QUIMICA SANGUINEA

DETERMINACION DE GLUCOSA

TOMA Y MANEJO DE LAS MUESTRAS

Recogida: 8 Horas de ayuno al momento de la extraccin de sangre
Se reduce: Contaminacin bacteriana Gluclisis. tubos que contengan fluoruro de sodio. El suero o el plasma se debera separar de las clulas con la mayor brevedad posible Plasma: Utilizar heparina. Orina: se recomienda el uso de un conservante qumico tal como mertiolato (0,23 mmol/L) Almacenamiento: 4 horas a 30C en glucosa serica 24 horas a 4C largo plazo las muestras se deben colocaren envases sellados y congelarse a -10C.

FUNDAMENTO DE LA DETERMINACION:
Reacciones enzimticas calorimtricas - METODO DE HEXOQUINASA

- METODO DE PEROXIDASA
- 4 AMINO FENAZONA - FENOL

METODO DE HEXOQUINASA
PREPARACIN DEL REACTIVO Reconstituya el reactivo con el volumen de agua destilada o desionizada indicado en la etiqueta de la botella. ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DE EL REACTIVO: Antes del uso: Cuando se almacena a 2-8C, el reactivo es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial y de la caja del kit. Reactivo reconstituido: Cuando se almacena bien cerrado a 2-8C, el reactivo es estable durante al menos 30 das. Indicios del deterioro del reactivo: Turbidez; Absorbancia del reactivo >0,2 (340 nm, paso de luz de 1 cm); y/o Imposibilidad de obtener los valores de control dentro del intervalo asignado.

METODO DE HEXOQUINASA
En este procedimiento se utilizan filtrados libres de protenas preparados mediante la tcnica Somogyi utilizando precipitacin con ZnSO4 / BaSO4. Sin embargo, para uso de rutina en laboratorios el mtodo preferido es el suero o el plasma sin eliminacin de protenas COMPOSICIN DEL REACTIVO Ingredientes activos: Trietanolamina 20 mmol/L ATP 1,65 mmol/L NAD 1,06 mmol/L Hexoquinasa (levadura recombinante) >1500 U/L G-6-PDH (Leuconostoc recombinante) >1500 U/L pH 7,3 0,1 a 20C

Las series de reacciones implicadas en el sistema de ensayo son las siguientes:

Hexoquinasa 1. Glucosa + ATP > G-6-P + ADP

G-6-PDH
2. G-6-P + NAD+ > 6-PG + NADH + H+

*La cantidad de NADH formado es proporcional a la concentracin de glucosa en la muestra, y se puede medir mediante el aumento de la absorbancia a 340 nm.

ESPECTOMETRO
La cantidad de NADH formado es proporcional a la concentracin de glucosa en la muestra, y se puede medir mediante el aumento de la absorbancia a 340 nm.

PARMETROS DEL SISTEMA Temperatura 30/37C Longitud de onda primaria 340 nm (334 365nm) Longitud de onda secundaria 380 nm (380 410nm) Tipo de ensayo Punto final Direccin Incremento Muestra: Proporcin de reactivo 1:100 1:150 p.ej. Vol de muestra 3 L Vol de reactivo 300 L Tiempo de incubacin 180 segundos Lmites del blanco de reactivo Bajo 0,0 AU (340 nm, paso de luz de 1cm ) Alto 0,2 AU Linealidad Hasta 42 mmol/L (756 mg/dL) Sensibilidad 0,017A por mmol/L (340nm, paso de luz de 1cm) 0,001A por mg/dL

DETERMINACION DE GLUCOSA
CALCULOS:
Glucosa = Absorbancia de desconocido x Valor del calibrador Absorbancia del calibrador
Absorbancia = e . l. c

donde e es una constante, l es el camino ptico (1 cm generalmente), y c es la concentracin.

