RESPONSIVITAS DAN KAPASITAS EMBRIOGENESIS MIKROSPORA

BEBERAPA GENOTIPE CABAI (Capsicum spp.)PADA SISTEM KULTUR

SEBAR-MIKROSPORA

HAKIIM BASHAAR

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
 ABSTRAK
HAKIIM BASHAAR. Responsivitas dan Kapasitas Embriogenesis Mikrospora Beberapa
Genotipe Cabai (Capsicum spp.) pada Sistem Kultur Sebar-Mikrospora. Dibimbing oleh ENCE
DARMO JAYA SUPENA dan HADISUNARSO.
Cabai besar Tanjung-2 dan cabai keriting Big Chili dari Capsicum annuum, serta cabai
rawit tipe hijau Bara dan tipe putih Hot Chili dari C. frutescens diuji responsivitas dan kapasitas
embriogenesis mikrosporanya dengan prosedur kultur sebar-mikrospora untuk memproduksi
tanaman haploid ganda (HG) pada kondisi lokal di Bogor. Sebagai kontrol digunakan cabai besar
HG Galaxy. Ciri morfologi stadia populasi mikrospora uninukleat akhir yang dominan (> 50 %)
pada Galaxy adalah ketika panjang mahkotanya sama dengan atau sedikit lebih panjang dari
kelopaknya, dan ketika warna antera berwarna hijau dengan warna keunguan pada ujungnya.
Induksi androgenesis berhasil dilakukan terhadap kultivar yang dicobakan kecuali cabai rawit
Bara. Responsivitas terbaik diperlihatkan oleh cabai besar Tanjung-2 (58 %) yang tidak berbeda
nyata dengan HG Galaxy (53 %) dengan jumlah embrio lengkap masing-masing 2.2 dan 4.1
embrio per kuncup bunga. Secara umum responsivitas cabai besar lebih baik dibandingkan cabai
keriting, dan cabai keriting lebih baik dari cabai rawit.

ABSTRACT
HAKIIM BASHAAR. Responsifity and capacity of pepper (Capsicum spp.) microspore
embryogenesis in shed-microspore culture procedure. Under supervision of ENCE DARMO JAYA
SUPENA and HADISUNARSO.
Four cultivars of two species pepper (Capsicum spp.), that are : large hot pepper Tanjung-2
and curly pepper Big Chili belonging to C. annuum; green type of small pepper Bara and white
type of small pepper Hot Chili belonging to C. frutescens tested its responsifity and capacity with
the shed-microspore culture procedure to produce the double haploid (DH) at local condition in
Bogor. As control large hot pepper DH Galaxy was used. Morphological marker for the optimal
microspore stage of Galaxy is when the length of petals slightly longer than sepals, and there is an
appearance of purple color on the tips of anthers. Induction of androgenesis was occured in all
cultivars tested except Bara. The best responses were showed by Tanjung-2 (58 %) which is not
statistically different from Galaxy (53 %) with normal embrio yield 2.2 and 4.1 embryo per flower,
respectively. Generally, large hot pepper more responsive than curly pepper, and curly pepper
more responsive than small pepper.
RESPONSIVITAS DAN KAPASITAS EMBRIOGENESIS MIKROSPORA
BEBERAPA GENOTIPE CABAI (Capsicum spp.)PADA SISTEM KULTUR
SEBAR-MIKROSPORA

Skripsi
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains
pada Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Institut Pertanian Bogor

HAKIIM BASHAAR
G34102071

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
Judul : Responsivitas dan Kapasitas Embriogenesis Mikrospora Beberapa
Genotipe Cabai (Capsicum spp.) pada Sistem Kultur Sebar-Mikrospora
Nama : Hakiim Bashaar
NIM : G 34102071

Menyetujui,

Pembimbing I Pembimbing II

Dr. Ir. Ence Darmo Jaya Supena, MSi. Ir. Hadisunarso

NIP 131851278 NIP 130779512

Mengetahui,
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Institut Pertanian Bogor

Dr.Drh. Hasim, DEA

NIP 131578806

Tanggal Ujian: Tanggal lulus :

