Teora y prctica para la extraccin y purificacin del ADN de palma de aceite

Theory and Practice for the Extraction and Purification of the Oil Palm DNA
Pedro J. Rocha Salavarrieta 1

RESUMEN
Uno de los ms importantes aportes a la biologa ha sido el reconocimiento del ADN como la molcula de la vida. El estudio de sus propiedades fisicoqumicas y biolgicas ha desarrollado, en menos de 50 aos, un enfoque totalmente novedoso en lo referente al origen, flujo y almacenamiento de la informacin gentica en todo ser vivo. Debido a que en el ADN se encuentran cifradas las instrucciones que definen las caractersticas propias de cada organismo, diversas tecnologas y sistemas de anlisis se han desarrollado para la caracterizacin de esta molcula. Los resultados de tales estudios demuestran que caractersticas como la resistencia a enfermedades, potencialidades de produccin, tamao y color de los frutos, entre otros, son debidas a la expresin de la informacin gentica y su interaccin con el medio ambiente. La aplicacin de este conocimiento se ha convertido en una herramienta fundamental en programas de mejoramiento gentico. Por lo tanto, en la presente revisin se presentan conceptos bsicos y explicaciones de los mtodos utilizados para la extraccin de esa informacin gentica empleando, como ejemplo, el protocolo usado para el aislamiento de ADN de palma de aceite (Elaeis guineensis Jacq.). Se espera que esta revisin sea el comienzo de una serie de artculos en los que se ver el vertiginoso desarrollo de la gentica y la biotecnologa en los ltimos aos y la importancia de aplicar las tcnicas moleculares en palma de aceite.

SUMMARY
One of the most important contributions to biology has been the recognition of the DNA as the lifes molecule. The study of its physicochemical and biological properties has developed, in less than 50 years, a complete different approach in relation to the origin, flux, and storage of genetic information in all known living-forms. Because inside the DNA molecule are ciphered the instructions that define all the characteristics of any organism, several technologies and systems of data analysis have been developed for the characterization of this molecule. The results of such studies have demonstrated that characters such as resistance against diseases, productivity potential, size and colour of fruits are due to the expression of genetic information and its interaction with the environment. Nowadays, the use of this knowledge is a fundamental tool in breeding programms. In this review, some basic concepts and explanations about methods currently used for DNA extraction, in particular the protocol used for oil palm, are presented. This review will be the starting point of a series of papers related with the importance of applying molecular techniques in oil palm. Palabras Claves: Biologa molecular, Palma de aceite, ADN, Marcadores moleculares. 1 PhD. Investigador Titular. Laboratorio de Marcadores Moleculares, rea de Fisiologa y Mejoramiento. Cenipalma. Calle 21 No. 42C-47, Bogot, Colombia. E-mail: pedro.rocha@cenipalma.org.

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INTRODUCCIN
Las caractersticas fisiolgicas y bioqumicas de todo ser vivo estn contenidas en sus respectivos genomas (ver glosario). Los genomas de bacterias, hongos, plantas, animales y algunos virus estn compuestos por molculas de cido desoxirribonuclico (comnmente llamado ADN). El ADN es una estructura qumica cuyos elementos fundamentales (nucletidos) se organizan de manera lineal generando enormes secuencias de informacin (Fig. 1, Tabla 1). La informacin que define y codifica un carcter determinado se denomina gen (Lewin 1995). Los genes se organizan linealmente y se agrupan formando estructuras llamadas cromosomas, los cuales pueden ser vistos bajo el microscopio durante ciertas etapas del ciclo de vida de la clula. Los genes que posee un individuo en su genoma definen su genotipo. La expresin del genotipo es afectada en gran medida por el medio ambiente, determinando as la apariencia o rendimiento de un individuo (fenotipo). La gentica estudia cmo el genotipo y el

Figura 1. Niveles de organizacin del ADN. Toda clula posee un ncleo en el cual se encuentra el ADN. La condensacin del ADN constituye los cromosmas. El ADN es una doble hlice conformada por nucletidos. A lo largo de la doble cadena de ADN se localizan los genes, los cuales codifican protenas. La interaccin de los genes con el medio ambiente define las caractersticas externas de un individuo (fenotipo).

