ISOLASI ARTEMISININ DARI Artemisia annua

Laporan Praktik Lapangan di PT Kimia Farma (Persero), Tbk. Unit Riset dan Pengembangan

DWI WAHYUDI

DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR

2 2011

ISOLASI ARTEMISININ DARI Artemisia annua

DWI WAHYUDI

Laporan Praktik Lapangan Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR

4 2011

Judul : Isolasi Artemisinin dari Artemisia annua Nama : Dwi wahyudi NIM : G44080114

Disetujui Pembimbing I Pembimbing II

Dr. Tetty Kemala, S.Si., M.Si. NIP. 19710407 199903 2 001

Dra. Lilis Dachliyati NIP. 1967 0616 A

Diketahui Ketua Departemen Kimia

Prof. Dr. Ir. Tun Tedja Irawadi, M.S. NIP. 19501227 197603 2 002

Tanggal lulus:

PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala karunia-Nya sehingga laporan praktik lapangan ini berhasil diselesaikan. Terima kasih penulis ucapkan kepada Ibu Dr. Tetty Kemala, S.Si., M.Si. dan Ibu Dra. Lilis Dachliyati selaku pembimbing dari departemen dan institusi. Di samping itu, penghargaan penulis sampaikan kepada Bapak Nurdin, Bapak Totok, Ibu Yuni, Ibu Atit, Ibu Nina, staf Laboratorium Ekstraksi Bahan Alam PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan, serta Ammar Asyari yang telah membantu selama pelaksanaan praktik lapangan. Ungkapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada ayah, ibu, serta seluruh keluarga, atas segala doa dan kasih sayangnya. Semoga laporan praktik lapangan ini dapat bermanfaat. Bogor, November 2011 Dwi Wahyudi

DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ...................................................................................................v DAFTAR GAMBAR...............................................................................................v DAFTAR LAMPIRAN...........................................................................................vi PENDAHULUAN....................................................................................................1 Latar Belakang ..............................................................................................1 Tujuan............................................................................................................2 Waktu dan Tempat ........................................................................................2 KEADAAN UMUM PT KIMIA FARMA (PERSERO) TBK. UNIT RISET DAN PENGEMBANGAN................................................................................................3 Sejarah Perusahaan ........................................................................................3 Visi dan Misi..................................................................................................3 Fungsi ............................................................................................................4 Kegiatan ........................................................................................................4 Struktur Organisasi.........................................................................................4 Bagian Pengembangan Formulasi .................................................................5 Bagian Ekstraksi Bahan Alam (EBA)............................................................5 Bagian Pengembangan Metode Analisis dan Validasi ...................................6 Bagian Pengelolaan Informasi Registrasi ......................................................6 Bagian Umum dan Bagian Gudang ...............................................................7 Bagian Personalia, Administrasi, dan Keuangan............................................8 TINJAUAN PUSTAKA.........................................................................................10 Artemisia annua ...........................................................................................10 Artemisinin .................................................................................................11 BAHAN DAN METODE ......................................................................................12 Alat dan Bahan ...........................................................................................12 Isolasi Artemisinin menggunakan Etanol dari Simplisia Skala Laboratorium ...............................................................................................................................12 Isolasi Artemisinin menggunakan Etanol dari Simplisia Skala Pilot ...........13 Isolasi Artemisinin menggunakan n-heksana dari Simplisia ......................13 Isolasi Artemisinin menggunakan MPLC (Medium Pressure Liquid Chromatography) ........................................................................................14 Analisis Kadar Artemisinin dalam Sampel .................................................14 HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................15 Isolasi Artemisinin menggunakan Etanol dari Simplisia Skala Laboratorium ...............................................................................................................................15 Isolasi Artemisinin menggunakan Etanol dari Simplisia Skala Pilot ..........17 Isolasi Artemisinin menggunakan n-heksana dari Simplisia ......................19 Isolasi Artemisinin menggunakan MPLC (Medium Pressure Liquid Chromatography)..........................................................................................21 Perbandingan Hasil Isolasi Setiap Metode .................................................22 SIMPULAN DAN SARAN ..................................................................................24 Simpulan .....................................................................................................24 Saran ..........................................................................................................24

iv
DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................................25 LAMPIRAN ..........................................................................................................26

DAFTAR TABEL
Halaman
1 Hasil analisis kadar artemisinin sampel ............................................................16 2 Hasil analisis kadar artemisinin simplisia .........................................................17 3 Neraca massa isolasi artemisinin dengan pelarut etanol ..................................17 4 Hasil analisis kadar artemisinin pada sampel 1 dan sampel 2 skala pilot ..........18 5 Neraca massa isolasi artemisinin pada sampel 1 dan sampel 2 skala pilot ........18 6 Hasil analisis kadar artemisinin pada fase minyak ekstrak n-heksana ..............20 7 Neraca massa hasil isolasi artemisinin dengan n-heksana ................................20 8 Perbandingan hasil isolasi berbagai metode .....................................................23

DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Struktur kimia artemisinin.................................................................................11 2 Kristal artemisinin ............................................................................................16 3 Kristal artemisinin skala pilot 1 dan skala pilot 2 .............................................18 4 Hasil isolasi artemisinin dengan pelarut n-heksana ..........................................21 5 Artemisinin hasil isolasi menggunakan MPLC ................................................22

DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Struktur organisasi PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan ...............................................................................................26 2 Diagram alir isolasi artemisinin dari simplisia dengan etanol ........................27 3 Diagram alir isolasi artemisinin skala besar/pilot ..........................................28 4 Diagram alir proses isolasi artemisinin dengan n-heksana..............................29 5 Proses ekstraksi dengan etanol .......................................................................29 6 Alat pemindai KLT (Camag) .........................................................................29 7 Profil KLT analisis kadar artemisinin hasil isolasi dengan penampak noda anisaldehida dalam asam sulfat ......................................................................30 8 Profil KLT standar dan simplisia dengan penampak noda anisaldehida dalam asam sulfat .....................................................................................................31 9 Profil KLT kristal artemisinin sampel 1 dan sampel 2 skala pilot ..................31 10 Proses pemekatan dengan penguap putar (Buchi) ..........................................32 11 Profil KLT hasil analisis fase minyak ekstrak n-heksana ...............................32 12 Instrumen MPLC ...........................................................................................33 13 Profil KLT fraksi 31 sampai dengan fraksi 50 ...............................................33 14 Profil KLT fraksi 55 sampai dengan fraksi 75 ...............................................34 15 Profil KLT fraksi 80 sampai dengan fraksi 100 .............................................34 16 Profil KLT fraksi 115 sampai dengan fraksi 130 ...........................................35 17 Data hasil analisis KLT dengan pemindai KLT (Camag) ..............................35 18 Perhitungan setiap tabel .................................................................................37

