Universidad del Norte. Laboratorio Multifuncional de Ciencias Biolgicas.

Robin Casalla

UNIVERSIDAD DEL NORTE REA DE CIENCIAS BSICAS DPTO DE QUMICA Y BIOLOGA LABORATORIO DE BIOLOGIA PRCTICA 4: TRANSPORTE A TRAVS DE LA MEMBRANA PLASMTICA 1. Introduccin Las clulas como sistemas vivientes realizan actividades a travs de su membrana celular. Una de esas actividades es el intercambio de sustancias, que le permite a la clula absorber alimentos y excretar substancias de deshecho. El intercambio de sustancias con el medio se puede realizar a travs de diferentes procesos entre los que se puede citar el transporte pasivo, en el cual no hay consumo de energa metablica (ATP) y el transporte activo, en el cual hay consumo de energa metablica debido a que el movimiento de sustancias se realiza en contra del gradiente de concentracin y electroqumico. Una de las formas de transporte pasivo es el fenmeno de la difusin en el cual las sustancias migran de un lugar en el que la concentracin de soluto es mayor hacia el lugar en el que la concentracin de soluto es menor, atravesando una barrera semipermeable como lo es la membrana celular. La smosis es un caso especial de difusin. El proceso de smosis en los seres vivos se define como la difusin del agua a travs de la membrana celular, de una regin de baja concentracin de soluto hacia una de alta concentracin de soluto. El intercambio del agua entre la clula y su ambiente es un factor fundamental en el funcionamiento normal de la clula. 2. Objetivos Analizar la influencia de algunos factores sobre el fenmeno de difusin espontnea. Observar los cambios morfolgicos que experimentan los eritrocitos humanos al ser colocados en soluciones de diferentes concentraciones. Analizar el fenmeno de la smosis y su efecto en los eritrocitos humanos. Observar los cambios morfolgicos y de distribucin de las subestructuras celulares durante el fenmeno de smosis en clulas vegetales 3. Materiales Cronmetro Goteros Beakers Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Tubos de ensayo Cinta de enmascarar Sangre Elodea Agua del grifo Agua destilada Solucin de Giemsa al 1% Solucin de cloruro de calcio al 10% Solucin de cloruro de sodio a diferentes concentraciones

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4. Procedimiento 4.1. Difusin Espontnea (Efecto de la concentracin) 1. Tome cinco (5) tubos de ensayo, con la misma capacidad, y agregue en cada uno 5 mililitros de agua destilada. Rotlelos con un nmero del uno al cinco. 2. Agregue a cada tubo un nmero determinado de gotas de Giemsa al 1%. Por ejemplo, una gota al tubo # 1, dos gotas al tubo # 2, y as sucesivamente hasta el tubo # 5. 3. Con la ayuda de un cronmetro o reloj, mida el tiempo que transcurre desde el momento de agregar la gota del colorante (tiempo 0) hasta que la distribucin del mismo en el agua se hace uniforme (tiempo final). Este intervalo de tiempo se denominar tiempo de difusin. 4. Realice una grfica en la que relacione el nmero de gotas del colorante, equivalente a la concentracin de la sustancia a difundir, (variable independiente) con el tiempo que tard en difundir el colorante hasta la uniformidad (variable dependiente). Discuta estos resultados. 4.2. Difusin Espontnea (Efecto de la temperatura) 1. Tome cuatro (4) tubos de ensayo, con la misma capacidad, y agregue en cada uno 5 mililitros de agua destilada. Rotlelos con un nmero del uno al cuatro. 2. Coloque el tubo # 1 en un recipiente con hielo y espere unos minutos. Registre la temperatura del agua en el tubo. A continuacin, agregue sobre la superficie del agua a una distancia estimada (fija), una (1) gota de Giemsa al 1%. Mida el tiempo que transcurre desde el momento de agregar la gota del colorante (tiempo 0) hasta que la distribucin del mismo en el agua se hace uniforme (tiempo final). Este intervalo de tiempo se denominar tiempo de difusin. 3. En los tubos marcados como 2, 3 y 4 realice el procedimiento anterior pero colocndolos previamente en un recipiente con agua fra, a temperatura ambiente o en un bao termorregulador, respectivamente. 4. Realice una grfica en la que relacione la temperatura del agua en los tubos de ensayo (variable independiente) con el tiempo que tard en difundir el colorante hasta la uniformidad (variable dependiente). Discuta los resultados. 4.3. Osmosis en clulas animales 1. Coloque en un portaobjeto una gota de sangre, la cual ha sido extrada de un voluntario minutos antes de iniciar la prctica. Colquele un cubreobjeto y observe al microscopio con los objetivos de 10X y 40X. Dibuje dos clulas y stas se tomarn como muestra control. 2. Coloque en un portaobjeto una gota de sangre, agregue una gota de la solucin sealada por el profesor. Colquele un cubreobjeto y observe al microscopio con los objetivos de 10X y 40X. Dibuje dos clulas. 3. Repita el procedimiento anterior en otro portaobjeto, pero agregando una gota de la otra solucin suministrada, antes de colocar el cubreobjeto. Dibuje dos clulas. En los dos casos anteriores, discuta los resultados para deducir si la solucin es isotnica, hipotnica o hipertnica con respecto al interior de la clula. 2

