Kontaminasi komoditas pangan dengan jumlah jejak pestisida telah menjadi sumber pertumbuhan keprihatinan bagi masyarakat umum.

Selama bertahun-tahun, New York State Departemen Pertanian telah dianalisis buah-buahan, sayuran, dan susu untuk pestisida phosphated dan klor pada bagian rendah-per-miliar tingkat dengan menggunakan detektor selektif dikombinasikan dengan konfirmasi spektrometri massa melalui pemantauan selektif-ion (SIM; 1 ). Banyak pestisida tampaknya memiliki efek-mengganggu endokrin evenat tingkat rendah, mendorong lembaga regulator untuk meminta metode analisis yang sangat sensitif (2). Menentukan efek paparan tingkat rendah diulang untuk pestisida pada manusia, terutama anakanak, tidak bisa dibuat tanpa batas deteksi yang sangat rendah. Banyak dari senyawa, seperti pestisida organochlorinated, juga telah ditunjukkan untuk bioaccumulate dalam jaringan lemak hewan (3). Beberapa tahun pemantauan menunjukkan bahwa jumlah yang dilaporkan sebagian besar senyawa, diperoleh dengan kromatografi gas (GC) dengan detektor selektif, berada dekat dengan batas deteksi metode. Tanpa batas-batas deteksi rendah, banyak residu akan pergi tidak dilaporkan. Detektor selektif seperti detektor konduktivitas elektrolitik (ELCD) dan detektor fotometri nyala (FPD) sangat sensitif tetapi tidak mendeteksi pestisida tanpa fosfor atau klorin. Jika pestisida harus dikonfirmasi oleh spektrometri massa, batas deteksi ditentukan oleh batasbatas deteksi spektrometer massa. Juga SIM konfirmasi, terutama pada tingkat rendah, bisa menjadi tersangka. Biasanya, kegunaan dari sebuah spektrometer massa benchtop untuk pestisida skrining dibatasi oleh sensitivitas yang buruk dibandingkan dengan detektor GC. Penggunaan GC dengan spektrometri massa tandem (MS / MS) adalah salah satu metode untuk memperoleh konfirmasi pada sensitivitas yang sama dengan detektor GC khas. MS / MS dapat mencapai sensitivitas yang sangat baik bahkan dengan matriks kompleks, karena menghilangkan gangguan sebelum ion pengukuran (4, 5). Dalam prosesnya, keluar sampel kolom analitis dan menjadi terionisasi dalam tahap pertama dari MS / MS. Pada titik ini, semua tetapi rentang yang sangat sempit massa yang dikeluarkan. Pada tahap kedua MS / MS, ini berkisar ditahan massa yang terfragmentasi dan hasilnya kemudian diukur. Salah satu teknik menggunakan 3 quadrupoles dalam seri untuk mencapai MS / MS. Fungsi quadrupole pertama sebagai massa filter yang hanya mempertahankan ion dalam rentang kecil massa. Yang quadrupole kedua adalah ruang tabrakan, mana ion terisolasi terfragmentasi dan

dipindahkan ke quadrupole ketiga. Yang quadrupole ketiga filter hasil fragmentasi sehingga mereka dapat dipindai sebagai spektrum produk. Ini quadrupole triple disebut sebagai tandem-in instrumen-ruang, karena setiap langkah dalam proses memerlukan komponen instrumen unik (6). Sementara memberikan informasi konfirmasi yang sangat baik, pengaturan triple-quadrupole memiliki presisi miskin karena susut jaringan transmisi (7). Teknik kedua melibatkan penggunaan suatu perangkap ion, di mana semua MS / MS langkah dilakukan. Makalah ini menjelaskan teknik ini. Alat perangkap ion disebut sebagai tandem-in instrumen-waktu, karena wilayah ion yang sama digunakan untuk semua / MS proses MS (8). Dalam operasi khas perangkap ion, ion diadakan dan selektif keluar dari perangkap dengan penerapan frekuensi radio (rf) tegangan ke elektroda cincin dan tegangan tetap-frekuensi untuk akhir tutup elektroda. Dengan instruksi yang tepat, perangkap dapat diprogram untuk mengeluarkan ion yang tidak diinginkan, mempertahankan hanya mereka dari berbagai sempit massa (9-11). Untuk menghasilkan produk ion, ion terisolasi (orang tua atau prekursor ion) yang diselenggarakan di trap terfragmentasi. fragmentasi ion Prekursor dapat dilakukan 2 cara. Dengan eksitasi nonresonant, tegangan rendah frekuensi tambahan diterapkan untuk topi akhir perangkap, mengakibatkan perubahan seketika dalam energi potensial. Energi ini diubah menjadi energi getaran, yang berkontribusi disosiasi ion diadakan di bidang perangkap. Dengan eksitasi resonan, tegangan tinggi frekuensi rf tambahan diterapkan pada perangkap topi akhir. Jika frekuensi dari tegangan yang diterapkan cocok dengan frekuensi osilasi ion terperangkap, energi kinetik ion meningkat. Peningkatan dalam hasil energi dalam tumbukan-disosiasi diinduksi (CID) dan pembentukan produk-ion. Karena eksitasi resonansi selektif menambah energi untuk ion massa tertentu / rasio biaya, energi untuk fragmentasi dapat ditambahkan pada ion prekursor dengan menambah waktu eksitasi tanpa mendepak ion. Dengan cara ini, senyawa yang membutuhkan banyak obligasi untuk dilanggar untuk menghasilkan fragmentasi dapat dianalisa. Dengan kedua metode pembentukan produk ion, perangkap ion harus diberitahu bagaimana dan kapan untuk menerapkan fungsi. Analit Masing-masing harus memiliki daftar sendiri parameter yang akan menciptakan spektrum produk yang diinginkan. Parameter-parameter yang dimasukkan oleh pengguna dan disimpan sebagai instruksi yang menggunakan komputer untuk mengontrol perangkap ion. File-file ini dikenal sebagai file metode ion-persiapan (IPM). GC / MS / MS efektif dalam mengidentifikasi pestisida dalam matriks pertanian di bagian-permilyar level (12). Varian's Saturn 2000 tandem spektrometer massa telah terbukti menjadi

sensitif sebagai detektor selektif untuk pestisida yang paling, dan tidak terbatas untuk mendeteksi senyawa dengan heteroatom seperti klor atau fosfor. Ia juga menawarkan konfirmasi tanpa reinjection dan kurang peka dari detektor selektif untuk mencampuri coextractives karena ion induk terisolasi sebelum tahap kedua MS / MS.

METODE Aparat (a) Blender.-1 liter gelas (bukti ledakan, Waring, New Hartford, CT). (b) Cair concentrator.-Turbovap 6 cell evaporator (Zymark, Hopkinton, MA) dengan lulus 200 tabung mL. (c) Centrifuge.-200 kapasitas botol mL. (d) GC / MS / MS system.-Saturn 2000 (Varian, Walnut Creek, CA). Reagen (a) Solvents.-Analytical grade etanol, asetonitril, toluena, aseton, dan metanol (JT Baker, Phillipsburg, NJ). (b) Water.-dideionisasi. (c) Na2SO4.-Anhidrat, 10-60 mesh (Fisher, Fairlawn, NJ). (d) ACS NaCl. Bersertifikat (Fisher). (e) Solid-tahap ekstraksi (SPE) tubes.-ENVI-carb (Supelco, Bellefonte, PA), 5 g-6 mL; SAX dan PSA, 3 mL dan 500 mg; 75 mL Obligasi Elut tabung reservoir (Varian, Harbor City, CA).

Ekstraksi Campurkan 50 g sampel cincang (atau susu) dengan 100 mL etanol asetonitril-(95 + 5, yang baru saja dibuat) dalam blender liter 1. Blend selama 5 menit. Tambahkan 15 g NaCl dan blender selama 5 menit. Hapus 40 ml ca (ca susu 70mLfor) transfer layerand atas organik ke botol sentrifus 200 mL. Tambahkan Na2SO4 15 g dan kocok dengan baik. Centrifuge pada kecepatan tinggi selama 5 menit. Kuantitatif mentransfer 30 mL (50 mL susu) ke tabung Zymark 200 konsentrator mL dan berkonsentrasi untuk ca 5 mL pada 35EC bawah nitrogen. Tempat ca 2 Na2SO4 cm dalam tabung SPE ENVI-carb dan cuci dengan 5 toluena mL. Cuci 1500 mg SAX SPE tabung dan 1500 mg PSA SPE tabung dengan 5 toluena mL. Hubungkan dari atas ke bawah

