8ICDLGkADASI ILNAN1kLN CLLn 8Ak1LkI

LAU1 Pseudomonos sp
ka|3b22 ASAL kUMAI kALIMAN1AN 1LNGAn
C|eh 1uLlk Murnlaslh1*) ?opl2 dan 8udlawan
8ICDLGkADASI ILNAN1kLN CLLn 8Ak1LkI
LAU1 Pseudomonos sp
ka|3b22 ASAL kUMAI kALIMAN1AN 1LNGAn
C|eh 1uLlk Murnlaslh1*) ?opl2 dan 8udlawan
Dw| rat|w| (090S609)
M|ra Iu[| (090S77S)
rat|w| W (090SS96)
kangga 8ayu C (0608614)
W|ddy n (090S692)
Dw| rat|w| (090S609)
M|ra Iu[| (090S77S)
rat|w| W (090SS96)
kangga 8ayu C (0608614)
W|ddy n (090S692)
aLar 8elakang aLar 8elakang
1ercemarnya llngkungan daraL maupun lauL
oleh bahanbahan berbahaya dlbuLuhkan
penangan yang serlus unLuk mengurangl LlngkaL
konLamlnasl zaL berbahaya LersebuL 8eberapa
cara klmla flslka dan blologl dlkembangan unLuk
mengaLasl pencemaran bahan klmla rekalslLran
8loremedlasl saaL lnl dlyaklnl merupakan cara
Lerbalk dengan reslko pallng kecll ada kondlsl
LerLenLu beberapa mlkroorganlsme lauL
menggunakan pollaromaLlk hldrokarbon sebagal
sumber karbon dan sumber energl
1u[uan 1u[uan
unLuk mengeLahul kemampuan bakLerl
lauL lndonesla (Pseudomonos sp t|pe
ka|3b22 % dalam mendegradasl fenanLren
8loremedlasl 8loremedlasl
8loremedlasl merupakan penggunaan mlkroorganlsme
unLuk mengurangl poluLan dl llngkungan
8loremedlasl menggunakan kaLallsaLor (enzlm) yang
dlkeluarkan oleh mlkroorganlsme unLuk mengkaLallsls
penghancuran senyawa berbahaya yang speslflk uegradasl
senyawa poluLan selalu mellbaLkan Lransformasl sLrukLur
senyawa sehlngga Ler[adl perubahan lnLegrlLas molecular
poluLan Supaya proses LersebuL dapaL berlangsung opLlmal
dlperlukan kondlsl llngkungan yang sesual dengan kebuLuhan
perLumbuhan dan perkembangangblakan mlkroorganlsme
enanLren enanLren
enanLren merupakan salah saLu pollaromaLlk
hldrokarbon (AP) yang blasa dlLemukan pada
Lanah yang Lercemar daerah esLuarla dan
peralran lalnnya
enanLren merupakan benLuk pallng
sederhana darl AP yang mempunyal benLuk
boyteqloo" dan kteqloo" sehlngga serlng
dlgunakan sebagal model subsLraL unLuk
mempela[arl meLabollsme AP yang karslnogenlk
Pseudomonos p Pseudomonos p
lngdom 8acLerla
hylum roLeobacLerla
Classls Camma roLeobacLerla
Crdo seudomondales
amllla seudomonaceae
Cenus seudomonas
Specles 9eoJomooo
an[uLan
W 9eoJomooosp merupakan bakLerl
hldrokarnonlk yang mampu mendegradasl
berbagal [enls hldrokarbon
W emampuan bakLerl 9eoJomooo sp dalam
mendegradasl hldrokarbon dan dalam
menghasllkan blosurfacLan menun[ukkan bahwa
lsolaL bakLerl 9eoJomooo sp berpoLensl unLuk
dlgunakan dalam upaya bloremedlasl llngkungan
aklbaL pencemaran hldrokarbon
MeLode enellLlan MeLode enellLlan
8ahan
1 Sampel alr lauL ( dlambll darl kedalaman 2m darl
pelabuhan)
2 enanLran
3 Mlnyak MenLah medlum yang dlgunakan
adalah swp broLh yang mengandung
(nP4nC32PC4 e(lll) slLraL eksLrak yeasL
4 Medlum agarCn87 yang mengandung naCl na2SC4
1ASC Cl nP4Cl na2PC47 P2C na8r naPCC3
P38C3 na MgCl2 CaCl2 SrCl2 dan eCl24P2C
an[uLan an[uLan
3 Medlum marlneagar (2116 dlfco) yang
