Anda di halaman 1dari 26

Teknik Pemindahan Biakan Mikroba Secara Aseptik

I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Setiap mikroorganisme memerlukan nutrisi yang berbeda-beda untuk pertumbuhannya. Karakteristik pertumbuhan mikroorganisme inilah yang menyebabkan bermacam-macamnya media penunjang pertumbuhan mikroba. Pengetahuan tentang nutrisi ini penting dalam membantu persiapan medium tumbuh mikroorganisme tersebut. Melalui media pertumbuhan dapat dilakukan isolasi mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. Kegiatan menumbuhkan mikroorganisme dalam suatu medium memerlukan serangkaian persiapan yang baik. Kegiatan tersebut dapat berupa persiapan alat maupun persiapan medium yang akan digunakan dalam menumbuhkan mikroorganisme. Kegiatan mempersiapkan alat memerlukan suatu ketelatenan khusus agar alat-alat yang akan digunakan tidak terkontaminasi (dalam keadaan steril). Sedangkan kegiatan pembuatan medium penting agar kita bisa menumbuhkan mikroba yang kita inginkan.

1.2 Tujuan Tujuan praktikum ini adalah menguasai teknik pemindahan biakan murni dari satu wadah ke wadah yang lain secara aseptik. II. METODELOGI 2.1 Waktu dan Tempat Praktikum teknik pemindahan biakan mikroba secara aseptik dilaksanakan pada hari Rabu, 02 Maret 2011 pada pukul 07.00-10.00 WIB dan pengamatan dilakukan pada hari Kamis, tanggal 04 Maret 2011 di Laboratorium Kesehatan Ikan, Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. 2.2 Alat dan Bahan Alat yang digunakan dalam praktikum adalah satu rak tabung reaksi, bunsen, korek api, inokulen, alkohol 70%, tabung reaksi, tissue, dan kapas untuk sumbat. Sedangkan bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah air suling/air akuades, 3 tabung sea water complete (SWC) dan biakan bakeri Pseudoalteromonas. 2.3 Prosedur Kerja 2.3.1 Pemindahan Biakan Pada Media Cair

Siapkan lup inokulasi, pegang kedua tabung yang berisi medium steril dengan tangan kiri dan lup inokulasi dengan tangan kanan. Panaskan lup inokulasi di atas pembakar bunsen sampai seluruh kawat pijar. Gerakan dengan cepat lup tersebut ke arah baeah diatas api supaya ikut terpanasi, biarkan lup dingin sekitar 30 detik sebelum dipakai untuk mencegah matinya biakan murni yang akan dipindahkan ataupun terjadinya percikan. Angkat kedua sumbat tabung satu demi satu. Dimulai dengan sumbat tabung yang terdekat dengan tangan kanan dengan cara melingkarkan jari kelingking disekitarnya, begitu juga sumbat tabung yang kedua angkat dengan jari manis dengan gerakan yang sama. Jangan dari arah belakang tabung namun dari antara kedua tabung. Dengan gerakan diputar biasanya memudahkan lepasnya sumbat dari mulut tabung. Panaskan kedua mulut tabung yang tidak tersumbat dengan cara melakukannya bolak-balik sebanyak 2 kali diatas api. Jagalah agar sudut kemiringan tabung tidak melebihi 45o bila tidak disumbat. Masukan lup ke dalam salah satu tabung seakan-akan memindahkan satu lup penuh biakan untuk dimasukan de dalam tabung lain. Panaskan kembali mulut tabung tersebut dan kembalikan sumbat pada masing-masing tabung seperti sedia kala. Pijarkan kembali lup inokulasi sebelum diletakan kembali ke tempatnya. Berikan etiket padaa semua tabung yang baru saja di inokulasi dan letakan ditempat yang sudah disediakan untuk diinkubasi pada suhu kamar selama 24 jam. 2.3.2 Penggoresan Biakan pada Agar Miring Siapkan lup inokulasi, pegang kedua tabung yang berisi medium steril dengan tangan kiri dan lup inokulasi dengan tangan kanan. Panaskan lup inokulasi di atas pembakar bunsen sampai seluruh kawat pijar. Gerakan dengan cepat lup tersebut ke arah baeah diatas api supaya ikut terpanasi, biarkan lup dingin sekitar 30 detik sebelum dipakai untuk mencegah matinya biakan murni yang akan dipindahkan ataupun terjadinya percikan. Angkat kedua sumbat tabung satu demi satu. Dimulai dengan sumbat tabung yang terdekat dengan tangan kanan dengan cara melingkarkan jari kelingking disekitarnya, begitu juga sumbat tabung yang kedua angkat dengan jari manis dengan gerakan yang sama. Jangan dari arah belakang tabung namun dari antara kedua tabung. Dengan gerakan diputar biasanya memudahkan lepasnya sumbat dari mulut tabung. Panaskan kedua mulut tabung yang tidak tersumbat dengan cara melakukannya bolak-balik sebanyak 2 kali diatas api. Jagalah agar sudut kemiringan tabung tidak melebihi 45o bila tidak disumbat. Masukan lup ke dalam salah satu tabung seakan-akan memindahkan satu lup penuh biakan untuk dimasukan de dalam tabung lain pada dasar kemiringan agar lalu ditarik ke atas dengan gerakan zig-zag. Panaskan kembali mulut tabung tersebut dan kembalikan sumbat pada masing-masing tabung seperti sedia kala. Pijarkan kembali lup inokulasi sebelum diletakan kembali ke tempatnya. Berikan etiket padaa semua tabung yang baru saja di inokulasi dan

letakan ditempat yang sudah disediakan untuk diinkubasi pada suhu kamar selama 24 jam. III. HASIL DAN PEMBAHASAN 3.1 Hasil Berdasarkan haasil pengamatan pada praktikum teknik pemindahan mikroba secara aseptik diperoleh data pemindahan biakan pada media SWC cair dan agar miring sebagai berikut : Tabel 1. Pemindahan Biakan Bakteri pada Media SWC Cair No Sample Warna Media Keterangan 1 Ita Apriani Bening 2 Isnendi Agustian Bening 3 Heidi herli Bening Keterangan : + : Tumbuh Bakteri : Tidak Tumbuh Bakteri Tabel 2. Hasil Pemindahan Mikroba pada Media SWC Agar Miring No Sample Warna Media Keterangan 1 Ita Apriani Bening 2 Reza Akbar Santoso Bening 3 Mita Istifarini Bening Keterangan : : tidak ada kontaminan + : ada kontaminan 3.2 Pembahasan Media agar merupakan substrat yang sangat baik untuk memisahkan campuran mikroorganisme sehingga masing-masing jenisnya menjadi terpisahpisah. Teknik yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme pada media agar memungkinkannya tumbuh dengan agak berjauhan dari sesamanya, juga memungkinkan setiap selnya berhimpun membentuk koloni, sekelompok massa sel yang dapat dilihat langsung oleh mata. Semua sel dalam koloni itu sama; dianggap kesemuanya itu merupakan keturunan (progeni) satu mikroorganisme (Pelczar, 2006). SWC atau sea water complete merupakan salah satu jenis media yang biasa digunakan dalam menumbuhkan mikroba. SWC biasanya digunakan dalam menumbuhkan bakteri yang bersifat luminescent atau bakteri yang mengeluarkan cahaya berpendar. Komposisi dari SWC meliputi 500 ml air, 12 g garam laut, 2,5 g pepton, 1,5 g yeast extract, 1,5 ml gliserin dan 7,5 g agar (Anonim, 2008) Medium adalah bahan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di dalamnya. Medium padat berfungsi untuk menumbuhkan bakteri yang dapat diamati penampilan atau morfologi koloni. Misalnya, tubuh buah mikrobakteri dan endospora spesies-spesies tertentu.