reservoir 75 mL dan ENVI-carb, SAX, dan tabung PSA dan prewet dengan 5 ml asetonitriltoluena (3 + 1, dibuat pada hari penggunaan). Transfer terkonsentrasi sampel reservoir, dan dengan N2, push sampel tabung ENVI-carb. Mengelusi dengan empat 10 mL volume 3:1 (v / v) asetonitril-toluen dan mengumpulkan dalam tabung Zymark 200 konsentrator mL. Konsentrasi eluen untuk <1 mL. Tambahkan ca 10 mL aseton dan berkonsentrasi untuk 2 mL. Untuk analisis karbamat melalui LC, menghapus 1 mL sampel akhir dan berkonsentrasi untuk <0,1 mL. Tambahkan ca metanol 5 ml dan berkonsentrasi untuk 1 mL.

Faktor Konsentrasi adalah sebesar 7,5 g / mL (50 g sampel '30 ml/100 mL volume 2mLfinal) untuk buah-buahan dan sayuran dan 12,5 g / mL susu (50 g sampel' 50 ml/100 ml 2ml volume akhir). Instrumen Kondisi (a) GC / MS / MS system.-Trap suhu, 200EC, suhu manifold, 35EC; 1079 port injeksi suhuprogrammable: suhu awal, 53EC, waktu awal, 0,30 menit, tingkat, 300EC/min, suhu akhir, 250EC; Kolom tekanan, 10 psi; split lubang katup: kondisi awal, terbuka; ditutup pada 0,45 menit, terbuka pada 2,00 menit; rasio, 100% terbuka; 8200 autosampler: kali suntik, 0,1 menit; plug pelarut, 1,0 mL; injeksi tingkat, 0,5 mL / s, lebih rendah celah udara, ya; celah udara atas, ya, udara kering, tidak ada, kedalaman jarum, 90%, kecepatan pengambilan, 2.0 mL / s, volume sampel, 5 mL. (b) Gas suhu chromatograph.-awal, 55EC untuk 2,0 menit, meningkat menjadi 230EC di 10EC/min, tahan selama 10 menit, meningkat menjadi untuk 275EC di 20EC/min, dan tahan selama 19 menit. Hasil dan Diskusi Ekstraksi berdasarkan metode sebelumnya menggunakan tabung SPE berbasis karbon (ENVIcarb) untuk mempertahankan analit (13). Perubahan dilakukan untuk mendapatkan lebih terkonsentrasi akhir ekstrak. Hasilnya adalah faktor konsentrasi 7,5 mg / mL, yang memungkinkan batas deteksi yang sangat rendah. Selain itu, metode ini tidak memerlukan halogenasi pelarut. Untuk memaksimalkan sensitivitas, 5 mL disuntikkan dengan teknik besar volume khas. Sampel disuntikkan perlahan-lahan, tepat di bawah titik didih pelarut sampel (titik aseton's mendidih 56EC dan jadi sampel disuntikkan pada 53EC). Pada saat injeksi, split

ventilasi terbuka, dan gas pembawa (helium) diperbolehkan untuk menguapkan pelarut. Perpecahan vent kemudian ditutup, dan suhu port injeksi yang dibangkitkan cepat (300EC/min) untuk 250EC untuk memfokuskan analit pada kepala kolom (DB-XLB, 30 m, 0.25mmid, ketebalan 0,25 mmfilm; J & W Scientific, Folsom, CA). Karena 5 mL volume injeksi relatif besar, jumlah sampel matriks yang masuk kolom harus diminimalkan dengan penggunaan, misalnya, Carbofrit (Restek, Bellefonte, PA) injeksi masukkan port pengepakan. Kemasan Carbofrit adalah plug karbon berpori yang menyimpan coextractives yang seharusnya dapat disimpan dalam kolom, campur dengan kromatografi kolom dan mengurangi rentang kehidupan.