PENDAHULUAN
Latar Belakang Malaria merupakan masalah kesehatan masyarakat Indonesia karena angka kesakitan penyakit ini cukup tinggi. Di luar Jawa dan Bali masih sering terjadi letusan kejadian luar biasa (KLB) yang menimbulkan kematian. Kinin adalah suatu alkaloid yang diisolasi dari kulit batang kina yang merupakan obat malaria tertua dan banyak digunakan oleh sebagian besar masyarakat di dunia. Setelah ditemukan obat sintetik yang mempunyai struktur kimia mirip dengan kina, yaitu 4aminokinolin misalnya klorokuin, maka pemakai obat malaria mulai beralih ke obat sintetik tersebut (Alegantina 2010). Klorokuin adalah satu dari beberapa obat yang digunakan untuk malaria yang telah tersedia sejak tahun 1934, tetapi setelah digunakan selama 70 tahun, dilaporkan telah banyak mengalami resisten terhadap galur Plasmodium falcifarum. Propinsi di Indonesia telah melaporkan resistensi terhadap klorokuin, sulfadoksin/pirimetamin, kina, dan meflokuin. Adanya resistensi tersebut membuat para ilmuwan berpaling kembali kepada bahan alam untuk mencari obat malaria baru (Alegantina 2010). Obat antimalaria yang masih dalam pengembangan penelitian sekarang adalah artemisinin, yaitu zat aktif yang diisolasi dari tanaman Artemisia annua oleh peneliti Cina pada tahun 1972. Hasil uji in vitro dan in vivo menunjukkan bahwa aktivitas artemisinin sangat tinggi, bahkan terhadap galur Plasmodium yang telah resisten dengan obat antimalaria kuinin dan turunannya. Artemisinin juga telah diujicobakan kepada pasien penderita malaria di Cina dan hasilnya sangat efektif dalam menekan pertumbuhan Plasmodium dibandingkan dengan obat antimalaria klorokuin (Sugita 2001). Sintesis kimia artemisinin tidak efisien dan tidak ekonomis, sehingga produksi artemisinin masih berasal dari hasil isolasi. Selama ini Indonesia memperoleh bahan baku artemisinin dari luar negeri dan harganya sangat mahal. Artemisia annua L. berasal dari China tapi dapat tumbuh baik di Indonesia dan telah dibudidayakan di BPTO (Balai Penelitian Tanaman Obat) Tawangmangu. Oleh karena itu dalam rangka pengadaan bahan baku obat malaria di Indonesia,

2 dilakukan penelitian awal untuk mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa isolat artemisinin yang berasal dari budidaya tanaman Artemisia annua (Alegantina 2010). Tujuan Tujuan kegiatan praktik lapangan ini adalah mengisolasi artemisinin dari simplisia Artemisia annua. Waktu dan Tempat Kegiatan praktik lapangan dilaksanakan di PT Kimia Farma (Persero), Tbk. Unit Riset dan Pengembangan yang beralamat di Jalan Cihampelas No. 5 Bandung 40171. Kegiatan praktik lapangan dimulai dari tanggal 1 Juli sampai dengan 12 Agustus 2011.

KEADAAN UMUM PT KIMIA FARMA (PERSERO) TBK. UNIT RISET DAN PENGEMBANGAN
Sejarah Perusahaan Kegiatan penelitian dan pengembangan pada awalnya dilakukan oleh setiap unit produksi. Seiring berjalannya waktu, pemusatan kegiatan penelitian dan pengembangan secara menyeluruh dilakukan oleh PT Kimia Farma (Persero), Tbk. Hal ini dikaitkan dengan adanya perubahan pola konsumsi di tengah masyarakat dan persaingan pasar sehingga diperlukan penelitian dan pengembangan secara terpadu dan terfokus dari seluruh unit produksi guna memenuhi keinginan dan kebutuhan masyarakat terhadap obat. Demi mewujudkan hal tersebut, maka PT Kimia Farma (Persero), Tbk. membangun Divisi Riset dan Teknologi di bawah Direktorat Produksi pada tanggal 19 Juni 1991 dan berlokasi di jalan Cihampelas No. 5 Bandung. Kemudian pada tahun 2003 bersamaan dengan perubahan struktur organisasinya, divisi ini berubah menjadi Unit Riset dan Pengembangan (Risbang). Visi dan Misi PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan mempunyai visi, yaitu menjadi unit yang menghasilkan produk unggulan yang bermutu, inovatif, dan kompetitif di pasar. Misi dari PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan, antara lain: (1) mengembangkan produk baru farmasi, bahan baku kimia dan bahan baku obat alami unggulan yang bermutu, berkhasiat, dan kompetitif di pasaran; (2) mengembangkan produk baru melalui kerja sama dengan lembaga penelitian dalam dan luar negeri; (3) mengembangkan penelitian produk eksis di pabrik untuk meningkatkan mutu dan efisiensi; (4) mengembangkan sumber daya manusia yang mempunyai akhlak tinggi, berkompetensi tinggi dalam kaidah-kaidah pengembangan teknologi, dan ilmu pengetahuan yang berorientasi pasar. Fungsi

4 PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan memiliki fungsi, antara lain: (1) sebagai pusat penelitian produk baru dari bahan sintesis dan bahan alam melingkupi penyediaan bahan baku, formulasi, dan analisis; (2) sebagai pusat penelitian renovasi produk eksis, bantuan teknis teknologi bagi unit lain dan pengembangan berkelanjutan yang efisien dalam proses; (3) sebagai pusat pembuatan dokumen registrasi; (4) sebagai pusat informasi produk dan perkembangan ilmu pengetahuan serta peraturan yang berhubungan dengan kefarmasian; (5) sebagai koordinator kerja sama penelitian dengan institusi di luar PT Kimia Farma (Persero), Tbk.; (6) sebagai koordinator pemantauan limbah dari pabrik; (7) pemantauan paten produk baru. Kegiatan Kegiatan yang dilakukan di PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan, antara lain pengembangan produk baru, peningkatan kualitas dan efisiensi, kerja sama pengujian prpoduk, kerja sama penelitian, dokumen registrasi produk serta penanganan limbah. Struktur Organisasi Organisasi PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan dipimpin oleh seorang manajer yang memimpin tiga bagian, yaitu bagian pengembangan formulasi dan ekstraksi bahan alam (EBA), bagian pengembangan metode analisis dan validasi, dan bagian pengelolaan informasi registrasi. Masingmasing bagian dipimpin oleh seorang asisten manajer yang memimpin beberapa supervisor. Bagian umum, administrasi, personalia, keuangan, akuntansi, dan peneliti fungsional merupakan unit yang tidak tergabung dengan tiga bagian utama namun bertanggung jawab langsung kepada manajer PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan. Bagan struktur organisasi PT Kimia Farma (Persero), Tbk. Uni Riset dan Pengembangan diperlihatkan pada Lampiran 1. Bagian Pengembangan Formulasi

