TOXINES BACTERIENNES

Pr. A.SAMB C.E.S (2005-2006) (2005-

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DEFINITION :  Protine enzymatique  Fonction de catalyseur  Responsable de symptomes cliniques  Modes daction : -Extrieur de la cellule cible : liaison a : 1 rcepteur Formant des PORES - Translocation et action Intra- cellulaire spcifique Intra-

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Interets : Thrapeutique : Traitement des anomalies motrices ( strabisme ; remodelage esthtique ; dystonies ) Traitement K ( Tox diphtrique ) Agronomie : Prvention insecticides dangereux Militaire : Arme biologique ( charbon ; botulisme) Biologie Molculaire : Outils

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Bactries Toxignes et maladies
Maladies Bactries

Diphtrie Ttanos Botulisme Cholra Charbon Choc septique Gangrene gaz

Corynebacterium diphteriae Clostridium tetani Clostridium botulinum Vibrion cholerique Bacillus anthracis Staph aureus et Strepto pyogenes Clostridium perfringens

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DIFFERENTS TYPES DE TOXINES

Libre des bactries en division ou lyses par la rponse immunitaire (rle dans le choc des tats septiques )

Endotoxine LPS: associ a la paroi LPS:

Exotoxine:
Protine extracellulaire secrte par les bactries

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METHODES DETUDES  Extraction : -Surnageant de culture -Lysat bactrien  Purification: - lectrophorse - Chromatographie - Ultracentrifugation ; electrofocalisation

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METHODES DETUDES: Rsultats :



    

Proprits physiques: Thermolabilit Sensibilit suc gastriques ; Acides ; ure Proprits Chimiques: Holoprotines - Monocatnaires - Bicatnaires - Plusieurs chanes

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METHODES DETUDES: Rsultats :



Proprits biologiques - Cytotoxicit Spcifique ( ex : neurones ) Large ( mort non spcifique = ncrose ) - Cytotoxicit influence par : Terrain ( Age ; sexe ; race ) Dose et voie Fivre et tat de jeun

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DETERMINATION ACTIVITE TOXIQUE : TITRAGE

Matriel : Animal Culture de cellule Mthode : Directe /Animal ou cellules : Recherche un pouvoir lethal D.M.M ou DL50 DH50 DMR Rsultats : 1mg de tox ; tue 1000t de matires vivantes Indirecte : Recherche dune proprit antignique FLOCULATION Matriel : Srum talon en UI Mthode in vitro U.F Rsultats : 1UF = 0.03mg danatoxine de Copenhague

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CLASSIFICATION DES EXOTOXINES I) Selon mode daction sur membrane cellulaire

Fixation sur rcepteur non spcifique  Fixation sur rcepteur non spcifique en formant des PORES  Fixation sur rcepteurs spcifiques


II) Actifs sur les lymphocytes T = Superantignes III) Translocation et action /cible intra cellulaire spcifique. spcifique.

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CLASSIFICATION SELON MODE DACTION

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I
TOXINES AGISSANT sur la SURFACE MEMBRANE CELLULAIRE

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CLASSIFICATION DES EXOTOXINES

Agissant sur rcepteur membrane cellule NON SPECIFIQUE (1) Structure : Enzymatique PHOSPHOLIPIDES
Effet sur cellule : Lyse Effet sur lhte : lyse , gangrne ; diffusion de linfection EX: Phospholipase de C .perfringens = E toxine Phospholipase C de pseudomonas

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CLASSIFICATION DES EXOTOXINES

Agissant sur rcepteur membrane NON SPECIFIQUE (2) CHOLESTEROL avec FORMATION DE PORES ( HEMOLYSINES)

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CLASSIFICATION DES EXOTOXINES

HEMOLYSINES Effet sur cellule: Hmolyse in vitro ; mais pas effet sur le cellule: Pouvoir .pathogne. -Reconnaissance rcepteur : cholestrol Mcanisme ? Oligomres Insertion sur membrane et changement conformation Formation de pores Lyse cellulaire Effet sur l hte : Diffusion de linfection ; dtruit les macrophages ; fuite de K EX : Bactries GRAM ( +) extra cell; ( Strepto , SLO ) ;bacillus ; listria ;bacillus