Untuk melakukan MS / MS, analit masing-masing harus memiliki PHT sendiri, yang melakukan fungsi ionisasi, isolasi, dan fragmentasi prekursor (12). Karena sebuah IPM dibangun dengan parameter yang spesifik untuk analit, masing-masing PHT harus dilaksanakan hanya selama elusi dari analit yang diinginkan. Oleh karena itu, setiap analit harus chromatographically dipisahkan untuk mempertahankan lebih mudah kebetulan puncak dan PHT terkait. Untuk memaksimalkan pemisahan pestisida, mereka diurutkan berdasarkan waktu retensi dan ditempatkan dalam 2 kelompok. Kelompok-kelompok yang terorganisir untuk meninggalkan setidaknya 0,1 menit antara maxima puncak. Dengan demikian, setiap PHT dilakukan selama elusi dari puncak masing-masing. Ketika pemisahan min 0,1 tidak mungkin, 2 IPMS dikombinasikan (14). Namun, tidak ada lebih dari 2 gelombang digabungkan, karena menggabungkan 3 atau lebih akan mengurangi sensitivitas untuk semua senyawa yang terlibat. Menggabungkan 2 IPMS menjadi salah satu alternatif melibatkan pemindaian dengan masing-masing 2 set parameter. Parameter ini bolak akan disimpan dan dijalankan sebagai satu file PHT. Ketika data akuisisi selesai, 2 kromatogram bisa dibangun dengan menghubungkan titik data yang sesuai dengan analit masing-masing. IPMS dibuat dengan terlebih dahulu menjalankan setiap pestisida secara penuh scan dan mengumpulkan data untuk sekitar 10 unit massa atom (Amu) di atas berat molekul. Selanjutnya, ion struktural yang signifikan dipilih sebagai orang tua atau ion prekursor. ion ini harus hadir massa tertinggi di kelimpahan yang baik. Parameter IPM sekarang dapat bervariasi untuk mendapatkan spektrum produk yang diinginkan. Idealnya spektrum akan berisi minimal 2 ion produk pada kelimpahan setidaknya 50% dari puncak dasar (12).

Dengan konvensional MS ekstrak relatif kotor, massa di bawah 100 Amu dihindari karena jumlah besar gangguan. matriks coextractives Banyak massa di bawah 100 Amu, dan mereka menyebabkan gangguan berat seperti yang fragmen analit tidak dapat dibedakan dari orangorang dari matriks. Pada MS / MS, massa hanya dalam spektrum produk yang dihasilkan dari fragmentasi ion prekursor. Akibatnya, ion massa bawah tidak terganggu dan lebih bermanfaat. Sebagai contoh, ketika sebuah PHT dibangun untuk asefat, ion dengan m / z 42 terbukti menjadi ion kuantifikasi karena tidak ada gangguan diamati bahkan pada massa rendah. Tercantum dalam Tabel 1 adalah parameter IPM untuk masing-masing pestisida.

Untuk mendapatkan hasil yang sensitif dan direproduksi, scan rate set ke minimal 1 scan / s dalam PHT masing-masing. Spectra ini kemudian dimasukkan ke dalam database, dan ion target dipilih sebagai ion kuantifikasi.

Sebuah standar dibuat untuk masing-masing 2 kelompok dan menjalankan secara penuh scan untuk memastikan bahwa jendela run time di mana fungsi IPMS sesuai dengan waktu retensi dari senyawa yang sesuai. Untuk mencegah perubahan dalam waktu retensi, kolom penjaga (sepotong tua kolom analitis cocok) diganti dengan yang baru dari panjang yang sama setiap waktu pekerjaan pemeliharaan dilakukan pada port injeksi.

Untuk sensitivitas maksimum, perangkap ion dioptimalkan untuk MS / MS. perangkap ini pertama disetel untuk full-scan kerja. Pengganda elektron kemudian meningkat 200, target diatur ke 10000, dan set emisi saat ini ke 80 mA (10). Setiap set standar dijalankan dengan metode akuisisi yang terkait dengan masing-masing kelompok injeksi. Untuk mencakup semua senyawa dalam metode, semua sampel yang disuntikkan dua kali: satu kali untuk setiap metode akuisisi. Kurva Kalibrasi kemudian dibuat untuk masing-masing senyawa, dan setiap sampel dijalankan, spektrum adalah query dengan database yang dibuat oleh standar. Deteksi pestisida dalam sampel yang nyata telah berhasil bahkan ketika pestisida hadir dalam berbagai konsentrasi. Spektrum pestisida ditemukan pada sampel sudah cukup stabil, terlepas dari konsentrasi, untuk perangkat lunak untuk mencocokkan dengan benar ke dalam database spektrum. pencocokan Hal ini dimungkinkan, karena hanya sebuah band sempit massa disimpan di perangkap dan populasi ion dalam perangkap masih rendah setiap saat selama MS / MS.