 PRAKATA
Segala puji dan syukur penulis ucapkan ke-Hadirat Allah SWT atas rahmat dan hidayah-
Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Shalawat dan salam kepada suri tauladan terbaik
Nabi Muhammad SAW dan semoga terlimpahkan pula kepada keluarga dan para sahabatnya serta
orang-orang yang mengikuti jejak mereka sampai hari kemudian.
Meski luas lahan tanaman cabai di Indonesia relatif stabil, yaitu lebih dari 150.000 hektar
per tahun, produktivitasnya berfluktuasi. Ini menunjukkan ada persoalan dalam budidaya cabai.
Skripsi ini berjudul “Responsivitas dan Kapasitas Embriogenesis Mikrospora Beberapa Genotipe
Cabai (Capsicum spp.) pada Sistem Kultur Sebar-Mikrospora”, dan merupakan sebuah pendekatan
teknologi dalam usaha meningkatkan produktivitas dan kualitas tanaman cabai Indonesia yang
berbasis pada pengembangan kultivar lokal.
Penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :
1. Keluarga tercinta, Mamah, Papah, adik-adikku: Febrie Subhan, Okke Maulana, dan Ahmad
Fathan Mubina. Serta tante Ela dan paman Eka atas segala doa, semangat dan kasih sayang
yang membuat penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.
2. Dr. Ir. Ence Darmo Jaya Supena, MSi. atas segala bimbingan dan fasilitas yang diberikan
untuk menunjang penelitian penulis sampai terselesaikanya skripsi ini.
3. Ir. Hadisunarso atas bimbingan dan arahan yang diberikan kepada penulis saat penelitian
sampai selesai.
4. ............... selaku dosen penguji atas masukan untuk perbaikan karya ilmiah ini.
5. Staf dan rekan-rekan penelitian di PPSHB : Pak Adi, Pak Mulya, Mbak Pepy, Pak Muzuni,
mas firda, mas yasir, mbeh relfi, mbak budi, popy, ammay, ussy, jaya dan masih banyak yang
lain tidak penulis sebutkan tanpa mengurangi rasa hormat. Senang bisa mengenal kalian dan
menjalani masa-masa penelitian yang tidak terlupakan bersama
6. Teman-teman seperjuangan di “kota hujan”: Tedi, zaki, yudi, bekti, yandi, hasyim, putra,
selamet, ode, rozi, gani, rahmadi atas kebersamaan dan pengalaman yang menyenangkan
selama ini, semoga kita bisa sukses bersama di masa-masa yang akan datang.
7. Semua pihak yang telah membantu hingga selesainya studi penulis di “kampus rakyat” ini
Semoga karya ilmiah bermanfaat.

Bogor, Desember 2007

Hakiim Bashaar
 RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 29 Nopember 1983 merupakan anak pertama dari
empat bersaudara, dari pasangan Endang Suardi dan Sri Sukmawati.
Tahun 1996 penulis lulus dari SD Negeri Pisangan II Ciputat. Tahun 1999 penulis lulus dari
SLTP Negeri I Ciputat. Tahun 2002 penulis lulus dari SMU Widuri Jakarta Selatan dan pada tahun
yang sama penulis diterima di Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Institut Pertanian Bogor melalui jalur SPMB.
Saat mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten praktikum mata kuliah Genetika Dasar
untuk program sarjana selama tiga semester pada tahun ajaran 2005-2007, dan juga untuk program
pascasarjana mahasiswa Biologi BUD selama dua semester pada tahun ajaran 2006/2007. Penulis
juga menjadi ketua Bidang Kewirausahaan dari Himpunan Mahasiswa Biologi (HIMABIO) pada
tahun ajaran 2004/2005.
 DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR TABEL.......................................................................................................vii
DAFTAR GAMBAR.................................................................................................viii
PENDAHULUAN........................................................................................................1
BAHAN DAN METODE.............................................................................................1
Bahan Tanaman dan Sumber Antera ...................................................................1
Pengamatan Morfologi Kuncup Bunga dan Antera Serta Perkembangan
Mikrospora...........................................................................................................1
Kultur Sebar-Mikrospora Antera..........................................................................1
Perkecambahan dan Pertumbuhan Tanaman........................................................2
HASIL..........................................................................................................................2
Hubungan Morfologi Kuncup Bunga dan Antera dengan Stadia Mikrospora
pada HG Galaxy...................................................................................................2
Embriogenesis Mikrospora..................................................................................2
Hubungan Morfologi Kuncup Bunga dan Antera dengan Stadia Mikrospora
pada Hot Chili dan Bara ......................................................................................4
PEMBAHASAN...........................................................................................................5
SIMPULAN..................................................................................................................6
DAFTAR PUSTAKA...................................................................................................6

DAFTAR TABEL
 Halaman

1
Tabel 1 Tahapan perkembangan mikrospora pada beberapa fase perkembangan
kuncup bunga tanaman cabai besar HG Galaxy ..........................................................3
Tabel 2 Penampilan beberapa genotipe cabai (Capsicum spp.) untuk vitalitas,
responsivitas dan kapasitas embriogenesis mikrosporanya..........................................3

