DETERMINACIN DE COMPONENTES VOLTILES MAYORITARIOS EN BEBIDAS ALCOHLICAS Y AGUARDIENTES POR CROMATOGRAFA DE GASES EN COLUMNAS CAPILARES. Autores: MC.

Luisa Vega Bolaos Lic. Jos Antonio Arias Verdes Tc. Ramn Sersa Espinosa Ing. Roberto Rivero Prez

RESUMEN La determinacin de componentes mayoritarios en las bebidas alcohlicas y aguardientes resulta de gran importancia para controlar la calidad de las mismas, garantizando que se cumplan las especificaciones de calidad de estos productos tanto para el consumo nacional como para la exportacin. Se estandariz el mtodo de cromatografa de gases establecido en la NC 508:2007, utilizando una columna capilar de BP 20 de 30 metros de largo por 0.25 m de espesor de pelcula y 0.25 de dimetro interno. Se establecieron los tiempos de retencin relativos para el acetaldehdo, metanol, 1- propanol, 2-metil 1- propanol y para la suma del 2-metil 1- butanol y 3- metil 1- butanol. Las curvas de calibracin de cada componente presentaron coeficientes de correlacin lineal superiores a 0.99. Se establecieron los parmetros de integracin y se utiliz el mtodo del estndar interno para la cuantificacin. La repetibilidad y la reproducibilidad fueron menores de 5 y 8% respectivamente. INTRODUCCIN Los componentes voltiles de las bebidas alcohlicas consisten en una amplia gama de compuestos que incluyen cidos, alcoholes, aldehdos, y otras trazas de compuestos aromticos. Estos compuestos se pueden generar en diferentes etapas de la elaboracin de las bebidas alcohlicas, pero el grupo ms voluminoso de compuestos voltiles se produce durante la etapa de la fermentacin alcohlica (steres, alcoholes, aldehdos, cidos, compuestos de azufre, etc). De estos compuestos, los alcoholes y los steres son los ms importantes cuantitativamente(1,2,3). Los alcoholes superiores tienen sobre el organismo un efecto narctico muy superior al del alcohol etlico. En los destilados se encuentran en proporciones muy bajas, por lo que fisiolgicamente su efecto es moderado. Se forman algunos durante la fermentacin alcohlica y otros como el 2-butanol se forma durante la conservacin, por lo que es un elemento que distingue los aguardientes de orujo de los de vinos (4,5). La formacin del propanol es ms compleja porque est ligada al metabolismo de las levaduras y as su concentracin est correlacionada negativamente con las del cido sulfhdrico 6). A veces tambin puede formarse a partir del metabolismo de los azcares. El butano proviene esencialmente de vas secundarias del metabolismo de los aminocidos. En general, los factores que favorecen el crecimiento celular de las levaduras estimulan la produccin de alcoholes superiores (7). .

El contenido de alcoholes superiores es un condicionante de la calidad de las bebidas alcohlicas y depende de las tcnicas de elaboracin empleadas. La Cromatografa de Gases (GC) es una herramienta poderosa para el anlisis de componentes voltiles mayoritarios. En general, se requiere una mnima preparacin de la muestra y un tiempo corto para la obtencin de resultados de alta confiabilidad (8,9). El objetivo de este trabajo fue estandarizar la metodologa para determinar los componentes voltiles mayoritarios en bebidas alcohlicas destiladas, aguardientes y alcohol etlico por cromatografa de gases. MATERIALES Y METODOS Para implementar el mtodo se verific la linealidad del detector de Ionizacin de Llama (FID) con respecto a la concentracin de los diferentes alcoholes, se construy una curva de calibracin con 6 puntos por triplicado de la siguiente manera: Las soluciones se prepararon a 20 C y se almacenaron a una temperatura menor de 5 C y las pesadas se registraron con una precisin del orden de los 0.1 mg. La solucin de la mezcla patrn se prepar pesando de forma individual los siguientes estndares en un frasco volumtrico de 100 mL conteniendo aproximadamente 60 mL de solucin de etanol al 40 % v/v y completando hasta el aforo. Componente Metanol 1- propanol 2- metil -1-propanol 2- metil -1- butanol 3- metil -1- butanol Acetaldehdo Volumen (mL) 0.25 0.75 1.25 0.90 2.80 0.50

Para la preparacin de las soluciones de la curva de calibracin se pipetearon separadamente 0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 4.0 y 6 mL de la solucin de mezcla patrn en volumtricos de 100 mL conteniendo aproximadamente 50 mL de solucin de etanol al 40 % v/v y se llev al aforo. Las concentraciones en g/100 L se muestran en la siguiente tabla.

Componente

1 2 (0.5 mL) (1 mL)

3 4 (1.5 mL) (2 mL)

5 (4 mL)

6 (6 mL)

Metanol 0,976 1,952 2,928 3,904 5,856 7,808 1-propanol 3,112 6,224 9,336 12,448 18,672 24,896 2-metil-1-propanol 5,406 10,812 16,218 21,624 32,436 43,248 Alcohol isoamlico* 15.948 31,897 47,845 63,794 127,588 191,382 Acetaldehdo 2,606 5,212 7,818 10,424 15,636 20,848 *Suma de la mezcla de los ismeros (2-metil-1-butanol y 3-metil-1-butanol).