Populasi yang rendah ion dalam perangkap mengurangi interaksi ion-ion, dan beberapa perubahan dalam spektrum dengan variasi dalam konsentrasi yang diamati.

Beberapa kendala ada, Namun, dalam analisis rutin sejumlah besar sampel. Sensitivitas untuk asefat dan metamidofos, 2 pestisida populer, telah menjadi masalah. Ini sensitivitas miskin telah terlihat dengan spektrometer massa lainnya dan mungkin karena situs aktif di kolom kapiler, karena meningkatkan sensitivitas sebentar bila kolom berubah. Ini 2 pestisida baru-baru ini telah dieliminasi dari metode layar karena tanggapan yang tidak stabil. Phosmet dan-m azinphos juga telah diamati untuk tidak menanggapi secara linear atau konsisten dari injeksi untuk injeksi, dan tidak jelas mengapa.

Masalah lain adalah dengan kontaminasi laboratorium. Ketika sensitivitas sangat meningkat, karena dengan metode ini, kita secara rutin melihat beberapa senyawa seperti kosong ophenylphenol (OPP) dan difenilamin (DPA) dalam reagen ekstraksi dan matriks. OPP dan DPA diperkirakan mematuhi bagian logam blender, dan dapat dieliminasi sebagai pencemar dengan lebih baik mencuci. Namun, senyawa lain dapat disimpan pada permukaan lain, dan itu belum jelas apakah sisa-sisa ekstraksi bisa sepenuhnya dihilangkan.

Kendala ini membuat penentuan batas deteksi sulit. Namun, indikasi kepekaan dapat diperoleh dengan menganalisis sampel dengan spektrometer / MS MS serta dengan layar detektor rutin selektif. Tercantum dalam Tabel 2 adalah data untuk contoh nyata disaring oleh kedua MS / MS detektor dan selektif. AQ menunjukkan kuantisasi yang diperkirakan karena daerah puncak yang terpadu di bawah standar terendah. Beberapa senyawa terdeteksi lebih berhasil daripada yang lain oleh detektor selektif, seperti asefat, m-azinphos, metamidofos, dan phosmet. Banyak senyawa lain, bagaimanapun, adalah sebagai atau lebih mudah terdeteksi oleh instrumen / MS MS, dan beberapa analit mungkin memiliki batas deteksi jauh lebih rendah dengan MS / MS.

Piperonyl butoksida dalam (ubi jalar) 313 sampel terdeteksi oleh MS / MS tetapi tidak oleh deteksi massa-selektif (MSD). Piperonyl butoksida secara rutin terdeteksi oleh MSD bukan GC detektor lain karena tidak mengandung fosfor atau klorin. Gambar 1 menunjukkan kromatogram

dari butoksida piperonyl dalam sampel dengan semua ion produk utama sekarang dan bentuk puncak yang baik dari ion kuantisasi. Karena jumlah yang ditemukan jauh di bawah tingkat standar terendah, kami melaporkan jumlah seperti dibawah ini 1 ppb. Dalam sampel 731 (strawberry), malathion ditemukan oleh FPD dan MS / MS dalam jumlah yang sebanding quantitated: 0,018 dan 0,017 mg / g, masing-masing (Gambar 2). Kesimpulan Bahkan ketika jejak analisis dilakukan dan batas deteksi rendah dicapai dengan detektor GC tradisional, konfirmasi MS biasanya diperlukan. Batas kemampuan setiap laboratorium untuk mendeteksi senyawa pada tingkat jejak karena itu dibatasi oleh sensitivitas metode MS. SIM yang telah digunakan untuk batas deteksi yang lebih rendah. Namun, pengumpulan data pada beberapa ion tidak akan memberikan sebanyak mungkin informasi lengkap scan data dan tidak dapat dianggap sebagai konfirmasi sama. Ini MS / MS memungkinkan metode kuantisasi dan konfirmasi benar pada batas deteksi yang, dalam banyak kasus, sama dengan atau lebih rendah daripada detektor GC.