Aula2.

Aula 2 Estequiometriadocrescimento microbianoeformaodeproduto

Estequiometriadareaomicrobiana. q Equaogeral. Crescimentoaerbico. Cinticadecrescimento. Cinticadeutilizaodesubstratos. Cinticadesntesedeprodutos. Modeloparaocrescimentomicrobiano ode o pa a o c esc e to c ob a o

Referencias
SHULER, Michael L.; KARGI, Fikret. Bioprocess engineering: basic concepts. 2nd. ed. concepts 2nd ed Upper Saddle River: Prentice Hall PTR PTR, c2002.553p. (Chemical engineering series ) ISBN 0130819085. SCHMIDELL Willib ld LIMA U l d Al id AQUARONE SCHMIDELL, Willibaldo; LIMA, Urgel de Almeida; AQUARONE, Eugnio; BORZANI, Walter (Coords.). Biotecnologia industrial: Engenharia Bioqumica, Vol. 2, Sao Paulo: Edgard Blucher, 2001. ISBN 8521202792 8521202792. GODIA C, e LOPEZ J. (editores) Ingeniera Bioqumica. Universidad Autnoma de Barcelona, Espaa. Captulo 4 Cintica microbiana. AIBA, S.; HUMPHREY, A. E.; MILLIS, N. F. Biochemical Engineering. Ed. Press, 153p. 1973

ESTEQUIOMETRIA DO CRESCIMENTO MICROBIANO E DA FORMAO DE PRODUTOS

O2

Fonte de carbono

Produtos

microrganismo
Fonte de nitrognio Clulas

CO2

H2O

Estudocintico Estudo cintico

Processoobedeceaoprincpiodeconservaodamatria

AC a H b Oc + BO2 + DNH 4 OH EC H O N + FCO2 + GH 2 O

Biomassa o assa Substrato Fontedenitrognio

Elementosminerais: fsforo,enxofre,cobre,clcio, etc.

Sntese

Manuteno

Hidrlise Hid li

Glicose

Piruvato

Produtos de Fermentao
( lactato, lcoois, cidos, etc.)

8 ATP

6 ATP

30 ATP
Ciclo de Krebs

Respirao Anaerbia p
(CO2, SO42-, NO3-)

CO2 Respirao Aerbia

O2

Esquema simplificado d processos aerbios e anaerbios E i lifi d de bi bi

COEFICIENTE DE RENDIMENTO ATP EM BIOMASSA YX/ATP

YX/ATP = quantidade de biomassa sintetizada por mol de ATP gerado

YXM/ ATP de: O valor de

10 a 11 g clulas/mol ATP para crescimento anaerbico de heterotrficos e de 6,5 g clulas/mol ATP para autotrficos

1 YX / ATP

1 YXM/ ATP

m ATP + D

mATP a velocidade de consumo de ATP para a manuteno celular

1 YX / O2

1 YXM/ O2

mO

Ocrescimentomicrobianopodeexpressarseemformadareaoqumica. Exemplo: ParaocrescimentoaerbiodeSaccharomyces cerevisiae sobreglicose:

Parapodercalcularoscoeficientesestequiomtricosnecessrioconhecera composioelementaldomicrorganismo. Podeser:experimentalmenteporanliseelemental. porconsultaemaliteratura. Formulaempricaeexpressaseporconvenioemfunodeumnicotomode carbono. ParaareaoanteriorCH1,703O0,459N0,171 Permitefazerbalanodemassaeenergiaparacadacomponenteedeterminar Permite fazer balano de massa e energia para cada componente e determinar oscoeficientesestequiomtricos.