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4.4. Osmosis en clulas vegetales 1. Coloque unas ramitas de elodea en cada uno de los beakers rotulados como Solucin A, B, o C. Espere unos 5 minutos. 2. Tome una hoja de elodea de cada una de las soluciones anteriores, colquela sobre un portaobjeto, agregue dos gotas del mismo medio de donde sac la hoja y coloque un cubreobjeto. 3. Observe al microscopio con los objetivos de 10X y 40X. Dibuje dos clulas. En los tres casos, discuta los resultados para deducir cul es la solucin isotnica, hipotnica o hipertnica con respecto al interior de la clula. 4.5. Actividades para presentar en el Informe 1. Explique cul es la relacin entre la concentracin o la temperatura de la solucin y el tiempo de difusin. Cmo se podra extrapolar esta observacin a lo que sucede a nivel celular? 2. Realice un dibujo del fenmeno observado en las clulas sanguneas y en las hojas de elodea. En dichos dibujos seale los medios hipotnicos, isotnicos o hipertnicos con respecto al interior de la clula y de ejemplos de soluciones que presenten este tipo de comportamiento. 5. Recursos en la Web http://science.nhmccd.edu/biol/bio1int.htm 6. Preguntas problemas para incluir en el Informe Los glbulos rojos se hinchan y estallan cuando son colocados en una solucin hipotnica como el agua destilada. Por qu no nos hinchamos y reventamos cuando nadamos en una piscina que contiene agua, la cual es hipotnica con respecto a nuestras clulas y fluidos corporales? Distintas clulas tienen membranas plasmticas ligeramente diferentes. La de un Paramecium, p. ej., es slo 1% tan permeable al agua como la de un glbulo rojo humano. En base a la observacin de los efectos de la smosis sobre los glbulos rojos y una investigacin del papel de las vacuolas contrctiles en el Paramecium, qu funcin cree que tenga la baja permeabilidad al agua del Paramecium? Qu diferencias moleculares cree que pueden explicar esta baja permeabilidad al agua? La integridad de la membrana plasmtica es indispensable para la supervivencia celular. Podra el sistema inmunolgico de un organismo aprovechar esto para destruir clulas extraas que han invadido el organismo? Cmo podran las clulas del sistema inmunolgico alterar las membranas de las clulas extraas? Proponga un experimento para demostrar el proceso de difusin simple de solutos (dilisis) a travs de la membrana plasmtica.

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7. Caractersticas del Informe. El modelo que se presenta a continuacin es una adaptacin del modelo seguido en la publicacin de artculos cientficos e incluye lo siguiente: 1. Identificacin. Ttulo y Autores. 2. Resumen (mximo 100 palabras). Describir lo ms relevante del experimento de manera breve y concisa. 3. Introduccin. Presentacin del tema del experimento realizado y los contenidos ms relevantes (marco terico) consultados en la literatura (Libros y Artculos de revistas especializadas). 4. Materiales y Mtodos. Redacte con sus propias palabras la metodologa general seguida durante el desarrollo del experimento. Escriba de forma ordenada y coherente el procedimiento general seguido y no es necesario que incluya una lista de materiales y reactivos utilizados durante el experimento. 5. Resultados y Discusin. Presntelos en forma de prrafos concretos, tablas, grficas o dibujos. En el caso de los dibujos de lo observado al microscopio se deben presentar enmarcados en un crculo. Adems, es importante indicar el aumento total de la imagen dado por el microscopio utilizado. Las tablas, grficas, o dibujos deben estar numeradas y rotuladas adecuadamente (Escribir un pie de figura con su descripcin). Esta seccin del Informe debe incluir la suficiente informacin sobre lo observado durante el experimento. La discusin de los resultados es una interpretacin propia de los resultados obtenidos y las implicaciones que tienen. Aqu, se debe realizar un anlisis de las tablas, grficas o dibujos reportados como Resultados. Haga una comparacin de sus resultados con los obtenidos o publicados por otros autores. En esta seccin puede abordar o analizar las preguntas problemas planteadas. Las respuestas a las preguntas forman parte de la Discusin, pero no son la Discusin misma. 6. Conclusiones. Redacte las conclusiones teniendo en cuenta los objetivos planteados y aquellos alcanzados durante el desarrollo del experimento. Son el producto del anlisis realizado sobre los resultados obtenidos. Escribirlas de manera breve, concisa y en forma numerada. 7. Bibliografa. Incluya la referencia completa de los Libros, Artculos de revistas, o bsquedas en Bases de Datos especializadas consultados y citados en la Introduccin o en la Discusin. NOTA: El Informe debe tener una extensin mxima de 8 pginas escritas en Word; letra Arial o Times New Roman tamao 12; interlineado 1,5 lneas; sin espacios muertos entre ttulos; y guardando los mrgenes correspondientes establecidos por el Word.