Anda di halaman 1dari 6

Human Insulin

Oleh, Marvi Nurjanah 0906639335

Sejarah Pada tahun 1921, ilmuwan Kanada Frederick G. Banting dan Charles H.Best berhasil memurnikan insulin dari pankreas anjing. Selama bertahun-tahun para ilmuwan membuat perbaikan terus menerus dalam memproduksi insulin. Pada tahun 1936, peneliti menemukan cara untuk membuat insulin lepas lambat dalam darah. Mereka menambahkan protein yang ditemukan dalam sperma ikan, protamine. Satu injeksi berlangsung 36 jam. Terobosan lain pada tahun 1950 ketika para peneliti menghasilkan jenis insulin yang bekerja sedikit lebih cepat dan tidak tinggal di dalam aliran darah lebih lama. Pada 1970-an, para ahli mulai mencoba dan menghasilkan insulin yang lebih mirip insulin alami dalam tubuh.

Para peneliti terus mengembangkan insulin tetapi metode produksi dasar tetap sama selama beberapa dekade. Insulin diekstraksi dari pankreas sapi dan babi dan dimurnikan. Struktur kimia insulin pada hewan-hewan ini hanya sedikit berbeda dengan insulin manusia, sehingga berfungsi dengan baik dalam tubuh manusia. (Meskipun beberapa orang memiliki sistem kekebalan tubuh negatif atau reaksi alergi.) Kemudian di awal 1980-an bioteknologi merevolusi sintesis insulin. Para peneliti telah menerjemahkan struktur kimia insulin pada pertengahan 1950. Mereka segera menentukan lokasi yang tepat dari gen insulin di bagian atas kromosom 11. Pada tahun 1977, sebuah tim peneliti menggabungkan gen insulin tikus ke dalam bakteri yang kemudian menghasilkan insulin.

Pada tahun 1891, Frederick Banting lahir di Alliston, Ontario. Lulus pada tahun 1916 dari sekolah kedokteran di Universitas Toronto. Setelah menjadi layanan Medis pada Perang Dunia I, Banting menjadi tertarik pada diabetes dan mempelajari penyakit ini di University of Western Ontario.

Pada tahun 1922, insulin diuji pada Leonard Thompson, seorang pasien diabetes berusia 14 tahun. Pada awalnya ia menderita reaksi alergi parah sehingga suntikan

lebih lanjut dibatalkan. Suntikan kedua akhirnya diberikan pada Thompson dan hasilnya memuaskan.

Pada tahun 1980-an, peneliti menggunakan rekayasa genetika untuk memproduksi insulin manusia. Pada tahun 1982, Perusahaan Eli Lilly menghasilkan insulin manusia yang menjadi produk pertama rekayasa genetika yang disetujui. Tanpa perlu bergantung pada hewan, peneliti dapat memproduksi insulin dalam persediaan yang tidak terbatas. Hal ini juga tidak mengandung kontaminan hewan. Bahan baku Insulin manusia ditumbuhkan di laboratorium di dalam bakteri Escherichia coli. Para peneliti membutuhkan protein yang memproduksi insulin manusia dan protein ini didapat melalui serangkaian asam amino yang disintesis oleh DNA Produsen memasukkan asam amino insulin, dan mesin sekuensing

menghubungkan asam amino bersama-sama. Selain itu diperlukan tangki besar untuk menumbuhkan bakteri, dan nutrisi yang diperlukan bagi bakteri untuk tumbuh. Beberapa instrumen yang diperlukan untuk memisahkan dan

memurnikan DNA seperti sentrifugasi, kromatografi dan x-ray kristalografi. Proses produksi Sintesis insulin manusia merupakan proses bertahap biokimia yang mengacu pada teknik dasar DNA rekombinan dan pemahaman tentang gen insulin. DNA membawa petunjuk untuk bagaimana tubuh bekerja dan satu segmen kecil DNA, gen insulin, kode untuk protein insulin . Produsen memanipulasi prekursor biologis terhadap insulin sehingga tumbuh di dalam bakteri. Menggunakan insulin manusia Insulin adalah protein yang terdiri dari dua rantai asam amino yang terpisah, rantai A di atas rantai B. Asam amino merupakan unit dasar yang mementuk semua protein. Rantai insulin terdiri dari 21 asam amino dan rantai B memiliki 30 asam amino.