Sedangkan medium cair digunakan untuk berbagai keperluan seperti pembiakan organisme dalam jumlah besar (Hadiutomo, 2009). Berdasarkan hasil pengamatan yang diperoleh, medium tidak menimbulkan kontaminan bakteri sehingga proses pemindahan biakan pada medium cair dapat dikatakan berhasil. Begitu juga pada proses pemindahan biakan bakteri pada agar miring hanya tumbuh bakteri yang yang ditanam saja yaitu Pseudoalteromonasberwarna orange. Medium steril adalah medium yang tidak mengandung semua jenis kehidupan, yang biasanya disterilkan dengan memanaskan pada temperatur tertentu sehingga semua mikroorganisme pengkontaminasi dimatikan. Akhirnya, dalam bekerja dengan mikroorganisme harus dibuat cara untuk memindahkan organisme yang tumbuh (yang disebut inokulum) dari suatu kultur murni ke medium. Medium steril tanpa terjadi pemindahan kontaminan luar yang tidak diinginkan. Metode untuk mencegah masuknya mikroorganismeyang tidak dikehendaki disebut teknik aseptik. Dengan teknik aseptik maka tidak terjadi introdiksi organisme kontaminan ke dalam kultur. Hal ini juga menjamin organisme yang sedang ditangani tidak mengkontaminasi orang yang ada di sekitar. Sterilisasi merupakan suatu proses yang bertujuan untuk menghilangkan dan membebaskan semua alat dan media dari gangguan organisme mikroba, termasuk virus, bakteri, spora dan fungi beserta sporanya. Sterilisasi merupakan suatu metode atau cara yang digunakan untuk mengeliminasi semua mikroorganisme (Greenwooddalam Oktarina, 2009). IV. KESIMPULAN DAN SARAN 4.1 Kesimpulan Biakan mikroba tumbuh pada media yang diletakan di dalam tabung. Mikroorganisme yang tumbuh pada media agar terlihat berwarna orange dan terdiri dari satu koloni sedangkan pada media cair tetap bening. Dengan demikian pemindahan biakan mikroba berlangsung secara aseptik. Adapun diketahui bahwa mikroorganisme dapat ditumbuhkan pada suatu media khususnya media agar dan cair. 4.2 Saran Semoga praktikum tentang dasar-dasar mikrobioloogi kedepannya dapat dilakukan lebih teliti lagi oleh para praktikan dengan mendapatkan pengarahan yang lebih baik lagi dari asisten meja masing-masing. Selain itu, saat praktikum berlangsung praktikan diharapkan dapat bekerja secara aseptik dan sistematis sehingga tidak terdapat bakteri kontaminan dalam media. Wadah yang digunakan untuk medium sebaiknya diperbanyak jumlahnya dan lebih beragam sehingga praktikan dapat lebih mahir dalam pemindahan biakan mikroba secara aseptik. DAFTAR PUSTAKA

Anonim.

2008. Making Seawater Complete.cibt.bio.cornell.edu/programs/archive/0610ccc/media.pdf [8 Maret 2011] Pelczar, Michael. 2006. Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik. Ratna Siri Hadioetomo. Penerjemah. Jakarta : UI-Press. Oktarina, Theresia. 2009. Sterilisasi pada medium bakteri. .http://www.try4know.co.cc/2009/12/sterilitas-medium-itupenting.html. [8 Maret 2011] Hadiuntomo, RS. 2009. Metode-metode Untuk Bakteriologi. Lembaga Sumberdaya Informasi. Pusat Antar Universitas, Institut Pertanian Bogor.

Teknik Pemindahan Mikrobe


22 Februari 2012

TEKNIK PEMINDAHAN BIAKAN MIKROBE SECARA ASEPTIK Tujuan : Mempelajari teknik penyiapan lekapan basah dan tetes gantung untuk mengamati berbagai macam mikroorganisme hidup di bawah mikroskop. Hasil Pengamatan : Tabel Hasil Pengamatan Mikrobe Media Perlakuan Nutrient agar-nutrient broth Nutrient broth Serratia marcescensnutrient agar Hasil

Bening-bening (tidak berhasil) Nutrient broth Bening-bening (tidak berhasil Nutrient agar Agar miring Serratia Tidak tumbuh bakteri marcescens Pembahasan Media yang diamati pada praktikum ini ialah nutrient broth (NB), nutrient agar (NA), dan Serratia marcescens yang terdapat pada tabung reaksi. Masing-masing tabung terdiri dari tiga buah NB, satu buah NA , dan biakan agar miring Serratia marcescens sebanyak satu buah. Pertama, tabung reaksi yang berisi nutrient brothdiambil sedikit dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi nutrient both yang lain. Kedua, tabung reaksi nutrient agar diambil sedikit dan dimsukkan ke dalam larutannutrient broth. Ketiga, tabung Serratia marcescens diambil sedikit dan dimasukkan ke dalam larutan nutrient agar. Masing-masing tabung yang berisikan larutan tersebut dipindahkan ke tabung lain dengan cara pemindahan bakteri secara aseptik. Pemindahan bakteri dari medium lama ke medium yang baru atau yang dikenal dengan istilah inokulasi bakteri ini memerlukan banyak ketelitian. Terlebih dahulu kita harus mengusahakan agar semua alat- alat yang akan digunakan untuk pengerjaan medium dan pengerjaan inokulasi benar- benar

steril. Hal ini untuk menghindari terjadinya kontaminasi, yaitu masuknya mikroba lain yang tidak diinginkan sehingga biakan yang tumbuh di dalam medium adalah benar- benar biakan murni (Dwidjoseputro, 1990). Teknik pemindahan bakteri secara aseptik terdiri dari dua macam yakni konvensional dan modern. Teknik aseptik konvensional ialah sterilisasi secara fisik yang dilakukan dengan pemanasan (membakar alat pada api), dimana kawat yang akan digunakan untuk mengambil larutan ataupun agar miring dibakar serta mulut tabung reaksi pun dipanaskan agar bakteri yang diamati tetap terjaga agar tidak terkontaminasi bakteri lain. Serta Teknik modern yakni laminar flow dengan menggunakan alat-alat yang steril. Sterilisasi juga dilakukan terhadap peralatan, yaitu menggunakan etanol yang disemprotkan secara merata pada peralatan yang digunakan. Laminar air flow cabinet biasanya disteriliasi permukaan dengan 70% alcohol. Selain itu, digunakan sebagai ruangan untuk pengerjaan secara aseptis. Prinsip penaseptisan suatu ruangan berdasarkan aliran udara keluar dengan kontaminasi udara dapat diminimalkan. Serratia marcescens adalah suatu jenis bakteri gram negatif dari familyenterobacteriaceae. Bakteri ini berbentuk basil (bulat lonjong) dan beberapa galur membentuk kapsul, termasuk organisme yang bergerak dengan cepat (motil) karena mempunyai flagela peritrik, dapat tumbuh dalam kisaran suhu 5C 40C dan dalam kisaran pH antara 5-9. Koloni Serratia marcescens pada media agar biasa tidak terbedakan pada hari pertama atau hari kedua dan kemudian mungkin berkembang menjadi cembung. Pada suhu kamar, bakteri patogen ini menghasilkan zat warna (pigmen) merah.Bakteri ini jenis fakultatif anaerobik yang tidak terlalu membutuhkan oksigen. Serratia marcescens banyak ditemukan di alam terutama di air dan tanah, tetapi beberapa terdapat dalam usus manusia. Penularannya melalui kontak langsung, tetesan dan dalam beberapa kasus ditemukan tumbuh pada saluran kencing, pada larutan garam, dan dalam larutan lain yang semula diduga steril. Pada pengamatan ini pemindahan biakan mikrob secara aseptik kelompok kami mengalami kegagalan. Pertama, bakteri yang ada pada tabung reaksi NA yang dimasukkan agar miring tidak tumbuh. Kedua, tabung reaksi NB yang dimasukkan NA berwarna bening-bening yang seharusnya beningkeruh. Akan tetapi, berbeda hal pada tabung NB, warna yang terlihat ialah bening dan dapat dikatakan berhasil. Faktor yang mempengaruhi ketidakberhasilan ini ialah adanya kesalahan teknik dalam pemindahan

bakteri dari satu media ke media lain, kurangnya waktu inkubasi, dan pengambilan bakteri yang sangat sedikit atau bahkan tidak terambil.

Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan yang menunjukkan bahwa pemindahan bakteri secara aseptik harus dilakukan dengan hati-hati agar bakteri yang akan diamati tidak terkontaminan dengan bakteri dari luar sehingga biakan yang tumbuh di dalam medium adalah benar- benar biakan murni. Dalam hal ini, pemindahan bakteri secara aseptik pada kelompok kami mengalami kegagalan. Faktor yang menyebabkan ketidakberhasilan dalam percobaan ini ialah adanya kesalahan teknik pada waktu pemindahan bakteri, kurangnya waktu inkubasi, dan pengambilan bakteri yang sangat sedit atau bahkan tidak terambil. Daftar Pustaka [Anonim].2008.http://www.commtechlab.msu.edu/sites/dlcme/(28 september 2011). www.zoo/microbes/serratia.html (28 september 2011). Pelczar, Michael J. 1988.Dasar-Dasar Mikrobiologi, 954. Jakarta: UI press. Hadioetomo, Ratna Siri. 1993. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama. http://www.fp.unud.ac.id/biotek/kultur-jaringan-tanaman/10-fasilitas-danteknik-untuk-kultur-jaringan-tanaman/(29 september 2011)

TEKNIK PEMINDAHAN BIAKAN MIKROBA SECARA ASEPTIK, laporan mikrobiologi


Laporan ke-2 m.k. Mikrobiologi Akuatik Hari/ Tanggal : Kamis/ 22 September 2011 Kelompok/ Shift : 7/ 2 Asisten : 1. Damayanti 2. Ghita Ryan Septiani

TEKNIK PEMINDAHAN BIAKAN MIKROBA SECARA ASEPTIK


Disusun oleh: Dian Novita Sari J3H110045

TEKNOLOGI PRODUKSI DAN MANAJEMEN PERIKANAN BUDIDAYA DIREKTORAT DIPLOMA INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2011 I. PENDAHULUAN I.I Latar belakang Bakteri merupakan mikro uniseluler. Pada umumnya bakteri tidak mempunyai klorofil. Ada beberapa yang fotosintetik dan reproduksi aseksualnya secara pembelahan. Bakteri tersebar luas di alam, di dalam tanah, di atmosfer, di dalam endapan-endapan lumpur, di dalam lumpur laut, dalam air, pada sumber air panas, di daerah antartika, dalam tubuh manusia, hewan, dan tanaman. Jumlah bakteri tergantung pada keadaan sekitar. Misalnya, jumlah bakteri di dalam tanah tergantung jenis dan tingkat kesuburan tanah (Hidayat, Padaga, dan Suhartini 2006). Sifat hidup bakteri secara umum adalah sapotrofik pada sisa buangan hewan ataupun tanaman yang sudah mati, tetapi banyak juga parasitik pada hewan, manusia, dan tanaman dengan menyebabkan banyak penyakit (Suriawiria 2008). Praktikum ini perlu dilakukan agar praktikan terbiasa bekerja aseptik, terutama saat praktikum tentang bakteri maupun mikroba lainnya. Dengan terbiasa bekerja dengan teknik aseptik, praktikan bisa menghindari kontaminasi dalam praktikum sehingga praktikum yang dilakukan berhasil dan tidak menyebabkan efek bagi praktikan, misalnya infeksi oleh bakteri.

Steril artinya tidak didapatkan mikroba yang tidak diharapkan kehadirannya, baik yang mengganggu atau merusak media maupun mengganggu kehidupan dan proses yang sedang dikerjakan. Semua proses baik fisika, kimia, dan mekanik yang membunuh semua bentuk kehidupan, terutama mikroorganisme disebut dengan sterilisasi (Waluyo 2007).
Sterilisasi dapat dilakukan dengan berbagai cara diantaranya dengan uap air panas bertekanan, alat yang digunakan disebut autoklaf (Autoclave). Untuk steriliasasi, alat ini dilengkapi dengan katup pengaman. Alat diisi dengan air kemudian bahan dimasukkan. Panaskan sampai mendidih dan dari katup pengaman keluar uap air dengan lancar lalu ditutup. Suhu akan naik sampai 121 0C dan biarkan selama 15 menit (untuk industri pengalengan ada perhitungan tersendiri), lalu biarkan dingin sampai tekanan normal dan klep pengaman dibuka. Cara ini akan mematikan spora dengan cara penetrasi panas ke dalam sel atau spora sehingga lebih cepat. (Machmud 2008).

1.2

Tujuan Tujuan dari praktikum ini adalah menguasai teknik pemindahan biakan murni dari suatu wadah ke wadah yang lain secara aseptik. II. METODE KERJA 2.1 Waktu dan Tempat Praktikum dilaksanakan pada hari Kamis, 15 September 2011, pukul 13.30-15.10 WIB, bertempat di Laboratorium CA BIO 2, Cilibende, Institut Pertanian Bogor. 2.2 Alat dan Bahan Alat yang digunakan adalah erlenmeyer, cawan petri, 2 buah tabung ulir kecil, 1 buah tabung ulir besar, bunsen, hot plate, aluminium foil, rak tabung, mikro pipet, tip, tisu, karet, neraca analitik, pipet mohr, bulb, pengaduk, sprayer dan lup (ose). Bahan yang digunakan adalah NA bubuk, Yeast ekstrack 0,4 gr, Glycerol 1,2 mL,Bakto pepton 2 gr, air laut 160 mL, biakan murni E. choli, alkohol, dan akuades 250 mL. 2.3 Prosedur Kerja 2.3.1 Pembuatan Media (NA dan SWC) a. NA Semua alat dan bahan yang telah disterilkan sebelumnya disiapkan, bubuk NA ditimbang seberat 4,2 gr di neraca analitik. Setelah itu, disiapkan akuades sebanyak 150 mL, kemudian bubuk NA yang telah ditimbang dimasukkan ke tabung erlenmeyer dan ditambahkan akuades 150 mL tersebut. Setelah itu, larutan NA dipanaskan di atas hot plate sambil diaduk hingga mendidih dan homogen. Setelah mendidih, larutan didinginkan sebentar lalu ditutup dengan aluminium foil dan diikat dengan karet agar tutupnya rapat, kemudian dimasukkan ke Autoclave untuk disterilkan.

b. SWC Semua alat dan bahan disiapkan. Semua bahan ditimbang sesuai dengan takaran yang digunakan dalam membuat SWC 250 mL. Kemudian semua bahan yang telah ditimbang dimasukkan ke Erlenmeyer dan ditambahkan 160 mL air laut dan 100 mL akuades. Setelah itu diaduk rata dan dipanaskan di atas hot plate. Setelah mendidih, erlenmeyer yang berisi larutan SWC diangkat dan didinginkan beberapa saat lalu ditutup dengan aluminum foil. Kemudian dimasukkan ke Autoclave untuk disterilisasi. 2.3.2 Pemindahan SWC Semua alat dan bahan disiapkan. Tangan praktikan dan meja dibersihkan dengan alkohol 70% kemudian di lap dengan tisu. Setelah itu, 2 buah tabung ulir kecil yang berisi SWC steril dipegang di tangan kiri dan lup dipegang ditangan kanan. Kemuadian mikro pipet diset sesuai dengan volume yang diinginkan,lalu tip yang sudah disterilkan dipasangkan ke mikro pipet. Setelah itu, tabung larutan SWC 1 dibuka lalu didekatkan ke bunsen dan larutan SWC diambil dengan mikro pipet dengan cara menekan tombol di ujung mikro pipet (tidak sampai full). Kemudian tabung mulut larutan SWC 1 didekatkan lagi ke bunsen dan ditutup. Setelah itu tabung larutan SWC 2 dibuka dan di dekatkan ke bunsen, lalu larutan SWC 1 yang di mikro pipet dimasukkan ke tabung larutan SWC 2 dengan menekan tombol di ujung mikro pipet sampai full. Setelah itu, mulut tabung larutan SWC 2 didekatkan lagi ke bunsen dan ditutup. Tip pada mikro pipet dilepas dengan menekan tombol di dekat ujung mikro pipet. Kemudian tabung larutan SWC 1 dan 2 dimasukkan ke kantong plastik dan di simpan selama 24 jam. Keesokan harinya diteliti apakah terjadi kontaminasi atau tidak. 2.3.3 Pemindahan Biakan (Agar Miring dan Cawan Petri) A. Cawan Petri Semua alat dan bahan disiapkan. Tangan dan meja tempat kerja dibersih dengan alkohol dan dilap dengan tisu. Kemudian bunsen dinyalakan. Media agar yang telah dicairkan dipindahkan ke cawan petri dengan cara tangan kanan memegang media agar dan kiri memegang cawan petri. Kemudian seluruh pinggiran cawan dan tempat media agar dipanaskan dan dibuka dengan hati-hati dan media agar dituang ke cawan petri. Setelah itu, cawan petri yang berisi media agar didinginkan pada suhu ruang hingga agar membeku. Setelah media agar di cawan petri membeku, ose (lup) dipegang di tangan kanan dan erlenmeyer tempat biakan murni E. coli ditangan kiri. Setelah itu, ose dipanaskan hingga membara, lalu didinginkan sebentar. Kemudian, mulut erlenmeyer tempat biakan murni E. coli dipanaskan di bunsen. Lalu ose dicelupkan kebiakan murni dan mulut erlenmeyer tempat biakan murni E. coli dipanaskan lagi dan ditutup rapat. Lalu tangan kiri memegang cawan petri dan tangan kanan memegang ose (lup). Setelah itu, pinggiran cawan petri yang berisi agar dipanaskan di bunsen. Setelah itu, cawan petri dibuka dengan hati-hati dan ose digoreskan ke permukaan media agar

