Replicao Bidirecional A partir de cada origem de replicao formam-se duas forquilhas que permitem a replicao bidirecional.

As protenas que participam da replicao afastam progressivamente as fitas de DNA, a partir do espao criado na origem de replicao. Assim, a extenso de fita molde vai se ampliando e permitindo a entrada de nucleotdeos complementares que se orientam espontaneamente no sentido anti-paralelo ao da fita molde (Figura 21). A velocidade de deslocamento das forquilhas grande, no DNA humano estima-se que seja de 100 pb/segundo e em bactrias dez vezes mais rpido.

Para que a replicao ocorra, a DNA polimerase deve se associar fita molde do DNA e se deslocar sobre ela, realizando as ligaes fosfodister entre os nucleotdeos livres que parearam com as bases da fita molde. A DNA polimerase sempre faz a ligao de um novo nucleotdeo a partir da extremidade 3- OH livre do ltimo nucleotdeo, por isso, costuma-se dizer que a fita nova do DNA cresce da extremidade 5 para a extremidade 3 e que a DNA polimerase se desloca na fita nova de 5para 3.

Cada uma das fitas da dupla hlice tem sua polaridade definida pelo modo como as pentoses esto posicionadas - enquanto uma fita tem orientao 5-3a outra tm orientao 35. A mesma orientao anti-paralela mantida na fita nova que se forma durante a replicao do DNA. Assim, apenas uma das fitas novas ter a extremidade 3-OH livre voltada para a direo em que a forquilha de replicao se move. Como a DNA polimerase s pode adicionar novos nucleotdeos em uma extremidade 3-OH livre, uma das fitas novas crescer acompanhando a forquilha de replicao e a outra ser produzida em direo oposta ao do deslocamento da forquilha.

A fita nova com a extremidade 3-OH livre voltada para a direo oposta ao deslocamento da forquilha de replicao ter crescimento descontnuo, ser produzida aos poucos, em pequenos pedaos denominados fragmentos de Okazaki.

Nessa fita, a DNA polimerase se ligar fita molde e se deslocar em sentido oposto ao da abertura da forquilha, sendo necessrio que periodicamente abandone a fita molde, retorne forquilha de replicao e novamente se ligue fita molde, sintetizando um novo trecho de DNA. A velocidade de replicao da fita com extremidade 3-OH livre voltada para fora da forquilha menor e por isso ela TAMBM denominada de fita retardatria. A outra fita, que tem extremidade 3-OH livre voltada para dentro da forquilha, denominada de fita lder. Os pareamentos entre as bases A-T e C-G so ditos obrigatrios, embora esses sejam apenas os pareamentos mais estveis que se pode obter entre purinas e pirimidinas. Eventualmente, outros tipos de pareamentos podem se formar, por exemplo, pares G-T, G-A ou U-G. Esses pares so bem menos estveis, mas que se no fossem detectados como erros de pareamento causariam grandes alteraes na informao gentica transmitida de uma clula para outra. A DNA polimerase tem atividade revisora, ou seja, capaz de verificar se os nucleotdeos da fita nova esto corretamente pareados com a fita molde. A atividade revisora (ou mecanismo de reviso, verificao ou proofreading) permite que antes de realizar adio de um novo nucleotdeo, a DNA polimerase verifique se o ltimo nucleotdeo que foi ligado fita de DNA nascente est corretamente pareado com a fita molde. Se o pareamento estiver incorreto, a DNA polimerase desfaz a ligao fosfodister e o nucleotdeo mal pareado desligado da cadeia de DNA em formao. A capacidade de remover nucleotdeos da extremidade da fita de DNA nascente corresponde atividade de nuclease da DNA polimerase. Essa enzima, portanto capaz de realizar duas atividades bem diferentes: realiza polimerizao de nucleotdeos no sentido 5-3 e degrada a fita de DNA (remove nucleotdeos) no sentido 3-5 . A atividade de reviso que a DNA polimerase executa antes da adio de um novo nucleotdeo obrigatria. Se no existir ligao para revisar, a DNA polimerase tambm no pode fazer polimerizao. necessrio que exista sempre alguns nucleotdeos j ligados entre si e pareados com a fita molde, para que e DNA polimerase possa atuar. Esse pequeno trecho de fita nova, pareada com a fita molde, fornece a extremidade 3-OH livre, para que a DNA polimerase possa adicionar o prximo nucleotdeo. A DNA polimerase no faz sntese de novo, porque necessita de um pequeno fragmento que fornea a extremidade 3-OH livre para iniciar sua atividade. Isso significa

dizer que a DNA polimerase no pode iniciar a construo da nova fita de DNA, ligando entre si os dois primeiros nucleotdeos. O pequeno segmento de fita nova que permite a ao da DNA polimerase recebe o nome de primer ou seqncia iniciadora. Essa seqncia de nucleotdeos fornece os pareamentos necessrios para a atividade de reviso da DNA polimerase e a extremidade 3OH livre para a polimerizao. Como nenhuma DNA polimerase faz sntese de novo, a enzima que faz a ligao entre os primeiros nucleotdeos que iniciam a sntese de uma nova fita de DNA (primer) pertence outra classe. Essa enzima, denominada de primase, classificada como RNA polimerase pois utiliza como substrato ribonucleotdeos. Na verdade, cada nova fita de DNA iniciada por um pequeno trecho de RNA, aproximadamente 10 ribonucleotdeos ligados entre si e complementares fita molde de DNA.

Para a fita lder (fita nova que cresce acompanhando o deslocamento da forquilha de replicao) necessrio apenas um primer na origem de replicao. A DNA polimerase se liga extremidade 3-OH livre dessa seqncia de ribonucleotdeos e passa a fazer as ligaes entre os desoxirribonucleotdeos complementares a fita molde, acompanhando a abertura da forquilha de replicao. Na fita retardatria ou descontnua, necessrio que, periodicamente, a primase adicione um novo primer. A partir de cada primer construdo um fragmento de fita nova de DNA, mas como o deslocamento da DNA polimerase no sentido contrrio ao da abertura da forquilha de replicao, logo a enzima no encontra mais fita molde disponvel e abandona o DNA. Para produzir uma fita nova complementar a fita molde que foi recm exposta pelo deslocamento da forquilha, preciso ocorrer a adio de um novo primer. Os fragmentos de DNA que compem a fita de DNA com replicao descontnua so chamados de Fragmentos de OKazaki. A fita com replicao descontnua transformada em uma fita de DNA completa, sem interrupes e sem ribonucleotdeos atravs da atividade de outras trs enzimas. A remoo do primer feita por uma nuclease (enzima que destri cidos nuclicos, removendo nucleotdeos) e uma D NA polimerase especial, denominada de polimerase de reparo, faz a ligao entre os dessoxirribonucleotdeos complementares regio antes ocupada pelo primer. Finalmente, a DNA-ligase faz a unio entre a extremidade 5de um fragmento e a e extremidade 3do outro, eliminando as interrupes que existiam na fita retardatria.

A primase, como toda RNA polimerase, no possui atividade revisora e os primers podem conter vrios erros de pareamento, isso porm no constitui fonte de mutaes uma vez que todos os primers so removidos e substitudos. As ligaes entre os novos nucleotdeos que substiuem o primer so feitas pela DNA polimerases que atuam no reparo de DNA e que possuem atividade revisora. A abertura da dupla hlice depende da atividade de enzimas denominadas DNA-helicases, que catalisam o desenrolamento do DNA (Figura 30).

A deficincia de atividade de DNA-Helicase durante muito tempo foi associada a um distrbio raro, conhecido como Sndrome de Hutchinson-Gilford (Figura 31). O envelhecimento precoce sem dvida a caracterstica mais notvel dessa sndrome. A hiptese era que o mal funcionamento da helicase seria responvel por renovao deficiente dos tecidos. Em 2002, finalmente foi identificado o gene relacionado a esse distrbio e no um gene para helicase. A hipsete original no foi confirmada. A protena associada e esse tipo de progeria pertence famlia das lamininas e se localiza na membrana nuclear.

As fitas simples que so produzidas pela passagem da helicase rapidamente tornariam a se associar se no fosse a presena de protenas que se ligam fita simples. So essas protenas, denominadas de SSB (single-strand DNA-binding proteins), que evitam a formao de pontes de hidrognio entre as bases das fitas molde (Figura 32).

Tambm participa da replicao uma protena, denominada de grampo deslizante que forma um anel em torno da fita molde e faz com que a DNA polimerase fique firmemente associada ao DNA molde (Figura 33). Na fita com replicao descontnua, o grampo deslizante libera a DNa polimerase, cada vez que chega em um fragmento j pronto. A frente da forquilha de replicao de deslocam as girases, enzimas classificadas como topoisomerases, que reconhecem as regies em que a dupla hlice do DNA est apresentando maior toro. necessrio lembrar que a ao da helicase, ao abrir a dupla hlice de DNA, faz com que as voltas removidas da regio aberta sejam transferidas para frente. (Situao semelhante pode ser observada quando tentamos separar um fio de l afastando os fios menores. Se o fio tiver apenas alguns centmetros e possuir extremidades livres, a separao far com que as extremidades girem. Se o fio for muito longo, a abertura provocara a formao de dobramentos nas regies frente da abertura). http://www.ufsm.br/blg220/hide/replic7.htm