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Ao antimicrobiana de extratos de plantas medicinais sobre espcies fitopatognicas de fungos do gnero Colletotrichum

SILVA, M.B. ; NICOLI, A. ; COSTA, A.S.V. ; BRASILEIRO, B.G. ; JAMAL, C.M. ; SILVA, C.A. ; PAULA JNIOR, 2 2 T.J. ; TEIXEIRA, H. 1 2 UNIVALE, Rua Israel Pinheiro 2000, 35020-220 - Governador Valadares, MG; EPAMIG-CTZM, Vila Giannetti 47, 36570-000 - Viosa, MG; *mbarreto@univale.br

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RESUMO: A demanda por produtos agrcolas com baixo nvel residual de pesticidas cada vez maior. Princpios ativos derivados de metablitos secundrios presentes em extratos de plantas medicinais podem inibir o desenvolvimento de organismos fitopatognicos. Este trabalho verificou o efeito in vitro de extratos das plantas medicinais Costus pisonis (cana-de-macaco), Achillea millefolium (mil-folhas) e Pelctranthus barbatus (boldo-da-terra) no crescimento micelial dos fungos Colletotrichum musae (isolado de banana), Colletotrichum gloeosporioides (isolado de mamo), C. gloeosporioides (isolado de cacau) e Colletotrichum lindemuthianum (isolado de feijo). Todos os extratos apresentaram algum efeito fungitxico sobre o crescimento micelial dos fungos. O extrato de folhas de C. barbatus reduziu o crescimento micelial de C. musae, C. gloeosporiodes (mamo), C. gloeosporiodes (cacau) e C. lindemuthianum em 82, 49, 47 e 53%, respectivamente. Palavras-chave: controle alternativo, antracnose, metablitos secundrios ABSTRACT: Antimicrobial action of medicinal plant extracts on phytopathogenic species of Colletotrichum fungus. Agricultural products with low levels of pesticide residues have been increasingly required by consumers. Active ingredients derived from secondary metabolites and present in medicinal plant extracts can inhibit the development of plant pathogens. The objective of this work was to verify the in vitro effect of extracts from the medicinal plants Costus pisonis, Achillea millefolium and Plectranthus barbatus on the mycelial growth of Colletotrichum musae (isolated from banana), Colletotrichum gloeosporioides (isolated from papaya), C. gloeosporioides (isolated from cacao) and Colletotrichum lindemuthianum (isolated from bean). All extracts had an inhibitory effect on the fungi mycelial growth. Plectranthus barbatus leaf extract reduced the mycelial growth of C. musae, C. gloeosporiodes (papaya), C. gloeosporiodes (cacao) and C. lindemuthianum by 82, 49, 47 and 53%, respectively. Key words: alternative control, anthracnose, secondary metabolites

INTRODUO O uso indiscriminado e sem acompanhamento de defensivos agrcolas industrializados tem induzido o surgimento de populaes resistentes de patgenos de plantas, fazendo com que os agricultores aumentem, por sua conta, a dose dos produtos utilizados, como forma de manter sob controle as doenas e a viabilidade econmica da produo. Conseqentemente, o desenvolvimento de produtos agrcolas com baixo nvel residual de pesticidas cada vez mais demandado.

O uso de produtos derivados da indstria qumica no controle de doenas na agricultura moderna tem sido amplamente questionado pela sociedade, em decorrncia dos efeitos adversos causados por estes (Koepf et al., 1986; Paula Jr. et al., 2006). Dentre estes efeitos possvel enumerar a poluio da gua e do ar, a contaminao de alimentos, o aumento da resistncia de patgenos aos produtos e os seus efeitos sobre as plantas, os animais e o homem (Souza, 1998). O principal

Recebido para publicao em 14/08/2007 Aceito para publicao em 20/12/2007

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problema na utilizao de agrotxicos est ligado, porm, ao fato de esses produtos serem, muitas vezes, aplicados em doses excessivas ou de forma inadequada. Alm disso, o desenvolvimento de produtos sintticos para controlar doenas procedimento trabalhoso e de custo elevado por causa dos vrios testes que so, geralmente, requeridos, como eficcia, seletividade, toxicologia e impacto ao ambiente (McLaren, 1986). Extratos de plantas medicinais tm sido utilizados com sucesso no controle de fungos fitopatognicos (Silva et al., 2006). Metablitos secundrios de plantas so considerados escrias ou produtos finais do seu metabolismo e tm importncia para as plantas que os sintetizam. Uma das funes dessas substncias fornecer proteo s plantas contra o ataque de organismos patognicos (Whittaker & Fenny, 1971; Swain, 1977; McLaren, 1986; Wink, 1988; Taiz & Zeiger, 1991). Tem sido verificado que a maioria dos extratos de plantas apresenta propriedades antifngicas (Pordesimo & Ilag, 1976; Moore & Atkins, 1977; Alfenas et al., 1982; Rai & Tripathi, 1984). Espcies de plantas medicinais tm, em sua composio qumica, substncias biologicamente ativas que provocam no organismo humano reaes que podem variar da cura ao abrandamento da doena. Diversas espcies tm sido tambm testadas para o controle de fitopatgenos. Cruz et al. (1998) verificaram que o tratamento de sementes de soja com extrato aquoso de manjerico (Ocimum basilicum), lavanda (Lavandula officinalis), capim-limo (Cymbopongon citratus) e eucalipto (Eucaliptus citriodora) reduziu significativamente a incidncia de Penicillium sp. e de Aspergillus sp. Em sementes. Silva et al. (1999) verificaram que o extrato de quebra-pedra (Phyllanthus niruri) inibiu a germinao de Fusarium oxysporum. A atividade nematicida do extrato aquoso de alho (Allium sativum) contra o nematide-das-galhas do cafeeiro, Meloydogine exigua, foi comprovada por Silva et al. (1999). Alguns metablitos isolados ou mesmo fraes de extratos tambm apresentam atividade antifngica. O leo essencial de cambar (Lantana aculeata) apresentou atividade contra Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, F. oxysporum, Microspermum gypsum, Penicillium digitatum, Penicillium notatum e Rhizophus stolonifer (Saxena & Sharma, 1999). Tetranortriterpenides isolados de cedro australiano (Toona ciliata), neem ( Azadirachta indica ) e cidra ( Citrus medica ) apresentaram atividade contra Puccinia arachidis (Govindachari et al., 2000). O presente trabalho verificou o efeito in vitro do extrato bruto de algumas espcies de plantas medicinais no crescimento micelial dos fungos fitopatognicos Colletotrichum musae (Berk. & M.A.

Curtis) Arx (isolado de banana; anamorfo: Glomerella), Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. (isolado de mamo; anamorfo: Glomerella cingulata), C. gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. (isolado de cacau; anamorfo: G. cingulata) e Colletotrichum lindemuthianum (Sacc. & Magnus) Briosi & Cavara (isolado de feijo; anamorfo: Glomerella).

MATERIAL E MTODO Plantas de cana-de-macaco (Costus pisonis Lindl., Zingiberaceae), mil-folhas (Achillea millefolium L., Asteraceae) e boldo-da-terra [ Plectranthus barbatus (Andr.) Benth, Limiaceae] foram coletadas e do horto de plantas medicinais da UNIVALE, em seguida, submetidas secagem em temperatura ambiente. Os extratos destas plantas foram obtidos por macerao, utilizando-se como solvente o etanol. Posteriormente foram secos foram obtidos pela eliminao do etanol por evaporao a vcuo e identificados no banco de extratos do Bioplanta, grupo de pesquisa em Plantas Medicinais da UNIVALE, sob os respectivos cdigos: Bio40, Bio38 e Bio32. A partir de folhas e de caules de C. pisonis, A. millefolium e de P. barbatus foi extrado 1 g de extrato etanlico, que foi diludo em 5 mL do solvente orgnico dimetilsulfxido (DMSO). Visando obter uma concentrao final de 2.000 L L-1, aps repouso por uma hora, 0,5 mL do extrato de cada planta medicinal foi dissolvido em DMSO e vertido em frasco Erlenmeyer contendo 50 mL de BDA, previamente autoclavado, cuja temperatura encontrava-se em 48C. Em seguida, o extrato bruto foi homogeneizado no meio de cultura e vertido em placas de Petri. Quatro horas depois, discos de miclio de 0,7 cm de dimetro dos fungos C. musae, C. gloeosporioides (mamo), C. gloeosporioides (cacau) e C. lindemuthianum, cultivados por sete dias em meio BDA (200 g de batata, 20 g de dextrose e 15-20 g de gar), foram colocados no centro das placas, e mantidos a 2530C. O crescimento radial mdio do miclio foi avaliado em intervalos de 24h, at um total de 120h aps a repicagem dos fungos (Dhingra & Sinclair, 1985). Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, em que cada tratamento foi repetido cinco vezes. Placas de Petri sem extrato vegetal contendo meio BDA acrescido do solvente DMSO (testemunha A) e apenas com BDA (testemunha B) serviram como controles. Para testar a confiabilidade dos resultados, o ensaio foi repetido duas vezes. Aps anlise de varincia, o crescimento radial mdio de cada tratamento foi comparado pelo Teste de Tukey, a 5% de probabilidade.