di dalam cawan petri secara zigzag, semua proses pelaksanaan dilakukan didekat api (bunsen). Setelah itu ose dan pinggiran cawan dipanaskan lagi, lalu cawan petri dimasukkan ke plastik dan disimpan selama 24 jam dan keesokan harinya diteliti apakah terjadi kontaminasi atau tidak. B. Media Agar Miring Semua alat dan bahan disiapkan. Kemudian bunsen dinyalakan. Media agar yang telah dicairkan dipindahkan ke tabung ulir besar dengan cara mengambil media agar yang sudah dicairkan sebanyak 5mL dengan menggunakan pipet Mohr dan bulb lalu dipindahkan ke tabung ulir besar. Setelah itu, tabung ulir yang berisi media agar didinginkan pada suhu ruang dengan posisi dimiringkan hingga agar membeku. Setelah media agar di tabung membeku, tangan dan meja tempat kerja dibersih dengan alkohol dan dilap dengan tisu. Ose (lup) dipegang di tangan kanan dan erlenmeyer tempat biakan murni E. coli ditangan kiri. Setelah itu, ose dipanaskan hingga membara, lalu didinginkan sebentar. Kemudian, mulut erlenmeyer tempat biakan murni E. coli dipanaskan di bunsen. Lalu ose dicelupkan kebiakan murni dan mulut erlenmeyer tempat biakan murni E. coli dipanaskan lagi dan ditutup rapat. Tangan kiri memegang tabung ulir dan tangan kanan memegang ose (lup). Setelah itu, tutup tabung ulir yang berisi media agar dibuka dan mulut tabung dipanaskan di bunsen. Lalu, Kemudian, ose digoreskan ke permukaan media agar di dalam tabung ulir secara zigzag, semua proses pelaksanaan dilakukan didekat api (bunsen). Setelah itu ose dan mulut tabung dipanaskan lagi, lalu tabung ulir ditutup dan dimasukkan ke kantong plastik. Kemudian disimpan selama 24 jam dan keesokan harinya diteliti apakah terjadi kontaminasi atau tidak. III. HASIL DAN PEMBAHASAN 3.1 Hasil Tabel 1. Pemindahan Sea Water Complete (SWC) No. Sampel Kontaminan Keterangan 1. Dian + keruh 2. Elsa + keruh 3. Arthur + keruh Keterangan : + : Ada kontaminan - : Tidak ada kontaminan. Tabel 2. Pemindahan Biakan Murni Escherichia coli pada Nutrient Agar (NA) No. Media Sampel Kontaminan Keterangan 1. Cawan petri Dian + putih susu 2. Elsa + putih susu 3. Arthur + putih susu 4. Agar miring Dian + putih susu 5. Elsa + putih susu 6. Arthur + putih susu Keterangan : + : Tumbuh bakteri Escherichia coli - : Tidak tumbuh bakteri Escherichia coli

3.2

Pembahasan

Teknik aseptik sangat diperlukan untuk menghindarkan mikroorganisme dari kontaminan yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba. Teknik aseptis digunakan sepanjang kegiatan berlangsung, baik alat, bahan, lingkungan sekitar maupun praktikannya. Untuk alat dan bahan praktikum dapat diterapkan metode sterilitas. Penguasaan teknik aseptik ini sangat diperlukan dalam keberhasilan laboratorium mikrobiologi dan hal tersebut merupakan salah satu metode permulaan yang dipelajari oleh ahli mikrobiologi (Oram 2001). Sementara itu, menurut Pelczar & Chan (2007) teknik aseptis sangat penting dalam pengerjaan mikrobiologi yang memerlukan ketelitian dan keakuratan disamping kesterilan yang harus selalu dijaga agar terbebas dari kontaminan yang dapat mencemari. Populasi mikroba di alam sekitar kita sangat besar dan komplek. Beratus-ratus spesies berbagai mikroba biasanya menghuni bermacam-macam bagian tubuh kita, termasuk mulut, saluran pencernaan, dan kulit. Sekali bersin terdapat beribu-ribu mikroorganisme. Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekulmolekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya (Machmud 2008). Nutrient Agar (NA) merupakan media yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri, media ini dipanaskan agar mencair, kemudian sedikit didinginkan sehingga suhunya kira-kira 40-50C, pendinginan ini dilakukan untuk mendapatkan suhu yang ideal sehingga agar tidak mengeras namun tidak terlalu panas yang mengakibatkan kematian koloni yang akan dibiakkan. Kegunaan dari Nutrient Agar adalah untuk kultivasi dan perawatan sebagian besar dari mikroorganisme. Komposisi dari Nutrient Agar adalah agar sebanyak 15 gram, pepton sebanyak 5 gram, NaCl sebanyak 5 gram, ekstrak yeast sebanyak 2 gram dan ekstrak kaldu sebanyak 1 gram (Atlas 1946). Pada praktikum yang dilakukan, meskipun agar sudah didiamkan selama beberapa waktu, agar tetap tidak membeku secara sempurna, hal ini disebabkan karena pada saat pembuatan media Nutrient Agar,larutan Nutrient Agar belum homogen secara sempurna. Sehingga masih ada akuades yang belum tercampur dengan pertikel-pertikel Nutrient Agar. Sea Water Complete (SWC) merupakan media yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri, khususnya bakteri air laut. Komposisi dari SWC yang dibuat pada praktikum kemarin adala yeast ekstrack 0,4 gr, glycerol 1,2 mL, bakto pepton 2 gr, air laut 160 mL, dan aquades 100mL.

Golongan bakteri Coli, merupakan jasad di dalam substrat air, bahan makanan, dan sebagainya yang menjadi indikator untuk kehadiran jasad berbahaya, yang mempunyai persamaan sifat. Escherichia sebagai salah satu contoh yang terkenal mempunyai beberapa spesies hidup di dalam saluran pencernaan makanan manusia dan hewan berdarah panas.Escherichia coli mulamula diisolasi oleh Escherich (1885) dari tinja bayi (Suriawiria 2008). Bakteri Coli dalam jumlah tertentu di dalam air, dapat digunakan sebagai indikator adanya jasad patogen. Jika di dalam 100 mL air minum terdapat 500 bakteri Coli, memungkinkan terjadinya penyakit gastroenteritis yang segera