TOXINES BACTERIENNES Hmolysines

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CLASSIFICATION DES EXOTOXINES Agissant sur rcepteur membrane SPECIFIQUES (1) PROTEINES TRANSMEMBRANAIRES

GUANINE Structure: Enzyme (Guanilate cyclase )

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CLASSIFICATION DES EXOTOXINES

Fixation sur rcepteur spcifique membrane GUANINE : Activit guanilate cyclase Activit : Catalyse formation grande quantit de Guanine Monophosphate : (GMP) (G Consquence : Sur la cellule : Hyperscrtion de chlore Chez l hte : Hyperscrtion deau et lectrolytes EX / ST de E.Coli

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CLASSIFICATION DES EXOTOXINES

Agissant sur rcepteur membrane

SPECIFIQUE(2) les lymphocytes T: Superantignes Activit ; Sur la cellule: Dtournement de prsentation Ag

Libration massive de Cytokines IL1-2-TNF IL1Sur lhote : Fivre Choc Ex : TSS1 Staphylocoque Toxine scarlatine

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Lymphocyte T RecepteurT Toxine superantigene Ev Ag FV Molcule bivalente

MHC classe II Molecule Macrophage

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CLASSIFICATION DES EXOTOXINES

II
TOXINE AGISSANT SUR CIBLE INTRACELLULAIRE SPECIFIQUE

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Toxine a cible intra cellulaire spcifique .Structure: Structure: Plusieurs domaines A= catalyseur : Toxicit B= fixation sur rcepteur cellulaire et facilite translocation A pour atteindre la cible

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III Toxine a cible intra cellulaire spcifique Activit:: On connat 4 activits enzymatiques


1) ADP ribosylation de la cible avec comme rsultat : Hyperactivit ( ex : Vibrio cholrae) Inactivation : ( ex : diphtrie ; coqueluche) 2)Activit enzymatique par clivage ARN ribosomal 3) Activit enzymatique Protolytique 4) Activit enzymatique : Adnyl cyclase

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III TOXINE cible intra cellulaire spcifique Activit

entranant une 1) ADP ribosylation de la cible




Hyperactivit
( ex : Vibrio cholrae )

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Toxine cholrique = Cholra

Mcanisme daction Adhsion a lentrocytes et secrtions locale de toxine Gnes : phagique CTX comprenant A et B Structure A=: 2S/U :A1 et A2 ; A1= Pro enzyme= :A1 A1= ADP ribosylase B= 5 S/U reconnaissent le ganglioside GM1( GM1( glycolipide de surface des entrocytes )

  

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Toxine cholrique = Cholra

Mcanisme daction : Fixation de B au ganglioside GM1  Translocation de A1  Activit : ADP ribosylation de la Protine Gs qui rgule ladnylcyclase :  Consquence : -Production importante Adnyl cyclase et AMP cyclique dans lentrocyte (inhibition absorption de Na Chez lhote : fuite dlectrolytes et eau

Mcanisme daction de la toxine cholrique sur la sous unit E de la protine Gs de entrocyte

F K E GDP GTP E Adnyl cyclase

ATP

Protine Gs A1 toxine GDP E K E E GTP ADPR GTP Adenyl cyclase ATP

AMPc

AMPc

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1) ADP ribosylation de la cible entranant une

Inactivation de la cible : ( ex :
diphtrie et coqueluche ) EX: EX: Gne diphtrie : Phage F Toxine :Structure : Peptide prcurseur ( A-S-S-B) Clivage A et B A= Toxique B = liaison rcepteur membranaire .

