Ana Indrayati

Pengertian teknologi DNA rekombinan (kloning)

Komponen kloning
• Vektor • Enzim restriksi • DNA ligase • Sel kompeten • DNA donor (sisipan)

Tahapan kloning


Cara seleksi hasil kloning
Karakterisasi hasil kloning

Genomik/kromosom:

karena terdapat di dalam
kromosom

Ekstrakromosom: terdapat diluar kromosom-PLASMID
• Sirkuler/ bulat • Dapat bereplikasi

sendiri (karena mempunyai origin of replication /ori)

Rekayasa genetika

DNA kloning: perbanyakan gen di dalam suatu sel
yang bukan inang alamiah/aslinya Pembentukan molekul DNA baru yang disebut molekul

DNA rekombinan-penyisipan molekul DNA ke dalam
suatu vektor sehingga memungkinkan molekul rekombinan tersebut untuk terintegrasi dan mengalami

perbanyakan di dalam sel inang

ENZIM RESTRIKSI: ENZIM YANG DAPAT MEMOTONG DNA PADA URUTAN YANG SPESIFIK ENZIM DNA LIGASE: ENZIM YANG DAPAT MENYAMBUNGKAN POTONGAN DNA DNA REKOMBINAN: DNA YANG BERASAL DARI MOLEKUL DNA ASING YANG DISISIPKAN KE DALAM SUATU PLASMID/VEKTOR PLASMID: MOLEKUL DNA SIRKULER, EKSTRAKROMOSOM, DAPAT BEREPLIKASI SENDIRI TRANSFORMASI: PROSES MEMASUKKAN DNA REKOMBINAN KE DALAM SEL INANG


KLONING: PROSES PERBANYAKAN DNA REKOMBINAN DI DALAM SEL INANG
KLON: KUMPULAN SEL YANG MEMBAWA PLASMID REKOMBINAN YANG SAMA

  

DNA DONOR: DNA YANG AKAN DIKLON ENZIM RESTRIKSI PLASMID/VEKTOR - VEKTOR KLONING: MEMPEBANYAK DNA DNA LIGASE SEL INANG

 

    

ISOLASI DAN PERBANYAKAN DNA: PCR PEMOTONGAN DENGAN ENZIM RESTRIKSI LIGASI DENGAN ENZIM DNA LIGASE TRANSFORMASI KE DALAM SEL INANG KARAKTERISASI KLON HASIL TRANSFORMASI

Sisi pengenalan

enzim restriksi

Urutan nukleotida rantai atas=urutan

nukleotida rantai
bawah Sisi pengenalan enzim

restriksi

DNA (enzim restriksi) 5’- NNNGAATTCNNN -3’ 3’- NNNCTTAAGNNN -5’ EcoRI 5’- NNNG 3’- NNNCTTAA AATTCNNN -3’ GNNN -5’

DNA (ligase) 5’- NNNGOH 3’- NNNCTTAAP
PAATTCNNN

-3’

OHGNNN

-5’

ligase 5’- NNNGAATTCNNN -3’ 3’- NNNCTTAAGNNN -5’

Sel yang siap

menerima DNA
dari luar

CaCl2 meningkatkan permeabilitas membran sel bakteri

Heat shock/kejut panas 42oC. 90 detik

   

Analisis migrasi Analisis restriksi: enzim restriksi PCR DNA sekuensing

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful