Urea

cinética AA
Método cinético UV para la determinación de urea en
suero o plasma

SIGNIFICACION CLINICA ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE

La urea constituye la fracción de nitrógeno no proteico más
importante en la mayoría de los líquidos biológicos. En el
hombre es el principal producto final del metabolismo protei-
co. Se produce en el hígado y es excretada por la orina a
través de los riñones.
Una elevación de la concentración sérica de urea, se inter-
preta generalmente como una posible disfunción renal. Sin
embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los valores
séricos de urea se encuentran íntimamente relacionados con
la dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier altera-
ción en estas variables se traducirá en un cambio de la con-
centración de urea en suero.
ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)
hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Reactivo de Trabajo: en refrigerador (2-10oC) es estable 30
días a partir del momento de su preparación.
INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
REACTIVOS
Cuando el espectrofotómetro ha sido llevado a cero con agua,
lecturas de Absorbancia del Reactivo de Trabajo inferiores a
1,000 D.O. (a 340 nm) son indicio de deterioro del mismo, por
lo que debe descartarse.

FUNDAMENTOS DEL METODO MUESTRA

Basado en el siguiente esquema reaccionante: Suero o plasma
a) Recolección: obtener suero de la manera usual o plasma.
ureasa
urea + H2O > 2 NH3 + CO2 b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plas-
ma, se recomienda el uso de heparina o Anticoagulante W de
GlDH
NH3 + NADH + H+ + 2-oxoglutarato > l-glutamato + Wiener lab. para su obtención.
NAD+ + H2O c) Sustancias interferentes conocidas:
- Los anticoagulantes que contienen fluoruros inhiben la ac-
REACTIVOS PROVISTOS ción de la ureasa.
Standard: solución de urea 0,60 g/l. - Los vapores amoniacales contaminan la muestra, produ-
Buffer: solución de buffer Goods pH 7,9. ciendo valores falsamente aumentados.
Enzimas: viales conteniendo 2-oxoglutarato, NADH, ureasa Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
y glutamato deshidrogenasa (GlDH). drogas en el presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la urea
Concentraciones finales en suero es estable varios días en refrigerador o 6 meses en
2-Oxoglutarato .................................................... 7,5 mmol/l congelador, sin agregado de conservadores.
NADH .............................................................. 0,28 mmol/l
Ureasa ................................................................. ≥ 4000 U/l MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
GlDH ...................................................................... ≥ 400 U/l - Espectrofotómetro
Goods ................................................................. 100 mmol/l - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
- Cubetas espectrofotométricas
INSTRUCCIONES PARA SU USO - Cronómetro
Standard : listo para usar.
Reactivo de Trabajo: CONDICIONES DE REACCION
- 4 x 50 ml: disolver el contenido de un vial de Enzimas en un (disminución de la absorbancia)
frasco de Buffer. Enjuagar varias veces el vial con Buffer. Mez- - Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 ó 366)
clar suavemente por inversión hasta disolución completa, evi- - Temperatura de reacción: 37oC
tando la formación de espuma. Fechar. - Tiempo de reacción: 2 minutos
- 10 x 20 ml: disolver el contenido de un vial de Enzimas con - Volumen de muestra: 10 ul
20 ml de Buffer. Mezclar suavemente por inversión hasta di- - Volumen de Reactivo de Trabajo: 1 ml
solución completa, evitando la formación de espuma. Fechar. - Volumen final de la reacción: 1,01 ml
Se pueden alterar proporcionalmente los volúmenes de mues-
PRECAUCIONES tra y de reactivo a fin de acomodarlo a los requerimientos de
Los Reactivos son para uso diagnóstico "in vitro". los distintos espectrofotómetros.