mengandung yeasL pepLone casamlno acld
deksLrose soluble sLarchsodlum pyruvaLe dan
agar
6 elaruL organlk yang dlgunakan adalah
dlkloromeLan (Merck) heksan (Merck) eLll
aseLaL (Merck) eralaLan yang dlgunakan
unLuk ldenLlflkasl produk konversl adalah CC
Mass dengan kolom kapller
Cara er[a
1 Sampel alr lauL sebanyak 4 m dl Lambahkan nuLrlen
fenanLren 1000 ppm dan 1m medlum swp
1 Sampel alr lauL sebanyak 4 m dl Lambahkan nuLrlen
fenanLren 1000 ppm dan 1m medlum swp
2 ullnkubasl selama 24 mlnggu menggunakan shaker
lncubaLor" suhu 30oC Subllmasl dengan uap fenanLren
sLandar pada permukaan agar
2 ullnkubasl selama 24 mlnggu menggunakan shaker
lncubaLor" suhu 30oC Subllmasl dengan uap fenanLren
sLandar pada permukaan agar
3 Sesudah 2 mlnggu laruLan fermenLasl dllnokulasl
kedalam medla agaronr7 dengan konsenLrasl 101 dan 102
3 Sesudah 2 mlnggu laruLan fermenLasl dllnokulasl
kedalam medla agaronr7 dengan konsenLrasl 101 dan 102
4 Mlkroba poslLlf pendegradasl fenanLren dlLun[ukkan
dengan adanya zona benlng dlseklLar kolonl
4 Mlkroba poslLlf pendegradasl fenanLren dlLun[ukkan
dengan adanya zona benlng dlseklLar kolonl
lsolasl Mlkroba
3 ullakukan lsolasl dan purlflkasl 3 ullakukan lsolasl dan purlflkasl
u[l 1lngkaL
8lodegradasl
ulbuaL prakulLur lsolaL dalam 4m medlum marlne
broLh" dllnkubasl selama 2 harl
ulbuaL prakulLur lsolaL dalam 4m medlum marlne
broLh" dllnkubasl selama 2 harl
sebanyak 3m laruLan prakulLur dlLambahkan kedalam 300m
medlum marlne broLh" yang mengandung mlnyak menLah
(1m) dan dllnkubasl pada roLary shaker" suhu 30
o
C
sebanyak 3m laruLan prakulLur dlLambahkan kedalam 300m
medlum marlne broLh" yang mengandung mlnyak menLah
(1m) dan dllnkubasl pada roLary shaker" suhu 30
o
C
Sesudah 6 harl kulLur dlpanen dan dlsenLrlfuse unLuk
mendapaLkan sel bakLerl Sel dlplsahkan darl
supernaLanL" dan dlLlmbang beraL basahnya
Sesudah 6 harl kulLur dlpanen dan dlsenLrlfuse unLuk
mendapaLkan sel bakLerl Sel dlplsahkan darl
supernaLanL" dan dlLlmbang beraL basahnya
pelleL bakLerl dllaruLkan dalam 4 m buffer fosfaL pP 73 m pelleL bakLerl dllaruLkan dalam 4 m buffer fosfaL pP 73 m
Sebanyak 1 m laruLan lnokulum (108mg/m) dlLambahkan kedalam
130 m medlum Cn87 yang maslngmaslng mengandung AP
fenanLren 1000 ppm
Sebanyak 1 m laruLan lnokulum (108mg/m) dlLambahkan kedalam
130 m medlum Cn87 yang maslngmaslng mengandung AP
fenanLren 1000 ppm
Sebagal konLrol abloLlk dlgunakan medlum Cn87 yang
mengandung AP Lanpa dllnokulasl dengan bakLerl
Sebagal konLrol abloLlk dlgunakan medlum Cn87 yang
mengandung AP Lanpa dllnokulasl dengan bakLerl
ulLur dllnkubasl pada roLary shaker" suhu 30oC dan
dllakukan pengukuran perLumbuhan dengan
spekLromeLer uv/vlslble pan[ang gelombang 660 nm
ulLur dllnkubasl pada roLary shaker" suhu 30oC dan
dllakukan pengukuran perLumbuhan dengan
spekLromeLer uv/vlslble pan[ang gelombang 660 nm
emanenan dua kall dalam semlnggu dllakukan unLuk
mendeLeksl konsenLrasl fenanLren yang Lerslsa ulLlvasl