Tabla 1. Variacin del tamao del genoma para algunos genomas vegetales. (basado en Bennet y Leitch 2001).

Nombre comn
Trigo Tabaco Caa de azcar Maz Caf Palma de aceite Papa Yuca Frjol Arroz Uva Arabidopsis

Nombre cientfico
Triticum aestivum L. Nicotiana tabacum L. Saccharum officinarum L. Zea mays L. Coffea arabiga L. Elaeis guineensis Jacq. Solanum tuberosum L. Manihot esculenta Krantz Phaseolus vulgaris L. Oryza sativa L. Vitis vinifera L. Arabidopsis thaliana

Tamao del genoma (en pares de nucletidos)

16.978.500 5.733.000 3.969.000 2.670.500 1.176.000 980.000 858.000 808.500 588.000 490.000 417.000 171.500

Nmero de cromosomas
42 48 80 20 44 32 24 72 22 24 38 10

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fenotipo son transmitidos de padres a hijos y junto con la biologa molecular han desarrollado tcnicas de anlisis de poblaciones y de individuos que permiten ubicar, caracterizar y explicar la heredabilidad de genes u otros fragmentos de ADN (Lewin 1995). La linealidad de la molcula de ADN y la consecuente disposicin de los genes en cromosomas hacen posible que genes vecinos se hereden juntos. Este hecho, junto con las herramientas experimentales y de anlisis, han permitido generar mapas, en los cuales cualquier fragmento de ADN (marcador molecular) puede ser utilizado como una va indirecta para seguir el patrn de herencia de una caracterstica. Los marcadores moleculares establecen relaciones de vecindad con genes de inters, determinando su localizacin dentro del genoma del organismo estudiado. En Arabidopsis thaliana, la primera planta cuyo genoma fue secuenciado completamente, existen alrededor de 25.500 genes (The Arabidopsis Genome Initative 2000). Cada uno de ellos vara en longitud, teniendo la mayora de ellos entre 500 hasta varios miles de nucletidos. Sin embargo, con base en la informacin obtenida para A. thaliana y las estimaciones para otras plantas, se calcula que slo del 15 al 30% del genoma contiene secuencias codificantes (genes). El restante 85 a 70% se distribuye en secuencias reguladoras indispensables para la expresin de los genes y en secuencias repetidas que varan entre una y miles de copias por clula (The Arabidopsis Genome Initative 2000). Estas secuencias repetidas se pueden encontrar agrupadas en regiones particulares del cromosoma (centrmeros y telmeros) o dispersas a lo largo del genoma (Flavell y Twell 1996). A la determinacin de la posicin de genes particulares, secuencias reguladoras y repetidas dentro del genoma se le denomina mapeo gentico. Para mapear genes, es decir, para determinar la ubicacin de una caracterstica (gen) en el genoma, se hace necesario realizar cruzamientos y analizar sus progenies con procedimientos estadsticos relativamente sencillos (Fig. 2). El fitomejoramiento tradicional ha dado las herramientas conceptuales para analizar la herencia de caracteres fenotpicos evidentes, tales como tamao, color, productividad, forma de frutos, etc. (Griffiths et al. 1993). Por su parte, el rea de marcadores moleculares ha

permitido generar y analizar mltiples puntos de informacin independientemente de su funcionalidad. Y es la integracin de las dos disciplinas la que permite acelerar el proceso de mejoramiento gentico de poblaciones e individuos por correlacin entre la informacin fenotpica y la molecular. A continuacin se describen algunas de las tcnicas empleadas para manipular el ADN de plantas. En la actualidad, la aplicacin de esas tcnicas es de especial inters para la exitosa ejecucin de programas de mejoramiento gentico.

