RESPONSIVITAS DAN KAPASITAS EMBRIOGENESIS MIKROSPORA

BEBERAPA GENOTIPE CABAI (Capsicum spp.)PADA SISTEM KULTUR

SEBAR-MIKROSPORA

HAKIIM BASHAAR

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
 ABSTRAK
HAKIIM BASHAAR. Responsivitas dan Kapasitas Embriogenesis Mikrospora Beberapa
Genotipe Cabai (Capsicum spp.) pada Sistem Kultur Sebar-Mikrospora. Dibimbing oleh ENCE
DARMO JAYA SUPENA dan HADISUNARSO.
Cabai besar Tanjung-2 dan cabai keriting Big Chili dari Capsicum annuum, serta cabai
rawit tipe hijau Bara dan tipe putih Hot Chili dari C. frutescens diuji responsivitas dan kapasitas
embriogenesis mikrosporanya dengan prosedur kultur sebar-mikrospora untuk memproduksi
tanaman haploid ganda (HG) pada kondisi lokal di Bogor. Sebagai kontrol digunakan cabai besar
HG Galaxy. Ciri morfologi stadia populasi mikrospora uninukleat akhir yang dominan (> 50 %)
pada Galaxy adalah ketika panjang mahkotanya sama dengan atau sedikit lebih panjang dari
kelopaknya, dan ketika warna antera berwarna hijau dengan warna keunguan pada ujungnya.
Induksi androgenesis berhasil dilakukan terhadap kultivar yang dicobakan kecuali cabai rawit
Bara. Responsivitas terbaik diperlihatkan oleh cabai besar Tanjung-2 (58 %) yang tidak berbeda
nyata dengan HG Galaxy (53 %) dengan jumlah embrio lengkap masing-masing 2.2 dan 4.1
embrio per kuncup bunga. Secara umum responsivitas cabai besar lebih baik dibandingkan cabai
keriting, dan cabai keriting lebih baik dari cabai rawit.

ABSTRACT
HAKIIM BASHAAR. Responsifity and capacity of pepper (Capsicum spp.) microspore
embryogenesis in shed-microspore culture procedure. Under supervision of ENCE DARMO JAYA
SUPENA and HADISUNARSO.
Four cultivars of two species pepper (Capsicum spp.), that are : large hot pepper Tanjung-2
and curly pepper Big Chili belonging to C. annuum; green type of small pepper Bara and white
type of small pepper Hot Chili belonging to C. frutescens tested its responsifity and capacity with
the shed-microspore culture procedure to produce the double haploid (DH) at local condition in
Bogor. As control large hot pepper DH Galaxy was used. Morphological marker for the optimal
microspore stage of Galaxy is when the length of petals slightly longer than sepals, and there is an
appearance of purple color on the tips of anthers. Induction of androgenesis was occured in all
cultivars tested except Bara. The best responses were showed by Tanjung-2 (58 %) which is not
statistically different from Galaxy (53 %) with normal embrio yield 2.2 and 4.1 embryo per flower,
respectively. Generally, large hot pepper more responsive than curly pepper, and curly pepper
more responsive than small pepper.
RESPONSIVITAS DAN KAPASITAS EMBRIOGENESIS MIKROSPORA
BEBERAPA GENOTIPE CABAI (Capsicum spp.)PADA SISTEM KULTUR
SEBAR-MIKROSPORA

Skripsi
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Biologi

HAKIIM BASHAAR

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
Judul : Responsivitas dan Kapasitas Embriogenesis Mikrospora Beberapa
Genotipe Cabai (Capsicum spp.) pada Sistem Kultur Sebar-Mikrospora
Nama : Hakiim Bashaar
NIM : G 34102071

Menyetujui,

Pembimbing I Pembimbing II

Dr. Ir. Ence Darmo Jaya Supena, MSi. Ir. Hadisunarso

NIP 131851278 NIP 130779512

Mengetahui,
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Institut Pertanian Bogor

Dr.Drh. Hasim, DEA

NIP 131578806

Tanggal Ujian: Tanggal lulus :