DAFTAR GAMBAR

Halaman
1 ...............................................................................................................................viii
Gambar 1 Morfologi bunga cabai HG Galaxy pada beberapa kelompok
perkembangan. Bar: 5 mm............................................................................................3
Gambar 2 Embriogenesis mikrospora beberapa genotipe cabai (Capsicum spp.)
dalam metode KSM dan tanaman yang dihasilkan : a. embrio pada Galaxy; b. embrio
dan kecambah pada Tanjung-2; c. embrio pada Big Chili; d. embrio pada Hot Chili;
e. tanaman berasal dari hasil KSM cabai varitas Tanjung-2. Karakter-karakter
embrio: el (embrio lengkap); et (embrio tidak lengkap); ek (embrio yang telah
berkecambah) Bar: a-d = 3 mm, e = 4 cm....................................................................4
Tabel 3 Tahapan perkembangan mikrospora pada beberapa stadia perkembangan
kuncup bunga beberapa genotipe tanaman cabai (Capsicum spp.) .............................4
Gambar 3 Morfologi bunga cabai rawit Hot Chili pada beberapa kelompok
perkembangan. Bar: 2 mm............................................................................................5
Gambar 4 Morfologi antera pada kultur: a.Bara usia 7 minggu kultur, b. HG Galaxy
usia 4 minggu kultur Bar: 0.9 mm...............................................................................5

PENDAHULUAN
Cabai merupakan tanaman sayuran
terpenting di Indonesia baik dinilai dari luas
areal pertanaman maupun nilai ekonominya.
Pada tahun 2004, luas areal pertanaman cabai
mencapai 194.588 ha atau sekitar 19.9 % dari
total luas areal tanaman sayuran (Deptan
2005). Produktivitas cabai pada tahun 2006
sebesar 5.0 ton/ha (http://faostat.fao.org). Pro-
duktivitas ini ternyata masih lebih rendah bila
dibandingkan terhadap rata-rata produktivitas
negara di Asia seperti India (9.2 ton/ha),
Thailand (14 ton/ha), dan Cina (20.6 ton/ha).
Oleh karenanya diperlukan usaha untuk
meningkatkan produktivitas dan kualitas
tanaman cabai Indonesia, salah satunya adalah
dengan mengembangkan kultivar lokal yang
sudah banyak dikenal dan dibudidayakan oleh
masyarakat.
Pengembangan kultivar lokal tanaman
cabai melalui penelitian genetik dan
pemuliaan memerlukan galur murni (GM)
yang terjamin keseragaman genetiknya.
Pembentukan GM dapat dilakukan secara
konvensional melalui proses penyerbukan
sendiri terkendali, namun dibutuhkan waktu
sedikitnya 5-7 generasi. Teknologi haploid,
yaitu regenerasi embrio dari gamet untuk
menghasilkan tanaman haploid dan haploid
ganda (HG) merupakan alternatif untuk
meningkatkan efisiensi dan efektivitas pem-
bentukan GM karena hanya membutuhkan 1-2
generasi (Ochoa-Alejo & Ramirez-Malagon
2001).
Penelitian untuk menghasilkan tanaman
haploid dan HG pada cabai melalui kultur
antera pada media padat telah banyak
dilakukan, namun metode ini masih sangat
bergantung pada genotipe, khususnya spesifik
untuk jenis paprika (Sibi et al. 1979; Dumas
de Vaulx et al. 1981; Gyulai et al. 2000).
Metode kultur antera pada media padat ini
dilaporkan tidak responsif pada kultivar cabai
besar dan bahkan beberapa genotipe paprika
(Qin & Rotino 1993, Ltifi & Wenzel 1994).
Baru-baru ini Supena et al. (2006a)
berhasil mengembangkan prosedur untuk
memproduksi tanaman HG varietas lokal
cabai Indonesia dengan menggunakan metode
kultur sebar-mikrospora (KSM). Prosedur ini
menggunakan antera yang dikulturkan pada
media dua lapis, yaitu media cair di atas
media padat. Selanjutnya dalam masa
inkubasi, antera akan membuka secara normal
dan mikrosporanya tersebar ke media.
Mikrospora ini kemudian akan berkembang
1
menjadi embrio, dan setelah dikecambahkan
dan dipindahtanamkan akan menjadi tanaman
utuh. Prosedur KSM ini sangat potensial
digunakan sebagai langkah awal untuk
mengembangkan cabai varietas hibrida
berbasis kultivar lokal yang ada di Indonesia
maupun dicobakan pada spesies lain pada
genus Capsicum.
Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari
responsivitas dan kapasitas embriogenesis
mikrospora beberapa genotipe cabai dari
spesies Capsicum annuum L. maupun spesies
Capsicum frutescens L. pada kondisi lokal di
Bogor dengan menerapkan prosedur KSM
yang dikembangkan Supena et al. (2006a)
BAHAN DAN METODE
Bahan Tanaman dan Sumber Antera
Genotipe cabai yang digunakan adalah:
cabai besar Tanjung-2 dan cabai keriting Big
Chili yang termasuk spesies C. annuum; cabai
rawit tipe hijau Bara dan cabai rawit tipe putih
Hot Chili yang termasuk spesies C. frutescens,
serta cabai besar HG Galaxy (Supena et al.
2006a) sebagai kontrol atau genotipe model.
Pertanaman cabai dan pemeliharaannya di-
lakukan pada lahan terbuka.
Pengamatan Morfologi Kuncup Bunga dan
Antera Serta Perkembangan Mikrospora
Pengamatan untuk menentukan tahapan
perkembangan mikrospora dilakukan pada
tanaman model Galaxy, yang selanjutnya
digunakan sebagai standar pada penelitian ini.
Bunga cabai dikelompokan menjadi enam
tahap perkembangan berdasarkan morfologi
kuncup bunga dan area warna ungu pada
antera. Mikrospora diisolasi dari masing-
masing antera kelompok kuncup bunga untuk
selanjutnya DNA inti sel mikrospora di-
warnai dengan 4’,6-diamidino-2-phenylindole
(DAPI). Stadium perkembangan mikrospora
diamati dibawah mikroskop fluoresens Nikon
Eclipse E-600 dengan filter UV.
Konfirmasi tahapan perkembangan mikro-
spora pada genotipe cabai lainnya dilakukan
setelah dari hasil akhir kultur diperoleh bahwa
respon untuk cabai rawit putih sangat rendah
dan bahkan tidak didapatkan pertumbuhan
embrio pada cabai rawit tipe hijau.
Kultur Sebar-Mikrospora Antera
Media. Media yang digunakan adalah
media dua lapis (Supena et al. 2006a), yaitu
lapisan bawah berupa media padat yang
mengandung komponen Nitsch (Nitsch &
Nitsch 1969) dan maltosa 20 g/l dengan
penambahan arang aktif 10 g/l, dan agar

gelrite 2 g/l. Sedangkan pada lapisan atas
berupa media cair dengan komponen sama
seperti pada media padat, kecuali tanpa arang
aktif dan agar. Untuk mengatasi kontaminasi
digunakan kombinasi antibiotik rifampisin (10
mg/l) dan timentin (400 mg/l).
Isolasi Antera. Kuncup bunga yang
digunakan sebagai sumber eksplan adalah
dengan antera yang mengandung lebih dari
50% mikrospora pada stadium uninukleat
akhir (Supena et al. 2006a). Karakterisasi
untuk stadia ini adalah adanya warna ungu
pada antera, yaitu pada kelompok per-
kembangan ke-2 dan ke-3 (Gambar 1 pada
bagian hasil). Kuncup bunga diberi praper-
lakuan suhu dingin berinterval 5-10 0C selama
satu hari yang diletakkan pada wadah tertutup
yang berisi kertas lembab. Proses isolasi
antera dilakukan pada kondisi steril di dalam
laminar. Kuncup bunga didesinfeksi selama 1
menit dalam etanol 70 %, kemudian dibilas 2
kali dalam akuades steril. Desinfeksi dilanjut-
kan dalam NaOCl 2 % selama 15 menit
dengan penambahan Tween-20 0.05 % (v/v),
kemudian dibilas 3 kali dalam akuades secara
bertahap selama 1 menit, 5 menit, dan terakhir
minimal 10 menit. Proses isolasi antera dari
kuncup bunga yang sudah disterilisasi
dilakukan dengan cara mengelupas kelopak
dan mahkota serta melepaskan filamennya.
Inkubasi dan Produksi Embrio. Hasil
isolasi antera dikulturkan dalam sistem media
dua lapis dan diinkubasi pada suhu dingin
berinterval 6-110 C selama seminggu pertama
kultur, selanjutnya dipindahkan pada suhu 25-
280 C dan selalu dalam kondisi gelap. Embrio
yang terbentuk dalam masa inkubasi dipanen
pada umur 7-8 minggu kultur untuk se-
lanjutnya dikecambahkan.
Perkecambahan dan Pertumbuhan
Tanaman
Embrio dikecambahkan dalam medium
yang mengandung elemen MS ½ konsentrasi
(Murashige & Skoog 1962), sukrosa 20 g/l
dan 6-benzylaminopurin (BA) 0.1 µM, di-
padatkan dengan gelrite 2 g/l. Kultur dilaku-
kan pada botol kultur berdiameter 6 cm dan
diinkubasi pada suhu 25-280 C dengan pen-
cahayaan selama 16 jam. Setelah tiga sampai
empat minggu bibit yang telah berdaun 5-6
buah dan memiliki perakaran yang baik dipin-
dahkan ke dalam botol berdiameter 8 cm dan
tinggi 11 cm dengan media campuran tanah,
kasting dan arang sekam (1:1:1) setebal 4-5
cm yang dilembabkan dengan air, kemudian
botol di-seal untuk menjaga kelembaban dan
dibuka secara bertahap. Tanaman pada sta-
2
dium berdaun 5-6 buah siap diaklimatisasikan
dan ditanam dalam pot di rumah kaca.
Pengamatan dan Analisis Data
Perkembangan kultur diamati setiap
minggu. Setelah kultur berumur 7-8 minggu,
embrio yang terbentuk diamati dan dihitung.
Embrio dikelompokkan ke dalam dua kate-
gori, yaitu embrio lengkap dan embrio tidak
lengkap. Embrio lengkap merupakan embrio
yang berkembang baik, memiliki radikula,
hipokotil, kotiledon, epikotil dan plumula
yang akan berkembang menjadi tanaman yang
tumbuh normal. Sedangkan embrio tidak
lengkap adalah embrio yang tidak mempunyai
kotiledon.
Data hasil pengamatan dianalisis meng-
gunakan metode analisis sidik ragam dan uji
beda nyata terkecil (BNT) dengan program
komputer SPSS 14.0.
HASIL
Hubungan Morfologi Kuncup Bunga dan
Antera dengan Stadia Mikrospora pada
HG Galaxy
Hubungan perkembangan stadia mikro-
spora dengan ciri morfologi kuncup bunga
dan warna antera pada tanaman model haploid
ganda Galaxy disajikan pada Gambar 1 dan
Tabel 1. Stadia uninukleat akhir telah didapati
pada kelompok perkembangan ke-1 (48.5 %),
persentase ini semakin meningkat pada per-
kembangan ke-2 (60.1 %) dan ke-3 (66.7 %),
dan kemudian menurun pada perkembangan
ke-4 (42.8 %). Stadia uninukleat akhir tidak
didapati lagi pada perkembangan ke-5 dan ke-
6 karena pada kelompok ini mikrospora telah
menjadi polen dan mikrospora tidak berinti.
Embriogenesis Mikrospora
Embriogenesis mikrospora melalui me-
tode KSM berhasil dilakukan pada tanaman
cabai kontrol serta tiga dari empat genotipe
tanaman cabai yang dicobakan dalam pe-
nelitian ini. Analisis statistik terhadap data
kultur memperlihatkan bahwa terdapat penga-
ruh genotipe terhadap respon embriogenesis
dan vitalitas kultur. Respon embriogenesis
terbesar dimiliki Tanjung-2 sebesar 58 %
yang tidak berbeda nyata dengan HG Galaxy
(53 %) dan Big Chili (44 %), sedangkan
respon terkecil pada Hot Chili sebesar 19 %
serta Bara yang tidak respon sama sekali (0
%) (Tabel 2).
Dalam hal vitalitas kultur (ketahanan
terhadap kontaminasi) kontrol lebih tahan
dibandingkan ke empat genotipe lainnya,
dimana 60 % dari jumlah petri yang dikultur-
kan terbebas dari kontaminasi, sebaliknya
 3