RESULTADO E DISCUSSO Todos os extratos avaliados apresentaram

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TABELA 1. Efeito de extratos vegetais brutos de Costus pisonis, Achillea millefolium e Coleus barbatus no crescimento micelial mdio (cm) de Colletotrichum musae (isolado de banana), Colletotrichum gloeosporioides (isolado de mamo), C. gloeosporioides (isolado de cacau) e Colletotrichum lindemuthianum (isolado de feijo).

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Valores mdios acumulados aps 120 h de incubao a 25-30oC. Mdias seguidas das mesmas letras nas colunas no diferem estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey (5%). 3 Valores entre parnteses referem-se sensibilidade mdia de inibio do crescimento micelial dos fungos (%) pelos extratos vegetais em relao testemunha A (placas sem extrato vegetal contendo meio BDA + solvente orgnico DMSO) ou B (placas sem extrato vegetal contendo apenas meio BDA).
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efeitos fungitxicos variveis sobre o crescimento micelial das espcies de Colletotrichum spp. (Tabela 1). Os resultados obtidos em placas sem extrato vegetal contendo BDA + DMSO (testemunha A) foram comparados com os obtidos em placas contendo apenas BDA (testemunha B) e observou-se que o solvente orgnico DMSO inibiu o crescimento dos fungos na concentrao utilizada. Dessa forma, a avaliao do potencial de controle de cada extrato foi feita considerando-se a testemunha A. Os extratos provenientes de folhas e de caules de P. barbatus apresentaram o maior potencial fungitxico comparado aos extratos das outras espcies testadas. Ambos os extratos de C. barbatus inibiram de forma similar o crescimento micelial de C. gloeosporioides isolado de mamo, bem como de C. musae e C. lindemuthianum; entretanto, o extrato proveniente de folhas apresentou maior efeito inibidor em C. gloeosporioides isolado de cacau do que aquele proveniente apenas da macerao de caules da planta. Comparado s testemunhas A e B, o crescimento de C. gloeosporioides (cacau) foi inibido tanto pelo extrato de C. pisonis quanto de A. millefolium. Por outro lado, apenas o extrato de A. millefolium apresentou efeito inibidor no crescimento micelial de C. musae. C. musae foi a espcie que apresentou maior sensibilidade mdia aos compostos testados. Seu crescimento em meio BDA contendo extrato de folhas de P. barbatus sofreu inibio de 83 e 81%, comparando-se, respectivamente, s testemunhas A e B (Tabela 1). Neste trabalho foram utilizados apenas os extratos brutos das plantas testadas. Em estudos futuros, caso sejam utilizadas fraes biologicamente ativas, possvel que haja a potencializao do efeito fungitxico dos extratos, especialmente com relao a C. barbatus. Alm da necessidade de demonstrar o potencial fungitxico in vivo, estudos adicionais devero incluir a caracterizao qumica dos princpios ativos dos extratos dessas espcies.

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CONCLUSO Extratos das plantas medicinais Costus pisonis (cana-de-macaco), Achillea millefolium (milfolhas) e Plectranthus barbatus (boldo-da-terra) foram capazes de inibir o crescimento micelial de fungos fitopatognicos do gnero Colletotrichum. O extrato de folhas de P. barbatus reduziu o crescimento micelial de C. musae, C. gloeosporiodes (isolado de mamo), C. gloeosporiodes (isolado de cacau) e C. lindemuthianum em 82, 49, 47 e 53%, respectivamente. AGRADECIMENTO Os autores agradecem ao apoio da FAPEMIG (Belo Horizonte, MG). T.J. Paula Jnior bolsista do CNPq.

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