dlhenLlkan keLlka graflk perLumbuhan sudah mengalaml
penurunan
emanenan dua kall dalam semlnggu dllakukan unLuk
mendeLeksl konsenLrasl fenanLren yang Lerslsa ulLlvasl
dlhenLlkan keLlka graflk perLumbuhan sudah mengalaml
penurunan
reparasl sampel yang dlgunakan unLuk anallsls CC/CCMass
dllakukan sebagal berlkuL sebanyak 3 m laruLan kulLur dleksLrak
dengan dlkloromeLan kemudlan dlambll fasa organlknya
selan[uLnya unLuk menghllangkan kandungan alr dlLambahkan
naLrlum sulfaL
reparasl sampel yang dlgunakan unLuk anallsls CC/CCMass
dllakukan sebagal berlkuL sebanyak 3 m laruLan kulLur dleksLrak
dengan dlkloromeLan kemudlan dlambll fasa organlknya
selan[uLnya unLuk menghllangkan kandungan alr dlLambahkan
naLrlum sulfaL
ase organlk dlpekaLkan hlngga volume akhlr 1 m ConLoh
slap dlanallsls menggunakan CC dan CCMass
ase organlk dlpekaLkan hlngga volume akhlr 1 m ConLoh
slap dlanallsls menggunakan CC dan CCMass
em|ahan Senyawa
na|| 8|odegrada|
pemanenan Lerhadap kulLur seudomonas sp al3b22
pada harl ke29
pemanenan Lerhadap kulLur seudomonas sp al3b22
pada harl ke29
aruLan kulLur selan[uLnya dleksLrak dengan pelaruL
dlkloromeLan kemudlan dlevaporasl dan eksLrak
dlfrakslnasl menggunakan kromaLografl kolom
aruLan kulLur selan[uLnya dleksLrak dengan pelaruL
dlkloromeLan kemudlan dlevaporasl dan eksLrak
dlfrakslnasl menggunakan kromaLografl kolom
romaLografl kolom slllka gel dengan elusl gradlen
heksaneLll aseLaL dlgunakan unLuk memlsahkan
frakslfraksl produk konversl
romaLografl kolom slllka gel dengan elusl gradlen
heksaneLll aseLaL dlgunakan unLuk memlsahkan
frakslfraksl produk konversl
frakslfraksl hasll kromaLografl kolom dlanallsls
menggunakan kromaLografl lapls Llpls unLuk
menenLukan fraksl produk konversl Sebagal penampak
noda dlgunakan slnar uv
frakslfraksl hasll kromaLografl kolom dlanallsls
menggunakan kromaLografl lapls Llpls unLuk
menenLukan fraksl produk konversl Sebagal penampak
noda dlgunakan slnar uv
Ana||| roduk
8|odegrada|
rakslfraksl hasll pemlsahan dengan kromaLografl kolom
slllka gel sesudah dlkerlngkan dlambll sedlklL dan dlcampur
dengan serbuk 8r dan dlhaluskan kemudlan langsung
dlmasukkan sample plaLe" dan dllakukan pengukuran
rakslfraksl hasll pemlsahan dengan kromaLografl kolom
slllka gel sesudah dlkerlngkan dlambll sedlklL dan dlcampur
dengan serbuk 8r dan dlhaluskan kemudlan langsung
dlmasukkan sample plaLe" dan dllakukan pengukuran
Anallsls Cas ChromaLography SpecLroscopy Massa" Lerhadap
eksLrak hasll fermenLasl dllakukan berdasarkan meLode
eLrosca menggunakan kolom kapller deLekLor lu suhu awal
80oC dan suhu makslmum 323oC Cas pembawa adalah gas
hellum dengan Lekanan 1936 psl dengan kecepaLan allran 332
m/mln
Anallsls Cas ChromaLography SpecLroscopy Massa" Lerhadap
eksLrak hasll fermenLasl dllakukan berdasarkan meLode
eLrosca menggunakan kolom kapller deLekLor lu suhu awal
80oC dan suhu makslmum 323oC Cas pembawa adalah gas
