande excesso (200 - 300%) de resina sobre a quantidade da
amostra estequiometricamente calculada; a capacidade das
resinas varia de 2 a 5 mM/g (peso seco).
Tratamento da resina e preparo da coluna - Suspender a
resina de troca inica em gua e deixar em repouso por
24 horas. Introduzi-la em coluna adequada e, tratando-se
de resina aninica, convert-la em bsica passando atravs
da coluna, soluo de hidrxido de sdio SR, velocidade
de 3 mL/ min., at que o eluato fornea reao negativa
para cloreto. Passar, em seguida, gua isenta de dixido
de carbono. Em caso de resina catinica, a converso para
a forma cida se d pela passagem de cido clordrico SR
atravs da coluna, seguida de lavagem com gua isenta de
dixido de carbono at que o eluato fornea reao neutra.
Desenvolve-se coluna de troca inica de maneira anloga
descrita para cromatografa de adsoro. Terminada a
operao, regenera-se a resina lavando-a com hidrxido
de sdio SR (colunas aninicas) ou com cido clordrico
SR (colunas catinicas) e, em seguida, com gua isenta de
dixido de carbono at que fornea reao neutra.
5.2.17.4 CROMATOGRAFIA A LQUIDO
DE ALTA EFICINCIA
A cromatografa a lquido de alta efcincia (CLAE) uma
tcnica de separao fundamentada na distribuio dos
componentes de uma mistura entre duas fases imiscveis,
a fase mvel, lquida, e a fase estacionria slida, contida
em uma coluna cilndrica. As separaes so alcanadas
por partio, adsoro, troca inica, excluso por tamanho
ou interaes estereoqumicas, dependendo do tipo de fase
estacionria utilizada. A CLAE apresenta vantagens sobre
a cromatografa a gs para as anlises de combinaes
orgnicas. Amostras no volteis e termolbeis so,
preferencialmente, analisadas por CLAE. A maioria das
anlises farmacuticas est baseada no mtodo de separao
por partio e devem ocorrer em tempo curto de anlise.
Vrios fatores qumicos e fsico-qumicos infuenciam na
separao cromatogrfca, os quais dependem da natureza
qumica das substncias a serem separadas, da composio
e vazo da fase mvel, da composio e rea superfcial da
fase estacionria.
APARELHAGEM
O equipamento utilizado consiste em um reservatrio
que contm a fase mvel, uma bomba com a fnalidade
de impelir a fase mvel pelo sistema cromatogrfco, um
injetor para introduzir a amostra no sistema, uma coluna
cromatogrfca, um detector e um dispositivo de captura
de dados, como um software, integrador ou registrador.
Alm de receber e enviar informaes para o detector,
softwares so utilizados para controlar todo o sistema
cromatogrfco, proporcionando maior operacionalidade e
logstica de anlise.
110 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Os sistemas cromatogrfcos modernos consistem de
bombas para pressurizar a fase mvel, controladas por
software, que podem ser programadas para variar a relao
de componentes da fase mvel, como requerido para
cromatografa por gradiente de solvente, ou para misturar,
de forma isocrtica, a fase mvel (fases mveis com relao
fxa de solventes). Presses operacionais de at 5000 psi
(cerca de 345 bar) e vazo de at 10 mL por minuto podem
ser utilizadas. Presses superiores fcam condicionadas a
evoluo do instrumental.
Aps dissolver a amostra na fase mvel ou em outro
solvente adequado, a soluo injetada no sistema
cromatogrfco, de forma manual, utilizando seringa
apropriada, ou por meio de um injetor ou amostrador
automtico. Este consiste em um carrossel ou bandeja,
capaz de acomodar diversos frascos contendo as amostras.
Alguns amostradores automticos podem ser programados
para injetar diferentes volumes de amostra, diversas
quantidades de injees, controlar o intervalo entre
injees e outras variveis operacionais.
Quando se trabalha a altas presses, uma vlvula de
injeo essencial. Essa apresenta um sistema calibrado,
com volume defnido, denominado anel de injeo ou ala
de amostragem, que ser preenchido com a soluo a ser
analisada e, posteriormente, transferida coluna.
Para a maioria das anlises farmacuticas, a separao
alcanada por partio dos componentes, presentes na
soluo a ser analisada, entre as fases mvel e estacionria.
Sistemas que consistem de fases estacionrias polares e
fases mveis apolares so defnidos como cromatografa
em fase normal, enquanto o oposto, fases mveis
polares e fases estacionrias apolares, so denominados
de cromatografa em fase reversa. A afnidade de uma
substncia pela fase estacionria e, consequentemente, seu
tempo de reteno na coluna, controlado pela polaridade
da fase mvel.
As fases estacionrias utilizadas em cromatografa em fase
reversa consistem, tipicamente, de uma molcula orgnica
quimicamente ligada s partculas de slica ou outros
suportes, como grafta porosa. O dimetro das partculas
de, normalmente, 3 m a 10 m. Quanto menores o dimetro
da partcula e a pelcula que recobre o suporte, mais rpida
e efciente ser a transferncia das substncias entre as fases
estacionrias e mveis. A polaridade da coluna depende
dos grupos funcionais presentes, sendo os mais comuns
os grupos apolares octil, octadecil, fenil, cianopropil e
polar, nitrila. A proporo de grupos silanis no ligados
ao grupo funcional infuencia, signifcativamente, na
efcincia da separao cromatogrfca e no formato do
pico eludo. Comercialmente, esto disponveis colunas
cromatogrfcas com diferentes qualidades de fases
estacionrias, inclusive aquelas com pequena proporo de
grupos silanis livres, denominadas capeadas. Geralmente,
colunas de slica em fase reversa apresentam vida til
na faixa de pH de 2 a 8, entretanto, colunas contendo
grafta porosa ou materiais polimricos, como o estireno-
divinilbenzeno, so estveis em uma faixa mais ampla
de pH. De forma menos comum, podem ser utilizados
lquidos, no ligados, como revestimento do suporte de
slica e, portanto, devem ser imiscveis com a fase mvel.
As colunas normalmente usadas para separaes analticas
tm dimetros internos de 1 mm a 5 mm. Essas podem ser
aquecidas, proporcionando separaes mais efcientes, mas
s raramente so utilizadas temperaturas superiores a 60
C, devido ao potencial de degradao da fase estacionria
ou volatilidade da fase mvel. A menos que especifcado
na monografa da substncia a ser analisada, as colunas so
utilizadas em temperatura ambiente.
Os detectores mais frequentemente utilizados em
cromatografa a lquido de alta efcincia so os
espectrofotomtricos (UV/Vis). Os detectores
espectrofotomtricos so utilizados para detectar
compostos com grupamento cromforo. Tais detectores
consistem de uma clula de fuxo localizada no trmino
da coluna cromatogrfca. A radiao ultravioleta
atravessa, constantemente, pela clula de fuxo e
recebida no detector. Com o sistema em funcionamento,
as substncias so eludas da coluna, passam pela clula de
detector e absorvem a radiao, resultando em alteraes
mensurveis no nvel de energia. Esses detectores podem
apresentar comprimento de onda fxo, varivel ou mltiplo.
Detectores de comprimento de onda fxo operam em um
nico valor, tipicamente 254 nm, emitido por uma lmpada
de mercrio de baixa presso. Aqueles com comprimento
de onda varivel contm uma fonte contnua de emisso,
como uma lmpada de deutrio ou xennio de alta presso,
e um monocromador ou um fltro de interferncia, de modo
a gerar radiao monocromtica a um valor selecionado
pelo operador, podendo, ainda, ser programados para
alterar o comprimento de onda durante o desenvolvimento
da anlise. Os detectores de comprimento de onda mltiplo
medem, simultaneamente, a absorvncia em dois ou mais
comprimentos de onda, sendo denominados de detectores
de arranjo de diodos (DAD). Nestes, a radiao ultravioleta
transmitida atravs da clula de fuxo, absorvida pela
amostra e ento separada em seus componentes originais,
que so detectados, individualmente, pelo detector de
fotodiodos, registrando dados de absorvncia em toda a
faixa do espectro do ultravioleta e visvel e, adicionalmente,
os espectros de cada pico registrado no cromatograma.
Os detectores de ndice de refrao medem a diferena
entre o ndice de refrao da fase mvel pura e da fase
mvel contendo a substncia a ser analisada. So utilizados
para detectar substncias que no absorvem no ultravioleta
ou visvel, entretanto so menos sensveis que os detectores
espectrofotomtricos. Os detectores de ndice de refrao
apresentam a desvantagem de serem sensveis a pequenas
mudanas da composio dos solventes da fase mvel,
taxa de fuxo e temperatura.
Os detectores fuorimtricos so utilizados para detectar
compostos com grupamento fuorforo ou que podem ser
convertidos em derivados fuorescentes, por transformao
qumica ou adicionando reagentes fuorescentes a grupos
funcionais especfcos. Se a reao qumica requerida,
pode-se realiz-la no momento da preparao da amostra
ou, alternativamente, o reagente pode ser introduzido na
fase mvel, com a reao ocorrendo antes da deteco.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 111 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Os detectores potenciomtricos, voltamtricos ou
eletroqumicos so teis para quantifcao de substncias
que podem ser oxidadas ou reduzidas em um eletrodo.
Esses detectores so altamente seletivos, sensveis e
seguros, mas requerem fases mveis livres de oxignio e
ons de metais redutveis. Uma bomba de fuxo contnuo
deve ser utilizada, assegurando que o pH, a fora inica,
e a temperatura da fase mvel permanecem constantes.
Detectores eletroqumicos com eletrodo especfcos
de carbono podem ser utilizados, vantajosamente,
para quantifcar nanogramas de substncias facilmente
oxidveis, como fenis e catecis.
Os detectores de espectrometria de massas tm a
capacidade de medir a massa molar de uma substncia,
combinados com a cromatografa lquida proporcionam
uma alta seletividade uma vez que picos no resolvidos
podem ser isolados monitorando-se um valor de massa
selecionado. Esses detectores podem ser de quadrupolo
simples denominados (MS) ou tandem (MS/MS), quando
associados, para exemplifcar alguns dos modelos
utilizados. As fontes de ionizao mais comuns so os do
tipo ionizao por eletrospray e a ionizao qumica a
presso atmosfrica.
Os detectores de condutividade tm aplicao na
cromatografa de troca inica e medem a condutividade
da fase mvel continuamente que modifcada com a
presena de analitos na clula.
Atualmente, sistemas de coleta de dados modernos esto
disponveis com as funes de receber e armazenar os sinais
provenientes do detector e, posteriormente, proporcionar
o manejo dessas informaes, gerando os cromatogramas
com os dados de rea e altura do pico, identifcao da
amostra e mtodos. As informaes tambm podem ser
coletadas em sistemas simples de gravao de dados, como
registradores, para a garantia da integridade dos dados
gerados.
PROCEDIMENTO
O comprimento e o dimetro interno da coluna, o tipo e o
tamanho das partculas da fase estacionria, a temperatura
da operao, a composio e a vazo da fase mvel e o tipo
de deteco so descritos nas monografas individuais.
A composio da fase mvel tem infuncia signifcativa
na performance cromatogrfca e na separao das
substncias presentes na soluo a ser analisada. Para uma
anlise quantitativa precisa, reagentes de elevado grau de
pureza ou solventes orgnicos de pureza cromatogrfca
devem ser utilizados. A gua, de qualidade adequada, deve
apresentar baixas condutividade e absoro na faixa do
ultravioleta. Na cromatografa de partio, o coefciente
de partio e, consequentemente, a separao podem ser
modifcados pela adio de outro solvente fase mvel. Na
cromatografa de troca-inica, a reteno das substncias
afetada pelo pH, pela fora inica e por outras modifcaes
na composio da fase mvel. A tcnica de modifcar
continuamente a composio dos solventes da fase mvel
durante a corrida cromatogrfca denominada de eluio
gradiente, e aplicada para separar misturas complexas
de substncias com diferentes fatores de capacidade.
Entretanto, detectores que so sensveis a modifcaes na
composio da fase mvel, como os refratmetros, tm sua
utilizao limitada com a tcnica de eluio gradiente.
O detector deve apresentar uma ampla faixa de atuao e
as substncias a serem analisadas devem estar separadas de
qualquer interferente. A faixa linear para uma substncia
aquela na qual a resposta do detector diretamente
proporcional sua concentrao.
Os sistemas de CLAE so calibrados comparando-
se as respostas dos picos obtidos com as respectivas
concentraes de substncias qumicas de referncia
(SQR). Resultados quantitativos confveis so obtidos por
meio de calibrao com padro externo, quando injetores
ou amostradores automticos so preferencialmente
utilizados. Esse mtodo envolve a comparao direta das
respostas obtidas com os picos, separadamente analisados,
das solues padro e amostra. Nos casos em que a
padronizao externa utilizada, os clculos podem ser
realizados segundo a equao:
em que,
Ca = concentrao da soluo amostra;
Cp = concentrao da soluo padro;
Ra = resposta (rea ou altura) do pico da soluo amostra;
Rp = resposta (rea ou altura) do pico da soluo padro.
Se a injeo realizada por meio de seringa, melhores
resultados quantitativos so obtidos por meio de calibrao
com padro interno, adicionando-se uma quantidade
conhecida de uma substncia qumica de referncia no
interferente s solues padro e amostra. A relao das
respostas obtidas com a substncia a ser analisada e com
o padro interno utilizada para expressar o resultado
quantitativo. Nos casos em que a padronizao interna
utilizada, os clculos podem ser realizados segundo a
equao:
em que,
Rai = resposta (rea ou altura) do pico do padro interno
na soluo amostra;
Rpi = resposta (rea ou altura) do pico do padro interno
na soluo padro.
Devido a variaes normais entre equipamentos, solventes,
reagentes e tcnicas, necessrio um teste de adequao
do sistema para assegurar que o mtodo descrito seja
aplicado de forma irrestrita. Os principais parmetros da
adequao do sistema esto descritos em Interpretao dos
cromatogramas e em Adequao do sistema.
INTERPRETAO DOS CROMATOGRAMAS
Na Figura 1 representada uma separao cromatogrfca
tpica de duas substncias, sendo t
1
e t
2
os respectivos
/
112 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
tempos de reteno. Os termos h, h/2 e W
h/2
correspondem altura, meia altura e largura a meia altura, respectivamente,
e W representa a largura do pico na linha de base, pelo mtodo da triangulao. O sinal relativo ao tempo morto, t
0
, refere-
se a uma substncia no retida na coluna cromatogrfca.
Figura 1 Separao cromatogrfca de duas substncias.
Tempo de reteno (t), Fator de reteno (k) e Tempo de
reteno relativo
O tempo de reteno em cromatografa caracterstico
da substncia analisada, entretanto no exclusivo. A
comparao entre os tempos de reteno da amostra e da
substncia qumica de referncia pode ser utilizada como
indicativo da identidade da substncia, porm insufciente
para garantir a total caracterizao da amostra. O tempo
de reteno absoluto pode variar entre equipamentos e
conforme o uso de solventes e reagentes diferentes. Nesse
sentido, as comparaes so feitas em termos de fator de
reteno, k, calculado segundo a expresso:
0
0
t
t t
k

=
em que,
t = tempo de reteno da substncia analisada;
t
0
= tempo morto.
O fator de reteno, k, a razo entre a quantidade
da substncia com afnidade pela fase estacionria e a
quantidade com afnidade pela fase mvel. Quanto maior a
afnidade da substncia pela fase estacionria maior a sua
reteno.
O conceito de tempo de reteno relativo tambm pode
ser aplicado. Para tanto, deve-se defnir uma substncia,
de uma mistura, como a principal. Essa ter o tempo de
reteno relativo de 1. Todas as outras substncias tero
seus tempos de reteno relacionados com o tempo de
reteno da substncia principal.
Nmero de pratos tericos (N)
O nmero de pratos tericos, N, indicativo da efcincia
da coluna. Pode ser expresso em nmeros de pratos tericos
por coluna ou nmero de pratos tericos por metro. Para
picos com formato gaussiano, o nmero de pratos tericos
por coluna calculado segundo as expresses:


O valor de N depende da substncia a ser analisada e das
condies de anlise, como fase mvel, temperatura e fase
estacionria.
Resoluo (R)
A resoluo, R, o parmetro cromatogrfco que indica o
grau de separao entre duas substncias em uma mistura,
e calculada segundo as expresses,
em que,
t
2
e t
1
= tempos de reteno das duas substncias da mistura;
W
1
e W
2
= respectivas larguras dos picos na linha de base,
pelo mtodo da triangulao;
W
1,h/2
e W
2,h/2
= respectivas larguras dos picos meia altura.
A rea ou a altura do pico so, usualmente, proporcionais
quantidade da substncia eluda. A rea sob o pico,
geralmente, mais utilizada, entretanto pode ser menos
precisa se houver outros picos interferentes. Para medidas
manuais, o grfco deve ser obtido em velocidade maior que
a usual, minimizando os erros na obteno da largura e da
largura meia altura dos picos. Para a anlise quantitativa,
as substncias devem estar totalmente separadas de
qualquer substncia interferente.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 113 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Fator de cauda (T)
O fator de cauda, T, que indica a simetria do pico,
apresenta valor igual a 1 quando o pico perfeitamente
simtrico. Esse valor aumenta medida que a assimetria
do pico se torna mais pronunciada. Em alguns casos,
valores inferiores a 1 podem ser observados. medida
que a assimetria do pico aumenta, a integrao e a preciso
se tornam menos confveis. O fator de cauda calculado
segundo a expresso:
em que,
W
0,05
= largura do pico a 5% da altura;
f = valor da poro anterior do pico, em relao largura a
5% da altura, de acordo com a Figura 2.
Figura 2 Cromatograma representando a assimetria do pico.
ADEQUABILIDADE DO SISTEMA
Os testes de adequabilidade do sistema so parte integrante
dos mtodos de cromatografa lquida. So aplicados com
a fnalidade de verifcar se a resoluo e a reprodutibilidade
do sistema cromatogrfco esto adequadas para as anlises
a serem realizadas. Os principais parmetros necessrios
para a verifcao da adequabilidade do sistema so
descritos a seguir.
A resoluo, R, funo da efcincia da coluna, N,
e especifcada para garantir que substncias eludas
proximamente, apresentem separao satisfatria sem
interferncias mtuas.
Replicatas de injees da soluo padro so trabalhadas,
estatisticamente, para verifcar se os requerimentos
para a preciso da anlise foram atingidos. A menos que
especifcado na monografa individual, so utilizados os
dados de cinco replicatas de injees para calcular o desvio
padro relativo (DPR), se a especifcao for igual ou
inferior a 2,0%. Se o desvio padro relativo especifcado
for superior a 2,0%, os dados de seis replicatas devem ser
utilizados.
O fator de cauda, T, que indica a simetria do pico, igual
a 1 para picos perfeitamente simtricos e maior que 1 para
picos que apresentam assimetria. Em alguns casos, valores
menores que 1 podem ser observados.
Esses testes so realizados aps coletar os resultados de
replicatas de injees da soluo padro ou outra soluo
especifcada na monografa individual. A especifcao
desses parmetros cromatogrfcos, em uma monografa,
no impede a modifcao das condies de anlise.
Ajustes nas condies de trabalho, de forma a atingir os
parmetros de adequabilidade do sistema, podem ser
necessrios. A menos que especifcado na monografa
individual, os parmetros de adequabilidade do sistema
so determinados a partir dos dados obtidos com o pico da
substncia de interesse. A preciso do sistema, demonstrada
por meio de replicatas da soluo padro, deve ser
alcanada antes das injees das solues amostras. A
adequabilidade do sistema deve ser verifcada durante toda
a anlise cromatogrfca, por injeo de soluo padro em
intervalos de tempo apropriados. Quando houver mudana
signifcativa no equipamento ou em um reagente, os testes
de adequabilidade do sistema devem ser realizados antes
das injees da amostra. A anlise no ser vlida a menos
que os requerimentos do teste de adequabilidade do sistema
sejam alcanados.
5.2.17.4.1 Cromatografa de ons
A cromatografa de ons refere-se ao mtodo de separao
e determinao de ons utilizando cromatografa a lquido
de alta efcincia (CLAE). Esta tcnica baseada em um
processo de separao dos componentes da amostra entre
duas fases: fase mvel e fase estacionria. O processo
de separao resultante de interaes especfcas entre
as espcies presentes na amostra em ambas as fases. O
114 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
mecanismo de interao com a fase estacionria a troca
inica, onde as colunas utilizadas so constitudas por
um grupo funcional carregado, geralmente SO
3
-
, COO
-
,
NH
3
+
, NR
3
+
ligado a uma matriz polimrica, como slica
ou copolmero do tipo poliestireno-divinilbenzeno. A
fase mvel tambm contm espcies inicas ocorrendo,
desta forma, uma competio entre a distribuio das
espcies presentes na amostra entre a fase mvel e a
fase estacionria. Para cada on, o processo de troca
caracterizado pelo equilbrio de distribuio entre a fase
mvel e a fase estacionria.
Os trocadores utilizados podem ser classifcados em fortes,
mdios e fracos, dependendo do grupo funcional ligado
matriz polimrica. Os trocadores inicos fortes so aqueles
que se ionizam completamente em uma ampla faixa de
pH, como grupo sulfnico e amnio quaternrio. O grau
de dissociao dos trocadores inicos fracos e mdios
dependente do pH e, desta forma, a capacidade destes
trocadores varia em funo do pH. Pode-se citar como
exemplo, o grupo carboxlico e poliamina.
Esta tcnica permite que a condutividade eltrica seja
usada para a deteco e determinao quantitativa dos ons
em soluo, aps a separao. Geralmente, a cromatografa
de ons com coluna de troca aninica e detector por
condutividade pode ser utilizada para a determinao dos
ons F
-
, Cl
-
, Br
-
, SO
4
2-
, PO
4
3-
, I
-
, entre outros. Em virtude
da condutividade eltrica ser uma propriedade comum
a todas as espcies inicas em soluo, o detector por
condutividade tem a capacidade de monitorar todas as
espcies inicas. O problema que ocorre na utilizao da
condutividade eltrica para quantifcar as espcies inicas
eludas pode ser causado pela alta condutividade dos ons
presentes na fase mvel, principalmente devido ao on
sdio, impossibilitando a quantifcao de outros ons.
Este problema superado com o uso de um supressor do
eluente, posicionado aps a coluna de separao, onde
ocorre a converso dos ons do eluente em espcies que
contribuam para uma condutncia baixa ou nula. O cido
carbnico, resultante da troca catinica, fracamente
dissociado, possuindo uma baixa condutividade (sinal de
condutividade da linha base menos signifcativo). Desta
forma, a sensibilidade, para a determinao de nions,
pode ser aumentada signifcativamente, em um fator de 10
vezes ou superior, quando so utilizados supressores.
Um equipamento de cromatografa de ons consiste,
basicamente, no mesmo sistema utilizado para CLAE.
Este sistema consiste de uma bomba de alta propulso,
uma vlvula de injeo com ala de amostragem adequada,
coluna de separao (para a separao de nions deve ser
utilizada uma coluna de troca aninica), uma ps-coluna,
caso necessrio, para converso dos ons do eluente em
espcies com menor condutividade e um detector de
condutividade.
PROCEDIMENTO
Para operar o cromatgrafo de ons, recomenda-se seguir
as instrues do fabricante. As determinaes so feitas
por comparao com solues de referncia, contendo
concentraes conhecidas do analito.
Fase mvel: preparar a fase mvel de acordo com as
especifcaes recomendadas pelo fabricante da coluna
de troca aninica utilizada. Recomenda-se a utilizao
de fase mvel composta por uma mistura de carbonato
e bicarbonato de sdio (Na
2
CO
3
/NaHCO
3
), na faixa de
concentrao de 1,0 a 4 mmol/L, dependendo da coluna
utilizada. Utilizar a vazo da fase mvel recomendada
pelo fabricante do equipamento e de acordo com a coluna
de troca inica utilizada. Durante as anlises utilizando
a deteco por condutividade, regenerar a coluna de
supresso qumica, conforme recomendao do fabricante.
Recomenda-se a utilizao de H
2
SO
4
0,005 mol/L e
posterior lavagem com gua purifcada.
Calibrao: preparar ao menos quatro solues de
referncia do elemento a ser determinado, abrangendo
a faixa de concentrao recomendada pelo fabricante
do equipamento para o analito em anlise e injetar,
separadamente, cada soluo de referncia no equipamento,
utilizando ala de amostragem adequada. Recomenda-se o
uso de ala de amostragem de 20 a 100 L. Registrar os
cromatogramas e integrar os sinais em rea ou em altura
de pico. Aps a calibrao, traar a curva de calibrao.
Preparar a soluo da amostra conforme indicado na
monografa, ajustando sua concentrao para que esta fque
situada dentro da faixa de concentrao das solues de
referncia. Injetar a amostra no cromatgrafo, registrar a
leitura e repetir esta sequncia trs vezes, adotando a mdia
das trs leituras. Determinar a concentrao do elemento
pela curva de calibrao. Caso seja feita a determinao
simultnea de vrios nions, podem ser feitas solues de
referncia contendo todos os analitos.
5.2.17.5 CROMATOGRAFIA A GS
Cromatografa a gs (CG) uma tcnica de separao
cromatogrfca baseada na diferena de distribuio de
espcies de uma mistura entre duas fases no miscveis,
na qual a fase mvel um gs de arraste que se move
atravs da fase estacionria contida em uma coluna. CG
est baseada no mecanismo de adsoro, distribuio de
massa ou excluso por tamanho. aplicada a substncias
e seus derivados que se volatilizam sob as temperaturas
empregadas, e utilizada para identifcao, teste de
pureza e determinao quantitativa.
Quando um constituinte vaporizado conduzido pelo gs
de arraste para dentro da coluna, ele particionado entre a
fase mvel gasosa e a fase estacionria por um processo de
distribuio contracorrente dinmico, apresentando uma
reteno maior ou menor devido a fenmenos de soro e
dessoro sobre a fase estacionria.
EQUIPAMENTO
O equipamento consiste em uma fonte de gs de arraste
e um controlador de fuxo, uma cmara de injeo, uma
coluna cromatogrfca contida em um forno, um detector
e um sistema de aquisio de dados (ou um integrador ou
registrador). O gs de arraste circula pela coluna com fuxo
e presso controlados e segue diretamente para o detector.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 115 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
O injetor, a coluna e o detector apresentam temperatura
controlada. A cromatografa se realiza a temperatura
constante ou utilizando um programa de temperatura
adequado. Os compostos a serem cromatografados, tanto
em soluo como gases, so injetados, entrando em contato
com o gs de arraste na cmara de injeo. Dependendo
da confgurao do equipamento, a mistura a ser analisada
deve ser injetada diretamente na coluna ou deve ser
vaporizada na cmara de injeo e misturada no gs de
arraste antes de entrar na coluna.
Uma vez na coluna, os constituintes da mistura so
separados em funo de seus diferentes ndices de reteno
linear, os quais so dependentes da presso de vapor e
do grau de interao com a fase estacionria. O ndice
de reteno, que defne a resoluo, o tempo de reteno
e a efcincia da coluna em relao aos componentes da
mistura, tambm temperatura-dependente. O uso de
programas de temperatura para o forno onde est a coluna
apresenta uma vantagem na efcincia de separao dos
compostos que se comportam diferentemente na presso
de vapor.
Os compostos saem separados da coluna, passando por
um detector, que responde a quantidade de cada composto
presente. O tipo de detector a ser utilizado depende da
natureza dos compostos a serem analisados e especifcado
em cada monografa. Os detectores so aquecidos para
evitar a condensao dos compostos eludos. A sada do
detector dada em funo do tempo de reteno, gerando
um cromatograma, que consiste de uma srie de picos
no eixo do tempo. Cada pico representa um composto
da mistura vaporizada, embora alguns picos possam sair
sobrepostos. O tempo de eluio caracterstico de um
composto individual e a resposta do instrumento, medido
como a rea do pico ou a altura do pico, em funo da
quantidade presente.
Injetores
Injees diretas de solues o modo usual de injeo, a
menos que seja indicado diferentemente na monografa. A
injeo pode se realizar diretamente na cabea da coluna
utilizando uma seringa ou uma vlvula de injeo, ou em
uma cmara de vaporizao que pode estar equipada com
um divisor de fuxo. A quantidade de amostra que pode
ser injetada em uma coluna capilar sem saturara menor
quando comparada quantidade que pode ser injetada
em colunas empacotadas. Colunas capilares, portanto,
frequentemente so utilizadas com injetores capazes de
dividir a amostra em duas fraes (modo split), uma menor
que entra na coluna e outra maior que descartada. Esses
injetores podem ser utilizados sem divisor de amostra
(modo splitless) para anlises de componentes em menor
quantidade ou em traos.
As injees da fase de vapor podem ser efetuadas por
sistema de injeo em espao confnado (headspace)
esttico ou dinmico.
Sistema de injeo em espao confnado (headspace)
esttico (purge e trap) inclui um dispositivo de
concentrao, por onde as substncias volteis da soluo
so arrastadas at uma coluna adsorvente, mantida a baixa
temperatura onde so adsorvidas. As substncias retidas
so ento dessorvidas em uma fase mvel por aquecimento
rpido da coluna adsorvente.
Sistema de injeo em espao confnado (headspace)
dinmico inclui uma cmara de aquecimento das amostras,
termostaticamente controlada, na qual se colocam frascos
(vials) fechados onde amostras slidas ou lquidas so
colocadas por um perodo de tempo determinado, para
permitir que os componentes volteis das amostras atinjam
o equilbrio entre a fase no gasosa e a fase de vapor.
Depois de estabelecido o equilbrio, uma quantidade pr-
determinada do espao confnado do frasco injetada no
cromatgrafo.
Fases estacionrias
As fases estacionrias esto contidas em colunas que
podem ser:
Uma coluna capilar de slica fundida cuja
parede est revestida com a fase estacionria;
Uma coluna empacotada com partculas inertes
impregnadas com a fase estacionria;
Uma coluna empacotada com a fase estacionria slida.
As colunas capilares, usualmente feitas de slica fundida,
apresentam um dimetro interno ( ) de 0,10 a 0,53 mm e
um comprimento de 5 a 60 m. A fase lquida ou estacionria
que pode estar quimicamente ligada superfcie interna,
um flme de 0,1 a 5,0 m de espessura, embora fases
estacionrias no polares possam atingir 5 m de espessura.
As colunas empacotadas, de vidro ou metlicas, apresentam
comprimento de 1a 3 m com um dimetro interno ( ) de
2 a 4 mm. As fases estacionrias consistem, geralmente,
em polmeros porosos ou suportes slidos impregnados
com a fase lquida chegando a, aproximadamente, 5%
(p/p). Colunas de alta capacidade, com a fase lquida
chegando a, aproximadamente, 20% (p/p), so utilizadas
para uma ampla faixa de compostos e para determinao
de compostos com baixo peso molecular como a gua.
A capacidade requerida infuencia a escolha do suporte
slido.
Os suportes para anlise de compostos polares em
colunas empacotadas com uma fase estacionria de baixa
polaridade e baixa capacidade devem ser inertes para evitar
um excessivo prolongamento dos picos. A reatividade dos
materiais de suporte pode ser reduzida por silanizao
antes do preenchimento com a fase lquida. Geralmente se
utiliza terra de diatomceas lavadas com cido e calcinadas.
Os materiais esto disponveis em diversos tamanhos de
partcula, sendo as partculas mais comumente utilizadas
de 150 a 180 m (80 a 100 mesh) e de 125 a 150 m (100
a 120 mesh).
Fases mveis
O suprimento do gs de arraste pode ser obtido a partir
de um cilindro de alta presso ou por um gerador de gs
116 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
de alta pureza. Em ambos os casos, o gs passa por uma
vlvula de reduo de presso e o fuxo medido para,
ento, entrar na cmara de injeo e na coluna. O tempo
de reteno e a efcincia do pico dependem da qualidade
do gs de arraste; o tempo de reteno diretamente
proporcional ao comprimento da coluna e a resoluo
proporcional raiz quadrada do comprimento da coluna.
Para colunas empacotadas, a mdia de fuxo do gs
carreador usualmente expressa em mililitros por minuto,
presso atmosfrica e temperatura ambiente. O fuxo
mdio medido na sada do detector, ou com um dispositivo
mecnico calibrado ou com um tubo de borbulhamento,
enquanto a coluna est com temperatura de funcionamento.
A velocidade linear do gs de arraste atravs da coluna
empacotada inversamente proporcional raiz quadrada
do dimetro interno da coluna para um dado volume de
fuxo. Fluxos de 60 mL/min em uma coluna de 2 mm de
dimetro interno e 15 mL/min em uma coluna de 2 mm
de dimetro interno, proporcionam velocidades lineares
idnticas e, com isso, tempos de reteno similares. A
menos que especifcado na monografa, a mdia de fuxo
para colunas empacotadas de, aproximadamente, 30 a
60 mL/min. Para colunas capilares, a velocidade do fuxo
linear usualmente utilizada ao invs da mdia de fuxo.
Isto determinado a partir do comprimento da coluna e
do tempo de reteno de uma amostra de metano diluda,
utilizando um detector por ionizao de chama. Operando
a altas temperaturas, existe presso de vapor sufciente para
que ocorra uma gradual perda da fase lquida, um processo
chamado sangramento.
Hlio ou nitrognio so, geralmente, empregados como
gases de arraste para colunas empacotadas, enquanto que
os gases de arraste utilizados para colunas capilares so
nitrognio, hlio e hidrognio.
Detectores
Detectores por ionizao de chama so os mais utilizados
mas, dependendo da fnalidade da anlise, outros detectores
podem ser empregados, incluindo: condutividade trmica,
captura de eltrons, nitrognio-fsforo, espectrometria de
massas, espectrometria no infravermelho com transformada
de Fourier, entre outros. Para anlises quantitativas, os
detectores devem apresentar uma ampla variao dinmica
linear: a resposta deve ser diretamente proporcional
quantidade de composto presente no detector em uma
ampla faixa de concentraes. Detectores por ionizao de
chama apresentam uma ampla faixa linear e so sensveis
maioria dos compostos. A resposta dos detectores depende
da estrutura e da concentrao do composto e da mdia de
fuxo da combusto, do ar e do gs de arraste. A menos que
especifcado diferentemente na monografa, detectores por
ionizao de chama operam tanto com hlio quanto com
nitrognio como gs de arraste para colunas empacotadas,
e com hlio ou hidrognio para colunas capilares.
Os detectores por condutividade trmica empregam fo de
metal aquecido localizado na corrente do gs de arraste.
Quando um analito entra no detector com o gs de arraste,
a diferena na condutividade trmica da corrente de gs
de arraste (gs e componentes da amostra) relativo a um
fuxo de referncia do gs de arraste sem analito medido.
Em geral, detectores por condutividade trmica respondem
uniformemente a compostos volteis sem considerar sua
estrutura; entretanto, so considerados menos sensveis
que o detector por ionizao de chama.
Detectores por ionizao de chama alcalina, tambm
chamado NP ou detector nitrognio-fsforo, contm uma
fonte terminica, com um sal metal-lcali ou um elemento
de vidro contendo rubdio ou outro metal, que resulta numa
efciente ionizao de nitrognio orgnico e compostos
contendo fsforo. um detector seletivo que apresenta
baixa resposta para hidrocarbonetos.
Detectores por captura de eltrons contm uma fonte
radioativa de radiao ionizante. Exibem uma resposta
extremamente alta a compostos halogenados e grupo nitro,
mas pouca resposta a hidrocarbonetos. A sensibilidade
aumenta com o nmero e o peso atmico de tomos de
halognio.
Dispositivos para tratamento de dados
Estaes de tratamento de dados conectadas na sada dos
detectores calculam a rea e a altura dos picos, e apresentam
os cromatogramas completos contendo os parmetros da
corrida e os dados dos picos. Os dados dos cromatogramas
podem ser armazenados e reprocessados por integrao
eletrnica ou outro tipo de clculo que seja necessrio.
Essas estaes de tratamento de dados so utilizadas
tambm para programar as corridas cromatogrfcas.
PROCEDIMENTO
Colunas empacotadas e capilares devem ser condicionados
antes do uso at que a linha de base esteja estvel. Isso
deve ser realizado operando a uma temperatura acima da
especifcada pelo mtodo ou por repetidas injees do
composto ou da mistura a ser cromatografada. O fabricante
da coluna geralmente fornece instrues para o adequado
procedimento de condicionamento da coluna. Em caso de
polisiloxanos metil e fenil substitudos termicamente estveis,
uma sequncia especial aumenta a efcincia e a inatividade:
manter a coluna temperatura de 250 C por 1 hora, com
fuxo de gs hlio, para remover o oxignio e solvente. Para o
fuxo de hlio, aquecer at 340 C por 4 horas, e ento reduzir
o aquecimento at temperatura de 250 C, e condicionar com
fuxo de hlio at a estabilidade da linha de base.
Aps o procedimento de condicionamento, equilibrar a
coluna, o injetor e o detector s temperaturas e fuxo dos
gases especifcados na monografa at a obteno de uma
linha de base estvel. Preparar a(s) soluo(es) amostra
e de referncia como descrito. As solues devem estar
isentas de partculas slidas.
Muitos frmacos so molculas polares reativas. Nesse
caso, pode ser necessria a converso destes a derivados
menos polares e mais volteis, por tratamento dos grupos
reativos com reagentes apropriados.
Os ensaios requerem comparao quantitativa de um
cromatograma com outro. A maior fonte de erro a
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 117 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
irreprodutibilidade da quantidade de amostra injetada,
notadamente quando injees manuais so realizadas com o
auxlio de uma seringa. Os efeitos de variabilidade podem ser
minimizados pela adio de um padro interno, um composto
no interferente adicionado na mesma concentrao nas
solues amostra e padro. A mdia das respostas do pico
do analito em relao ao padro interno comparada entre
os cromatogramas da amostra e do padro. Quando o padro
interno quimicamente similar substncia a ser analisada,
existe tambm uma compensao para variaes menores
na coluna e nas caractersticas do detector. Em alguns
casos, o padro interno pode ser conduzido atravs da
preparao da amostra antes da anlise cromatogrfca para
controlar outros aspectos quantitativos do ensaio. Injetores
automticos aumentam a reprodutibilidade das injees das
amostras e reduzem a necessidade de padres internos.
5.2.17.5.1 Cromatografa a gs em espao
confnado (headspace)
A cromatografa a gs em espao confnado (headspace)
uma tcnica particularmente adequada para a separao e
determinao de compostos volteis presentes em amostras
slidas e lquidas. Este mtodo est baseado na anlise de
uma fase de vapor em equilbrio com uma fase slida ou
lquida.
EQUIPAMENTO
O equipamento consta de um cromatgrafo a gs ao qual
se adapta um dispositivo para a introduo da amostra, que
pode estar conectado a um mdulo de programao que
controle automaticamente a presso e a temperatura. Se for
necessrio, pode-se acoplar um dispositivo de eliminao
de solventes. A amostra a ser analisada introduzida em um
frasco provido de um obturador adequado que o fecha e de
um sistema de vlvulas que permite a entrada de um gs de
arraste. O frasco colocado em uma cmara termostatizada
a determinada temperatura para a amostra ser examinada. A
amostra deixada nesta temperatura por tempo sufciente
para permitir que se estabelea o equilbrio entre a fase
slida e a fase gasosa. O gs de arraste introduzido no
frasco e, depois de determinado tempo, uma vlvula
aberta para permitir que o gs se expanda at a coluna
cromatogrfca, arrastando os componentes volteis.
Ao invs de utilizar um cromatgrafo especialmente
adaptado para a introduo das amostras, tambm
podem-se utilizar seringas hermticas e um cromatgrafo
convencional. Neste caso, o equilbrio entre as duas
fases conduzido em uma cmara separada e a fase de
vapor transferida para a coluna, tomando as precaues
necessrias para evitar qualquer modifcao do equilbrio.
PROCEDIMENTO
Ajustar as condies de trabalho do equipamento a fm de
obter uma resposta satisfatria, utilizando as solues de
referncia.
Calibrao direta
Introduzir separadamente, em frascos idnticos, a
preparao a examinar e cada uma das solues de
referncia, segundo as condies descritas na monografa
e evitando o contato entre a amostra e o dispositivo de
injeo. Fechar hermeticamente os frascos e introduzi-los
na cmara termostatizada a temperatura e presso descritas
na monografa. Aps atingir o equilbrio, proceder anlise
cromatogrfca nas condies descritas.
Adio de padro
Adicionar, a uma srie de frascos idnticos, volumes
iguais da soluo a examinar. Adicionar a todos os frascos,
exceto a um deles, quantidades crescentes de uma soluo
de referncia, de concentrao conhecida da substncia a
examinar. Deste modo, se obtm uma srie de preparaes
contendo quantidades crescentes de determinada
substncia. Fechar hermeticamente os frascos e introduzi-
los na cmara termostatizada, segundo condies de
temperatura e presso descritas na monografa. Aps
alcanar o equilbrio, proceder anlise cromatogrfca
nas condies descritas.
Calcular a equao da reta por regresso linear, utilizando
o mtodo dos mnimos quadrados e, a partir dela, obter a
concentrao da substncia em exame na preparao da
amostra, indicada pelo intercepto da equao.
5.2.18 POLAROGRAFIA
A polarografa, mtodo analtico eletroqumico,
fundamenta-se na medida da corrente eltrica resultante
da eletrlise de substncias eletroativas (reduzveis
ou oxidveis) sob determinado potencial de eletrodo e
condies controladas. Em outras palavras, a tcnica
implica no registro do aumento da corrente em eletrodo
polarizvel, durante a eletrlise de substncia dissolvida
no meio eletroltico, em funo do aumento da tenso
aplicada ao sistema. O grfco desta evoluo da corrente
em relao tenso - o polarograma - fornece informaes
quali e quantitativas sobre constituintes eletro-redutveis
ou eletro-oxidveis da amostra.
Dentre as variantes de metodologia polarogrfca, a
mais simples a tcnica em corrente contnua. Requer, a
exemplo da potenciometria, o emprego de dois eletrodos, o
de referncia (geralmente eletrodo de calomelano saturado,
ECS) e o microeletrodo indicador (geralmente eletrodo de
mercrio gotejante, EMG). Em alguns casos emprega-se
um terceiro eletrodo, auxiliar. O ECS - de elevada rea
superfcial - fornece potencial constante durante o ensaio,
enquanto o EMG - gotas de mercrio de dimenses
reprodutveis fuindo periodicamente da extremidade de
capilar ligado ao reservatrio do metal - assume o potencial
que lhe conferido pela fonte externa. O equipamento
polarogrfco compreende, alm dos eletrodos, a clula
polarogrfca (cuba de eletrlise), fonte de alimentao
varivel, dotada de voltmetro e microampermetro
(galvanmetro) e registrador grfco ou digital.
118 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
De forma simplifcada, a tcnica consiste na dissoluo da
amostra (o mtodo tem sensibilidade para concentraes
de espcie eletroativa na faixa de 10
-2
a 10
-4
M) em
eletrlito de suporte, responsvel pela manuteno de
pequena corrente residual, mas que se mostra inerte na
faixa de potencial de transformao da amostra (janela
de potencial). Inicialmente, sem aplicao de tenso na
fonte, (potenciostato de preciso), a tenso fornecida ao
microeletrodo nula e no haver indicao de corrente
no microampermetro. O crescente aumento de tenso
far com que pequeno potencial alcance os eletrodos.
Sob esta tenso, ainda reduzida, eventuais impurezas do
eletrlito suporte e pequenas concentraes de oxignio
podem sofrer reduo no EMG (catodo, neste caso),
reduzindo-se e provocando a indicao de pequena
passagem de corrente. A elevao progressiva da tenso
aplicada acentuar o processo de reduo e o aumento
quase proporcional da corrente. Atinge-se, fnalmente, o
potencial necessrio reduo do analito na soluo da
amostra, o que se refete em elevao acentuada da corrente
lida no microampermetro (galvanmetro) e registrada no
polarograma. H, contudo, limite para a proporcionalidade
da elevao tenso-corrente. Enquanto a corrente se eleva
(e a reduo se processa), ocorre diminuio progressiva
da concentrao da espcie eletroativa original junto
superfcie do eletrodo. Em dado momento - a velocidade
da eletrlise sendo constante - tal concentrao atinge
nvel insufciente para permitir elevao adicional da
corrente e esta ltima passa a ser limitada pela difuso
com a qual a espcie eletroativa consegue se difundir no
seio (interior) da soluo eletroltica para a superfcie do
EMG. Surge o patamar observado no polarograma (Figura
1), sendo a corrente medida - ento denominada corrente
de difuso um parmetro proporcional concentrao
de espcie eletroativa na amostra (aspecto quantitativo
da polarografa). Superado determinado nvel de tenso, a
corrente volta a se elevar. Esse aumento causado pela
reao do eletrlito suporte. Sua presena, em elevadas
concentraes, impede que as molculas eletroativas da
amostra alcancem o microeletrodo por migrao eltrica e
assegura, por isso, que a corrente limite seja efetivamente
regulada apenas por difuso.
Ao se empregar um microeletrodo de mercrio gotejante, a
superfcie do eletrodo constantemente renovada (forma-
se gota nova a cada 3-5 segundos), ocorrendo, da, variao
na corrente medida dentro de dado intervalo; a corrente
mais baixa quando a gota se forma, chegando ao mximo
no instante da queda. O fenmeno explica a forma dente
de serra caracterstica da onda polarogrfca.
Figura 1- Polarograma de espcie eletrorredutvel.
POLAROGRAMA
ilustrado na Figura 1 um polarograma tpico (EMG),
caracterizado por 4 fases distintas. O segmento A devido
corrente capacitiva, i
c
, incorporada corrente faradaica,
i
f
, resultante da oxidao ou reduo de impurezas do
eletrlito suporte, ou da amostra e pequenas concentraes
de oxignio, quando esse no retirado por completo da
soluo. O conjunto destas correntes denomina-se corrente
residual, i
r
(i
r
= i
c
+ i
f
). No segmento B do polarograma
ocorre a corrente faradaica, i
f
, devida converso da
substncia sob ensaio. A eletrodecomposio leva escassez
desta substncia junto ao microeletrodo, verifcando-se o
patamar (segmento C) onde aparece a corrente limite, i
l
.
Esta compreende a soma das correntes residual e de difuso
(i
1
= i
r
+ i
d
) em que a corrente de difuso - proporcional
concentrao da espcie eletroativa na amostra - tem seu
valor determinado por:
i
d
= i
l
+ i
r
Duas outras correntes indesejveis - a de migrao e a de
conveco - podem incorporar a corrente limite. A primeira
suprimida pelo emprego de eletrlito suporte inerte na
faixa de potencial empregada, em concentraes, no
mnimo, 100 vezes maiores que as da espcie eletroativa.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 119 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
A corrente de conveco, por sua vez, eliminada pela no
agitao da soluo.
Finalmente, o segmento D do polarograma, no qual
ocorre reverso da proporcionalidade tenso-corrente,
corresponde reduo de outras espcies eletroativas,
quando presentes, ou, mais frequentemente, eletrlise do
suporte.
Equao de Ilkovic
A equao de Ilkovic estabelece relaes entre variveis
compreendidas na medida polarogrfca e a corrente de
difuso no EMG:
em que
i
d
= corrente de difuso, em uA
708 = constante dependente de diversos parmetros,
incluindo a unidade adotada para as variveis, dimenso da
gota de mercrio e instante da medida de i
d
,
n = nmero de eltrons necessrios reduo ou oxidao
de uma molcula ou on de substncia eletroativa,
D = coefciente de difuso, em cm
2
/s,
C = concentrao de substncia eletroativa, em milimoles/L,
m = massa do fuxo de mercrio, em mg/s,
t = tempo de vida da gota, em s.
A constante 708 - englobando constante natural e o valor do
faraday - estabelecida para operao a 25
o
C e aplicvel
polarografa de corrente contnua amostrada, na qual, em vez
do registro contnuo de corrente, efetua-se apenas a leitura da
corrente ao trmino da vida da gota de mercrio, permitindo
obteno de polarograma linear. Entretanto, ao empregarem-
se instrumentos dotados de amortecedor de dente de serra
no registrador, considera-se a corrente mdia dos pulsos. A
corrente de difuso obtida segundo a equao de Ilkovic passa
a ser a mdia para toda a vida da gota de mercrio. Neste caso
a constante adquire o valor 607.
As variveis compreendidas na equao de Ilkovic
devem ser controladas para que a corrente de difuso
seja efetivamente proporcional concentrao de espcie
eletroativa na amostra analisada. Alguns ons e molculas
orgnicas em soluo aquosa modifcam seu coefciente
de difuso razo de 1 a 2% para cada grau centgrado
aumentado, tornando necessrio que a clula polarogrfca
tenha sua temperatura controlada com tolerncia de 0,5
o
C Os parmetros m e t, relacionados com dimenso e
velocidade de renovao da gota de mercrio, dependem
da geometria do capilar, sendo a corrente de difuso
proporcional raiz quadrada da altura da coluna de
mercrio. Alturas adequadas - medindo-se da extremidade
do capilar at o nvel de mercrio no reservatrio - situam-
se entre 40 e 80 cm. O dimetro interno do capilar neste
caso de 0,04 mm para comprimentos entre 6 e 15 cm. A
altura exata do capilar ajustada para permitir a formao
de uma gota a cada 3-5 segundos, com circuito aberto e
capilar imerso no eletrlito sob ensaio.
Assim, se durante um ensaio em particular todos os
parmetros - exceo da concentrao da espcie
eletroativa - forem mantidos constantes, a equao de
Ilkovic pode ser escrita como
i
d
= KC
em que K representa o conjunto de variveis mantidas
constantes.
Esta relao direta entre corrente de difuso e concentrao
usualmente adotada mediante a determinao prvia
da corrente de difuso de soluo padro de referncia,
de concentrao conhecida. Em seguida, sob condies
idnticas, determina-se a corrente de difuso da amostra e,
fnalmente, sua concentrao:
em que P e A correspondem, respectivamente, a padro e
amostra.
Uma vez que polargrafos, em sua maioria, so dotados
de registradores automticos, mais fcil determinar
grafcamente correntes de difuso pela medida da altura da
onda polarogrfca (ver Figura 1). Os valores anotados,
em cm, podem ser diretamente aplicados frmula, sem
necessidade de sua converso em unidades de corrente
eltrica:
A
P
A
P
C
C
A
A
=
em que A
P
e A
A
correspondem s alturas das ondas
polarogrfcas do padro e da amostra, respectivamente.
Potencial de meia-onda
A medida da altura da onda polarogrfca para fns de
anlise quantitativa deve ser efetuada traando-se linhas
retas rentes aos picos das oscilaes da corrente residual
e da corrente limite e unindo-se, por meio de terceira reta
paralela ao eixo das abcissas, os prolongamentos das duas
primeiras. A reta vertical traada passando pelo ponto de
infexo da onda polarogrfca, correspondendo metade
da distncia entre a corrente residual e a corrente limite (I
= l / 2i
d
). A projeo desta reta sobre o eixo das ordenadas
fornece o chamado potencial de meia-onda, parmetro
empregado para caracterizar substncias eletroativas
(aspecto qualitativo da polarografa). O potencial de
meia-onda, E
1/2
, dado em volts versus ECS (eletrodo de
referncia), salvo quando houver especifcao diferente, e
seu valor como parmetro de identifcao decorre de sua
independncia da concentrao e caractersticas do EMG.
Entretanto, este parmetro varia em funo da composio,
pH e temperatura do meio eletroltico. Cabe ressaltar que,
para os equipamentos modernos, a medida da altura da onda
polarogrfca pode ser feita automaticamente empregando
programas especfcos para aquisio e processamento de
dados.
120 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Remoo de oxignio
O oxignio reduzido no EMG em duas etapas,
convertendo-se inicialmente em perxido de hidrognio
e, em seguida, em gua. O fato de tais reaes ocorrerem
em potenciais mais negativos que zero volts, versus ECS,
podendo assim interferir com a onda polarogrfca da
amostra, torna necessrio eliminar o gs dissolvido na
soluo previamente determinao. A melhor forma
consiste em borbulhar nitrognio isento de oxignio
atravs da soluo durante um perodo de 10 a 15 minutos
imediatamente antes do ensaio, tomando a precauo de
previamente saturar o nitrognio (para evitar alteraes na
soluo eletroltica devidas evaporao) borbulhando-o
atravs de pequeno volume de soluo eletroltica em
recipiente separado.
importante manter a cuba eletroltica parada e sem
vibraes durante o registro polarogrfco com o intuito
de se evitar a formao de correntes de conveco. Em
consequncia, necessrio retirar o tubo de nitrognio
da soluo durante o registro, e deixar o tubo sobre a
superfcie da soluo para preencher a parte superior da
clula polarogrfca com nitrognio (N
2(g)
) prevenindo,
assim, a entrada de ar na clula polarogrfca. Solues
alcalinas podem ser desoxigenadas pela adio de bissulfto
de sdio, desde que este no interaja com integrantes da
soluo eletroltica.
Mximo polarogrfco
Efetuada a reduo da espcie eletroativa (EMG
catodizado), muitas vezes a onda polarogrfca eleva-se
acentuadamente, muitas vezes, antes de cair, de forma
igualmente acentuada, at o valor da corrente limite.
O fenmeno denominado mximo polarogrfco e a
corrente correspondente recebe o nome de corrente de
adsoro (i
a
). Traz o inconveniente de difcultar a medida
da onda polarogrfca (corrente de difuso) e suas causas
- ainda pouco esclarecidas - compreendem a adsoro de
eletrlito superfcie da gota de mercrio. A eliminao
do mximo polarogrfco , contudo, facilmente efetuada
mediante adio de quantidades diminutas de determinados
tensoativos (supressores de mximo) ao meio eletroltico.
Sobressaem, para tal fm, o uso de soluo de gelatina a
0,005% (p/v) e soluo de vermelho de metila a 0,01%
(p/v), entre outras.
Advertncia
Vapores de mercrio so txicos. Ao manusear o metal,
trabalhar em rea ventilada e evitar derrames que, caso
ocorram, devem ser imediata e cuidadosamente recolhidos.
POLAROGRAFIA DE PULSO
Polarografa de pulso consiste em uma variante de tcnica,
superior, pela preciso e sensibilidade, polarografa de
corrente contnua no doseamento e na identifcao de
elevado nmero de substncias em baixas concentraes,
incluindo elementos de trao, metablitos e, evidentemente,
frmacos. Sua sensibilidade, cerca de 10 vezes mais
elevada que a da polarografa DC, permite determinaes
na ordem de 10
-6
M.
Figura 2 - Medida da corrente em relao ao tempo na
polarografa de corrente contnua (A); na polarografa de
pulso (B); e na polarografa de pulso diferencial (C).
Em lugar da aplicao linearmente progressiva de potencial
e medida contnua da corrente desenvolvida, a polarografa
de pulso compreende a aplicao de pulsos de potencial
crescente ao EMG, coincidentes com o perodo fnal
de vida das gotas de mercrio, cada pulso apresentando
potencial ligeiramente superior ao anterior. A corrente, por
sua vez, amostrada no instante fnal de durao do pulso
de potencial, perodo no qual a corrente capacitiva adquire
valor praticamente nulo e a corrente residual se compe
quase que exclusivamente da corrente de difuso.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 121 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Figura 3 - Polarograma obtido na
polarografa de pulso diferencial.
Por outro lado, a tcnica de pulsos no provoca diminuio
acelerada da camada de difuso (concentrao de espcies
eletroativas junto ao eletrodo), propiciando a obteno de
correntes de difuso mais elevadas para concentraes
equivalentes. Da o aumento de sensibilidade inerente
tcnica. Outro aspecto favorvel da polarografa de pulso
a maior facilidade na medida da corrente limite, isenta de
oscilaes, ao contrrio do que ocorre na polarografa de
corrente contnua.
Na polarografa de pulso diferencial, pulsos constantes,
de pequena amplitude, so sobrepostos a uma rampa de
potencial de tenso linearmente crescente. A medida da
corrente efetuada duas vezes a cada pulso - imediatamente
antes da aplicao do pulso e, novamente, em seu instante
fnal - registrando-se apenas a diferena entre os dois valores
medidos (Figura 2). O registro grfco deste sistema de
medida diferencial fornece curva semelhante derivada da
onda polarogrfca, mostrando pico caracterstico (Figura
3). O potencial do pico polarogrfco corresponde a E
1/2