Se utiliz el mtodo del Estndar Interno para la cuantificacin de la concentracin de cada componente y se prepar pesando 20 gramos de 1-Butanol para bebidas destiladas y alcohol etlico en un frasco volumtrico de 100 mL conteniendo aproximadamente 50 mL de solucin de etanol al 40 % v/v, y se completo hasta el aforo, y para el aguardiente se pesaron 40 g del estndar interno y se procedi de la misma forma. Se utiliz un cromatgrafo de gases Shimadzu 2014 equipado con detector de ionizacin de llama y una columna capilar BP20 de 30 metros de largo, 0.25 m de espesor de pelcula y 0.25 mm de dimetro interno, la inyeccin se realiz en modo Split con una relacin de 25:1 y una temperatura del inyector de 220 C, el programa de temperatura de la columna cont de una isoterma a 45 C durante 8 minutos y una rampa de 20 C/min hasta 150 C. A continuacin se inicia otra rampa de 70 C/min hasta 220 C para eluir otros compuestos presentes en la muestra. El detector se mantiene a 300C durante todo el anlisis. Para la identificacin de los diferentes componentes se utiliz el tiempo de retencin relativo al 1- butanol con un ancho de ventana 3 segundos. Para el estudio de la proximidad de concordancia entre los resultados de mediciones sucesivas del mismo mensurando bajo las mismas condiciones de medicin se inyect una muestra de Tequila 10 veces y para el estudio de la reproducibilidad se procedi de la misma forma, pero en das sucesivos (10). La adquisicin de datos e integracin de los picos se realiz utilizando el Software GC Solution y una interfase RS-232C para la comunicacin con la estacin cromatogrfica. Para la evaluacin estadstica de los resultados de la repetibilidad y reproducibilidad se uso el programa Startgraph. RESULTADOS Y DISCUSIN En la figura se muestra un cromatgrama de la mezcla de alcoholes utilizada para evaluar la resolucin y los tiempos de retencin de cada uno de los componentes. Utilizando una columna de 60 m de largo y helio o hidrgeno como gas portador es posible separar los ismeros 2- metil 1- Butanol y 3- Metil 1- Butanol (11).

Como se observa a continuacin todas las curvas de calibracin mostraron coeficientes de correlacin lineal superiores a 0.99.

El cromatgrama siguiente corresponde a la muestra de Tequila usada para el estudio de la repetibilidad y la tabla 1 muestra los resultados del estudio para los diferentes alcoholes en las 10 muestras evaluadas.

Tabla 1. Resultado de la repetibilidad. rea promedio Componente Acetaldehdo 1553,36 Metanol 16111,73 1-Propanol 6501,09 2-Metil-1-Propanol 5875,64 Mezcla de Ismeros 16680,55

CV (%)

4.92 4,25 4,78 4,36 4,48

Los coeficientes de variacin de das sucesivos se muestran en la tabla 2.

Tabla 1. Resultado de la reproducibilidad. rea promedio Componente Acetaldehdo 1571,45 Metanol 16002,64 1-Propanol 6901,09 2-Metil-1-Propanol 6084,73 Mezcla de Ismeros 16771,45

CV (%)

7,93 7,03 6,65 7,36 7,13

CONCLUSIONES La metodologa implementada es rpida, eficaz, confiable y puede ser aplicada para la determinacin de compuestos voltiles de bebidas alcohlicas, aguardientes y alcohol etlico. El uso del 1- Butanol como estndar interno y referencia para los tiempos de retencin result adecuado.

BIBLIOGRAFIA 1. Eyda Otero et al. Calidad de varios rones cubanos. Rev. Cub. Alim. Y Nutr. 2001; 15(2):96100. 2. Instituto de Nutricin e Higiene de los Alimentos (INHA). 2005. Control sanitario de las aguas y bebidas (en lnea). Consultado el 18 de marzo 2010. disponible en http://www.inha.sld.cu/vicedirecciones/aguasybebidas.htmPrado3. Ramrez, R.; Victor, Gonzles-lvarez, V.; Pelayo-Ortiz, C.; Casillas, N.; Estarrn, M.; Gmez-Hernndez, E., 2005, Volatyl compounds during thermal process. International Journal of Food Science & Technology, Vo. 40, No 7, pp. 701-708(8). 4. Antonio, Luis, Miguel. 2003. Vinos y Enologias (en lnea). Disponible en: http://www.apoloybaco.com/Aguardientes.htm 5. Minakata, E.P.; Hernndez, G.L.; Barba de la Rosa, A.; Len Rodrguez, A., 2006, Characterization of volatile compounds of mezcal, an ethnic alcoholic beverage obtained from Agave salmiana. Journal Agriculture Food Chemistry, 54, 1337-1341. 6. Giudici, P. Zambonelli, C. Kunkee, RE.1993. Am. J. Enol. Vitic., 44, 17-2. 7. Henschke, PA., Jiranek, V. 1992. Wine, Microbiology and Biotechnology Harwood Academic Publishers. Sydney. 8. NC 508: 2007. Bebidas alcohlicasDeterminacin de componentes voltiles mayoritarios en bebidas alcohlicas destiladas, aguardientes y alcohol etlico por cromatografa gas lquido. 9. Vallejo, C. y Gonzlez, C., 1999, Identificacin de los compuestos voltiles del tequila. Bebidas mexicanas, 8(4), 1-17. 10. NC TS: 2004 Gua para la validacin de mtodos de ensayo qumicos para alimentos. 11. Supelco Chromatography 2001. Aplications Alcohols.