TEMA 10: PRUEBAS DE LABORATORIO PARA EL ESTUDIO DEL LAS PROLIFERACIONES NEOPLSICAS DE LEUCOCITOS.

CARACTERISTICAS DE LAS LEUCEMIAS AGUDAS Proliferaciones neoplsicas de leucocitos: estas proliferaciones anormales suponen el desarrollo de tumores, los tumores a su vez, constituyen las enfermedades ms importantes de los leucocitos y se dividen segn las clulas que proliferan: Neoplasias linfocticas : en muchos casos estos tumores estn formados por clulas que parecen bloqueadas en determinados estadios de diferenciacin , simulando fases normales de la diferenciacin linfoctica, una caracterstica que sirve para diferenciarlos. Neoplasias mielocticas: derivadas de las clulas precursoras que normalmente originan los elementos formes de la sangre. Neoplasias histocticas: presentan lesiones proliferantes de histocitos.

PRUEBAS DE LABORATORIO PARA EL ESTUDIO DE ESTAS NEOPLASIAS Sensibilidad de tcnicas: A la hora de diagnosticar las leucemias se debe tener en cuenta la sensibilidad de las distintas tcnicas 1/100 celulas: examen patolgico/citogentica 1/1000 clulas: FACS 1/100000 clulas: PCR (ms sensible) PRUEBAS MORFOLGICAS El diagnstico de la enfermedad se establece a partir de muestras obtenidas de mdula sea, sangre perifrica y frotis de fragmentos tisulares afectados. -RECUENTO SANGUNEO COMPLETO: se analiza la Cantidad de eritrocitos, leucocitos y plaquetas Cantidad de Hb en los eritrocitos -FROTIS DE SANGRE PERIFRICA: podemos diferenciar los tipos de clulas presentes en la muestra de sangre porque con esta prueba podemos observar la morfologa -ASPIRACIN Y BIOPSIA DE LA MDULA SEA: extraccin de mdula sea, sangre y un trozo pequeo de hueso mediante una aguja hueca en el hueso de la cadera o el esternn y la muestra es analizada por un patlogo para ver si hay signos de cncer PRUEBAS CITOQUIMICAS Se basa en tcnicas de tincin El objetivo es estudiar la presencia de ciertos componentes qumicos en el interior de las clulas sanguneas hematopoyticas y de sangre perifrica. Todas tienen tres etapas: fijacin, incubacin y contraste. Mencionamos las ms usadas en la actualidad: -FOSFATASA ALCALINA GRANULOCITARIA: se usa sobretodo en el estudio de los sndromes mieloproliferativos y para corrovorar el diagnstico de l. mieloide crnica (valores muy bajos o nulos) -MIELOPEROXIDASA: sirve para diferenciar la l.mieloctica de la linfoctica aguda, es especfica de los elementos de la granulopoyesis (da positiva solo en la mieloctica) -NEGRO SUDN: detecta la actividad de la peroxidasa por tanto es equivalente a la anterior -ESTERASAS: son enzimas que al reaccionar con steres en presencia de una sal diazoica forman un colorante azoico -PAS (reaccin del ac. Peridico de Schiff): el ac.perydico (agente oxidante) libera grupos aldehidos que al combinarse con el reactivo de schiff se forma color rojo INMUNOFENOTIPO

Se hace mediante citometra de flujo o por inmunohistoqumica (la citometra es la de eleccin porque es ms rpida y de mayor resolucin) Sirve para: -distinguir leucemia mieloctica aguda con mnima diferenciacin de las linfocticas agudas. - diagnosticar las leucemias megacarioblsticas agudas -separar las leucemias agudas de precursores B de los T. Consiste en efectuar un anlisis de antgenos (de membrana, citoplasma y nucleares) que incluya CD3, CD 79, mieloperoxidasa y TdT. Los paneles deben contener reactivos que reconozcan antgenos asociados a la lnea B, a la lnea T, mieloide, eritroide, megacarioctica y marcadores no especficos.