 PRAKATA
Segala puji dan syukur penulis ucapkan ke-Hadirat Allah SWT atas rahmat dan hidayah-
Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Shalawat dan salam kepada suri tauladan terbaik
Nabi Muhammad SAW dan semoga terlimpahkan pula kepada keluarga dan para sahabatnya serta
orang-orang yang mengikuti jejak mereka sampai hari kemudian.
Meski luas lahan tanaman cabai di Indonesia relatif stabil, yaitu lebih dari 150.000 hektar
per tahun, produktivitasnya berfluktuasi. Ini menunjukkan ada persoalan dalam budidaya cabai.
Skripsi ini berjudul “Responsivitas dan Kapasitas Embriogenesis Mikrospora Beberapa Genotipe
Cabai (Capsicum spp.) pada Sistem Kultur Sebar-Mikrospora”, dan merupakan sebuah pendekatan
teknologi dalam usaha meningkatkan produktivitas dan kualitas tanaman cabai Indonesia yang
berbasis pada pengembangan kultivar lokal.
Penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :
1. Keluarga tercinta, Mamah, Papah, adik-adikku: Febrie Subhan, Okke Maulana, dan Ahmad
Fathan Mubina. Serta tante Ela dan paman Eka atas segala doa, semangat dan kasih sayang
yang membuat penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.
2. Dr. Ir. Ence Darmo Jaya Supena, MSi. atas segala bimbingan dan fasilitas yang diberikan
untuk menunjang penelitian penulis sampai terselesaikanya skripsi ini.
3. Ir. Hadisunarso atas bimbingan dan arahan yang diberikan kepada penulis saat penelitian
sampai selesai.
4. ... ............. selaku dosen penguji atas masukan untuk perbaikan karya ilmiah ini.
5. Staf dan rekan-rekan penelitian di PPSHB : Pak Adi, Pak Mulya, Mbak Pepy, Pak Muzuni,
mas firda, mas yasir, mbeh relfi, mbak budi, popy, ammay, ussy, jaya dan masih banyak yang
lain tidak penulis sebutkan tanpa mengurangi rasa hormat. Senang bisa mengenal kalian dan
menjalani masa-masa penelitian yang tidak terlupakan bersama
6. Teman-teman seperjuangan di “kota hujan”: Tedi, zaki, yudi, bekti, yandi, hasyim, putra,
selamet, ode, rozi, gani, rahmadi atas kebersamaan dan pengalaman yang menyenangkan
selama ini, semoga kita bisa sukses bersama di masa-masa yang akan datang.
7. Semua pihak yang telah membantu hingga selesainya studi penulis di “kampus rakyat” ini
Semoga karya ilmiah bermanfaat.

Bogor, Desember 2007

Hakiim Bashaar
 RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 29 Nopember 1983 merupakan anak pertama dari
empat bersaudara, dari pasangan Endang Suardi dan Sri Sukmawati.
Tahun 1996 penulis lulus dari SD Negeri Pisangan II Ciputat. Tahun 1999 penulis lulus dari
SLTP Negeri I Ciputat. Tahun 2002 penulis lulus dari SMU Widuri Jakarta Selatan dan pada tahun
yang sama penulis diterima di Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Institut Pertanian Bogor melalui jalur SPMB.
Saat mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten praktikum mata kuliah Genetika Dasar
untuk program sarjana selama tiga semester pada tahun ajaran 2005-2007, dan juga untuk program
pascasarjana mahasiswa Biologi BUD selama dua semester pada tahun ajaran 2006/2007. Penulis
juga menjadi ketua Bidang Kewirausahaan dari Himpunan Mahasiswa Biologi (HIMABIO) pada
tahun ajaran 2004/2005.
 DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR TABEL............................................................................................................................viii
DAFTAR LAMPIRAN...................................................................................................................viii
PENDAHULUAN..............................................................................................................................1
BAHAN DAN METODE...................................................................................................................1
Bahan Tanaman dan Sumber Antera ...................................................................1
Pengamatan Morfologi Kuncup Bunga dan Antera Serta Perkembangan
Mikrospora...........................................................................................................1
Kultur Sebar-Mikrospora Antera..........................................................................1
Perkecambahan dan Pertumbuhan Tanaman........................................................2
HASIL................................................................................................................................................2
Hubungan Morfologi Kuncup Bunga dan Antera dengan Stadia Mikrospora
pada HG Galaxy...................................................................................................2
Embriogenesis Mikrospora..................................................................................2
Hubungan Morfologi Kuncup Bunga dan Antera dengan Stadia Mikrospora
pada Bara dan Hot Chili.......................................................................................3
PEMBAHASAN.................................................................................................................................5
SIMPULAN........................................................................................................................................6
DAFTAR PUSTAKA.........................................................................................................................6
LAMPIRAN.......................................................................................................................................8
 DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1 Tahapan perkembangan mikrospora pada beberapa fase perkembangan kuncup bunga
tanaman cabai besar HG Galaxy .......................................................................................................3
Tabel 2 Penampilan beberapa genotipe cabai (Capsicum spp.) untuk vitalitas, responsivitas dan
kapasitas embriogenesis mikrosporanya............................................................................................4

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1 Morfologi antera di dalam kultur: a. antera pada Bara, b. antera pada Hot Chili dan c.
antera pada HG Galaxy. Bar: 2 mm....................................................................................................8
Lampiran 2 Tahapan perkembangan mikrospora pada beberapa stadia perkembangan kuncup
bunga beberapa genotipe tanaman cabai (Capsicum spp.) ................................................................8
Lampiran 3 Morfologi bunga pada beberapa kelompokan perkembangan. a: : cabai rawit ”Hot
Chili”. b: cabai besar ”Tanjung-2”. c: cabai keriting ”Big Chili”. Bar: a = 2 mm, b = 5 mm, c = 3
mm......................................................................................................................................................9
 1