- AE/2 em que AE representa a altura do pico. Graas
natureza do polarograma, que apresenta picos em vez
de ondas polarogrfcas tradicionais, a polarografa de
pulso diferencial propicia resoluo mais elevada, a
ponto de permitir determinaes simultneas de espcies
eletroativas com potenciais de meia-onda prximos entre
si, em concentraes da ordem de 10
-7
M.
5.2.19 DETERMINAO DO pH
DETERMINAO POTENCIOMTRICA DO pH
O valor de pH defnido como a medida da atividade
do on hidrognio de uma soluo. Convencionalmente
usada a escala da concentrao de on hidrognio da
soluo. A gua um eletrlito extremamente fraco, cuja
autoionizao produz on hidrnio (hidrognio hidratado)
e on hidrxido:
H
2
O + H
2
O H
3
O
+
+ OH
-
As concentraes do on hidrnio nas solues aquosas
podem variar entre limites amplos, que experimentalmente
vo de 1 a 10-14 M, que defnida pela simplifcada
relao:
pH = - log [H
3
O
+
]

= log 1/[H
3
O
+
],
Desta forma, a escala de pH uma escala invertida em
relao s concentraes de on hidrnio, ou seja, quanto
menor a concentrao de on hidrnio, maior o valor do
pH.
A determinao potenciomtrica do pH feita pela
medidada diferena de potencial entre dois eletrodos
adequados, imersos na soluo em exame. Um destes
eletrodos sensvel aos ons hidrognio e o outro o
eletrodo de referncia, de potencial constante.
A equao que expressa a medida potenciomtrica de uma
clula :
pH = pH
t
= (E E
t
)/ K,
em que
E = potencial medido quando a clula contm a soluo
amostra,
Et = potencial medido quando a clula contm a soluo
tampo,
pH = valor de pH na soluo amostra
pHt = valor de ph na soluo tampo, e
K = variao do potencial por unidade de variao de pH -
teoricamente equivale a 0,0591631 + 0,000198 (t25), em
que t corresponde temperatura na qual se opera.
O valor de pH expresso pela equao em relao ao pH
da soluo padro (pHp) e determinado em peagmetro
utilizando eletrodo de vidro.
Os aparelhos comercialmente utilizados para a
determinao de pH so instrumentos potenciomtricos,
providos de amplifcadores eletrnicos de corrente com
clula de vidro-calomelano, os quais so capazes de
reproduzir valores correspondentes a 0,02 de unidades
de pH. A escala de pH calibrada no s em milivolts,
mas tambm em unidades correspondentes de pH. Dessa
forma, no h necessidade de se aplicar a equao acima,
que traduz a medida eletromtrica de pH. Uma vez que as
medidas de atividade hidrognica so sensveis a variaes
de temperatura, todos os medidores de pH so equipados
com ajuste eletrnico de temperatura.
Solues-tampo para calibrao do medidor de pH
So empregadas visando aferio do aparelho, permitindo
linearidade nas respostas em relao s alteraes de
potencial observadas. As mais importantes so: tetraoxalato
de potssio 0,05 M, fosfato equimolar 0,05 M, tetraborato
de sdio 0,01 M, carbonato de sdio e hidrxido de clcio
saturado a 25 C.
As solues-tampo so preparadas da seguinte maneira:
Tetraoxalato de potssio, 0,05 M Reduzir o tetraoxalato
de potssio a p fno e dessecar em dessecador com slica.
Dissolver exatamente 12,71g de KH
3
(C
2
O
4
)2H
2
O em gua
para perfazer 1000 ml.
122 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Biftalato de potssio, 0,05M Reduzir o biftalato de
potssio a p fno e dessecar a 110
o
C at peso constante.
Dissolver exatamente 10,21g de KHC
8
H
4
O
4
, previamente
dessecado a 100 C durante 1 hora, em gua, para perfazer
1000 ml.
Fosfato equimolar, 0,05M Reduzir o Na
2
HPO
4
e
KH
2
PO
4
a p fno e dessecar a 110
o
C at peso constante.
Dissolver 3,55g de Na
2
HPO
4
e 3,40g de KH
2
PO
4
, em gua,
para perfazer 1000 ml.
Tetraborato de sdio, 0,01M - Dessecar o tetraborato
de sdio em dessecador contendo soluo aquosa de
brometo de sdio at peso constante. Dissolver 3,81g de
Na
2
B
4
O
7
10H
2
O, em gua, para perfazer 1000 ml. Evitar
absoro de dixido de carbono.
Hidrxido de clcio, saturado a 25C Reduzir o hidrxido
de clcio a p fno e dessecar com slica em dessecador
at peso constante. Transferir 5 g a balo volumtrico e
adicionar gua at 1000 ml. Agitar bem e manter em
temperatura de 25
o
C 2
o
C, para adequada saturao
(aproximadamente 0.02 M). Decantar a 25C antes de usar.
Proteger de modo a evitar absoro de dixido de carbono.
Carbonato de sdio Dessecar o carbonato de sdio
em dessecador com slica gel at peso constante. Pesar
exatamente 2,10 g. Dessecar em estufa de 300 a 500 C at
peso constante. Pesar 2,65 g. Dissolver ambas as amostras
em gua at 1000 ml.
Tais solues devem ser recm-preparadas com gua
isenta de dixido de carbono e empregadas em prazo de
trs meses, tomando-se cautela para evitar o crescimento
de fungos e bactrias. Se aceita o emprego de conservantes
desde que no interfra na medio potenciomtrica do pH.
A gua utilizada no preparo das solues deve ser
recentemente destilada, aquecida ebulio por, no mnimo,
15 minutos, resfriada e mantida em recipiente impermevel
a dixido de carbono. Preparar, individualmente, as seis
solues-padro e armazen-las em frascos de vidro ou de
polietileno adequados. Observar o prazo de validade das
solues, uma vez que o pH sofre alteraes com o passar
do tempo.
Tabela 1 Relao entre as temperaturas e os valores de pH das solues-tampo
para calibrao do medidor de pH
Temperatura
(
o
C)
Tetraoxalato
de potssio
0,05M
Biftalato
de potssio
0,05M
Fosfato
equimolar
Tetraborato
de sdio
0,01M
Hidrxido de
clcio saturado
a 25C
Carbonato
de sdio
10 1,67 4,00 6,92 9,33 13,00 10,18
15 1,67 4,00 6,90 9,27 12,81 10,12
20 1,68 4,00 6,88 9,22 12,63 10,07
25 1,68 4,01 6,86 9,18 12,45 10,02
30 1,68 4,01 6,85 9,14 12,30 9,97
35 1,69 4,02 6,84 9,10 12,14 9,93
40 1,70 4,03 6,84 9,07 11,99 -
PROCEDIMENTO
Aferio do peagmetro
Retirar o bquer contendo soluo de KCl na qual est
mergulhado o eletrodo quando o medidor no est em uso;
Lavar o eletrodo com jatos de gua destilada e enxugar
com papel fltro;
Imergir o eletrodo em soluo tampo de referncia,
verifcando-se a temperatura em que se vai operar;
Ajustar o valor de pH at o valor tabelado, mediante o
valor de calibrao;
Lavar o eletrodo com vrias pores da segunda soluo
tampo de referncia, imergir o eletrodo e verifcar o
valor de pH registrado. O valor de pH no deve apresentar
variaes que superem 0,07 do valor tabelado para a
segunda soluo padro. H aparelhos que possuem
frascos acoplados com detergentes aninicos, empregados
como solues de lavagem entre cada uma das operaes
de aferio dos valores de pH. A gua tambm se presta a
essa funo;
Se no houver preciso nas medidas, verifcar possveis
danos nos eletrodos e troc-los.
Determinao do pH na soluo amostra
Aps a aferio conveniente, lavar o eletrodo com gua
(ou solues prprias) e com vrias pores da soluo
amostra. Para diluio das amostras, usar gua destilada
isenta de dixido de carbono;
A primeira determinao fornece valor varivel, havendo
necessidade de proceder a novas leituras. Os valores
encontrados posteriormente no devero variar mais do
que 0,05 de unidade em trs leituras sucessivas;
Para determinaes que exijam alta preciso, as
temperaturas das solues-tampo e amostra, dos eletrodos
e das guas de lavagem no devem estar acima de 2 C
entre si. Assim, para que se reduzam os efeitos de histerese
trmica ou eltrica dos eletrodos, as solues devem estar
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 123 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
mesma temperatura por, no mnimo, 30 minutos antes do
incio da operao;
importante que, aps a utilizao do aparelho, se conserve
o eletrodo em soluo apropriada, normalmente de KCl.
Contaminaes das solues-estoque devem ser evitadas
pela adoo de procedimentos sistemticos, tais como o
fechamento imediato dos frascos contendo as solues,
a fm de prevenir introdues acidentais de pipetas ou
bastes, o uso de pipetas individuais para cada soluo.
DETERMINAO COLORIMTRICA DO pH
Baseia-se no emprego de solues indicadoras ou de papis
indicadores, que tem a propriedade de mudar de colorao
conforme a variao do pH. Neste caso, trata-se de medida
aproximada, indicando apenas uma faixa de valores,
mais ou menos larga, conforme o indicador empregado.
A determinao levada a efeito adicionando-se gotas da
soluo indicadora soluo em exame ou umedecendo-se
papis indicadores com a soluo em exame e observando-
se a mudana de colorao. As cores desenvolvidas pelos
indicadores em diversas faixas de pH esto relacionadas
em Indicadores (14.1)
ACIDEZ E ALCALINIDADE: ENSAIOS RPIDOS
Uma soluo considerada neutra quando no modifca a
cor dos papis azul e vermelho de tornassol, ou quando o
papel indicador universal adquire as cores da escala neutra,
ou quando 1 ml da mesma soluo se cora de verde com
uma gota de azul de bromotimol SI (pH 7,0).
considerada cida quando cora em vermelho o papel
azul de tornassol ou 1 ml se cora de amarelo por uma gota
de vermelho de fenol SI (pH 1,0 a 6,6).
considerada fracamente cida quando cora levemente
de vermelho o papel azul de tornassol ou 1 ml se cora de
alaranjado por uma gota de vermelho de metila SI (pH 4,0
a 6,6).
considerada fortemente cida quando cora de azul o
papel de vermelho de congo ou 1 ml se cora de vermelho
pela adio de uma gota de alaranjado de metila SI (pH
1,0 a 4,0).
considerada alcalina quando cora de azul o papel
vermelho de tornassol ou 1 ml se cora de azul por uma gota
de azul de bromotimol SI (pH 7,6 a 13,0).
considerada fracamente alcalina quando cora de azul o
papel vermelho de tornassol ou 1 ml se cora de rosa por
uma gota de vermelho de cresol SI (PH 7,6 a 8,8).
considerada fortemente alcalina quando se cora de azul
por uma gota de timolftalena SI (pH 9,3 a 10,5) ou de
vermelho por uma gota de fenolftalena SI (pH 10,0 a 13,0).
5.2.20 DETERMINAO DE
GUA
Muitas substncias farmacopeicas encontram-se na forma
hidratada ou contm gua absorvida, tornando-se relevante
sua determinao por mtodos especfcos como o mtodo
volumtrico (5.2.20.1); mtodo da destilao azeotrpica
(5.2.20.2), ou mtodo semimicro (5.2.20.3), sendo indicado
na monografa especifca para cada substncia.
5.2.20.1 MTODO VOLUMTRICO
Determinar o teor de gua, pelo mtodo direto, salvo quando
houver outra especifcao na monografa especifca da
substncia em analise.
MTODO DIRETO
Baseia-se na reao quantitativa da gua com soluo
anidra de dixido de enxofre e iodo em presena de uma
soluo tampo que reage com ons hidrognio.
Na soluo volumtrica, original, conhecida como
Reagente de Karl Fischer, o dixido de enxofre e o iodo
so dissolvidos em piridina e metanol. A amostra pode
tanto ser titulada diretamente (mtodo direto) quanto por
retorno (mtodo indireto).
Aparelhagem
Admite-se o emprego de qualquer equipamento que
permita a excluso adequada da umidade atmosfrica e a
determinao do ponto fnal da titulao. Para substncias
incolores, possvel detectar-se o ponto de equivalncia
pela mudana de cor do reagente, de amarelo canrio para
mbar. O inverso observado ao se adotar a titulao por
retorno. Todavia, mais frequente e preciso determinar-se
o fnal da titulao eletrometricamente. Compreende o uso
de dispositivo eltrico capaz de gerar diferena de potencial
de 200 mV entre dois eletrodos de platina imersos na
soluo a titular. Ao ser atingido o ponto de equivalncia,
ligeiro excesso de reagente provoca elevao brusca do
fuxo de corrente entre 50 a 150 A, durante 30 segundos a
30 minutos, dependendo da natureza da amostra (o perodo
menor quando a substncia solvel no reagente).
Alguns tituladores automticos possuem mecanismo para
fechamento imediato da vlvula que controla a entrada do
titulante, assim que detecta a mudana de potencial. Os
aparelhos comercialmente disponveis possuem um sistema
fechado que consiste de uma ou duas buretas automticas,
copo de titulao, agitador magntico e eletrodo especifco.
O ar no sistema mantido seco, com o uso de dessecantes
adequados.
Reagente de Karl Fischer
Adicionar 125 g de iodo a uma soluo contendo 670 mL
de metanol e 170 mL de piridina. Deixar resfriar. Transferir
100 mL de piridina para proveta de 250 mL, mantida fria
124 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
em banho de gelo, passar corrente de dixido de enxofre
atravs do solvente at que seu volume atinja 200 mL.
Lentamente, e sob agitao, adicionar essa soluo
mistura de iodo, fria, previamente preparada. Agitar at
completa dissoluo do iodo e aguardar 24 horas antes de
padronizar. Quando recm-preparada, a soluo reagente
neutraliza cerca de 5 mg de gua/mL, mas deteriora-se
com rapidez, portanto, recomenda-se a sua padronizao
imediatamente antes do uso, ou diariamente, quando em
uso contnuo. Proteger da luz quando em uso. Armazenar
o reagente sob refrigerao em frasco mbar, provido de
tampa esmerilhada hermtica. Como opo ao preparo do
reagente, pode-se recorrer a solues reagentes comerciais.
Tambm, podem ser utilizados reagentes comerciais que
contenham outros solventes, base diferente da piridina ou
outro lcool que no o metanol. Esses reagentes podem
ser solues individuais ou obtidas pela mistura de dois
reagentes provenientes de solues distintas. Quando a
monografa especifcar que o reagente deve ser diludo,
seguir as instrues do fabricante do produto. Como
diluente pode utilizar-se metanol ou outro solvente
adequado, como ter monoetlico de etilenoglicol.
Padronizao do reagente
Colocar quantidade sufciente de metanol. ou outro solvente
apropriado no frasco de titulao para cobrir os eletrodos e
adicionar quantidade sufciente de reagente para fornecer a
cor caracterstica da viragem ou a indicao de (100 50)
microamperes de corrente contnua quando da aplicao de
200 mV entre os eletrodos.
Para a determinao de traos de gua (menos de 1%),
prefervel usar reagentes com um fator de equivalncia de
gua inferior a 2,0, como o tartarato de sdio di-hidratado
(C
4
H
4
Na
2
O
6
.2H
2
O), previamente dessecado a 150 C,
por 3 horas. Pesar, rapidamente, de 150 a 350 mg do sal,
exatamente pesados, por diferena, no frasco de titulao
e titular at o ponto de equivalncia. O ttulo do reagente,
em mg de gua/mL de reagente, fornecido pela equao:
em que
18,02 = peso molecular da gua
230,08 = peso molecular do tartarato de sdio di-hidratado
p = massa, em mg, da tomada de ensaio de sal,
v = volume, em mL, de reagente consumido na titulao.
Para a determinao precisa de quantidade signifcativa
de gua (mais de 1%), utilizar gua como referncia.
Transferir de 25 a 250 mg de gua, exatamente pesados,
por diferena, para o frasco de titulao e titular at o ponto
de equivalncia. Calcular o ttulo do reagente, T, em mg de
gua/mL de reagente, pela equao
em que
p = massa, em mg, da gua,
v = o volume, em mL, de reagente consumido.
Procedimento
Salvo quando na monografa especifcar de modo diverso,
transferir 35 a 40 mL de metanol, ou outro solvente
apropriado, para o recipiente de titulao e titular com o
reagente padronizado at viragem visual ou eletromtrica,
com o intuito de eliminar toda a umidade que possa estar
presente (desconsiderar o volume consumido, pois ele no
entra nos clculos). Rapidamente, adicionar ao recipiente
de titulao quantidade, exatamente pesada da amostra,
que contenha 10 a 250 mg de gua, misturar e titular at
viragem visual ou eletromtrica. Calcular o teor de gua da
amostra, em mg, pela equao
Teor de gua (mg) = v T
em que
v = volume, em mL, de reagente consumido;
T = ttulo do reagente.
MTODO INDIRETO
Segue o mesmo principio do mtodo direto, porm, nesse
caso, incorpora-se excesso de reagente amostra e, aps
aguardar-se o tempo necessrio reao quantitativa,
titula-se o excesso de reagente com soluo padro de gua
em metanol. Essa tcnica, de uso irrestrito, especialmente
recomendada para substncias que liberam, lentamente,
seu contedo de gua.
Aparelhagem e reagente
Utilizar os mesmos descritos no mtodo direto.
Padronizao de soluo padro de gua (mtodo indireto)
Preparar soluo padro de gua diluindo 2 mL de gua
em quantidade sufciente de metanol, ou outro solvente
adequado, para completar 1000 mL. Padronizar essa
soluo conforme o procedimento anterior, utilizando
alquotas de 25 mL. Calcular o contedo de gua, em mg/
mL de soluo, pela equao
em que
v = volume, em mL, de reagente consumido,
T = ttulo do reagente, em mg/mL.
Procedimento
Quando na monografa assim especifcar, transferir
35 a 40 mL de metanol, ou outro solvente apropriado,
para o recipiente de titulao e titular com o reagente
padronizado at viragem visual ou eletromtrica, com o
intuito de eliminar toda a umidade que possa estar presente
(desconsiderar o volume consumido, pois ele no entra
nos clculos). Rapidamente, adicionar ao recipiente de
titulao, quantidade, exatamente pesada da amostra, que
contenha 10 a 250 mg de gua e um volume em excesso,
exatamente medido, do reagente. Deixar em repouso pelo
tempo necessrio para que a reao se complete e titular o
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 125 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
reagente no consumido com soluo padro de gua, at
viragem visual ou eletromtrica. Calcular o contedo, em
mg, de gua na tomada de ensaio pela equao:
em que
T = ttulo do reagente,
v = volume, em mL, do reagente adicionado em excesso
aps a incorporao da tomada de ensaio,
v = volume, em mL, de soluo padro de gua, necessrio
neutralizao do excesso de reagente,
v
r
= volume, em mL, de reagente por mL de soluo padro
de gua, determinado na padronizao dessa.
Caso seja especifcado na monografa, calcular o teor de
gua em porcentagem.
MTODO CULOMBIMTRICO
Para determinao culombimtrica da gua se utiliza o
reagente de Karl Fischer. O iodo, no entanto, no utilizado
como soluo volumtrica, mas obtido por oxidao
andica de uma soluo contendo iodeto. A clula de
reao constituda de um amplo compartimento andico
e de um restrito compartimento catdico; separados, entre
si, por um diafragma. Tambm, podem ser utilizados
outros tipos adequados de clulas de reao, como por
exemplo, sem o diafragma. Cada compartimento tem
um eletrodo de platina que conduz a corrente atravs da
clula. O iodo, que se produz no eletrodo andico, reage,
imediatamente, com a gua que est no compartimento.
Quando toda a gua for consumida, produz-se um excesso
de iodo que normalmente se detecta, eletrometricamente,
indicando o ponto fnal. No necessrio trocar o reagente
de Karl Fischer depois de cada determinao. Um requisito
necessrio para esse mtodo que cada componente da
amostra seja compatvel com os demais componentes e
que no produzam reaes secundrias. Normalmente as
amostras so transferidas ao recipiente de titulao, na
forma de solues, mediante a injeo atravs de um septo.
Os gases podem ser introduzidos na clula utilizando um
tubo de entrada adequado. A preciso do mtodo depende,
fundamentalmente, da eliminao da umidade no sistema. O
controle do sistema pode ser monitorado pela linha de base.
Esse mtodo , especialmente adequado, para substncias
qumicas inertes como hidrocarbonetos, alcois e teres.
Em comparao com o mtodo volumtrico de Karl
Fischer, a culombimetria um mtodo de microtitulao.
Aparelhagem
Admite-se o emprego de qualquer equipamento disponvel
comercialmente que possua um sistema totalmente
hermtico, equipado com eletrodos especfcos e agitador
magntico. O microprocessador do equipamento controla
o procedimento analtico e possibilita a visualizao dos
resultados. No necessrio proceder calibrao prvia
do equipamento, j que a corrente consumida pode ser
medida na forma absoluta.
Reagente
Utilizar o mesmo descrito no mtodo direto.
Preparao da amostra
Se a amostra for solvel, dissolver quantidade adequada,
exatamente pesada, em metanol anidro ou em outro
solvente adequado. Se a amostra for insolvel, pode
extrair-se a gua utilizando-se um solvente anidro que pode
ser injetado, em quantidade adequada, exatamente pesada,
na soluo do analito. Alternativamente, pode utilizar-se
tcnica de evaporao, em que a gua liberada coletada
em um tubo de ar corrente de gs inerte e anidro.
Procedimento
Com uma seringa seca, injetar rapidamente, a amostra
previamente preparada conforme descrito em Preparao
da amostra, medido com exatido e com um contedo
de gua estimado de 0,5 mg a 5 mg, ou de acordo com
as instrues do fabricante do equipamento. Misturar
e quantifcar por culombimetria, determinando o ponto
fnal eletrometricamente. Determinar o contedo de gua
na amostra diretamente na planilha do equipamento e
calcular a porcentagem presente da substncia. Realizar
a determinao em branco e proceder as correes
necessrias.
5.2.20.2 MTODO DA DESTILAO
AZEOTRPICA
semelhana do mtodo volumtrico, o azeotrpico
possibilita a determinao de gua contida em amostras de
natureza mltipla. A gua presente destilada com tolueno,
solvente no qual praticamente imiscvel, e separada em
tubo receptor apropriado aps resfriamento. Convm,
contudo, empregar tolueno previamente saturado com gua
para evitar resultados baixos devido dissoluo de gua
residual no solvente anidro.
APARELHO
Utilizar balo de fundo redondo (A) com capacidade para
500 mL, conectado por um tubo cilndrico (D) ao tubo
receptor (B) (Figura 1). As dimenses crticas das peas
do aparelho so: tubo cilndrico de 9 a 11 mm de dimetro
interno; tubo receptor com capacidade de 5 mL, e poro
cilndrica, com 146 - 156 mm de comprimento, graduada
em subdivises de 0,1 mL, de modo que o erro de leitura
no seja superior a 0,05 mL para qualquer volume indicado,
podendo, opcionalmente, ser provido de torneira. A parte
superior do tubo cilndrico liga-se, sempre, por meio de
juntas esmerilhadas, ao condensador de refuxo vertical (C)
de, aproximadamente, 400 mm de comprimento por, pelo
menos, 8 mm de dimetro interno.
Partes do balo e do tubo cilndrico podem ser guarnecidas
com tecido de amianto para maior isolamento trmico. O
126 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
calor para a destilao deve ser, preferivelmente, fornecido
por aquecedor eltrico dotado de controle por reostato ou
banho de leo.
Limpar o tubo receptor e condensador com mistura
sulfocrmica, enxaguar com gua e secar em estufa.
Introduzir no balo seco 200 mL de tolueno e
aproximadamente 2 mL de gua e destilar durante 2 horas.
Resfriar e, aps cerca de meia hora, medir o volume de
gua acumulado no tubo graduado.
PROCEDIMENTO
Adicionar ao balo quantidade de amostra, exatamente
pesada, que contenha de 2 a 4 mL de gua. Se a substncia
for de natureza pastosa, embrulh-la em folha de alumnio
de modo que a dimenso do pacote seja sufciente somente
para a sua passagem pelo gargalo do frasco. Se a substncia
induzir a ebulio, adicionar areia lavada e seca em
quantidade sufciente para cobrir o fundo do balo ou tubos
capilares de vidro, do tipo empregado para determinao
de ponto de fuso, vedados em uma das extremidades.
Adicionar 200 mL de tolueno, ligar o equipamento e
aquecer, Moderadamente, durante 15 minutos. Quando o
tolueno comear a ferver, regular o aquecimento para que
destile 2 gotas por segundo. Destilada praticamente toda a
gua, acelerar a velocidade de destilao para 4 gotas por
segundo. Concluda a destilao da gua, verter cerca de 10
a 15 mL de tolueno pela boca do condensador de refuxo
e prosseguir a destilao por mais 5 minutos. Remover a
fonte de calor, aguardar o resfriamento do tubo receptor
temperatura ambiente e deslocar eventuais gotculas de gua
retidas na parede do tubo receptor com o auxlio de arame
de cobre com extremidade envolta em borracha (ltex). Uma
vez concluda a separao das fases, ler o volume de gua
depositado no tubo receptor (descontando o volume inicial)
e calcular a porcentagem de gua na tomada de ensaio.
Figura 1- Aparelho para determinao de gua pelo mtodo azeotrpico.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 127 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
5.2.20.3 DETERMINAO DA GUA
PELO MTODO SEMIMICRO
A determinao da gua pelo mtodo semimicro
realizada em um aparelho de titulao de capacidade de
60 mL, munido de 2 eletrodos de platina, de um tubo
de admisso para o nitrognio, de uma rolha adaptada
extremidade de uma bureta e de um tubo de admisso
de ar protegido por um agente de secagem. A tomada de
ensaio introduzida por um tubo lateral munido de uma
rolha esmerilada. Durante a titulao, a agitao deve ser
assegurada mediante o auxlio de um agitador mecnico ou
atravs do borbulhamento de nitrognio seco.
O trmino da reao determinado pela intensidade da
amperagem. Um circuito apropriado, constitudo por
um potencimetro de aproximadamente 2000 , ligado
a uma pilha de 1,5 V, permite aplicar uma diferena de
potencial varivel. Essa ajustada de maneira a conduzir
uma corrente inicial fraca atravs dos eletrodos de platina
ligados em srie a um microampermetro. A agulha do
microampermetro desvia-se aps cada adio do reagente,
voltando imediatamente sua posio inicial. O fm
da reao indicado por um desvio que persiste por, no
mnimo, 30 segundos.
Utilizar o iodossulfuroso SR aps determinar seu
equivalente em gua. As solues e os reagentes utilizados
devem ser mantidos em condio anidra e preservados da
umidade atmosfrica durante o doseamento ou qualquer
manipulao.
O iodossulfuroso SR deve ser conservado ao abrigo da
luz, de preferncia num frasco munido de uma bureta
automtica.
As solues de iodossulfuroso SR, comercialmente,
disponveis apresentam (ou podem apresentar) uma
composio que difere da soluo de iodossulfuroso
SR por substituio da piridina por diversos compostos
bsicos. O emprego dessas solues reagentes deve ser
precedido de avaliao que permita, em cada caso, verifcar
estequiometria e ausncia de incompatibilidade entre a
substncia a ser ensaiada e o reagente. Salvo indicao
contrria, o Mtodo A deve ser utilizado.
Mtodo A. Introduzir no frasco de titulao cerca de 20 mL
de metanol anidro ou o solvente prescrito na monografa.
Adicione reagente iodossulfuroso SR soluo at a
viragem amperomtrica. Introduzir, rapidamente, a tomada
de ensaio, agitar durante 1 minuto e titular com a soluo
iodossulfuroso SR at nova viragem.
Mtodo B. Introduzir no frasco de titulao cerca de
10 mL de metanol anidro ou do solvente prescrito na
monografa. Adicionar iodossulfuroso SR at a viragem
amperomtrica. Introduzir, rapidamente, a tomada de
ensaio da substncia num estado de diviso conveniente,
e em seguida um volume de iodossulfuroso SR, sufciente
para obter um excesso de aproximadamente 1 mL. Nesse
caso, tambm, pode ser utilizado o volume prescrito
na monografa. Deixar em repouso em frasco fechado
e ao abrigo da luz durante 1 minuto ou durante o tempo
prescrito na monografa, agitando ocasionalmente. Titular
o excesso de iodossulfuroso SR com metanol anidro ou
com outro solvente prescrito na monografa, adicionado de
uma quantidade de gua conhecida e prxima de 2,5 g/L,
at regressar fraca corrente inicial.
5.2.21 ANLISE DE
SOLUBILIDADE POR FASES
A solubilidade de substncia pura em dado solvente,
temperatura constante, parmetro caracterstico da
substncia, podendo, pois, servir para fns de identifcao
e avaliao de grau de pureza. Nesse princpio, baseia-se a
anlise de solubilidade por fases. O procedimento consiste
na adio de pores crescentes de amostra a volumes
constantes de solvente no qual a substncia analisada
mostra apenas ligeira solubilidade, visando obteno de
soluo saturada dessa substncia. Uma vez promovido
o equilbrio do sistema - por agitao prolongada, sob
temperatura constante - determina-se o contedo total de
soluto na soluo sobrenadante (geralmente por tcnica
gravimtrica) e traa-se o diagrama de solubilidade
por fases, plotando a composio da soluo, em mg de
soluto por g de solvente (ordenadas), pela composio do
sistema, em mg de amostra adicionada por g de solvente
(abscissas). A Figura 1 ilustra diagrama desse tipo. Ao
longo do segmento AB, a totalidade do slido dissolve
e encontrada na soluo (inclinao corresponde
unidade). No ponto B a amostra satura a soluo e adies
subsequentes no acarretam aumento em sua concentrao.
A inclinao do segmento de reta BC , portanto, nula e a
interseo do prolongamento dessa reta com o eixo dos Y
fornece o valor da solubilidade da substncia.
Figura 1 Diagrama de solubilidade por fases de
amostra constituda por uma s substncia.
Se a amostra for constituda de duas substncias (uma
delas impureza da outra, por exemplo), o diagrama assume
a forma ilustrada na Figura 2. O segmento AB apresenta
inclinao unitria; o ponto B indica saturao da soluo
com relao a um dos componentes da amostra (geralmente
aquele que est presente em maior proporo); o segmento
BC indica a solubilizao do segundo componente e
o segmento CD a saturao da soluo com este ltimo
(inclinao nula).
128 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Figura 2 Diagrama de solubilidade por fases
de amostra contendo duas substncias.
O valor da inclinao do segmento BC - fase em
que somente o segundo componente solubilizado -
corresponde proporo deste componente na amostra. A
subtrao deste valor da unidade fornece o contedo do
primeiro componente na amostra, permitindo o emprego
da frmula (1-1).100 para a obteno do teor. A inclinao,
i, obtida pela frmula (Y
2
-Y
1
) / (X
2
-X
1
), em queY
1
,Y
2
e X
1
, X
2
correspondem, respectivamente, a projees
de pontos do segmento de reta BC sobre a ordenada
(composio da soluo) e a abcissa (composio do
sistema). A extrapolao do segmento BC fornece o limite
de solubilidade, S
1
, em mg de soluto por g de solvente,
do primeiro componente, enquanto o prolongamento da
reta do segmento CD at o eixo dos Y leva soma das
solubilidades dos dois componentes, S
1
+ S
2
.
A ocorrncia de desvios pronunciados nos pontos que
constituem os segmentos de reta do diagrama indica falta
de equilbrio no sistema, embora estes tambm possam
ser atribudos existncia de soluo slida ou a desvios
do comportamento terico. Se necessrio, a inclinao I
pode ser calculada por aproximao grfca ou a partir do
mtodo estatstico dos mnimos quadrados.
Uma peculiaridade da analise de solubilidade por fases no
ser tcnica aplicvel a misturas cujos componentes esto
presentes na amostra na proporo de suas solubilidades.
Neste caso particular, ambos os componentes promovem
saturao no mesmo ponto, fornecendo, como resultado,
diagrama de fases equivalente ao de substncia pura.
ESCOLHA DE SOLVENTE
A escolha de solvente para anlise de solubilidade por fases
baseada na solubilidade do componente presente em
maior proporo na amostra e no mtodo de doseamento
adotado para a determinao da concentrao da soluo
formada. Sendo mais usual a tcnica gravimtrica, convm
ao solvente apresentar volatilidade sufciente para permitir
sua evaporao a vcuo, mas insufciente para difcultar
operaes de transferncia e pesagem. Recomendam-se
solventes com ponto de ebulio entre 60
o
C e 150
o
C.
Em termos de solubilidade, conveniente que o solvente
apresente capacidade de solubilizao de amostra em
proporo no inferior a 4 mg/g nem superior a 50 mg/g.
A solubilidade tima compreende a faixa de 10 a 20 mg.
Recomendaes adicionais incluem a inrcia do solvente
frente aos componentes da amostra (prevendo-se, inclusive,
a possibilidade de formao de solvatos ou sais) e o
emprego de solvente de pureza e concentrao conhecida
(traos de impurezas afetam intensamente a solubilidade),
admitindo-se, contudo, o emprego de misturas.
APARELHAGEM
Compreende banho-maria termostatizado, frascos e
ampolas apropriadas e balana analtica, com preciso de
10 ug.
O banho dgua provido de termostato com tolerncia de
controle de temperatura no superior a 0,1
o
C, especialmente
na faixa de 25-30
o
C, usual para os ensaios. O banho
equipado com haste horizontal rotativa (25 rpm) provida
de garras fxadoras para as ampolas. Como alternativa,
pode ser usado vibrador (100 a 120 vibraes / segundo)
igualmente provido de garras fxadoras de ampolas.
A ampola - com capacidade para 15 mL - ao lado do
chamado frasco de solubilidade tambm empregado
nos ensaios, est ilustrada na Figura 3. Recipientes
de especifcao diferente so admissveis desde que
hermticos e apropriados tcnica descrita.
Figura 3 Ampola utilizada na anlise de solubilidade por fases.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 129 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
PROCEDIMENTO
Composio do sistema
Pesar com exatido um mnimo de 7 ampolas de 15 mL
rigorosamente limpas. Transferir quantidades crescentes
exatamente pesadas de amostra para cada ampola, de modo
que a primeira contenha quantidade apenas ligeiramente
menor que a solubilizvel em 5 mL de solvente e a ltima
contenha ligeiro excesso de amostra. Aps transferir 5,0
mL de solvente para cada ampola, resfri-las em mistura
de gelo seco e acetona e sel-las com maarico ar/gs,
tomando a precauo de guardar fragmentos de vidro
resultantes do processo.
Permitir s ampolas atingir a temperatura ambiente e pes-
las, juntamente com seus respectivos fragmentos de vidro.
Calcular a composio do sistema, em mg/g, para cada
ampola, pela frmula: 1000(M
2
-M
1
)/(M
3
-M
2
), em que M
2