nilai vitalitas kultur terendah dimiliki oleh

Big Chili (26 %) dan Bara (24 %) (Tabel 2).
 3

Tabel 1 Tahapan perkembangan mikrospora pada beberapa fase perkembangan kuncup bunga
tanaman cabai besar HG Galaxy
Fase Warna ungu pada antera dari Persentase tahapan perkembangan mikrospora
perkembangan beberapa perkembangan
kuncup bunga* kuncup bunga EU MU LU EB MB G+V TI
1 Belum ada 6.0 45.5 48.5 0 0 0 0
2 Hanya tipis pada bagian ujung 14.2 25.7 60.1 0 0 0 0
3 Sekitar ¼ panjang antera 0 33.3 66.7 0 0 0 0
4 Seluruh antera berwarna ungu 0 0 42.8 28.6 28.6 0 0
Warna ungu memucat pada
5 kuncup dengan mahkota yang 0 0 0 0 0 68.0 32.0
akan mekar
Warna ungu memucat pada
6 0 0 0 0 0 35.0 65.0
kuncup yang baru mekar
Keterangan : * seperti pada Gambar 1; EU: uninukleat awal, MU: uninukleat pertengahan, LU: uninukleat
akhir, EB: binukleat awal, MB: binukleat pertengahan, G+V: polen dengan inti generatif dan vegetatif, TI:
Tidak berinti (mikrospora mati)

1 2 3 4 5 6
Gambar 1 Morfologi bunga cabai HG Galaxy pada beberapa kelompok perkembangan. Bar: 5 mm

Jumlah embrio per petri responsif yang
dihasilkan terbesar pada Galaxy yaitu 7.1
embrio dan yang terkecil pada Hot Chili
hanya 1.3 embrio (Tabel 2). Hasil ini
mengambarkan bahwa genotipe berpengaruh
juga terhadap kemampuan produksi embrio.
Dalam hal kualitas embrio yang dihasilkan,
yang diperlihatkan melalui persentase embrio
lengkap (Gambar 2a-c), ternyata kultivar
Tanjung-2 (64.4 %) tidak kalah dibanding
Galaxy (57.5 %). Tanaman hasil metode KSM
juga berhasil didapatkan pada cabai kultivar
Tanjung-2 (Gambar 2e). Hasil pengamatan
jumlah kloroplas dalam sel penjaga daun
didapatkan rata-rata jumlah kloroplas sebesar
10.2 buah per kloroplas (2 sel penjaga).

