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A tecnologia do DNA recombinante

Cada fragmento de DNA, que foi clivado e separado do resto do material gentico, contm um ou mais genes. Lembre-se que cada gene origina uma protena, portanto ao estudarmos o gene estamos estudando a protena que ele codifica. Mas o que devemos fazer para estudar o gene? Devemos introduzi-lo no material gentico (no DNA) de um hospedeiro para que ocorra a transcrio do gene, em mRNA, e a traduo em protena. O hospedeiro um organismo que se multiplica (se reproduz) rapidamente, como por exemplo, as bactrias. Quando as bactrias se reproduzem por bipartio elas transmitem ao seus filhos o seu material gentico, portanto se neste material conter o fragmento de DNA de estudo, em pouco tempo teremos milhes de bactrias com o gene.

O plasmdio o material gentico circular no ligado ao cromossomo que fica espalhado pelo hialoplasma das bactrias. Ele sofre o mesmo processo do DNA cromossomal de transcrio e traduo, alm de, se multiplicar a cada diviso celular, passando uma cpia para cada clula filha.

O plasmdio retirado das clulas bacterianas para que se possa inserir o gene de estudo, para depois recoloc-lo na bactria.

Para entendermos melhor vamos conhecer esse processo passo a passo (acompanhe na figura): 1. 2. 3. 4. Os pesquisadores querem estudar um gene humano que produz uma protena que no se sabe a funo. Os pesquisadores recortam (utilizando enzimas de restrio), do DNA humano, o gene de interesse. Esse fragmento de DNA contendo o gene multiplicado por PCR para obtermos vrias cpias do mesmo fragmento (ou da mesma informao). A mesma enzima que clivou o gene do DNA humano utilizada para clivar o plasmdio bacteriano. Lembre-se que o fragmento de DNA, ao ser clivado, gera pontas adesivas que so complementares ao plasmdio se este for clivado com a mesma enzima. A seguir o plasmdio clivado misturado com os fragmentos de DNA (contendo o gene) e uma enzima chamada ligase cola os fragmentos ao plasmdio, produzindo o chamado DNA recombinante. Isso feito, o DNA recombinante introduzido em uma bactria hospedeira. A bactria hospedeira colocada em um meio nutritivo seletivo, apenas aquelas que possuem o DNA recombinante crescem, formando colnias. Aps muitas geraes de bactrias, o produto da expresso dos genes, as protenas humanas, so purificadas das bactrias (so separadas das protenas das bactrias).

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Esse mtodo produz uma grande quantidade de protenas humanas possibilitando assim, seu estudo.

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