corresponde massa da ampola contendo amostra; M
1
a
massa da ampola vazia e M
3
a massa da ampola contendo
amostra, solvente e eventuais fragmentos de vidro.
Equilbrio
O perodo necessrio ao estabelecimento de equilbrio
nos sistemas contidos nas ampolas varivel de acordo
com a natureza da amostra, mtodo de agitao (rotao
ou vibrao) e temperatura. A experincia indica prazo
mdio de 1 a 7 dias para agitao por vibrao e 7 a 14
dias para o processo rotacional. Para confrmar a promoo
de equilbrio, aquecer a penltima ampola da srie a 40
o
C com o intuito de obter supersaturao. O resultado
positivo se o ponto correspondente a esta ampola for
coerente com os demais no diagrama de fases. Todavia,
resultado diverso no signifca necessariamente no ter
sido atingido o equilbrio. H substncias com tendncia a
permanecer em soluo supersaturada e, sendo este o caso,
cabe a execuo de srie de anlises, variando-se o perodo
de espera com o fm de assegurar a coerncia dos pontos da
curva de solubilidade.
Composio da soluo
Atingido o equilbrio, colocar as ampolas em suporte
apropriado para que permaneam em posio vertical,
com os gargalos acima do nvel da gua do banho
termostatizado. Aguardar a decantao dos slidos nas
ampolas, abri-las e coletar 2,0 mL de cada uma por meio de
pipeta provida de chumao de algodo ou de outro material
capaz de atuar como fltro. Remover o material fltrante
da pipeta e transferir o lquido lmpido para frasco de
solubilidade (Figura 3) tarado e devidamente identifcado,
pesando cada frasco aps a operao. Esfriar os frascos em
banho de gelo seco e acetona e, em seguida, evaporar o
solvente sob presso reduzida. Aumentar gradativamente
a temperatura de evaporao, tomando a precauo de
no exceder o limite compatvel com a estabilidade da
amostra e dessecar o resduo at peso constante. Calcular
a composio da soluo em cada frasco, em mg/g, pela
frmula 1000 (P
3
-P
1
)/(P
2
-P
3
), em que P
3
corresponde
massa do frasco contendo o resduo da evaporao; P
1
a
massa do frasco de solubilidade vazio (tara) e P
2
a massa
do frasco contendo a soluo.
Traar diagrama de fases com base nos valores obtidos e
determinar a pureza porcentual da amostra em funo da
inclinao do segmento de reta.
APLICAO DA ANLISE DE SOLUBILIDADE POR
FASES NA PURIFICAO DE SUBSTNCIAS
Enquanto as solues obtidas no processo analtico descrito
contm essencialmente todas as impurezas presentes na
amostra em proporo aumentada em relao amostra
original, prestando-se - aps evaporao do solvente
determinao qualitativa das impurezas, a fase adequada,
pela elevada pureza, ao preparo de padres de referncia
para outros ensaios analticos.
Procedimento
Pesar quantidade apropriada de amostra e suspend-la em
solvente adequado de modo a - alcanado o equilbrio -
dissolver somente 10% do material. Fechar o frasco e
aguardar estabelecimento do equilbrio temperatura
ambiente (em geral, 24 horas so sufcientes). Em seguida,
recolher a soluo sobrenadante lmpida e evaporar,
temperatura ambiente ou prxima desta, at secura. Pelo
fato de a soluo conter as impurezas da amostra original,
obtm-se, por este procedimento, material em que a
proporo de impurezas encontra-se aumentada, sendo a
relao de enriquecimento aproximadamente igual razo
da massa da amostra pela massa de slidos dissolvidos no
volume de solvente empregado. Purifcar o resduo no
dissolvido por lavagem e secagem (padro de referncia).
5.2.22 ELETROFORESE
PRINCPIOS GERAIS
Por ao de um campo eltrico, as partculas carregadas
dissolvidas ou dispersas numa soluo eletroltica migram
em direo ao eletrodo de polaridade oposta. Na eletroforese
em gel, o deslocamento das partculas retardado pelas
interaes com o gel da matriz que constitui o meio de
migrao e comporta-se como um tamis molecular.
As interaes de oposio da fora eltrica e da tamizao
molecular resultam na taxa de diferencial de migrao
de acordo com o tamanho, forma e carga de partculas.
Devido s suas propriedades fsico-qumicas diferentes,
as diversas molculas contidas numa mistura migraro
a velocidades diferentes durante a eletroforese, fcando
assim separadas em fraes bem defnidas. As separaes
eletroforticas podem ser conduzidas em sistemas sem fase
de suporte (por exemplo, separao em soluo livre na
eletroforese capilar), e ou em meios estabilizados como
placas de camada fna, flmes ou gis.
130 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
ELETROFORESE DE FRONTEIRA, OU DIVISO, OU
LIMITE LIVRE, OU EM MOVIMENTO
Esse mtodo principalmente utilizado na determinao
de mobilidades, sendo as caractersticas experimentais
diretamente mensurveis e reprodutveis. Aplica-
se, sobretudo, a substncias de massa moleculares
relativamente elevadas, pouco difusveis. As divises so,
inicialmente, demarcadas por um processo fsico como a
refratometria ou a condutimetria. Aps a aplicao de um
campo eltrico defnido, durante um tempo determinado,
obtm-se novas divises e suas respectivas posies so
observadas. As condies operacionais possibilitam a
determinao das divises e dos constituintes.
ELETROFORESE EM SUPORTE, OU ELETROFORESE
DE ZONA
Esse mtodo usado apenas para amostras reduzidas. A
natureza do suporte, como papel, gel de agarose, acetato
de celulose, amido, agarose, metacrilamida ou gel misto,
introduz um nmero de fatores adicionais que modifcam
a mobilidade:
a) devido sinuosidade da canalizao do suporte,
distncia aparentemente percorrida que menor que a
distncia real;
b) certos suportes no so eletricamente neutros e, como o
meio constitui uma fase estacionria, pode algumas vezes
originar uma considervel corrente eletro-endosmtica
importante;
c) o aquecimento devido ao efeito de Joule pode produzir
certa evaporao do lquido do suporte, o que conduz,
por capilaridade, a um deslocamento da soluo das
extremidades para o centro; assim, a fora inica tende a
aumentar progressivamente.
A velocidade de migrao depende de quatro fatores
principais: mobilidade da partcula, corrente de eletro-
endosmtica, corrente de evaporao e intensidade
do campo. Por essas razes necessrio proceder em
condies experimentais bem determinadas e utilizar, se
possvel, padres de referncia.
Aparelhagem
Um aparelho de eletroforese consta de:
um gerador de corrente contnua de tenso controlvel e
de preferncia estabilizada;
uma cuba de eletroforese. Geralmente retangular, de vidro
ou de material plstico rgido, com dois compartimentos
separados, andico e catdico, que contm a soluo
tampo condutora. Em cada compartimento mergulha um
eletrodo, de platina ou de grafte, esses so conectados
por meio de um circuito devidamente isolado da fonte
de alimentao do terminal correspondente para formar,
respectivamente, o anodo e catodo, ligados por um circuito
convenientemente isolado ao borne correspondente do
gerador. O nvel do lquido nos dois compartimentos igual
para evitar o efeito de sifonagem. A cuba de eletroforese
deve ser equipada com uma tampa hermtica, permitindo
manter no seu interior uma atmosfera saturada de unidade
e atenuar assim, a evaporao do solvente durante a
migrao. Utiliza-se um dispositivo de segurana que corte
a corrente, quando se retira a tampa da cuba. Se a medida
de corrente eltrica exceder a 10 W prefervel resfriar o
suporte;
um dispositivo de suporte:
Eletroforese em tiras. Na eletroforese as tiras no suporte, so
previamente impregnadas com a mesma soluo condutora
e cada extremidade mergulhada no compartimento do
eletrodo. As tiras fcam bem estendidas, fxadas sobre
um suporte apropriado para evitar a difuso da soluo
condutora como, por exemplo, uma moldura horizontal,
um suporte em V invertido, ou uma superfcie uniforme,
com pontos de contato em intervalos adequados.
Eletroforese em gel. Na eletroforese em gel, o dispositivo
consiste numa placa de vidro, como, por exemplo, uma
simples lmina de microscpio, na qual se deposita uma
camada de gel aderente e de espessura uniforme em toda
a superfcie da lmina. O contato entre o gel e a soluo
condutora varia em funo do tipo do aparelho utilizado.
Evita-se qualquer condensao de umidade ou secagem da
camada slida;
um dispositivo de medio ou meios de deteco.
Procedimento. Colocar a soluo de eletrlito nos
compartimentos dos eletrodos. Colocar o suporte,
convenientemente embebido com a soluo do eletrlito
na cuba, de acordo com o tipo de aparelho utilizado. Traar
a linha de partida e aplicar a amostra de ensaio. Deixar
passar a corrente durante o tempo indicado; em seguida
desligar a corrente, retirar o suporte da cuba, secar e revelar.
ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA EM
TUBO CILNDRICO
Na eletroforese em gel de poliacrilamida, cilndrico (em
tubo) a fase estacionria constituda por um gel preparado
a partir de acrilamida e de N,N-metilenobisacrilamida. Os
gis so preparados em tubos, geralmente com 7,5 cm de
comprimento e 0,5 cm de dimetro interno (gel cilndrico);
uma nica amostra aplicada em cada tubo.
Aparelhagem. O aparelho constitudo de dois reservatrios
destinados a receber as solues tampo e construdos
com um material apropriado, tal como o polimetacrilato
de metila. Esto dispostos, verticalmente, um acima do
outro, e so munidos, cada um, de um eletrodo de platina.
Esses dois eletrodos so ligados a uma fonte de corrente
possibilitando operar com intensidade e tenso constantes.
Para gis cilndricos, o aparelho tem na base superior do
reservatrio um nmero de juntas de elastmero situadas a
igual distncia do eletrodo.
Procedimento. De um modo geral, recomenda-se
desgaseifcar as solues antes da polimerizao e utilizar
o gel imediatamente aps a sua preparao. Preparar
o gel segundo as indicaes da monografa. Colocar a
mistura de gel nos tubos de vidro apropriados, fechados
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 131 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
na extremidade inferior com uma rolha, at uma altura
igual em todos eles, distncia de cerca de 1 cm do bordo
superior do tubo. Evitar a introduo de bolhas de ar nos
tubos. Cubra a mistura com uma camada de gua a fm de
impedir o contato com o ar e deixar de repouso. A formao
do gel requer, geralmente, cerca de 30 minutos e est
completa quando aparece uma delimitao ntida entre o
gel e a camada aquosa. Eliminar a camada aquosa. Encher
o reservatrio inferior com a soluo tampo, prescrita e
remover as rolhas dos tubos. Encaixar os tubos nas juntas
do reservatrio superior de modo que a sua parte inferior
mergulhe na soluo tampo do reservatrio inferior e
ajuste de forma que o fundo dos tubos esteja imersos na
soluo tampo do reservatrio inferior. Delicadamente
encher os tubos na soluo do reservatrio inferior. Preparar
as solues problema e padro contendo o corante indicado
prescrito. Encher, cuidadosamente, os tubos com a soluo
tampo indicada. Aplicar as solues, cuja densidade
foi aumentada, por adio de sacarose, por exemplo,
superfcie do gel, utilizando um tubo diferente para cada
soluo. Colocar a mesma soluo tampo no reservatrio
superior. Ligar os eletrodos fonte de corrente e proceder
eletroforese, utilizando a corrente de intensidade ou de
tenso constante e temperatura prescrita na monografa.
Interrompa a corrente quando o indicador corado atingir
o reservatrio inferior. Retirar, imediatamente, os tubos e
proceder extruso do gel. Localizar a posio das bandas
nos eletroforetogramas segundo o procedimento indicado.
ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA
COM DODECILSULFATO DE SDIO (DSS-EGPA)
Campo de aplicao. A eletroforese em gel de
poliacrilamida utilizada para a caracterizao qualitativa
das protenas contidas em preparaes biolgicas, para
controles de pureza e determinaes quantitativas.
Finalidade. A anlise por eletroforese em gel um processo
adaptado identifcao e ao controle da homogeneidade
das protenas contidas em preparaes farmacuticas.
utilizada como rotina para avaliar a massa molecular das
subunidades proticas e determinar as subunidades que
compem as protenas purifcadas. No mercado existe uma
grande variedade de gis e reagentes prontos para serem
utilizados em vez dos que se descrevem a seguir, desde que
os resultados obtidos sejam equivalentes e que possam ser
satisfeitas as condies de validade descritas em Validao
do ensaio.
Caractersticas dos gis de poliacrilamida
As propriedades de tamis dos gis de poliacrilamida
esto relacionadas com a sua estrutura particular que a
de uma rede tridimensional de fbras e poros resultantes
da formao de ligaes cruzadas entre a bisacrilamida
bifuncional e as cadeias adjacentes de poliacrilamida. A
polimerizao catalisada por um gerador de radicais livres
composto de persulfato de amnia (PSA) e N,N,N,N-
tetrametiletilenodiamina (TEMED). O tamanho real dos
poros de um gel tanto menor quanto mais elevada for a
sua concentrao em acrilamida. Como a concentrao de
acrilamida do gel aumenta, a sua porosidade efetiva diminui.
A porosidade real de um gel defnida de modo operacional
pelas suas propriedades de tamis molecular, isso , a
resistncia que ele ope migrao das macromolculas.
Existem limites para as concentraes de acrilamida que
podem ser utilizadas. Em concentraes muito elevadas
os gis desfazem-se mais facilmente e tornam-se difceis
de manipular. Quando o tamanho dos poros de um gel
diminui, a velocidade de migrao de uma protena nesse
gel diminui, tambm. Ajustando a porosidade de um
gel, alterando a concentrao em acrilamida, possvel
otimizar a resoluo do mtodo para um determinado
produto proteico. Desse modo, as caractersticas fsicas de
um gel dependem, portanto, do seu teor em acrilamida e
em bisacrilamida. Alm da composio do gel, o estado
da protena constitui outro fator importante para a sua
mobilidade eletrofortica.
No caso das protenas, a mobilidade eletrofortica depende
do pK dos grupos com carga eltrica e do tamanho da
molcula. igualmente afetada pela natureza, concentrao
e pH do tampo, pela temperatura, intensidade do campo
eltrico e pela natureza do suporte.
ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA EM
CONDIES DESNATURANTES
O mtodo descrito a ttulo de exemplo aplicvel
anlise dos polipeptdeos monmeros de massa molecular
compreendida entre 14 000 e 100 000 daltons. possvel
ampliar esse intervalo por diferentes tcnicas (por exemplo,
pelos empregos de gis em gradiente ou de sistemas
tampo especiais), mas tais tcnicas no fazem parte
deste texto. A eletroforese em gel de poliacrilamida em
condies desnaturantes usando o dodecilsulfato de sdio
(DSS-EGPA) a tcnica de eletroforese mais utilizada para
avaliar a qualidade farmacutica dos produtos proteicos e
sobretudo o foco deste texto. De modo geral, a eletroforese
analtica das protenas realizada em gel de poliacrilamida
em condies que favorecem a dissociao das protenas nas
suas subunidades polipeptdicas e que limitam o fenmeno
de agregao. Utiliza-se frequentemente esse efeito do
dodecilsulfato de sdio (DSS) um detergente fortemente
aninico, para dissociar as protenas antes da sua aplicao
no gel, em combinao com o calor. Os polipeptdeos
desnaturados ligam-se ao DSS, adquirem cargas negativas
e caracteriza-se por uma relao carga/massa constante
qualquer que seja o tipo de protena considerada. Sendo
a quantidade de DSS ligada quase sempre proporcional a
massa molecular do polipeptdeo e independente da sua
sequncia, os complexos DSS-polipeptdeo migram nos
gis de poliacrilamida com mobilidades que so funo do
tamanho do polipeptdeo.
A mobilidade eletrofortica dos complexos detergente-
polipeptdeos resultantes apresenta sempre a mesma
relao funcional com a massa molecular. A migrao dos
complexos DSS , como seria de se prever, em direo ao
anodo velocidade mais elevada para os complexos de
baixa massa molecular do que para os de alta. , assim,
possvel determinar a massa molecular de uma protena a
partir da sua mobilidade relativa, aps comparao com
solues padro de valor de massa molecular conhecida
132 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
e a observao de uma banda nica constitui um critrio
de pureza. Todavia, as modifcaes eventuais na
constituio do polipeptdeo, por exemplo, uma N- ou
uma O-glicosilao, tm um impacto signifcante no
negligencivel sobre a massa molecular aparente de uma
protena, no se liga a uma molcula de carboidratos
de forma semelhante a um polipeptdeo. Com efeito, o
DSS no se liga da mesma maneira aos agrupamentos
glicdicos ou aos agrupamentos peptdicos, de modo que a
constncia da relao carga/massa deixa de ser verifcada.
A massa molecular aparente das protenas que sofreram
modifcaes ps-translacionais no refete realmente a
massa da cadeia polipeptdica.
Condies redutoras
A associao das subunidades polipeptdicas e a estrutura
tridimensional das protenas baseiam-se, muitas vezes,
na existncia de pontes dissulfeto. Um dos objetivos a
atingir na anlise DSS- EGPA em condies redutoras
romper essa estrutura por reduo das pontes dissulfeto.
A desnaturao e a dissociao completas das protenas
por tratamento com 2-mercaptoetanol ou com ditiotreitol
(DTT) provocam um desdobramento da cadeia
polipeptdica seguida de uma complexao com o DSS.
Nessas condies, a massa molecular das subunidades
polipeptdicas pode ser calculada por regresso linear com
a ajuda de padres de massa molecular apropriada.
Condies no redutoras
Para certas anlises, a dissociao completa da protena
em subunidades peptdicas no desejvel. Na
ausncia de tratamento pelos agentes redutores, como
o 2-mercaptoetanol ou o DTT, as pontes dissulfeto
covalentes permanecem intactas e a conformao
oligomrica da protena preservada. Os complexos DSS-
oligmero migram mais lentamente que as subunidades
DSS-peptdicas. Alm disso, as protenas no reduzidas
podem no ser, totalmente, saturadas em DSS e, por
consequncia, no se ligam ao detergente numa relao de
massa constante. Essa circunstncia torna a determinao
da massa molecular dessas molculas pelo DSS- EGPA
mais difcil que a anlise de polipeptdeos totalmente
desnaturados, pois, para que a comparao seja possvel
necessrio que os padres e as protenas desconhecidas
tenham confguraes semelhantes. Entretanto, a obteno
no gel de uma nica banda corada permanece como critrio
de pureza.
CARACTERSTICAS DA ELETROFORESE DE GEL
EM SISTEMA TAMPO DESCONTNUO
O mtodo eletrofortico mais divulgado para a
caracterizao das misturas complexas de protenas
fundamenta-se no emprego de um sistema tampo
descontnuo que inclui dois gis contnuos, mas distintos:
um gel (inferior) de separao ou de resoluo e um
gel (superior) de concentrao. Esses dois gis so de
porosidade, pH e fora inica diferentes. Alem disso, os
diferentes ons mveis so usados nos gis e nos tampes
do eletrodo. A descontinuidade do sistema tampo conduz
a uma concentrao de grande volume das amostras no gel
de concentrao e, portanto, a uma melhoria da resoluo.
Quando o campo eltrico aplicado, um gradiente de
tenso negativo instaura-se atravs da soluo da amostra
e arrasta as protenas do gel de concentrao para o gel
de empilhamento. Os ons glicinato contidos no tampo
do eletrodo seguem as protenas no gel de empilhamento.
Forma-se, rapidamente, uma zona de diviso mvel cuja
frente constituda pelos ons cloreto de alta mobilidade e a
parte de trs pelos ons glicinato mais lentos. Um gradiente
de alta tenso localizado instaura-se entre as frentes inicas
da cabea e da cauda e leva os complexos DSS-protena
a concentrarem-se numa banda muito estreita que migra
entre as fraes cloreto e glicinato.
Em larga escala, independentemente do volume da amostra
aplicado, o conjunto dos complexos DSS-protena sofre
um efeito de condensao e penetra no gel de separao
na forma de uma banda estreita, bem defnida, de alta
densidade proteica. O gel de empilhamento, de poros
largos, no retarda, geralmente, a migrao das protenas,
mas desempenha, principalmente, o papel de meio
anticonvequitivo. Na interface dos gis de empilhamento
e de separao, as protenas so confrontadas com um
brusco aumento do efeito de retardamento devido ao
pequeno dimetro dos poros do gel de separao. Quando
penetram no gel de separao, esse retardamento prossegue
devido ao efeito de tamis molecular exercido pela matriz.
Os ons glicinato ultrapassam as protenas cuja migrao
prossegue, ento, num meio de pH uniforme constitudo
pela soluo tampo de trometamina (TRIS) e pela glicina.
O efeito de tamis molecular conduz a uma separao dos
complexos DSS-polipeptdeo com base na sua respectiva
massa molecular.
PREPARAO DE GIS DE POLIACRILAMIDA DSS
VERTICAIS DE TAMPO DESCONTNUO
Montagem do molde
Com um detergente suave, limpar as duas placas de
vidro (por exemplo de tamanho 10 cm x 8 cm), o pente
de politetrafuoroetileno, os dois espaadores e o tubo de
borracha de silicone (por exemplo, dimetro de 0,6 mm x
350 mm), e enxaguar, abundantemente, com gua. Secar
todos os elementos com papel toalha ou tecido. Lubrifcar
os espaadores e o tubo com lubrifcante que no seja base
de silicone. Colocar os espaadores a 2 mm da borda ao
longo dos dois lados curtos e de um dos lados compridos da
placa de vidro. Esse ltimo corresponder ao fundo do gel.
Comear a instalar o tubo sobre a placa de vidro utilizando
um dos espaadores como guia. Atingida a extremidade
do espaador, dobrar o tubo com precauo para faz-lo
seguir o lado longo da placa de vidro. Mantenha o tubo
no seu lugar com um dos dedos, dobre-o de novo para
faz-lo seguir o segundo lado curto da placa, utilizar o
espaador como guia. Colocar a segunda placa no lugar,
alinhando-a, perfeitamente, sobre a primeira, e mantenha o
conjunto por presso manual. Colocar duas pinas em cada
um dos lados curtos do molde e depois, com precauo,
quatro outras pinas no lado longo que constituir a base
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 133 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
do molde. Verifcar se o tubo segue a borda das placas e
no se deslocou aps a colocao das pinas. O molde est
pronto e o gel pode ser colocado nele.
Preparao dos gis
Para os gis do sistema tampo descontnuo, recomenda-se
colocar primeiro o gel de separao e deix-lo polimerizar
antes de colocar o gel de concentrao, porque o teor em
acrilamida-bisacrilamida nos dois gis, no tampo e do pH
diferente.
Preparao do gel de separao. Num erlenmayer preparar
o volume apropriado de uma soluo de acrilamida de
concentrao desejada, usando os valores indicados na
Tabela 1. Misturar os componentes pela ordem indicada.
Antes de adicionar a soluo de persulfato de amnia
e a de tetrametiletilenodiamina (TEMED), fltrar, se
necessrio, por suco usando uma membrana de acetato
de celulose (dimetro dos poros; 0,45 m); mantenha sob
suco agitando a unidade de fltrao at no mais formar
bolhas na soluo. Adicionar as quantidades apropriadas
de soluo de PSA e de TEMED (Tabela 1), agitar e
introduzir, imediatamente, no espao que separa as duas
placas de vidro do molde. Deixar uma altura livre sufciente
para o gel de concentrao (altura de um dente do pente
mais 1 cm). Usando uma pipeta de vidro aflada, recubra,
com precauo, a soluo com lcool isobutlico saturado
de gua. Deixar polimerizar o gel em posio vertical,
temperatura ambiente.
Preparao do gel de empilhamento. Quando a
polimerizao terminar (cerca de 30 minutos), esgotar o
lcool isobutlico e lavar vrias vezes a superfcie do gel
com gua para eliminar completamente o lcool isobutlico
e, se necessrio, a acrilamida no polimerizada. Deixar o
mnimo de lquido na superfcie do gel e, eventualmente,
absorva a gua residual com a ponta de uma toalha de
papel. Num erlenmyer, preparar um volume apropriado
de uma soluo de acrilamida de concentrao desejada
usando os valores registrados na Tabela 2. Misturar os
componentes pela ordem indicada.
Antes de juntar a soluo de PSA e de TEMED, fltrar
se necessrio, por suco por uma membrana de acetato
de celulose (dimetro dos poros: 0,45 ); mantenha
sob suco agitando a unidade de fltrao at no mais
formar bolhas na soluo. Adicionar as quantidades
apropriadas de solues de persulfato de amnia e de
TEMED (Tabela 2), agitar e adicionar, imediatamente,
sobre o gel de separao. Colocar, imediatamente, no
lugar um pente de politetrafuoroetileno limpo na soluo
do gel de concentrao, tomando a precauo de evitar a
formao de bolhas de ar. Adicionar soluo para o gel de
concentrao de modo a encher totalmente os interstcios
do pente. Deixar polimerizar o gel em posio vertical,
temperatura ambiente.
134 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Tabela 1 - Preparao do Gel de Resoluo.
Componentes da soluo
Volume dos componentes em mL por volume do molde do gel de:
5 mL 10 mL 15 mL 20 mL 25 mL 30 mL 40 mL 50 mL
6% de Acrilamida
gua 2,6 5,3 7,9 10,6 13,2 15,9 21,2 16,5
Soluo de acrilamida
(1)
1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 8,0 10,0
Tris 1,5 M pH 8,8
(2)
1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio
(3)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia
(4)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina
(5)
0,004 0,008 0,012 0,016 0,02 0,024 0,032 0,04
8% de Acrilamida
gua 2,3 4,6 6,9 9,3 11,5 13,9 18,5 23,2
Soluo de acrilamida
(1)
1,3 2,7 4,0 5,3 6,7 8,0 10,7 13,3
Tris 1,5 M pH 8,8
(2)
1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio
(3)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia
(4)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina
(5)
0,003 0,006 0,009 0,002 0,005 0,008 0,024 0,03
10% de Acrilamida
gua 1,9 4,0 5,9 7,9 9,9 11,9 15,9 19,8
Soluo de acrilamida
(1)
1,7 3,3 5,0 6,7 8,3 10,0 13,3 16,7
Tris 1,5 M pH 8,8
(2)
1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio
(3)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia
(4)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina
(5)
0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,002 0,016 0,02
12% de Acrilamida
gua 1,6 3,3 4,9 6,6 8,2 9,9 13,2 16,5
Soluo de acrilamida
(1)
2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 16,0 20,0
Tris 1,5 M pH 8,8
(2)
1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio
(3)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia
(4)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina
(5)
0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
14% de Acrilamida
gua 1,4 2,7 3,9 5,3 6,6 8,0 10,6 13,8
Soluo de acrilamida
(1)
2,3 4,6 7,0 9,3 11,6 13,9 18,6 23,2
Tris 1,5 M pH 8,8
(2)
1,2 2,5 3,6 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio
(3)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia
(4)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina
(5)
0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
15% de Acrilamida
gua 1,1 2,3 3,4 4,6 5,7 6,9 9,2 11,5
Soluo de acrilamida
(1)
2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 20,0 25,0
Tris 1,5 M pH 8,8
(2)
1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio
(3)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia
(4)
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina
(5)
0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
______________
(1) Soluo de acrilamida: acrilamida/bisacrilamida (29:1) a 30% (p/v) SR
(2) Tris 1,5 M pH 8,8: tampo de triscloridrato 1,5 M pH 8,8.
(3) DSS 100 g/L: soluo de dodecilsulfato de sdio a 10% (p/v).
(4) PSA 100 g/L: soluo de persulfato de amnio a 10% (p/v). O persulfato de amnio fornece os radicais livres que induzem a polimerizao da
acrilamida e da bisacrilamida. A soluo de persulfato de amnia decompe-se, lentamente, e renovada toda a semana.
(5) TEMED: N,N,N,N-tetrametiletilenodiamina.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 135 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Tabela 2 - Preparao do gel de empilhamento.
Componentes da soluo
Volume dos componentes em mL por volume do molde do gel de:
1 mL 2 mL 3 mL 4 mL 5 mL 6 mL 8 mL 10 mL
gua 0,68 1,4 2,1 2,7 3,4 4,1 5,5 6,8
Soluo de acrilamida
(1)
0,17 0,33 0,5 0,67 0,83 1,0 1,3 1,7
Tris M pH 6,8
(2)
0,13 0,25 0,38 0,5 0,63 0,75 1,0 1,25
(DSS) 100 g/L de Dodecil Sulfato de Sdio
(3)
0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,08 0,1
(PSA) 100 g/L de Persulfato de Amnia
(4)
0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,08 0,1
(TEMED) Tetrametiletilenodiamina
(5)
0,001 0,002 0,003 0,004 0,005 0,006 0,008 0,01
_____________
(1) Soluo de acrilamida: acrilamida/bisacrilamida (29:1) a 30% (p/v) SR
(2) Tris M pH 6,8: tampo de triscloridrato M de pH 6,8.
(3) DSS 100 g/L: soluo de dodecilsulfato de sdio a 10% (p/v).
(4) PSA 100 g/L: soluo de persulfato de amnia a 10% (p/v). O persulfato de amnia fornece os radicais livres que induzem a polimerizao da
acrilamida e da bisacrilamida. A soluo de persulfato de amnia decompe-se, lentamente, e renovada toda a semana.
(5) TEMED: N,N,N,N-tetrametiletilenodiamina.
DETECO DAS PROTENAS NOS GIS
A colorao com azul de Coomassie o mtodo mais
correntemente utilizado para as protenas, com um nvel de
deteco da ordem de 1 g a 10 g de protena por banda.
A colorao com nitrato de prata o mtodo mais sensvel
para a visualizao das protenas em gis; possibilita a
deteco de bandas com 10 ng a 100 ng de protena. Todas
as etapas da colorao dos gis so realizadas temperatura
ambiente; com agitao moderada e com movimento
orbital num equipamento apropriado. necessrio o uso
de luvas para evitar depositar no gel impresses digitais
que tambm fcariam coradas.
Colorao com azul de Coomassie. Mergulhar o gel
durante, pelo menos, uma hora num grande excesso de
azul de Coomassie SR. Eliminar a soluo de colorao.
Mergulhar o gel num grande excesso de soluo de
descolorao (consiste em uma mistura de 1 volume de
cido actico glacial e 4 volumes de metanol e 5 volumes
de gua). Renovar vrias vezes a soluo de descolorao
at que as bandas proticas apaream, nitidamente, sobre
fundo claro. Quanto mais forte for a descolorao do gel,
tanto menor quantidades de protenas so detectveis
por esse mtodo. possvel acelerar a descolorao
incorporando na soluo de descolorao alguns gramas
de resina de troca inica ou uma esponja.
Nota : as solues cido-alcolicas utilizadas nesse mtodo
no fxam totalmente as protenas do gel. Pode, portanto,
haver perda de certas protenas de massa molecular baixa
durante as operaes de colorao e descolorao dos
gis fnos. Pode ser conseguida uma fxao permanente
colocando o gel durante 1 hora numa mistura de 1 volume
de cido tricloroactico, 4 volumes de metanol e 5 volumes
de gua, antes de se mergulhar na azul de Coomassie SR.
Colorao com nitrato de prata. Mergulhar o gel durante 1
hora num grande volume de soluo de fxao (consiste em
adicionar 0,27 mL de formaldedo em 250 mL de metanol e
Montagem do gel no aparelho de eletroforese e separao
eletrofortica
Quando a polimerizao terminar (cerca de 30
minutos), retirar o pente com precauo. Lavar os poos
imediatamente com gua ou tampo de eletroforese DSS-
EGPA para eliminar a acrilamida eventualmente no
polimerizada. Se necessrio, endireitar os dentes do gel
de empilhamento, com uma agulha hipodrmica, de ponta
partida, anexada a uma seringa, de um dos lados curtos da
placa, retirar com precauo o tubo e recolocar as pinas.
Proceda do mesmo modo do outro lado curto e depois na
base do molde.
Introduzir o gel no aparelho de eletroforese. Introduzir
os tampes de eletroforese nos reservatrios superior e
inferior. Eliminar as bolhas, eventualmente aprisionadas,
na base do gel entre as placas de vidro. recomendvel
empregar para esse fm uma agulha hipodrmica dobrada
fxada numa seringa. Nunca estabelea tenso eltrica no
gel sem as amostras porque pode destruir a descontinuidade
do sistema tampo. Antes de depositar a amostra, lave
ou preencha os poos com precauo com tampo de
eletroforese DSS-EGPA. Preparar as solues problema
e padro utilizando o tampo para amostra recomendada
e tratar como se especifca na monografa da substncia a
ser analisada. Aplicar nos poos do gel de concentrao
o volume apropriado das diferentes solues. Proceda
eletroforese nas condies recomendadas pelo fabricante
do aparelho. Certos fabricantes de aparelhos para DSS-
EGPA fornecem gis de diversas superfcies e espessuras.
Para obter uma separao tima, pode ser necessrio fazer
variar a durao da eletroforese e os parmetros eltricos
como indicado pelo fabricante. Verifcar que a frente de
colorao se desloca no gel de separao, ela atinge a base
do gel, parar a eletroforese. Retirar o molde do aparelho
e separar as duas placas de vidro. Retirar os espaadores,
separar e rejeitar o gel de empilhamento e proceder,
imediatamente, colorao.
136 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
diluir para 500 mL com gua). Eliminar e renovar a soluo
de fxao e deixar incubar durante, pelos menos, 1 hora, ou
durante toda a noite, se assim for mais prtico. Eliminar a
soluo de fxao e colocar o gel num volume em excesso
de gua durante 1 hora e, em seguida, mergulhar durante
15 minutos em soluo de glutaraldedo a 1% (v/v). Lavar
o gel colocando-o por duas vezes num volume excessivo
de gua durante 15 minutos e, em seguida, mergulh-lo
durante 15 minutos, ao abrigo da luz, em nitrato de prata
SR1 recentemente preparado. Lavar o gel colocando-o
por trs vezes num volume excessivo de gua durante 15
minutos e, em seguida, mergulh-lo durante cerca de 1
minuto em soluo de desenvolvimento (consiste em diluir
2,5 mL de cido ctrico monoidratado a 2% (p/v) e 0,27
mL de formaldedo em gua a 500 mL) at obter colorao
satisfatria. Suspenda o desenvolvimento por imerso
durante 15 minutos em soluo de cido actico a 10%
(v/v). Lavar com gua.
Secagem dos gis de poliacrilamida DSS corados
O tratamento dos gis ligeiramente diferente conforme
o mtodo de colorao utilizado. No caso da colorao
com Coomassie, a etapa de descolorao seguida de
uma imerso do gel em soluo de glicerol a 10% (p/v)
durante, pelo menos, 2 horas (ou uma noite). No caso
da colorao com prata, a lavagem fnal seguida de
uma imerso em soluo de glicerol a 2% (p/v) durante
5 minutos. Mergulhar duas folhas de celulose porosa em
gua durante 5 a 10 minutos. Colocar uma das folhas numa
moldura de secagem. Levantar, delicadamente, o gel e
deposit-lo sobre a folha de celulose. Eliminar bolhas que,
eventualmente, tenham fcado aprisionadas e adicionar
alguns mililitros de gua ao longo das bordas do gel. Cobrir
com a segunda folha e eliminar eventuais bolhas de ar
aprisionadas. Terminar o conjunto do quadro de secagem.
Colocar na estufa ou deixar secar temperatura ambiente.
DETERMINAO DA MASSA MOLECULAR
A massa molecular das protenas determinada por
comparao da sua mobilidade com a mobilidade de vrios
marcadores proteicos de peso molecular conhecidos.
Existem, para a padronizao dos gis, misturas de
protenas de massa molecular exatamente conhecida
que possibilitam obter uma colorao uniforme. Tais
misturas esto disponveis para diferentes faixas de massa
molecular. As solues me concentradas das protenas
de massa molecular conhecida so diludas em tampo
para amostragem apropriada e depositadas no mesmo gel
que a amostra proteica a examinar. Imediatamente aps
a eletroforese, determinar a posio exata do corante de
marcao (azul de bromofenol) para identifcar a frente de
migrao dos ons. Para esse efeito, pode cortar-se uma
pequena poro da borda do gel, ou mergulhar no interior
do gel, no nvel da frente de migrao do corante, uma
agulha molhada em tinta da China. Aps a colorao do
gel, determinar a distncia de migrao de cada banda
protica (marcadores e bandas desconhecidas) a partir
do bordo superior do gel de separao e dividir cada uma
dessas distncias de migrao pela distncia percorrida pelo
corante de marcao. As distncias de migrao, assim,
obtidas so chamadas mobilidades relativas das protenas
(em referncia frente de colorao) e, convencionalmente,
representadas por Rf. Construir um grfco usando os
logaritmos da massa molecular relativa (Mr) dos padres
proteicos em funo dos Rf correspondentes. Os grfcos
obtidos so ligeiramente sigmides. O clculo das massas
moleculares desconhecidas pode ser calculado por
regresso linear, ou por interpolao a partir da curva de
variao de log (Mr) em funo do Rf desde que os valores
obtidos para as amostras desconhecidas se situem na parte
linear do grfco.
Validao do ensaio
O ensaio s ser vlido se as protenas utilizadas como
marcadores de massa molecular distriburem-se em 80%
do comprimento do gel e se, no intervalo de separao
desejada (por exemplo, o intervalo que cubra o produto e o
seu dmero, ou o produto e as suas impurezas aparentadas)
existir para as bandas proteicas em causa uma relao
linear entre o logaritmo da massa molecular e o valor
do Rf. Exigncias de validao suplementares dizendo
respeito preparao da amostra podem ser especifcadas
nas monografas em particular.
DETERMINAO QUANTITATIVA DAS IMPUREZAS
Quando for especifcado numa monografa em particular
um teor em impurezas, conveniente preparar uma
soluo padro correspondente a esse teor diluindo a
soluo problema. Se, por exemplo, este limite for de 5%, a
soluo padro uma diluio a 1:20 da soluo problema.
O eletroforetograma obtido com a soluo problema no
apresenta nenhuma banda devido impureza (alm da
banda principal) que seja mais intensa que a banda principal
do eletroforetograma obtido com a soluo padro. Desde
que se opere em condies validadas, possvel quantifcar
as impurezas por normalizao em relao banda
principal, utilizando um densitmetro integrador. Nesse
caso, verifcada a linearidade das respostas.
5.2.22.1 ELETROFORESE CAPILAR
Eletroforese capilar (EC) um mtodo fsico de anlise
baseado na migrao, dentro de um capilar, de solutos
carregados, dissolvidos em uma soluo eletroltica,
sob a infuncia de uma corrente eltrica. Atualmente,
a EC compreende uma famlia de tcnicas de separao
eletrocinticas que separam compostos baseada, sobretudo,
na diferena de mobilidade eletrofortica, partio entre
fases, ponto isoeltrico, tamanho molecular, ou ainda, na
combinao de uma ou mais destas propriedades.
PRINCPIOS GERAIS
Em EC, a separao governada por dois fatores. O
primeiro corresponde ao movimento dos solutos no capilar
devido ao campo eltrico (E), tambm denominado de
velocidade eletrofortica. O segundo ocorre em funo
do fuxo do eletrlito devido superfcie carregada na
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 137 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
parede do capilar, sendo chamado de fuxo eletrosmtico.
A mobilidade eletrofortica de um soluto (
ep
) est
relacionada a caractersticas especfcas como tamanho
molecular, forma e carga eltrica bem como propriedades
inerentes ao eletrlito no qual a migrao ocorre (fora
inica do eletrlito, pH, viscosidade e presena de aditivos).
Sob a infuncia de tenso, os solutos carregados migram
atravs do eletrlito com uma determinada velocidade, V
ep
,
dada em cm/s, e calculada pela equao:
onde:
u
ep
= mobilidade eletrofortica;
E = tenso aplicada;
q = carga efetiva do soluto;
n = viscosidade do eletrlito;
r = raio de Stokes;
V = voltagem aplicada ao sistema;
L = comprimento total do capilar.
Quando um campo eltrico aplicado ao longo do capilar,
um fuxo de eletrlito gerado no interior do mesmo. A
migrao de diferentes solutos ao longo do capilar em
direo ao detector, independente da presena de carga
inica, indica que alm da mobilidade eletrofortica, est
envolvida uma fora adicional. Caso no houvesse esta fora
adicional, compostos com carga positiva migrariam pelo
capilar enquanto os nions permaneceriam distncia do
detector e os solutos neutros simplesmente no migrariam.
A fora adicional que direciona todos os solutos atravs
do capilar denominada de fuxo eletrosmtico (FEO) e
possui papel importante nos diversos tipos de EC.
O FEO tem sua origem a partir da ionizao dos grupos
silanis na parede interna do capilar, que so transformados
em grupos silanoato (Si-O
-
), em pH acima de trs. Estes
grupos com carga negativa atraem os ctions do eletrlito,
formando uma camada interna na parede do capilar. A
dupla camada formada prxima superfcie do capilar
essencialmente esttica. A camada mais difusa, prxima
dupla camada mvel e, sob ao de uma tenso eltrica,
migra em direo ao ctodo carreando juntamente a gua de
hidratao. Entre as duas camadas existe um plano de atrito
e o desequilbrio eltrico gerado corresponde diferena
de potencial que atravessa as duas camadas, denominada
de potencial zeta ().
A velocidade do fuxo eletrosmtico dependente da
mobilidade eletrosmtica (
eo
) que, por sua vez, est
diretamente relacionada densidade de carga da parede
interna do capilar e s caractersticas do eletrlito. A
velocidade do fuxo eletrosmtico (V
eo
) pode ser calculada
pela equao:
onde:
c= constante dieltrica do eletrlito;
= potencial zeta da superfcie do capilar;
n = viscosidade do eletrlito;
V = voltagem aplicada ao sistema;
L = comprimento total do capilar.
As mobilidades eletrofortica e eletrosmtica de um soluto
podem atuar na mesma direo ou em direes opostas,
dependendo da carga (positiva ou negativa) do soluto e da
velocidade do soluto (v), conforme a equao abaixo:
A soma ou diferena entre as duas velocidades usada na
dependncia das mobilidades atuarem na mesma direo ou
em direes opostas. Na eletroforese capilar na sua forma
mais usual, nions migraro em direo oposta ao fuxo
eletrosmtico e suas velocidades sero menores do que a
velocidade do fuxo eletrosmtico. Ctions migraro na
mesma direo do fuxo eletrosmtico e suas velocidades
sero maiores do que a velocidade do fuxo eletrosmtico.
Nesta condio, na qual existe uma rpida velocidade de
fuxo eletrosmtico em relao velocidade eletrofortica
dos solutos, ctions e nions podem ser separados na
mesma corrida eletrofortica.
O tempo (t) necessrio para o soluto migrar uma distncia
(l) do terminal de injeo do capilar at a janela de deteco
do capilar (comprimento efetivo do capilar) defnido pela
equao:
onde:
l = distncia do terminal de injeo do capilar at a janela
de deteco do capilar (comprimento efetivo do capilar);
V
ep
= velocidade eletrofortica;
V
eo
= velocidade do fuxo eletrosmtico.
A reprodutibilidade na velocidade de migrao dos solutos
est diretamente relacionada manuteno de um valor
constante do fuxo eletrosmtico entre diferentes corridas
eletroforticas. Para algumas aplicaes especfcas,
pode ser necessrio reduzir ou mesmo suprimir o fuxo
eletrosmtico atravs de modifcaes na parede do capilar
ou na concentrao, composio e/ou pH da soluo
eletroltica.
Aps introduo da amostra no capilar, cada soluto
da amostra migra junto ao eletrlito como uma banda
independente, conforme sua mobilidade intrnseca. Sob
condies ideais o nico fator que pode contribuir para o
alargamento da banda oriundo da difuso molecular do
soluto ao longo do capilar (difuso longitudinal). Neste
caso, a efcincia da banda expressa como nmero de
pratos tericos (N) de acordo com a equao:
onde:
D = coefciente de difuso molecular do soluto no eletrlito;
Os demais termos foram abordados anteriormente.
138 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
A separao entre duas bandas pode ser alcanada pela
modifcao da mobilidade eletrofortica dos solutos,
pelo fuxo eletrosmtico e pelo aumento da efcincia das
bandas de cada soluto em anlise. A resoluo pode ser
calculada atravs da equao:
onde:

epa
e
epb
= mobilidades eletroforticas de dois solutos a
serem separados;

eo
= mobilidade do fuxo eletrosmtico
;

ep
= mobilidade eletrofortica mdia dos solutos .
EQUIPAMENTO
Um equipamento de eletroforese capilar composto por:
- uma fonte de alta voltagem;
- dois reservatrios de eletrlitos, mantidos no mesmo
nvel, contendo solues andica e catdica;
- dois eletrodos (ctodo e nodo), imersos nos reservatrios
dos eletrlitos e conectados fonte de alta voltagem;
- um capilar de slica fundida provido de janela de deteco
para alinhamento a determinados tipos de detectores. Os
terminais do capilar so imersos nos reservatrios contendo
as solues eletrolticas. O capilar deve ser preenchido
com a soluo eletroltica prescrita na monografa;
- sistema de injeo da amostra de soluto(s) por ao
hidrodinmica ou eletrocintica. A escolha do processo
de injeo e sua automao so imprescindveis na
anlise quantitativa por eletroforese capilar. A introduo
da amostra pelo modo eletrocintico deve levar em
considerao a mobilidade eletrofortica intrnseca de cada
soluto, permitindo adequada discriminao dos diferentes
componentes da amostra;
- detector capaz de monitorar a quantidade de solutos que
passam atravs do segmento de deteco do capilar em
intervalo especfco de tempo. Os detectores mais usuais
so baseados em espectrofotometria de absoro (UV e
UV-VIS) ou fuorimetria. Anlises tambm podem ser
realizadas utilizando detectores eletroqumicos ou atravs
da espectrometria de massas;
- sistema de controle de temperatura capaz de mant-la
constante no interior do capilar. Alteraes de temperatura
implicam em falta de reprodutibilidade na separao de
solutos;
- sistema computadorizado para registro e integrao dos
eletroferogramas.
A monografa de cada substncia deve detalhar o tipo
de capilar, as solues eletrolticas, o mtodo de pr-
condicionamento, as condies da amostra e da migrao
eletrofortica.
A soluo eletroltica deve ser fltrada (fltro de 0,45 m)
para remover partculas e desaerada para evitar a formao
de bolhas que possam interferir no sistema de deteco
ou interromper o contato eltrico no capilar durante a
migrao eletrofortica. Os mtodos eletroforticos devem
estabelecer um detalhado procedimento de lavagem do
capilar entre cada corrida a fm de permitir tempos de
migrao reprodutveis dos solutos em anlise.
5.2.22.1.1 Eletroforese capilar em soluo livre
PRINCPIO
Nesta tcnica os solutos so separados em um
capilar contendo apenas eletrlito sem qualquer meio
anticonvectivo. O mecanismo de separao est baseado
nas diferenas apresentadas pela razo carga / massa das
espcies analisadas que migram como bandas a velocidades
diferenciadas. Os solutos so separados pela combinao
entre a mobilidade eletrofortica intrnseca e a magnitude
do fuxo eletrosmtico no capilar. Capilares recobertos
internamente, com reduzido fuxo eletrosmtico, podem
ser utilizados para aumentar a capacidade de separao dos
solutos que adsorvem na superfcie do capilar.
A tcnica em soluo livre adequada para anlise de
solutos de pequena massa molecular (PM < 2000) e elevada
massa molecular (2000 < PM < 100 000). Devido alta
efcincia do sistema, molculas com diferenas mnimas
em sua razo massa / carga podem ser discriminadas. A
tcnica tambm permite separao de solutos quirais
atravs da adio de seletores quirais no eletrlito de
separao. A otimizao da separao requer a avaliao
de diferentes parmetros instrumentais e relacionados
soluo eletroltica.
PARMETROS INSTRUMENTAIS
Voltagem - o tempo de separao proporcional
voltagem aplicada. Todavia, um aumento na voltagem
usada pode causar produo de calor excessivo (efeito
Joule), determinando elevao da temperatura e gradientes
de viscosidade no eletrlito dentro do capilar, os quais
so responsveis pelo alargamento da banda e reduo na
resoluo dos solutos em anlise;
Polaridade - a polaridade do eletrodo pode ser normal
(nodo na admisso e ctodo na sada). Neste caso o fuxo
eletrosmtico move em direo ao ctodo. Se a polaridade
do eletrodo for revertida, a direo do fuxo eletrosmtico
contrria sada e apenas solutos carregados com
mobilidade eletrofortica superior ao do fuxo eletrosmtico
migram em direo sada;
Temperatura - o principal efeito da temperatura
observado na viscosidade e condutividade eltrica do
eletrlito. Alteraes nestas duas propriedades do eletrlito
determinam diferenas na velocidade de migrao;
Capilar - o comprimento e dimetro interno infuenciam
parmetros analticos como tempo de migrao total dos
solutos, efcincia das separaes e capacidade de carga.
Sob voltagem constante, o aumento do comprimento total e
efetivo do capilar pode diminuir a corrente eltrica que, por
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 139 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
sua vez, determina o aumento no tempo de migrao dos
analitos. Capilares com menor dimetro interno possuem
melhor capacidade de dissipao do calor gerado pela
corrente eltrica (efeito Joule), permitindo a elevao da
voltagem aplicada e reduo no tempo de anlise. O limite
de deteco do mtodo tambm pode ser infuenciado
pelo dimetro interno, dependendo do volume de amostra
injetado e do sistema de deteco utilizado. A efcincia
das separaes tambm pode ser aumentada pela reduo
do dimetro interno do capilar.
A adsoro de componentes da amostra na parede
interna do capilar pode limitar a efcincia. Por esta
razo, estratgias para evitar estas interaes devem
ser consideradas no desenvolvimento de um mtodo de
separao por eletroforese capilar. Este um fator crtico,
por exemplo, em amostras contendo protenas. Uma destas
estratgias (uso de pH(s) extremos e adsoro de eletrlitos
carregados com carga positiva) requer a modifcao da
composio do eletrlito para prevenir a adsoro das
protenas. Alternativamente, possvel recobrir a parede
interna do capilar com um polmero atravs de ligaes
covalentes, prevenindo a interao de protenas com a
superfcie da slica carregada negativamente. Para esta
proposta, capilares com a parede interna previamente
recoberta com polmeros de natureza neutro-hidroflica,
catinica e aninica so disponveis comercialmente.
PARMETROS DA SOLUO ELETROLTICA
Natureza do tampo e concentrao - Os eletrlitos
para eletroforese capilar devem apresentar capacidade
tamponante adequada na faixa de pH escolhido e baixa
mobilidade a fm de minimizar a gerao de corrente
eltrica. Para diminuir a distoro do pico eletrofortico
importante combinar a mobilidade do on do eletrlito
mobilidade do soluto. A escolha do solvente da amostra
importante para alcanar uma uniformidade do soluto o qual
permite o aumento da efcincia de separao e melhora
a deteco. Alm disso, um aumento na concentrao do
eletrlito em um pH especfco determina a diminuio do
fuxo eletrosmtico e da velocidade do soluto.
pH do eletrlito - O pH do eletrlito pode afetar a separao
atravs da modifcao da carga do soluto ou de outros
aditivos, bem como da alterao do fuxo eletrosmtico.
A mudana no valor do pH do eletrlito acima ou abaixo
do ponto isoeltrico de protenas e peptdeos infuencia a
separao destes solutos, atravs da modifcao da carga
lquida de carter negativo para positivo. Em geral, um
aumento no pH do eletrlito ocasiona elevao do fuxo
eletrosmtico.
Solventes orgnicos - Solventes orgnicos como metanol,
acetonitrila entre outros podem ser adicionados ao
eletrlito aquoso para aumentar a solubilidade do soluto
e/ou de outros aditivos presentes no eletrlito, ou ainda,
infuenciar o grau de ionizao dos solutos da amostra. A
adio destes solventes no eletrlito geralmente provoca a
reduo do fuxo eletrosmtico.
Aditivos para separaes quirais - As separaes
enantiomricas devem ser realizadas atravs da adio
de seletores quirais ao eletrlito de corrida. Os seletores
quirais mais utilizados so as ciclodextrinas. Porm,
teres coroa, polissacardeos e protenas tambm podem
ser empregados para esta fnalidade. A discriminao
enantiomrica regida por diferentes interaes entre o
seletor quiral e cada um dos enantimeros do soluto em
anlise. Assim, a escolha correta do seletor infuencia
diretamente a resoluo enantiomrica obtida para solutos
quirais. Durante o desenvolvimento de um mtodo
para separao enantiomrica, recomendvel testar
ciclodextrinas de diferentes tamanhos de cavidade, (, |,
), ciclodextrinas modifcadas com grupamentos neutros
(metil, etil, hidroxialquil, etc.), ou com grupamentos
ionizveis (aminometil, carboximetil, sulfobutilter, etc.).
A resoluo de separaes quirais igualmente controlada
pela concentrao do seletor quiral, da composio e
pH do eletrlito e da temperatura de anlise. Aditivos
orgnicos como metanol e Ureia podem ser empregados
para modifcar a resoluo obtida.
5.2.22.1.2 Cromatografa Eletrocintica Micelar
(CEM)
PRINCPIO
Na Cromatografa Eletrocintica Micelar, a separao ocorre
em uma soluo eletroltica que contm um tensoativo a
uma concentrao acima da concentrao micelar crtica
(cmc). As molculas do soluto so distribudas entre
o eletrlito e a fase pseudo-estacionria composta de
micelas, de acordo com o coefciente de partio do soluto.
uma tcnica que pode ser usada para separao de solutos
neutros e/ou ionizados, mantendo a efcincia, velocidade
e adequabilidade instrumental da eletroforese capilar. O
tensoativo aninico dodecil sulfato de sdio (DSS) um
dos tensoativos mais usados na CEM, apesar de outros
tambm serem utilizados, como, por exemplo, tensoativos
catinicos (sais de cetiltrimetilamnio).
Em pH neutro ou alcalino, um forte fuxo eletro-osmtico
gerado movimentando os ons do eletrlito de separao na
direo do ctodo. Se DSS for utilizado como tensoativo, a
migrao eletrofortica da micela aninica ser na direo
oposta, em direo ao nodo. Como resultado, a velocidade
de migrao micelar total reduzida, em comparao ao
fuxo da soluo eletroltica. No caso de solutos neutros,
uma vez que o analito pode estar distribudo entre a micela e
o eletrlito, e no h mobilidade eletrofortica, a velocidade
de migrao do analito depender somente do coefciente de
partio entre a micela e o eletrlito. No eletroferograma,
os picos correspondentes a cada soluto neutro esto sempre
localizados entre o marcador de fuxo eletrosmtico e o da
micela (o tempo decorrido entre estes dois picos chamado
de janela de separao). Para solutos ionizados, a velocidade
de migrao depende do coefciente de partio do soluto
entre a micela e eletrlito e da mobilidade eletrofortica do
soluto na ausncia da micela.
Na CEM o mecanismo de solutos neutros e fracamente
ionizados essencialmente cromatogrfca. Assim, a
migrao do soluto e a resoluo podem ser representadas
140 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
em termos de fator de reteno do soluto (k), tambm
denominada de razo de distribuio de massa (D
m
), que
a relao entre nmero de moles do soluto no interior da
micela e na fase mvel. Para uma substncia neutra, k pode
ser calculado atravs da seguinte equao:
onde
t
R
= tempo de migrao do soluto;
t
0
= tempo de migrao de um soluto no retido (determinado
pela injeo de um marcador de fuxo eletrosmtico que
no se liga micela, por exemplo, metanol);
t
mc
= tempo de migrao da micela (determinado pela
injeo de um marcador de micela, como Sudan III, o
qual migra continuamente associado micela ao longo da
migrao eletrofortica);
K = coefciente de partio do soluto;
V
S
= volume da fase micelar;
V
M
= volume da fase mvel;
Igualmente, a resoluo entre 2 picos adjacentes (R
s
)
dada por:
onde:
N = nmero de pratos tericos de cada soluto;
= seletividade;
k
a
e k
b
= fatores de reteno para ambos solutos
repectivamente (k
b
> k
a
).
De forma similar, porm no idntica, as equaes
fornecem valores de k e R
s
para solutos com carga.
OTIMIZAO
O desenvolvimento de mtodos por CEM envolve
parmetros instrumentais e da soluo eletroltica:
Parmetros instrumentais
Voltagem - O tempo de separao inversamente
proporcional voltagem aplicada. Todavia, um aumento
na voltagem pode causar produo excessiva de calor,
elevando os gradientes de temperatura e viscosidade do
eletrlito na seo transversal do capilar. Este efeito pode
apresentar impacto relevante em eletrlitos que apresentem
maior condutividade como aqueles que contm sistemas
micelares. Os sistemas que apresentam menor capacidade
de dissipao do calor determinam alargamento das bandas
e menor resoluo entre os picos.
Temperatura - Alteraes na temperatura do capilar afetam
o coefciente de partio do soluto entre o eletrlito e as
micelas, a concentrao micelar crtica e a viscosidade
do eletrlito. Estes parmetros infuenciam diretamente
no tempo de migrao dos solutos durante a separao
eletrofortica. A utilizao de um adequado sistema de
refrigerao aumenta a reprodutibilidade do tempo de
migrao dos solutos.
Capilar - As dimenses do capilar (comprimento e dimetro
interno) contribuem no tempo de anlise e na efcincia das
separaes. Um aumento do comprimento total e efetivo
do capilar pode diminuir a corrente eltrica (sob voltagem
constante), aumenta o tempo de migrao e melhora a
efcincia de separao. O dimentro interno do capilar
controla a dissipao do calor (em um dado eletrlito e
corrente eltrica) e consequentemente o alargamento das
bandas dos solutos.
Parmetros da soluo eletroltica
Natureza do tensoativo e concentrao - A natureza
do tensoativo, de forma anloga fase estacionria
em cromatografa, afeta a resoluo, pois modifca a
seletividade da separao. O log k de uma substncia neutra
aumenta linearmente com a concentrao do tensoativo na
fase mvel. Visto que a resoluo em CEM alcana um
mximo quando k apresenta valor prximo
0
t t
mc
modifcaes na concentrao de tensoativo presente na
fase mvel determinam alteraes na resoluo das bandas.
pH do eletrlito - o pH no altera o coefciente de partio
de solutos no ionizados, mas pode determinar mudanas
no fuxo eletrosmtico em capilares no recobertos. Uma
diminuio no pH do eletrlito reduz o fuxo eletrosmtico,
proporcionando um aumento na resoluo dos solutos
neutros e no tempo de anlise.
Solventes orgnicos - solventes orgnicos (metanol,
propanol, acetonitrila) podem ser adicionados soluo
eletroltica para melhorar a separao de solutos
hidrofbicos. Em geral, a adio destes modifcadores
reduz o tempo de migrao e a seletividade da separao. O
porcentual de solvente orgnico adicionado deve levar em
considerao a concentrao micelar crtica do tensoativo,
tendo em vista que valores excessivos podem afetar, ou
mesmo, inibir o processo de formao das micelas e,
por conseguinte, a ausncia do fenmeno de partio. A
dissociao de micelas na presena de porcentuais elevados
de modifcador no signifca necessariamente melhores
resultados na separao. Em determinadas situaes, a
interao hidrofbica entre o monmero do tensoativo e
solutos neutros formam complexos solvofbicos que pode
ser separados eletroforeticamente.
Modifcadores para separaes quirais - a separao
de enantimeros em CEM pode ser obtida atravs da
incluso de seletores quirais ao sistema micelar, ligados
covalentemente ao tensoativo ou adicionados ao eletrlito de
separao. Micelas que possuem ligaes com propriedades
de discriminao quiral incluem sais de N-dodecanoil- L
aminocidos, sais biliares, entre outros. A resoluo quiral
tambm pode ser obtida atravs de seletores quirais, tais
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 141 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
como as ciclodextrinas, adicionadas diretamente s solues
eletrolticas que contm tensoativos no quirais.
Outros aditivos - A seletividade pode ser modifcada atravs
de vrias estratgias, por adio de substncias qumicas ao
eletrlito. A adio de diversos tipos de ciclodextrinas ao
eletrlito tambm pode ser utilizada para reduzir interao
de solutos hidrofbicos com a micela, aumentando assim a
seletividade para este tipo de soluto.
A adio de substncias capazes de modifcar as interaes
soluto-micela por adsoro nesta ltima tem sido usada
para aumentar a seletividade das separaes em CEM.
Estes aditivos podem ser um segundo tensoativo (inico
ou no inico) que origina mistura de micelas ou ctions
metlicos que dissolvem a micela formando complexos de
coordenao com os solutos.
QUANTIFICAO
As reas dos picos devem ser divididas pelo tempo de
migrao correspondente para fornecer a rea correta com
o objetivo de:
- compensar o deslocamento no tempo de migrao entre
corridas, reduzindo assim a variao da resposta;
- compensar as diferentes respostas dos componentes da
amostra com diferentes tempos de migrao.
Quando um padro interno utilizado, deve-se verifcar
se nenhum pico de soluto a ser analisado apresenta
sobreposio ao pico do padro interno.
CLCULOS
O teor do componente (ou componentes) em anlise
deve ser calculado a partir dos valores obtidos. Quando
prescritos, o teor porcentual de um ou mais componentes
da amostra a ser analisada calculado pela determinao
da rea corrigida (s) do pico (s) como uma porcentagem
do total das reas corrigidas de todos os picos, excluindo
aqueles resultantes de solventes ou reagentes adicionados
(processo de normalizao). recomendvel a utilizao
de um sistema de integrao automtica (integrador ou
sistema de aquisio e processamento de dados).
ADEQUABILIDADE DO SISTEMA
Os parmetros de adequabilidade do sistema so
empregados para verifcar o comportamento do mtodo por
eletroforese capilar. A escolha destes parmetros depende
do tipo de Eletroforese Capilar utilizado. Os fatores
so: fator de reteno (k) (apenas para cromatografa
eletrocintica micelar), nmero aparente de pratos tericos
(N), fator de simetria (A
s
) e resoluo (R
s
). As equaes
que permitem calcular os valores de N e R
s
atravs dos
eletroferogramas so fornecidas abaixo.
Nmero aparente de pratos tericos
O nmero aparente de pratos tericos (N) pode ser
calculado usando a expresso:
onde:
t
R
= tempo de migrao ou distncia da linha de base a
partir do ponto de injeo at a linha perpendicular do
ponto mximo do pico correspondente ao componente;
w
h
= largura do pico meia altura
Resoluo
A resoluo (R
s
) entre picos de alturas similares de 2
componentes pode ser calculada usando a expresso:
onde:
t
R1
e t
R2
= tempos de migrao ou distncias da linha de
base a partir do ponto de injeo at a linha perpendicular
do ponto mximo de dois picos adjacentes
w
h1
e w
h2
= largura dos picos meia altura
Quando apropriado, a resoluo pode ser calculada atravs
da medida da altura do vale (H
v
) entre 2 picos parcialmente
resolvidos em uma preparao padro e a altura do pico
menor (H
p
), calculando a razo pico/vale (p/v):
Fator de simetria
O fator de simetria (A
s
) de um pico pode ser calculado
usando a expresso:
onde:
w
0,05
= largura do pico determinada a 5% do valor da altura;
d = distncia entre a linha perpendicular do pico mximo e
a tangente do pico a 5% da altura do pico.
Testes para repetibilidade de rea (desvio padro das
reas ou da razo rea / tempo de migrao) e para
repetibilidade do tempo de migrao (desvio padro do
tempo de migrao) so introduzidos como parmetros
de adequabilidade. A repetibilidade do tempo de migrao
fornece um teste para adequabilidade de procedimentos
de lavagem do capilar. Uma prtica alternativa para evitar
a falta de repetibilidade do tempo de migrao usar o
tempo de migrao relativo a um padro interno.
Um teste para verifcar a razo sinal/rudo de uma
preparao padro (ou a determinao do limite de
quantifcao) tambm pode ser til para determinao de
substncias relacionadas.
142 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Proporo sinal : rudo
Os limites de deteco e quantifcao correspondem
razo sinal : rudo de 3 e 10, respectivamente.
A proporo sinal : rudo (S/N) calculada usando a
expresso:
onde:
H = altura do pico correspondente ao componente
especfco, no eletroferograma obtido com a soluo
referncia, medida a partir do mximo do pico at a linha
de base extrapolada do sinal observado ao longo de uma
distncia igual a 20 vezes a largura a meia altura do pico;
h = intervalo da linha de base em um eletroferograma
obtido aps injeo do branco, observado a uma distncia
igual a 20 vezes a largura a meia altura do pico no
eletroferograma obtido com a soluo referncia, e se
possvel, localizado prximo do tempo de reteno onde
este pico seria encontrado.
5.2.23 ANLISE
ENANTIOMRICA
FRMACOS QUIRAIS
Os enantimeros geralmente exibem diferentes
propriedades farmacolgicas e toxicolgicas devido
aos principais alvos moleculares como protenas,
cidos nucleicos e polissacardeos serem quirais. Por
exemplo, os enantimeros do ter metlico do levorfanol,
o dextrometorfano e o levometorfano, so utilizados
diferentemente na teraputica. Enquanto o dextrometorfano
indicado como antitussgeno, o levometorfano indicado
como analgsico.
Devido ao reconhecimento da importncia do uso clnico
de frmacos enantiomericamente puros no tratamento
de diversas doenas, as indstrias farmacuticas so
incentivadas constantemente a disponibilizar frmacos
resolvidos em quantidades industriais.
Para garantir a segurana e a efcincia dos frmacos
disponveis e em desenvolvimento, necessrio resolver
os enantimeros e examinar cada um quanto s atividades
farmacolgicas e toxicolgicas. Aps a identifcao
do enantimero mais ativo (eutmero) deve-se avaliar o
excesso enantiomrico do eutmero desde a sntese at o
consumo para garantir a qualidade do medicamento.
SEPARAO E DETERMINAO ENANTIOMRICA
DE FRMACOS
A separao, ou resoluo, de enantimeros por
cromatografa a lquido de alta efcincia (CLAE) comeou
a ser aplicada desde os anos sessenta. Nos anos setenta,
com o aparecimento das colunas de pequenas partculas
para cromatografa a lquido, iniciou-se o desenvolvimento
das fases estacionrias quirais para resoluo de frmacos
racmicos.
A CLAE considerada uma das tcnicas mais efcientes
para separao, deteco e quantifcao de frmacos. O
uso de fase estacionria quiral (FEQ) adequada torna-se
um poderoso mtodo para a separao dos enantimeros.
A resoluo cromatogrfca dos enantimeros pode ser
alcanada por vrios mtodos, todavia, sempre necessrio
o uso de algum tipo de discriminador ou seletor quiral.
O mtodo indireto e o direto so os dois caminhos para
separao dos enantimeros utilizando cromatografa a
lquido.
No mtodo indireto, os enantimeros so convertidos em
diastereoismeros pela reao com uma substncia quiral.
Os diastereoismeros so substncias que apresentam
propriedades fsico-qumicas diferentes e, portanto, podem
ser separados utilizando fase estacionria no quiral.
O mtodo indireto foi largamente utilizado no passado.
Entretanto apresenta limitaes como necessidade do
isolamento da substncia de interesse e sua derivatizao.
Esses fatos difcultam o desenvolvimento do processo
automatizado para grande nmero de amostras. Alm
disso, a pureza enantiomrica dos agentes derivatizantes
importante para evitar falsos resultados. Outra limitao
so as diferentes velocidades e/ou constantes de reao para
os enantimeros j que os estados de transio reacionais
so diastereoisomricos o que pode resultar em proporo
diferente da composio enantiomrica inicial.
No mtodo direto, a mistura de enantimeros a ser
resolvida injetada diretamente no cromatgrafo. Para a
separao dos enantimeros pode-se utilizar uma FEQ, ou
um solvente quiral, ou uma fase mvel com aditivo quiral.
A resoluo ocorre devido formao de complexos
diastereoisomricos entre a mistura enantiomrica e o
seletor quiral utilizado para a resoluo. O uso de FEQ
hoje o mtodo mais empregado para resoluo por CLAE.
Nas tabelas a seguir (Tabelas 1, 2, 3, 4 e 5) so apresentadas
as principais classes de fases estacionrias utilizadas para
a resoluo de misturas racmicas e alguns exemplos de
seletores quirais em cada classe. Consultar o fabricante
para a indicao do uso de cada seletor.
Tabela 1 - Fases estacionrias quirais do tipo Pirkle.
Discriminador quiral*
(R)-DNB-fenilglicina
(S)-DNB-fenilglicina
(R)-DNB-leucina
(S)-DNB-leucina
Fosfonato de dimetila de DNB--amino-2,2-dimetil-4-
pentenila
DNB-tetraidrofenantreno
Naftiletilamida
______________
* A maioria das colunas do tipo Pirkle so disponveis nas duas formas
enantiomricas.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 143 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Tabela 2 - Fases estacionrias quirais do tipo protena.
Discriminador quiral