TABLA 3. Inmunofenotipo de los pacientes con leucemia linfoide aguda comn Marcadores antignicos Linfoides B CD10 CD19 CD20 CD22 Linfoides T CD3 CD4 CD7 Mieloides CD13 CD33 CD14 Glicoforina A Otros Tdt HLA-DR 87 100 8 3 3 1 9,2 3,4 3,4 1,1 3 1 2 3,4 1,2 2,3 87 87 6 86 100 100 6,9 98,8 No. (n=87) %

CITOGENTICA Y ESTUDIOS GENOTIPICOS Son pruebas imprescindibles en el diagnstico de una leucemia aguda. Tcnicas ms importantes: el cariotipo convencional, la hibridacin genmica comparada y las tcnicas moleculares. En los casos de las leucemias agudas de precursores linfoides T y B adems del cariotipo convencional es necesario analizar el reordenamiento de algunos genes y efectuar un Southern blot del gen MLL. PCR (prueba de reaccin en cadena de la polimerasa de la transcriptasa inversa) Es una prueba de laboratorio por la que se estudian las clulas de una muestra de tejido mediante sustancias qumicas para detectar si hay ciertos cambios en la estructura o funcionamiento de los genes, se usa sobretodo para diagnosticar l.promieloctica aguda. CARACTERSTICAS DE LAS LEUCEMIAS AGUDAS Las leucemias son 1/3 de todos los cnceres infantiles (segn la edad habr ms tendencia a sufrir un tipo de leucemia) L.linfocticas agudas: 75%

L.mielocticas agudas: 20% L.crnicas: 5%

Las leucemias agudas humanas son proliferaciones tumorales que se originan en las celulas madre (puede afectar a cualquier clula madre: pluripotencial, linfoide, mieloide) Esto lleva a alteracin del proceso de hematopoyesis normal. El fenotipo tumoral observado en la leucemia aguda es consecuencia de las alteraciones de la fisiologa normal de las clulas. Los procesos crticos que se encuentran lesionados son: Autosuficiencia en las seales de crecimiento. Insensibilidad a los estmulos inhibitorios. Evasin de la apoptosis. Capacidad replicativa ilimitada. Angiogneis, Invasin de tejidos. Estas caractersticas las tienen todas las clulas tumorales (se deben a mutaciones) Cada uno de estos cambios fisiolgicos representa el fracaso de un mecanismo de defensa. Valores normales que sirven como referencia en el estudio de las patologas son los siguientes: LEUCOCITOS ( x 109/l) 7.5 (adulto) NEUTROFILOS LINFOCITOS EOSINFILOS BASOFILOS MONOCITOS Leucocitosis > 11 Leucopenia < 4 2-7.5 (40-75%) 1,5-4,0 (20-45%) 0,04-0,4 (1-6%) <0,04-0,4(< 1%) 0.2-1(2-10%) 9-18 (nios)

Caractersticas de las leucemias agudas: Puede haber leucocitosis o leucopenia Presencia de blastos y formas inmaduras, sobretodo en la mdula sea Suele haber anemia, neutropenia y trombocitopenia El 90% de los pacientes presentan anomalas cromosmicas Sin tratar es de curso rpido y mortal

PREGUNTAS TIPO TEST: 1) dentro de las pruebas citoqumicas no se incluye: (correcta d) a) mieloperoxidasa b) esterasas c) reaccin del cido peridico d) anlisis de antgenos de membrana e) fosfatasa alcalina granulocitaria 2) las leucemias agudas se caracterizan por: (correcta a) a) ser ms corriente en nios b) ser de curso rpido y mortal aunque se trate c) anemia, neutropenia y trombocitopenia siempre d) presencia de formas inmaduras sobre todo en sangre perifrica e) leucocitosis 3) la mieloperoxidasa diferencia: (correcta c)

a) b) c) d)

e)

L. mieloctica de histoctica siendo negativo para mieloctica. L. mieloctica de linfoctica siendo positiva para linfoctica L. mieloctica de linfoctica siendo positiva para la mieloctica L. mielocitica de histoctica siendo positiva para mieloctica L. histoctica de linfoctica siendo positiva para la histoctica