Tabel 2 Penampilan beberapa genotipe cabai (Capsicum spp.) untuk vitalitas, responsivitas dan
kapasitas embriogenesis mikrosporanya

Rata-rata
Jumlah Kultur terjadi Rata-rata
Kultur tidak embrio
total respon embrio Embrio
Genotipe kontaminasi 1 lengkap
kultur embriogenesis 2 per lengkap (%)
(%) per
(petri) (%) kuncup
kuncup
Galaxy 103 60 a 53 a 7.1 4.1 57.5
Tanjung-2 94 48 ab 58 ab 3.5 2.2 64.4
Big Chili 68 26 b 44 ab 1.9 0.6 33.3
Hot Chili 66 24 b
et19 bc 1.3 0.3 25.0
Bara e 79 42 ab 0c 0 0 0
Keterangan: 1= dari jumlah petri awal, 2 = dari jumlah petri tidak kontaminasi. Angka yang diikuti huruf yang
sama pada kolom yang sama, berarti tidak berbeda nyata pada selang ekkepercayaan 95 % (atau ά = 0.05)
a et b el
et
e

e
cl d e
 4

et
el

ek
a et b el
et
et

el
c d e
Gambar 2 Embriogenesis mikrospora beberapa genotipe cabai (Capsicum spp.) dalam metode
KSM dan tanaman yang dihasilkan : a. embrio pada Galaxy; b. embrio dan kecambah
pada Tanjung-2; c. embrio pada Big Chili; d. embrio pada Hot Chili; e. tanaman
berasal dari hasil KSM cabai varitas Tanjung-2. Karakter-karakter embrio: el (embrio
lengkap); et (embrio tidak lengkap); ek (embrio yang telah berkecambah) Bar: a-d =
3 mm, e = 4 cm

Hubungan Morfologi Kuncup Bunga dan
Antera dengan Stadia Mikrospora pada
Hot Chili dan Bara
Rendahnya respon embriogenesis pada
Hot Chili serta tidak terjadi respon pada Bara
menimbulkan dugaan bahwa stadia mikro-
spora yang digunakan tidak tepat, disebabkan
penciri yang berasal dari HG Galaxy
kemungkinan berbeda untuk kedua tipe cabai
ini. Namun, berdasarkan hasil konfirmasi
diketahui bahwa stadia perkembangan
mikrospora pada Hot Chili dan Bara tidak
berbeda dengan Galaxy. Pada Hot Chili stadia
uninukleat akhir dominan terdapat mulai
kelompok perkembangan ke-2 (71.4 %),
meningkat hingga perkembangan ke-4 (100
%). Demikian juga juga pada Bara dimana
perkembangan ke-3 telah mengandung stadia
uninukleat akhir dominan (77.8 %) dan
meningkat hingga perkembangan ke-4 (85.7
%). (Tabel 3). Sehingga penggunaan kelom-
pok perkembangan ke-2 dan ke-3 pada kultur
telah mewakili stadia mikrospora yang
diinginkan.

Tabel 3 Tahapan perkembangan mikrospora pada beberapa stadia perkembangan

kuncup bunga beberapa genotipe tanaman cabai (Capsicum spp.)
Fase Persentase tahapan perkembangan mikrospora
Genotipe perkembangan
EU MU LU EB G+V TI
kuncup bunga*
Hot Chili 1 100 0 0 0 0 0
(cabai rawit putih) 2 0 28.6 71.4 0 0 0
3 0 25.0 75.0 0 0 0
4 0 0 100 0 0 0
5 0 0 25.0 75.0 0 0
6 0 0 0 0 91.0 9.0
Bara 1 100 0 0 0 0 0
(cabai rawit hijau) 2 29.4 52.9 17.6 0 0 0
3 0 22.2 77.8 0 0 0
4 0 0 85.7 14.3 0 0
5 0 0 0 0 100 0
6 0 0 0 0 100 0
Keterangan : * seperti pada Gambar 2; EU: uninukleat awal, MU: uninukleat pertengahan,
LU: uninukleat akhir, EB: binukleat awal, G+V: polen dengan inti generatif dan vegetatif, TI:
Tidak berinti (mikrospora mati)