1
-Glicoprotena cida
Albumina srica bovina
Albumina srica humana
Celobioidrolase I
Pepsina
Ovomucoid
Tabela 3 - Fases estacionrias quirais do tipo cavidade ou incluso.
Discriminador quiral
-Ciclodextrina
|-Ciclodextrina
-Ciclodextrina
O-(S)-2-Hidroxipropil-|-ciclodextrina
O-(R/S) 2-Hidroxipropil-|-ciclodextrina
O-(S)-Naftiletilcarbamoil-|-ciclodextrina
Tabela 4 - Fases estacionrias quirais do tipo carboidratos.
Discriminador quiral
Tris(dimetilfenilcarbamoil)celulose
Tris(4-metilbenzoato)celulose
Tris(fenilcarbamoil)celulose
Triacetato de celulose
Tribenzoato de celulose
ter tribenzlico de celulose
Tricinamato de celulose
Tabela 5 - Fases estacionrias quirais do
tipo antibiticos macrocclicos.
Discriminador quiral
Vancomicina
Teicoplanina
Ristocetina
5.2.24 CONDUTIVIDADE DA
GUA
A condutividade eltrica da gua uma medida do fuxo
de eltrons o qual facilitado pela presena de ons.
Molculas de gua dissociam-se em ons em funo do
pH e da temperatura resultando em uma determinada
condutividade. Alguns gases, em especial o dixido de
carbono, dissolvem-se em gua e interagem para formar
ons que afetam a condutividade e o pH da gua. Esses ons
e sua condutividade resultante podem ser considerados
como intrnsecos gua. A exposio da amostra
atmosfera pode alterar a condutividade/resistividade,
devido perda ou ganho de gases dissolvidos.
O on cloreto e o on amnio so algumas das principais
impurezas encontradas na gua e, tambm, infuenciam na
sua condutividade. Esses ons externos podem ter impacto
signifcativo na pureza qumica da gua e comprometer a
sua utilizao em aplicaes farmacuticas.
As condutividades combinadas dos ons intrnsecos
secos e dos ons externos variam em funo do pH e so
a base para as especifcaes da condutividade descritas
na tabela 3 e empregadas quando realizada a etapa 3 do
teste. Duas etapas preliminares so includas neste teste.
Se as condies do teste e os limites de condutividade so
atendidos em qualquer uma destas etapas preliminares
(Etapas 1 e 2), a gua satisfaz as exigncias deste teste e
no necessria a aplicao da Etapa 3. Somente no caso
da amostra no obedecer s exigncias da Etapa 3, a gua
julgada como no conforme com os requerimentos do teste
de condutividade.
INSTRUMENTAO E PARMETROS
OPERACIONAIS
A condutividade da gua deve ser medida usando
instrumentos calibrados com resoluo de 0,1 /cm. O
termmetro deve ter divises de 0,1 C e cobrir a faixa de
23 a 27 C. Os eletrodos devem ser mantidos conforme a
recomendao do fabricante do aparelho.
A constante de condutividade da clula um fator
usado como multiplicador para os valores da escala do
condutivmetro.
Constante da clula: o valor deve ser conhecido em
2%. Geralmente clulas de condutividade apresentam
constante na ordem de 0,1 cm
-1
, 1 cm
-1
e 2 cm
-1
. A
maioria dos equipamentos apresenta a constante da clula
defnida. necessrio aferir essa constante com soluo
de KCl de referncia descrita na Tabela 1. Normalmente
a verifcao realizada utilizando somente uma soluo
de referncia; nesse caso utilizar a soluo de referncia
de menor condutividade. Porm, recomendvel medir
periodicamente a condutividade dos demais padres e
observar a concordncia entre a leitura do condutivmetro
e o valor nominal de cada soluo de referncia.
Calibrao: conforme instrues do fabricante. A maioria
dos equipamentos de mltiplas escalas possui um nico
ponto calibrao, logo necessrio calibrar sempre que
usar uma escala diferente. A leitura obtida deve estar entre
+ 0,1 uS/cm do valor nominal da soluo de referncia.
Para a calibrao do condutivmetro, utilizar as solues de
referncias descritas a seguir.
Soluo A (0,01 M): pesar exatamente 0,7455 g de cloreto
de potssio seco a 105 C durante 2 horas, transferir para
balo volumtrico de 1000 mL e completar o volume com
gua.
Soluo B (0,005 M): pipetar 50 mL da Soluo A para
balo volumtrico de 100 mL e completar com gua.
Soluo C (0,001 M): pipetar 10 mL da Soluo A para
balo volumtrico de 100 mL e completar com gua.
144 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Soluo D (0,0005 M): pipetar 5 mL da Soluo A para
balo volumtrico de 100 mL e completar com gua.
Soluo E (0,0001 M): pipetar 5 mL da Soluo A para
balo volumtrico de 500 mL e completar com gua.
Nota 1: para o preparo das solues acima utilizar
sempre gua isenta de dixido de carbono, ou seja, com
condutividade inferior a 0,10 S.cm
-1
.
Nota 2: no utilizar compensao de temperatura e manter
as solues de referncia a 25 C durante a leitura.
Tabela 1 - Condutividade das solues
de cloreto de potssio (25C).
Soluo
Concentrao
(mol/L)
Condutividade
( /cm)
A 0,01 1412
B 0,005 717,5
C 0,001 146,9
D 0,0005 73,9
E 0,0001 14,9
PROCEDIMENTO
O procedimento descrito a seguir estabelecido para
medidas de gua purifcada e gua para injetveis.
Alternativamente, a Etapa 1 pode ser realizada (com
modifcaes apropriadas de acordo com o item 1 da Etapa
1) usando-se instrumentao do tipo em linha que tenha
sido calibrada apropriadamente, cujas constantes de clula
tenham sido exatamente determinadas e cujas funes de
compensao de temperatura tenham sido desabilitadas.
A adequabilidade de tais instrumentos em linha para
testes de controle de qualidade tambm dependente
da localizao no sistema de gua. Evidentemente, o
posicionamento do instrumento precisa refetir a qualidade
da gua que ser usada.
Etapa 1
1 Enxaguar a clula com pelo menos trs pores da
amostra.
A determinao deve ser realizada em recipiente apropriado
ou como determinao em linha. O valor obtido deve ser
inferior a 1,3 S/cm, na temperatura de 25,0 C + 0,1C.
3 Na Tabela 2, localizar o valor de temperatura mais
prximo e menor que a temperatura na qual a condutividade
foi medida. O valor de condutividade correspondente a
essa temperatura o limite. (No interpolar)
4 Se o valor de condutividade medido no maior que
o valor correspondente na Tabela 2, a gua atende s
exigncias para a condutividade. Porm, se o valor medido
maior que o da tabela, proceder determinao de acordo
com a Etapa 2.
Tabela 2 - Valores limites para condutividade de
acordo com a temperatura (somente para valores de
condutividade sem compensao de temperatura).
Temperatura (C) Condutividade (/cm)
0 0,6
5 0,8
10 0,9
15 1,0
20 1,1
25 1,3
30 1,4
35 1,5
40 1,7
45 1,8
50 1,9
55 2,1
60 2,2
65 2,4
70 2,5
75 2,7
80 2,7
85 2,7
90 2,7
95 2,9
100 3,1
Etapa 2
1 Transferir quantidade sufciente de gua (100 mL ou
mais) para recipiente apropriado e agitar a amostra. Ajustar
a (25 1) C e agitar a amostra vigorosamente observando
periodicamente a leitura do condutivmetro. Quando a
mudana na condutividade devido absoro de dixido
de carbono atmosfrico menor que 0,1 /cm por 5
minutos, registrar a condutividade.
2 Se a condutividade no maior que 2,1 /cm, a gua
obedece s exigncias para o teste de condutividade. Se a
condutividade maior que 2,1 /cm, proceder conforme
a Etapa 3.
Etapa 3
Realizar este teste no mximo 5 minutos aps a Etapa 2 com
a mesma amostra mantendo a temperatura da amostra a (25
1) C. Adicionar soluo saturada de cloreto de potssio
(0,3 mL para 100 mL de amostra) e determinar o pH com
preciso de 0,1 unidade de acordo com Determinao do
pH (5.2.19). Utilizando a Tabela 3 determinar o valor
limite para a condutividade de acordo com o pH.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 145 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Tabela 3 - Valores limites de condutividade de
acordo com o pH (somente para amostras mantidas
em atmosfera e temperatura equilibradas).
pH Condutividade (/cm)
5,0 4,7
5,1 4,1
5,2 3,6
5,3 3,3
5,4 3,0
5,5 2,8
5,6 2,6
5,7 2,5
5,8 2,4
5,9 2,4
6,0 2,4
6,1 2,4
6,2 2,5
6,3 2,4
6,4 2,3
6,5 2,2
6,6 2,1
6,7 2,6
6,8 3,1
6,9 3,8
7,0 4,6
Aps determinado o pH e estabelecido o limite de acordo
com a Tabela 3, a gua atende o teste se a condutividade
medida na Etapa 2 no maior que esse limite. Se a
condutividade for maior ou o valor do pH est fora da faixa
de 5 a 7, a gua no atende o teste para condutividade.
GUA ULTRAPURIFICADA
Para a gua ultrapurifcada, em geral os condutivmetros
ou resistivmetros instalados nos equipamentos de
purifcao de gua possuem um circuito de compensao
da temperatura para 25,0 C e fornecem a leitura direta.
Esses equipamentos devem ser calibrados periodicamente.
A condutividade da gua ultrapurifcada deve ser 0,055
uS/cm a 25,0 C (resistividade > 18,0 MO.cm) para uma
aplicao especfca.
Alternativamente, caso o equipamento no fornea a leitura
direta da condutividade, proceder conforme abaixo:
1 Enxaguar a clula com pelo menos trs pores da
amostra.
2 Determinar simultaneamente a temperatura e a
condutividade da gua sem compensao automtica
da temperatura. A determinao deve ser realizada em
recipiente apropriado ou como determinao em linha.
O valor obtido deve ser inferior a 0,055 uS/cm, na
temperatura de 25,0 C + 0,1C.
3 Na Tabela 4, localizar o valor de temperatura mais
prximo e menor que a temperatura na qual a condutividade
foi medida. O valor de condutividade correspondente a
essa temperatura o limite. (No interpolar)
4 Se o valor de condutividade medido no maior que o
valor correspondente na Tabela 4, a gua ultrapurifcada
atende s exigncias para a condutividade.
Tabela 4 - Valores limites para condutividade de
acordo com a temperatura (somente para valores de
condutividade sem compensao de temperatura).
Temperatura (C) Condutividade (/cm)
0 0,012
5 0,017
10 0,023
15 0,031
20 0,042
25 0,055
30 0,071
35 0,090
40 0,113
45 0,140
50 0,171
55 0,207
60 0,247
65 0,294
70 0,345
75 0,403
80 0,467
85 0,537
90 0,614
95 0,696
100 0,785
5.2.25 LIMPIDEZ DE LQUIDOS
PROCEDIMENTO
Utilizar tubos de vidro neutro, incolor e transparente, com
fundo chato e de 15 a 25 mm de dimetro interno, a menos
que indicado de maneira diferente na monografa. Introduzir,
em tubos separados, o lquido em exame e a suspenso
de referncia indicada na monografa, preparando-a
por ocasio do uso, conforme especifcado na Tabela 1.
O lquido em exame e a suspenso de referncia devem
atingir, nos tubos, uma altura de 40 mm. Cinco minutos
aps o preparo da suspenso de referncia, comparar o
contedo dos tubos, observando-os, verticalmente, sob
luz visvel difusa e contra fundo preto. A difuso da luz
deve ser tal que a suspenso de referncia I seja facilmente
distinguida da gua e da suspenso de referncia II.
Um lquido considerado lmpido quando, ao ser examinado
nas condies anteriormente descritas, sua transparncia
corresponde da gua ou do solvente utilizado, ou
quando sua opalescncia no mais pronunciada que a da
suspenso de referncia I.
Padro de opalescncia
Dissolver 1 g de sulfato de hidrazina em gua e completar
o volume para 100 mL com o mesmo solvente. Deixar em
146 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
repouso por 4 a 6 horas. Adicionar 25 mL dessa soluo
a uma soluo contendo 2,5 g de metenamina em 25 mL
de gua. Misturar bem e deixar em repouso por 24 horas.
Essa suspenso estvel por dois meses se conservada
em recipiente de vidro, com superfcie livre de defeitos. A
suspenso no deve aderir s paredes do recipiente e deve
ser, vigorosamente, agitada, no recipiente original, antes
do uso. Para o preparo do padro de opalescncia, diluir
15 mL da suspenso para 1000 mL com gua. O padro
de opalescncia deve ser preparado no momento do uso e
pode ser conservado por, no mximo, 24 horas.
Tabela 1 Preparo das suspenses de referncia
Suspenso de referncia I II III IV
Padro de opalescncia (mL) 5 10 30 50
gua (mL) 95 90 70 50
5.2.26 ALCOOMETRIA
Alcoometria a determinao do grau alcolico ou ttulo
etanlico das misturas de gua e lcool etlico.
O ttulo alcoomtrico volumtrico de uma mistura de gua
e lcool expresso pelo nmero de volumes de etanol a
20 C contido em 100 volumes dessa mistura a mesma
temperatura. expresso em % (v/v).
O ttulo alcoomtrico ponderal expresso pela relao
entre a massa de etanol contida em uma mistura de gua e
etanol e a massa total dessa. expresso em % (m/m).
O lcool etlico contm, no mnimo, 95,1% (v/v)
correspondendo a 92,55% (m/m) e, no mximo, 96,9%
(v/v) correspondendo a 95,16% (m/m) de C
2
H
6
O a 20 C.
O lcool etlico absoluto contm, no mnimo, 99,5% (v/v)
correspondendo a 99,18% (m/m) de C
2
H
6
O a 20 C. Esses
valores podem ser observados na tabela alcoomtrica
(Anexo D).
DETERMINAO DO GRAU ALCOLICO OU TTU-
LO ALCOOMTRICO
O alcometro centesimal se destina determinao do grau
alcolico das misturas de gua e lcool indicando somente
a concentrao do lcool em volume e expresso pela sua
unidade de medida, grau Gay-Lussac (G.L.).
As determinaes do alcometro so exatas somente para a
mistura de gua e lcool a 20 C, na qual o instrumento foi
graduado. Se a temperatura durante o ensaio for inferior ou
superior a 20 C torna-se necessrio corrigir a temperatura
do lcool para 20 C.
A determinao do grau alcolico das misturas de agua em
volume realizada pelo alcometro.
Para a determinao do grau alcolico das misturas de
gua e lcool em massa, pode ser utilizado o mtodo da
densidade relativa ou verifcada a graduao na tabela
alcoomtricaaps a determinao pelo alcometro.
5.2.27 ANLISE TRMICA
A anlise trmica um conjunto de tcnicas que possibilitam
medir as propriedades fsico-qumicas de uma substncia
em funo da temperatura. As tcnicas mais comumente
utilizadas so as que medem as variaes de energia ou de
massa de uma substncia.
TERMOGRAVIMETRIA (TG)
A termogravimetria a tcnica de anlise trmica em
que a variao de massa da amostra determinada como
uma funo da temperatura, ou tempo de aquecimento,
utilizando um programa controlado de temperatura.
Aparelhagem
constitudo basicamente de uma termobalana que uma
associao entre o forno eltrico e uma balana eletrnica
de alta preciso na qual a substncia inserida em um porta-
amostra sob atmosfera especifcada e programa controlado
de temperatura. O dispositivo possibilita aquecer e medir
simultaneamente a massa do analito. Em certos casos, o
aparelho pode ser associado a um sistema que possibilita
detectar e analisar os produtos volteis.
Calibrao e/ou aferio da termobalana. Transferir uma
quantidade adequada de oxalato de clcio monoidratado
SQR no porta-amostra. A termobalana indicar com
grande preciso e exatido a sua massa. Empregar a razo
de aquecimento de 10
o
C/min e aquecer a amostra at 900
o
C. Ao fnalizar o processo trmico registrar: i) a curva
termogravimtrica (TG) marcando a temperatura no eixo
das abscissas (valores crescentes da esquerda para a direita)
e a massa percentual da amostra no eixo das ordenadas
(valores crescentes de baixo para cima); ii) a curva
termogravimtrica derivada (DTG), derivada primeira da
curva TG, que possibilita defnir melhor onde se iniciou
e fnalizou a perda de massa. Determine no grfco a
distncia entre os patamares inicial e fnal da curva massa-
temperatura, distncia que representa a perda de massa da
amostra no dado intervalo de temperatura. As perdas de
massas declaradas do oxalato de clcio monoidratado SQR
so calculadas, estequiometricamente, a partir das trs
etapas de perdas de massas devido s sucessivas liberaes
de: a) H
2
O; b) CO; c) CO
2
. A verifcao da escala da
temperatura pode ser realizada utilizando a tcnica do
gancho metlico fundvel (In, Pb, Zn, Al, Ag e Au) de
acordo com as indicaes do fabricante.
Procedimento
Utilizar o mesmo mtodo descrito para calibrao e/
ou aferio adicionando uma quantidade adequada de
amostra. As curvas TG e DTG ilustradas na Figura 1
indicam uma etapa de perda de massa da amostra. Na curva
DTG, observa-se que entre os pontos ab situa-se o patamar
inicial. A perda de massa se inicia no ponto b e fnaliza-se
no ponto c. Entre os pontos cd situa-se o patamar fnal.
O intervalo bc corresponde ao intervalo reacional. Para
calcular a perda de massa da amostra na curva TG, utiliza-
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 147 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
se a comparao com a curva DTG para maior preciso na
localizao dos pontos b e c. Traar os prolongamentos dos
patamares inicial e fnal da curva TG no eixo das ordenadas
utilizando os pontos b e c. A distncia medida corresponde
perda de massa (Am) da amostra. As projees dos pontos
b e c no eixo de abscissas correspondem, respectivamente,
temperatura inicial (Ti) e fnal (Tf) da perda de massa.
Registrar o resultado em percentagem da relao m/m.
Nota 1: necessria a obteno de uma curva do ensaio em
branco (aquecimento nas mesmas condies experimentais
empregando-se o porta-amostra vazio) antes do ensaio da
amostra para subtrao de linha base.
Nota 2: no caso da utilizao frequente do aparelho,
realizar, regularmente, verifcao e/ou calibrao. Em
caso contrrio, realizar essas operaes antes de cada
determinao.
Nota 3: como a atmosfera pode afetar os resultados so
registradas a vazo e a composio do gs para cada
ensaio.
Figura 1 - Exemplo da curva termogravimtrica e suas medidas.
Aplicaes
A determinao da variao da massa para uma substncia
em determinados intervalos de temperatura pode ser
utilizada para avaliao do comportamento trmico;
determinao do teor de umidade e/ou solventes;
determinao da temperatura de ebulio e sublimao;
determinao da temperatura de decomposio trmica e
determinao do teor de cinzas.
CALORIMETRIA EXPLORATRIA DIFERENCIAL
(DSC)
A calorimetria exploratria diferencial uma tcnica
que possibilita avaliar os fenmenos energticos, fsicos
e/ou qumicos produzidos durante o aquecimento (ou
resfriamento) de uma substncia. Essa tcnica possibilita
medir o fuxo de calor diferencial entre a amostra e um
material de referncia termicamente inerte em funo da
temperatura e/ou tempo de aquecimento sob um programa
controlado de temperatura. A amostra e o material de
referncia so mantidos a aproximadamente a mesma
temperatura durante o experimento. Podem-se determinar
as variaes de entalpia; as mudanas de calor especfco
e a temperatura de eventos endo e exotrmicos. De acordo
com o mtodo de medio utilizado, h duas modalidades:
o DSC com compensao de potncia e o DSC com fuxo
de calor.
APARELHAGEM
O DSC com compensao de potncia constitudo por
uma clula calorimtrica que contm dois fornos, um
para o material de referncia e o outro para a amostra.
O DSC com fuxo de calor constitui-se por uma clula
calorimtrica contendo um nico forno que dispe de
um sensor calorimtrico para a referncia e amostra. Os
equipamentos comportam um dispositivo de programao
controlada da temperatura, um ou vrios detectores
trmicos e um sistema de registro que pode ser associado a
um sistema de tratamento de dados. As determinaes so
efetuadas sob atmosfera especifcada.
Calibrao e/ou aferio do apareIho. Calibrar o aparelho
para o eixo de temperatura e de fuxo de calor utilizando
ndio metlico de alta pureza ou qualquer outro material
certifcado apropriado de acordo com as indicaes do
fabricante. Para o ajuste da linearidade, utiliza-se uma
combinao de dois metais como o ndio e o zinco para a
aferio do eixo de temperatura.
PROCEDIMENTO
Para um porta-amostra adequado transferir uma quantidade
da amostra, rigorosamente conhecida. Fixar a temperatura
inicial e fnal do ensaio e a razo de aquecimento. Iniciar o
aquecimento. Aps o ensaio, registrar a curva da calorimetria
exploratria diferencial escrevendo no eixo das abscissas a
temperatura, ou o tempo (valores crescentes da esquerda
para a direita) e o fuxo de calor no eixo das ordenadas,
indicando o sentido (endotrmico ou exotrmico). Na curva
DSC ilustrada na Figura 2 observa-se a variao entlpica
entre os pontos acd. O ponto de interseco b, referente ao
prolongamento da linha de base com a tangente no ponto de
maior inclinao (ponto de infexo) da curva, corresponde
temperatura onset (incio extrapolado do evento, T
onset
),
empregado em eventos de fuso como a temperatura inicial
da mudana de estado. O fm do evento trmico marcado
pelo ponto c (T
pico
), no entanto para fnalidades do clculo
de rea da curvas considera-se o ponto d (T
fnal
). A variao
de entalpia (AH) do fenmeno proporcional rea sob
a curva limitada pelos pontos acd sendo determinado o
fator de proporcionalidade a partir da determinao da
entalpia de fuso de uma substncia padro conhecida
(ndio, por exemplo) nas mesmas condies de trabalho.
Cada curva termo analtica registrada contendo os
seguintes dados: indicao da ltima calibrao, tamanho
e identidade da amostra, tipo de porta-amostra, material de
referncia, atmosfera (vazo e composio do gs), taxa de
aquecimento e sensibilidade da clula calorimtrica.
148 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Figura 2 - Exemplo de uma curva DSC tpica e suas medidas.
Aplicaes
A avaliao do fuxo de calor diferencial referente s
variaes de capacidade trmica e da entalpia das transies
de fase de uma substncia em funo da temperatura
pode ser utilizada para a determinao do ponto e faixa
de fuso; determinao da temperatura de sublimao,
evaporao e solidifcao; determinao da temperatura
de transio vtrea; avaliao de polimorfsmo, construo
de diagrama de fases, determinao da pureza (exceto as
substncias amorfas, os polimorfos instveis na faixa da
temperatura experimental, os compostos que fundem
com decomposio trmica e as substncias que possuem
pureza inferior a 95%).
Determinao de pureza
O mtodo baseado no fato de que a presena de pequenas
quantidades de impurezas num dado material diminui o
seu ponto de fuso e alarga a sua faixa global de fuso.
A Figura 3 ilustra esse comportamento para trs amostras
hipotticas, uma delas a padro e as outras duas contem
pequenas quantidades de impurezas.
Figura 3 - Exemplo de curvas DSC de uma amostra
hipottica comdiferentes teores de pureza
Baseando-se na equao de vant Hoff (Equao 1),
possvel a determinao da frao molar das impurezas X
2

(nmero de mols das impurezas pelo total de nmero de
mols da amostra) considerando que no h formao de
fase slida durante a fuso.

2
=
(

2

em que T
m
representa a temperatura de fuso da amostra; T
o

o ponto de fuso da substncia pura em graus Kelvin; R
a constante dos gases (8,3143 J.K
-1
. mol
-1
); AH
f
o calor de
fuso do principal componente expresso em J.mol
-1
.
Quando no h formao de fase slida, a concentrao de
impureza na fase lquida em uma dada temperatura durante
a fuso inversamente proporcional frao fundida
nessa temperatura e a diminuio do ponto de fuso
diretamente proporcional frao molar de impureza. O
grfco da temperatura da amostra (T
s
) versus o inverso da
frao fundida (1/F) na temperatura T
s
resulta em uma reta
com inclinao igual diminuio do ponto de fuso (T
o
-
T
m
). O ponto de fuso terico da substncia pura pode ser
obtido por extrapolao quando 1/F = 0.
Substituindo os valores experimentais obtidos para T
o
- T
m
,
AH
f
e T
o
na equao 1 possvel calcular a frao molar
das impurezas na amostra.
5.2.28 DETERMINAO DA
OSMOLALIDADE
Osmolalidade uma forma prtica que d uma medida total
da contribuio de vrios solutos presentes na soluo pela
presso osmtica da soluo. Uma aceitvel aproximao
da osmolalidade em soluo aquosa dada por: c
m
= vm,
se o soluto no ionizado, v= 1; no entanto v o nmero
total de ons sempre presente ou formado pela lise da
soluo de uma molcula de soluto; m = molalidade da
soluo, que o nmero de moles do soluto por kilograma
de solvente; = coefciente osmtico molar o qual
quantifcado da interao entre ons da carga oposta da
soluo. dependente do valor de m. Se a complexidade
da soluo aumenta, comea a ser difcil de medir. A
unidade de osmolalidade osmol por kilograma (osmol/
kg), mas o submltiplo miliosmol por kilograma (mosmol/
kg) normalmente usado.
De outra forma descrita, a osmolalidade determinada
pela medida da diminuio do ponto de congelamento.
Existe uma relao entre a osmolalidade e a diminuio do
ponto de congelamento T:
c
m
= T / 1,86 x 1000 mosmol/kg
EQUIPAMENTO
O equipamento Osmmetro - consiste de: continer
refrigerado para a medida; sistema de medio de
(Equao 1)
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 149 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
temperatura munido de um termosensor, com um
dispositivo de medio de diferentes potenciais que
pode ser graduado para a diminuio da temperatura ou
diretamente na osmolalidade; e deve ser includo um
recurso para homogeneizar a soluo.
PROCEDIMENTO
Preparar a soluo referncia conforme descrito na Tabela
1. Determinar o zero do equipamento usando gua. Calibrar
o equipamento usando a soluo de referncia: pipetar 50 a
250 L da amostra a ser analisada; transferir para a clula de
medio e iniciar o sistema de resfriamento. Normalmente,
um dispositivo de homogeneizar programado para operar
a temperatura abaixo da esperada da diminuio crioscpica
para prevenir super resfriamento. Um dispositivo indica
quando o equilbrio alcanado. Antes de cada medio
rinsar a clula de medio com a soluo a ser examinada.
Tabela 1 - Informaes para preparar-se a soluo de referncia para a calibrao do Osmmetro.
Massa em g da
soluo de Cloreto de
sdio por kg de gua
Osmolalidade real
(mosmol/kg)
Osmolalidade ideal
(mosmol/kg)
Coefciente
osmtico molal
Diminuio
crioscpica (C)
3,087 100 105,67 0,9463 0,186
6,260 200 214,20 0,9337 0,372
9,463 300 323,83 0,9264 0,558
12,684 400 434,07 0,9215 0,744
15,916 500 544,66 0,9180 0,930
19,147 600 655,24 0,9157 1,116
22,380 700 765,86 0,9140 1,302
Realizar a mesma operao com a amostra teste. Ler
diretamente a osmolalidade ou calcular pela medio
da diminuio do ponto de congelamento. O teste
considerado vlido quando o valor encontrado est entre
dois valores da escala de calibrao.
5.2.29 ENSAIOS FSICOS E
FSICO QUMICOS PARA
GORDURAS E LEOS
5.2.29.1 DETERMINAO DA
DENSIDADE RELATIVA
Proceder conforme descrito em Determinao da
densidade de massa e densidade relativa (5.2.5).
5.2.29.2 DETERMINAO DA
TEMPERATURA DE FUSO
Proceder conforme descrito em Determinao da
temperatura e faixa de fuso, Metodo III (5.2.2).
5.2.29.3 DETERMINAO DA
TEMPERATURA DE SOLIDIFICAO
SEPARAO DOS CIDOS GRAXOS
Transferir 75 mL de soluo de hidrxido de potssio
em glicerol (25 g de hidrxido de potssio em 100 mL
de glicerol) para bquer de 1000 mL e aquecer a 150 C.
Adicionar 50 mL de amostra tratada conforme indicado
na monografa especfca e prosseguir o aquecimento sob
agitao. A temperatura no deve ultrapassar 150 C.
A saponifcao dada por concluda quando a mistura
apresentar homogeneidade, sem vestgios de material
particulado. Transferir a mistura para outro bquer de 1000
mL, contendo 500 mL de gua quase fervente. Juntar,
lentamente, 50 mL de soluo de cido sulfrico 25%
(v/v) e aquecer, sob agitao, at separao defnida de
fase lmpida (cidos graxos). Lavar a fase graxa com gua
fervente a fm de isent-la de cido sulfrico e mant-la, em
bquer pequeno, em banho-maria fervente at decantao
da gua, deixando lmpida a fase oleosa. Filtrar e recolher a
mistura de cidos graxos enquanto ainda quente em bquer
seco e dessec-la a 150 C durante 20 minutos. Transferir a
mistura quente para frasco apropriado e mant-la em banho
de gelo at solidifcao.
150 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Para avaliar o grau de pureza dos cidos graxos separados
pelo procedimento anterior, transferir, previamente ao
congelamento, 3 mL da soluo de cidos graxos dessecados
para tubo de ensaio e adicionar 15 mL de etanol. Aquecer a
soluo at fervura e juntar 15 mL de hidrxido de amnio
6 M. A preparao resultante deve ser lmpida.
PROCEDIMENTO
Proceder conforme descrito em Determinao da
temperatura de congelamento (5.2.4).
5.2.29.4 DETERMINAO DO NDICE DE
REFRAO
O ndice de refrao de um meio referido ao ar igual
relao entre o seno do ngulo de incidncia de um raio
luminoso no ar e o seno do ngulo de refrao do raio
refratado no meio considerado. Salvo indicao contrria,
o ndice de refrao determinado a 20 C 0,5 C e em
comprimento de onda 589,3 nm, correspondente ao da luz
da raia D do sdio. Nesse caso, o smbolo que representa o
ndice de refrao .
Nos refratmetros correntes h determinao do ngulo
limite. Em alguns aparelhos, a parte essencial um prisma
de ndice de refrao conhecido, em contato com o lquido
em ensaio.
Para calibrao do aparelho, utilizar os lquidos de referncia
mencionados na Tabela 1. O valor do ndice de refrao de
cada lquido de referncia indicado no seu rtulo.
Tabela 1 Lquidos de referncia na
determinao do ndice de refrao.
Lquido de referncia
n/t (coefciente
de temperatura)
Trimetilpentano 0,00049
Tolueno 0,00056
Metilnaftaleno 0,0048
Se for utilizada luz branca para a determinao do
ndice de refrao, o refratmetro possui um sistema de
compensao. O aparelho dever fornecer leituras exatas
at a terceira casa decimal, no mnimo, e possuir um
dispositivo que possibilite operar temperatura prescrita:
o termmetro possibilita a leitura com a aproximao de,
pelo menos, 0,5 C.
5.2.29.5 DETERMINAO DO PODER
ROTATRIO
Proceder conforme descrito em Determinao do poder
rotatrio e do poder rotatrio especfco (5.2.8).
5.2.29.6 DETERMINAO DE GUA
Proceder conforme descrito em Mtodo volumtrico
(5.2.20.1).
5.2.29.7 NDICE DE ACIDEZ
O ndice de acidez, I
A
, expressa, em miligramas, a
quantidade necessria de hidrxido de potssio para a
neutralizao dos cidos graxos livres em 1 g de amostra.
ndices elevados de acidez so sugestivos de hidrlise
acentuada dos steres constituintes da matria graxa.
As causas da degradao incluem tratamentos qumicos
integrantes dos processos industriais de extrao e
purifcao, atividade bacteriana, ao cataltica (calor,
luz), estocagem inadequada e presena de impurezas como
a umidade, entre outros.
PROCEDIMENTO
Pesar, colocada em erlenmeyer de 250 mL, cerca de 10,0 g
ou exatamente a quantidade prescrita (em g) da substncia
teste. Adicionar 50 mL de uma mistura de etanol 96% e ter
etlico (1:1) v/v. Exceto quando houver indicao contrria
na monografa especfca, a mistura de solventes deve
ser previamente neutralizada com hidrxido de potssio
0,1 M, ou hidrxido de sdio 0,1 M, em presena de 0,5
mL de soluo de fenolftalena. Aquecer a amostra at 90
C se for necessrio para a dissoluo da mesma. Aps
solubilizao completa; titular com hidrxido de potssio
0,1 M at observao da cor rosa plida persistente por,
no mnimo, 15 segundos. Proceder ao ensaio em branco e
corrigir o volume de titulante consumido.
Calcular o I
A
de acordo com a equao:
Em que
n = volume (em mL) de hidrxido de potssio 0,1 M gasto
na titulao
m = massa de amostra em gramas.
5.2.29.8 DETERMINAO DO NDICE DE
SAPONIFICAO
O ndice de saponifcao I
S
exprime, em miligramas,
a quantidade de hidrxido de potssio necessria para
neutralizar os cidos livres e saponifcar os steres
existentes em 1 g de substncia.
O I
S
fornece indcios de adulteraes da matria graxa com
substncias insaponifcveis (leo mineral, por exemplo).
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 151 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Salvo indicao na monografa especfca, utilizar a
quantidade de amostra indicada na Tabela 1.
Tabela 1 Quantidade de amostra para
determinar o ndice de saponifcao.
Valor esperado de I
S
Quantidade de
amostra (g)
3 - 10 12 - 15
10 - 40 8 - 12
40 - 60 5 - 8
60 - 100 3 - 5
100 - 200 2,5 - 3
200 - 300 1 - 2
300 - 400 0,5 - 1
Pesar, colocada em balo de 250 mL, a quantidade de
amostra indicada (m), adicionar 25,0 mL de soluo
metanlica de hidrxido de potssio 0,5 M e algumas
pedras de ebulio. Adaptar o condensador de refuxo
vertical. Aquecer em banho-maria durante 30 min, salvo
em indicao especfca. Acrescentar 1 mL de soluo
de fenolftalena e titular, imediatamente, o excesso de
hidrxido de potssio com soluo de cido clordrico 0,5
M (mL). Efetuar ensaio em branco nas mesmas condies
e corrigir o volume do titulante (n
2
mL).
Calcular o ndice de saponifcao (I
S
), utilizando a
expresso:
5.2.29.9 DETERMINAO DO NDICE DE
STERES
O ndice de steres, I
E
, expressa a quantidade de hidrxido
de potssio, em miligramas, necessria para a saponifcao
dos steres presentes em 1 g de amostra. O I
E
calculado a
partir do ndice de saponifcao I
S
e do ndice de acidez I
A
,
conforme a equao:
I
E
= I
S
I
A
5.2.29.10 DETERMINAO DO NDICE
DE IODO
O ndice de iodo I
i
, expressa, em gramas, a quantidade de
iodo suscetvel a complexao em 100 g de substncia
sob as condies descritas a seguir. Constitui medida
quantitativa do grau de insaturaes dos cidos graxos,
esterifcados e livres, na amostra. O I
i
valor encontrado na
determinao sugestivo do grau de pureza do material
ensaiado bem como da presena de adulterantes. A
substituio do Mtodo A pelo Mtodo B deve ser objeto
de uma validao.
MTODO A
Salvo indicao na monografa especfca, utilizar a
quantidade de amostra indicada na Tabela 1.
Tabela 1 Quantidade de amostra para
determinao do ndice de iodo.
ndice esperado I
i
Quantidade de amostra
Inferior a 20 1,0
20 60 0,5 0,25
60 100 0,25 0,15
Superior a 100 0,15 0,10
Em recipiente de 250 mL, munido de rolha esmerilhada,
seco, ou lavado com cido actico glacial, introduzir a
amostra (m g) e dissolv-la em 15 mL de clorofrmio,
salvo em indicaes especifcadas na respectiva
monografa. Acrescentar 25,0 mL de soluo de brometo
de iodo. Tampar o recipiente e conserv-lo sob proteo
da luz durante 30 min, agitando-o, frequentemente. Aps
adio de 10 mL de soluo de iodeto de potssio a 100
g/L e 100 mL de gua, titular com tiossulfato de sdio 0,1
M agitando, energicamente, at que a colorao amarela
quase tenha desaparecido. Juntar 5 mL de soluo de
amido e continuar a titulao, adicionando o tiossulfato de
sdio 0,1 M, gota a gota, agitando, at o desaparecimento
da colorao (n
2
mL). O teste em branco deve ser realizado
nas mesmas condies e sem a amostra (n
1
mL).
Calcular o ndice de iodo pela expresso:
MTODO B
Salvo indicao em contrrio, utilizar a quantidade de
amostra indicada na Tabela 2.
152 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Tabela 2 Quantidade de amostra para determinao do ndice de iodo.
ndice de iodo provvel I
i
Massa (g) correspondente
a um excesso de 150
por cento de ICl
Massa (g) correspondente
a um excesso de 100
por cento de ICl
Soluo de cloreto
de iodo (mL)
<3 10 10 25
3 8,4613 10,5760 25
5 5,0770 6,3460 25
10 2,5384 3,1730 20
20 0,8461 1,5865 20
40 0,6346 0,7935 20
60 0,4321 0,5288 20
80 0,3173 0,3966 20
100 0,2538 0,3173 20
120 0,2115 0,2644 20
140 0,1813 0,2266 20
160 0,1587 0,1983 20
180 0,1410 0,1762 20
200 0,1269 0,1586 20
min, exatamente, e adicionar 30 mL de gua. Titular com
tiossulfato de sdio 0,01 M, adicionando, lentamente, sem
cessar a agitao enrgica at que a colorao amarela
tenha quase desaparecido. Acrescentar 5 mL de soluo
de amido. Continuar a titulao agitando energicamente,
at desaparecimento da colorao (n
1
mL de tiossulfato de
sdio 0,01 M). Realizar um ensaio em branco nas mesmas
condies (n
2
mL de tiossulfato de sdio 0,01 M). O ensaio
em branco no consome mais de 0,1 mL de tiossulfato de
sdio 0,1 M.
Calcular o ndice de perxidos pela expresso:
MTODO B
Nota: operar ao abrigo da luz.
Num erlenmeyer, com rolha esmerilhada, introduzir
50 mL de uma mistura v/v de cido actico glacial com
trimetilpentano (3:2). Arrolhar e agitar at dissoluo da
amostra (Tabela 1). Adicionar 0,5 mL de soluo saturada
de iodeto de potssio, arrolhar novamente e deixar a soluo
em repouso durante 60 1s. Nesse tempo de repouso, agitar,
pelo menos, trs vezes e, em seguida, acrescentar 30 mL
de gua. Titular com soluo de tiossulfato de sdio 0,01
M (v
1
mL), adicionado lentamente, com agitao enrgica
e constante, at desaparecimento quase total da colorao
amarela dada pela presena do iodo. Adicionar cerca de
0,5 mL de soluo de amido SI e continuar a titulao, sem
cessar a agitao, em especial quando estiver prximo do
ponto de equivalncia, para garantir a liberao do iodo do
solvente. Adicionar, gota a gota, a soluo de tiossulfato
de sdio at que a cor azul comece a desaparecer. Se na
titulao for gasto menos de 0,5 mL de tiossulfato de sdio
0,1 M, repetir o procedimento utilizando tiossulfato de
sdio 0,01 M (v
1
mL) sob agitao constante e enrgica.
Em recipiente de 250 mL com rolha esmerilada, previamente
lavado com cido actico glacial ou seco, introduzir a
quantidade de amostra (m g) e dissolv-la em 15 mL de uma
mistura de volumes iguais de ciclohexano e cido actico
glacial, salvo em indicao contrria. Se necessrio, fundir
previamente a substncia (ponto de fuso superior a 50 C).
Adicionar, lentamente, o volume de soluo de cloreto de
iodo indicado na Tabela 2. Tampar o recipiente e agitar, ao
abrigo da luz, durante 30 min, salvo indicao contrria.
Adicionar 10 mL de soluo de iodeto de potssio a 100
g/L e 100 mL de gua. Titular com tiossulfato de sdio 0,1
M, agitando, energicamente, at que a colorao amarela
quase desaparea. Acrescentar 5 mL de soluo de amido e
continuar a titulao adicionando, gota a gota, o tiossulfato
de sdio 0,1 M at desaparecimento da colorao (n
1
mL de
tiossulfato de sdio 0,1 M). Realizar um ensaio em branco
nas mesmas condies (n
2
mL de tiossulfato de sdio 0,1 M).
Calcular o ndice de iodo utilizando a seguinte expresso:
5.2.29.11 DETERMINAO DO NDICE
DE PERXIDOS
O ndice de perxido I
p
o nmero que exprime, em
miliequivalentes de oxignio ativo, a quantidade de
perxido em 1000 g de substncia.
Se a monografa no indicar o mtodo a ser utilizado,
executar o Mtodo A. A substituio do Mtodo A pelo
Mtodo B sempre objeto de validao.
MTODO A
Pesar 5,00 g da amostra, colocada em erlenmeyer de 250 mL
com rolha esmerilhada. Adicionar 30 mL de uma mistura
v/v de cido actico glacial e clorofrmio (proporo
3:2). Agitar at dissoluo da amostra e juntar 0,5 mL de
soluo saturada de iodeto de potssio. Agitar durante1
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 153 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
No caso do ndice de perxido for igual ou superior a 70, e
ocorrendo retardo na mudana de cor do indicador amido
de 15 a 30 s, agitar, vigorosamente, at o desaparecimento
da colorao amarela. Isso devido tendncia do
trimetilpentano sobrenadar na fase aquosa e ao tempo
necessrio para obter uma mistura adequada entre o
solvente e o titulante aquoso.
Para ndices de perxido inferiores a 150, utiliza-se
tiossulfato de sdio 0,01 M. Pode adicionar-se mistura uma
pequena quantidade (0,5 a 1,0% (m/m)) de emulsifcante
apropriado, para retardar a separao das fases e diminuir o
tempo de liberao do iodo (por exemplo, polissorbato 60).
Efetuar um ensaio em branco (v
0
mL). Se for consumido,
mais de 0,1 mL de tiossulfato de sdio 0,01 M, substituir
os reagentes e repetir a titulao. O ndice de perxido
calculado pela frmula a seguir.
em que:
c = concentrao da soluo de tiossulfato de sdio em
moles por litro.
Tabela 1 - Quantidade de amostra para
determinao do ndice de perxido
Valor esperado de I
p
Quantidade de amostra (g)
0 12 2,00 5,00
12 20 1,20 2,00
20 30 0,80 1,20
30 50 0,500 0,800
50 90 0,300 0,500
5.2.29.12 DETERMINAO DO NDICE
DE HIDROXILA
O ndice de hidroxila I
OH
o nmero que exprime, em
miligramas, a quantidade de hidrxido de potssio
necessria para a neutralizao de cido que se combina,
por acilao, com 1 g de substncia.
MTODO A
Introduzir a amostra, exatamente pesada (g), de acordo com
a quantidade indicada na Tabela 1, em balo de acetilao
de 150 mL, salvo se na monografa especfca estiver
preconizado outro valor. Adicionar o volume de soluo
de anidrido actico indicado e adaptar o condensador de
refuxo.
Tabela 1 Quantidade de amostra e
volume do reagente acetilante.
I
OH
esperado
Quantidade de
amostra (g)
Volume de
reagente (de
acetilao) em
mililitros
10 - 100 2,0 5,0
100 - 150 1,5 5,0
150 - 200 1,0 5,0
200 - 250 0,75 5,0
250 - 300 0,6 ou 1,20 5,0 ou 10
300 - 350 1,0 10,0
350 - 700 0,75 15,0
700 - 950 0,5 15,0
Aquecer em banho-maria durante 1 h, cuidando para
manter o nvel da gua do banho cerca de 2,5 cm acima do
nvel do lquido contido no balo. Retirar o balo e deix-lo
arrefecer. Adicionar 5 mL de gua atravs da extremidade
superior do condensador. Se a adio da gua originar uma
turvao, acrescentar piridina at o desaparecimento da
turvao e anotar o volume adicionado. Agitar, aquecer
novamente o balo em banho de gua durante 10 min.
Retirar o balo e deix-lo arrefecer. Lavar o condensador
e as paredes do balo com 5 mL de lcool, previamente
neutralizado em presena de soluo de fenolftalena.
Titular com soluo alcolica de hidrxido de potssio
0,5 M, em presena de 0,2 mL de soluo de fenolftalena
SI (n
1
mL). Realizar um ensaio em branco, nas mesmas
condies (n
2
mL).
Calcular o ndice de hidroxila utilizando a expresso:
em que
I
A
= ndice de acidez
MTODO B
Em erlenmeyer seco e munido de rolha esmerilhada
introduzir a tomada de ensaio (m g). Adicionar 2,0 mL de
reagente de anidrido propinico, arrolhar o balo e agitar
suavemente, at dissoluo. Aps 2 h de repouso, salvo
sob indicao contrria, retirar a rolha do erlenmeyer e
transferir seu contedo para outro de 500 mL com boca
larga contendo 25,0 mL de soluo de anilina a 9 g/L
em ciclohexano e 30 mL de cido actico glacial. Agitar
e aps 5 min de repouso adicionar 0,05 mL de soluo
cristal violeta SI. Titular com cido perclrico 0,1 M at a
154 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
viragem para verde esmeralda (n
1
mL). Realizar um ensaio
em branco nas mesmas condies (n
2
mL).
Calcular o ndice de hidroxila utilizando a expresso:
em que
I
A
= ndice de acidez
Pela possibilidade de haver presena de gua, determinar o
teor de umidade (y por cento) na amostra segundo o mtodo
especfco. O ndice de hidroxila obtido pela equao:
I
OH
= (ndice encontrado) - 31,1y
5.2.29.13 DETERMINAO DO NDICE
DE ACETILA
O ndice de acetila a quantidade de lcali, em mg de
hidrxido de potssio, necessria para a neutralizao do
cido actico liberado pela hidrlise de 1 g de substncia
acetilada. usado para estabelecer o grau de presena de
lcoois livres em substncias graxas. calculado com base
na diferena entre os ndices de saponifcao da substncia
acetilada pela tcnica descrita a seguir e da substncia no
acetilada.
PROCEDIMENTO
Transferir 10 g de substncia e 20 mL de anidrido actico
para balo Kjeldahl de 200 mL de capacidade. Adaptar
o condensador de refuxo. Apoiar o frasco sobre tela de
amianto em cujo centro tenha sido cortado orifcio de cerca
de 4 cm de dimetro e aquecer sobre chama de bico de gs
com altura mxima de 25 mm (evitando que a chama alcance
a base do balo). Manter em ebulio regular durante 2
horas, resfriar e transferir o contedo do balo para bquer
de 1000 mL contendo 600 mL de gua. Adicionar 0,2 g de
p de pedra pomes e ferver durante 30 minutos. Resfriar
e transferir a mistura para funil de separao, rejeitando a
camada aquosa inferior. Lavar a substncia acetilada com
trs ou mais pores de 50 mL de soluo saturada quente
de cloreto de sdio, at que a soluo de lavagem no mais
fornea reao cida ao papel de tornassol. Adicionar,
ainda, 20 mL de gua quente ao funil e agitar, removendo,
em seguida, o mais completamente possvel, a fase aquosa.
Transferir a substncia para cpsula de porcelana, adicionar
1 g de sulfato de sdio pulverizado e fltrar atravs de papel
de fltro pregueado. Determinar o ndice de saponifcao
da substncia original, no acetilada, e da substncia
acetilada pelo procedimento descrito e calcular o ndice de
acetila pela frmula:
em que
a = ndice de saponifcao da substncia original,
b = ndice de saponifcao da substncia acetilada.
5.2.29.14 DETERMINAO DE
SUBSTNCIAS INSAPONIFICVEIS
Substncias insaponifcveis so aquelas remanescentes
reao de saponifcao, no volteis a 100 - 105 C e que
foram carreadas no processo de extrao da substncia a
ensaiar.
Se a monografa especfca no indicar o procedimento,
utilizar o Mtodo I. Utilize material de vidro com boca
esmerilhada e desengordurado.
MTODO I
Adicionar 2,0 - 2,5 g da amostra em balo de 250 mL.
Adicionar 25 mL de hidrxido de potssio etanlico 0,5 M.
Acoplar um condensador de refuxo ao balo e ferver em
banho-maria por 1 hora, sob agitao. Transferir o contedo
do balo para funil de separao, usando 50 mL de gua e,
enquanto o lquido inda estiver morno, extrair, mediante
agitao vigorosa, com trs quantidades de 50 mL de ter
isento de perxidos. Lavar o balo com a primeira alquota
de ter. Misturar as solues etreas em funil de separao
contendo 20 mL de gua. (Se as solues etreas contm
slidos em suspenso, fltrar para o funil de separao
atravs de um fltro de papel livre de gordura. Lavar o
fltro com ter livre de perxido). Agitar, cuidadosamente,
e descartar a fase aquosa. Lavar a frao orgnica, com
duas pores de 20 mL de gua. Em seguida, adicionar
trs quantidades de 20 mL de hidrxido de potssio 0,5 M
e agitar, vigorosamente, em cada uma das adies. Aps
cada tratamento deve ser realizada lavagem com 20 mL
de gua. Finalmente, lave com quantidades sucessivas de
20 mL de gua at que a fase aquosa no mostre reao
alcalina em presena de fenolftalena. Transferir a frao
orgnica para um balo previamente tarado, lavando o funil
de separao com ter isento de perxidos. Eliminar o ter
e adicionar 3 mL de acetona ao balo. Eliminar o solvente
por completo at constante a temperatura no superior a
80 C. Dissolver o contedo do balo em 10 mL de etanol
recentemente fervido (96%) e previamente neutralizado.
Titular com hidrxido de sdio etanlico 0,1 M e soluo
de fenolftalena como indicador. Se o volume de soluo
titulante gasto no exceder 0,1 mL, a quantidade de resduos
pesados, deve ser tomado como matria insaponifcvel.
Calcular a matria insaponifcvel como uma porcentagem
da substncia a ser examinada. Se o volume de titulante
gasto exceder 0,1 mL, a quantidade de resduos pesados
no podem ser tomadas como a matria insaponifcvel e
do teste deve ser repetido.
MTODO II
Num balo de 250 mL, acoplado em sistema de condensao
por refuxo, introduzir a quantidade prescrita (m g) da
amostra. Juntar 50 mL de soluo alcolica de hidrxido
de potssio 2 M e aquecer em banho-maria, durante 1 h
sob agitao. Aps arrefecer a temperatura inferior a 25
C, transfrir o contedo do balo para funil de separao.
Adicionar 100 mL de gua. Adicionar 100 mL de ter isento
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 155 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
de perxidos e agitar cautelosamente. Repetir a operao
mais duas vezes com 100 mL de ter etlico. Reunir as
fraes etreas em outro funil de separao contendo 40
mL de gua. Agitar, suavemente, durante alguns minutos e
deixar separar as fases. Rejeitar a fase aquosa. Lavar a fase
etrea duas vezes com 40 mL de gua a cada vez. Lavar
em seguida, sucessivamente, com 40 mL de hidrxido
de potssio a 30 g/L e com 40 mL de gua. Repetir trs
vezes esta operao. Lavar, repetidamente, a fase etrea
com 40 mL de gua de cada vez, at que a fase aquosa no
d reao alcalina fenolftalena. Transferir a fase etrea
para um balo, tarado, lavando o funil de separao com
ter isento de perxidos. Evaporar o ter at a secura, com
as precaues usuais. Juntar 6 mL de acetona ao resduo.
Eliminar, cuidadosamente, o solvente em corrente de ar.
Seque a 100 - 105 C, at massa constante, deixe arrefecer
em dessecador e pese (a g). O resultado calculado em
percentagem m/m.
Dissolver o resduo em 20 mL de lcool, neutralizados
previamente em presena de soluo de fenolftalena e
titular com soluo alcolica de hidrxido de sdio 0,1 M.
Se o volume de soluo alcolica de hidrxido de sdio
0,1 M gasto nessa titulao for superior a 0,2 mL, indica
que houve separao incompleta das duas fases e resduo
obtido no pode ser considerado insaponifcvel. O ensaio
deve ser repetido.
5.2.29.15 IDENTIFICAO DE LEOS
FIXOS
5.2.29.15.1 Identifcao dos leos vegetais por
cromatografa em camada delgada
Fase fxa: gel de slica octadecilsilanizada (RP-18).
Soluo amostra. Salvo indicao em monografa
especfca, dissolver cerca de 20 mg (1 gota) da amostra
em 3 mL de diclorometano.
Soluo padro. Dissolver cerca de 20 mg (1 gota) de leo
de milho em 3 mL de diclorometano.
Procedimento. Aplicar, separadamente, 1 L de cada
soluo na placa. Desenvolver duas vezes na distncia de
0,5 cm com ter. Em seguida, desenvolver duas vezes a
distncias de 8 cm com mistura de diclorometano, cido
actico glacial com acetona (2:4:5). Deixar a placa secar ao
ar e nebulizar com soluo de cido fosfomolbdico a 100
g/L em lcool. Aquecer a placa a 120 C durante cerca de 3
min. Examinar luz do dia.
O cromatograma apresenta manchas comparveis s
reproduzidas na Figura 1.
Figura 1 - Cromatografa em camada delgada
para a identifcao dos leos fxos.
________________
1 leo de amendoim 6 leo de soja
2 Azeite de oliva 7 leo de girassol
3 leo de ssamo 8 leo de canola
4 leo de milho 9 leo de canola (isento de cido ercico)
5 leo de amndoas 10 leo de germes de trigo
5.2.29.15.2 Impurezas alcalinas
Introduzir 10 mL de acetona recentemente destilada,
0,3 mL de gua e 0,05 mL de soluo alcolica de azul
de bromofenol a 0,4 g/L em tubo de ensaio. Neutralizar,
se necessrio, com cido clordrico 0,01 M ou hidrxido
de sdio 0,01 M. Adicionar 10 mL da amostra, agitar e
deixar em repouso. O ponto de viragem indicado pelo
desenvolvimento de cor amarela na camada superior. No
necessrio volume superior a 1,1 mL de cido clordrico
0,01 M.
5.2.29.15.3 leos estranhos em leos vegetais
por cromatografa em camada delgada
Proceder por cromatografa em camada delgada (5.2.17.1),
utilizando placa (kieselguhr G). Impregnar a placa,
colocando-a numa cmara fechada contendo a quantidade
necessria da mistura de ter etlico e parafna lquida
(90:10; v/v) de forma a que a superfcie do lquido atinja
cerca de 5 mm da camada de adsorvente. Quando a mistura
de impregnao tiver percorrido, pelo menos, 12 cm da
camada, retirar a placa da cmara e deixar evaporar o
solvente durante 5 min. Desenvolver na mesma direo da
impregnao.
Preparao da mistura de cidos graxos. Aquecer sob
refuxo, durante 45 min, 2 g da amostra com 30 mL de
soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 M. Juntar
50 mL de gua, deixar arrefecer. Transferir para funil de
separao. Agitar trs vezes com 50 mL de ter etlico de
cada vez. Rejeitar as solues etreas. Acidifcar a fase
aquosa com cido clordrico e agitar trs vezes com 50 mL
de ter etlico de cada vez. Rena as solues etreas e lave-
as trs vezes com 10 mL de gua de cada vez. Rejeitar as
guas de lavagem. Adicionar sulfato de sdio anidro frao
156 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
etrea e fltrar. Evaporar o ter em temperatura inferior a 50
C. Utilizar o resduo para preparar a soluo problema.
Os cidos graxos podem, tambm, ser obtidos a partir da
soluo saponifcada resultante da reao de determinao
de insaponifcveis.
Soluo amostra. Dissolver 40 mg da mistura de cidos
graxos obtidos da amostra em 4 mL de clorofrmio.
Soluo padro. Dissolver, em 4 mL de clorofrmio, 40
mg da mistura de cidos graxos obtidos a partir de uma
mistura de 19 volumes de leo de milho e 1 volume de
leo de canola.
Procedimento. Aplicar, separadamente, na placa, 3 L de
cada soluo. Desenvolver o cromatograma com mistura
de cido actico glacial: gua (90:10 v/v) por percurso
de 8 cm. Secar a placa a 110 C durante 10 min. Deixar
arrefecer. Introduzir a placa, salvo indicao em contrrio,
em cuba de cromatografa saturada de vapores de iodo.
Para tal, coloque iodo em cristalizador, de forma baixa,
no fundo da cuba. Aps certo tempo, aparecem manchas
castanhas ou amarelas acastanhadas. Retirar a placa da
cuba e aguardar alguns minutos. Quando a colorao de
fundo, castanha da camada desaparecer, pulverizar com
soluo de amido; aparecem, ento, manchas azuis que,
quando secam, podem passar a castanhas e voltam de
novo a azul aps pulverizao com gua. O cromatograma
obtido com a Soluo amostra apresenta sempre manchas
correspondentes s manchas do cromatograma obtido com
a Soluo padro: uma com Rf prximo de 0,5 (cido
oleico) e outra com Rf prximo de 0,65 (cido linoleico).
Em certos leos pode aparecer uma mancha com Rf
prximo de 0,75 (cido linolnico). Por comparao com
o cromatograma obtido com a Soluo padro, verifque
a ausncia da mancha com Rf 0,25 (cido ercico) no
cromatograma obtido com a soluo problema.
5.2.29.15.4 leos estranhos em leos fxos por
cromatografa a gs
Quando no houver qualquer indicao na monografa
especfca, utilize o Mtodo A. A pesquisa de leos
estranhos efetuada sobre os steres metlicos dos cidos
graxos do leo em anlise, utilizando cromatografa a gs
(5.2.17.5).
MTODO A
Esse mtodo no se aplica aos leos contendo glicerdeos de
cidos graxos com grupos epoxi, hidro epoxi, ciclopropilo
ou ciclopropenilo, nem aos que contm grande quantidade
de cidos graxos com nmero de tomos de carbono na
cadeia inferior a 8, nem queles cujo ndice de cido seja
superior a 2,0.
Soluo amostra. Se a monografa indicar, seque a amostra
antes de iniciar o ensaio. Pesar 1,0 g da amostra, em balo
de boca esmerilhada de 25 mL. Acoplar condensador de
refuxo e um dispositivo que possibilite fazer passar uma
corrente de nitrognio no interior do balo. Adicionar 10
mL de metanol anidro e 0,2 mL de soluo de hidrxido
de potssio a 60 g/L em metanol. Adaptar o condensador e
fazer passar uma corrente de nitrognio com fuxo de cerca
de 50 mL/min at eliminao do ar. Agitar e aquecer
ebulio. Quando a preparao fcar lmpida (normalmente
cerca de 10 min depois), aquecer por mais 5 min. Arrefecer
em gua corrente e transfrir para um funil de separao.
Lavar o balo com 5 mL de heptano, adicionar ao contedo
do funil de separao e agitar. adicionar 10 mL de soluo
de cloreto de sdio a 200 g/L e agitar vigorosamente.
Deixar separar as fases e transfrir a fase orgnica para um
balo contendo sulfato de sdio anidro. Deixar em repouso
e fltrar.
Soluo padro (a). Preparar 0,50 g de mistura de
substncias de referncia, conforme prescrito na monografa
especfca. Se a monografa no indicar a soluo padro,
utilize uma das que so descritas na Tabela 1. Dissolver
em heptano e diluir a 50,0 mL com o mesmo solvente.
Observao: Para cromatografa em coluna capilar e razo
de split recomendado que o componente com cadeia
longa da mistura em anlise seja adicionado mistura de
calibrao, quando a anlise quantitativa for realizada por
curva de calibrao.
Soluo padro (b). Diluir 1,0 mL da soluo padro (a) e
completar para 10,0 mL com heptano.
Soluo padro (c). Preparar 0,50 g de uma mistura de metil
steres de cidos graxos conforme indicado na monografa
da substncia em anlise. Dissolver em heptano e diluir
at 50 mL em balo volumtrico com o mesmo solvente.
Misturas comerciais de metil steres de cidos graxos,
tambm, podem ser utilizadas.
Condies cromatogrfcas
Coluna:
- material: slica fundida, vidro ou quartzo;
- tamanho: 10 a 30 m de comprimento e 0,2 a 0,8 mm de
dimetro interno;
- fase estacionria: poli(cianopropil)metilfenilmetilsiloxano
ou de macrogol
20 000 (espessura do flme de 0,1 a 0,5 m) ou outra fase
estacionria apropriada;
Gs de arraste: hlio ou hidrognio para cromatografa;
Fluxo do gs de arraste: 1,3 mL/min (para colunas de 0,32
mm de dimetro interno);
Razo de split: 1:100 ou menor, de acordo com o dimetro
interno da coluna em uso (1:50 quando o dimetro for de
0,32 mm);
Detector: ionizao de chama;
Temperatura:
- coluna: 160 - 200 C, de acordo com a fase estacionria
e comprimento (200 C para uma coluna de 30 m de
comprimento, revestida internamente com macrogol
20 000). Se necessrio ou indicado na monografa da
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 157 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
substncia em anlise, elevar a temperatura da coluna
de 170 a 230 C com rampa de aquecimento de 3 C por
minuto (coluna com macrogol 20 000).
- injetor: 250 C;
- detector: 250 C;
Volume de injeo: 1 L;
Sensibilidade: A altura do pico principal no cromatograma
obtido com a Soluo de padro (a) de 50 a 70% da
escala total do registrador.
Adequao do sistema quando forem utilizadas as misturas
de substncias referncia (Tabela 2).
Observao. Para cromatografa em coluna capilar e razo
de split recomendado que o componente com cadeia
longa da mistura em anlise seja adicionado mistura de
calibrao, quando a anlise quantitativa for realizada por
curva de calibrao.
- resoluo: no mnimo, de 4 entre os picos de caprilato
de metila e caprato de metila, calculados no cromatograma
obtido com a Soluo padro (a);
- razo sinal/rudo: no mnimo, 5 para o pico referente ao
caprato de metila, observado no cromatograma obtido pela
anlise da Soluo padro (b);
- nmero de pratos tericos: mnimo de 15000, calculado
para o pico correspondente ao caproato de metila.
Adequao do sistema quando forem utilizadas as misturas
de substncias referncia listadas nas Tabelas 1, ou 3:
Observao. Para cromatografa em coluna capilar e razo
de split recomendado que o componente com cadeia
longa da mistura em anlise seja adicionado mistura de
calibrao, quando a anlise quantitativa for realizada por
curva de calibrao.
- resoluo: no mnimo, de 1,8 entre os picos de oleato de
metila e estearato de metila, calculados no cromatograma
obtido com a Soluo padro (a);
- razo sinal/rudo: no mnimo, 5 para o pico referente ao
miristato de metila observado no cromatograma obtido
pela anlise da Soluo padro (b);
- nmero de pratos tericos: mnimo de 30 000, calculado
para o pico correspondente ao estearato de metila.
Avaliao do cromatograma. Evite condies de anlise que
possibilitem o surgimento de picos mascarados (presena
de constituintes com tempos de reteno prximos como,
por exemplo, os cidos linolnico e araqudico).
Anlise qualitativa
Identifcar os picos do cromatograma obtido com a Soluo
padro (c) (em condies isotrmicas de operao ou com
programao linear de temperatura).
Quando forem utilizadas condies isotrmicas de
operao, os picos podem ser identifcados por comparao
com o cromatograma obtido da Soluo padro (a) e
informaes registradas nas Tabelas 1, 2, ou 3:
a) medir o tempo de reteno reduzido (t
R
) de cada pico
obtido da Soluo padro (a). O t
R
o tempo de reteno
medido em relao ao pico do solvente e no em relao ao
tempo da injeo. Traar a reta por meio da equao:
Log (t
R
)