Figura 2. Esquema paraseguir el comportamiento de una caracterstica (gen responsable del color) en una poblacin hipottica. Una planta femenina que expresa el color (gen dominante) se cruza con una planta masculina que no lo exhibe (gen recesivo). El resultado del cruce es una descendencia en la que todas las plantas de esa primera generacin filial (F1) presentan color. Si se cruzan dos miembros de esta descendencia se genera una poblacin (F2), en la cual se puede apreciar que tres de las cuatro individuos posee color y uno no. Este modelo de herencia de genesha sido observado para muchas caractersticas. Es conocido como la ley de segregacin de caracteres y fue propuesta de J.G. Mendel hacia 1865. La aplicacin de este concepto permite predecir las proporicones esperadas para algunas caractersticas en cruzamientos particulares. (Lewin 1995).

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AISLAMIENTO DEL ADN

El primer paso para desarrollar experimentos con marcadores moleculares es la extraccin del material gentico de plantas que, por sus caractersticas fenotpicas, poseen caracteres agronmicos de inters. Para la extraccin del ADN vegetal es necesario tener en cuenta tres factores: 1. El tipo de planta y de tejido que se va a emplear como fuente. Por ejemplo, los tejidos jvenes contienen ms ADN que los tejidos viejos. Adems, es necesario considerar la composicin bioqumica de los tejidos. Por ejemplo, el mtodo de extraccin del material gentico proveniente de tejidos ricos en compuestos fenlicos es diferente al mtodo empleado con tejidos ricos en carbohidratos o aceites. 2. El tipo de ADN que se va a extraer. Las plantas poseen tres tipos de ADN: el nuclear, el mitocondrial y el cloroplstico. Reciben estos nombres dependiendo del tipo de organelo celular en el que el ADN se encuentre. Los distintos tipos de ADN tienen caractersticas bioqumicas semejantes. Sin embargo, el tipo de informacin biolgica que codifican es completamente diferente. 3. El tipo de anlisis a realizar (RFLP, RAPD, AFLP, secuenciacin, etc). Con base en la cantidad y la calidad del ADN se pueden desarrollar diversas tcnicas de anlisis, algunas de las cuales sern explicadas con mayor detalle en prximos artculos. El objetivo principal en un experimento de extraccin de ADN es obtener una preparacin de buena calidad y en gran cantidad. La calidad se refiere a la posibilidad de almacenar el ADN por tiempo indefinido, manteniendo su estructura y propiedades y es la calidad del ADN el factor responsable de la reproduciblidad en experimentos posteriores. La cantidad, por su parte, es un concepto relativo que depende, entre otros, del nmero y estado de las clulas propias del tejido a estudiar. Por lo tanto, como regla general, un buen mtodo de extraccin debe mantener la integridad fsica y bioqumica del ADN e incrementar sus rangos de pureza y concentracin (Sambrook et al. 2001).

En plantas existen mltiples protocolos para extraer y purificar el ADN. Sin embargo, todos ellos incluyen cuatro pasos indispensables: 1. Ruptura de tejidos y paredes celulares. Este paso consiste en pulverizar el material vegetal a bajas temperaturas, generalmente empleando nitrgeno lquido o hielo seco (Rogers y Bendich 1988). Tambin existe la pulverizacin en seco, un proceso en el cual los tejidos se deshidratan por secado en un horno o con silicagel. Sin embargo, este procedimiento no es de aplicacin general y en palma de aceite, por ejemplo, el tratamiento de secado no permite recuperar ADN de buena calidad. Para degradar paredes celulares se pueden utilizar, adems, enzimas tipo celulasas. 2. Ruptura de membranas. Una vez el tejido es disgregado en clulas, se hace necesario romper las membranas celulares para liberar el ADN. Esto puede ser llevado a cabo qumicamente con detergentes (SDS, Triton o detergentes comerciales). Tambin se emplean mtodos fsicos, como aquellos basados en ultrasonido. 3. Inhibicin de enzimas que destruyen al ADN. Como un mecanismo de defensa natural, las clulas contienen enzimas que destruyen al ADN (ADNasas). Estas enzimas deben ser inactivadas para garantizar la calidad de las preparaciones de ADN. La inhibicin puede realizarse mediante mtodos fsicos, tales como desnaturalizacin por calor (a temperaturas de 65 C) o con mtodos qumicos (Tablas 2 y 3). Estos ltimos incluyen tratamiento con solventes orgnicos (fenol y cloroformo), con antioxidantes (Ditiothreitol y -mercaptoetanol), con agentes quelantes (EDTA, EGTA) que capturan los iones magnesio necesarios para la funcionalidad de las ADNasas, o con agentes caotrpicos que actan removiendo el agua estructural de las protenas (Rogers y Bendich 1988). Por lo general se utlizan mezclas de varios de estos reactivos para asegurar la inhibicin de tales enzimas. 4. Extraccin de contaminantes. El objetivo de extraer ADN es obtener preparaciones enriquecidas en esta molcula. Sin embargo, el ADN est asociado con protenas (histonas) e inmerso en