1 2 3 4
Gambar 3 Morfologi bunga cabai rawit Hot Chili pada beberapa kelompok perkembangan.
Bar: 2 mm
a b
Gambar 4 Morfologi antera pada kultur: a.Bara usia 7 minggu kultur, b. HG Galaxy usia 4
minggu kultur Bar: 0.9 mm
PEMBAHASAN
Salah satu faktor yang sangat mempeng-
aruhi keberhasilan induksi androgenesis
melalui kultur antera ataupun isolasi mikro-
spora adalah penggunaan stadia per-
kembangan mikrospora yang tepat. Untuk
cabai, stadia kuncup bunga atau antera yang
tepat adalah yang mengandung lebih dari 50
% mikrosporanya berada pada tahap uni-
nukleat akhir (Supena et al. 2006a). Hasil
pengamatan pada HG Galaxy, ciri morfologi
untuk stadia populasi mikrospora tersebut
adalah ketika panjang mahkotanya sama
dengan atau sedikit lebih panjang dari
kelopaknya, dan ketika warna antera berwarna
hijau dengan terdapat warna keunguan pada
ujungnya. Hasil ini sesuai dengan yang
dilaporkan Supena et al. (2006a) dan bahkan
sepertinya berlaku umum untuk kultivar cabai
besar (Sibi et al. 1979, Andrezejewski & Mol
1985, Dolcet-Sanjuan et al. 1997, Tipirdamaz
& Ozkum Ciner 2001, Kim et al. 2004,
Supena et al. 2006a). Kedua penciri ini
digunakan juga untuk genotipe cabai lainnya
dalam penelitian ini, yaitu tipe cabai keriting
5
5 6
ataupun untuk spesies yang berbeda C.
frutescens.
Pengaruh genotipe terhadap induksi
androgenesis pada penelitian ini terlihat dari
variasi respon yang dihasilkan oleh masing-
masing genotipe. Secara umum terlihat bahwa
responsivitas dan kapasitas embriogenesis
mikrospora cabai besar lebih baik dibanding-
kan cabai keriting, dan cabai keriting lebih
baik dari cabai rawit. Rendahnya responsivitas
dan kapasitas embriogenesis mikrospora pada
Hot Chili serta tidak terjadi respon pada Bara
dalam penelitian ini, kemungkinan tidak
hanya disebabkan oleh pengaruh genotipe,
tetapi dipengaruhi juga oleh beberapa faktor
lainnya. Faktor yang mungkin berpengaruh
adalah ciri morfologi bunga dan warna antera
untuk stadia mikrospora pada cabai besar
mungkin tidak sama untuk C. frutescens.
Tingginya tingkat kontaminasi yang terjadi
pada penelitian ini diduga berhubungan
dengan kondisi pertumbuhan tanaman.
Penggunaan lahan terbuka sebagai tempat
tanam dan dugaan adanya bakteri endofitik
merupakan alasan mengapa masih terjadi
tingkat kontaminasi yang cukup tinggi dalam
penelitian ini.