= f (nmero de carbonos da cadeia equivalente)
b) os logaritmos dos tempos de reteno reduzidos
dos cidos insaturados so pontos da reta com valores
no inteiros de tomos de carbono denominados de
comprimento equivalente de cadeia. O comprimento
equivalente de cadeia corresponde ao nmero terico de
tomos de carbonos de cidos graxos saturados que teriam
o mesmo t
R
. Por exemplo, o cido linoleico possui t
R

como cido graxo teoricamente saturado com 18,8 tomos
de carbono. Identifcar os picos do cromatograma obtido
com a soluo teste por curva de calibrao e pelo tempo
de reteno reduzido. Comprimentos de cadeia esto
registrados na Tabela 4.
Anlise quantitativa
Geralmente, a quantifcao realizada usando o mtodo
de normalizao, no qual a soma das reas sob os picos
do cromatograma, com exceo do pico do solvente,
considerada como sendo igual a 100%. Utilizar,
preferencialmente, um integrador eletrnico.
O teor percentual de cada componente calculado
determinando a rea sob o pico correspondente em relao
soma das reas sob todos os picos. No considerar os
picos cuja rea for inferior a 0,05 por cento da rea total.
Em determinados casos, quando a cadeia de cidos graxos
inferior ou igual a doze tomos de carbono, podem ser
indicados fatores de correo nas monografas individuais
para converter a rea sob os picos em porcentagem m/m.
Tabela 1 Mistura de substncias para calibrao.
Mistura de substncias Composio (% m/m)
Laurato de metila 5
Miristato de metila 5
Palmitato de metila 10
Estearato de metila 20
Araquidato de metila 40
Oleato de metila 20
Tabela 2 Mistura de substncias para calibrao.
Mistura de substncias Composio (% m/m)
Caproato de metila 10
Caprilato de metila 10
Caprato de metila 20
Laurato de metila 20
Miristato de metila 40
158 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Tabela 3 Mistura de substncias para calibrao.
Mistura de substncias Composio (% m/m)
Miristato de metila 5
Palmitato de metila 10
Estearato de metila 15
Araquidato de metila 20
Oleato de metila 20
Eicosanoato de metila 10
Behenato de metila 10
Lignocerato de metila 10
Tabela 4 - Comprimento equivalente de cadeia
(valores calculados a partir de curva de calibrao
e anlise com coluna de macrogol 20000).
cido graxo
Comprimento de
cadeia equivalente
cido caproico 6,0
cido caprlico 8,0
cido cprico 10,0
cido lurico 12,0
cido misrstico 14,0
cido palmtico 16,0
cido palmitoleico 16,3
cido margrico 17,0
cido esterico 18,0
cido oleico 18,3
cido linoleico 18,8
cido gama-linolnico 19,0
cido alfa-linolnico 19,2
cido araquidico 0,0
cido eicosanoico 20,2
cido araquidnico 21,2
cido behnico 22,0
cido ercico 22,2
cido 12-oxoesterico 22,7
cido ricinolico 23,9
cido 12-hidroxiesterico 23,9
Lignocerato de metila 24,0
cido nervnico 24,2
MTODO B
Esse mtodo no se aplica aos leos que contenham
glicerdeos de cido graxos com grupos epoxi, hidroepoxi,
ciclopropilo ou ciclopropenilo, nem aos leos cujo ndice
de cido seja superior a 2,0.
Soluo problema. Introduzir 0,100 g da amostra em tubo
de centrfuga de 10 mL com rolha esmerilhada. Dissolver
com 1 mL de heptano e 1 mL de dimetilcarbonato. Agitar
energicamente, aquecendo a calor brando (50 - 60
o
C).
Adicionar 1 mL de soluo de sdio a 12 g/L em metanol
anidro soluo ainda quente. Agitar energicamente,
durante cerca de 5 min. Adicionar 3 mL de gua destilada
e agitar energicamente, durante cerca de 30 s. Centrifugar
durante 15 min a 1500 g. Injetar 1 L da fase orgnica.
Solues padro e avaliao dos cromatogramas. Na
ausncia de indicao especfca na monografa individual,
proceda conforme descrito em Mtodo A.
Condies cromatogrfcas. A cromatografa pode ser
realizada, utilizando:
coluna de slica fundida de 30 m de comprimento e 0,25
mm de dimetro interno, recoberta com macrogol 20 000
(espessura da pelcula: 0,25 m);
gs de arraste: hlio para cromatografa, com fuxo 0,9
mL/min;
detector de ionizao de chama;
razo de split 1:100
Utilizar a programao de temperatura representada na
Tabela 1.
Tabela 1 - Programao de temperatura para cromatografa.
Tempo (minutos) Temperatura (C)
Coluna 0 15 100
15 36 100 225
36 61 225
Injetor 250
Detector 250
MTODO C
Esse mtodo no se aplica aos leos que contenham
glicerdeos de cido graxos com grupos epoxi, hidroperoxi,
aldedo, cetona, ciclopropilo e ciclopropenilo, bem como,
aos leos com grupos polinsaturados conjugados ou com
grupos acetilnicos por causa da destruio parcial ou total
desses grupos.
Soluo problema. Em frasco cnico de 25 mL, dissolver
0,10 g da amostra em 2 mL de soluo de hidrxido de
sdio a 20 g/L em metanol. Adaptar o frasco ao condensador
de refuxo vertical e aquecer durante 30 min. Atravs do
condensador, adicionar 2,0 mL de soluo metanlica
de trifuoreto de boro e aquecer durante 30 min. Atravs
do condensador, adicionar 4 mL de heptano e aquecer
durante 5 min. Arrefecer a mistura e adicionar 10,0 mL de
soluo saturada de cloreto de sdio. Agitar durante 15 s e
adicionar uma quantidade de soluo saturada de cloreto
de sdio sufciente para fazer a fase superior chegar ao
colo do frasco recipiente. Retirar alquota de 2 mL da fase
superior. Lavar trs vezes com 2 mL de gua de cada vez e
secar com sulfato de sdio anidro.
Solues padro, condies cromatogrfcas e avaliao
dos cromatogramas. Na ausncia de indicao na
monografa especfca, proceder conforme descrito em
Mtodo A.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 159 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
5.2.29.16 DETERMINAO DE ESTERIS
EM LEOS FIXOS
SEPARAO DA FRAO DE ESTERIS
Preparar a frao insaponifcvel. Separar a frao de
esteris do leo fxo por cromatografa em camada
delgada, utilizando uma placa de gel de slica G (espessura
da camada entre 0,3 mm e 0,5 mm).
Soluo amostra (a). Em balo de 150 mL, introduzir
volume de soluo de betulina a 2 g/L em diclorometano, que
corresponda a cerca de 10% do teor de esteris da amostra
utilizada para o doseamento (por exemplo, volume de 500 L
de soluo de betulina no caso do leo de oliva virgem, e de
1500 L no caso de outros leos vegetais). Se na monografa
estiver registrada a exigncia do clculo do teor percentual
de cada esterol na frao esterlica, a adio da betulina pode
ser omitida. Evaporar at a secura em corrente de nitrognio.
Adicionar 5,00 g da amostra e adicionar 50 mL de hidrxido
de potssio alcolico 2 M. Acoplar condensador de refuxo
vertical. Aquecer em banho-maria durante 1 h, sob agitao.
Arrefecer at temperatura inferior a 25 C e transferir o
contedo do balo para um funil de separao, com o auxlio
de 100 mL de gua. Agitar, com precauo, trs vezes
com 100 mL de ter etlico isento de perxidos. Reunir as
fraes etreas em outro funil de separao com o auxlio
de 40 mL de gua destilada. Agitar suavemente durante
alguns minutos. Deixar separar as fases por decantao e
rejeitar a fase aquosa. Lavar a fase orgnica vrias vezes
com 40 mL de gua (a cada vez) at que a fase aquosa no
apresente reao alcalina a fenolftalena. Transferir a frao
orgnica para um balo, tarado e lavar o funil de separao
com ter etlico. Evaporar o ter. Adicionar ao resduo 6
mL de acetona. Eliminar, cuidadosamente, o solvente com
corrente de nitrognio. Secar em estufa a 100 - 105 C at
massa constante. Dissolver o resduo com volume mnimo
de diclorometano.
Soluo amostra (b).Submeter 5,00 g de leo de canola
ao mesmo procedimento descrito para a Soluo amostra
(a) a partir de Adicionar 50 mL de hidrxido de potssio
alcolico 2 M....
Soluo problema (c). Submeter 5,00 g de leo de girassol
ao mesmo procedimento descrito para a Soluo problema
(a) a partir de Adicionar 50 mL de hidrxido de potssio
alcolico 2 M....
Soluo padro. Dissolver 25 mg de colesterol e 10 mg
de betulina em 1 mL de diclorometano. Utilizar uma placa
diferente para cada soluo problema.
Aplicar, separadamente, 20 L da Soluo padro em
forma de banda de 20 mm por 3 mm e 0,4 mL da soluo
problema (a), (b) ou (c) em forma de banda de 40 mm por
3 mm. Migrar pela distncia de 18 cm com a fase mvel
ter:n-hexano (35:65; v/v). Secar as placas em corrente de
nitrognio. Revelar com soluo de diclorofuorescena a 2
g/L em etanol. Examinar em 254 nm.
O cromatograma obtido com a Soluo padro
apresenta bandas correspondentes, respectivamente, ao
colesterol e betulina. Os cromatogramas obtidos com
as Solues amostra apresentam bandas de Rf prximos
dos correspondentes aos esteris. De cada um dos
cromatogramas raspar a regio da placa correspondente s
bandas dos esteris bem como uma zona situada 2 - 3 mm
para cima e para baixo das zonas visveis correspondentes
soluo padro. Colocar essas regies em trs erlenmeyer
diferentes de 50 mL. Adicionar a cada um, 15 mL de
diclorometano quente e agitar. Filtrar, separadamente, cada
soluo por um fltro de vidro poroso (40), ou por fltro
de papel apropriado. Lavar, cada fltro, trs vezes com 15
mL de diclorometano. Transferir o fltrado e lquidos de
lavagem em erlenmeyer, tarado. Evaporar at a secura em
corrente de nitrognio e pesar.
DOSEAMENTO DOS ESTERIS
Proceder por cromatografa a gs (5.2.17.5). O doseamento
deve ser realizado ao abrigo da umidade e preparar as
solues no momento do uso.
Soluo amostra. Aos esteris separados a partir da amostra
por cromatografa em camada delgada, adicionar 0,02 mL
da mistura, recentemente preparada, de clorotrimetilsilano:
hexametildissilazano : piridina anidra (1:3:9; v/v/v)
por miligrama de resduo. Agitar, cuidadosamente, at
dissoluo completa dos esteris. Deixar em repouso em
dessecador com pentxido de difsforo durante 30 min.
Centrifugar, se necessrio, e utilizar o sobrenadante.
Soluo padro (a). A nove partes dos esteris separados
do leo de canola por cromatografa em camada delgada,
juntar uma parte de colesterol. Adicionar 0,02 mL da
mistura, recentemente preparada, de clorotrimetilsila
no:hexametildissilazano:piridina anidra (1:3:9; v/v/v)
por miligrama de resduo. Agitar, cuidadosamente, at
dissoluo completa dos esteris. Deixar em repouso em
dessecador com pentxido de difsforo durante 30 min.
Centrifugar, se necessrio, e utilizar o sobrenadante.
Soluo padro (b). Aos esteris separados do leo
de girassol por cromatografa em camada delgada,
juntar 0,02 mL da mistura, recentemente preparada,
de clorotrimetilsilano : hexametildissilazano : piridina
anidra (1:3:9; v/v/v) por miligrama de resduo. Agitar,
cuidadosamente, at dissoluo completa dos esteris.
Deixar em repouso em dessecador com pentxido de
difsforo durante 30 min. Centrifugar, se necessrio, e
utilizar o sobrenadante.
Condies cromatogrfcas
- coluna de slica fundida de 20 a 30 m de comprimento e
0,25-0,32 mm de dimetro interno, recoberta por pelcula
de poli[metil(95)fenil(5)]siloxano ou de poli[metil(94)
fenil(5)vinil(l)]siloxano (espessura da pelcula 0,25 m);
- gs de arraste: gs hidrognio com fuxo de 30 a 50 cm/s
ou hlio com fuxo de 20 a 35 cm/s;
- razo de split (1/50 ou 1/100);
- temperaturas: coluna: 260 C; injetor: 280 C; detector:
290 C;
- volume de injeo: 1 L.
160 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Resultados. O cromatograma obtido com a Soluo padro
(a) apresenta quatro picos principais correspondendo,
respectivamente, ao colesterol, brassicasterol,
campesterol e -sitosterol. O cromatograma obtido com
a Soluo padro (b) apresenta quatro picos principais
correspondendo, respectivamente, ao campesterol,
estigmasterol, -sitosterol e
7
-estigmastenol. Os tempos
de reteno relativos dos diferentes esteris em relao ao
-sitosterol so indicados na Tabela 1.
O pico correspondente ao padro interno (betulina) est,
nitidamente separado, dos picos correspondentes aos
esteris a serem quantifcados.
Tabela 1 Tempos de reteno relativos, dos esteris em
relao ao -sitosterol, obtidos com duas diferentes colunas.
Esteris
Poli[metil(95)
fenil(5) siloxano
Poli[metil(94)
fenil(5)
vinil(1)
siloxano
Colesterol 0,63 0,67
Brassicasterol 0,71 0,73
24-Metilenocolesterol 0,80 0,82
Campesterol 0,81 0,83
Campestanol 0,82 0,85
Estigmasterol 0,87 0,88

7
-Campesterol 0,92 0,93

5,23
-Estigmastadienol 0,95 0,95
Clerosterol 0,96 0,96
-Sitosterol 1 1
Sitostanol 1,02 1,02

