Precipitao de Protenas com Desnaturao As protenas possuem uma estrutura tridimensional bem definida que est relacionada com

suas propriedades fsicas e biolgicas. A modificao na estrutura tridimensional nativa de uma protena, com a conseqente alterao de suas propriedades conhecida como desnaturao. A desnaturao envolve alteraes nas estruturas quaternria, terciria e secundria de protenas, mas no da primria. A desnaturao, usualmente decresce a solubilidade das protenas. A diminuio da solubilidade pode ser explicada pela exposio de radicais hidrofbicos e outros que prejudiquem a interao protena-gua e favoream a interao protena-protena. A desnaturao o evento primrio e importante. A floculao e a coagulao, que muitas vezes so confundidos com desnaturao de protenas, so simplesmente manifestaes visveis das alteraes estruturais causadas pelos agentes desnaturantes. Existem vrios agentes desnaturantes de protenas, tais como: calor, cidos, lcalis, solventes orgnicos, solues concentradas de uria e guanidina, detergentes, sais de metais pesados, etc. Entre as alteraes que se observam em decorrncia da desnaturao protica, pode-se citar: diminuio da solubilidade, perda de atividade biolgica (por exemplo, da ao enzimtica, da ao hormonal), aumento da reatividade de radicais da cadeia polipeptdica, alteraes na viscosidade e coeficiente de sedimentao, etc. A precipitao com desnaturao, alm de serem utilizadas para caraterizar a presena de protenas em soluo, tambm so teis para proceder a desprotenizao de lquidos biolgicos para anlise de componentes no proticos. Precipitao por Ao do Calor A estrutura terciria de uma protena mantida por interaes hidrofbicas entre os radicais apolares que se abrigam no meio aquoso, procurando se agruparem no interior do glbulo protico, pelas atraes inicas entre os radicais carregados com cargas opostas, pelas pontes

dissulfeto, pontes de hidrognio, interaes hidrofbicas ou ainda pelas Foras de Van der Waals. Ao fornecer energia a um meio aquoso contendo protenas, atraes entre os radicais so desfeitas e a protena "desenrolada", expondo, ao meio aquoso seus radicais apolares que estavam contidos no seu interior. Isto que leva desnaturao.
A temperatura um fator importante na solubilizao das protenas. Em geral, entre O e 40C o aumento da temperatura favorece a solubilidade. Isto decorre do fato do calor provocar um aumento da energia cintica das molculas de protena, facilitando a interao destas com o solvente. Entretanto, acima de 40C, as protenas comeam a precipitar: os movimentos moleculares se tornam to intensos que os grupamentos qumicos se afastam alm da distncia permitida para se reassociarem, aproximando-se de outros com os quais se associam. Assim, ocorre o rompimento das estruturas secundria, terciria e quaternria e a protena adquire outra conformao, uma conformao inativa (desnaturada).

Precipitao por reao com os reagentes para alcalides

Determinados agentes, como os reagentes para alcalides podem ser usados na precipitao de protenas, o que til na desproteinizao de materiais biolgicos, como o sangue: nions de cidos complexos (tricloroactico, tnico, fosfotngstico) formam sais insolveis onde a protena funciona como ction.

Precipitao por Reao com Sais de Metais Pesados

A adio de sais de metais pesados, tais como mercrio, chumbo, cobre e zinco, levam formao de sais denominados "quelatos" entre os aminocidos cidos e estes metais. A protena precipita porque estes sais so insolveis em gua e tambm porque, com a quebra das ligaes inicas, os aminocidos hidrofbicos ficam mais expostos ao meio aquoso.

Precipitao por Ao de Solventes Orgnicos

A adio de solventes orgnicos, como o etanol, ter etlico e acetona

s solues aquosas de protenas podem levar precipitao das mesmas. Isto pode ser explicado pelo fato destes solventes apresentarem uma

constante dieltrica inferior da gua. Solventes orgnicos em baixas temperaturas (0 C ou menos) so teis para a separao de misturas proticas, porque as protenas podem ser precipitadas sem sofrerem desnaturao. Entretanto, a temperatura mais elevada, os solventes orgnicos podem levar desnaturao por romperem pontes de hidrognio e interaes apolares, importantes na manuteno da conformao protica. A gua tem uma alta constante dieltrica, assim a fora de atrao entre molculas proticas contendo radicais com cargas opostas baixa, predominando a interao protena-gua em vez da interao protenaprotena. A adio de solventes pode inverter esta situao, levando agregao e precipitao das molculas proticas.

Solubilizao (Salting In) Efeito da Fora Inica sobre a Solubilidade das Protenas
A capacidade dos sais neutros de influenciar a solubilidade das protenas uma funo de sua fora inica, que tanto depende de sua concentrao como na valncia de ctions e nions que formam o sal. Em concentrao reduzida, os sais aumentam a solubilidade de muitas protenas, um fenmeno denominado salting-in, provavelmente devido interao da protena com os sais causando diminuio da interao protena-protena e, portanto, aumentando a solubilidade.

Precipitao (Salting Out) Reaes de Precipitao sem Desnaturao

As protenas podem ser precipitadas sem sofrer desnaturao por ao de solventes orgnicos, como foi explicado anteriormente, variao do pH e por alteraes da fora inica do meio. A variao do pH pode ser usada para precipitar protenas no seu ponto isoeltrico, pH no qual a repulso eletrosttica entre as molculas mnima. Este efeito denominado de salting-out. As protenas podem ser ressolubilizadas mantendo as suas caractersticas estruturais nativas por uma variao de pH acima ou abaixo do ponto isoeltrico.