CLCULOS ESTEQUIOMTRICOS

Uma clula t i U l l tpica:

CH1,8O0,5N0,2

Um mol de material biolgico definido como a quantidade que contm 1 grama de tomos de carbono, como em CHON

CLCULOS ESTEQUIOMTRICOS
Para a seguinte converso biolgica, onde no h formao de produtos, produtos alm de CO2 e H2O:

CHmOn + aO2 + bNH3

onde

cCHON + dH2O + eCO2

CHmOn representa 1 mol de carboidrato CHON representa 1 mol de material celular

Ento, fazendo um b l E t f d balano d massa: de C: H: O: N: 1=c + e m + 3b = c + 2d n + 2a = c + d + 2e b = c

O coeficiente respiratrio fi i t i t i :

e RQ = a

Ocoeficienterespiratriosedefine como: molesdeCO2formados moldeO2 gasto

GRAU DE REDUO ()
Quando as reaes so mais complexas, como quando h formao de produto extracelular, um coeficiente estequiomtrico adicionado. O conceito de grau de reduo utilizado para um balano de prtons e eltrons d bi t lt da biorreao. O grau de reduo de um composto orgnico definido como o nmero de equivalentes de eltrons disponveis por grama de tomos de carbono Os eltrons disponveis so aqueles que poderiam ser transferidos para o oxignio durante a oxidao de um composto a CO2, H2O e NH3. Grau de reduo de alguns elementos: g

C=4 H=1 N = -3

O = -2 P=5 S=6

COMO CALCULAR O GRAU DE REDUO ()

Metano (CH4):

1(4) + 4(1) = 8,

= 8/1 = 8 = 24/6 = 4 = 12/2 = 6

( ) Glicose (C6H12O6): 6(4) + 12(1) + 6(-2) = 24, Etanol (C2H5OH): 2(4) + 6(1) + 1(-2) = 12,

Um alto grau de reduo indica um baixo grau de oxidao:

CH4 > ETOH > glicose

Exemplo1:

Calcule o grau de reduo dos seguintes compostos. a) piruvato ( 3O3H3) ) p (C b) cido ltico (C3O3H6)

GRAU DE REDUO ()

Considere a produo aerbica de um nico produto extracelular:

CHmOn + aO2 + bNH3

substrato

cCHON + dCHxOyNz + eH2O+fCO2

biomassa produto

Os graus de reduo do substrato, biomassa e produto so:

s = 4 + m 2n b = 4 + 2 3 p = 4 + x 2y 3z
OBS: Os graus de reduo do CO2, H2O e NH3 so zero.

A equao da reao acima pode ser utilizada para balanos de massa, balanos elementares de C, H, O e N, balano eletrnico e energtico. Balano de carbono: c + d + f =1 ocoeficientec oYX/S ocoeficiented oYP/S

Balano de nitrognio: c + dz = b Balano eletrnico: cb + dp = s 4a

ocoeficientec oYX/S

RENDIMENTOS

coeficientederendimentobiomassa/substrato

ocoeficientec oYX/O2 coeficientederendimentobiomassa/oxignio ocoeficientec oYX/NH3 coeficientederendimentobiomassa/amnia fi i d di bi / i ocoeficiented oYP/S coeficientederendimentoproduto/substrato FATORDE FATOR DE CONVERSO

Exemplo2: p

Calculeoscoeficientesestequiomtricosparaocrescimento aerbiodeSaccharomyces cerevisiae sobreglicose: bi d S h ii b li

C6H12O6 + aO2 + bNH3 b cC 1,703 0,459 0,171 cCH1 703O0 459N0 171 + dH2O + eCO2 d

Ocoeficienterespiratrio,RQiguala1,033(molesdeCO2formados/molde O2 gasto).

Resposta:

CLCULO TERICO DOS COEFICIENTES DE RENDIMENTO:

Exerccio1:

A degradao aerbica de um composto orgnico por uma cultura mista de bactrias em um efluente industrial pode ser representada pela seguinte reao:
C3H6O3 + aO2 + bNH3 cC5H7NO2 + dH2O + eCO2

b) Determine os coeficientes de rendimento YX/O2 e YX/NH3 c) Determine o grau de reduo para substrato, bactria e o coeficiente respiratrio (RQ).

a) Determine a, b, c e e, se YX/S = 0,4 gX/gS.

Biomassa Concen ntrao(g g/L)

Produto

Substrato TempodeCultivo(h) Tempo de Cultivo (h) Cinticadecrescimentomicrobiano,utilizaodesubstratose sntesedeprodutos. sntese de produtos.

Curva de Crescimento
Esgotamento de nutrientes E t t d ti t

Fase de multiplicao celular.

Fase de adaptao ao meio de cultivo cultivo.

Fasede Fase de crescimento Lag

Taxade Taxa de crescimento zero

Caractersticas nenhumaumentononmerodeclulas, aumentamdetamanho,sosintetizadasnovas d h i i d enzimasparaasclulasseadaptaremaonovo meio condiesdecrescimentobalanceado;asclulas souniformesemtermosdecomposioqumicae atividademetablicasefisiolgicas.Picoda atividadeeeficinciafisiolgica acmulodeprodutosmetablicostxicose/ou exaustodenutrientes.Algumasclulasmorrem, exausto de nutrientes Algumas clulas morrem outrascrescemesedividem.Onmerodeclulas viveisdiminui acmuloadicionaldeprodutosmetablicos inibitrios.Ataxademorteacelerada;onmero declulasdiminuidemodoexponencial.

Exponencialou Log

mximaou constante

Estacionria

zero

Morte

negativa

QUANTIFICAO DO CRESCIMENTO MICROBIANO

Mtodos Diretos

Muitas vezes no so possveis devido presena de slidos em suspenso DETERMINAO DO NMERO DE CLULAS:

Contagem Microscpica e Contagem Celular Eletrnica - expresso em nmero de clulas/mL Contagem em Placa - expresso em UFC/mL (unidade formadora de colnia)

Contagem de clulas viveis (capazes de se reproduzir)

Estimativa de clulas viveis de uma amostra CONTAGEM EM PLACA

QUANTIFICAO DO CRESCIMENTO MICROBIANO

Mtodos Diretos
DETERMINAO DA CONCENTRAO CELULAR: Peso Seco mtodo direto mais comum para determinar a concentrao celular, usado apenas em meios de cultura sem slidos em suspenso. Amostras do caldo de cultivo so filtradas (volume conhecido) e secas por 24 h a 80C. 80 C. Peso de empacotamento mtodo pouco preciso. Amostras do meio de cultivo so centrifugadas em um tubo calibrado e o peso das clulas g p peletizadas determinado. Espectrofotometria absoro da luz pelas clulas em suspenso no meio de cultura. A medida da turbidez, ou densidade ptica do meio determinada. Mtodo rpido e de baixo custo. Deve ser feita uma curva de calibrao. No pode ser usado se o meio contm partculas em suspenso.

QUANTIFICAO DO CRESCIMENTO MICROBIANO

Mtodos Indiretos

Medidas do consumo de substrato e/ou formao de produtos Determinao de Componentes Celulares: Contedo de Nitrognio p g (protena), RNA, DNA, lipdios, polissacardeos Determinao de Produtos Metablicos Especficos Determinao de Componentes do Meio de Cultura glicose Viscosidade Produo de gs Condutncia Produo de calor

Variao de componentes celulares durante o crescimento bacteriano

CRESCIMENTO CELULAR
O crescimento microbiano pode ser considerado como um conjunto de reaes qumicas em cadeia, que levam produo de biomassa. q ,q p Os nutrientes do meio de cultura so convertidos em energia e em compostos biolgicos substrato + clulas S + X produtos extracelulares P + nX + mais clulas

Para o crescimento aerbico: X0 + S + O2 + NH4+ X + CO2 + P + H2O

onde X0 = inculo (g/L) X = biomassa (g/L) (g ) S = substrato (g/L) P = produto (g/L)

CINTICA DO CRESCIMENTO MICROBIANO

Velocidade de crescimento:

dX = X dt

1 dX = X d dt

= velocidade especfica de crescimento ( -1) p (h

Rendimento biomassa/substrato: YX/S relacionaaquantidadeformadadebiomassacomaquantidadedesubstratogasto

YX / S =

g biomassa formada g substrato utilizado

Rendimento produto/substrato: YP/S relacionaaquantidadeformadadeprodutocomaquantidadedesubstratogasto

YP / S =

g produto formado g substrato utilizado

CINTICA DO CRESCIMENTO MICROBIANO

Crescimentoembatelada(descontnuo) Cultura de clulas num recipiente FECHADO, com uma carga inicial de meio que no alterada pela adio ou remoo de nutrientes (volume dentro do biorreator constante).

Substrato (S)

CINTICA DO CRESCIMENTO MICROBIANO

FASELAG A idade do inculo possui grande influncia no tamanho da fase lag O ideal encontrar a idade tima do inculo que resulte numa fase lag mnima Para minimizar a fase lag, as clulas devem estar adaptadas ao meio de cultura, ser jovens ( (fase de crescimento exponencial) e ativas p ) O volume de inculo deve ser alto (5-10%) Mais de uma fase lag pode ser observada quando h mais de uma fonte de carbono (diauxia)

CINTICA DO CRESCIMENTO MICROBIANO

CRESCIMENTOEXPONENCIAL FASELOG O acmulo do nmero ou da massa de microrganismos ocorre segundo uma progresso geomtrica, sendo que a velocidade de crescimento proporcional massa de microrganismos num dado instante

dX = X dt

X = X0
ou

em t = 0
t

Integrando:

X ln = t X0

X = X 0e

linha t li h reta num grfico em escala l fi l logartmica (X versus t) t i

tempodeduplicaocelular: tempo de duplicao celular

d =

ln 2

0,693

Exerccio2: Foi realizado o crescimento de Saccharomyces cerevisiae a 30C em meio contendo: 30 C 10 g/L de extrato de levedura, 20 g/L de glicose e 20 g/L de peptona. O crescimento foi realizado em frascos de 1L contendo 300 mL de meio. p ( Amostras foram retiradas periodicamente e determinouse (os dados obtidos esto na tabela abaixo) : a absorbncia a 600 nm, o peso seco das clulas e o nmero total de clulas. Calcule e td para os trs modos de medida do crescimento microbiano.

Absorbncia ( )

N de clulas ( )

3 2

lnabs600nm

1 0 1 2 3 3 0 5 10 15 20 25 y=0,4511x 2,2187 y = 0 4511x 2 2187 R=0,9767

t(h)

Absorbncia ( )

Peso seco( )

2 1,5 1 0,5

lnX

0 0,5 05 1 1,5 2 0 5 10 15 1 20 25 2 y 0,2716x y =0,2716x 1,5638 R=0,9933

t(h)

CINTICA DO CRESCIMENTO MICROBIANO

FASEESTACIONRIA A taxa de crescimento igual a zero Alguns fenmenos podem ser observados: - A concentrao celular pode permanecer constante, mas o nmero d l l d de clulas viveis pode diminuir; - Pode ocorrer lise celular e a diminuio das clulas viveis; - A clulas podem no crescer, mas seu metabolismo continua ativo, As l l d t b li ti ti produzindo metablitos secundrios, tais como antibiticos, hormnios. As clulas catabolizam as reservas celulares para produzir monmeros energticos, que mantenham suas funes celulares mnimas (metabolismo endgeno) kd t dX ou = kd X S0

X=X e

dt

kd = constante de primeira ordem para o metabolismo endgeno

XS0 = concentrao celular no incio da fase estacionria

CINTICA DO CRESCIMENTO MICROBIANO

FASEDEMORTE Inicia no final da fase estacionria, devido exausto de nutrientes ou ao acmulo de produto txicos

dN = k 'd N dt

ou

N = NSe

K 'd t

kd = constante de primeira ordem de morte celular

NS = concentrao celular no final da fase estacionria
No incio da fase de morte pode ocorrer o restabelecimento da cultura se as clulas forem transferidas para um meio rico em nutrientes.