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 d) Recuperación: agregando cantidades conocidas de urea a
PROCEDIMIENTO distintos sueros, se obtuvo una recuperación entre 96 y 102 %
Equilibrar los reactivos a la temperatura de trabajo antes para todo nivel de urea estudiado.
de agregar la muestra.
Llevar a cero el espectrofotómetro con agua destilada. En PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS
una cubeta mantenida a la temperatura de trabajo, colocar: Longitud de onda primaria ....................................... 340 nm
Longitud de onda secundaria (bicromática) ............. 380 nm
Reactivo de Trabajo 1 ml
Tipo de reacción ...................................................... cinética
Muestra o Standard 10 ul Dirección de la reacción ...................................... disminuye
Temperatura de reacción .............................................. 37oC
Mezclar inmediatamente (sin invertir) y disparar simultá-
Relación muestra/reactivo .......................................... 1:100
neamente un cronómetro. A los 60 segundos exactos me-
Tiempo de equilibrio ........................................... 3 segundos
dir la absorbancia (D1 o S1 ) y continuar la incubación. Me-
Tiempo de retardo ............................................ 60 segundos
dir nuevamente la absorbancia (D2 o S2 ) a los 120 segun-
Tiempo de lectura ............................................ 60 segundos
dos (60 segundos después de la 1° lectura). Determinar la
Absorbancia de Blanco ................................... > 1,200 D.O.
diferencia de absorbancia (ΔA). Utilizar esta diferencia para
Límite de Absorbancia ..................................... ≥ 0,800 D.O.
los cálculos.
Linealidad ..................................................................... 3 g/l
Para las instrucciones de programación consulte el manual
del usuario del analizador en uso.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
0,60 g/l PRESENTACION
Urea (g/l) = f x (D1 - D2 ) f= - 10 x 20 ml (Cód. 1810322).
(S1 - S2)
- 4 x 50 ml (Cód. 1810323).

METODO DE CONTROL DE CALIDAD BIBLIOGRAFIA

Standatrol S-E 2 niveles.
VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma: 0,10 - 0,50 g/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
- Para preservar la integridad de los reactivos debe emplearse
material volumétrico perfectamente limpio y seco.
- Evitar contaminaciones con amoníaco provenientes del am-
biente (ej.: humo de cigarrillo, vapores de amoníaco).
- No mezclar por inversión, dado que el sudor contiene urea.
- Searcy, R.L. - "Diagnostic Biochemistry" McGraw-Hill, New
York, NY 1969.
- Talke, H.; Schubert, G.E. - Klin Wochschr 43:174, 1965..
- Tiffany, T.O.; Jansen, J.M.; Burtis, C.A.; Overton, J.B.; Scott,
C.D. - Clin. Chem. 18:829, 1972.
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 4th ed., 2001.
- Faulkner, W.R.; King, J.W. - "Fundamentals of Clinical
Chemistry". Tietz NW (Ed) W.B. Saunders Co. Philadelphia
Chap 12:718, 1970.

PERFORMANCE
a) Reproducibilidad: procesando simultáneamente 20 re-
plicados de una misma muestra, se obtiene:
Nivel D.S. C.V.
0,50 g/l ± 0,011 g/l 2,32 %
1,83 g/l ± 0,024 g/l 1,33 %
b) Límite de detección: depende del fotómetro empleado y
de la longitud de onda. De acuerdo con la sensibilidad reque-
rida, en espectrofotómetro a 340 nm (con cubetas de caras
paralelas de 1 cm de espesor, reproducibilidad ± 2 nm, luz
espuria ≤ 0,5 %, semiancho de banda ≤ 8 nm) para 0,001
D.O. el mínimo cambio de concentración detectable será de
0,01 g/l. Elaborado por:
Wiener Laboratorios S.A.I.C.
c) Linealidad: la reacción es lineal hasta 3 g/l de urea. Para Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
valores superiores, diluir la muestra original 1:2 con agua des- http://www.wiener-lab.com.ar
tilada y repetir la determinación. Corregir los cálculos multi-
plicando el resultado por el factor de dilución empleado.
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Inscripto M.S.
Disp. Nº: 450/97
Wiener lab.
Cert. Nº: 1864/97 2000 Rosario - Argentina
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