5 Bagian pengembangan formulasi mempunyai fungsi dan tugas, yaitu mengembangkan formula bahan sintesis atau bahan alam, mengerjakan reformulasi produk eksis, bantuan teknis intern maupun ekstern PT Kimia Farma (Persero), Tbk. , serta melakukan kerja sama penelitian bioekivalen, uji khasiat, toksisitas dan uji ketersediaan hayati dengan lembaga penelitian atau perguruan tinggi. Pengembangan produk baru dilaksanakan berdasarkan ide yang diusulkan unit pemasaran, produksi, PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan, ataupun usulan dari dewan direksi yang kemudian diajukan dalam rapat koordinasi produk baru. Penelitian untuk produk program pemerintah, pengembangannya tidak perlu diajukan dalam rapat koordinasi. Bagian Ekstraksi Bahan Alam (EBA) Bagian ekstraksi bahan alam (EBA) terdiri dari dua sub bagian, yaitu budidaya tanaman dan laboratorium/pilot ekstraksi bahan alam. Pengembangan produk dari bahan alam dapat berasal dari tumbuhan, hewan, maupun mineral. Bahan baku alam untuk sediaan farmasi meliputi bahan tanaman segar maupun simplisia, ampas, ekstrak, atau isolat yang diperoleh melalui proses tertentu dan terstandardisasi. Sasaran bagian pengembangan EBA ini adalah: (1) perbaikan proses produksi yang eksis di pabrik, yaitu memperoleh teknologi proses yang efisien; (2) pengembangan produk dari produk yang eksis di pabrik, yaitu memperoleh produk kimia dan bahan alam yang bermutu dan efisien yang berasal dari produk yang sudah ada; (3) produk dan proses baru, yaitu memperoleh produk baru kimia dan bahan alam bermutu dan efisien untuk obat tradisional, pangan, pertanian, dan alternatif bahan bakar minyak (BBM). Fungsi dan tugas bagian pengembangan EBA, yaitu melaksanakan penelitian budidaya tanaman, melakukan ekstraksi dan isolasi zat berkhasiat dari bahan alam, melakukan sintesis kimia, dan melakukan kerja sama untuk melakukan uji khasiat.

Bagian Pengembangan Metode Analisis dan Validasi

6 Bagian pengembangan metode analisis dan validasi mempunyai fungsi dan tugas untuk mencari atau meneliti metode analisis yang valid untuk sediaan farmasi, melakukan analisis terhadap produk-produk baru, melakukan pemeriksaan mikrobiologi, menentukan waktu kadaluarsa dari suatu produk baru, dan melakukan pengujian serta pengawasan stabilitas suatu produk. Bagian pengembangan metode analisis dan validasi memiliki beberapa sub bagian, yaitu pengembangan metode analisis dan validasi; kalibrasi, bahan baku, dan pembanding; analisis bahan alam; uji stabilitas; dan analisis mikrobiologi. Bagian Pengelolaan Informasi Registrasi Tugas dan fungsi utama dari bagian pengelolaan informasi registrasi adalah membuat dokumen registrasi produk baru, impor, maupun ekspor yang akan didaftarkan ke BPOM untuk mendapatkan nomor registrasi atau nomor izin edar (NIE). Tugas dan fungsi lain dari bagian ini adalah membuat dokumen registrasi untuk perpanjangan NIE. Dokumen registrasi (Drug Master File) menyangkut semua informasi tentang produk yang dihasilkan PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan mulai dari bahan baku yang digunakan sampai dihasilkan produk jadi untuk keperluan internal. Selain itu, bagian ini pun memberikan informasi terbaru mengenai perkembangan teknologi dan produk farmasi yang dihasilkan PT Kimia Farma (Persero), Tbk. kepada masyarakat luas. Bagian registrasi juga bertanggung jawab terhadap pengelolaan perpustakaan yang terdapat di PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan, antara lain bertanggung jawab terhadap pemeliharaan bahan pustaka yang berguna untuk kebutuhan informasi bagi karyawan. Perpustakaan PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan tidak hanya diperuntukan bagi pihak intern PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan tertapi juga terbuka untuk umum, seperti dosen dan mahasiswa. Selain itu, bagian registrasi juga bertanggung jawab terhadap pengelolaan dan pemeliharaan komputer dan jaringan LAN (Local Area Network) yang berfungsi sebagai penghubung setiap bagian di PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan dan mempermudah karyawan dalam mengelola data dan komunikasi antar bagian di risbang.