5
-Avenasterol 1,03 1,03

5,24
-Estigmastadienol 1,08 1,08

7
-Estigmastenol 1,12 1,12
A
7
-Avenasterol 1,16 1,16
Betulina 1,4 1,6
Examinar o cromatograma obtido com a Soluo amostra.
Identifcar os picos e calcular o teor porcentual de cada
esterol na frao de esteris usando a equao:
em que
A = rea sob o pico correspondente do composto a
quantifcar;
S = soma das reas sob os picos correspondentes aos
compostos indicados na Tabela 1.
Se na monografa houver exigncia, calcule o teor de
cada esterol na amostra, em miligramas por 100 gramas,
utilizando a expresso:
em que
A = rea sob o pico correspondente ao composto a ser
quantifcado;
A
s
= rea sob o pico correspondente a betulina;
m = massa da tomada da amostra para o ensaio, em gramas;
m
s
= massa, em miligramas, da betulina adicionada
5.2.30 CARBONO ORGNICO
TOTAL
A determinao do carbono orgnico total (COT) um
mtodo sensvel e inespecfco de quantifcar os tomos de
carbono ligados por covalncia em molculas orgnicas
presentes em uma amostra. A anlise utilizada para
identifcar a contaminao da gua por impurezas orgnicas
e auxiliar no controle dos processos de purifcao e
distribuio. Baixos nveis de COT sugerem a ausncia de
compostos qumicos orgnicos potencialmente perigosos
na gua usada na elaborao de frmacos. O teor de COT
pode estar relacionado ocorrncia de endotoxinas, ao
crescimento microbiano e ao desenvolvimento de bioflmes
nas paredes da tubulao dos sistemas de distribuio de
gua de uso farmacutico. O contedo de COT independe
do estado de oxidao da matria orgnica e no sofre
interferncia de outros tomos ligados estrutura orgnica,
como nitrognio e hidrognio. H vrios mtodos
apropriados para a anlise do COT e as determinaes
podem ocorrer em linha ou no laboratrio (fora de linha).
Os mtodos em geral fundamentam-se na oxidao
completa das molculas orgnicas a dixido de carbono,
que quantifcado como carbono. Normalmente, o carbono
orgnico oxidado por combusto, aplicando calor,
emisso de raios ultravioleta ou agentes oxidantes, como o
persulfato de sdio. A quantifcao do dixido de carbono
feita por deteco do gs produzido com infravermelho
ou pela leitura da condutividade da soluo.
O mtodo abrangido nesse captulo sugestivo e o
usurio pode adotar qualquer outro que seja apropriado
e acessvel s suas fnalidades especfcas, desde que o
limite de quantifcao seja adequado faixa de leitura
esperada. Utiliza uma soluo padro de substncia
facilmente oxidvel, como a sacarose, por exemplo,
numa concentrao tal que a resposta instrumental obtida
corresponda ao limite estabelecido para o COT. O mtodo
pode igualmente ser realizado com um aparelho instalado
em linha, que tenha sido convenientemente calibrado e que
satisfaa ao ensaio de conformidade do sistema.
Na Tabela 1 so mostrados os valores mdios esperados
para os principais tipos de purifcao de gua.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 161 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Tabela1 Valores tpicos de COT em gua.
Tipo de purifcao Faixa esperada de COT (mg/L)
gua potvel 0,5 a 7,0
Destilao Cerca de 0,10
Deionizao 0,05 a 0,50
Osmose reversa 0,04 a 0,10
Osmose reversa + deionizao 0,01 a 0,05
Tecnologias combinadas 0,003 a 0,005
Tecnologias combinadas + Oxidao UV < 0,002
PREPARAO DAS SOLUES
Branco. Preparar a soluo do branco, ou quaisquer
outras solues necessrias para defnir a linha de base, ou
proceder calibrao, segundo as instrues do fabricante.
Utilizar o branco apropriado para regular o zero do
aparelho.
Soluo padro. Dissolver a sacarose R, previamente
dessecada em temperatura de 105 C durante 3 h, em gua
COT, de modo a obter uma soluo contendo 1,19 mg
de sacarose por litro (0,50 mg de carbono por litro), para
verifcar o instrumento.
Utilizar soluo, em gua COT, de ftalato cido de
potssio, previamente seco a 105 C durante 4 h, na
concentrao determinada pelo fabricante do equipamento,
para a calibrao do instrumento. Preservar a soluo,
acidifcando com H
3
PO
4
concentrado ou H
2
SO
4
concentrado
a pH < 2. Para determinar carbono orgnico e inorgnico,
separadamente, preparar, tambm, a soluo padro de
soluo de bicarbonato de sdio (seco em dessecador, por
no mnimo 18 horas) e carbonato de sdio decaidratado
(seco a 500 600 C por 30 minutos), na proporo do
contedo de carbono de 1:1, em gua COT.
A concentrao da soluo padro est calculada para a
gua purifcada, cujo limite de COT de 500 ppb. Para
outros tipos de gua, fazer a devida adequao.
Soluo de conformidade do sistema. Dissolver
1,4-benzoquinona em gua COT, de modo a obter uma
soluo a 0,75 mg de 1,4-benzoquinona por litro (0,50 mg
de carbono por litro).
Amostra. Coletar a amostra de gua em recipiente limpo;
seco e com tampa, deixando um mnimo de ar. Cuidar para
no haver qualquer tipo de contaminao. No utilizar
material de plstico. Proceder anlise o mais breve
possvel, de modo a minimizar os riscos de deteriorao ou
de contaminao da amostra.
CONFORMIDADE DO SISTEMA
Proceder as leituras (L) das solues de gua COT
(L
Cot
), soluo padro (L
Pa
), soluo de conformidade do
sistema (L
CS
) e registrar. Calcular a efccia do sistema em
percentagem, usando a expresso:
EQUIPAMENTO
Consiste de um injetor, um equipamento para decompor
a amostra, um sistema para separar o dixido de carbono
formado, um detector e um registrador do sinal eltrico
emitido. O tubo de decomposio deve ser capaz de gerar,
no mnimo, 0,450 mg/L de carbono orgnico, para uma
amostra de 1,071 mg/L de sacarose.
O limite de deteco do equipamento, especifcado pelo
fabricante, igual ou inferior a 0,050 mg de carbono por
litro (0,05 ppm). A conformidade do sistema verifcada,
periodicamente, por meio de uma soluo preparada com
uma substncia de difcil oxidao, como por exemplo, a
1,4-benzoquinona. A localizao do aparelho escolhida
de modo a assegurar que os resultados obtidos sejam
representativos da gua utilizada. A leitura deve ser feita
imediatamente aps a coleta da amostra de gua.
GUA COT (ACOT)
Utilizar gua de alta pureza, que satisfaa s seguintes
especifcaes:
- Condutividade: no mximo 0,1 S.cm
1
a 25 C;
- Carbono orgnico total - no mximo 0,10 mg/L.
Dependendo do tipo de equipamento utilizado os teores em
metais pesados e em cobre podem ser crticos. Observar as
instrues do fabricante.
Utilizar a gua COT como branco; na preparao das
solues do padro; de soluo de conformidade do
sistema e na limpeza do equipamento. A preparao da
soluo padro e da soluo de conformidade do sistema
deve ser concomitante da amostra.
PREPARAO DO MATERIAL DE VIDRO.
Lavar, cuidadosamente, o material de vidro por meio de
um processo que elimine a matria orgnica. Deixar o
material imerso em mistura de partes iguais de soluo
de perxido de hidrognio diludo a 30% e cido ntrico
diludo. Enxaguar com gua COT.
Caso use uma microseringa para injetar a amostra, essa
deve ser lavada com mistura de soluo de hidrxido de
sdio a 5% com lcool etlico absoluto (1:1), ou em cido
clordrico a 25%. Enxaguar abundantemente com gua
COT.
162 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
O sistema estar conforme se o valor obtido estiver entre
85% e 115% do valor terico.
PROCEDIMENTO
Empregar o mtodo analtico recomendado pelo fabricante
do equipamento utilizado. Injetar volume adequado da
amostra e proceder leitura do carbono total.
Determinar a leitura da amostra (L
Am
). A amostra satisfaz o
ensaio se L
Am
no for superior a L
Pa
- L
Cot
.
L
Am
< L
Pa
L
Cot
.
Para clculos diferenciados das fraes de carbono
orgnico e inorgnico, fazer a leitura do carbono orgnico
total, mudar a confgurao do equipamento para a leitura
de carbono inorgnico e calcular o carbono orgnico
por subtrao. Alternativamente, pode medir o carbono
orgnico aps remoo do carbono inorgnico e subtrair
do carbono total. Normalmente, para guas de alta pureza
a frao de carbono inorgnico desprezvel.
5.3 MTODOS QUMICOS
5.3.1 REAES DE
IDENTIFICAO
5.3.1.1 ONS, GRUPOS E FUNES
Os mtodos clssicos de identifcao de funes ou
determinados grupos qumicos presentes em frmacos
consistem em reaes que resultam em formao de
precipitado, produto colorido, desprendimento de gs,
descoramento do reagente utilizado ou outro fenmeno
qualquer facilmente perceptvel. Estes ensaios no so
aplicveis a misturas de frmacos.
Acetato
1) Aquecer a amostra com quantidade igual de cido
oxlico; desprendem-se vapores cidos com odor
caracterstico de cido actico.
2) Aquecer a amostra com cido sulfrico SR e etanol;
desprende-se acetato de etila, de odor caracterstico.
3) Tratar soluo neutra da amostra com cloreto frrico
SR; produz-se cor vermelho-escura, que desaparece pela
adio de cidos minerais.
4) Dissolver a amostra em gua, adicionar cinco gotas
de nitrato de lantnio SR, duas gotas de iodo 0,1 M e
uma gota de soluo concentrada de amnia. Aquecer
cuidadosamente at ebulio. Aps alguns minutos forma-
se precipitado azul ou aparece colorao azul intensa.
Acetila
Colocar a amostra em tubo de ensaio e juntar trs gotas de
cido fosfrico SR. Fechar o tubo com tampa atravessada
por outro tubo de ensaio menor cheio de gua e em cujo
exterior se depositou uma gota de nitrato de lantnio
SR. Aquecer o conjunto em banho-maria durante cinco
minutos (certas substncias acetiladas se hidrolisam
com difculdade; neste caso a mistura deve ser aquecida
lentamente, at ebulio, sobre chama direta). Transferir a
gota de nitrato de lantnio SR a uma cpsula de porcelana
e misturar com uma gota de iodo SR. Colocar na borda da
mistura uma gota de hidrxido de amnio 2 M. Na zona de
contato dos dois lquidos aparece lentamente cor azul que
persiste por pouco tempo.
Alcaloide
Dissolver alguns miligramas da amostra em 5 mL de gua,
juntar cido clordrico SR at acidifcar a soluo e, em
seguida, verter 1 mL de iodobismutato de potssio aquo-
actico; forma-se imediatamente precipitado alaranjado ou
vermelho-alaranjado.
Alumnio, on
1) Juntar a amostra a hidrxido de amnio 6 M; forma-
se precipitado branco gelatinoso, insolvel em excesso do
mesmo reagente.
2) Adicionar a amostra a hidrxido de sdio M ou sulfeto
de sdio SR; forma-se precipitado branco gelatinoso,
solvel em excesso do mesmo reagente.
3) A soluo da amostra juntar hidrxido de amnio 5 M
at que se forme turvao. Adicionar, em seguida, trs a
quatro gotas da soluo recm-preparada de quinalizarina
a 0,05% em hidrxido de sdio a 1% (p/v). Aquecer at
ebulio, resfriar e acidifcar com excesso de cido actico
5 M; produz-se cor violeta-avermelhado.
Amina aromtica primria
Acidifcar a soluo da amostra com cido clordrico 2
M e juntar quatro gotas de nitrito de sdio SR. Aps 1 a
2 minutos, acrescentar 1 mL de 2-naftol SR; aparece cor
alaranjada intensa ou vermelha, formando-se geralmente
precipitado.
Amnia e amina aliftica voltil
Dissolver a amostra em tubo de ensaio, acrescentar xido
de magnsio e aquecer se necessrio; desprendem-se
paulatinamente vapores alcalinos, que escurecem o papel
de prata-mangans colocado na parte superior do tubo.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 163 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Amnio, on
Juntar amostra excesso de hidrxido de sdio M a frio;
ocorre desprendimento de amnia, de odor caracterstico, e
que muda para azul a cor vermelha do papel de tornassol.
A decomposio acelerada pelo aquecimento.
Antimno(III), on
1) Tratar a soluo da amostra, fortemente acidifcada
por cido clordrico (no mximo 2 M), com sulfeto de
hidrognio SR; forma-se precipitado alaranjado de sulfeto
de antimnio, insolvel em hidrxido de amnio 6 M, mas
solvel em sulfeto de amnio SR, hidrxido de sdio 2 M
e cido clordrico concentrado.
2) Dissolver a amostra em tartarato de sdio e potssio
SR; aps resfriamento, juntar, gota a gota, sulfeto de sdio
SR1; forma-se precipitado vermelho-alaranjado solvel
em hidrxido de sdio 2 M.
Arsnio
1) A uma soluo amoniacal da amostra adicionar sulfeto de
sdio SR e acidifcar com cido clordrico diludo; forma-
se precipitado amarelo, insolvel em cido clordrico, mas
solvel em solues alcalinas.
2) Aquecer 5 mL da soluo da amostra fortemente
clordrica em banho-maria com volume igual de hipofosfto
de sdio SR; forma-se precipitado de cor marrom a preta.
Caso se tratar de As(V), a reduo mais lenta; o acrscimo
de iodeto de potssio SR exercer efeito cataltico.
Barbtrico sem substituinte no nitrognio
A uma soluo metanlica da amostra juntar algumas gotas
de soluo contendo nitrato de cobalto(II) a 10% (p/v) e
cloreto de clcio a 10% (p/v), misturar e acrescentar, com
agitao, algumas gotas de hidrxido de sdio 2 M; forma-
se precipitado azul-violeta.
Brio, on
1) Tratar soluo da amostra com cido sulfrico M; forma-
se precipitado branco, insolvel nos cidos clordrico e
ntrico.
2) Colocar a amostra na zona redutora de chama; esta
adquire cor verde-amarela, que se apresenta azul quando
vista atravs de vidro verde.
Benzoato
1) Tratar soluo neutra da amostra com cloreto frrico
SR; forma-se precipitado amarelo escuro, solvel em ter
etlico.
2) Acidular soluo moderadamente concentrada da
amostra com cido sulfrico M; forma-se precipitado de
cido benzico, facilmente solvel em ter etlico.
Bicarbonato
1) Tratar a amostra com cido mineral; produz-se
efervescncia com desprendimento de gs incolor que, ao
reagir com hidrxido de clcio SR, forma imediatamente
precipitado branco.
2) A uma soluo fria da amostra juntar fenolftalena SI;
a soluo permanece inalterada ou fca apenas levemente
colorida.
Bismuto, on
Dissolver a amostra em ligeiro excesso de cidos ntrico ou
clordrico e diluir com gua; forma-se precipitado branco
que, tratado com sulfeto de hidrognio, passa a marrom; o
composto resultante solvel em mistura quente de partes
iguais de cido ntrico e gua, mas insolvel em sulfeto de
amnio SR.
Bissulfto
Tratar a amostra com cido clordrico 3 M; desprende-se
dixido de enxofre, reconhecido por seu odor pungente
caracterstico e por escurecer papel de fltro umedecido
com nitrato de mercrio(I) SR.
Borato
1) A uma soluo da amostra acidulada com cido
clordrico, juntar algumas gotas de soluo de iodo a 0,1%
(p/v) e de soluo de lcool polivinlico a 2% (p/v); produz-
se cor verde intensa. A reao alterada por agentes de
oxidao ou reduo.
2) Tratar a amostra com cido sulfrico, acrescentar
metanol e levar a mistura ignio; ela queima com chama
de bordos verdes.
Brometo
1) soluo da amostra acidifcada com cido sulfrico SR,
juntar gua de cloro SR; desprende-se bromo, que confere
cor parda soluo; agitando-se esta com clorofrmio,
o solvente adquire cor variando de vermelho a marrom-
avermelhado e a camada aquosa permanece incolor.
2) Tratar a soluo da amostra com cido ntrico SR e
nitrato de prata SR; forma-se precipitado caseoso branco
levemente amarelado, insolvel em cido ntrico e pouco
solvel em hidrxido de amnio 6 M
Clcio, on
1) Umedecer a amostra com cido clordrico e lev-la
zona redutora da chama; aparece cor vermelho-alaranjada
transitria.
2) Dissolver a amostra, juntar duas gotas de vermelho
de metila SI, neutralizar com hidrxido de amnio 6 M,
acrescentar cido clordrico 3 M, gota a gota, at acidular
a soluo e verter oxalato de amnio SR; forma-se
164 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
precipitado branco de oxalato de clcio, insolvel em cido
actico 6 M, mas solvel em cido clordrico SR.
Carbonato
1) Tratar a amostra com cido mineral; produz-se
efervescncia, com desprendimento de gs incolor que, ao
reagir com hidrxido de clcio SR, forma imediatamente
precipitado branco.
2) A uma soluo fria da amostra solvel juntar fenolftalena
SI; aparece cor vermelha.
Chumbo, on
1) Tratar soluo da amostra com cido sulfrico M; forma-
se precipitado branco, insolvel em cido clordrico 3 M ou
cido ntrico 2 M, mas solvel em hidrxido de sdio M
aquecido, em acetato de amnio a 10% (p/v) e em excesso
de cido sulfrico M.
2) Tratar soluo da amostra, isenta de cidos minerais,
com cromato de potssio SR; forma-se precipitado
amarelo, insolvel em cido actico 6 M, mas solvel em
hidrxido de sdio M e em cido ntrico, a quente.
Cianeto
Tratar soluo da amostra com sulfato ferroso SR, hidrxido
de sdio SR e cloreto frrico SR, aquecer at ebulio e
acidular com cido clordrico; produz-se colorao ou
precipitado azul. Se a quantidade de cianeto presente for
pequena, forma-se soluo coloidal de colorao azul -
esverdeada.
Citrato
A 15 mL de piridina adicionar alguns miligramas da
amostra dissolvida ou suspensa em 1 mL de gua, agitar,
juntar 5 mL de anidrido actico mistura, agitar novamente;
aparece cor vermelha clara.
Clorato
1) Tratar soluo da amostra com nitrato de prata SR em
meio de cido ntrico SR; no se forma precipitado. Verter
cido sulfuroso ou soluo recente de nitrito de sdio SR
a esta mistura; forma-se precipitado branco, insolvel em
cido ntrico SR, mas solvel em hidrxido de amnio 6 M.
2) Submeter a amostra ignio; forma-se cloreto,
identifcado por ensaios apropriados.
3) Tratar a amostra seca com cido sulfrico; ocorre
crepitao desprendendo-se gs amarelo esverdeado (para
este ensaio usar quantidade pequena de clorato, devendo-
se tomar cuidado extremo ao execut-lo, pois o gs que se
forma decompe-se de modo explosivo acima de 45 C -
utilizar capela).
Cloreto
1) Tratar soluo da amostra, acidifcada com cido ntrico,
com nitrato de prata SR; forma-se precipitado branco
caseoso, insolvel em cido ntrico, mas, solvel em ligeiro
excesso de hidrxido de amnio 6 M.
2) Misturar a amostra seca com igual peso de dixido de
mangans, umedecer com cido sulfrico SR e aquecer
brandamente; desprende-se cloro, identifcado pelo odor
e pela produo de cor azul em papel de amido iodetado
umedecido.
Cobre (II), on
1) Tratar a soluo da amostra com ferrocianeto de potssio
SR; forma-se precipitado marrom-avermelhado, insolvel
em cidos diludos, mas solvel em hidrxido de amnio.
2) Tratar soluo da amostra com cido clordrico e
limalhas de ferro metlico; deposita-se pelcula vermelha
de cobre metlico.
3) Tratar soluo da amostra com excesso de hidrxido de
amnio 6 M; forma-se primeiro precipitado azulado e, em
seguida, soluo fortemente azulada.
ster
Juntar amostra soluo de cloridrato de hidroxilamina a
7% (p/v) em metanol e soluo de hidrxido de potssio a
10% (p/v) em etanol, aquecer at ebulio, resfriar, acidular
com cido clordrico SR e juntar soluo de cloreto frrico
SI; produz-se cor vermelho-azulada ou vermelha.
Ferro
Tratar a amostra com sulfeto de amnio SR; forma-se
precipitado preto, que se dissolve em cido clordrico 3 M,
com desprendimento de gs sulfdrico, caracterizado pelo
papel acetato de chumbo.
Frrico, on
1) Tratar soluo cida da amostra com ferrocianeto
de potssio SR; forma-se precipitado azul escuro, que
no dissolve por adio de cido clordrico SR, mas
decomposto por hidrxido de sdio 2 M.
2) Tratar a amostra com tiocianato de amnio SR; produz-
se cor vermelha intensa que no desaparece com adio
de cidos minerais diludos, mas pode ser extrada com
ter etlico, passando a colorao vermelha para a camada
etrea.
Ferroso, on
1) Tratar soluo da amostra com ferricianeto de potssio
SR; forma-se precipitado azul escuro, insolvel em cido
clordrico 3 M, mas decomposto por hidrxido de sdio M.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 165 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
2) Tratar soluo da amostra com hidrxido de sdio
M; forma-se precipitado branco-esverdeado, que passa
rapidamente a verde e, em seguida, quando agitado, a
marrom.
Fosfato (ou ortofosfato)
1) Tratar soluo neutra da amostra com nitrato de prata
SR; forma-se precipitado amarelo, solvel em cido ntrico
2 M ou hidrxido de amnio 6 M.
2) Tratar soluo ntrica da amostra com molibdato de
amnio SR; forma-se precipitado amarelo, solvel em
hidrxido de amnio 6 M; a reao acelerada pelo calor.
Hipofosfto
1) Aquecer soluo da amostra, acidulada por cido
sulfrico SR, com sulfato cprico SR; forma-se precipitado
vermelho.
2) Tratar soluo da amostra com cloreto mercrico SR;
forma-se precipitado branco, que se toma cinzento na
presena de excesso de hipofosfto.
Iodeto
1) Tratar soluo da amostra com gua de cloro SR, gota
a gota; desprende-se iodo, que muda a cor da soluo de
amarela para vermelha; agitando-se esta soluo com
clorofrmio, este adquire cor violeta.
2) Tratar soluo da amostra acidifcada com cido ntrico
SR, com nitrato de prata SR; forma-se precipitado amarelo
caseoso, insolvel em cido ntrico SR e hidrxido de
amnio 6 M
Lactato
Tratar soluo da amostra, acidulada por cido sulfrico
SR, com permanganato de potssio SR e aquecer a
mistura; desprende-se acetaldedo, identifcado pelo odor
caracterstico.
Ltio, on
1) Tratar a soluo da amostra moderadamente concentrada
e alcalinizada por hidrxido de sdio SR, com carbonato de
sdio SR; forma-se, por aquecimento, precipitado branco,
solvel em cloreto de amnio SR.
2) Umedecer a amostra com cido clordrico e aquecer na
zona redutora da chama; esta adquire cor vermelha intensa.
Magnsio, on
1) Tratar soluo da amostra com hidrxido de sdio SR;
forma-se precipitado branco, que se dissolve com a adio
de cloreto de amnio SR.
2) Tratar soluo da amostra, na presena de cloreto de
amnio SR, com carbonato de amnio SR; no se forma
precipitado mas, ao se adicionar fosfato de sdio dibsico
heptaidratado SR, forma-se precipitado cristalino branco,
insolvel em hidrxido de amnio 6 M.
Mercrio
1) Tratar soluo da amostra com sulfeto de hidrognio
SR; forma-se precipitado preto, insolvel em sulfeto de
amnio SR e em cido ntrico 2 M fervente.
2) Aplicar soluo da amostra, sem excesso de cido
ntrico, em lmina de cobre brilhante; forma-se depsito
que, ao ser polido, se toma brilhante e prateado.
Mercrio (II), on
1) Tratar soluo da amostra com hidrxido de sdio M;
forma-se precipitado amarelo.
2) Tratar soluo neutra da amostra com iodeto de potssio
SR; forma-se precipitado escarlate, muito solvel em
excesso de reagente.
Mercrio(I),on
1) Tratar a amostra com hidrxido de sdio M; o sal
decompe-se, dando cor preta.
2) Tratar soluo da amostra com cido clordrico SR;
forma-se precipitado branco, que escurece ao ser tratado
com hidrxido de amnio 6 M.
3) Tratar soluo da amostra com iodeto de potssio SR;
forma-se precipitado amarelo que, com o tempo, pode
passar a verde.
Nitrato
1) Aquecer a amostra com cido sulfrico e cobre metlico;
desprendem-se vapores vermelho pardos (realizar em
capela).
2) Tratar soluo da amostra com igual volume de cido
sulfrico, esfriar a mistura e juntar 0,5 mL de soluo de
sulfato ferroso 0,5 M; na interface produz-se cor parda a
roxa.
Nitrito
1) Tratar a amostra com cidos minerais diludos ou com
cido actico 5 M; desprendem-se vapores pardacentos
(realizar em capela).
2) Tratar papel de amido iodetado com soluo da amostra;
o indicador se cora de azul.
3) Adicionar a amostra soluo acidifcada de
permanganato de potssio SR; desaparece a cor.
Oxalato
1) Tratar soluo neutra ou alcalina da amostra com cloreto
de clcio SR; forma-se precipitado branco, insolvel em
cido actico 6 M, mas solvel em cido clordrico.
166 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2) Tratar soluo acidifcada quente da amostra com
permanganato de potssio SR; desaparece a cor.
Permanganato
1) Tratar soluo da amostra, acidulada por cido sulfrico
SR, com perxido de hidrognio a 3% (p/v) SR; a cor
desaparece a frio.
2) Tratar soluo da amostra, acidulada por cido sulfrico
SR, com cido oxlico SR em soluo aquecida; a cor
desaparece.
Perxido
Tratar soluo da amostra, ligeiramente acidulada por
cido sulfrico SR, com dicromato de potssio SR; aparece
cor azul intensa. Agitando a mistura com igual volume de
ter etlico e deixando os lquidos se separarem, a cor azul
passa para a camada etrea.
Potssio, on
1) Tratar soluo alcalina da amostra com tetrafenilborato
sdico a 1% (p/v); forma-se precipitado branco.
2) Tratar soluo da amostra com cido actico SR e 1
mL de cobaltinitrito de sdio SR; forma-se imediatamente
precipitado amarelo ou amarelo alaranjado, na ausncia de
ons amnio.
3) Colocar a soluo da amostra, acidulada com cido
clordrico SR, na zona redutora da chama; esta adquire
cor violeta; a presena de pequena quantidade de sdio
mascara a cor.
4) Tratar soluo da amostra com cido perclrico SR;
forma-se precipitado branco cristalino.
Prata, on
1) Tratar soluo da amostra com cido clordrico; forma-
se precipitado caseoso branco, insolvel em cido ntrico
SR, mas facilmente solvel em hidrxido de amnio 6 M
2) Tratar a soluo da amostra com hidrxido de amnio
6 M e pequena quantidade de soluo de formaldedo; por
aquecimento, deposita-se espelho de prata metlica na
superfcie do recipiente.
Salicilato
1) Tratar a soluo diluda da amostra com cloreto frrico
SR; produz-se cor violeta.
2) Tratar soluo moderadamente concentrada da amostra
com cido mineral; forma-se precipitado cristalino branco
de cido saliclico, que funde entre 156 e 160 C.
Sdio, on
1) Colocar soluo da amostra, acidulada, com cido
clordrico SR, na zona redutora da chama; esta adquire cor
amarela intensa.
2) Tratar soluo da amostra com cido clordrico ou ntrico
e, em seguida, com acetato de uranila e zinco SR; forma-
se precipitado cristalino amarelo-ouro, aps agitao por
alguns minutos.
Succinato
1) Tratar soluo neutra da amostra com cloreto frrico SR;
forma-se precipitado marrom claro.
2) Tratar soluo neutra da amostra com nitrato de prata
SR; forma-se precipitado branco, facilmente solvel em
hidrxido de amnio 6 M.
Sulfato
1) Tratar soluo da amostra com cloreto de brio SR;
forma-se precipitado branco, insolvel em cido clordrico
SR e em cido ntrico SR.
2) Tratar soluo da amostra com acetato de chumbo SR;
forma-se precipitado branco, solvel. em acetato de amnio
SR, mas insolvel em cido clordrico ou ntrico SR.
3) Tratar soluo da amostra com cido clordrico SR; no
se forma nenhum precipitado (distino do tiossulfato).
Sulfto
1) Tratar a amostra com cido clordrico 3 M; desprende-
se dixido de enxofre, reconhecido por seu odor pungente
caracterstico e por escurecer papel de fltro umedecido
com nitrato de mercrio(I) SR.
2) Acidifcar soluo da amostra com cido clordrico
SR, aquecer com algumas gotas de permanganato de
potssio SR e juntar gotas de cloreto de brio SR; forma-se
precipitado branco.
Tartarato
1) Dissolver alguns miligramas da amostra em gua,
acidifcada com cido actico SR, adicionar uma gota
de soluo de sulfato ferroso a 1% (p/v) e uma gota de
perxido de hidrognio a 3% (p/v); produz-se cor amarela
fugaz. Juntar hidrxido de sdio 2 M gota a gota; produz-se
cor azul intensa.
2) Acidifcar soluo da amostra com cido sulfrico M,
juntar algumas gotas de resorcinol 2% (p/v) e adicionar,
cuidadosamente, cido sulfrico, de modo a se formarem
duas camadas; aquecendo em banho-maria, por alguns
minutos, na interface aparece anel vermelho.
Tiocianato
Tratar soluo da amostra com cloreto frrico SR; produz-
se cor vermelha, que no desaparece pela adio de cidos
minerais moderadamente concentrados e pode ser extrada
com ter etlico, passando a colorao vermelha para a
camada etrea.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 167 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Tiossulfato
1) Tratar soluo da amostra com cido clordrico; forma-se
precipitado branco, que passa logo a amarelo, e desprende-
se dixido de enxofre, reconhecido pelo odor.
2) Tratar soluo actica da amostra com cloreto frrico SR;
produz-se cor violeta escura que desaparece rapidamente.
Xantina
Tratar a amostra com duas gotas de soluo concentrada
de perxido de hidrognio concentrado e cinco gotas de
cido clordrico 2 M, e aquecer at secura em banho-maria;
obtm-se resduo vermelho-amarelado que, tratado com
hidrxido de amnio 2 M, muda para vermelho-violeta.
Zinco, on
1) Tratar soluo da amostra com ferrocianeto de potssio
SR; forma-se precipitado branco, insolvel em cido
clordrico 3 M
2) Tratar soluo neutra ou alcalina da amostra com sulfeto
de amnio SR; forma-se precipitado branco.
3) Tratar soluo da amostra com soluo de hidrxido
de sdio 2 M, gota a gota; forma-se precipitado branco,
focoso, solvel em excesso de hidrxido de sdio SR.
5.3.1.2 IDENTIFICAO DE ESTEROIDES
POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA
PROCEDIMENTO
Preparar cromatoplaca utilizando Kieselguhr G como
suporte. Introduzir a cromatoplaca na cuba contendo o
solvente de impregnao e deixar desenvolver at que
o solvente atinja o topo da cromatoplaca. Remover a
cromatoplaca da cuba e deixar evaporar o solvente.
Preparar soluo da amostra a 0,25% (p/v) e soluo do
padro a 0,25% (p/v) utilizando, como solvente, mistura
de 9 volumes de clorofrmio e 1 volume de metanol. A no
ser que a monografa estabelea diferentemente, aplicar
sobre a cromatoplaca 2 uL da soluo de amostra, 2 uL
da soluo padro e 2 uL da mistura 1:1 das solues da
amostra e do padro. Desenvolver o cromatograma com o
eluente especifcado na monografa, deixando-o subir no
mesmo sentido que o solvente de impregnao. Remover a
cromatoplaca da cuba, deixar evaporar o eluente, aquecer
a cromatoplaca a 120
o
C por 15 minutos e nebulizar com
soluo de cido sulfrico a 10% (v/v) em etanol a 96%.
Aquecer a 120
o
C por mais 10 minutos, deixar esfriar e
examinar luz normal e luz ultravioleta (366 nm). A
mancha principal do cromatograma obtido com a soluo
da amostra corresponder mancha principal obtida no
cromatograma da soluo do padro. A mancha principal
resultante da aplicao da mistura das solues de amostra
e de padro aparecer como nica e compacta.
Solventes de impregnao
I - Mistura de 1 volume de formamida e 9 volumes de
acetona
II - Mistura de 1 volume de 1 ,2-propanodiol e 9 volumes
de acetona
III - Mistura de 1 volume de parafna lquida e 9 volumes
de ter de petrleo de faixa de ebulio 40 -60
o
C.
Eluentes
A - Clorofrmio
B - Mistura de 3 volumes de tolueno e 1 volume de
clorofrmio
C - Tolueno
D - Mistura de 4 volumes de cicloexano e 1 volume de
tolueno
E - Mistura de volumes iguais de cicloexano e ter de
petrleo de faixa de ebulio 40 - 60
o
C
F - Mistura de 2 volumes de cido actico glacial e 3
volumes de gua
G - Mistura de 8 volumes de hexano e 2 volumes de
dioxano.
5.3.1.3 PESQUISAS DE ESTEROIDES
ESTRANHOS POR CROMATOGRAFIA
EM CAMADA DELGADA
PROCEDIMENTO I
Preparar cromatoplacas conforme descrito em
Cromatografa em camada delgada (5.2.17.1), utilizando
silica-gel G como suporte. Preparar 3 solues utilizando,
como solvente, mistura de 9 volumes de clorofrmio e 1
volume de metanol nas seguintes concentraes: 1,5%
(p/v) da substncia em exame Soluo 1; 1,5% (p/v) da
substncia qumica de referncia (SQR) correspondente
Soluo 2 e 0,03% (p/v) de cada um das seguintes SQR:
prednisolona e acetato de cortisona Soluo 3. Aplicar
sobre a cromatoplaca 1 uL de cada uma destas solues,
separadamente, e desenvolver o cromatograma utilizando,
como eluente, mistura de 77 volumes de diclorometano, 15
volumes de ter, 8 volumes de metanol e 1,2 volumes de
gua. Secar o cromatograma ao ar, aquecer a 105
o
C por
10 minutos e nebulizar com soluo de azul de tetrazlio
alcalina SR. A mancha principal do cromatograma
obtida com a Soluo 1 corresponde, em posio, cor e
intensidade, mancha principal do cromatograma obtido
com a Soluo 2. Qualquer mancha secundria obtida
com a Soluo 1 no mais intensa do que a mancha
correspondente no cromatograma obtida com a Soluo 3.
PROCEDIMENTO II
Proceder cromatografa utilizando slica-gel G como
suporte e, como eluente, mistura de 95 volumes de
1,2-dicloroetano, 5 volumes de metanol e 0,2 volumes de
gua.
168 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Aplicar sobre a cromatoplaca, separadamente, 1 uL de
cada uma das 3 solues em mistura de 9 volumes de
clorofrmio e 1 volume de metanol, como no Procedimento
I, com exceo da Soluo 3, em que se adiciona acetato de
desoxicortona SQR.
5.3.1.4 PESQUISA DE SUBSTNCIAS
RELACIONADAS A SULFONAMIDAS
POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA
PROCEDIMENTO I
Proceder cromatografa em camada delgada (5.2.17.1)
utilizando slica-gel H como suporte. Preparar soluo
da substncia em exame a 1,0% (p/v) utilizando, como
solvente, mistura de 9 volumes de etanol a 96% e 1 volume
de hidrxido de amnio 13,5 M Soluo 1. Preparar
soluo de sulfanilamida SQR a 0,005% (p/v), usando
o mesmo solvente Soluo 2. Aplicar separadamente
sobre a cromatoplaca 10 uL da Soluo 1 e da Soluo
2. Desenvolver o cromatograma usando mistura de 15
volumes de 1-butanol e 3 volumes de hidrxido de amnio
M como eluente. Remover a cromatoplaca da cuba, aquecer
a 105
o
C por 10 minutos e nebulizar com soluo a 0,1%
(p/v) de 4-dimetilaminobenzaldedo em etanol a 96%,
contendo 1% de cido clordrico (v/v): qualquer mancha
secundria obtida no cromatograma com a Soluo 1,
diferente da mancha principal, no mais intensa que
aquela obtida no cromatograma com a Soluo 2.
PROCEDIMENTO II
Proceder cromatografa em camada delgada (5.2.17.1)
utilizando slica-gel H como suporte e mistura de 20
volumes de clorofrmio, 2 volumes de metanol e 1
volume de dimetilformamida como fase mvel. Aplicar
sobre a cromatoplaca, separadamente, 10 uL de cada uma
das seguintes solues: 0,25% (p/v) da substncia em
exame em mistura de 9 volumes de etanol e 1 volume de
hidrxido de amnio 13,5 M Soluo 1; 0,00125% (p/v)
de sulfanilamida SQR no mesmo solvente da Soluo 1
Soluo 2. Desenvolver o cromatograma, deixar secar ao ar
e revelar conforme prescrito no Procedimento I: qualquer
mancha secundria obtida com a Soluo 1, diferente da
mancha principal, no mais intensa que aquela obtida no
cromatograma com a Soluo 2.
5.3.1.5 IDENTIFICAO DE
FENOTIAZINAS POR CROMATOGRAFIA
EM CAMADA DELGADA
Proceder conforme descrito em Cromatografa em camada
delgada (5.2.17.1). Usar Kieselguhr G como suporte.
Impregnar a cromatoplaca seca, colocando-a em cuba
contendo mistura de 10 volumes de 2-fenoxietanol, 5
volumes de macrogol 300 e 85 volumes de acetona. Deixar
o eluente subir pelo menos 17 cm. Remover a cromatoplaca
da cuba e utilizar imediatamente.
Aplicar sobre a cromatoplaca, separadamente, 2 L de
cada uma das solues seguintes: 0,2% (p/v) da substncia
em exame em clorofrmio Soluo 1 e 0,2% (p/v) da
substncia qumica de referncia (SQR) correspondente
Soluo 2, operando em atmosfera de nitrognio
e luz reduzida. Desenvolver o cromatograma usando,
como eluente, mistura de 2 volumes de dietilamina e 100
volumes de ter de petrleo de faixa de ebulio 40 - 60
o
C saturada com 2-fenoxietanol. Remover a cromatoplaca
da cuba, deixar secar ao ar e examinar sob luz ultravioleta
com intensidade mxima em 366 nm: observa-se
fuorescncia, produzida em poucos minutos. Em seguida,
nebulizar a cromatoplaca com soluo de cido sulfrico
a 10% (v/v) em etanol e observar a colorao produzida:
a mancha principal no cromatograma, obtida com a
Soluo 1, corresponde, em posio, cor e intensidade
de fuorescncia quela obtida no cromatograma com a
Soluo 2 e tem a mesma estabilidade pelo perodo de,
pelo menos, 20 minutos depois da nebulizao.
5.3.1.6 PESQUISA DE IMPUREZAS
RELACIONADAS A FENOTIAZINAS
POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA
PROCEDIMENTO
Preparar cromatoplacas utilizando slica-gel GF
254
como
suporte, operando em atmosfera de nitrognio e ao abrigo
da luz. Preparar soluo contendo 2,0% (p/v) da substncia
em exame em mistura de 95 volumes de metanol e 5 volumes
de dietilamina Soluo 1. Preparar soluo a 0,01% (p/v)
da substncia em exame, utilizando o mesmo solvente
Soluo 2. Aplicar sobre a cromatoplaca, separadamente,
10 uL de cada soluo recm preparada. Usar fase mvel
especifcada na monografa. Deixar o solvente subir 12 cm
acima do ponto de aplicao. Remover a cromatoplaca da
cuba, deixar secar ao ar e examinar sob luz ultravioleta
(254 nm). Desprezar qualquer mancha sobre a linha base.
Qualquer mancha secundria obtida no cromatograma
com a Soluo 1, exceto a mancha principal, no mais
intensa que a mancha obtida com a Soluo 2, exceto se a
monografa estabelecer diferentemente.
Fases mveis
A Mistura de 80 volumes de cicloexano, 10 volumes de
acetona e 10 volumes de dietilamina
B Mistura de 85 volumes de hexano, 10 volumes de
acetona e 5 volumes de dietilamina
C Mistura de 15 volumes de 1-butanol e 3 volumes de
hidrxido de amnio M
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 169 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
5.3.2 ENSAIOS LIMITE PARA
IMPUREZAS INORGNICAS
5.3.2.1 ENSAIO LIMITE PARA CLORETOS
Preparao amostra: transferir a quantidade de amostra
especifcada na monografa, ou indicada na Tabela 1, ou
calculada, para um tubo de Nessler (capacidade de 50 mL e
22 mm de dimetro interno), adicionando um volume de 30
a 40 mL de gua destilada. Caso seja utilizada uma soluo
da amostra, transferir o volume da soluo especifcado
na monografa, ou calculado, para o tubo de Nessler e
completar o volume para 30 a 40 mL com gua destilada.
Neutralizar, se necessrio, com cido ntrico SR Deve-se
empregar uma quantidade de amostra que possibilite o uso
de volume maior do que 0,2 mL de cido clordrico padro.
Fixando-se o volume de soluo padro em 1 mL pode
calcular-se m (massa em grama da amostra) pela frmula:
m = 354,6
l
sendo l o limite de cloreto em ppm na matria-prima.
Preparao padro: transferir o volume de cido clordrico
padro (HCl 0,01 M SV), indicado na monografa, ou
na Tabela 1, ou calculado, para um tubo de Nessler e
adicionar um volume de 30 a 40 mL de gua destilada.
Procedimento: aos tubos de Nessler contendo a preparao
padro e a preparao amostra, adicionar 1 mL de cido
ntrico SR. Se, aps a acidifcao, a preparao no estiver
perfeitamente lmpida, fltrar atravs de papel de fltro isento
de cloreto, transferir o fltrado para o tubo de Nessler e
adicionar 1 mL de nitrato de prata SR. Completar o volume
para 50 mL com gua destilada e homogeneizar. Deixar em
repouso, ao abrigo da luz, durante 5 minutos. A turbidez da
preparao amostra no deve ser superior da padro.
Tabela 1 Limites de impureza cloreto e quantidades correspondentes da matria-prima para se realizar o ensaio
considerando a utilizao constante de 1,0 mL da soluo padro que contm 3,546 x 10
-4
g de cloreto.
Quantidade de amostra (g) Limite de cloreto (ppm) Quantidade de amostra (g) Limite de cloreto (ppm)
0,10 3546 (= 0,355%) 3,8 93
0,15 2364 (= 0,236%) 4,0 88
0,20 1773 (= 0,180%) 4,2 84
0,25 1418 (= 0,l42%) 4,4 80
0,30 1182 (= 0,120%) 4,6 77
0,35 1013 (= 0,100%) 4,8 74
0,40 886 5,0 71
0,45 788 5,2 68
0,50 709 5,4 65
0,55 645 5,6 63
0,60 591 5,8 61
0,65 545 6,0 59
0,70 506 6,2 57
0,75 473 6,4 55
0,80 443 6,6 53
0,85 417 6,8 52
0,90 394 7,0 50
0,95 373 7,2 49
1,00 354 7,4 48
1,2 295 7,6 46
1,4 253 7,8 45
1,6 221 8,0 44
1,8 197 8,2 43
2,0 177 8,4 42
2,2 161 8,6 41
2,4 148 8,8 40
2,6 136 9,0 39
2,8 126 9,2 38
3,0 118 9,4 37
3,2 111 9,6 37
3,4 104 9,8 36
3,6 98 10,0 35
170 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
Sendo fxa a quantidade de cloreto (= 3,546 x 10
-4
g) na
preparao padro, se o limite de cloreto em determinada
substncia for, por exemplo, 354 ppm, dever-se- utilizar
1 g da substncia para obter-se at a mesma turbidez do
padro; se o limite for de 71 ppm de cloreto, devero ser
utilizados 5 g de amostra e assim por diante.
Alternativamente, proceder conforme descrito em
Cromatografa inica (5.2.17.4.1), utilizando cromatgrafo
equipado com coluna de troca aninica e detector por
condutividade com supresso qumica.
5.3.2.2. ENSAIO LIMITE PARA SULFATOS
Preparao amostra: transferir a quantidade da amostra
especifcada na monografa, ou indicada na Tabela 2, ou
calculada, para um tubo de Nessler (capacidade de 50
mL e 22 mm de dimetro interno), adicionando 30 a 40
mL de gua destilada. Caso seja utilizada uma soluo
da amostra, transferir o volume da soluo especifcado
na monografa, ou calculado, para o tubo de Nessler e
completar o volume para 30 a 40 mL com gua destilada.
Se necessrio, neutralizar com cido clordrico SR. Pode-
se, eventualmente, utilizar cido actico. Se a preparao
no estiver perfeitamente lmpida, fltrar atravs de papel
de fltro isento de sulfato. Transferir o fltrado para tubo
de Nessler. Deve-se empregar uma quantidade de amostra
que possibilite o uso de volume maior do que 0,2 mL de
soluo de cido sulfrico padro. Fixando-se o volume de
soluo padro em 2,5 mL pode calcular-se m (massa em
grama da amostra) pela frmula:
m = 1200,8
l
sendo l o limite de sulfato em ppm na matria-prima.
Preparao padro: transferir o volume de cido sulfrico
padro (H
2
SO
4
0,005 M SV) indicado na monografa,
ou indicado na Tabela 2, ou calculado, para um tubo de
Nessler e adicionar um volume de 30 a 40 mL de gua
destilada.
Procedimento: aos tubos de Nessler contendo a preparao
padro e a preparao amostra, adicionar 1 mL de cido
clordrico 3 M e 3 mL de cloreto de brio SR. Completar
o volume para 50 mL com gua destilada. Homogeneizar.
Deixar em repouso por cerca de 10 minutos. A turbidez da
preparao amostra no deve ser superior da padro.
Tabela 2 Limites de impureza sulfato e quantidades correspondentes da matria-prima para se realizar o ensaio
considerando a utilizao constante de 2,5 mL da soluo padro que contm 1,2008 x 10
-3
g de sulfato.
Quantidade de amostra (g) Limite de sulfato (ppm) Quantidade de amostra (g) Limite de sulfato (ppm)
0,50 2401 (= 0,240%) 4,6 261
0,55 2183 (= 0,220%) 4,8 250
0,60 2001 (= 0,200%) 5,0 240
0,65 1847 (= 0,185%) 5,2 231
0,70 1715 (= 0,171%) 5,4 222
0,75 1601 (= 0,160%) 5,6 214
0,80 1501 (= 0,150%) 5,8 207
0,85 1412 (= 0,141%) 6,0 200
0,90 1334 (= 0,133%) 6,2 194
0,95 1264 (= 0,126%) 6,4 187
1,00 1200 (= 0,120%) 6,6 182
1,2 1001 (= 0,100%) 6,8 177
1,4 858 7,0 171
1,6 750 7,2 166
1,8 667 7,4 162
2,0 600 7,6 158
2,2 546 7,8 154
2,4 500 8,0 151
2,6 462 8,2 146
2,8 429 8,4 143
3,0 400 8,6 139
3,2 375 8,8 136
3,4 353 9,0 133
3,6 333 9,2 130
3,8 316 9,4 127
4,0 300 9,6 125
4,2 286 9,8 122
4,4 273 10,0 120
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 171 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Sendo fxa a quantidade de sulfato (= 1,2008 x 10
-3
g),
se o limite de sulfato em determinada substncia for, por
exemplo, 500 ppm, devero ser utilizados 2,4 g de amostra
para obter-se at a mesma turbidez do padro; se o limite
for de 151 ppm de sulfato, devero ser utilizados 8 g de
amostra e assim por diante.
Alternativamente, proceder conforme descrito em
Cromatografa inica (5.2.17.4.1), utilizando cromatgrafo
equipado com coluna de troca aninica e detector por
condutividade com supresso qumica.
5.3.2.3 ENSAIO LIMITE PARA METAIS
PESADOS
A determinao de metais pesados pode ser efetuada por
dois mtodos: ensaio limite por formao de partculas
slidas de sulfetos ou determinao por espectrometria
atmica.
O ensaio limite consiste na formao de partculas slidas
dos sulfetos de metais pesados, em suspenso, e posterior
comparao visual da intensidade da cor nas preparaes
