Procedimiento de la prueba

Inmunoensayo Enzimtico

Tcnica en la cual uno de los reactantes, el anticuerpo o el antgeno, se fija a un soporte solido con la interaccin con reactante complementario.

Fases de realizacin

Sensibilizacin de la placa. Bloqueo de espacios vacos. El Ag o el Ac se fija a una superficie. Aplicacin del espcimen de prueba. Controles positivo y negativo Deteccin y caracterizacin por Ac. 2 marcado. Incubacin con la muestra. Incubacin con el sistema de deteccin. Adicin del sustrato.

Tipos de ELISA
Anticuerpos Marcados ELISA Directo ELISA Indirecto ELISA Sandwich o Doble (DAS) o Heterologo (HADAS) Antgenos Marcados ELISA Competitivo

ELISA Directo

Fijacin al soporte insoluble (tapizado) de antgenos especficos. Lavado para eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados. Adicin de anticuerpos marcados (conjugados) con una enzima.

Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora

Elisa Indirecta

Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos para los anticuerpos objeto de estudio. Lavado para eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados. Adicin del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarn especficamente con los antgenos fijados al soporte. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima

Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea. Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado

ELISA Sndwich DAS (Double Antibody Sandwich).

Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados. Adicin de la muestra problema.

Lavado para eliminar los antgenos que no hayan reaccionado y los restos de la muestra no fijados.

Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar, los cuales reaccionan con los antgenos aadidos con la muestra problema y que se encuentran fijados a los anticuerpos.

Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. Adicin de un substrato sobre el que sea

ELISA Sndwich HADAS.

Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados. Adicin de la muestra.

Lavado para eliminar los antgenos que no hayan reaccionado y los restos de la muestra no fijados.

Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar (deben tener un eptopo diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte. Lavado para eliminar los anticuerpos que no hayan reaccionado.

Adicin de anticuerpos conjugados con una enzima antianticuerpos empleados en el paso anterior.
Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.