Bagian Umum dan Bagian Gudang Bagian umum membawahi beberapa sub bagian yaitu sub bagian pemeliharaan, sub bagian pengadaan, sub bagian sekretariat, dan sub bagian keamanan. Bagian umum ini bertugas menangani proses pengadaan barang. Permintaan barang diajukan oleh masing-masing laboratorium dengan menggunakan bon permintaan pembelian barang (BPPB). BPPB ini diserahkan ke sekretariat untuk dikelompokkan, selanjutnya BPPB tersebut ditandatangani oleh pimpinan unit. Setelah BPPB mendapatkan persetujuan dari pimpinan untuk diadakan, maka hal yang perlu dilakukan adalah mencari penawaran dari pemasok, melakukan evaluasi dari tahap penawaran tersebut, baik dari kualitas, harga, jangka waktu pengiriman barang, maupun jangka waktu pembayaran. Merealisasikan pengadaan barang tersebut dengan cara membuat surat pesanan (SP) yang terdiri dari enam rangkap, yaitu dua rangkap untuk pemasok, satu untuk bagian administrasi, pengadaan, akuntansi, dan gudang. Di dalam SP tercantum antara lain nomor permintaan, waktu, cara, tempat pembayaran, dan tanda tangan pimpinan. Pada saat pengiriman barang biasanya pemasok menyertakan kuitansi penagihan, yang berisi faktur penjualan dan kuitansi, surat pesanan, menyertakan kuitansi rangkap dua (bermaterai jika lebih dari 250 ribu rupiah), dan faktur pajak. Pembelian barang oleh PT Kimia Farma (Persero), Tbk. harus kepada perusahaan kena pajak (PKP). Pembelian simplisia bahan alam, bahan dipesan melalui koperasi agar barang tersebut dikenakan pajak terlebih dahulu. Pengadaan barang yang berasal dari pabrik dilakukan melalui internal memo yang ditujukan kepada masing-masing manajer pabrik. Pembelian bahan baku impor, pemesanan melalui kantor pusat di Jakarta, namun pembebanan biaya tetap dikenakan kepada PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan. Pembayaran yang dilakukan biasanya kontrabon (maksimal 30 hari). Proses pengadaan barang ini biasanya memerlukan waktu 1-2 hari. Selain itu, bagian pengadaan juga bertugas membuat laporan realisasi barang setiap dua minggu untuk mengetahui jumlah anggaran yang dikeluarkan untuk pengadaan barang.

8 Bagian gudang bertugas menerbitkan surat penerimaan barang yang menyatakan bahwa barang telah diterima dan siap untuk dipakai. Surat penerimaan barang ini digunakan oleh bagian keuangan sebagai syarat dalam pembayaran. Selanjutnya bon permintaan bahan penelitian dicetak oleh gudang sebagai bukti jika bahan sudah diambil dari gudang. Bahan yang disimpan di bagian gudang PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan hanya alkohol dan akuades yang memang selalu diperlukan di setiap bagian. Untuk sementara ini, gudang PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan merupakan gudang transit di mana setiap bahan baku yang datang dari pemasok langsung diserahkan kepada bagian pemesan sehingga gudang tidak bertanggung jawab terhadap penyimpanan bahan baku. Bagian Personalia, Administrasi, dan Keuangan Bagian Personalia Bagian personalia bertugas untuk mengelola sumber daya manusia yang ada di PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan. Jumlah total pegawai yang bekerja di PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan sebanyak 77 orang yang terdiri dari 13 orang pegawai di perkebunan dan 64 pegawai di kantor PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan. Beberapa pelatihan dilaksanakan untuk meningkatkan kualitas sumber daya manusia di PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan agar para karyawan menjadi kompeten di bidangnya. Beberapa pelatihan intern yang dilakukan adalah pelatihan cara pembuatan obat yang baik (CPOB), validasi, dan kalibrasi. Pelatihan intern biasanya dilakukan dengan mendatangkan instruktur dari luar. Bagian Administrasi dan Keuangan Bagian administrasi dan keuangan bertanggung jawab langsung kepada manajer keuangan. PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan hanya melakukan pengeluaran dana dan tidak ada dana pemasukan, oleh karena itu

9 PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan disebut sebagai cost center. Bagian administrasi dan keuangan terdiri dari bagian anggaran dan perhitungan pajak serta akuntansi. Bagian akuntansi bertugas mencatat biaya-biaya yang dikeluarkan untuk melihat naik turunnya keuangan. Permintaan dan ke PT Kimia Farma (Persero), Tbk. dinyatakan dalam bentuk rencana anggaran keuangan risbang yang disusun per tahun oleh bagian keuangan. Rencana anggaran ini dibuat minimal enam bulan sebelum tahun anggaran. Rencana anggaran dibuat berdasarkan rapat koordinasi dengan seluruh bagian, kemudian dievaluasi oleh bagian keuangan. Setelah diketahui dan disetujui oleh manajer PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan, rencana anggaran ini dikirim ke kantor pusat. Kemudian setiap bulan, triwulan, semester, atau tahunan dibuat laporan realisasi anggaran kerja perusahaan (RAKP). Laporan realisasi tahun sebelumnya digunakan sebagai kontrol dari laporan tahun yang berjalan.

TINJAUAN PUSTAKA
Artemisia annua Tanaman artemisia merupakan tanaman yang berasal dari daerah sub tropis dan mempunyai spesies berkisar antara 200 sampai 400 spesies. Hasil penelitian tahun 1972 di Cina menunjukkan bahwa Artemisia annua mengandung bahan aktif artemisinin yang sangat efektif mengatasi penyebab penyakit malaria yang telah resisten terhadap kina. Artemisia annua merupakan satu-satunya jenis yang mengandung artemisinin dengan kadar yang cukup tinggi, di alam bervariasi antara 0.1-1.8%, bahkan dengan menggunakan hibrida antara klon China dan Vietnam, kandungan artemisinin dapat mencapai 2% (Gusmaini & Nurhayati 2007). Tanaman artemisia diyakini sebagai tanaman asli Asia, dan diduga berasal dari China Utara (Mongolia) yang terletak pada 40 lintang utara dan 109 bujur timur. Saat ini tanaman artemisia telah tersebar ke beberapa negara, antara lain Argentina, Bulgaria, Francis, Hungaria, Rumania (khusus dibudidayakan untuk dimanfaatkan minyak atsirinya), Italia, Spanyol, USA dan Yugoslavia. Tanaman artemisia telah diintroduksi dan telah dibudidayakan di India, Vietnam, Thailand, Myanmar, Madagaskar, Malaysia, USA, Brazil, Australia dan negara-negara Eropa (Gusmaini & Nurhayati 2007). Artemisia dapat tumbuh dengan baik pada daerah dataran tinggi dengan ketinggian 1000-1500 m dpl, tanah berpasir atau berlempung yang berdrainase baik dengan pH 5.5-8.5 (pH optimum 6-8), curah hujan 700-1000 mm/tahun. Ketersediaan air merupakan faktor yang sangat berpengaruh terhadap pertumbuhan tanaman terutama pada umur 1-2 bulan (Gusmaini & Nurhayati 2007). Tumbuhan Artemisia annua mempunyai daun seperti pakis, bunga berwarna kuning terang, tinggi rata-rata mencapai 2 m, bertangkai tunggal, dan bercabang banyak, dan daun berukuran panjang 2.5-5 cm. Tumbuhan Artemisia annua mempunyai klasifikasi, yaitu dunia Plantae (tumbuhan), super divisi: Spermatophyta (menghasilkan biji), divisi Magnoliophyta (tumbuhan berbunga), kelas Magnoliopsida (berkeping dua/dikotil), sub kelas Asteridae, ordo Asterales, famili Asteraceae, genus Artemisia, spesies Artemisia annua (Anonim 2008).

11

Artemisinin Artemisinin merupakan seskuiterpena khusus dengan bagian unik 1,2,4trioksana dan mempunyai aktivitas antimalaria yang sangat baik, terutama untuk parasit yang tahan terhadap berbagai obat (Liang & Fang 2006). Senyawa turunan artemisinin digunakan sebagai terapi kombinasi obat antimalaria (Hien et al. 2011). Struktur kimia artemisinin dapat dilihat pada Gambar 1. Bobot molekul artemisinin, yaitu 282.3 g/mol (WHO 2010). Menurut WHO artemisinin merupakan obat malaria terbaik saat ini untuk malaria yang telah resisten terhadap klorokuin dan kina. Artemisinin diberikan secara kombinasi dengan obat antimalaria lain untuk mencegah terjadinya resistensi. Obat kombinasi ini disebut terapi ACT (Artemisinin based Combination Therapy) yang kini merupakan pengobatan terbaik (Alegantina et al. 2010). Artemisinin dapat meningkatkan produksi asam lambung dan merangsang menstruasi (Kardinan 2006). Artemisia annua mengandung senyawa artemisinin. Senyawa artemisinin ini memiliki indeks terapi yang lebih tinggi dibandingkan dengan klorokuin dan aktif terhadap galur Plasmodium falcifarum yang resisten terhadap klorokuin. Senyawa artemisinin yang tinggi terutama terdapat pada jaringan bagian atas tanaman (daun dan bunga), sementara di batang kandungannya rendah. Artemisinin terakumulasi pada glandular trichomes, suatu organ yang hanya terdapat pada daun, batang dan bunga (Gusmaini & Nurhayati 2007).

Gambar 1 Struktur kimia artemisinin (Liang & Fang 2006).

BAHAN DAN METODE

Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan untuk isolasi artemisinin dari Artemisia annua, antara lain radas refluks, rotary evaporator/penguap putar (Buchi), alat-alat gelas, pemindai KLT (Camag), neraca analitik, kertas saring, kain saring, oven, chamber, vial, dan pipa kapiler 5 L. Bahan-bahan yang digunakan untuk isolasi artemisinin dari Artemisia annua, antara lain simplisia Artemisia annua, etanol teknis, n-heksana, anisaldehida, asam sulfat, akuades, plat silika gel 60 GF254 (Merck), arang aktif, kloroform, metanol, asam asetat glasial, dan etil asetat. Isolasi Artemisinin menggunakan Etanol dari Simplisia Skala laboratorium Sebanyak 300 g simplisia Artemisia annua dimasukkan ke dalam labu ekstraksi lalu diekstraksi dengan 2250 mL etanol teknis selama 2 jam pada suhu 50C (skala 1 pada alat) dengan pengadukan. Kemudian ampas dari ekstrak encer disaring menggunakan kain saring secara gravitasi. Ekstrak encer yang diperoleh sebanyak 1540 mL. Ekstrak encer ditambahkan 30 g arang aktif sehingga warna hijau daun hilang. Arang aktif disaring menggunakan kertas saring halus. Ekstrak encer yang sudah hilang warna hijau daunnya dipekatkan dengan menggunakan penguap putar pada suhu 40C (skala pada alat) dan tekanan 175 mbar pada alat untuk menghilangkan etanol. Setelah dipekatkan diperoleh fase minyak. Fase minyak yang diperoleh dipartisi dengan air:n-heksana (1:2) dalam corong pisah dan dikocok selama 30 menit. Setelah dikocok, ekstrak di dalam corong pisah dibiarkan hingga terbentuk 3 lapisan (lapisan organik/n-heksana, lapisan air, dan ekstrak). Lapisan organik dipisahkan dari air dan ekstrak. Lalu lapisan organik dipekatkan hingga volume menjadi setengah volume awal. Fase organik yang sudah dipekatkan ditambahkan beberapa tetes etil asetat lalu disimpan di lemari pendingin selama dua hari sehingga terbentuk kristal. Kristal yang terbentuk dipindahkan ke dalam vial yang sudah ditimbang bobot kosongnya lalu

13 kristal dan vial ditimbang untuk mengetahui bobot kristal yang diperoleh. Diagram alir isolasi artemisinin dengan etanol dari simplisia diperlihatkan pada Lampiran 2. Isolasi Artemisinin menggunakan Etanol dari Simplisia Skala Pilot Sebanyak masing-masing 5 kg simplisia Artemisia annua dimasukkan ke dalam dua buah ember. Sebanyak 37500 mL etanol teknis ditambahkan ke dalam masing-masing ember dan diaduk selama 6 jam tanpa pemanasan. Ekstrak pertama didiamkan selama satu malam, sedangkan ekstrak kedua didiamkan selama dua malam. Setelah didiamkan, ampas dari ekstrak etanol disaring menggunakan saringan 200 mesh lalu hasil saringan disaring kembali dengan kertas saring kasar. Filtrat ditambahkan 0.5 kg arang aktif dan diaduk. Filtrat yang telah ditambahkan arang aktif didiamkan selama satu malam. Arang aktif disaring menggunakan kertas saring. Filtrat dipekatkan dengan penguap putar pada suhu 40C (skala pada alat) dan tekanan 175 mbar pada alat untuk menghilangkan etanol. Setelah dipekatkan diperoleh fase minyak. Fase minyak yang diperoleh dipartisi dengan air:n-heksana (1:2) dalam corong pisah dan dikocok selama 30 menit. Setelah dikocok, ekstrak di dalam corong pisah dibiarkan hingga terbentuk 3 lapisan (lapisan organik/n-heksana, lapisan air, dan ekstrak dan emulsi). Lapisan organik dipisahkan dari air dan ekstrak. Lalu lapisan organik dipekatkan hingga volume menjadi setengah volume awal. Fase organik yang sudah dipekatkan ditambahkan beberapa tetes etil asetat lalu disimpan di lemari pendingin selama dua hari sehingga terbentuk kristal. Kristal yang terbentuk ditimbang untuk perhitungan rendemen. Diagram alir isolasi artemisinin skala besar/pilot diperlihatkan pada Lampiran 3. Isolasi Artemisinin menggunakan n-heksana dari Simplisia Sebanyak 300 g simplisia dimasukkan ke dalam labu ekstraksi lalu diekstraksi dengan 2250 mL n-heksana teknis selama 2 jam pada suhu 50C (skala 1 pada alat) dengan pengadukan. Kemudian ampas dari ekstrak encer disaring menggunakan kain saring secara gravitasi. Ekstrak encer yang diperoleh sebanyak 1440 mL. Ekstrak encer ditambahkan 20 g arang aktif sehingga warna hijau daun hilang. Arang aktif disaring menggunakan kertas saring halus. Ekstrak encer yang sudah