Dispondo de um conjunto de dados experimentais de X, S e P em funo do tempo temse:

dx = dt

ds = dt

dp = dt

Crescimento

Consumo

Formao

Calculo das parmetros cinticos para crescimento unicelular.

Distribuindo os dados da fase coordenadas semilogartmicas, t d d il t i temse:

exponencial

em

d ln( X ) = dt Velocidadesespecficas: Velocidades especficas:

Crescimento:

1 X

dX dt

1 X
s

dX dt d
1 = X dS dt

Consumodesubstrato:

Formao de produto: Formaodeproduto:

1 X

dP dt

Como essa fase tem a distribuio de uma reta a velocidade especfica de crescimento constante e mxima.

log l

l log

0 i

= (t ti )

X0i= Concentrao celular no instante de incio da fase exponencial p

Rearranjandoaequaoanterior: j q

X
ln

= X
X

0 i

( t ti )

Ou,reescrevendodeoutraforma,temse:

= ln

0 i

+ t

Assim, podese obter o t A i d bt tempo d d li d de duplicao da biomassa, onde X=2X0i:

Fatordeconversodesubstratoaclulas
Y
X / S

Tdup

ln 2

X X 0 S 0 S

X0=Concentraocelularinicial X=Concentraocelularnoinstantet S0=Concentraoinicialdosubstrato S=Concentraoresidualdosubstratonoinstantet. S C id l d b i

Para leveduras e bactrias crescendo aerobicamente em glicose, YX/S 0 4 a 0 6 g/g e YX/O2 0 9 a 1 4 g/g 0,4 0,6 / 0,9 1,4 / O coeficiente de manuteno utilizado para descrever a velocidade especfica de consumo de substrato para a manuteno celular:

Este parmetro importante para a determinao de X em cultivo de fungos filamentosos e em processos de tratamento de efluentes. O fator de converso pode ser obtido tambm atravs de:

/ S

Coeficientedemanuteno

= m

[dS/ dt]m dS/ m

X

'X / S

Velocidade especfica de consumo de substrato para manuteno da viabilidade celular

Produtividadedebiomassa
P = X
F

X T
F

X0=Biomassainicial; XF=Biomassafinal; TF=Tempototaldecultivo.

RENDIMENTO BIOMASSA-SUBSTRATO

Exerccio3:

Uma linhagem de fungo foi cultivada em batelada, utilizando glicose como substrato. Os seguintes dados foram obtidos:

Calcule: a) A velocidade especfica de crescimento b) O rendimento biomassa/substrato c) e qual a mxima concentrao celular seria esperada se 150 g de glicose fosse utilizada com o mesmo tamanho de inculo?

4 3,5 3 2,5

lnX X

2 1,5 1 0,5 05 0 0 10 20

y=0,1015x+0,0171 R=0,9986 R 0 9986

30

40

50

t(h)

CINTICA DO CRESCIMENTO MICROBIANO

VELOCIDADESESPECFICAS

1 dS S = X dt
1 dP P = X dt

de consumo de substrato

de formao de produto

Asvelocidadesespecficasdeconsumodesubstrato,deformaode p , produtoedecrescimentosoutilizadascomoparmetroscomparativos embioprocessos,indicandoaeficinciadosprocessos.

Formaodeprodutos. Formao de produtos. 1. Formaodeprodutodiretamente relacionadocomutilizaodasubstrato. l d l d b Exemplo:Etanol. e p o: ta o . 2. Formaodeprodutoindiretamente relacionadocomutilizaodasubstrato. l i d tili d bt t Exemplo:cidoctrico. p 3. Formaodeprodutoaparentementeno associadacomautilizaodasubstrato. associada com a utilizao da substrato Exemplo:Penicilina.

Classificaoosprocessosfermentativosdependendodeotipodereao. Simples: Os Si l O nutrientes se convertem em produtos com uma taxa estequiomtrica fi i d i i fixa,
sem acumulo de intermedirios. Exemplo: Converso de glicose em cido glucnico pela Aspergillus niger.