menjadi embrio, dan setelah dikecambahkan

PENDAHULUAN dan dipindahtanamkan akan menjadi tanaman
utuh. Prosedur KSM ini sangat potensial
Cabai merupakan tanaman sayuran
digunakan sebagai langkah awal untuk
terpenting di Indonesia baik dinilai dari luas
mengembangkan cabai varietas hibrida
areal pertanaman maupun nilai ekonominya.
berbasis kultivar lokal yang ada di Indonesia
Pada tahun 2004, luas areal pertanaman cabai
maupun dicobakan pada spesies lain pada
mencapai 194.588 ha atau sekitar 19.9 % dari
genus Capsicum.
total luas areal tanaman sayuran (Deptan
Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari
2005). Produktivitas cabai pada tahun 2006
responsivitas dan kapasitas embriogenesis
sebesar 5.0 ton/ha (FAO 2007). Produktivitas
mikrospora beberapa genotipe cabai dari
ini ternyata masih lebih rendah bila
spesies Capsicum annuum L. maupun spesies
dibandingkan terhadap rata-rata produktivitas
Capsicum frutescens L. pada kondisi lokal di
negara di Asia seperti India (9.2 ton/ha),
Bogor dengan menerapkan prosedur KSM
Thailand (14 ton/ha), dan Cina (20.6 ton/ha).
yang dikembangkan Supena et al. (2006a)
Oleh karenanya diperlukan usaha untuk
meningkatkan produktivitas dan kualitas
tanaman cabai Indonesia, salah satunya adalah
dengan mengembangkan kultivar lokal yang BAHAN DAN METODE
sudah banyak dikenal dan dibudidayakan oleh Bahan Tanaman dan Sumber Antera
masyarakat. Genotipe cabai yang digunakan adalah:
Pengembangan kultivar lokal tanaman cabai besar Tanjung-2 dan cabai keriting Big
cabai melalui penelitian genetik dan Chili yang termasuk spesies C. annuum; cabai
pemuliaan memerlukan galur murni (GM) rawit tipe hijau Bara dan cabai rawit tipe putih
yang terjamin keseragaman genetiknya. Hot Chili yang termasuk spesies C. frutescens,
Pembentukan GM dapat dilakukan secara serta cabai besar HG Galaxy (Supena et al.
konvensional melalui proses penyerbukan 2006a) sebagai kontrol atau genotipe model.
sendiri terkendali, namun dibutuhkan waktu Pertanaman cabai dan pemeliharaannya di-
sedikitnya 5-7 generasi. Teknologi haploid, lakukan pada lahan terbuka.
yaitu regenerasi embrio dari gamet untuk
Pengamatan Morfologi Kuncup Bunga dan
menghasilkan tanaman haploid dan haploid
Antera Serta Perkembangan Mikrospora
ganda (HG) merupakan alternatif untuk
Pengamatan untuk menentukan tahapan
meningkatkan efisiensi dan efektivitas pem-
perkembangan mikrospora dilakukan pada
bentukan GM karena hanya membutuhkan 1-2
tanaman model Galaxy, yang selanjutnya
generasi (Ochoa-Alejo & Ramirez-Malagon
digunakan sebagai standar pada penelitian ini.
2001).
Bunga cabai dikelompokan menjadi enam
Penelitian untuk menghasilkan tanaman
tahap perkembangan berdasarkan morfologi
haploid dan HG pada cabai melalui kultur
kuncup bunga dan area warna ungu pada
antera pada media padat telah banyak
antera. Mikrospora diisolasi dari masing-
dilakukan, namun metode ini masih sangat
masing antera kelompok kuncup bunga untuk
bergantung pada genotipe, khususnya spesifik
selanjutnya DNA inti mikrospora diwarnai
untuk jenis paprika (Sibi et al. 1979; Dumas
dengan 4’,6-diamidino-2-phenylindol (DAPI).
de Vaulx et al. 1981; Gyulai et al. 2000).
Stadium perkembangan mikrospora diamati
Metode kultur antera pada media padat ini
dibawah mikroskop fluoresens Nikon Eclipse
dilaporkan tidak responsif pada kultivar cabai
E-600 dengan filter UV.
besar dan bahkan beberapa genotipe paprika
Konfirmasi tahapan perkembangan mikro-
(Qin & Rotino 1993, Ltifi & Wenzel 1994).
spora pada genotipe cabai lainnya dilakukan
Baru-baru ini Supena et al. (2006a)
setelah dari hasil akhir kultur diperoleh bahwa
berhasil mengembangkan prosedur untuk
respon untuk cabai rawit putih sangat rendah
memproduksi tanaman HG varietas lokal
dan bahkan tidak didapatkan pertumbuhan
cabai Indonesia dengan menggunakan metode
embrio pada cabai rawit tipe hijau.
kultur sebar-mikrospora (KSM). Prosedur ini
menggunakan antera yang dikulturkan pada Kultur Sebar-Mikrospora Antera
media dua lapis, yaitu media cair di atas Media. Media yang digunakan adalah
media padat. Selanjutnya dalam masa media dua lapis (Supena et al. 2006a), yaitu
inkubasi, antera akan membuka secara normal lapisan bawah berupa media padat yang
dan mikrosporanya tersebar ke media. mengandung komponen Nitsch (Nitsch &
Mikrospora ini kemudian akan berkembang Nitsch 1969) dan maltosa 20 g/l dengan

