PRÁCTICA Nº 02
Recuento total de microorganismo
Método de Breed
ASIGNATURA :
DOCENTE :
ALUMNO :
CICLO :
2007 - II
1
PRÁCTICA Nº 02
RECUENTO MICROSCOPICO DIRECTO POR
EL METODO DE BREED
I. Introducción:
II. Objetivos:
III. Materiales:
Microscopio calibrado
Láminas portaobjeto
Lámina patrón de Breed
Pipeta de Breed o asa en anillo calibrado
Colorante de Gram o Azul de metileno
2
Xilol
Papel Tisú
Muestra: leche
IV. Procedimiento:
2. Preparación de la Película:
Se lava la lámina, desengrasándola. Una vez hecho se coloca sobre la lámina
patrón, en este caso al carecer de ella se coloca una lámina de cartón que
tenga una cuadrado de 1 cm2.
Enseguida colocar la muestra de leche previamente homogenizada (20
veces).
Con el asa calibrada se coloca 0.01 ml. de la muestra en la lámina. Esta se
extiende por toda el área del cuadrado de la lámina patrón.
Luego debe hacerse el secado lento para evitar el resquebrajamiento de la
película; en especial cuando la muestra se trata de leche.
En algunas muestras es necesario desengrasar la película con Xilol.
3
Teñir la película por el Método de Gram o tinción simple con azul de
metileno.
3. Examen Microscópico:
Contar en el microscopio los microorganismos por campo utilizando lente de
inmersión. Se cuenta a lo largo de toda la película.
Se cuenta como mínimo 20 campos y un máximo 100 campos.
Cuando se cuentan los microorganismos se deben de contar como uno solo:
aquellas bacterias que están solas, los agregados, los grupos, los cocos o
bacilos en cadenas.
4
campo
V. Cálculos y Resultados:
# de # de
# de m.o # de m.o
campo campo
1. 9 11. 3
2. 2 12. 6
3. 4 13. 7
4. 9 14. 3
5. 8 15. 5
6. 9 16. 4
7. 5 17. 6
8. 6 18. 1
9. 3 19. 4
10. 5 20. 2
17.5 x 10 µm = 175 µm
1 mm
175 µm x = 0.175 mm
1000 µm
- Luego, con este valor podemos hallar el área del círculo o en este caso, del
campo microscópico (Acampo = π x r2), en este caso como tenemos el
diámetro y no el radio, lo único que se hace es dividirlo entre 2.
5
Acampo = 3.1416 x (0.175 mm/2)2
X = 4158 mm-2
- Luego, a este valor se lo multiplica por 100 para hallar el FM (el factor
microscópico debe estar entre 300,000 y 600,000.
Nº promedio Recíproco
Nº de m.o. en Factor
= de m.o por X X de la
muestra microscópico
campo dilución
Nº de m.o. en
= 5.05 x 415 800 x 100
muestra
Nº de m.o. en
= 209’979,000 m.o/mL
muestra
VI. Preguntas:
6
- La Norma Técnica Peruana para el Método de Bredd se puede conseguir con el sgte.
nombre: “Leche Cruda: Numeración de Células Somáticas. Método del
Microscopio”; con código NTP 202.173:1998, y tiene un costo de S/. 48.92. Esta
norma técnica será comprada en conjunto por los alumnos de práctica del curso en
los próximos días.
VII. Referencias: