LOGO

BEBERAPA PENCAPAIAN DALAM BIOTEKNOLOGI

ANA INDRAYATI

LOGO

INSULIN REKOMBINAN

Struktur insulin

LOGO

Proinsulin: rantai A, B, C Insulin: rantai A dan B Rantai A: 21 aa

Rantai B: 30 aa
Dihubungkan oleh ikatan disulfida

Sumber: Terapi Untuk Defisiensi Insulin 06/27/2010 oleh Sarmoko

LOGO

Sumber: Terapi Untuk Defisiensi Insulin 06/27/2010 oleh Sarmoko

Produksi insulin

LOGO

Modifikasi insulin

LOGO

Meningkatkan waktu paro

Mudah berikatan dengan reseptornya sehingg aktivitas meningkat

Metode: site directed mutagenesis (SDM)

Sumber: Terapi Untuk Defisiensi Insulin 06/27/2010 oleh Sarmoko

LOGO

VAKSIN DNA

Vaksinasi

LOGO

Pemberian suatu antigen (= zat yang merangsang sistem imun, dihasilkan bakteri atau virus) atau senyawa imunogenik (mikroorganisme/ bagian dari mikroorganisme) yang tidak berbahaya tetapi tetap memiliki determinan antigenik yang sama dengan mikroba patogen yang utuh/virulen untukmemberikan kekebalan terhadap penyakit tertentu
Menginduksi sistem imun humoral atau seluler atau keduanya

Mekanisme kerja vaksin

LOGO

Jenis-jenis vaksin

LOGO

1. Killed vaksin (virus atau bakteri yang telah dimatikan), zat kimia, panas, Contoh: polio, hepatitis A
2. Attenuated vaksin (virus atau bakteri dilemahkan), contoh: MMR (measle, mumps, rubela) 3. Toksoid (toksin yang diinaktifkan, contoh: tetanus, difteri 4. Conjugate vaksin ( konjugasi polisakarida dengan protein, meningkatkan respon imun), contoh: Haemophilus influenzae tipe B 5. Vaksin DNA

Pembuatan vaksin DNA

1

LOGO

Gen virus

Plasmid ekspresi DNA rekombinan Purifikasi DNA rekombinan

Siap digunakan DNA rekombinan Amplifikasi DNA rekombinan

Sumber: NEERAJ KUMAR, AVTAR, (student), JI TENDER MEHLA (Research Scholar), NDRI, and Dr. S.K. Sood, Senior scientist, NDRI, Karnal

Rute pemberian
Injeksi: intramuskular

LOGO

intradermal

Gene gun:

DNA rekombinan dibungkus partikel emas

Ditembakkan ke organ target

Mekanisme kerja
Jalur endogen Jalur eksogen

LOGO

Nucleus

DNA rek MHC-I mRNA Antigenic Peptides Antigenic Protein

Protein antigen keluar dari sel

Sumber: NEERAJ KUMAR, AVTAR, (student), JI TENDER MEHLA (Research Scholar), NDRI, and Dr. S.K. Sood, Senior scientist, NDRI, Karnal

LOGO

ANTIBODI MONOKLONAL

Antibodi
benda asing atau antigententara Berada dalam sistem sirkulasi

LOGO

Pertahanan alami tubuh sebagai respon terhadap masuknya

Pada saat antigen masuk ke dalam tubuh tubuh akan merespon

dengan mensintesis berbagai macam antibodi Sel B merupakan sel di dalam tubuh yang menghasilkan antibodi Antigen berikatan dengan reseptor sel B dan menginduksi sel B untuk menghasilkan antibodi spesifik terhadap antigen tersebut Bagian dari antigen tempat antibodi berikatan disebut epitop Satu antigen seringkali memiliki beberapa epitop

Struktur antibodi

LOGO

Epitop dan paratop

LOGO

Paratop: sisi pada antibodi tempat epitop berikatan

Epitop: sisi pada antigen tempat paratop berikatan

Antibodi poliklonal dan monoklonal

LOGO

Antibodi poliklonal: antibodi yang mengenali banyak epitop dari antigen Antibodi monoklonal: antibodi yang hanya mengenali satu epitop dari antigen

Produksi antibodi
Poliklonal Kelinci diimunisasi dengan antigen tertentu

LOGO

Monoklonal Teknologi hibridoma Khler dan Milstein et al (Nobel Prize 1984)

Antibodi dihasilkan
Kelinci dimatikan Antibodi diambil dari serum darah Serum:

Teknologi hibridoma

LOGO

Wikipedia

Teknologi hibridoma-produksi mAb

LOGO

Imunisasi mencit dengan antigen X, antibodi terhadap antigen X dihasilkan oleh sel B Isolasi dan seleksi sel B penghasil antibodi tehadap X dari limfe mencit Penggabungan sel B dengan sel mieloma (sel kanker) pada kultur sel dengan PEG (polietilen glikol)
Sel B: umurnya pendek-penghasil antibodi Sel mieloma: imortal-dapat dibiakkan terus menerus

Penggabungan antara sel B dengan sel mieloma menghasilkan sel hibrid Seleksi sel hibridoma Sel hibridoma di kultivasi untuk menghasilkan mAb terhadap antigen X Produksi mAb

Seleksi sel hibridoma

Sel B
HGPRT positif (HGPRT: hypoxanthine phosphoribosyl transferase) merupakan enzim untuk sintesis basa purin/DNA jalur salvage) Sintesis DNA: jalur salvage dan jalur de novo

LOGO

Sel B mampu sintesis DNA dari jalur salvage (HGPRT positif) dan de novo

Sel mieloma
HGPRT negatif (jalur salvage off) Jalur de novo on

Medium HAT (hipoxantine, aminopterin, timidin)

Aminopterin menghambat sintesis DNA jalur de novo, sel dipaksa sintesis melalui jalur salvage

Sel B: mati (umurnya pendek) Sel mieloma: mati (HGPRT negatif sehingga jalur salvage off) Sel hibridoma: hidup (HGPRT positif sehingga jalur salvage on)

LOGO

Salvage De Novo

Produksi Mab

LOGO

In vitro: sel hibridoma ditumbuhkan pada jaringan/sel kultur, antibodi dipanen dari supernatan In vivo: sel hibridoma ditransplantasikan pada hewan atau tanaman

Contoh mAb-Onkologi

LOGO

Rituximab

LOGO

Rituximab- mAb terapi kanker limfoma non Hodgkin Setiap sel memiliki protein penanda yang disebut antigen Rituximab mengenali protein penanda C20 yang ada pada permukaan sel B abnormal (ditemukan pada limfoma) Rituximab menyerang sel limfoma

LOGO

RNA ANTISENSE

RNA antisense

LOGO

Mulai dikembangkan: 1978 Antisense berikatan spesifik dengan mRNA Menghambat translasi Degradasi mRNA oleh RNAase H (ada di dalam dan luar nukleus) Menghentikan pembacaan informasi yang ada mRNA (sintesis protein di ribosom)

RNA antisense-pengobatan kanker

LOGO

Ekspresi gen: DNAmRNA-protein Genta scientists: mengisolasi mRNA Bcl-2 (protein regulator sel kanker) DNA komplemen mRNA 12-22 basa-obat Duplek DNA/mRNA Translasi dihambat, protein Bcl-2 tidak dapat disintesis

LOGO

TERAPI GEN

Terapi gen
Teknik terapi-memperbaiki gen abnormal (mutan/ cacat) penyebab penyakit Awal: mutasi pada satu gen
sistik fibrosis mengganti gen yang rusak

LOGO

Berkembang: mutasi pada banyak gen

Kanker rekombinasi homolog mencegah ekspresi gen abnormal mutasi balik selektif sehingga gen abnormal berfungsi kembali

Terapi gen: wikipedia

Metode terapi gen

Pengantaran langsung
Gen terapi dibungkus liposom, mikropartikel,virus (retrovirus, adenovirus, virus herpes, cacar dll Dimasukkan ke jaringan atau pembuluh darah penderita