penambahan arang aktif 10 g/l, dan agar
gelrite 2 g/l. Sedangkan pada lapisan atas
berupa media cair dengan komponen sama
seperti pada media padat, kecuali tanpa arang
aktif dan agar. Untuk mengatasi kontaminasi
digunakan kombinasi antibiotik rifampisin (10
mg/l) dan timentin (400 mg/l).
Isolasi Antera. Kuncup bunga yang
digunakan sebagai sumber eksplan adalah
dengan antera yang mengandung lebih dari
50% mikrospora pada stadium uninukleat
akhir (Supena et al. 2006a). Karakterisasi
untuk stadia ini adalah adanya warna ungu
pada antera, yaitu pada kelompok
perkembangan ke-2 dan ke-3 (Gambar 1 pada
bagian hasil). Kuncup bunga diberi
praperlakuan suhu dingin berinterval 5-10 0C
selama satu hari yang diletakkan pada wadah
tertutup yang berisi kertas lembab. Proses
isolasi antera dilakukan pada kondisi steril di
dalam laminar. Kuncup bunga didesinfeksi
selama 1 menit dalam etanol 70%, kemudian
dibilas 2 kali dalam akuades steril. Desinfeksi
dilanjutkan dalam NaOCl 2% selama 15 menit
dengan penambahan Tween-20 0.05% (v/v),
kemudian dibilas 3 kali dalam akuades secara
bertahap selama 1 menit, 5 menit, dan terakhir
minimal 10 menit. Proses isolasi antera dari
kuncup bunga yang sudah disterilisasi
dilakukan dengan cara mengelupas kelopak
dan mahkota serta melepaskan filamennya.
Inkubasi dan Produksi Embrio. Hasil
isolasi antera dikulturkan dalam sistem media
dua lapis dan diinkubasi pada suhu dingin
berinterval 6-110 C selama seminggu pertama
kultur, selanjutnya dipindahkan pada suhu 25-
280 C dan selalu dalam kondisi gelap. Embrio
yang terbentuk dalam masa inkubasi dipanen
pada umur 7-8 minggu kultur untuk se-
lanjutnya dikecambahkan.
Perkecambahan dan Pertumbuhan
Tanaman
Embrio dikecambahkan dalam medium
yang mengandung elemen 1/2 MS, sukrosa 20
g/l dan 6-benzylaminopurin (BA) 0.1 µM,
dipadatkan dengan gelrite 2 g/l. Kultur
dilakukan pada botol kultur berdiameter 6 cm
dan diinkubasi pada suhu 25-280 C dengan
pencahayaan selama 16 jam. Setelah tiga
sampai empat minggu bibit yang telah
berdaun 4-5 buah dan memiliki perakaran
yang baik dipindahkan ke dalam botol
berdiameter 8 cm dan tinggi 11 cm dengan
media campuran tanah, kasting dan arang
sekam (1:1:1) setebal 4-5 cm yang
dilembabkan dengan air, kemudian botol di-
seal untuk menjaga kelembaban dan dibuka
2
secara bertahap. Tanaman pada stadium
berdaun 5-6 buah siap diaklimatisasikan dan
ditanam dalam pot di rumah kaca.
Pengamatan dan Analisis Data
Perkembangan kultur diamati setiap
minggu. Setelah kultur berumur 7-8 minggu,
embrio yang terbentuk diamati dan dihitung.
Embrio dikelompokkan ke dalam dua kate-
gori, yaitu embrio lengkap dan embrio tidak
lengkap. Embrio lengkap merupakan embrio
yang berkembang baik, memiliki radikula,
hipokotil, kotiledon, epikotil dan plumula
yang akan berkembang menjadi tanaman yang
tumbuh normal. Sedangkan embrio tidak
lengkap adalah embrio yang tidak mempunyai
kotiledon.
Data hasil pengamatan dianalisis meng-
gunakan metode analisis sidik ragam dan uji
beda nyata terkecil (BNT) dengan program
komputer SPSS 14.0.
HASIL
Hubungan Morfologi Kuncup Bunga dan
Antera dengan Stadia Mikrospora pada
HG Galaxy
Hubungan perkembangan stadia mikro-
spora dengan ciri morfologi kuncup bunga
dan warna antera pada tanaman model haploid
ganda Galaxy disajikan pada Gambar 1 dan
Tabel 1. Stadia uninukleat akhir telah didapati
pada kelompok perkembangan ke-1 (48.5 %),
persentase ini semakin meningkat pada per-
kembangan ke-2 (60.1 %) dan ke-3 (66.7 %),
dan kemudian menurun pada perkembangan
ke-4 (42.8 %). Stadia uninukleat akhir tidak
didapati lagi pada perkembangan ke-5 dan ke-
6 karena pada kelompok ini mikrospora telah
menjadi polen dan mikrospora tidak berinti.
Embriogenesis Mikrospora
Embriogenesis mikrospora melalui me-
tode KSM berhasil dilakukan pada tanaman
cabai kontrol serta tiga dari empat genotipe
tanaman cabai yang dicobakan dalam pe-
nelitian ini. Analisis statistik terhadap data
kultur memperlihatkan bahwa terdapat penga-
ruh genotipe terhadap respon embriogenesis
dan vitalitas kultur. Respon embriogenesis
terbesar dimiliki Tanjung-2 sebesar 58 %
yang tidak berbeda nyata dengan Galaxy (53
%) dan Big Chili (44 %), sedangkan respon
terkecil pada Hot Chili sebesar 19 % serta
Bara yang tidak respon sama sekali (0 %)
(Tabel 2).
Dalam hal vitalitas kultur (ketahanan
terhadap kontaminasi) kontrol lebih tahan
dibandingkan ke empat genotipe lainnya,
 3