diikuti oleh demam tifus. Escherichia colipada keadaan tertentu dapat mengalahkan mekanisme pertahanan tubuh sehingga dapat tinggal di dalam biader (cystitis), pelvis (ginjal), dan hati, yang dapat menyebabkan diare, peritonistis, meningitis, dan infeksi-infeksi lainnya (Suriawiria 2008). IV. KESIMPULAN DAN SARAN 4.1 Kesimpulan Teknik aseptik dalam proses-proses pengerjaan yang berkaitan dengan mikrobiologi, memerlukan ketelitian dan keakuratan serta kesterilan yang harus selalu dijaga agar terbebas dari kontaminan. Penguasaan teknik aseptik sangat diperlukan dalam keberhasilan praktikum mikrobiologi dan hal tersebut merupakan salah satu metode permulaan yang harus dipelajari oleh seorang ahli mikrobiologi. Bakteri E. coli bisa mengganggu kesehatan jika dikultur secara tidak aseptik, karena praktikan bisa terinfeksi. Kontaminasi pada media NA dan SWC dapat dilihat dengan melihat warna media, yaitu putih susu pada NA dan keruh pada SWC. 4.2 Saran Hendaknya para praktikan sangat berhati-hati dalam melakukan pemindahan biakanagar tidak terjadi kontaminasi. Selain itu, para praktikan diharapkan mengurangi percakapan dan lebih baik memakai masker saat bekerja agar bisa meminimalisir terjadinya kontaminasi,yang nantinya dapat mengganggu kesehatan praktikan dan mengurangi keberhasilan praktikum. DAFTAR PUSTAKA Hidayat, Nur. Masdiana C. Padaga, Sri Suhartini. 2006. Mikrobiologi Industri. Yogyakarta: Andi Offset. Atlas,R.M.1946.Handbook Of Microbiological Media 3th Edition.CRC Press: Amerika. Machmud, M. 2008. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Balai Penelitian Bioteknologi Tanaman Pangan, Bogor. http://anekaplanta.wordpress.com/2008 /03/02/teknik-penyimpanan-dan-pemeliharaan-mikroba/. Diakses pada tanggal 8 April 2010. Oram, R.F. S., Paul. J. Hummer, Jr. 2001. Biology Living System. Glencoe Division Mc Millan Company. Waterville. Pelczar, M. J., Chan, E.C.S. 2007. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Volume 1. Hadioetomo RSet al., penerjemah: Jakarta: UI Press. Terjemahan dari: Elements of Microbiology. Suriawiria, Unus. 2008. Mikrobiologi Air. Bandung: PT. Alumni. Waluyo, Lud. 2007. Mikrobiologi Umum. Malang: UPT. Penerbit Universitas Malan

Teknik Aseptik
@ Bogor , 15:02:00 Teknik aseptis atau steril adalah suatu sistem cara bekerja (praktek) yang menjaga sterilitas ketika menangani pengkulturan mikroorganisme untuk mencegah kontaminasi terhadap kultur mikroorganisme yang diinginkan. Dasar digunakannya teknik aseptik adalah adanya banyak partikel debu yang mengandung mikroorganisme (bakteri atau spora) yang mungkin dapat masuk ke dalam cawan, mulut erlenmeyer, atau mengendap di area kerja. Pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan ini dapat mempengaruhi atau mengganggu hasil dari suatu percobaan. Mikroorganisme dapat juga jatuh dari tangan praktikan, sarung tangan atau jas laboratorium karena pergerakan lengan yang relatif cepat. Penggunaan teknik aseptik meminimalisir material yang digunakan terhadap agen pengontaminasi. Pada kenyataanya teknik aspetis tidak dapat melindungi secara sempurna dari bahaya kontaminan. Namun semakin banyak belajar dari pengalaman maka semakin mengurangi resiko yang ditimbulkan.

Penggunaan teknik aseptis - Teknik aseptis seharusnya digunakan saat kita bekerja dengan mikroorganisme hidup dan dengan segala media pertumbuhannya. - Teknik aseptis sebaiknya digunakan ketika kita tidak ingin larutan dari suatu botol tidak berubah sifat akibat aktivitas mikroorganisme, seperti saat membuat buffer (larutan penyangga) meskipun buffer dengan konsentrasi garam tinggi atau mengandung deterjen. - Teknik aseptis disarankan pada saat kita bekerja menggunakan agen atau senyawa yang berbahaya seperti bahan kimia beracun atau bahan radioaktif. Tentu saja perlindungan diri sendiri dari bahaya senyawa ini lebih penting. Beberapa contoh : - Mentransfer biakan dari media satu ke media lainnya. Bakteri kontaminan yang tumbuh tentu saja dapat mengganggu kemurnian biakan dan mungkin saja membuat rancu hasil yang didapatkan. - Memfilter media atau serum dan menghitung jumlah bakteri dengan cara filtrasi. Kontaminasi yang ikut tersaring dapat tumbuh pada media baru yang membuat tidak terpakainya media pertumbuhan tersebut atau mempengaruhi jumlah total bakteri. - Membuka dan merehidrasi bakteri terliofolisasi. Teknik aseptis dapat menjaga sel yang terrehidrasi dari bakteri kontaminan dan menjaga tidak keluarnya sel ke meja kerja. - Melakukan reaksi restriksi atau PCR. Walaupun enzim restriksi pada umumnya disimpan dalam gliserol 50% (bakteriostatik) tapi enzim yang diencerkan akan lebih rentan rusak akibat aktivitas mikroorganisme atau dihambat oleh ion atau unsur tertentu. Kontaminasi DNA asing yang masuk ke dalam tube PCR mungkin dapat teramplifikasi sehingga hasil yang didapat membingungkan. - Melabeli sel dengan (32P) fosfat. Pada kasus ini kerja aseptis ditujukan untuk melindungi operator dari bahan kimia berbahaya. Jika menggunakan teknik aseptis maka Anda tidak akan membiarkan tutup bahan radioaktif terbuka atau secara tidak sengaja menggunakan pipet bekas bahan radioaktif. Aturan umum teknik aseptis - Meja kerja sebaiknya jauh dari sesuatu yang dapat menciptakan aliran udara, misalnya tidak ada jendela yang terbuka, tidak dekat dengan pintu yang selalu dibuka-tutup dan jauh dari

lalu-lintas orang. Penggunaan kabinet biosafety dapat menjaga dan mengatur aliran udara tetapi ini bukan merupakan suatu jaminan mutlak dari resiko terkontaminasi. - Pastikan meja kerja bersih dari kotoran dan benda-benda yang tidak akan digunakan. Kultur tua atau pipet bekas seharusnya tidak berada di meja kerja. Kotoran seringkali sulit dibersihkan pada sudut-sudut ruang. - Usap meja kerja dengan antiseptik atau senyawa pembersih lain sebelum digunakan. Di sebagian besar laboratorium umumnya menggunakan etanol 70% untuk membersihkannya. Sediakan etanol pada posisi selalu dekat dengan meja. Jika telah selesai bekerja, sebaiknya meja kerja dikosongkan dari peralatan dan bersihkan lagi. - Semua peralatan (pipet, cawan dll.) yang digunakan harus steril. Sebaiknya semua peralatan yang telah disterilisasi diberi label. Jika menemukan alat yang sepertinya telah disterilisai tapi masih ragu terhadap sterilitasnya maka sebaiknya jangan digunakan. Bungkus peralatan baik alat steril sekali pakai atau bukan (pipet, syringe dll.)diperiksa terlebih dahulu apakah terdapat kebocoran atau tersobek. - Atur peralatan di meja kerja sedemikian rupa sehingga meminimalisir pergerakan tangan. Alat-alat yang biasanya digunakan dengan tangan kanan (jarum inokulum, filler, pipet dll.) letakkan disebelah kanan begitu juga sebaliknya (rak tabung, cawan petri, erlenmeyer dll.) terkecuali untuk tangan kidal. Di bagian tengah meja kerja disediakan ruang lapang untuk bekerja. - Membakar mulut atau bagian tepi dari suatu alat dapat membunuh mikroorganisme yang menempel. - Telah siap dengan segala peralatan dan bahan yang dibutuhkan. Semua bahan dan alat untuk prosedur tertentu telah dipersiapkan di meja kerja. Jangan sampai meninggalkan meja kerja untuk mengambil sesuatu yang terlupa atau tertinggal. Perhitungkan semua yang diperlukan beserta cadangannya. - Pakai sarung tangan lateks dan ganti secara berkala. Sarung tangan membantu melindungi dari tumpahan biakan atau bahan kimia berbahaya. Tidak menggunakan sarung tangan dirasa tidak bermasalah jika materi dan bakteri yang diteliti dipastikan tidak berbahaya. - Cuci tangan sebelum dan sesudah bekerja. Cuci tangan dengan desinfektan atau sabun bila tidak ada desinfektan. Cuci tangan dapat membilas mikroorganisme yang ada di tangan. Saran-saran teknik aseptis - Minimalisasi gerak : pergerakan tangan dapat menciptakan aliran udara . semakin cepat pergerakannya semakin cepat aliran udara yang ditimbulkan. Pergerakan lengan sebaiknya dilakukan seperlu mungin dan bergerak secara lembut. - Minimalisasi jarak: jarak antar peralatan diatur seefektif dan seefisien mungkn. Antar peralatan jangan diletakkan terlalu jauh. - Minimalisasi keterpaparan : semakin sering menggerakkan sesuatu (mis: cawan berisi media) melewati udara maka semakin besar partikel udara untuk masuk. Semakin lama tutup erlenmeyer terbuka juga semakin besar terkontaminasi. Catatan penting dalam kerja secara aspetis - Tutup erlenmeyer, botol atau cawan sebaiknya dibuka kira-kira 450. tujuannya untuk meminimalisasi udara masuk namun masih dapat mentransfer sesuatu. - Jika diharuskan untuk membuka penuh dan tutup diletakkan di meja kerja, maka tutup dapat diletakkan tertelungkup atau terlentang (muka menghadap ke atas). Jika tertelungkup pastikan permukaannya bersih dan bila terlentang pastikan juga tidak ada gerakan di atasnya. - Untuk menghindari bakteri yang menempel pada jarum inokulum terpental/terciprat maka diameter loops harus berkisar 2-3 mm dan untuk memperkecil getaran panjang kawat tidak lebih dari 6cm.