14 hilang warna hijau daunnya dipekatkan dengan menggunakan penguap putar pada suhu 40C (skala pada alat) dan tekanan 365 mbar pada alat hingga ekstrak pekat namun masih ada sedikit n-heksana sehingga terbentuk kristal. Kristal yang terbentuk dipindahkan ke vial lalu ditimbang untuk perhitungan rendemen. Diagram alir ditunjukkan pada Lampiran 4. Isolasi Artemisinin menggunakan MPLC (Medium pressure liquid chromatography) Sebanyak 10 mL ekstrak pekat dari proses partisi skala besar diambil untuk dilakukan isolasi dengan MPLC. Sampel dimasukkan ke dalam instrumen MPLC lalu difraksinasi dengan eluen heksana:etil asetat (4:1) dan laju alir 17 mL/25 detik. Proses fraksinasi menghasilkan 130 tabung. Hasil fraksinasi diuji dengan KLT untuk pengelompokkan dan mencari tabung yang mengandung artemisinin. Artemisinin teridentifikasi pada tabung 55-70. Tabung 55-70 digabung lalu dipekatkan dengan penguap putar. Hasil pemekatan didiamkan dalam lemari pendingin lalu dianalisis kadarnya dengan pemindai KLT (Camag). Analisis Kadar Artemisinin dalam Sampel Kristal standar ditimbang dan dimasukkan ke dalam labu takar. Sampel pun ditimbang dan dimasukkan ke dalam labu takar. Sampel dan standar dilarutkan dengan menggunakan etanol 70%, kecuali untuk sampel yang diperoleh dari ekstraksi dengan menggunakan n-heksana dilarutkan dengan n-heksana. Setelah sampel dan standar dilarutkan lalu dianalisis menggunakan KLT analitik dengan eluen kloroform: metanol: asam asetat glasial (52.5: 0.6: 0.7). Setelah dielusi, plat KLT dianalisis dengan pemindai KLT (Camag) untuk perhitungan kadar artemisinin dalam sampel. Data hasil analisis dengan pemindai KLT diperlihatkan pada Lampiran 17. Rumus yang digunakan untuk perhitungan kadar sebagai berikut. kadar = luas area sampel konsentras i standar volume penotolan standar 100% luas area standar konsentras i sampel volume penotolan sampel

HASIL DAN PEMBAHASAN

Isolasi Artemisinin menggunakan Etanol dari Simplisia Skala Laboratorium Isolasi artemisinin bertujuan untuk mendapatkan kristal artemisinin dari Artemisia annua dan mengetahui rendemen yang dihasilkan. Metode pertama yang dilakukan untuk mengisolasi artemisinin, yaitu simplisia diekstrak terlebih dahulu dengan etanol. Etanol berfungsi untuk mengekstrak bahan aktif dalam simplisia Artemisia annua, klorofil daun, lemak, ekstrak, dan pengotor ekstrak. Artemisinin larut dalam etanol (Alegantina et al. 2010). Ekstraksi dilakukan dengan metode refluks atau dengan bantuan panas dan pengadukan selama 2 jam. Hal ini dilakukan agar ekstraksi lebih cepat dan diharapkan semua artemisinin terekstrak oleh etanol, tetapi suhu yang digunakan tidak boleh terlalu panas, karena dapat merusak artemisinin. Proses ekstraksi diperlihatkan oleh Lampiran 5. Ekstrak etanol yang diperoleh sebanyak 1540 mL lalu ditambahkan arang aktif sebanyak 30 g untuk menghilangkan warna hijau daun. Arang aktif disaring dengan saringan halus. Filtrat yang diperoleh dipekatkan untuk menghilangkan pelarut etanol agar tidak mengganggu proses partisi. Etanol yang masih tersisa dapat mengganggu, proses partisi dengan air:n-heksana (1:2) karena artemisinin larut dalam etanol dan n-heksana (Alegantina et al. 2010) sehingga menyebabkan penyebaran artemisinin pada etanol dan n-heksana. Setelah etanol hilang, ekstrak dipartisi dengan air:n-heksana (1:2) untuk menarik artemisinin ke fraksi n-heksana. Air berfungsi untuk mencuci pengotor yang larut dalam air. Proses partisi menyebabkan terbentuknya 3 fraksi, yaitu fraksi organik (nheksana), fraksi air, dan fraksi ekstrak pekat. Fraksi emulsi tidak terbentuk. Fraksi organik diidentifikasi kandungan artemisininnya. Setelah diuji, pada fraksi organik teridentifikasi adanya artemisinin. Fraksi organik ini kemudian dipekatkan hingga volume mencapai setengah dari volume awal. Fraksi yang telah dipekatkan ditambahkan beberapa tetes etil asetat agar terbentuk kristal. Setelah ditambahkan etil asetat, fraksi disimpan di dalam lemari pendingin dan didiamkan selama dua malam. Kristal yang terbentuk berwarna putih dan berbentuk jarum. Kristal yang terbentuk dapat dilihat pada Gambar 2. Tidak semua artemisinin terbentuk menjadi

16 kristal karena masih terdapat fraksi minyak, sehingga sulit untuk mendapatkan kristal murni. Minyak masih menempel pada kristal.