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Tabla 2. Algunos agentes contaminantes en preparaciones de ADN y alternativas para su extraccin (basado en Sambrook et al. 2001; Taylor et al. 1993; Rogers y Bendich 1988).

Contaminante
Polisacridos Lpidos y grasas

Tratamiento
Uso de detergentes (CTAB). Incubacin enzimtica (con lipasas). Uso de detergentes (SDS, Triton). Tratamiento con cloroformo, alcohol isoamlico. Incubacin enzimtica (con proteasas). Extraccin con fenol y cloroformo. Uso de detergentes. Uso de alcoholes. Incubacin enzimtica (con ARNasa). Electroforesis. Cambios en el pH. Evaporacin a temperatura ambiente. Tratamiento con cloroformo y alcoholes. Uso de solventes orgnicos. Uso de etanol al 70%. Uso de soluciones acuosas con posterior centrifugacin.

Protenas

Pigmentos ARN

Alcoholes Compuestos fenlicos Detergentes Sales Slidos insolubles

un medio que contiene estructuras de composicin qumica diversa. Adems, los reactivos empleados en los procesos iniciales de purificacin se convierten en agentes contaminantes (Tabla 2). Las metodologas para retirar los contaminantes de una preparacin de ADN incluyen: la centrifugacin a altas velocidades, la electroforesis, la separacin a travs de columnas e incluso la utilizacin de imanes (biomagntica) para obtener preparaciones de alta pureza. Un contaminante generalmente presente en preparaciones de ADN es el ARN (cido ribonuclico). Esta molcula se degrada por incubacin con la enzima ARNasa. Todos los pasos anteriormente mencionados se basan en las caractersticas fisicoqumicas del ADN. Pues aparte de ser una molcula de alto peso molecular, muy larga y delicada, es un cido capaz de formar sales con iones cargados positivamente (cationes). Adems, es soluble en soluciones concentradas de sales (sal de cocina, por ejemplo), pero insoluble en alcoholes (tipo etanol o isopropanol). Adicionalmente, el ADN es destruido (depurinado)

a pH cido (menor de 4,0), es insoluble a pH 5.6, pero es soluble a pH 8,0. Por lo tanto, los procesos de extraccin, purificacin y almacenamiento del ADN deben mantener el pH ptimo y brindar una alta concentracin inica (Howell 1973). Ya con el conocimiento de las caractersticas generales de los procedimientos de extraccin de ADN, a continuacin se presenta uno de los protocolos de extraccin de ADN de palma de aceite utilizado en Cenipalma (Villegas y Fuentes, datos sin publicar). Dicho protocolo es una variacin de la metodologa propuesta por Dellaporta et al. (1983).