Simultneo: Os nutrientes se convertem em produtos com uma taxa estequiomtrica

varivel, varivel sem acumulo de intermedirios intermedirios. Exemplo: Converso de acar em protenas e gorduras durante o crescimento de Rhodotorula glutinis. Consecutivo: Os nutrientes se convertem em produtos com acumulo de intermedirios. Exemplo: Converso de glicose em cido glucnico pela Pseudomonas ovalis, a glicolactona intermedirio. Por passos: Os nutrientes se convertem completamente em intermedirios antes de p p convertesse em produtos. (dois reaes simples) Exemplos: Crescimento diauxico, dois fontes de carbono. Induo de uma enzima. Complexo: Envolve a combinao de reaes. Exemplo: Produo de penicilina.

CINTICA DA FORMAO DE PRODUTOS

PRODUTOSMICROBIANOS: 1. Produtos associados ao crescimento: produzidos simultaneamente com o crescimento a velocidade especfica de formao de produto proporcional velocidade d t i l l id d especfica de crescimento

1 dP P = = YP / X X dt
produo de enzima constitutiva, de etanol

CINTICA DA FORMAO DE PRODUTOS

PRODUTOSMICROBIANOS: 2. Produtos no associados ao crescimento: produzidos durante a fase estacionria de crescimento A velocidade especfica de formao de produto constante

P =

= constante

Muitos metablitos secundrios, como antibiticos Metabolismo de sobrevivncia

CINTICA DA FORMAO DE PRODUTOS

PRODUTOSMICROBIANOS: 3. Produtos parcialmente associados ao crescimento: produzidos durante o crescimento lento e fase estacionria produo de cido lctico, de goma xantana, de cido ctrico e outros metablitos secundrios produzidos a partir de metablitos primrios a velocidade especfica de formao de produto : = parmetro de f t d formao d produto de d t P associado ao crescimento

= +

relaodeLuedekingPiret g

= parmetro de formao de produto

no associado ao crescimento

CINTICA DA FORMAO DE PRODUTOS

RELAODELEUDEKINGPIRET

P = +
Se = 0, o produto no associado ao crescimento Se = 0 o produto associado ao crescimento e = YP / X 0, crescimento,

a b
a: crescimento parcialmente associado ao crescimento b: crescimento associado ao crescimento

c: crescimento crescimento

no

associado

ao

FATORES EXTERNOS QUE INFLUENCIAM NO CRESCIMENTO MICROBIANO

TEMPERATURA 1. PSICRFILOS (Ttima < 20C) ( ) MICRORGANISMOS 2. MESFILOS (20C < Ttima < 50C) 3. TERMFILOS (Ttima > 50C)

Acima da temperatura tima, a velocidade de crescimento diminui e pode ocorrer a morte trmica das clulas. A velocidade d crescimento ( ) e a constante d morte celular (kd) l id d de i () de l l variam com a temperatura segundo a equao de Arrhenius:

= Ae

Ea / RT

k 'd = A' e

Ed / RT

Ea = 10 a 20 kcal/mol

Ed = 60 a 80 kcal/mol

Variao da velocidade de crescimento de E coli com a temperatura E. (equao de Arrhenius)

A temperatura tambm afeta a formao de produtos A Ttima para a formao de produtos pode ser diferente da Ttima de crescimento!! O coeficiente de rendimento YX/S tambm afetado pela temperatura, pois acima da Ttima, os requerimentos de manuteno da clula aumentam.

FATORES EXTERNOS QUE INFLUENCIAM NO CRESCIMENTO MICROBIANO

pH

O pH afeta a atividade enzimtica, e conseqentemente a velocidade de crescimento microbiano microbiano.