hellum dengan Lekanan 1936 psl dengan kecepaLan allran 332
m/mln
Pasll engamaLan Pasll engamaLan
uarl hasll skrlnlng bakLerl
pendegradasl fenanLren dlperoleh
lsolaL dengan warna krem yang
memberlkan zona pada u[l subllmasl
dengan fenanLren
ldenLlflkasl dengan anallsls
16SrunA darl lsolaL LersebuL
menun[ukkan [enls 9eoJomooo sp
al3b22
Gambar 1 Io|at ka| 3b22 da|am Med|a onr
7 (A) danMar|ne Agar (8)
lsolasl Mlkroba
an[uLan an[uLan
Anallsls konsenLrasl slsa fenanLren hasll
blodegradasl 9eoJomooo al3b22
dllakukan dengan menggunakan romaLografl
Cas
u[l 8lodegradasl u[l 8lodegradasl
uegradasl fenanLren berlangsung cepaL
pada 2 harl perLama kulLlvasl dlmana Ler[adl
penurunan konsenLrasl hlngga 444
Selan[uLnya hlngga harl ke29 penurunan
konsenLrasl fenanLren mencapal 393 Pasll
LersebuL membukLlkan bahwa meLabollsme
fenanLren pada bakLerl 9eoJomooo
kol9b22 makslmal pada 2 harl kulLlvasl
ada harl selan[uLnya
meLabollsme fenanLren sangaL lambaL
Plngga harl ke29 bakLerl lnl Lldak mampu
mendegradasl fenanLren secara LoLal unLuk
mendegradasl hldrokarbon secara sempurna
dlperlukan opLlmasl balk darl segl llngkungan
(pPnuLrlen okslgen suhu) maupun darl
mlkrobanya sendlrl dllakukan rekayasa
geneLlka dan penggunaan konsorslum 8
an[uLan an[uLan
Gambar 2 Graf|k 8|odegrada| Ienantren o|eh
8akter|Pseudomonos sp ko/Plb22
8|odegrada| Ienantren |o|at ka|3b22
120
100
80
0
40
20
0
0 5 10 15 20 25 l0 l5
nar|
kontro/

I
e
n
a
n
t
r
e

Lineor kontro/ ku/tur
emlsahan senyawa hasll fermenLasl menggunakan
kromaLografl kolom menghasllkan 4 fraksl raksl 1
menggunakan eluenheksan 100 fraksl 2 heksaneLll aseLaL
(31) fraksl 3heksaneLll aseLaL (41) dan fraksl 4 heksaneLll
aseLaL (11) Anallsls 1C fraksl 1 dan 2 mempunyal wakLu
reLensl sama dengan fenanLren (06) sedangkan fraksl 3 dan 4
mempunyal wakLu reLensl (03)
Anallsls roduk
onversl
Anallsls kromaLogram CCMass senyawa hasll blodegradasl
fenanLren menun[ukkan 2 puncak penLlng puncak 1 pada wakLu reLensl
1316 menlL dan puncak 2 pada wakLu reLensl 2133 menlL
Anallsls spekLra massa menggunakan lnLernal sLandar menun[ukkan
bahwa senyawa dengan wakLu reLensl 1316 menlL adalah nafLalenol
sedangkan senyawa dengan wakLu reLensl 2133 menlL adalah fenanLren
Cambar 4 dl bawah lnl merupakan spekLra massa senyawa nafLalenol
uarl hasll anallsls LersebuL memberlkan bukLl bahwabakLerl
9eoJomooo kolb22 mampu mendegradasl fenanLren men[adl
senyawa nafLalenol
an[uLan an[uLan
Gambar 3 em|ahan Senyawa na|| 8|odegrada|
Ienantren nar| ke29 Menggunakan GCMa
eslmpulan
uarl penellLlan lnl dapaL dlslmpulkan bahwa
bakLerl lauL asal umal seudomonas sp al 3b22
merupakan [enls yang poLenslal unLuk dlkembangkan
men[adl bakLerl blodegradaLor AP uengan model
molekul fenanLren LerbukLl bakLerl lnl mampu
mendegradasl hlngga Lahap pembukaan clncln
aromaLlk enellLlan geneLlka funcLlonal gene" dan
enzlmologl sangaL dlperlukan unLuk mengeLahul
kemampuan pendegradaslannya secara menyeluruh