dimana 60 % dari jumlah petri yang dikultur-

kan terbebas dari kontaminasi, sebaliknya
nilai vitalitas kultur terendah dimiliki oleh
Big Chili (26 %) dan Bara (24 %) (Tabel 2).
 3

Tabel 1 Tahapan perkembangan mikrospora pada beberapa fase perkembangan kuncup bunga
tanaman cabai besar HG Galaxy
Fase Warna ungu pada antera Persentase tahapan perkembangan mikrospora
perkembangan dari beberapa
kuncup bunga perkembangan kuncup EU MU LU EB MB G+V TI
bunga
1 Belum ada 6.0 45.5 48.5 0 0 0 0
Hanya tipis pada bagian
2 14.2 25.7 60.1 0 0 0 0
ujung
3 Sekitar ¼ panjang antera 0 33.3 66.7 0 0 0 0
Seluruh antera berwarna
4 0 0 42.8 28.6 28.6 0 0
ungu
Warna ungu memucat pada
5 kuncup dengan mahkota 0 0 0 0 0 68.0 32.0
yang akan mekar
Warna ungu memucat pada
6 0 0 0 0 0 35.0 65.0
kuncup yang baru mekar
Keterangan : EU: uninukleat awal, MU: uninukleat pertengahan, LU: uninukleat akhir, EB:
binukleat awal, MB: binukleat pertengahan, G+V: polen dengan inti generatif dan vegetatif, TI:
Tidak berinti (mikrospora mati)

1 2 3 4 5 6
Gambar 1 Morfologi bunga cabai HG Galaxy pada beberapa kelompok perkembangan. Bar: 5 mm

Jumlah embrio per petri responsif yang dihasilkan terbesar pada Galaxy yaitu 7.1 embrio dan yang
terkecil pada Hot Chili hanya 1.3 embrio (Tabel 2). Hasil ini mengambarkan bahwa genotipe
berpengaruh juga terhadap kemampuan produksi embrio. Dalam hal kualitas embrio yang
dihasilkan, yang diperlihatkan melalui persentase embrio lengkap (Gambar 2a-c), ternyata kultivar
Tanjung-2 (64.4 %) tidak kalah dibanding Galaxy (57.5 %). Tanaman hasil metode KSM juga
berhasil didapatkan pada cabai kultivar Tanjung-2 (Gambar 2e). Hasil pengamatan jumlah
kloroplas dalam sel penjaga daun didapatkan rata-rata jumlah kloroplas sebesar 10.2.

Hubungan Morfologi Kuncup Bunga dan Antera dengan Stadia Mikrospora pada Bara dan
Hot Chili
Rendahnya respon embriogenesis pada Hot Chili serta tidak terjadi respon pada Bara
menimbulkan dugaan bahwa stadia mikrospora yang digunakan tidak tepat, disebabkan penciri
yang berasal dari HG Galaxy kemungkinan berbeda untuk kedua tipe cabai ini. Namun,
et
berdasarkan hasil konfirmasi diketahui bahwa

e
ek
a et b el
et
e

e
cl d e
 4

Tabel 2 Penampilan beberapa genotipe cabai (Capsicum spp.) untuk vitalitas, responsivitas dan
kapasitas embriogenesis mikrosporanya
Keterangan: 1= dari jumlah petri awal, 2 = dari jumlah petri tidak kontaminasi. Angka yang diikuti
huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5

Gambar 2 Embriogenesis mikrospora beberapa genotipe cabai (Capsicum spp.) dalam metode
KSM dan tanaman yang dihasilkan : a. embrio pada Galaxy; b. embrio dan kecambah
pada Tanjung-2; c. embrio pada Big Chili; d. embrio pada Hot Chili; e. tanaman berasal
dari hasil KSM cabai varitas Tanjung-2. Karakter-karakter embrio: el (embrio
lengkap); et (embrio tidak lengkap); ek (embrio yang telah berkecambah) Bar: a-d = 3
mm, e = 4 cm

Rata- Rata-rata
Jumlah Kultur terjadi
Kultur tidak rata embrio embrio
total respon
Genotipe kontaminasi 1 embrio lengkap lengkap
kultur embriogenesis 2
(%) per per (%)
(petri) (%)
kuncup kuncup
Galaxy 103 60 a 53 a 7.1 4.1 57.5
Tanjung-2 94 48 ab 58 ab 3.5 2.2 64.4
Big Chili 68 26 b 44 ab 1.9 0.6 33.3
Hot Chili 66 24 b 19 bc 1.3 0.3 25.0
Bara 79 42 ab 0c 0 0 0

PEMBAHASAN
Salah satu faktor yang sangat
mempengaruhi keberhasilan induksi andro-
genesis melalui kultur antera ataupun isolasi
mikrospora adalah penggunaan stadia
perkembangan mikrospora yang tepat. Untuk
cabai, stadia kuncup bunga atau antera yang
tepat adalah yang mengandung lebih dari 50
% mikrosporanya berada pada tahap uni-
nukleat akhir (Supena et.al 2006a). Hasil
pengamatan pada HG Galaxy, ciri morfologi
untuk stadia populasi mikrospora tersebut
adalah ketika panjang mahkotanya sama
dengan atau sedikit lebih panjang dari
kelopaknya, dan ketika warna antera berwarna
hijau dengan terdapat warna keunguan pada
ujungnya. Hasil ini sesuai dengan yang
dilaporkan Supena et al. (2006a) dan bahkan
sepertinya berlaku umum untuk kultivar cabai
besar (Sibi et al. 1979, Andrezejewski & Mol
1985, Dolcet-Sanjuan et al. 1997, Tipirdamaz
& Ozkum Ciner 2001, Kim et al. 2004,
Supena et al. 2006a). Kedua penciri ini
digunakan juga untuk genotipe cabai lainnya
dalam penelitian ini, yaitu tipe cabai keriting
ataupun untuk spesies yang berbeda C.
frutescens.
Pengaruh genotipe terhadap induksi
androgenesis pada penelitian ini terlihat dari
variasi respon yang dihasilkan oleh masing-
masing genotipe. Secara umum terlihat bahwa
responsivitas dan kapasitas embriogenesis
mikrospora cabai besar lebih baik dibanding-
kan cabai keriting, dan cabai keriting lebih
keragaman mikroorganisme yang tinggi
(Supena et al. 2006b). Pada penelitian ini
kontaminasi sangat mempengaruhi kultur
dengan menyebabkan terkolonisasinya antera
maupun media oleh bakteri yang berakibat
terhadap terhambatnya bahkan terhentinya
pertumbuhan mikrospora dalam kultur, dan
diduga kontaminasi yang terjadi berhubungan
dengan kondisi pertumbuhan tanaman.
Penggunaan lahan terbuka sebagai tempat
tanam dan dugaan adanya bakteri endofitik
merupakan alasan mengapa masih terjadi
tingkat kontaminasi yang cukup tinggi dalam
penelitian ini. Bakteri endofitik merupakan
bakteri yang hidup di dalam jaringan tanaman
dan umumnya bakteri ini tidak segera
mengkontaminasi kultur pada periode-periode
awal tetapi baru mengkontaminasi pada
periode kultur yang telah lama (Leifert &
Cassells 2001). Pada Bara walaupun secara
morfologi tanaman terlihat memiliki per-
tumbuhan yang sehat dan tahan terhadap
penyakit keriting yang umumnya mudah
5
baik dari cabai rawit. Namun, masih
rendahnya responsivitas dan kapasitas embrio-
genesis mikrospora pada Hot Chili serta tidak
terjadi respon pada Bara dalam penelitian ini
tidak hanya disebabkan oleh pengaruh
genotipe, tetapi dipengaruhi juga oleh
beberapa faktor diantaranya adalah : 1. kurang
optimalnya suhu praperlakuan kuncup bunga
dan suhu perlakuan inkubasi kultur yang
digunakan; 2. kondisi pertumbuhan tanaman
sumber eksplan dan kontaminasi kultur oleh
patogen pada tanaman yang digunakan; 3.
penggunaan usia fisiologis tanaman yang
tidak pada fase-fase awal pembungaan; 4. ciri
morfologi bunga dan warna antera untuk
stadia mikrospora yang diinginkan tidak sama
untuk semua genotipe.
Suhu praperlakuan kuncup bunga (5-100
C) dan suhu perlakuan kultur (6-110 C)
berturut-turut mendekati suhu 40 C untuk
praperlakuan dan 90 C untuk perlakuan sesuai
yang dianjurkan Supena et al. (2006a), belum
mampu secara optimal menginduksi embrio-
genesis mikrospora. Hal ini disebabkan
lebarnya interval suhu tersebut terhadap
besaran suhu yang diinginkan, dimana
seharusnya pada besaran yang optimal suhu
tersebut berperan sebagai cekaman untuk
menghentikan perkembangan gametofitik dan
mengarahkan ke perkembangan sporofitik
untuk dapat menghasilkan embrio dari
mikrospora.
Kontaminasi merupakan masalah utama
pada pelaksanaan kultur di Indonesia yang
merupakan daerah tropis dengan tingkat
menjangkiti tanaman lainnya tetapi di dalam
kultur, Bara memiliki antera yang terlihat
tidak normal seperti pada tanaman lainnya
(Lampiran 1). Bara dan Hot Chili merupakan
tanaman menahun sehingga peluang adanya
bakteri endofitik yang secara langsung dan
tidak langsung mempengaruhi vitalitas yang
akhirnya mempengaruhi respon sangat besar.
Penggunaan kombinasi antibiotik Rifampisin
(10 mg/l) dan Timentin (400 mg/l) belum
sepenuhnya mampu mengatasi kontaminasi
kultur, dimana menurut laporan Supena et al.
(2006b) kombinasi antibiotik Rifampisin (10
mg/) dan Timentin (200 mg/l) sudah mampu
menekan kontaminasi hingga 82 % pada
kultur antera cabai yang ditumbuhkan di
rumah kaca.
Usia fisiologis yang paling baik untuk
kultur adalah pada usia tanaman muda atau
pada awal-awal pembungaan (Kristiansen &
Andersen 1993). Kultur yang dilakukan pada
penelitian ini umumnya menggunakan antera
yang berasal dari usia fisiologis yang telah

dewasa. Karenanya, sedikit banyak faktor ini
ikut mempengaruhi rendahnya respon pada
Hot Chili dan Bara.
Penciri morfologi bunga dan warna antera
untuk mencirikan stadia uninukleat akhir yang
dominan (> 50 %) pada Galaxy hanya bisa
digunakan pada cabai besar lainnya yaitu
Tanjung-2, dan tidak bisa digunakan pada
cabai keriting Big Chili serta pada cabai rawit
Bara dan Hot Chili. Hal ini diperlihatkan
melalui konfirmasi yang dilakukan (Lampiran
2 & 3) dimana stadia uninukleat akhir
dominan pada Tanjung-2 memiliki pola yang
sama pada HG Galaxy dan sekaligus
menjelaskan kemungkinan tingginya respon
pada Tanjung-2 disebabkan material awal
kultur telah tepat. Big Chili memiliki pola
yang berbeda dengan HG Galaxy, dimana
stadia uninukleat akhir dominan terdapat pada
kelompok perkembangan ke-4 dan ke-5.
Namun, kuncup bunga yang paling sesuai
pada kelompok ini berada pada perkembangan
ke-5 dimana terdapat stadia uninukleat
pertengahan yang lebih sedikit. Sehingga
stadia uninukleat akhir yang berada pada fase
ini berada pada kondisi akan membelah yang
merupakan stadia paling responsif terhadap
induksi androgenesis (Sibi et al. 1979 ). Pada
Hot Chili stadia uninukleat akhir dominan
terdapat mulai kelompok perkembangan ke-2
(71.4 %), meningkat hingga perkembangan
ke-4 (100 %). Demikian juga juga pada Bara
di-mana perkembangan ke-3 telah mengan-
SIMPULAN
Penciri morfologi untuk mendapatkan
populasi mikrospora yang mengandung lebih
dari 50 % nya berada pada tahap uninukleat
akhir pada tanaman Galaxy adalah dari antera
yang berwarna hijau dengan warna keunguan
pada ujungnya yang diperoleh dari kuncup
bunga dengan ciri panjang mahkotanya sama
dengan atau sedikit lebih panjang dari
kelopaknya. Penciri ini hanya cocok
digunakan pada kultivar cabai besar dan tidak
cocok untuk kultivar cabai keriting dan cabai
rawit, karena memiliki pola perkembangan
yang berbeda. Induksi androgenesis berhasil
dilakukan terhadap tiga kultivar anggota C.
annuum dan satu kultivar anggota C.
frutescens. Responsivitas terbaik diperlihatkan
oleh cabai besar Tanjung-2 dan Galaxy
(kontrol) masing-masing sebesar 58 % dan 53
%, dengan jumlah embrio lengkap masing-
masing 2.2 dan 4.1 embrio per kuncup bunga.
Secara umum responsivitas cabai besar lebih
6
dung stadia uninukleat akhir dominan (77.8
%) dan meningkat hingga perkembangan ke-4
(85.7 %). Karena keterbatasan ulangan
pengamatan yang dikhawatirkan akan
memperbesar peluang terjadinya kesalahan,
maka stadia yang digunakan yaitu stadia
dengan persentase terbesar, dimana untuk
kedua genotipe tersebut berada pada
perkembangan ke-4. Hasil ini memberikan
gambaran perbedaan pola pencirian stadia
mikrospora untuk ketiga tipe cabai. Pada cabai
besar, perkembangan ke-4 tidak lagi
mengandung stadia uninukleat akhir yang
dominan, sebaliknya pada cabai rawit
kelompok perkembangan ini memiliki per-
sentase stadia uninukleat akhir terbesar.
Demikian juga cabai keriting Big Chili yang
memiliki persentase terbesar juga berada pada
perkembangan ke-4 dan ke-5. Oleh karena itu,
dengan melihat hasil ini menjadi catatan
terhadap perlunya karakterisasi untuk
mendapatkan stadia yang dominan sebelum
melakukan kultur terutama pada cabai keriting
dan cabai rawit
Pada kultivar Tanjung-2, berhasil
didapatkan tanaman haploid dari perkem-
bangan embrio yang dihasilkan melalui
metode KSM, tanaman ini memiliki rata-rata
jumlah kloroplas sebesar 10.2, dimana jumlah
ini mendekati nilai yang diukur oleh Supena
et al. (2006b) yaitu sebesar 9.0 untuk tanaman
haploid dan 17.0 untuk tanaman haploid
ganda atau diploid cabai kultivar Galaxy.
baik dibandingkan cabai keriting, dan cabai
keriting lebih baik dari cabai rawit.
DAFTAR PUSTAKA
Dumas de Vaulx R, Chambonnet D, Pochard
E. 1981. Culture in vitro d’anthères du
piment (Capsicum annuum L.):
amélioration des taux d’obtention de
plantes chez différents génotypes par des
traitements à +35 0C. Agronomie 1: 859-
864. (Dalam bahasa Perancis dilengkapi
abstrak bahasa Inggris)
Dolcet-Sanjuan R, Claveria E, Huerta A.
1997. Androgenesis in Capsicum annuum
L.-Effects of carbohydrate and carbon
dioxide enrichment. J Amer Soc Hort Sci
122: 468-475.
[Deptan] Departemen Pertanian. 2005.
Statistik Pertanian 2005. Jakarta: Deptan.
Gyulai G, Gémesné JA, Sági ZS, Venezel G,
Pintér P, Kristóf Z, Törjék O, Heszkey I,
 7