Variao da velocidade de crescimento com o pH

FATORES EXTERNOS QUE INFLUENCIAM NO CRESCIMENTO MICROBIANO

OXIGNIODISSOLVIDO Substrato importante em bioprocessos aerbicos Pode ser um substrato limitante, pois o oxignio pouco solvel na gua. Em altas concentraes celulares a velocidade de consumo de oxignio pode exceder a velocidade de fornecimento de oxignio, limitando o crescimento crescimento.

facultativo

aerbico estrito

FATORES EXTERNOS QUE INFLUENCIAM NO CRESCIMENTO MICROBIANO

OXIGNIODISSOLVIDO A concentrao crtica de oxignio o valor da velocidade de consumo de O2 que permite a respirao sem o microrganismo entre em metabolismo anaerbico A Ccrit de 5 a 10% da concentrao de saturao de oxignio dissolvido para bactrias e leveduras e de 10 a 50% para fungos.

FATORES EXTERNOS QUE INFLUENCIAM NO CRESCIMENTO MICROBIANO

OXIGNIODISSOLVIDO Requerimento especfico de oxignio de microrganismos

FATORES EXTERNOS QUE INFLUENCIAM NO CRESCIMENTO MICROBIANO

POTENCIALREDOX Afeta a velocidade e a quantidade de muitas reaes de oxi-reduo. Num meio d cultura, o potencial redox f N i de lt t i l d funo d oxignio di do i i dissolvido, l id do pH e da concentrao de outros ons O potencial eletroqumico dado pela seguinte equao:

RT RT Eh = E '0 +2,3 log PO2 + 2,3 log( H + ) 4F F

MODELOS CINTICOS PARA QUANTIFICAR O CRESCIMENTO MICROBIANO

Crescimento limitado pelo substrato cintica de saturao

Equao de Monod:

mS
KS + S

KS = coeficiente de Monod ou constante de saturao KS = S quando = 1/2mx KS = relaciona a especificidade do microrganismo com o substrato m = velocidade especfica de crescimento mxima quando S >> KS

MODELOS CINTICOS PARA QUANTIFICAR O CRESCIMENTO MICROBIANO

Equao de Monod:

mS
KS + S

Se S >> KS

= m

dX m = dtX

dX m dt = X

dX X = t m dt X0 0

ln X ln X 0 = m (t t0 )
ln X ln X 0 m = t

EXERCCIO4: EXERCCIO 4: O estudo cintico em batelada de produo de etanol pela bactria Zymomonas mobilis apresentou os seguintes resultados: Tempo(h) Tempo (h) Biomassa(g/L) Biomassa (g/L) Glicose(g/L) Glicose (g/L) Etanol(g/L) Etanol (g/L) 5 9 14 18 22 24 26 30 35 0,05 0,15 0,45 1,20 2,80 3,40 3,80 3 80 4,15 4,20 247 240 225 195 130 100 75 40 25 1,5 5,0 12,0 22,0 47,0 63,0 74,0 74 0 90,0 100,0

Apresente um grfico utilizando os dados acima e calcule: a) a velocidade especfica de crescimento mxima b) os coeficientes de converso substrato/biomassa e substrato/etanol c) o coeficiente que associa a produo de etanol com a de biomassa

EXERCCIO5:

Considere as curvas de crescimento da levedura S. cerevisiae abaixo. Identifique as fases de crescimento da levedura, e indique o que cada uma das fases significa. O que pode ser concludo quando comparamos as trs curvas, sabendo que o cultivo foi realizado em batelada, em frascos erlenmeyer de 500 mL e que a curva ( ) representa o crescimento d microrganismo em 200 mL t i t do i i L de meio, a curva ( ) em 300 mL e a curva ( ) em 400 mL? Comente sobre a velocidade especfica de crescimento, o tempo de duplicao celular e a oxigenao do meio meio.
3

16 14 12
Absorbncia 600nm

2,5

ln(abs 600nm)

10 8 6 4 2 0 0 5 10 Tempo(h) 15 20
300mL 200mL 200 mL 400mL

y=0,286x+0,686 6 R=0,906 y=0,226x+0,734 R=0,996 4 y=0,205x+0,848 R=0,987

200mL 300mL 400mL

1,5 15

0,5

0 0 2 4 Tempo(h) 6