PROTOCOLO DE EXTRACCIN DE ADN DE PALMA DE ACEITE (CENIPALMA)

1. Recolectar 8 g de tejido foliar jven y fresco. Si debido a razones logsticas no se puede procesar el material el mismo da de la recoleccin, ni tampoco se cuenta con nitrgeno lquido o hielo seco para almacenarlo, se puede

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mantener humedecido a temperatura ambiente por no ms de tres das. Sin embargo, el tejido foliar se puede almacenar a 80C por tiempo indefinido. Pulverizar el tejido con nitrgeno lquido. Aadir 8 ml de solucin de extraccin. Dicha solucin contiene: 150 mM de Tris-HCl, pH 8,0; 15 mM de EDTA, pH 8,0; 1 M de cloruro de sodio; 1% (peso/volumen) de CTAB; 1% (peso/volumen) de PVP-3600 y 5% (volumen/ volumen) de -mercaptoetanol. Las funciones de cada reactivo en la solucin se presentan en la Tabla 3. Incubar a 65C en bao Mara durante 30 min. Mezclar el tubo delicadamente cada 10 minutos. Este paso permite desnaturalizar (destruir) las enzimas y dems protenas presentes en el tejido foliar pulverizado. Centrifugar a 2.000 x g, durante 15 min. Este paso remueve todos los residuos slidos de la preparacin. Transferir la fase acuosa superior (sobrenadante) a un tubo limpio y aadir medio volumen (4 ml) de fenol. Agitar suavemente. En este paso se siguen destruyendo las protenas (debido a la presencia del fenol). Centrifugar a 2.000 x g, durante 20 min. Transferir el sobrenadante a un tubo limpio y aadir medio volumen (4 ml) de cloroformo:octanol. Incubar la mezcla con agitacin, durante una hora, a temperatura ambiente. Centrifugar a 2.000 x g, durante 20 min. Transferir el sobrenadante a un tubo limpio y aadir 1/10 del volumen (aprox. 0,8 ml) de acetato de sodio 3M, pH 5,2, fro (-20C) y 6/ 10 del volumen (aprox. 5 ml) de isopropanol fro (-20C). Incubar a 20C durante dos das. Despus de la incubacin, centrifugar a 2.000 x g, durante 30 min a temperatura ambiente. Desechar el lquido teniendo cuidado de no perturbar el botn de ADN que se forma al fondo del tubo. Aadir 2 ml de etanol al 70%. Esto ayuda a retirar las sales que se precipitaron junto con el ADN. Centrifugar a 2.000 x g, durante 3 min a temperatura ambiente. Dejar secar el botn de ADN a temperatura ambiente.

18. Aadir 0,5 ml de agua destilada estril y resuspender el botn de ADN agitando suavemente. 19. Aadir 0,1 ml de una solucin de ARNasa de 0,1 mg/ml. Incubar durante una hora a 37C. 20. Almacenar el ADN extrado a 4C si se va a utilizar en menos de tres das. Alternativamente, el almacenamiento por largos perodos puede realizarse a 20C. Con la aplicacin de este protocolo, se considera una buena extraccin aquella que presenta niveles muy bajos de agentes contaminantes y permite obtener alrededor de 80 mg de ADN por cada gramo de tejido foliar utilizado. Una muestra de ADN con estas caractersticas puede almacenarse durante varios aos a bajas temperaturas sin perder sus caractersticas fsicoqumicas ni biolgicas.

VERIFICACIN DE LA CALIDAD Y LA CANTIDAD DE UNA PREPARACIN DE ADN

El ADN que ha sido extrado de un tejido debe ser cuantificado y su calidad verificada. El mtodo ms empleado para la determinacin simultnea de estas caractersticas es la electroforesis en gel de agarosa (Fig. 3). Esta tcnica se fundamenta en la migracin de las molculas de ADN, a travs de una matriz gelatinosa, debida a la aplicacin de un campo elctrico. La deteccin visual del ADN se lleva a cabo utilizando una sustancia sensible a la luz ultravioleta, el bromuro de etidio (Sambrook et al. 2002). Este compuesto es un agente carcinognico que actua intercalndose dentro de la doble hlice del ADN. La cuantificacin tambin se puede realizar empleando un espectrofotmetro, el cual detecta la radiacin emitida por las bases nitrogenadas presentes en el ADN luego de ser excitadas con luz de 260 nm. De igual manera se puede emplear un fluormetro, el cual cuantifica la emisin de energa de los compuestos qumicos (fluorocromos) que se intercalan dentro del ADN.