Bottka S, Kriss J, Zatykó L. 2000.

Doubled haploid development and PCR-
anlaysis of F1 hybrid derived DH-R2
paprika (Capsicum annuum L.) lines.
Plant Physiol 156:168-174.
Kristiansen K, Andersen SB. 1993. Effect of
donor plant temperature, photoperiod, and
age on anther culture response of
Capsicum annuum L. Euphytica 67: 105-
109.

Ltifi A, Wenzel G. 1994. Anther culture of hot

and sweet pepper (Capsicum annuum L.):
Influence of genotype and plant growth
temperature. Capsicum and Eggplant
Nwsl 13: 74-77.
Leifert C, Cassells AC. 2001. Microbial
Hazards in Plant Tissue and Cell
Cultures. In Vitro Cell Dev Biol-Plant
37:133-138.
Nitsch JP, Nitsch C. 1969. Haploid plants
from pollen grains. Science 163: 85-87.
Ochoa-Alejo N, Ramirez-Malagon R. 2001.
In vitro chili pepper biotechnology. In
Vitro Cell Dev Biol-Plant 37:701-729.
Powell W. 1990. Environmental and Genetical
Aspects of Pollen Embryogenesis. Di
dalam : Bajaj YPS, editor. Biotechnology
in Agriculture and Forestry, Vol. 12
Haploids in Crop Improvement I. Berlin
Heidelberg: Springer-Verlag. hlm. 45-65.
Qin X, Rotino GL. 1993. Anther culture of
several sweet and hot pepper genotypes.
Capsicum and Eggplant Nwsl 12: 59-62.
Sibi M, Dumas de Vaulk R, Chambonnet D.
1979. Obtention de plantes haploïdes par
androgenèse in vitro chez le piment
(Capsicum annuum L.). Ann Amelior
Plantes 29:583-606. (Dalam bahasa
Perancis dilengkapi abstrak bahasa
Inggris)
Supena EDJ, Suharsono S, Jacobsen E,
Custers JBM. 2006a. Succesful
development of a shed-microspore culture
protocol for double haploid production in
Indonesian hot pepper (Capsicum
annuum L.). Plant Cells Rep 25:1-10.
Supena EDJ, Muswita W, Suharsono S,
Custers JBM. 2006b. Evaluation of
crucial factors for implementing shed-
microspore culture of Indonesian hot
pepper (Capsicum annuum L.) cultivars.
Scientia Horticulturae 107: 226-232.
 8

LAMPIRAN

a bb
Lampiran 1 Morfologi antera di dalam kultur: a. antera pada Bara, b. antera pada Hot Chili
dan c. antera pada HG Galaxy. Bar: 2 mm

Lampiran 2 Tahapan perkembangan mikrospora pada beberapa stadia perkembangan kuncup

bunga beberapa genotipe tanaman cabai (Capsicum spp.)
 9

Lampiran 3 Morfologi bunga pada beberapa kelompokan perkembangan. a: : cabai rawit

”Hot Chili”. b: cabai besar ”Tanjung-2”. c: cabai keriting ”Big Chili”. Bar: a = 2
mm, b = 5 mm, c = 3 mm.