Bakteri endofitik merupakan bakteri yang
hidup di dalam jaringan tanaman dan
umumnya bakteri ini tidak segera mengkon-
taminasi kultur pada periode-periode awal
tetapi baru mengkontaminasi pada periode
kultur yang telah lama (Leifert & Cassells
2001). Penggunaan kombinasi antibiotik
Rifampisin (10 mg/l) dan Timentin (400 mg/l)
belum sepenuhnya mampu mengatasi kon-
taminasi kultur, dimana menurut laporan
Supena et al. (2006b) kombinasi antibiotik
Rifampisin (10 mg/) dan Timentin (200 mg/l)
sudah mampu menekan kontaminasi hingga
82 % pada kultur antera cabai yang ditumbuh-
kan di rumah kaca.
Hot Chili dan Bara merupakan tanaman
menahun sehingga peluang adanya bakteri
endofitik yang secara langsung dan tidak
langsung mempengaruhi vitalitas yang
akhirnya mempengaruhi respon sangat besar.
Selain itu penggunaan usia fisiologis tanaman
yang tua untuk kultur pada kedua cabai
tersebut sedikit banyak berpengaruh terhadap
responsivitas dan kapasitas embriogenesis
yang dihasilkan.
Pada Bara walaupun secara morfologi
tanaman terlihat memiliki pertumbuhan yang
sehat dan tahan terhadap penyakit keriting
yang umumnya mudah menjangkiti tanaman
lainnya, tetapi di dalam kultur Bara memiliki
antera yang terlihat tidak seperti pada tanaman
lainnya (Gambar 4a). Walaupun secara normal
terlihat bahwa dinding antera telah membuka,
namun hingga usia 7-8 minggu kultur tidak
didapatkan perkembangan embrio dari antera
ini. Tidak terjadinya respon pada Bara
terhadap metode KSM ini lebih disebabkan
faktor genotipe.
Pada kultivar Tanjung-2, berhasil
didapatkan tanaman haploid dari perkem-
bangan embrio yang dihasilkan melalui
metode KSM, tanaman ini memiliki rata-rata
jumlah kloroplas sebesar 10.2, dimana jumlah
ini mendekati nilai yang diukur oleh Supena
et al. (2006b) yaitu sebesar 9.0 untuk tanaman
haploid dan 17.0 untuk tanaman haploid
ganda atau diploid cabai kultivar Galaxy.
SIMPULAN
Penciri morfologi untuk mendapatkan
populasi mikrospora yang mengandung lebih
dari 50 % nya berada pada tahap uninukleat
akhir pada tanaman Galaxy adalah dari antera
yang berwarna hijau dengan warna keunguan
pada ujungnya yang diperoleh dari kuncup
bunga dengan ciri panjang mahkotanya sama
dengan atau sedikit lebih panjang dari
6
kelopaknya. Induksi androgenesis berhasil
dilakukan terhadap tiga kultivar anggota C.
annuum dan satu kultivar anggota C.
frutescens. Responsivitas terbaik diperlihatkan
oleh cabai besar Tanjung-2 (58 %) yang tidak
berbeda nyata dengan HG Galaxy (53 %)
dengan jumlah embrio lengkap masing-
masing 2.2 dan 4.1 embrio per kuncup bunga.
Secara umum responsivitas cabai besar lebih
baik dibandingkan cabai keriting, dan cabai
keriting lebih baik dari cabai rawit.
DAFTAR PUSTAKA
Dumas de Vaulx R, Chambonnet D, Pochard
E. 1981. Culture in vitro d’anthères du
piment (Capsicum annuum L.):
amélioration des taux d’obtention de
plantes chez différents génotypes par des
traitements à +35 0C. Agronomie 1: 859-
864. (Dalam bahasa Perancis dilengkapi
abstrak bahasa Inggris)
Dolcet-Sanjuan R, Claveria E, Huerta A.
1997. Androgenesis in Capsicum annuum
L.-Effects of carbohydrate and carbon
dioxide enrichment. J Amer Soc Hort Sci
122: 468-475.
[Deptan] Departemen Pertanian. 2005.
Statistik Pertanian 2005. Jakarta: Deptan.
Gyulai G, Gémesné JA, Sági ZS, Venezel G,
Pintér P, Kristóf Z, Törjék O, Heszkey I,
Bottka S, Kriss J, Zatykó L. 2000.
Doubled haploid development and PCR-
anlaysis of F1 hybrid derived DH-R2
paprika (Capsicum annuum L.) lines.
Plant Physiol 156:168-174.
Ltifi A, Wenzel G. 1994. Anther culture of hot
and sweet pepper (Capsicum annuum L.):
Influence of genotype and plant growth
temperature. Capsicum and Eggplant
Nwsl 13: 74-77.
Leifert C, Cassells AC. 2001. Microbial
Hazards in Plant Tissue and Cell
Cultures. In Vitro Cell Dev Biol-Plant
37:133-138.
Murashige T, Skoog F. 1962. A revised
medium for rapid growth and bio-assay
with tobacco tissue culture. Physiol Plant
15:473-497.
Nitsch JP, Nitsch C. 1969. Haploid plants
from pollen grains. Science 163: 85-87.
Ochoa-Alejo N, Ramirez-Malagon R. 2001.
In vitro chili pepper biotechnology. In
Vitro Cell Dev Biol-Plant 37:701-729.

Powell W. 1990. Environmental and Genetical
Aspects of Pollen Embryogenesis. Di
dalam : Bajaj YPS, editor. Biotechnology
in Agriculture and Forestry, Vol. 12
Haploids in Crop Improvement I. Berlin
Heidelberg: Springer-Verlag. hlm. 45-65.
Qin X, Rotino GL. 1993. Anther culture of
several sweet and hot pepper genotypes.
Capsicum and Eggplant Nwsl 12: 59-62.
Sibi M, Dumas de Vaulk R, Chambonnet D.
1979. Obtention de plantes haploïdes par
androgenèse in vitro chez le piment
(Capsicum annuum L.). Ann Amelior
Plantes 29:583-606. (Dalam bahasa
7
Perancis dilengkapi abstrak bahasa
Inggris)
Supena EDJ, Suharsono S, Jacobsen E,
Custers JBM. 2006a. Succesful
development of a shed-microspore culture
protocol for double haploid production in
Indonesian hot pepper (Capsicum
annuum L.). Plant Cells Rep 25:1-10.
Supena EDJ, Muswita W, Suharsono S,
Custers JBM. 2006b. Evaluation of
crucial factors for implementing shed-
microspore culture of Indonesian hot
pepper (Capsicum annuum L.) cultivars.
Scientia Horticulturae 107: 226-232.