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1) ADP ribosylation de la cible entrainant : Inactivation cible : ( ex : diphtrie) Dans la cellule

Toxine : Activit :


-Liaison B avec rcepteur : -Translocation A par endocytose et formation endosome - Baisse PH dans lendosome , changement de conformation de A ; et libration dans cytoplasme -ADP ribosylation par A de EF2

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Nicotinamide Adnine Nicotinamide Adnine
TOXINE

Ribose P

Ribose P

Ribose P

Ribose P

NAD

ADENINE DIPHOSPHATE RIBOSE

ADP RIBOSYLATION EF2 EF2

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III Translocation et action sur cible intra cellulaire spcifique


2) Activit enzymatique par clivage ARN ribosomal Clive liaison glycosidique de l adnosine de

Activit:: Activit::

LARN 28s = Inactivation de l ARN Consquence : Arrt synthse protidique Ex ; Vrotoxine (shigella ) Toxine E.C EH

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III ) Translocation et action sur cible intra cellulaire spcifique
3) Activit enzymatique Protolytique Ex: Toxine ttanique et botulinique Activit :Hydrolyse de synaptobrvines ( protines vsicules synaptiques qui librent les neurotransmetteurs) Rle chez lhote : Perturbe la transmission influx nerveux

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III Translocation et action sur cible intra cellulaire spcifique
  

4) Activit enzymatique : Adnyl cyclase EX: Bacillus anthracis Structure TOXINE : 3 protines PA = pntration antigne EF = Adnyl cyclase (facteur oedmateux) LF = Activit mtalloprotase mtalloprotase (facteur lethal )

Toxine charbonneuse = Anthrax PA LF E.F

Sortie d eau Mort cellulaire Oedeme

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CONCLUSIONS  Connaissance actuelle du mode daction dun grand nombre de toxines a permis de constater que les PROTEINES G sont les cibles les plus frquentes des toxines )  Connaissance mode daction explique : Pathologies  Outils de biologie cellulaire (connaissance neuroscrtion trafic vsiculaire )  Outils Thrapeutiques ( vaccins ; immunotoxines ):

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PROPRIETES BIOLOGIQUES DES TOXINES PROTEIQUES Selon les cibles tissulaires Neurotoxines ;( ttanos , botulisme ) entrotoxines ; ( cholrique ; LT E.coli ) nphrotoxines Pantrope ( diphtrie )

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PROPRIETES BIOLOGIQUES DES TOXINES PROTEIQUES  Selon les cibles cellulaires : Hmolysines Leucocidines  Selon la physiopathologie Toxines responsables en partie de la maladie Coqueluche gangrne gazeuse pyocyanique Peste Toxine responsable en totalit de la maladie Cholra Diphtrie Dysenterie Choc toxique staphylococcique

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PROPRIETES ANTIGENIQUES Puissants immunognes: - Transformables en anatoxine ( vaccin ) - Immunit confre nest pas dfinitive (a entretenir) - Induit des anticorps protecteurs (immun srums= antitoxines)

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PROPRIETES ANTIGENIQUES

Anatoxines : 2 types
- Toxoide naturel = toxine naturelle par transformation spontane Mcanisme transformation non lucid non utilis en mdecine humaine  -Anatoxine dtoxifie artificielle Toxine naturelle dtoxifie  Mcanisme de transformation lucid


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PROPRIETES ANTIGENIQUES: Dtoxification artificielle  Vieillissement toxine en 3 a 4 semaines En prsence de formol a 40 degrs PH : alcalin ( dipht et ttanos ) acide ( botulique)  Mutagne chimique on obtient une molcule hybride Anatoxine +Protine ou peptide ou polyoside Application : vaccins conjugus Hib PNMo ; Mngo  Peptides de synthse: synthse: Boucle de 16 AA du fragment A (tox dipht) 44 AA entrotoxines ST +26 AA entrotox LT

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PROPRIETES ANTIGENIQUES Antitoxines  Obtention : Immunisation animaux avec anatoxines saigne aprs 5 semaines



Purification des K globulines = antitoxines Inconvnients : Choc anaphylactique; allergie

TOXINE AU LABORATOIRE
INDICATIONS : Recherche de toxine lors :  Toxi infections alimentaires  Syndrome entrique  Syndrome hmolytique et urmique  Syndrome de choc toxique  Diphtrie