Sebelum menjadi sebuah protein insulin aktif, pertama-tama insulin diproduksi sebagai preproinsulin. Ini adalah salah satu protein rantai panjang dengan rantai A dan B belum dipisahkan, bagian tengah menghubungkan rantai bersama-sama dan urutan sinyal di salah satu ujung protein memberitahu kapan harus mulai mensekresil. Setelah preproinsulin, rantai berkembang menjadi proinsulin, masih rantai tunggal tetapi tanpa urutan sinyal. Kemudian menjadi insulin protein aktif, protein tanpa bagian yang menghubungkan rantai A dan B. Pada setiap langkah, protein membutuhkan enzim spesifik untuk menghasilkan gen insulin. Dimulai dengan rantai A dan rantai B Salah satu metode pembuatan insulin dengan menumbuhkan dua rantai insulin secara terpisah yang kemudian dimasukkan ke dalam bakteri Escherichia coli. Plasmid rekombinan bergabung dengan sel bakteri dan akan mensintesis insulin melalui proeses fermentasi kemudian mengalami proses replikasi. Setelah proses replikasi, bakteri tersebut akan diambil DNAnya kembali. Dari DNA tersebut diperoleh rantai insulin. Kedua molekul DNA kemudian disisipkan ke dalam plasmid. Pertama memasukkan plasmid ke dalam bakteri E. coli. Mereka memasukkannya sebelah gen lacZ. LacZ merupakan 8-galaktosidase, gen banyak digunakan dalam prosedur DNA rekombinan karena mudah untuk menemukan dan memotong, sehingga insulin akan mudah dihilangkan sehingga tidak tertinggal dalam DNA bakteri. Gen berikutnya adalah asam amino metionin, yang memulai pembentukan protein Rekombinan yang baru terbentuk, plasmid dicampur dengan sel-sel bakteri. Plasmid masuk ke dalam bakteri disebut transfeksi. Produsen dapat menambah DNA ligase. Bakteri mensintesis insulin kemudian mengalami proses fermentasi. Bakteri tumbuh pada suhu optimal dalam tangki besar di pabrik. Jutaan bakteri mereplikasi kira-kira setiap 20 menit melalui mitosis sel, dan masing-masing mengekspresikan gen insulin.

Setelah mereplikasi, sel-sel diambil dari tank-tank dan untuk mengekstrak DNA. Salah satu cara umum yang dilakukan adalah dengan terlebih dahulu menambahkan campuran lisosom yang mencerna lapisan luar dinding sel, kemudian menambahkan campuran deterjen yang memisahkan membran dinding sel lemak. DNA bakteri ini kemudian diberi sianogen bromida, reagen yang membagi rantai protein pada residu metionin untuk memisahkan rantai insulin dari sisa DNA

Dua rantai tersebut kemudian dicampur bersama-sama dan bergabung dengan ikatan disulfida melalui Batch reaksi kemudian reduksi-reoksidasi. ditempatkan Ditambahkan dalam agen

pengoksidasi.

sentrifuge.

Campuran DNA kemudian dimurnikan sehingga hanya rantai insulin saja. Produsen dapat memurnikan campuran melalui sistem kromatografi seperti kromatografi kolom pertukaran ion, kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik, dan filtrasi gel kolom kromatografi. Produsen dapat menguji batch insulin untuk memastikan tidak ada protein bakteri E.coli yang bercampur dengan insulin

dengan menggunakan protein penanda yang memungkinkan mendeteksi DNA E. coli.

Proses proinsulin Pada tahun 1986, untuk memperoleh insulin dapat langsung menggunakan prekusor untuk gen insulin yaitu proinsulin. Cara untuk memperolehnya pun sama dengan proses memperoleh insulin dengan rantai A dan B, hanya saja pada metode ini yang disintesis adalah gen proinsulin Rangkaian kode untuk proinsulin dimasukkan ke dalam bakteri E. coli. Bakteri melalui proses fermentasi di mana ia mereproduksi dan menghasilkan proinsulin. Kemudian urutan antara rantai A dan B disambung dengan enzim kemudian insulin yang dihasilkan dimurnikan. Pada akhir proses manufaktur bahan-bahan yang ditambahkan ke insulin untuk mencegah bakteri dan membantu menjaga keseimbangan antara asam dan basa. Bahan lain juga ditambahkan terhadap insulin intermediate dan long-acting untuk menghasilkan jenis durasi insulin yang

diinginkan. Produsen menambahkan zat pada insulin murni untuk yang memperpanjang kerja insulin, seperti oksida seng. Zat ini juga dapat menunda absorbsi dalam tubuh. Analog insulin Pada pertengahan tahun 1990, peneliti mulai memperbaiki cara insulin manusia bekerja dalam tubuh dengan mengubah urutan asam amino dan menciptakan analog. Analog insulin lebih sedikit dan lebih mudah menyebar ke dalam darah, yang memungkinkan insulin untuk mulai bekerja di tubuh setelah disuntikan. Ada beberapa analog insulin yang berbeda. Insulin Humulin tidak memiliki ikatan yang kuat dengan insulin lain dan dengan demikian, diserap dengan cepat. Analog insulin lainnya yaitu glargine, perubahan struktur kimia protein dapat membuatnya memiliki laju pelepasan yang relatif konstan selama 24 jam tanpa puncak.

Diagram tahap produksi insulin

Setelah sintesis insulin manusia, struktur dan kemurnian dari batch insulin diuji melalui beberapa metode yang berbeda. Kromatografi cair kinerja tinggi digunakan untuk menentukan apakah ada kotoran dalam insulin. Teknik pemisahan lainnya, seperti kristalografi sinar-X, filtrasi gel, dan sekuensing asam amino, juga dilakukan. Produsen juga menguji kemasan botol untuk memastikan disegel dengan benar. Tabel Profil beberapa sediaan insulin yang beredar di Indonesia

Daftar Pustaka Clark, David P, and Lonnie D. Russell. Molecular Biology Made Simple and Fun. 2nd ed. Vienna, IL: Cache River Press, 2000. Considine, Douglas M., ed. Van Nostrand's Scientific Encyclopedia. 8th ed. New York: International Thomson Publishing Inc., 1995.
Dinsmoor, Robert S. "Insulin: A Never-ending Evolution." Countdown (Spring 2001)