Suero Control Positivo:
Suero de conejo el cual ha sido inmunizado contra todos los
ANTÍGENOS FEBRILES
AGENTE DE DIAGNÓSTICO
SIGNIFICADO CLÍNICO
La infección causada por microorganis-mos de diversas es-
pecies produce entre otros síntomas una marcada elevación
de la temperatura, tal es el caso de la fiebre tifoidea causa-
da por Salmonella typhi, S. enteritis , así como las
paratifoideas causadas por S. paratyphi A y B, y el tifo cau-
sado por el genero Rickettsias . La infección por estos
microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo hu-
moral con la producción de anticuerpos que pueden ser de-
tectados con el antígeno específico.
Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las
Rickettsia sp, el antígeno empleado para la determinación
de anticuerpos es el de Proteus OX-19, el cual presenta una
reacción cruzada con bacterias del genero Rickettsia.
La reacción de Huddleson es un método serológico que
detecta anticuerpos contra B. abortus, B. melitensis y B. Suis,
agentes causales de la brucelosis; también conocida como
fiebre de malta o fiebre ondulante por el cuadro febril carac-
terístico que se presenta.
FUNDAMENTO
La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los
anticuerpos séricos y el antígeno correspondiente produ-
ciendo una reacción de aglutinación macroscópica.
CONTENIDO
● Tífico “O” - Salmonella typhi; Antígeno somático,
pH: 6.5 ± 1.0
● Tífico “H” - Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH:
6.5 ± 1.0
● Paratífico “A” - pH: 6.5 ± 1.0
● Paratífico “B” - pH: 6.5 ± 1.0
● Proteus OX-19 - pH: 6.5 ± 1.0
● Brucella abortus - pH: 6.5 ± 1.0
Suero control negativo:
Suero de conejo el cual no ha sido inmunizado contra nin-
gún antígeno, por lo que no muestra ninguna aglutinación
con los antígenos en suspensión.
antígenos febriles en una suspensión.
MATERIALES REQUERIDOS, NO INCLUIDOS
• Pipetas serológicas
• Placa de Reacción
• Agitador
RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando la
hemólisis.
MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el
antígeno que se este usando.
NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la
temperatura ambiente para comenzar la prueba.
1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes
cantidades del suero a analizar: 0.08 mL, 0.04 mL, 0.02
mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBE ESTAR
TOTALMENTE CLARO).
2. Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión
uniforme.
3. Añadir 30 µL de la suspensión de antígeno a cada una
de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda
utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona
una gota de 30-40 µL).
4. Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador
diferente para cada una de las cantidades de suero.
5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador
mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.
6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y
observar la aglutinación macroscópica.
7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
El grado de aglutinación se registra como sigue:
4+ Aglutinación del 100% de los organismos
3+ Aglutinación del 75% de los organismos
2+ Aglutinación del 50% de los organismos
1+ Aglutinación del 25% de los organismos
- Aglutinación del 0% de los organismos
El titulo del suero será la inversa de la dilución más alta en
donde se observa una aglutinación del 50% de microorga-
nismos (2+)
Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproxi-
madamente equivalentes a las diluciones para prueba en tubo
como se muestra a continuación.
 VOLUMEN DEL SUERO TITULO 9. Registrar el título del suero en el cual la ultima dilución
de una aglutinación sea 2+.
0.08 mL 1 : 20
0.04 mL 1 : 40
PRECAUCIONES
0.02 mL 1 : 80
1. Todos los sueros por probar deberán estar totalmente
0.01 mL 1 : 160 claros y libres de contaminación bacteriana.
0.005 mL 1 : 320 2. No caliente el suero antes de probarlo.
3. Agite bien el antígeno antes de utilizarlo para asegurar
MÉTODO DE TITULACIÓN EN TUBO: una suspensión uniforme.
Mezcle bien la suspensión de antígeno mediante agitación 4. El antígeno se debe mantener en refrigeración a 2-8ºC
suave; prepare una dilución 1:20 del antígeno a utilizar en cuando no se utilice.
solución salina. 5. No congelar.
1. Colocar 7 tubos de 13 x 100 mm en una gradilla para
cada antígeno a probar, marcándolos del 1 al 6 y el tubo
Se recomienda la utilización de sueros control Positivo y
7 como control.
Negativo probados en paralelo con la muestra de suero para
2. Añadir al tubo 1, 0.9 mL de solución salina y 0.5 mL a asegurar al analista que el antígeno bacteriano en uso es
los 6 tubos restantes. capaz de reaccionar con su anticuerpo homólogo y mostrar
3. Añadir 0.1 mL del suero a probar al tubo número 1, mezcle cómo serán los resultados esperados en muestras de suero
bien y transfiera 0.5 mL al tubo número 2. positivas y negativas.
4. Continúe esta operación hasta el tubo número 6, eliminar
0.5 mL de esta dilución. El tubo 7 (Control negativo) tendrá LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
únicamente solución salina.
1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a
5. Añadir 0.5 mL del antígeno diluido 1:20 a cada uno de 1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a vacuna-
los 7 tubos. ciones o alguna infección anterior. No siempre se presenta
6. Agitar bien la gradilla para mezclar el antígeno y el suero producción de aglutininas en infecciones bacterianas.
e incubar en baño de agua. El tiempo y temperatura 2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas
recomendado es el siguiente. debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. La
vacuna tífica puede producir aglutininas contra antígenos
Antígeno Temperatura Tiempo de Proteus.
incubación 3. En la reacción de Huddleson, títulos de 1:80 pueden
consi-derarse ya de significado clínico.
Tífico “O” 48-50ºC 18-24 Horas
Tífico “H” 37ºC 2 Horas Nota: El diagnóstico exacto de la enfermedad depende del
S. paratyphi “A” y “B” 48-50ºC 2 Horas acercamiento entre el laboratorio clínico y el médico, ya que
la elevación del título en la muestra de suero con
Brucella abortus 37°C 48 Horas sintomatología reciente y la muestra de suero en fase
Proteus OX-19 37ºC 18-24 Horas convaleciente indicará la exactitud del diagnóstico.

7. Después de la incubación, saque la gradilla que contiene BIBLIOGRAFÍA

los tubos del baño y observe la aglutinación. La utilización
de una fuente de luz directa contra un fondo negro dará
mejores condiciones para la lectura.
8. Registrar los resultados como sigue :
1. Spink, W.W. : Amer, J. Clin, Path., 22 :201, 1952.
2. Dyer, R.E. : J.A.M.A., 124 : 1165, 1944.
3. Welch, H. & stuart, C.A. : J. Lab. Clin. Med., 21 :411, 1936
4. Felix, A. : Brit. MD. J., 11 :597, 1942.

4+ Todos los organismos 100% aparecen

sedimentados en el fondo del tubo y el Rev.: 22/02/02
sobrenadante es totalmente claro. IN-384
3+ Aproximadamente el 75% de los organismos
se encuentran sedimentados y el Fabricado en México por:
sobrenadante es ligeramente turbio.
LABORATORIOS MICSA
2+ Aproximadamente el 50% de los organismos
se encuentran sedimentados y el Estudios Clasa No. 9
sobrenadante es moderadamente turbio.
Col. Jardines Tecma
1+ Aproximadamente el 25% de los organismos
se encuentran sedimentados y el México, D.F.
sobrenadante es turbio.
Negativo No se observa aglutinación y la suspensión
es turbia.
 para:

Laboratorios Licon S.A.

Viveros del Rocío No. 33
Col. Viveros de la Loma
C.P. 54080 Tlalnepantla, Edo. de México
Tel.: (55) 5362-0299
Fax: (55) 5362-1792