Graficando absorbancia vs concentracin SE obtiene la constante e. Luego, sabiendo dicha constante pods calcular cualquier concentracin incgnita midiendo su absorbancia con la frmula : Abs = e.l.c

CETERMINACION DE GLUCOSA
Ejemplo: Absorbancia del calibrador = 0,23 Absorbancia de desconocido = 0,10 Valor del calibrador = 13,1 mmol/L (236 mg/dL)

Glucosa = 0.10 x 13,1 = 5,7 mmol/L 0,23

Glucosa = 0.10 x 236 = 103 mg/dL 0,23 *Conversin por unidad: mmol/L X 18 0 mg/ dL

LIMITACIONES:
Hemoglobina: Evite el uso de muestras hemolizadas.

VALORES ESPERADOS:
Suero: 3.89-5,83 mmol/L (70-105 mg/dL) CRITERIO DE LA OMS:

Bilirrubina: No se observa interferencia debida a la bilirrubina hasta 340 mol/L (20 mg/dL).

DIABETES En ayuno

PLASMA VENOSO 7.8mmol/L(140mg dL)

CAPILAR 7.8 mmol/L (140 mg/ dL)

Lipemia: No se observa interferencia debida a la lipemia, medida como triglicridos, hasta 5,6 mmol/L (500 mg/dL).

2 hrs despus de la carga de la glucosa

11.1mmol/ L (200 mg/dL)

12.2mmol/L(200 mg/dL)

TG ALTERADA

PLASMA VENOSO

CAPILAR

EN AYUNO

7.8 mmol/L(140mg/dL)

7.8mmol/L(140mg/ dL)

2 HRS DESPUES DE LA CARGA DE GLUCOSA

7.8-11.1 mmol/L(140200mg/dL)

8.9-12.2mmol/L ( 140mg/dL) (160-220mg/dL)

MEDICAMENTOS QUE ALTERAN:

Acetazolamida (A)
cido aminisaliclico (A) cido nalidxico (falso A) cido nicotnico (A) Amitriptilina (A) Alopurinol (D) Ciproheptadina (D) Clorotiazida (A) Clorpromazina (A) Clorpropamida (falsa D) Clortalidona (A) Epinefrina (falso A)

Eritromicina (D) Fenitona (A) Furosemida (A) Interferon (falso A) Levodopa (falsa D) Metildopa (falso A) Paracetamol (falsa D) Tetraciclina (falsa D) Vit-C (falsa D)

Patologias relacionadas:
HIPERGLUCEMIAS
Diabetes mellitus Enfermedades renales Feocromocitoma Hipertiroidismo Glucagonoma Pancreatitis aguda Sindrome de Cushing Tumores de pancreas

HIPOGLUCEMIA:
Dietas excesivas Enfermedades hepaticas Enfermedad de Addison Exceso de insulina en diabeticos Hipotiroidismo Insulinoma 9

Otras situaciones (estrs, sueros, embarazo, medicamentos)

UREA
2.5-6.4 mmol/L 15-38mg/dL

Constituyente nitrogenado no proteico

Se sintetiza en el hgado

Producto nitrogenado del desecho de protenas

Indicaciones
Cuando se sospecha de IR
Refleja la capacidad del rion para excretar desechos metabolicos

Niveles altos de urea

15-38mg/dL 2.5-6.4mmol/L
ABSORCION PROTEICA: CAMBIOS EN LA DIETA

CATABOLISMO DE PROTEINAS:
QUEMADURAS

FUNCION RENAL: DIABETES HIPERTENSION

Valores disminuidos
Hemodilucin

Insuficiencia Heptica

Escaso significado clnico

FUNDAMENTO DEL METODO

Los calculos se basan en el descubrimiento de Tiffany y col:
Ureasa
Urea + H2O > 2NH3 + CO2

GLDH
NH3 + -KG + NADH > L-Glutamato +NAD

* En presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) y de dinucletido de nicotinamida adenina (NADH), el amoniaco se combina con -cetoglutarato (-KG) para producir L-glutamato. La reaccion se sigue midiendo a la disminucion de la absoorbancia 340 nm de NAD

COMPOSICIN DEL REACTIVO Ingredientes activos Concentracin -cetoglutarato 5,2 mmol/L NADH > 0,14 mmol/L Ureasa (Jack Bean) > 5600 U/L GLDH (Microorganismo) > 400 U/L Tampn Tris 70 mmol/L Tambin contiene estabilizantes y cargas no reactivos.