Gambar 2 Kristal artemisinin. Kristal yang diperoleh sebanyak 0.0750 g. Kristal yang diperoleh diuji kadar artemisininnya dengan KLT analitik lalu diidentifikasi dengan pemindai KLT (Lampiran 6) pada panjang gelombang 538 nm. Cara kerja alat ini, yaitu dengan cara mengukur luas area spot yang terbentuk lalu dalam perhitungan dibandingkan dengan standar. Penampak noda yang digunakan yaitu anisaldehida dalam asam sulfat. Kristal standar dan kristal sampel ditimbang secara teliti lalu dimasukkan ke dalam labu takar. Setelah itu sampel dan standar dilarutkan menggunakan etanol dan n-heksana lalu ditera. Sebanyak 2.07 mg standar dilarutkan dalam 5 mL nheksana, sebanyak 2.47 mg standar dilarutkan dalam 5 mL alkohol 70%, sebanyak 1.91 mg kristal sampel dilarutkan dalam 5 mL n-heksana, dan 2.10 mg kristal sampel dilarutkan dalam 5 mL etanol 70%. Profil KLT sampel dan standar diperlihatkan pada Lampiran 7. Hasil analisis kadar artemisinin diperlihatkan pada Tabel 1. Perhitungan diperlihatkan dalam Lampiran 18. Tabel 1 Hasil analisis kadar artemisinin sampel Sampel Standar etanol Standar n-heksana Kristal etanol Kristal n-heksana Volume penotolan (L) 5 5 5 5 Konsentrasi (ppm) 494 414 420 382 Luas area 1300.50 1209.30 1154.20 Kadar (%) 100.00 100.00 104.39 -

Hasil analisis menunjukkan bahwa kristal sampel yang dilarutkan dalam nheksana tidak terdeteksi adanya artemisinin. Kadar kristal sampel yang dilarutkan dalam etanol memiliki kadar lebih besar dari standar. Perhitungan rendemen atau neraca massa dari isolasi artemisinin memerlukan data kadar artemisinin simplisia

17 yang diperoleh dari pengujian dengan KLT analitik. Profil KLT simplisia diperlihatkan pada Lampiran 8 dan hasil analisis kadar diperlihatkan pada Tabel 2. Perhitungan diperlihatkan dalam Lampiran 18. Tabel 2 Hasil analisis kadar artemisinin simplisia Sampel Standar Simplisia 1 Simplisia 2 Volume Konsentrasi penotolan (L) (ppm) 5 494 15 50585 15 50070 Rerata kadar simplisia Luas area 2121.00 1220.75 1215.20 Kadar (%) 100.00 0.19 0.19 0.19

Tabel 3 Neraca massa isolasi artemisinin dengan pelarut etanol Sampel Simplisia Kristal sampel Rendemen (%) Efisiensi ekstraksi (%) Bobot (g) 300.07 0.0750 0.03 Kadar artemisinin (%) 0.19 104.39 Bobot artemisinin (g) 0.5701 0.0783 13.73

Tabel 3 memperlihatkan neraca massa isolasi artemisinin dengan pelarut etanol. Hasil yang diperoleh menunjukkan rendemen yang cukup kecil. Sebanyak 300.07 g simplisia hanya menghasilkan 0.0750 g kristal artemisinin atau 0.03%. Begitu pula dengan metode ekstraksi ini hanya dapat mengekstrak 13.73% kristal artemisinin dari simplisianya. Artemisinin yang hilang selama proses isolasi hilang sebanyak 86.27%. Hasil yang diperoleh sangat kecil yang kemungkinan disebabkan oleh rusaknya artemisinin pada saat proses ekstraksi, banyak artemisinin yang hilang saat proses ekstraksi dan partisi, masih banyak artemisinin yang tidak terekstrak ke fraksi n-heksana, dan artemisinin masih larut atau belum mengkristal. Isolasi Artemisinin dengan Etanol dari Simplisia Skala Pilot Proses isolasi artemisinin skala pilot hampir sama dengan proses isolasi artemisinin dari simplisia dengan meggunakan etanol namun menggunakan jumlah simplisia yang lebih banyak dan proses ekstraksi dilakukan dengan ekstraksi tanpa pemanasan (maserasi). Proses pemanasan tidak dilakukan untuk menghindari rusaknya artemisinin karena pemanasan. Isolasi dilakukan dua kali dengan

18 perbedaan waktu perendaman dengan etanol. Sampel 1 dilakukan perendaman selama 1 malam dan sampel 2 dilakukan perendaman selama 2 malam. Kristal terbentuk pada kedua sampel, baik dengan perendaman 1 malam maupun 2 malam. Sebanyak 1.8471 g kristal terbentuk pada sampel 1 sedangkan pada sampel 2 terbentuk kristal sebanyak 2.2812 g. Kristal yang terbentuk diperlihatkan pada Gambar 3. Kristal-kristal yang diperoleh dianalisis dengan pemindai KLT untuk mengetahui kadar artemisinin dari masing-masing kristal yang diperoleh. Profil hasil KLT diperlihatkan pada Lampiran 9. Hasil analisis kadar artemisinin dari masing-masing kristal diperlihatkan pada Tabel 4.

(1)

(2)

Gambar 3 Kristal artemisinin skala pilot 1 (1) dan skala pilot 2 (2). Tabel 4 Hasil analisis kadar artemsinin pada sampel 1 dan sampel 2 skala pilot Sampel Standar EtOH Kristal sampel 1 Kristal sampel 2 Volume penotolan (L) 5 5 5 Konsentrasi (ppm) 494 425 457 Luas area 2372.27 2140.57 1958.07 Kadar (%) 100.00 104.89 89.22

Tabel 5 Neraca massa isolasi artemisinin pada sampel 1 dan sampel 2 skala pilot Sampel Simplisia Kristal sampel 1 Kristal sampel 2 Sampel 1 Sampel 2 Kadar artemisinin (%) 5000 0.19 1.8471 104.89 2.2812 89.22 Rendemen (%) 0.04 0.05 Bobot (g) Bobot artemisinin (g) 9.5000 1.9374 2.0353 Efisiensi ekstraksi (%) 20.39 21.42

Hasil yang diperoleh menunjukkan rendemen yang cukup kecil. Sebanyak 5000 g simplisia hanya menghasilkan 1.8471 g kristal kasar untuk perendaman 1