CONSIDERACIONES FINALES
El desarrollo de la gentica y la biotecnologa ha sido vertiginoso en los ltimos aos y ha hecho

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Tabla 3. Caractersticas y funciones de algunos de los reactivos empleados en la extraccin de ADN proveniente de diversas fuentes vegetales (Sambrook et al., 2001).

Reactivo
Tris (hidroximetil amino metano) EDTA (cido etilendiamintetractico)

Caracterstica
Tampn biolgico Agente quelante

Funcin
Estabiliza el pH de la solucin (entre 7,0 y 8,0) Atrapa los iones magnesio presentes en el medio para evitar la accin de enzimas que degradan al ADN. A altas concentraciones solubiliza al ADN. Equilibra fuerza inicas. Precipita al ADN. Precipita protenas. Denatura protenas.

Cloruro de sodio. Cloruro de potasio Acetato de sodio Acetato de potasio Fenol

Sal Sal Sal Sal Solvente orgnico (TXICO) Solvente orgnico (TXICO)

Cloroformo

Denatura protenas. Remueve lpidos. Solubiliza al fenol y lo elimina de la solucin. Solubiliza protenas y membranas.

SDS (dodecil sulfato de sodio)

Detergente aninico (TXICO) Detergente aninico

Sarkosyl (lauril sarcosina)

Inhibe hexoquinasas. Solubiliza protenas y membranas. Solubiliza polisacridos.

CTAB (hexadecil trimetil bromuro de amonio) Triton X-100 -Mercaptoetanol

Detergente catinico

Detergente Antioxidante

Solubiliza protenas y membranas. Inactiva protenas por reduccin de los puentes disulfuro. Reduce los grupos sulfuro de las protenas. Agente antioxidante. Disminuye la formacin de espumas e interfases. Elimina compuestos fenlicos que pueden inhibir la actividad de enzimas. Precipita cidos nuclicos. Precipita cidos nuclicos. Degrada ARN.

DTT (ditiothreitol) Octanol:isoamilalcohol PVP (polivinil pirrolidona) Etanol Isopropanol ARNasa

Antioxidante Alcoholes Detergente Alcohol Alcohol Enzima

posible incrementar la productividad y generar nuevos cultivares. Diversas tecnologas y sistemas de anlisis se han introducido como herramientas fundamentales para ser aplicadas en programas de mejoramiento. Sin embargo, con base en todos

estos avances y descubrimientos, el actor principal sigue siendo la informacin gentica, especficamente el ADN. En esta revisin se presentaron algunos conceptos bsicos para la extraccin del ADN. En prximos artculos se describirn algunas

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Figura 3. Electroforegramas de preparaciones de ADN proveniente de diversas palmas de aceite. Se muestran geles de agarosa al 0,8%, teidos con bromuro de etidio. (A) ADN de buena calidad. (B) ADN con impurezas. (C) ADN con presencia de ARN contaminante. (D) ADN degradado por accin mecnica o presencia de ADNasas. Registros tomados del centro de documentacin de geles del Laboratorio de Marcadores Moleculares de Cenipalma.

de las tcnicas que permiten obtener la informacin cifrada en esta molcula.

DELLAPORTA, S.L.; WOOD, J.; HICKS, J.B. 1983. A plant DNA minipreparation: Version II. Plant Molecular Biology Reporter (Estados Unidos) v.1 no.14, p.19-21. FLAVELL, R.B.; TWELL, D. 1996. Plant genome constituents and their organisation. In: G.D. Foster; D. Twell. (Eds.). Plant Gene Isolation. John Wiley & Sons, London. GRIFFITHS, A.J.F.; MILLER, J.H.; SUZUKI, D.T.; LEWONTIN, R.C.; GELBART, W.M. 1993. An Introduction to Genetic Analysis. 5th ed. W.H. Freeman and Company, New York. LEWIN, B. 1995. Genes V. Oxford University Press, New York. ROGERS, S.O.; BENDICH, A.J. 1988. Extraction of DNA from plant tissues. Plant Molecular Biology Manual. A6: 110. Kluwer Academic Publishers, Belgium. SAMBROOK, J.; RUSSELL, D.W.; SAMBROOK, J. 2001. Molecular Cloning. 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory, New York. TAYLOR, B.H.; MANHART, J.R.; AMASINO, R.M. 1993. Isolation and characterisation of plant DNAs. In: B.R. Glick; J.E. Thompson. (Eds.). Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology. CRC Press. Florida. p.37-47. The Arabidopsis Genome Initiative. 2000. Analysis of the genome sequence of the flowering plant Arabidopsis thaliana. Nature (Inglaterra) v.408, p.796-815.