- Tidak boleh menyedot cairan pada saat pipeting dengan mulut. - Untuk menghindari penyebaran mikroba dari tetesan pipet yang terjatuh maka dapat digunakan kain steril yang diberi desinfektan sebagai alas. Kain ini setelah selesai dibuang sebagai limbah berbahaya. Terminologi Antiseptik bahan kimia yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Asepsis pencegahan kepada mikroorganisme pengontaminasi dengan membunuh, memindahkan atau mencegah masuk mikroorganisme terhadap bahan steril. Bakterisida bahan kimia atau fisika yang dapat membunuh sel vegetatif (non-spore forming) bakteri. Bakteriostatik bahan kimia yang dapat mencegah pertumbuhan (multiplikasi) bakteri. Kontaminasi introduksi atau pemaparan mikroorganisme terhadap bahan steril. Disinfektan bahan kimia yang diperuntukkan membunuh, memindahkan mikroorganisme pathogen kecuali spora bakteri. Steril bebas dari mikroorganisme Sterilisasi pembebasan suatu benda terhadap segala jenis kehidupan.. Referensi: Barker, Kathy. 1998. At The Bench, A Laboratory Navigator. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York. Donacki, Nanci. 2004. Aseptic techniques used by Cell Culture specialists in handling products from and/or mammalian cells. http://protocol-online.org. James, Daniel E., 2008. Nine Safe Practices for the Microbiology Laboratory Carolina Biological Supply, Burlington, NC.John C. Schof ield, B.V.Sc., M.R.C.V.S. Essentials for Animal Research:A Primer for Research Personnel : Principles of Aseptic Technique. http://www.unmc.edu/Education Suhardi, S.H., Koesnandar, D. K. Indriani, H. Arnaldo. 2008. Biosafety : Pedoman Keselamatan Kerja di Laboratorium Mikrobiologi dan Rumah Sakit. PT. Multazam Mitra Prima.

TEKNIK PEMINDAHAN BIAKAN MIKROBE SECARA ASEPTIK


LAPORAN MIKROBIOLOGI DASAR Nama : Khalida Hanum NRP : C34100070

Nama asisten/NRP: Panji Cahya M/G84080009 Ikra Alma K/G34070065 TEKNIK PEMINDAHAN BIAKAN MIKROBE SECARA ASEPTIK Hasil Pengamatan

Nutrient Borth (NB)

Nutrient Borth & Serratia marcescens

Serratia marcescens

Pembahasan Praktikan kali ini mengamati bagaimana teknik pemindahan bakteri dari satu wadah ke wadah lain secara aseptic. Dalam hal pengamatan ini memerlukan bahan yaitu 3 tabung nutrient broth (NB, kaldu nutrisi), 1 tabung agar miring nutrient agar (NA, agar nutrient), dan biakan agar miring Serratia marcescens. Pada percobaan pertama

membandingkan nutrient borth dengan menghasilkan warna kuning bening. Hal ini membuktikan bahwa praktikan berhasil, karena pada percobaan ini tidak ada patogen yang masuk kedalam larutan nutrient borth. Percobaan kedua yaitu mengamati Serratia marcescens dengan warna yang di dapat pada tabung reaksi adalah merah muda dan keruh. Pengamatan ini sudah sesuai dengan teori yang di dapat. Percobaannutrient broth (NB) dan Serratia marcescens di dapatkan hasil yang sangat berbeda, dan percobaan ini berhasil. Untuk menjaga keberlangsungan hidup suatu mikroba maka perlu diadakan pemiaraan atau biakan (kultur, culture) mikroba. Kultur tersebut dapat disimpan dalam waktu yang cukup lama. Guna memperoleh satu spesies saja dalam satu piaraan, maka perlu diadakan suatu piaraan murni (pure culture). Piaraan murni dapat diperoleh dari piaraan campuran (mixed culture) yang biasanya diperoleh dari udara, tanah, kotoran dan lain lain. Setiap laboratorium mikrobiologi umumnya memiliki koleksi berbagai piaraan murni yang disebut dengan piaraan simpanan (stock culture/primary culture). Stock culture ini disimpan dan secara periodik harus dilakukan peremajaan dengan memindahkannya ke media baru yang steril. Media baru ini disebut piaraan turunan (sub culture). Pemindahan kultur ini harus dilakukan dengan cermat menurut teknik aseptik. Teknik aseptik adalah teknik pemindahan mikroba dengan menggunakan alat-alat yang steril serta aturan laboratorium tertentu agar tidak terjadi kontaminasi di dalam kultur tersebut. Serratia marcescens diketahui dapat mengakibatkan infeksi pada manusia, dengan banyak kuman yang resistan terhadap segala antibiotik misalnya influensa. Serratia marcescensmerupakan jenis bakteri yang tergolong Gram negatif berbentuk basil atau bulat lonjong dan beberapa galur membentuk kapsul, Serratia marcescens merupakan mikroorganisme yang memiliki kemampuan bergerak dengan cepat sebab Serratia marcescens mempunyai flagela peritrik, umumnya mikroorganisme ini dapat tumbuh dengan kisaran suhu 5 C -40 C sedangkan kisaran pH antara 5-9. Koloni Serratia marcescens pada media agar biasa tidak terbedakan pada hari pertama atau hari kedua dan kemudian mungkin berkembang menjadi cembung. Serratia marcescens diketahui berwarna merah pada suhu kamar, sebab bakteri Serratia marcescens ini menghasilkan zat warna merah produksi dari pigmen prodigiosin. Bakteri ini jenis bersifat fakultatif anaerobik yaitu bakteri yang tidak terlalu membutuhkan oksigen (Pelczar dan Chan, 2007). Teknik aseptik adalah langkah-langkah yang diambil agar dalam percobaan di laboratorium sehingga diperoleh hasil yang akurat. Contoh dengan menghindarkan percobaan dari mikroorganisme yang dapat mengkontaminasi produk sehingga terjadi perubahan yang tidak diingainkan. Teknik aseptik juga berfungsi untuk melindungi diri dari infeksi dan pencemaran lingkungan. Langkah aseptik yang diambil missal dengan menyemprotkan alkohol pada tangan dan mengelap meja percobaan dengan desinfektan sebelum memulai percobaan. Selain itu juga menghindari kontak dengan kontamianan. Teknik aseptic ada dua macam yaitu dengan cara modern (laminar) dan
0 0

konvensional. Teknik aseptic yang digunakan pada pengamatan kali ini dengan menggunakan teknik konvensional, dengan cara di bakar kawat lup di bakar di atas pembakaran Bunsen. Sedangkan pada teknik modern dinamakan lamaran. Laminar Air Flowadalah alat sterilisasi yang menggunakan prinsip filtrasi udara dan penggunaan radiasi ultraviolet.Laminar air flow digunakan sebagai tempat untuk melakukan kegiatan laboratorium yang membutuhkan kondisi steril, seperti membuka alat yang telah disterilisasi dan menyiapkan samel mikrobia. Lingkungan dalam laminar air flow disterilisasi dengan 2 cara. Sebelum digunakan,laminar air flow ditutup dan lampu UVR dinyalakan sehingga mikrobia di udara dan permukaan ruang mati, lalu saat bekerja, kondisi udara dijaga stabil dengan filtrasi udara. Komponen laminar air flow antara lain ruang kaca steril yang dilengkapi dengan tutup, filter udara di bagian belakang, lampu UVR di langit-langit ruang, lampu biasa untuk membantu proses kerja, serta panel tombol untuk menyalakan lampu UVR, filter dan lampu biasa. Kesimpulan Teknik pemindahan bakteri dari satu wadah ke wadah yang lain secara aseptic sudah berhasil melakukannya dengan menggunakan percobaan teknik aseptic secara konversional. Sebagai bukti dengan melakukan percobaan membandingkan nutrient borth dan Serratia marcescens, yang menghasilkan warna bening kuning di nutrient borth sedangkan serratia marcescens berwarna kuning keruh.

