PRAK. TAD MODUL ISOLASI DNA PLASMID CARA KERJA (REVISI): 1. Siapkan media LB-Amp sebanyak 4 mL. 2.

Inokulasikan biakan E.coli rekombinan (mengandung plasmid tertentu) dengan menggunakan jarum ose dan inkubasi pada suhu 37 C selama 16 jam. 3. Pindahkan 1,5 mL inokulum ke dalam tabung Eppendorf dan sentrifugasi pada 11.000 rpm selama 1 menit; buang supernatan. 4. Tambahkan lagi 1,5 mL inokulum ke dalam tabung Eppendorf yang sama dan sentrifugasi pada11.000 rpm selama 1 menit; buang supernatan. Pellet sel akan digunakan untuk proses selanjutnya. 5. Tambahkan 250 L buffer STE dan vortex selama 10 detik. 6. Tambahkan 5 L ProteinaseK, kemudian vortex selama 10 detik dan inkubasi pada suhu ruang selama 5 menit. 7. Tambahkan 300 L larutan lisis dan homogenkan dengan membolak-balikan tabung 10 kali. Biarkan selama 5 menit, TEPAT!! 8. Tambahkan 150 L larutan penetralisir, bolak-balik 10 kali dan biarkan selama 1 menit. 9. Lakukan sentrifugasi pada 11.000 rpm selama 10 menit. Sementara menunggu, persiapkan dan beri label tabung Eppendorf steril yang akan digunakan untuk langkah selanjutnya. 10. Pipet 400 L supernatant dan masukkan ke dalam tabung Eppendorf steril yang sudah disiapkan. 11. Tambahkan 800 L etanol p.a dingin; kemudian vortex selama 30 detik. 12. Inkubasi di dalam ice bath selama 20 menit. 13. Lakukan sentrifugasi pada 11.000 rpm selama 5 menit pada suhu 4C. 14. Buang supernatan dan tambahkan etanol 70% sebanyak 1 mL dan vortex selama 30 detik. 15. Lakukan sentrifugasi pada 11.000 rpm selama 5 menit pada suhu 4C. 16. Buang supernatan dan keringkan sisa etanol. 17. Larukan pellet DNA plasmid dengan 25 L ddH2O. 18. Elektroforesis larutan DNA plasmid. 19. Ukur konsentrasi DNA dengan menggunakan nanodrop.