amostra e padro em tubo de Nessler. O ensaio semi
quantitativo e possibilita inferir se a amostra passa ou no
no teste, representando o somatrio da concentrao dos
elementos contaminantes na amostra.
O mtodo por espectrometria atmica possibilita
quantifcar cada elemento contaminante na amostra
e limites diferenciados so estabelecidos para cada
elemento de acordo com a sua toxicidade e o tipo de forma
farmacutica. Elementos como As, Cd, Pb e Hg, devido
elevada toxicidade apresentam limites mais baixos que os
demais. Devido maior biodisponibilidade de elementos
eventualmente presentes em substncias utilizadas na
fabricao de produtos parenterais, os limites requeridos so
inferiores aqueles relacionados para utilizao por via oral.
MTODO DO ENSAIO LIMITE
Reagentes especiais
Soluo estoque de nitrato de chumbo: dissolver,
exatamente, 159,8 mg de nitrato de chumbo em 100 mL de
gua adicionada de 1 mL de cido ntrico. Diluir com gua
para 1000 mL e homogeneizar. Preparar e estocar essa
soluo em recipientes de vidro isentos de sais solveis de
chumbo.
Soluo padro de chumbo (10 ppm Pb): no dia do uso,
diluir 10 mL da soluo estoque de nitrato de chumbo para
100 mL com gua. Cada mililitro dessa soluo contm o
equivalente a 10 g de chumbo (10 ppm Pb).
Tampo acetato pH 3,5: dissolver 25,0 g de acetato de
amnio em 25 mL de gua e adicionar 38 mL de cido
clordrico 6 M. Se necessrio, ajustar o pH em 3,5 com
hidrxido de amnio 6 M ou cido clordrico 6 M. Diluir
para 100 mL com gua e homogeneizar.
Preparo do reagente de tioacetamida: dissolver 4 g de
tioacetamida em gua e completar o volume a 100 mL.
Tomar 0,2 mL e adicionar a 1 mL da mistura de hidrxido
de sdio M, 5 mL de gua e 20 mL de glicerina. Aquecer
em banho-maria por 20 s, resfriar e utilizar imediatamente.
MTODO I
Preparao amostra: transferir para tubo adequado
soluo da amostra preparada conforme especifcado na
monografa e diluir para 25 mL com gua, ou dissolver e
diluir com gua para 25 mL a quantidade de amostra, em
gramas, especifcada na monografa ou calculada segundo
a equao:
2 / (1000l)
em que
l = limite de metais pesados na amostra em porcentagem
(p/p).
Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou
hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de
faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua
para aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
Preparao padro: transferir para tubo adequado 2 mL de
soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25 mL
com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico
M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador
de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua
para aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
Preparao controle: transferir para um terceiro tubo
volume de soluo da amostra preparada conforme descrito
na monografa ou em preparao amostra e adicionar 2 mL
de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb). Ajustar o pH
entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio
6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como
indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente
40 mL e homogeneizar.
Procedimento: a cada uma das preparaes adicionar 2
mL de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 mL de tioacetamida.
Diluir com gua para 50 mL, homogeneizar e deixar em
repouso por 2 minutos. Aps 2 minutos, desenvolver-
se- tonalidade que varia do amarelo ao preto. Observar
as preparaes de cima para baixo, segundo o eixo
vertical do tubo, sobre fundo branco. Qualquer colorao
desenvolvida na preparao amostra no mais intensa do
na padro. O teste somente vlido se a intensidade da
colorao desenvolvida na preparao controle for igual ou
superior quela da padro.
MTODO II
Preparao amostra: transferir para tubo adequado
soluo da amostra preparada conforme especifcado na
monografa e diluir para 25 mL com solvente orgnico
(dioxano ou acetona, contendo, no mnimo, 15% v/v de
gua), ou dissolver e diluir com o mesmo solvente para 25
mL a quantidade de amostra, em gramas, especifcada na
monografa ou calculada segundo a equao:
172 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
2 / (1000l)
em que
l = limite de metais pesados na amostra em porcentagem
(p/p).
Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou
hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de
faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua
para aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
Preparao padro: transferir para tubo adequado 2 mL
de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25
mL com o mesmo solvente empregado para a dissoluo da
amostra. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M
ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de
faixa estreita como indicador externo. Diluir com o mesmo
solvente empregado para a dissoluo da amostra para
aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
Preparao controle: transferir para um terceiro tubo
volume de soluo da amostra preparada conforme
descrito na monografa ou em preparao amostra e
adicionar 2 mL de soluo padro de chumbo (10 ppm
Pb). Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou
hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de
faixa estreita como indicador externo. Diluir com o mesmo
solvente empregado para a dissoluo da amostra para
aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
Procedimento: a cada uma das preparaes adicionar 2 mL
de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 mL de tioacetamida. Diluir
com gua para 50 mL, homogeneizar e deixar em repouso
por 2 minutos. Aps 2 minutos, desenvolver-se- colorao
que varia do amarelo ao preto. Observar as preparaes
de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo,
sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na
preparao amostra no mais intensa do que na padro.
O teste somente vlido se a intensidade da colorao
desenvolvida na preparao controle for igual ou superior
quela na padro.
MTODO III
Preparo da amostra: utilizar a quantidade de amostra, em
gramas, especifcada na monografa ou calculada segundo
a equao:
2 / (1000l)
em que
l = limite de metais pesados na amostra em porcentagem
(p/p).
Transferir a amostra para cadinho adequado, adicionar
cido sulfrico sufciente para umedecer a substncia
e incinerar, cuidadosamente, sob temperatura baixa.
Adicionar massa carbonizada 2 mL de cido ntrico e 5
gotas de cido sulfrico. Aquecer, com cuidado, at que
no mais se desprendam vapores brancos. Incinerar em
mufa a 500 - 600 C at completa combusto do carbono.
Resfriar em temperatura ambiente, adicionar 4 mL de
cido clordrico 6 M, cobrir, digerir em banho-maria
por 15 minutos, descobrir e evaporar em banho-maria,
lentamente, at secura. Umedecer o resduo com 1 gota
de cido clordrico, adicionar 10 mL de gua quente e
digerir em banho-maria por 2 minutos. Alcalinizar ao papel
tornassol com hidrxido de amnio 6 M adicionado gota a
gota. Diluir com gua para 25 mL e ajustar o pH entre 3,0
e 4,0 com cido actico M, utilizando papel indicador de
faixa estreita como indicador externo. Filtrar se necessrio,
lavar o cadinho e o fltro com 10 mL de gua e combinar
o fltrado e as guas de lavagem em tubo adequado para
comparao de cor. Diluir com gua para aproximadamente
40 mL e homogeneizar.
Preparao padro: transferir para tubo adequado 2 mL
de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25
mL com o mesmo solvente empregado para a dissoluo da
amostra. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M
ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de
faixa estreita como indicador externo. Diluir com o mesmo
solvente empregado para a dissoluo da amostra para
aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
Preparao controle: transferir para um terceiro tubo
volume de soluo da amostra preparada conforme
descrito na monografa ou em preparao amostra e
adicionar 2 mL de soluo padro de chumbo (10 ppm
Pb). Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou
hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de
faixa estreita como indicador externo. Diluir com o mesmo
solvente empregado para a dissoluo da amostra para
aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
Procedimento: a cada uma das preparaes adicionar 2 mL
de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 mL de tioacetamida. Diluir
com gua para 50 mL, homogeneizar e deixar em repouso
por 2 minutos. Aps 2 minutos, desenvolver-se- colorao
que varia do amarelo ao preto.Observar as preparaes
de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo,
sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida
na preparao amostra no mais intensa do que aquela
na padro. O teste somente vlido se a intensidade da
colorao desenvolvida na preparao controle for igual ou
superior quela na padro.
MTODO IV
Preparo da amostra: Pesar, exatamente, quantidade de
amostra recomendada na monografa ou calculada segundo
a equao:
2 / (1000l)
em que
l = limite de metais pesados na amostra em porcentagem
(p/p).
Transferir para tubo de digesto de vidro borossilicato
de 100 mL e adicionar cerca de 10 mL de cido ntrico.
Proceder digesto em chapa de aquecimento ou bloco
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 173 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
digestor em temperatura de 120 C, durante 3 horas.
Recomenda-se aquecer o sistema lentamente, para evitar
projeo da amostra. Caso haja evaporao do cido,
adicionar outra alquota de 5 mL. Caso uma preparao
lmpida no seja obtida, adicionar, aps resfriamento, 2 mL
de perxido de hidrognio a 30% (p/p) e aquecer a 140 C
por mais uma hora. Esfriar e diluir, cautelosamente, com
pequeno volume de gua. Transferir, com lavagem, para
tubo de Nessler de 50 mL, sem ultrapassar 25 mL.
Preparao padro: transferir para tubo adequado 2 mL de
soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25 mL
com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico
M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador
de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua
para aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
Preparao controle: transferir para um terceiro tubo
volume de soluo da amostra preparada conforme descrito
na monografa ou em preparao amostra e adicionar 2 mL
de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb). Ajustar o pH
entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio
6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como
indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente
40 mL e homogeneizar.
Procedimento: a cada uma das preparaes adicionar 2 mL
de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 mL de tioacetamida. Diluir
com gua para 50 mL, homogeneizar e deixar em repouso
por 2 minutos. Aps 2 minutos, desenvolver-se- colorao
que varia do amarelo ao preto. Observar as preparaes
de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo,
sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na
preparao amostra no mais intensa do que na padro.
O teste somente vlido se a intensidade da colorao
desenvolvida na preparao controle for igual ou superior
quela na padro.
MTODO V
Preparo da amostra: nos casos em que os mtodos anteriores
de preparo de amostra no forem efcientes, proceder
conforme descrito em Decomposio por via mida em
sistema fechado ou Mtodo de combusto iniciada por
micro-ondas em sistema pressurizado descritos em Mtodo
de espectrometria atmica.
Preparao padro: transferir para tubo adequado 2 mL de
soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25 mL
com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico
M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador
de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua
para aproximadamente 40 mL e homogeneizar.
Preparao controle: transferir para um terceiro tubo
volume de soluo da amostra preparada conforme descrito
na monografa ou em preparao amostra e adicionar 2 mL
de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb). Ajustar o pH
entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio
6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como
indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente
40 mL e homogeneizar.
Procedimento: a cada uma das preparaes adicionar 2 mL
de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 mL de tioacetamida. Diluir
com gua para 50 mL, homogeneizar e deixar em repouso
por 2 minutos. Aps 2 minutos, desenvolver-se- colorao
que varia do amarelo ao preto. Observar as preparaes
de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo,
sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida
na preparao amostra no mais intensa do que aquela
na padro. O teste somente vlido se a intensidade da
colorao desenvolvida na preparao controle igual ou
superior quela na padro.
MTODO DE ESPECTROMETRIA ATMICA
Utilizar tcnicas de espectrometria atmica para
determinao de As, Cd, Cr, Cu, Hg, Ir, Mn, Mo, Ni, Os,
Pb, Pd, Pt, Rh, Ru e V, conforme Espectrometria atmica
(5.2.13). Entretanto, diferentes procedimentos de preparo
da amostra podem ser aplicados, como demonstrado na
Figura 1.
Figura 1 - Procedimentos de preparo de amostra para o mtodo de espectrometria atmica.
174 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
No caso de substncias solveis em gua, no h
necessidade da decomposio prvia da amostra e essa
pode ser analisada diretamente aps dissoluo. Caso no
seja solvel em gua e apresentar solubilidade em outro
solvente, a substncia pode ser analisada diretamente
aps dissoluo se no houver incompatibilidade entre o
solvente e a tcnica de espectrometria atmica utilizada.
Quando nenhuma das condies anteriores for atendida,
recomenda-se a decomposio prvia da amostra. Nesses
casos, dois procedimentos so recomendados:
Decomposio por via mida em sistema fechado
Pesar, exatamente, quantidade de amostra entre 0,1 e
0,5 g de amostra e adicionar cido ntrico conforme
recomendao do fabricante e proceder a digesto em
sistema fechado com aquecimento convencional ou com
micro-ondas em temperatura de 180 C ou superior.
Nos sistemas que empregam aquecimento convencional
e micro-ondas, quando no houver especifcao na
monografa, recomenda-se a digesto por 240 min e 20
min, respectivamente.
Mtodo de combusto iniciada por micro-ondas em
sistema pressurizado
Proceder conforme descrito no item Mtodos de combusto
(5.3.3.3).
Em princpio, os dois procedimentos de decomposio
descritos podem ser utilizados indistintamente. Entretanto,
se recomenda a utilizao da decomposio por via mida
devido a maior simplicidade e capacidade de processamento
de amostras. Outros reagentes, tais como cido clordrico,
cido sulfrico, perxido de hidrognio e cido fuordrico
(no pode ser utilizado em frascos de quartzo), tambm,
podem ser utilizados na etapa de digesto, dependendo da
necessidade.
A decomposio por combusto iniciada por micro-ondas
recomendada nos casos em que a digesto por via mida
no for efciente para amostras orgnicas.
Os limites mximos permitidos para cada elemento esto
descritos na Tabela 1.
Tabela 1 - Limites permitidos de impurezas de metais e no metais.
Elemento
Uso oral
Limite mximo (g g
-1
)
Uso parenteral
Limite mximo (g g
-1
)
Arsnio (As) 1,5 0,15
Cdmio (Cd) 0,5 0,05
Chumbo (Pb) 1,0 0,1
Mercrio (Hg) 1,5 0,15
Cromo (Cr) 25 2,5
Cobre (Cu) 250 25
Mangans (Mn) 250 25
Molibdnio (Mo) 25 2,5
Nquel (Ni) 25 2,5
Paldio (Pd) 10 1,0
Platina (Pt) 10 1,0
Vandio (V) 25 2,5
Irdio (Ir) O somatrio da concentrao no
pode exceder 10
O somatrio da concentrao no
pode exceder 10
smio (Os)
Rdio(Rh)
Rutnio (Ru)
MTODO I
Preparao amostra: dissolver quantidade da amostra
especifcada na monografa, ou na Tabela 1, ou calculada,
em solvente adequado, transferir para tubo de Nessler
(capacidade de 50 mL e 22 mm de dimetro interno).
Adicionar gua destilada, ou o solvente indicado na
monografa, em quantidade sufciente para 40 mL.
Adicionar 2 mL de cido ctrico a 20% (p/v).
Fixando-se o volume da Soluo padro de ferro (100 ppm
Fe) em 1 mL, pode-se calcular o valor de m (massa em
grama da amostra) pela frmula:
5.3.2.4 ENSAIO LIMITE PARA FERRO
Soluo padro de ferro (100 ppm Fe): dissolver 0,8634
g de sulfato frrico amoniacal dodecaidratado em gua
destilada em um balo volumtrico de 1000 mL. Adicionar
5 mL de cido sulfrico SR e completar o volume com
gua destilada.
Soluo padro de ferro (10 ppm Fe): diluir 10 mL da
Soluo padro de ferro (100 ppm Fe) com gua destilada
e completar o volume para 100 mL.
Soluo padro de ferro (2 ppm Fe): diluir 2 mL da
Soluo padro de ferro (100 ppm Fe) com gua destilada
e completar o volume para 100 mL.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 175 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
sendo l o limite de ferro em ppm na matria-prima.
Preparao padro: empregar 10 mL de Soluo padro
de ferro (10 ppm de Fe) ou 1 mL da Soluo padro de
ferro (100 ppm Fe), conforme Tabela 1, ou volume
calculado, adicionar gua destilada, ou o solvente indicado
na monografa, em quantidade sufciente para 40 mL.
Adicionar 2 mL de cido ctrico a 20% (p/v).
Procedimento: concomitantemente, acrescentar aos tubos
contendo as preparaes amostra e padro duas gotas
de cido tiogliclico. Homogeneizar, alcalinizar com
hidrxido de amnio, completar o volume para 50 mL com
gua destilada e homogeneizar. Deixar em repouso por 5
minutos. A cor rsea produzida na preparao amostra no
deve ser mais intensa do que na padro.
MTODO II
Preparao amostra: dissolver quantidade da amostra
especifcada na monografa, ou calculada, em solvente
adequado, ou utilizar volume da soluo da amostra
conforme especifcado na monografa. Adicionar 2 mL de
cido clordrico 2 M e 0,5 mL de gua de bromo SR. Aps
5 minutos, retirar o excesso de bromo por corrente de ar
em capela (CUIDADO! REAGENTE TXICO) e tranferir
para tubo de Nessler (capacidade de 50 mL e 22 mm de
dimetro interno).
Preparao padro: submeter o volume da Soluo padro
de ferro (2 ppm ou 10 ppm de Fe) indicado na monografa,
ou o volume calculado, conforme descrito na preparao
amostra.
Procedimento: concomitantemente, acrescentar aos
tubos contendo as preparaes amostra e padro, 3 mL
de tiocianato de potssio M, completar o volume para 50
mL, homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos. A
colorao produzida na preparao amostra no deve ser
mais intensa do que na padro.
MTODO III
Preparao amostra: transferir para um tubo de Nessler
(capacidade de 50 mL e 22 mm de dimetro interno) a
quantidade de amostra especifcada na monografa, ou
calculada, ou o volume da soluo da amostra indicado
na monografa. Diluir para 40 mL com gua destilada.
Adicionar 2 mL de cido clordrico M e homogeneizar.
Preparao padro: transferir o volume da Soluo padro
de ferro (10 ppm Fe) indicado na monografa, ou volume
calculado, para um tubo de Nessler e proceder conforme
descrito na preparao amostra.
Procedimento: adicionar aos tubos contendo as preparaes
amostra e padro 50 mg de cristais de peroxidissulfato
de amnio. Acrescentar 3 mL de tiocianato de amnio
SR, completar o volume para 50 mL com gua destilada
e homogeneizar. A colorao produzida na preparao
amostra no deve ser mais intensa do que na padro.
Tabela 1 Limites de impureza ferro e quantidade correspondentes da matria-prima para se realizar o ensaio considerando
a utilizao constante de 1,0 mL da soluo padro de ferro de 100 ppm, que contm 10
-4
g de ferro, na preparao padro.
Quantidade de amostra (g) Limite de ferro (ppm) Quantidade de amostra (g) Limite de ferro (ppm)
0,100 1000 0,4 250
0,105 950 0,5 200
0,111 900 0,667 150
0,116 850 1 100
0,125 800 1,111 90
0,133 750 1,250 80
0,143 700 1,429 70
0,154 650 1,667 60
0,167 600 2 50
0,182 550 2,5 40
0,200 500 3,333 30
0,222 450 5 20
0,250 400 10 10
0,285 350 20 5
0,333 300
Sendo fxa a quantidade de ferro (= 10
-4
g de Fe) na
Preparao padro, se o limite de ferro em determinada
substncia for, por exemplo, 1000 ppm, dever ser utilizado
0,1 g de amostra para se obter at a mesma colorao da
preparao padro; se o limite for 200 ppm de ferro, dever
ser utilizado 0,5 g de amostra, e assim por diante.
MTODO IV
Alternativamente, para determinao de ferro, proceder
ao preparo da soluo amostra conforme descrito em
Ensaio limite para metais pesados (5.3.2.3) e efetuar a
determinao por uma das tcnicas de Espectrometria
atmica (5.2.13).
176 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5.3.2.5 ENSAIO LIMITE PARA ARSNIO
MTODO ESPECTROFOTOMTRICO
O mtodo est baseado na reao entre a arsina (AsH
3
)
liberada e dietilditiocarbamato de prata que formam
complexo vermelho; a absoro da radiao pode ser
medida em espectrofotmetro ou colormetro.
Dois mtodos podem ser empregados diferindo, apenas, no
preparo da amostra e do padro. O Mtodo I , em geral,
utilizado para substncias inorgnicas, enquanto o Mtodo
II empregado para substncias orgnicas.
O sistema utilizado - Figura 1 - compreende: (a) gerador
de arsina; (b) e (d) juntas; (c) unidade esmerilhada; (e)
tubo de absoro. Outro sistema adaptado que tenha
as caractersticas essenciais do apresentado pode,
eventualmente, ser utilizado.
Figura 1 - Sistema para determinao de
arsnio pelo mtodo espectrofotomtrico.
Soluo estoque padro de arsnio: secar trixido de
arsnio por 1 hora a 105 C. Pesar, exatamente, 132 mg e
dissolver em 5 mL de soluo de hidrxido de sdio (1:5)
em balo volumtrico de 1000 mL. Neutralizar com cido
sulfrico M e, em seguida, acrescentar mais 10 mL de
cido sulfrico M. Completar o volume com gua recm-
fervida e resfriada.
Soluo padro de arsnio: transferir 1 mL (ou 0,5; ou
0,25; ou 0,1 mL) da soluo estoque padro de arsnio para
um balo volumtrico de 100 mL (ou de 50, ou de 25, ou
de 10 mL, de acordo com a necessidade do laboratrio)
Preservar o meio ambiente. Acrescentar 1 mL de cido
sulfrico M e completar o volume com gua recm-fervida
e, posteriormente, resfriada. Homogeneizar. Conservar
a soluo em recipiente de vidro e utilizar em at 3 dias.
Cada mL da soluo obtida contm 1 ug de arsnio.
Mtodo I
Preparao amostra: transferir para frasco gerador de
arsina a quantidade de substncia indicada na monografa,
ou a quantidade calculada.
Fixando-se o volume da soluo padro de arsnio em 3
mL pode-se calcular m (massa em grama da amostra) pela
frmula:
sendo l o limite de arsnio em ppm na matria-prima.
Dissolver com gua destilada completando o volume para 35
mL. Adicionar 20 mL de cido sulfrico M, 2 mL de iodeto
de potssio SR, 0,5 mL de cloreto estanoso SR fortemente
cido e 1 mL de lcool isoproplico. Homogeneizar. Deixar
em repouso por 30 minutos a temperatura ambiente. Na
unidade (c) do aparelho descrito, colocar duas pores
de algodo embebidas em soluo saturada de acetato de
chumbo, deixando entre elas espao de 2 mm. O excesso
da soluo deve ser eliminado espremendo-se as pores
de algodo e secando-as a presso reduzida a temperatura
ambiente. As juntas (b) e (d) devem ser lubrifcadas com
vaselina e unidas como na Figura 1.
Preparao padro: transferir para o frasco gerador de
arsina 3 mL da Soluo padro de arsnio. Diluir com
gua destilada para 35 mL. Proceder da mesma forma
descrita para a preparao amostra.
Procedimento: transferir 3 mL de dietilditiocarbamato
de prata SR para a unidade de absoro (e) dos frascos
geradores contendo as preparaes amostra e padro.
Adicionar 3 g de zinco granulado (malha de 1 mm)
mistura em cada frasco gerador de arsina. Imediatamente
unir as unidades (c) e (e) ao frasco gerador. Deixar em
banho de gua a (25 3) C por 45 minutos. Em intervalos
de 10 minutos agitar, vagarosamente. Aps esse perodo,
transferir o contedo da unidade de absoro para cela de
1 cm. Comparar a cor vermelha produzida nas preparaes
amostra e padro. A colorao produzida na preparao
amostra no deve ser mais intensa do que na padro. Caso
necessrio, determinar a absoro em espectrofotmetro
ou colormetro em comprimento de onda entre 535 e 540
nm empregando dietilditiocarbamato de prata SR como
branco para o ajuste do zero.
Mtodo II
Esse mtodo emprega, adicionalmente, perxido de
hidrognio na digesto da amostra. Com certas substncias
pode provocar reao violenta. Assim, importante
proceder, cuidadosamente, em todas as etapas. Deve-
se tomar cuidado, tambm, na presena de compostos
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 177 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
halogenados, especialmente, quando aquecer a amostra
com cido sulfrico e, posteriormente, adicionar perxido
de hidrognio a 26% (v/v). O aquecimento deve ser mais
brando impedindo que atinja a temperatura de ebulio da
mistura e carbonizao para evitar a perda de arsnio.
Preparao amostra: transferir para o frasco gerador
quantidade da amostra especifcada na monografa, ou
calculada.
Fixando-se o volume da soluo padro de arsnio em 3
mL pode-se calcular m (massa em grama da amostra) pela
frmula:
sendo l o limite de arsnio em ppm na matria-prima.
Adicionar 5 mL de cido sulfrico e prolas de vidro.
Se necessrio, empregar maior quantidade do cido para
umedecer completamente a substncia cuidando para que
o volume no ultrapasse 10 mL. Proceder a digesto em
capela de preferncia usando placa de aquecimento com
temperatura no superior a 120
o
C por tempo necessrio
ao incio da digesto. Uma vez iniciada a decomposio
da amostra, adicionar gota a gota, cuidadosamente,
perxido de hidrognio concentrado. Esperar que a reao
se abrande e, ento, aquecer entre adio de cada gota.
Caso haja excesso de espuma, interromper o aquecimento.
Assim que diminuir a intensidade da reao, aquecer,
cautelosamente, com agitao do frasco para promover
aquecimento homogneo. necessrio que se mantenham
as condies oxidantes durante toda a digesto. Para tanto,
adicionar pequenas quantidades de perxido de hidrognio
concentrado sempre que a mistura tornar-se marrom
ou escurecer. Destruda a matria orgnica, aumentar
paulatinamente a temperatura de aquecimento permitindo
que os vapores de trixido de enxofre sejam desprendidos
e a soluo se torne incolor ou levemente bege. Resfriar,
adicionar, cuidadosamente, 10 mL de gua destilada,
evaporar at o trixido de enxofre seja novamente
desprendido e resfriar. Caso necessrio, repetir a operao,
removendo traos de perxido de hidrognio. Resfriar
e acrescentar 10 mL de gua destilada. Lavar o frasco e
diluir com gua destilada completando o volume para 35
mL. Proceder como na preparao amostra do Mtodo I
iniciando por Adicionar 20 mL de cido sulfrico M....
Preparao padro: transferir para frasco gerador de arsina
3 mL da Soluo padro de arsnio e adicionar 2 mL de
cido sulfrico. Homogeneizar. Acrescentar o mesmo
volume de perxido de hidrognio concentrado empregado
para a preparao amostra. Proceder, em seguida, ao
aquecimento da soluo obtida at que se formem vapores.
Resfriar e adicionar, cuidadosamente, 10 mL de gua
destilada. Repetir o procedimento de aquecimento com
mais 10 mL e, aps, resfriar novamente e diluir com gua
destilada para completar 35 mL. Proceder como para a
preparao amostra.
Procedimento: proceder conforme descrito no Mtodo I.
Nota: antimnio interferente da reao, uma vez que forma
estibina (SbH
3
) fornecendo resultado falsamente positivo
no desenvolvimento de cor com dietilditiocarbamato de
prata SR. Nesses casos, deve-se comparar as preparaes
em comprimento de onda de 535 e 540 nm, no qual a
interferncia da estibina desprezvel.
MTODO DE ESPECTROMETRIA DE ABSORO
ATMICA COM GERAO DE HIDRETOS
Proceder a preparao amostra conforme descrito no
item Decomposio por via mida em sistema fechado
Ensaio limite para metais pesados (5.3.2.3) e determinar
por Espectrometria de absoro atmica com gerao
de hidretos (5.2.13.1.2). Proceder de acordo com as
especifcaes do fabricante empregando comprimento de
onda de 193,7 nm e resoluo do monocromador de (0,5
0,1) nm.
MTODO DE ESPECTROMETRIA DE EMISSO
TICA COM PLASMA INDUTIVAMENTE ACOPLADO
Proceder a preparao da amostra conforme descrito no
item Decomposio por via mida em sistema fechado -
Ensaio limite para metais pesados (5.3.2.3) e determinar por
Espectrometria de emisso ptica com plasma indutivamente
acoplado (5.2.13.2.2). Proceder de acordo com as
especifcaes do fabricante. Recomenda-se a utilizao do
comprimento de onda de 188,979 a 189,042 nm.
5.3.2.6 ENSAIO LIMITE PARA AMNIA
Soluo padro de amnia (2,5 ppm NH
3
): transferir 1 mL
da soluo de cloreto de amnio 0,00741% (p/v) para um
balo volumtrico de 10 mL. Completar o volume com
gua destilada.
Soluo padro de amnia (1 ppm NH
3
): diluir 40 mL da
soluo padro de amnia (2,5 ppm de NH
3
) para 100 mL
com gua destilada.
Preparao amostra: dissolver a quantidade indicada
da substncia em anlise em 12 mL de gua destilada,
alcalinizar, se necessrio, com hidrxido de sdio 2 M.
Transferir para balo volumtrico de 15 mL, adicionar
0,3 mL de soluo alcalina de tetraiodomercurato (II)
de potssio e completar o volume com gua destilada.
Homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos.
Transferir para um tubo de Nessler (capacidade de 50 mL e
dimetro interno de 22 mm).
Preparao padro: transferir 10 mL de soluo padro de
amnia (1 ppm de NH
3
), ou o volume calculado, para balo
volumtrico de 15 mL, adicionar 4,0 mL de gua destilada,
0,3 mL de soluo alcalina de tetraiodomercurato (II) de
potssio e completar o volume. Homogeneizar e deixar em
repouso por 5 minutos. Transferir para um tubo de Nessler.
Procedimento: comparar a cor desenvolvida nas
preparaes. A cor amarela produzida na preparao
amostra no deve ser mais intensa do que na padro.
178 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5.3.2.7 ENSAIO LIMITE PARA CLCIO
Soluo padro alcolica de clcio (100 ppm Ca): pesar,
exatamente, 2,5 g de carbonato de clcio e transferir para
balo volumtrico de 1000 mL com 12 mL de cido actico.
Dissolver e completar o volume com gua destilada.
Transferir, imediatamente antes do uso, 10 mL dessa
soluo para balo volumtrico de 100 mL e completar o
volume com etanol.
Soluo padro de clcio (10 ppm Ca): pesar, exatamente,
0,624 g de carbonato de clcio e transferir para balo
volumtrico de 250 mL com 3 mL de cido actico.
Dissolver e completar o volume com gua destilada.
Transferir, imediatamente antes do uso, 10 mL dessa
soluo para balo volumtrico de 1000 mL e completar o
volume com gua.
Preparao amostra: adicionar 1 mL de oxalato de amnio
SR a um tubo de Nessler (capacidade de 50 mL e 22 mm
de dimetro interno) contendo 0,2 mL da soluo padro
alcolica de clcio (100 ppm Ca). Aguardar 1 minuto,
adicionar mistura de 1 mL de cido actico diludo e 15
mL da soluo da amostra preparada como descrito na
monografa.
Preparao padro: transferir para um tubo de Nessler as
mesmas quantidades de oxalato de amnio SR e da soluo
padro alcoolica de clcio (100 ppm Ca) conforme
preparao amostra. Aguardar 1 minuto, adicionar mistura
de 10 mL da soluo padro de clcio (10 ppm Ca), 1 mL
de cido actico diludo e 5 mL de gua destilada.
Procedimento: Homogeneizar as preparaes nos tubos
de Nessler. Aps 15 minutos, a turbidez da preparao
amostra no deve ser mais intensa do que a da padro.
Alternativamente, proceder o preparo da amostra conforme
indicado na monografa e efetuar a determinao de
clcio por Espectrometria de absoro atmica com
chama (5.2.13.1.1) empregando chama do tipo ar-
acetileno, comprimento de onda de 422,7 nm e resoluo
do monocromador de (0,7 0,1) nm; ou Espectrometria
de emisso tica com plasma indutivamente acoplado
(5.2.13.2.2) empregando o comprimento de onda de
393,366 nm.
5.3.2.8 ENSAIO LIMITE PARA MAGNSIO
Preparao amostra: adicionar 0,1 g de tetraborato sdico
a 10 mL da soluo da amostra preparada conforme o
especifcado na monografa. Ajustar o pH entre 8,8-9,2
com cido clordrico SR ou hidrxido de sdio SR.
Preparao padro: adicionar 0,1 g de tetraborato sdico
a uma mistura de 1 mL da soluo padro de magnsio (10
ppm Mg) e 9 mL de gua destilada. Proceder conforme
preparao amostra.
Procedimento: transferir a preparao amostra para um
funil de separao e extrair 2 vezes, agitando por 1 minuto
cada vez, com 5 mL de uma soluo de hidroxiquinolina a
0,1% (p/v) em clorofrmio. Descartar as fases orgnicas e
adicionar fase aquosa 0,4 mL de butilamina e 0,1 mL de
trietanolamina. Ajustar o pH entre 10,5-11,5 se necessrio.
Adicionar 4 mL da soluo de hidroxiquinolina a 0,1% (p/v)
em clorofrmio e agitar por 1 minuto. Utilizar a fase inferior
para a comparao. Proceder da mesma maneira com a
preparao padro. A colorao produzida na preparao
amostra no deve ser mais intensa do que na padro.
Alternativamente, proceder determinao de magnsio por
Espectrometria de absoro atmica com chama (5.2.13.1.1)
empregando chama do tipo ar-acetileno, comprimento
de onda de 285,2 nm e resoluo do monocromador de
(1,2 0,1) nm; ou Espectrometria de emisso tica com
plasma indutivamente acoplado (5.2.13.2.2) empregando
comprimento de onda de 285,213 nm.
5.3.2.9 ENSAIO LIMITE PARA MAGNSIO
E METAIS ALCALINOS TERROSOS
A 200 mL de gua destilada adicionar 0,1 g de cloridrato
de hidroxilamina, 10 mL de tampo cloreto de amnio pH
10, 1 mL de soluo de sulfato de zinco 0,1 M e cerca de 15
mg de negro de eriocromo T. Aquecer a, aproximadamente,
40 C. Titular com EDTA dissdico 0,01 M SV at a
colorao violeta mudar para azul. Adicionar a essa soluo
quantidade recomendada da amostra dissolvida em 100
mL de gua destilada ou preparada de modo descrito na
monografa. Se a colorao da soluo mudar para violeta,
titular com EDTA dissdico 0,01 M SV at a viragem para
azul. O volume da soluo de EDTA dissdico 0,01 M SV
utilizado na segunda titulao no deve exceder o volume
estabelecido na monografa.
5.3.2.10 ENSAIO LIMITE PARA
ALUMNIO
Soluo padro de alumnio (200 ppm Al): tratar uma
poro de alumnio metlico com cido clordrico 6 M a
80 C por poucos minutos. Pesar 100 mg da poro tratada
e dissolver em mistura de 10 mL de cido clordrico e 2
mL de cido ntrico, a 80 C por, aproximadamente, 30
minutos. Manter sob aquecimento at reduo do volume
para cerca de 4 mL. Arrefecer at temperatura ambiente
e adicionar 4 mL de gua destilada. Deixar evaporar at
obter o volume de 2 mL. Arrefecer e transferir a soluo,
quantitativamente, usando gua destilada, para balo
volumtrico de 100 mL. Completar o volume com gua
destilada e homogeneizar. Pipetar 20 mL dessa soluo
e transferir para outro balo volumtrico de 100 mL.
Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
Soluo padro de alumnio (10 ppm Al): transferir,
imediatamente antes do uso, 5 mL da Soluo padro de
alumnio (200 ppm Al) para balo volumtrico de 100 mL;
completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
Soluo padro de alumnio (2 ppm Al): transferir,
imediatamente antes do uso, 1 mL da Soluo padro de
alumnio (200 ppm Al) para balo volumtrico de 100 mL;
completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
Farmacopeia Brasileira, 5 edio 179 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Soluo diluente de cido ntrico: transferir 40 mL de cido
ntrico para balo volumtrico de 1000 mL; completar o
volume com gua destilada e homogeneizar.
MTODO I
Preparao amostra: utilizar a quantidade especifcada da
amostra, ou calculada, preparada conforme especifcado na
monografa.
Preparao padro: utilizar o volume especifcado, ou
calculado, da Soluo padro de alumnio (10 ppm ou 2
ppm).
Procedimento: transferir para funis de separao as
preparaes amostra e padro e extrair com 3 pores (20,
20 e 10 mL) da soluo de hidroxiquinolina a 0,5% (p/v)
em clorofrmio. Juntar os extratos clorofrmicos e diluir
para 50 mL com clorofrmio. Realizar uma preparao em
branco utilizando o mesmo solvente. Medir a intensidade
da fuorescncia (5.2.15) da preparao amostra (I
1
), da
preparao padro (I
2
) e da preparao em branco (I
3
)
utilizando comprimento de onda de excitao de 392 nm
e monocromador ajustado em 518 nm. A fuorescncia da
preparao amostra (I
1
), descontada da preparao em
branco (I
3
) no deve ser maior do que a da preparao
padro (I
2
), descontada da preparao em branco (I
3
).
MTODO II
Preparao amostra: transferir quantidade da amostra
especifcada na monografa, ou calculada, para balo
volumtrico de plstico de 100 mL, adicionar 50 mL de
gua destilada e submeter ao ultrassom durante 30 minutos.
Adicionar 4 mL de cido ntrico; completar o volume com
gua destilada e homogeneizar.
Preparaes padro: preparar solues contendo 0,01,
0,02 e 0,04 ppm de alumnio, imediatamente antes do uso,
por meio da diluio da Soluo padro de alumnio (1
ppm Al) com Soluo diluente de cido ntrico em balo
volumtrico de 100 mL.
Procedimento: determinar as absorvncias das preparaes
padro e da preparao amostra por Espectrometria
de absoro atmica com forno de grafte (5.2.13.1.4)
equipado com lmpada de ctodo oco de alumnio. Ajustar
o comprimento de onda em 309,3 nm empregando uma
resoluo do monocromador de (0,7 0,1) nm. Utilizar a
Soluo diluente de cido ntrico como branco e proceder
a calibrao conforme descrito em (5.2.13.1.4) Mtodo
I (Calibrao direta). Determinar a concentrao de Al
na preparao amostra em ppm. Calcular a quantidade
de Al na amostra em ppm, por meio da multiplicao da
concentrao da preparao amostra em ppm por 100/P
no qual P a massa em gramas da substncia utilizada na
preparao amostra.
MTODO III
Proceder conforme descrito no Mtodo II e efetuar a
determinao por Espectrometria de emisso tica com
plasma indutivamente acoplado (5.2.13.2.2). Proceder de
acordo com as especifcaes do fabricante. Recomenda-se
a utilizao do comprimento de onda de 396,153 nm.
5.3.2.11 ENSAIO LIMITE PARA FOSFATOS
Soluo padro de fosfato (5 ppm): dissolver 0,716 g
de fosfato de potssio monobsico em gua destilada
e completar o volume para 1000 mL. Transferir 10 mL
dessa soluo para um balo volumtrico de 1000 mL e
completar o volume com gua destilada.
Preparao amostra: transferir a quantidade da amostra
especifcada, ou calculada, ou o volume da soluo da
amostra preparada conforme descrito na monografa para
balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com
solvente adequado. Transferir essa soluo para bquer
e adicionar 4 mL de reagente sulfomolbdico, 0,1 mL de
cloreto estanoso SR e homogeneizar.
Preparao padro: transferir 2 mL da Soluo padro
de fosfato (5 ppm) para balo volumtrico de 100 mL e
completar o volume com solvente adequado. Continuar
conforme descrito na preparao amostra.
Procedimento: aguardar 10 minutos, transferir 20 mL do
contedo das preparaes amostra e padro para tubos de
Nessler (capacidade de 50 mL e 22 mL de dimetro interno)
e comparar a colorao das preparaes. A colorao
produzida na preparao amostra no mais intensa do que
na padro.
Alternativamente, proceder conforme descrito em
Cromatografa inica (5.2.17.4.1) utilizando cromatgrafo
equipado com coluna de troca inica para separao
de nions e detector por condutividade com supresso
qumica.
5.3.2.12 ENSAIO LIMITE PARA CHUMBO
Soluo padro de chumbo diluda (1 ppm Pb): diluir
volume exatamente medido da Soluo padro de chumbo
(10 ppm Pb) preparada conforme descrito em Ensaio limite
para metais pesados (5.3.2.3) com 9 volumes de cido
ntrico a 1% (v/v).
Nota: armazenar todas as solues de reagentes em
recipientes de vidro de borossilicato. Enxaguar toda a
vidraria com soluo de cido ntrico a 20% (v/v) e, em
seguida, com gua destilada.
Preparao amostra: na ausncia de especifcao na
monografa, preparar a soluo amostra como segue.
Proceder cautelosamente, pois algumas substncias podem
reagir com violncia quando digeridas com perxido de
hidrognio. Transferir 1 g da amostra para frasco adequado,
acrescentar 5 mL de cido sulfrico, algumas prolas de
vidro e aquecer em placa de aquecimento, em capela, at
evoluo de fumos. Podem ser utilizados outros meios de
aquecimento adequados. Se necessrio, adicionar excesso
de cido sulfrico para umedecer completamente a amostra
180 Farmacopeia Brasileira, 5 edio
5
Farmacopeia Brasileira, 5 edio
no ultrapassando um total de 10 mL. Acrescentar, gota a
gota, com cuidado, perxido de hidrognio concentrado,
aquecendo entre as adies, permitindo que a reao
ocorra. Adicionar as primeiras gotas aos poucos e muito
lentamente misturando cuidadosamente para prevenir
reao rpida e interrompendo o aquecimento se ocorrer
excessiva formao de espuma. Agitar a soluo no frasco
para permitir a reao da amostra aderida nas paredes.
Acrescentar perxido de hidrognio sempre que a mistura
se tornar marrom ou escurecer. Continuar a digesto at
que vapores de trixido de enxofre sejam desprendidos
abundantemente para que a reao seja completa e
a soluo torne-se incolor. Resfriar, cautelosamente,
com o acrscimo de 10 mL de gua destilada, evaporar
novamente at que o trixido de enxofre se desprenda por
completo e resfriar. Repetir esse procedimento com 10 mL
de gua destilada para remover qualquer trao de perxido
de hidrognio. Cuidadosamente, diluir com 10 mL de gua
destilada e resfriar.
Nota: se, antes de aquecer, a amostra reagir muito
rapidamente e comear a fumegar com 5 mL de cido
sulfrico, deve-se utilizar 10 mL de cido sulfrico a 50%
(v/v) a frio e acrescentar algumas gotas de perxido de
hidrognio antes de aquecer.
Preparao padro: utilizar volume especifcado, ou
calculado da Soluo padro de chumbo diluda (1 ppm
Pb). Submeter ao mesmo tratamento da preparao
amostra.
Procedimento: transferir as preparaes amostra e padro
para um funil de separao usando 10 mL de gua destilada.
Acrescentar 6 mL de citrato de amnio SR e 2 mL de
cloridrato de hidroxilamina SR1 (para a determinao de
chumbo em sais de ferro usar 10 mL de citrato de amnio
SR). Adicionar duas gotas de vermelho de fenol a 0,1%
(p/v) em etanol, alcalinizar com hidrxido de amnio at
colorao vermelha e homogeneizar. Resfriar a soluo, se
necessrio, e acrescentar 2 mL de cianeto de potssio SR.
Extrair, imediatamente, com pores de 5 mL da soluo
extratora de ditizona e recolher cada extrato para outro
funil de separao at que a soluo de ditizona mantenha
sua cor verde. Agitar as solues de ditizona combinadas
durante 30 segundos com 20 mL de cido ntrico a 1%
(v/v) e descartar a fase orgnica. Adicionar soluo cida,
5 mL da soluo padro de ditizona e 4 mL de cianeto-
amnia SR, e agitar durante 30 segundos. A colorao
violeta produzida na fase orgnica da preparao amostra
no mais intensa do que na padro.
Alternativamente, preparar a amostra conforme descrito em
Ensaio limite para metais pesados (5.3.2.3) e determinar
chumbo por uma das tcnicas de Espectrometria atmica
(5.2.13).
5.3.3 ENSAIOS QUMICOS
5.3.3.1 TITULAES POR DIAZOTAO
Esse tipo de titulao muito til na anlise de frmacos
que contm grupo amino aromtico primrio tais como
as sulfonamidas e os anestsicos locais derivados do
cido aminobenzico. A titul