Daftar Pustaka Dwidjoseputro. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan: Jakarta Pelezar,chan. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI Press: Jakarta Singleton dan Sainsbury, 2006. Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3 Edition. John Wiley and Sons Inc. Sussex, England.
rd

TEKNIK PEMINDAHAN MIKROORGANISME SECARA ASEPTIK


7:41 PM Wilda Chusnia No comments Email This BlogThis! Share to Twitter Share to Facebook

TEKNIK PEMINDAHAN MIKROORGANISME SECARA ASEPTIK TUJUAN Bab ini dirancang untuk mengajari mahasiswa dalam menguasai teknik pemindahan bakteri secara aseptik.

PENDAHULUAN Mikroorganisme terdapat di mana-mana, oleh karena itu mikroorganisme luar yang tidak dikehendaki dapat masuk ke dalam biakan murni melalui aliran udara, kontak tangan yang tercemar, atau melalui tersentuhnya media atau permukaan tabung bagian dalam oleh benda yang belum disterilkan. Untuk mencegah mikroorganisme luar yang tidak dikehendaki masuk ke dalam biakan murni, perlu digunakan teknik aseptik, dimana semua peralatan maupun media pertumbuhan yang akan digunakan pada teknik ini harus dalam keadaan steril/aseptik. Ada beberapa metode untuk memindahkan biakan murni dari satu wadah ke wadah yang lain secara aseptik:
a. metode streak/gores b. metode spread/sebar c. metode pour plate/cawan tuang

Pada praktikum ini akan dipelajari langkah demi langkah cara memindahkan biakan murni dengan teknik aseptik. Biakan murni adalah biakan yang hanya terdiri dari satu spesies tunggal. BAHAN-BAHAN Kultur Rak tabung reaksi, tabung reaksi, media nutrient broth (NB), media nutrient agar (NA). Alat Jarum ose/lup inokulasi, batang kaca bentuk L untuk metode sebar spread, api bunsen/spiritus, alcohol, aluminium foil. PROSEDUR PERCOBAAN A. Metoda Streak/gores pada tabung agar miring 1. Menyiapkan jarum ose/lup inokulasi dari kawat nikrom, panjang kawat 610 cm, pada ujung kawat terdapat lingkaran dengan diameter antara 2-4 mm.

2. Menyiapkan 3 tabung reaksi yang disumbat kapas, 1 tabung reaksi berisi biakan murni bakteri, 1 tabung reaksi berisimedium padat NA/agar miring steril, 1 tabung berisi media cair NB steril. 3. Memegang 2 tabung reaksi di tangan kiri (1 tabung berisi biakan murni bakteri dan 1 tabung reaksi berisi medium cair NB) dan jarum ose di tangan kanan. 4. Memanaskan jarum ose di atas pembakar spiritus sampai seluruh kawatnya pijar, kemudian menggerakkan dengan cepat ose tersebut kearah bawah di atas api sehingga sebagian tangkai jarum ose ikut terpanasi, biarkan jarum ose mendingin selama + 20 detik sebelum dipakai, untuk mencegah matinya bakteri yang akan dipindahkan. 5. Mengangkat sumbat kapas ke dua tabung reaksi satu demi satu, mulai dengan sumbat tabung yang terdekat dengan tangan kanan yaitu tabung reaksi yang berisi biakan bakteri, dengan cara melingkarkan jari kelingking di sekitar sumbat kapas. 6. Mengangkat sumbat kapas tabung yang berisi media steril dengan jari manis, gerakan memutar biasanya memudahkan lepasnya sumbat dari mulut tabung. 7. Memanaskan mulut kedua tabung reaksi yang tidak bersumbat dengan cara melakukannya bolak-balik sebanyak dua kali di atas api. Kemudian menjaga agar sudut kemiringan tabung tidak melebihi 45 bila tidak tersumbat. 8. Memasukkan lup pada tabung yang berisi bakteri untuk dipindahkan ke dalam tabung yang berisi media cair steril. 9. Memanaskan kembali mulut kedua tabung tersebut seperti semula. 10. Mengembalikan sumbat masing-masing tabung seperti sediakala, tutup dengan alumunium foil. 11. Mengulangi pemindahan aseptic untuk memindahkan sejumlah kecil bakteri kedalam tabung berisi agar miring NA steril. Cara inokulasi agar miring dimulai dengan meletakkan lup ysng mengandung bakteri pada dasar kemiringan agar, lalu ditarik ke atas dengan gerakan zig-zag. 12. Setelah mulut tabung dipanaskan dan disumbat kembali dengan kapas dan alumunium foil, kemudian menyimpan tabung ke rak tabung.

13. Memberi etiket pada semua tabung yang baru diinokulasi, meletakkan tabung diruang yang disediakan untuk diinkubasi selama 48 jam pada suhu kamar. 14. Pada kegiatan praktikum berikutnya, mengamati tabung-tabung tersebut, bila teknik pemindahan secara aseptic dilakukan dengan baik maka tabung NB akan tampak keruh, sedangkan pada agar miring NA tampak zig-zag koloni bakteri. 15. Menunjukkan hasil praktikum pada Dosen/asisten yang bertugas. B. Metoda streak/gores pada agar cawan petri 1. Bagian bawah cawan petri yang berisi Nutrient Agar dibagi menjadi 4 bagian dengan mengggunakan spidol. 2. Membuka tutup cawan petri dengan mulutnya didekat api Bunsen. 3. Memijarkan ujung lup, kemudian didinginkan. 4. Memasukkan lup pada tabung yang berisi bakteri. 5. Ujung lup yang berisi bakteri digoreskan di atas cawan petri dimulai dari bagian 1, melanjutkan ke bagian 2, kemudian bagian 3 dan terakhir bagian 4. Memperhatikan selama menggores dari bagian 1 sampai bagian 4, ujung lup yang mengandung bakteri tidak boleh keluar dari dalam cawan petri. 6. Menutup cawan petri, kemudian memberi isolasi sekeliling cawan, sehingga cawan tertutup rapat. 7. Memberi etiket pada semua tabung yang baru diinokulasi, meletakkan tabung diruang yang disediakan untuk diinkubasi selama 48 jam pada suhu kamar. 8. Pada kegiatan praktikum berikutnya, mengamati tabung-tabung tersebut, bila teknik pemindahan secara aseptic dilakukan dengan baik maka tabung NB akan tampak keruh, sedangkan pada agar miring NA tampak zig-zag koloni bakteri. 9. Menunjukkan hasil praktikum pada Dosen/asisten yang bertugas. C. Metoda spread/sebar 1. Mengambil 0,1 ml biakan murni bakteri dengan pipet volume.

2. Membuka tutup cawan petri yang berisiagar nutrient dengan mulutnya didekat api Bunsen. 3. Mengambil 0,1 ml biakan bakteri dan diteteskan di atas media padat dengan menggunakan popet volume. 4. Kemudian menyebarkan/Spread dengan alat spread dari gelas bentuk L secara merata. 5. Menutup cawan petri, kemudian memberi isolasi sekeliling cawan, sehingga cawan tertutup rapat. 6. Memberi etiket pada semua tabung yang baru diinokulasi, meletakkan tabung diruang yang disediakan untuk diinkubasi selama 48 jam pada suhu kamar. 7. Pada kegiatan praktikum berikutnya, mengamati tabung-tabung tersebut, bila teknik pemindahan secara aseptic dilakukan dengan baik maka tabung NB akan tampak keruh, sedangkan pada agar miring NA tampak zig-zag koloni bakteri. 8. Menunjukkan hasil praktikum pada Dosen/asisten yang bertugas. D. Metode pour plate/cawan tuang 1. Mengambil 1 ml biakan murni bakteri dengan pipet volume. 2. Membuka tutup cawan petri kosong yang sudah steril dengan mulutnya didekat api Bunsen. 3. Memasukkan 1 ml biakan bakteri tersebut di atas cawan petri kosong. 4. Kemudian menuang larutan nutrient agar yang masih cair temperatut 40C (dapat di coba dengan menempelkan labu Erlenmeyer yang berisi NA cair, jika di pipi sudah tidak terasa tidak terlalu panas siap digunakan) kedalam cawan petri yang berisi bakteri tersebut. 5. Menutup cawan petri , memutar-mutar 3 kali ke kiri dan 3 kali ke kanan. 6. Membiarkan di suhu ruang sampai agarnya membeku dan diberi isolasi sekitar cawan. Membiakkan lalu disimpan diinkubator sesuai dengan suhu dan waktu yang dibutuhkan untuk pertumbuhannya.

7. Memberi etiket pada semua tabung yang baru diinokulasi, meletakkan tabung diruang yang disediakan untuk diinkubasi selama 48 jam pada suhu kamar. 8. Pada kegiatan praktikum berikutnya, mengamati tabung-tabung tersebut, bila teknik pemindahan secara aseptic dilakukan dengan baik maka tabung NB akan tampak keruh, sedangkan pada agar miring NA tampak zig-zag koloni bakteri. 9. Menunjukkan hasil praktikum pada Dosen/asisten yang bertugas.

PEMBAHASAN Pekerjaan memindahkan mikrobe dari medium lama ke medium yang baru harus dilaksanakan secara teliti. Terlebih dahulu harus diusahakan agar semua alat alat yang sangkut paut dengan medium dan pekerjaan inokulasi ( penanaman ) itu benar benar streil. Hal ini untuk menghindarkan kontaminasi, yakni masuknya mikroorganisme yang tidak kita inginkan. Beberapa langkah pada pekerjaan inokulasi dan isolasi mikrobe adalah sebagai berikut : 1. Menyiapkan Ruangan Ruang tempat inokulasi harus bersih, dan bebas angin. Dinding ruang yang basah menyebabkan butir butir debu menempel. Pada waktu mengadakan inokulasi, baik sekali bila meja tempat inokulasi didasari dengan kain basah. Pekerjaan inokulasi dapat dilakukan di dalam suatu kotak berkaca ( ent- kas ). Di laboratorium untuk membuat vaksin, serum, dan lain sebagainya, udara yang masuk ke dalam ruangan dilewatkan saringan yang disinari dengan sinar ultra ungu. 2. Pemindahan dengan Kawat Inokulasi Ujung kawat inokulasi sebaiknya dari platina atau dari nikrom. Ujung kawat boleh lurus, boleh juga kolongan yang berdiameter 1- 3 mm. Lebih dahulu ujung kawat ini dipijarkan, sedang sisanya sampai tangkai cukup dilewatkan nyala api saja. Setelah dingin kembali, ujung kawat itu disentukan suatu koloni. Mulut tabung tempat pemiaraan itu dipanasi juga setelah sumbatnya diambil. Setelah pengambilan inokulum( sampel bakteri ) selesai, mulut tabung dipanasi lagi kemudian disumbat seperti semula. Ujung kawat yang membawakan inokulum tersebut digesekkan pada medium baru atau pada suatu kaca benda. Komponen komponen yang harus disterilkan yaitu : a. Alat alat yang akan digunakan, seperti : cawan petri , pipet volume, ose.

b. Lingkungan, yaitu meja tempat kita bekerja disemprot alkohol. c. Person yaitu dengan menyemprot tangan dengan alkohol serta dapat juga memakai masker. d. Media 3. Teknik Biakan Murni Di alam bebas tidak ada mikrobe yang hidup tersendiri terlepas dari spesies lain. Seringkali mikrobe patogen kedapatan secara bersama sama dengan mikrobe saproba ( saprobakteri ). Dalam teknik biakan murni tidak saja diperlukan bagaimana memperoleh suatu biakan murni, tetapi juga bagaimana memelihara serta mencegah pencemaran dari luar. Medium untuk membiakkan mikrobe haruslah steril sebelum digunakan. Pencemaran ( kontaminasi ) dari luar terutama berasal dari udara yang mengandung banyak mikroorganisme. Teknik biakan murni untuk suatu spesies dikenal dengan beberapa cara, yaitu : a. Cara Penggesekan Cara ini lebih menguntungkan bila ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tetapi memerlukan keterampilan yang diperoleh dari latihan. Penggoresan yang sempurna akan mengahsilkan koloni yang terpisah. Tetapi kelemahan cara iniadalah bakteri bakteri anaerob tidak dapat tumbuh. Bakteri yang mempunyai flagel seringkali membentuk koloni yang menyebar terutama bila digunkan lempengan agar yang basah. Untuk mencegah hal ini harus digunakan lempengan yang benar benar kering. Untuk mendapatkan koloni yang terpisah sewaktu melakukan goresan harus memperhatikan, antara lain : Gunakan ose yang telah dingin untuk menggores permukaan lempengan agar. Sengkelit yang panas akan mematikan mikroorganisme, sehingga tidak terjadi pertumbuhan pada bekas goresan. Sewaktu menggores, sengkelit dibiarkan meluncur diatas permukaan lempengan. Agar yang luka akan menganggu pertumbuhanmikroorganisme, sehingga sulit diperoleh koloni yang terpisah. Sengkelit harus dipijarkan setelah menggores suatu daerah, hal ini dengan tujuan mematikan mikroorganisme yang melekat pada mata ose dan mencegah pencemaran pada penggoresan berikutnya. Menggunakan tutup cawan petri untuk melinduingi permukaan supaya terhindar dari pencemaran. Membalikkan lempengan agar untuk mencegah air kondensasi jatuh diatas permukaan sehingga dapat terjadi penyebaran koloni. b. Cara spread atau sebar

Pengenceran sampel sama seperti pada cara penuangan. Dengan memipet sebanyak 0,1 ml cairan dari botol pengencer dan biarkan cairan mengalir ke atas permukaan agar. Cairan sampel disebarkan dengan penyebar yang terbuat dari gelas berbentuk huruf L. Pada teknik ini sterilisasi penyebar dilakukan dengan mencelupkan ke dalam alkohol dan kemudian dipanaskan sampai alkohol terbakar habis. Penyebar didinginkandahulu sebelum digunakan untuk menyebar cairan sampel pada permukaan agar. Penyebaran cairan contoh ( sampel ) dilakukan dengan memutar agar lempengan tersebut. c. Cara Pour plate atau tuang Isolasi dengan menggunakan medium cair dengan cara penuangan. Prinsip melakukan penuangan adalah menurunkan jumlah mikroorganisme sehingga suatu saat hanya ditemukan suatu sel dalam tabung. Metode ini pertama kali dilakukan oleh Robert Koch ( 1843 1905 ). Terkadang masih terjadi kontaminasi pada medium biakan yang kita buat. Hal ini dikarenakan oleh : 1. Sterilisasi media dan alat kurang sempurna 2. Kontak langsung dengan permukaan atau tangan kita tercemar 3. Terentuhnya media ataupermukaan tabung bagian dalam oleh benda benda yang belum disterilkan 4. Melalui udara KESIMPULAN 1. Metode pemindahan biakan murni secara aseptik, antara lain : a. Metode streak atau gores Penggoresan sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. Kelemahannya adalah bakteri anaerob tidak dapat tumbuh. Alat yang utama yaitu ose. b. Metode spread atau sebar Alat utamanya yaitu gelas berbentuk L c. Metode pour plate atau tuang Alat utama yang digunakan yaitu pipet volume 2. Tujuan pemindahan bakteri ke media adalah untuk merefresh bakteri agar bakteri bereproduksi lebih banyak dan sempurna. DAFTAR PUSTAKA Waluyo,Lud.Drs.M.Kes.2004.Mikrobiologi Muhammadiyah Press : Malang. Umum.Universitas

Schlegel,H.G. dan Schmidt, K.1994. Mikrobiologi Umum. Gadjah Mada University Press : Yogyakart

Anda mungkin juga menyukai