AGRADECIMIENTOS
El autor expresa sus agradecimientos a Colciencias por el apoyo brindado durante su formacin doctoral. Adicionalmente, agradece a la Dra. Esperanza Torres (Centro Internacional de Fsica, CIF) por su opinin crtica sobre este texto y a los compaeros de Cenipalma por sus valiosos comentarios. Esta publicacin hace parte del proyecto financiado por Cenipalma y FONTAGRO, Convenio de Cooperacin Tcnica IICA-BID-FTG-5811999, FTG0111999 y FTG-2411999. La investigacin de Cenipalma es apoyada por el Fondo de Fomento Palmero de Fedepalma.

BIBLIOGRAFA
BENNET, M.D.; LEITCH, IJ. 2001. Angiosperm DNA C-values database (release 3.1, Sept. 2001). http:// www.rbgkew.org.uk/cval/homepage.html

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GLOSARIO
ADN: (cido desoxirribonuclico). Es la molcula responsable de almacenar todas las caractersticas (genes) de un individuo y transmitirlas a su descendencia. Qumicamente es una estructura qumica compleja cuyos componentes (denominados nucletidos) se organizan de manera lineal, generando enormes secuencias de informacin. Cromosoma: Es un paquete de genes y ADN presente en el ncleo de una clula. Diferentes clases de organismos tienen diferentes nmeros de cromosomas. El ser humano, por ejemplo, tiene 23 pares de cromosomas, mientras la palma de aceite tiene 32 pares. Cada miembro del par de cromosomas es aportado por el padre y por la madre del individuo. Fenotipo: Es el resultado de la expresin del genotipo, es decir, es la apariencia externa de un individuo. Tambin se expresa como el resultado de la influencia del medio ambiente sobre el genotipo. Gen: Es un fragmento de ADN que codifica para una caracterstica determinada. En otros trminos, es la unidad fsica y funcional de la herencia pasada directamente de los padres a su descendencia. Por ejemplo, caractersticas tales como color, altura y forma estn codificadas por uno o ms genes. Genoma: Es la dotacin gentica completa de cada ser vivo. En otros trminos, es la coleccin de informacin hereditaria que un individuo ha recibido de sus progenitores. Genotipo: Representa los genes transportados por un individuo. Marcador Gentico o Marcador Molecular: Es un segmento de ADN que puede ser identificado y localizado fsicamente sobre un cromosoma y cuya herencia puede ser seguida. Un marcador puede ser un gen, o puede ser una seccin de ADN sin funcin conocida. Ejemplos de tcnicas que generan marcadores moleculares son los RFLP, RAPD y AFLP, entre otros. AFLP = Polimorfismos en la longitud de fragmentos amplicados. RAPD = Polimorfismos de ADN amplificados aleatoriamente. RFLP = Polimorfismos en la longitud de fragmentos de restriccin. Mapeo de genes: Es un mtodo de anlisis que permite la determinacin de las posiciones relativas de los genes en un cromosoma y las distancias entre ellos. La representacin grfica que muestra las localizaciones fsicas de los genes y marcadores en cada cromosoma se denomina mapa fsico. Nucletido: Es el componente estructural bsico del ADN. Qumicamente es una molcula compuesta por una base nitrogenada, un azcar de cinco carbonos y un grupo fosfato. Debido a que el ADN es una doble hlice, su longitud se mide en pares de nucletidos (o pares de bases). Secuenciacin: Es una tcnica que permite conocer el orden de los nucletidos en una molcula de ADN

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