LOGO

Penghantaran tidak langsung: sel hidup

sel rusak penderita diambil dibiakkan di laboratorium Sel diinfeksi dengan virus pembawa gen terapi Virus dimasukkan ke dalam sel, menembakkan gen terapi tersebut ke dalam rantai DNA sel yang dituju

Penghantaran: Stem cell (sel punca)

Sel punca hematopoietic: sumsum tulang

LOGO

LOGO

http://encarta.msn.com/media_461561269/Gene_Therapy.html

Perkembangan terkini terapi gen

Parkinson

LOGO

Tubuh gemetar, kaku, dan bergerak lambat sebagian sel otak matiGABA rendah Gen pengkode GABA yang dibawa virus disuntikkan ke sel otak penderita parkinson

Depresi berat
Kadar protein p11(menimbulkan rasa senang) rendah Gen pengkode p11 dibawa virus disuntikkan ke sel otak

Kebutaan
gen RPE65: penyebab kebutaan Lebers congenital amaurosis.

LOGO

Jagung transgenik Teknologi terminator /Technology Protection System (TPS)

BIOTEKNOLOGI DI BIDANG PERTANIAN

Gen-gen pada TPS

LOGO

Gen 1: gen represor mengkode protein represor, berikatan pada binding site dekat gen 2

Gen 2: gen rekombinase, mengkode protein rekombinase, enzim yang memotong fragmen DNA dikendalikan oleh promotor rekombinase Gen 3: gen toksin, mengkode protein toksin, menyebabkan biji steril, dikendalikan oleh late promotor gen toksin diekspresikan pada embriogenesis akhir
Inducer: senyawa kimia yang digunakan perusahaan sehingga terjadi interaksi ketiga gen untuk menghasilkan biji steril

Perusahaan-tidak menginginkan gen terminator bekerja

LOGO

Menghasilkan biji fertil Induser tidak ada Protein represor dihasilkan berikatan pada binding site gen 2 sehingga menghalangi dihasilkannya protein rekombinase Dengan tidak dihasilkannya protein rekombinase maka bloker tidak akan dipotong dari gen 3 dan toksin tidak terbentuk Perusahaan memproduksi banyak biji yang akan dijual ke petani

Perusahaan-menginginkan gen terminator bekerja

Menghasilkan biji steril

LOGO

Sebelum biji dijual ke petani, ditambahkan induser (disemprot) Induser berikatan pada binding site, menghambat kompleks protein represor-binding site Gen 2 diekspresikan menghasilkan protein rekombinase Protein rekombinase memotong blocker sehingga gen toksin diekspresikan oleh late promotor menghasilkan toksin Petani: mendapatkan biji steril, sehingga harus selalu membeli biji fertil ke perusahaan untuk ditanam

LOGO

JAGUNG TRANSGENIK-JAGUNG BT (BACILLUS THURINGIENSIS)

LOGO

Mekanisme Kerja Toksin Bt

LOGO

Mekanisme Kerja Toksin Bt

LOGO

Toksin dimakan serangga-aktivasi protoksin oleh protease (saluran pencernaan, pH basa)

Aktif toksin menembus membran ususberikatan dengan reseptor spesifik

Pembentukan pori pada membran epitelketidakseimban gan konsentrasi ion-LISIS sel

Sisa tubuh serangga sebagai substrat untuk sporulasi BtSiklus hidup berlanjut

Reseptor: brush border membrane vesicles (BBMV) aminopeptidase N dan famili cadherin
Ronald D. F., C. G. Yua, M. John, M. Terry, S. Xiaomei, A. Herbert , A. Siqueirab, and S.D. Blair , 2005, Identifi cation, cloning and expression of a Cry1Ab cadherinreceptor from European corn borer, Ostrinia nubilalis (Hbner)(Lepidoptera: Crambidae), Insect Biochemistry and Molecular Biology, 35:1. pp. 33-40. doi:10.1016/j.ibmb.2004.10.001.

LOGO
Jagung Bt Jagung non Bt

LOGO

Thank You!
www.themegallery.com

LOGO

Bagaimana teknologi RNA antisense dapat digunakan untuk pengobatan kanker Jelaskan perbedaan strategi terapi gen in vivo dan ex vivo Jelaskan tujuan teknologi protection system