UREA
CALCULOS:
Urea = Absor/min de desconocido x valor del calibrador Absor/min de calibrador Ejemplo: Absorbancia del calibrador = 0,06 Abs/min Absorbancia de desconocido = 0,12 Abs/min Valor del calibrador = 14,3 mmol/L de urea; Urea = 0.12 x 14,3 = 28,6 mmol/L 0.06 Urea = 0.12 x 40 = 80 mg/dL 0.06

UREA
LIMITACIONES:
Hemoglobina: hasta 1000 mg/dL.
Bilirrubina no conjugada: hasta 1000 mol/L (60 mg/dL). Bilirrubina conjugada: 1000 mol/L (60 mg/dL). Lipemia: triglicridos, hasta 22,6 mmol/L (2000 mg/dL). cido ascrbico: No se observa interferencia debida a la hemoglobina hasta 20mg/dL (1,14 mmol/L)

CREATININA

CREATININA
ES UN SUBPRODUCTO DE DESCOMPOSICION DEL COMPUESTO GENERADOR DE ENERGIA FOSFATO DE CREATINA PRINCIPAL FUNCION DE LA MASA MUSCULAR INDICACIONES: Evaluacin de la funcin renal (TFG)

Valores de referencia
En sangre: Hombres: 0.7-1.4 mg/dL Mujeres: 0.6 -1.2 mg/dL En orina de 24 hrs: 500-2000 mg/dia

CREATININA
HIPERCREATINEMIA: Glumorelonefritis Insuficiencia Renal Pielonefritis Deshidratacion Distrofia muscular

Metodologia;
Determinacin colorimtrica por mtodos enzimticos de la creatinina, Creatinina amidohidrolasa Creatinina + H2O > Creatina Creatina amidinohidrolasa Creatina + H2O > Sarcosina + Urea Sarcosina oxidasa Sarcosina + H2O + O2 > Glicina + HCHO + H2O2 Peroxidasa 2H2O2 + 4-aminoantipirina + TOPS* > Tinte de quinonimina + 4H2O *Da lugar a un aumento de la absorbancia a 550 nm (530-570 nm) que es directamente proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra.

CREATININA
LIMITACIONES: Hemoglobina: No hay interferencia hasta 1000 mg/dL. Bilirrubina libre: No hay interferencia hasta 60 mg/dL (1030 mol/L). Bilirrubina conjugada: No hay interferencia hasta 33 mg/dL (560 mol/L). Lipemia: No hay interferencia hasta 1490 mg/dL (17 mmol/L). cido ascrbico: No hay interferencia hasta 82 mg/dL (4,5 mmol/L) b-Hidroxibutirato: No hay interferencia hasta 126 mg/dL (10 mmol/L). Cefalotina: No hay interferencia hasta 100 mg/dL (2,4 mmol/L).. Cefotaxima: No hay interferencia hasta 100 mg/dL (2,0 mmol/L). Acetoacetato: No hay interferencia hasta 108 mg/dL (10 mmol/L). Prolina: No hay interferencia hasta por 70 mg/dL (5,9 mmol/L)

BIBLIOGRAFIA
Base de Datos del Medicamentos (BOT). Colegio Oficiales de Farmacuticos. Espaa. 2000.3 Diccionario de Especialidades Farmacuticas. Edicin 27, 1999. Colombia.4 Vademecum Internacional. Especialidades Farmacuticas y Biolgicas. Productos y Artculos de Parafarmacia. Mtodos de Diagnstico. Edicin 41, 2000. Espaa.5