19 malam dan 2.2812 g kristal kasar untuk perendaman 2 malam. Metode ekstraksi ini dapat mengekstrak 20.39% kristal artemisinin dari simplisianya untuk perendaman 1 malam dan 21.42% untuk perendaman 2 malam. Hasil yang diperoleh sangat kecil dan banyak artemisinin yang hilang saat proses ekstraksi dan partisi, masih banyak artemisinin yang tidak terekstrak ke fraksi n-heksana, dan artemisinin masih larut dan belum mengkristal. Jumlah kristal yang terbentuk dari kedua metode ini tidak terlalu jauh yaitu sekitar 2 g atau menghasilkan rendemen sebanyak 0.04% kristal kasar. Perendaman 1 malam menghasilkan kristal yang lebih sedikit namun dengan kemurnian yang lebih tinggi. Sedangkan perendaman 2 malam menghasilkan kristal lebih banyak namun dengan kemurnian yang lebih rendah. Rendemen artemisinin yang dihasilkan tidak jauh berbeda, sehingga metode isolasi degan perendaman 1 malam pun sudah cukup baik dan lebih efisien dari segi waktu. Isolasi Artemisinin menggunakan n-heksana dari Simplisia Metode lain yang dilakukan untuk isolasi artemisinin dari simplisia Artemisia annua, yaitu ekstraksi dengan menggunakan pelarut n-heksana langsung tanpa diekstraksi dengan etanol terlebih dahulu. Ekstraksi langsung dengan n-heksana diharapkan dapat menarik senyawa yang larut n-heksana saja, sehingga pengotor yang terbawa lebih sedikit. Artemisinin larut n-heksana, sehingga metode ini dapat dilakukan untuk mengambil artemisinin dari simplisia Artemisia annua. Simplisia yang digunakan dalam percobaan kali ini sebanyak 300 g yang diekstrak dengan 2250 mL n-heksana. Metode ekstraksi yang digunakan sama dengan ekstraksi menggunakan etanol, yaitu metode refluks atau dengan pemanasan. Selama proses ekstraksi dilakukan pengadukan agar ekstraksi merata dan sempurna. Proses ekstraksi dilakukan dengan pemanasan skala 1 pada alat atau sekitar 50C. Setelah proses ekstraksi diperoleh ekstrak n-heksana encer sebanyak 1440 mL. Ekstrak encer n-heksana ditambahkan 20 g arang aktif untuk menghilangkan warna hijau daun. Setelah itu arang aktif disaring dengan menggunakan kertas saring halus agar arang aktif tidak lolos ke dalam ekstrak. Ekstrak encer yang sudah tidak ada warna klorofilnya dipekatkan dengan penguap putar pada suhu skala 40C pada alat dengan tekanan 365 mbar. Ekstrak dipekatkan hingga tersisa hanya sedikit

20 n-heksana agar terbentuk kristal. Lampiran 10 memperlihatkan proses pemekatan dengan penguap putar. Setelah proses pemekatan kristal mulai terbentuk, namun semakin lama menjadi fase minyak sehingga kristal yang terbentuk tidak berbentuk jarum melainkan seperti serbuk. Pembentukan kristal dalam sampel kemungkinan terhambat oleh fase minyak ini. Bobot kristal dan fase minyak yang diperoleh sebesar 3.9212 g. Analisis dengan KLT analitik kembali dilakukan untuk menentukan kadar artemisinin dalam fase minyak yang diperoleh tersebut. Analisis KLT dilakukan dengan eluen kloroform:metanol:asam asetat glasial (52.5:0.6:0.7) dengan penampak noda anisaldehida dalam asam sulfat. Profil KLT diperlihatkan pada Lampiran 11 dan hasil analisis data diperlihatkan pada Tabel 6. Neraca massa diperlihatkan pada Tabel 7. Perhitungan diperlihatkan dalam Lampiran 18. Tabel 6 Hasil analisis kadar artemisinin pada fase minyak ekstrak n-heksana Sampel Standar etanol Sampel etanol Standar n-heksana Sampel n-heksana Sampel n-heksana encer Volume penotolan (L) 5 5 5 5 5 Konsentrasi (ppm) 494 50970 414 51260 30756 Luas area 1300.50 1608.35 1209.30 1226.43 1143.60 Kadar (%) 100.00 1.20 100.00 0.82 1.27

Tabel 7 Neraca massa hasil isolasi artemisinin dengan n-heksana Sampel Simplisia Sampel Rendemen (%) Efisiensi ekstraksi (%) Bobot (g) 300.07 3.9212 1.31 Kadar artemisinin (%) 0.19 1.10 Bobot artemisinin (g) 0.5701 0.0431 7.56

Hasil yang diperoleh menunjukkan rendemen yang cukup kecil. Sebanyak 300.07 g simplisia hanya menghasilkan 3.9212 g kristal artemisinin dan fase minyak atau 1.31%. Begitu pula dengan metode ekstraksi ini hanya dapat mengekstrak 7.56% kristal artemisinin dari simplisianya. Artemisinin yang hilang selama proses isolasi hilang sebanyak 92.44%. Hasil yang diperoleh sangat kecil yang kemungkinan disebabkan oleh rusaknya artemisinin pada saat proses ekstraksi

21 karena dilakukan dengan pemanasan, banyak artemisinin yang hilang saat proses ekstraksi dan partisi, masih banyak artemisinin yang tidak terekstrak ke fraksi nheksana, dan artemisinin masih larut dan belum mengkristal. Hasil isolasi dengan metode ini memberikan hasil yang kurang baik dibandingkan dengan metode ekstraksi menggunakan etanol terlebih dahulu karena efisiensi ekstraksi dengan nheksana lebih kecil daripada efisiensi ekstraksi dengan etanol terlebih dahulu. Selain itu, ekstraksi dengan n-heksana menghasilkan fase minyak yang lebih banyak sehingga kristal terjebak dan larut dalam fase minyak sehingga sulit untuk terpisah menjadi kristal. Hasil isolasi dengan metode ini diperlihatkan pada Gambar 4.

Gambar 4 Hasil isolasi artemisinin dengan pelarut n-heksana. Isolasi Artemisinin menggunakan MPLC (Medium pressure liquid chromatography) Medium pressure liquid chromatography (MPLC) merupakan salah satu metode kromatografi dengan bantuan tekanan. Prinsip dari metode ini seperti kromatografi kolom yaitu pemisahan berdasarkan interaksi antara sampel dengan fase diam dan fase gerak namun dibantu dengan tekanan untuk menentukan laju alir dan mempercepat pemisahan. Instrumen MPLC terdiri dari sistem injeksi, pompa, kolom pemisahan, detektor, dan penampung fraksi. Instrumen MPLC diperlihatkan pada Lampiran 12. Isolasi menggunakan metode ini menghasilkan artemisinin dalam bentuk fase minyak dan tidak membentuk kristal. Hal ini kemungkinan terjadi karena masih banyaknya pengotor. Isolasi menggunakan teknik ini mempunyai kelemahan, yaitu

22 hanya dapat digunakan untuk skala kecil dan banyak menggunakan pelarut sehingga kurang efisien dibandingkan dengan metode lainnya. Metode ini menghasilkan fraksi-fraksi dari hasil pemisahan. Fraksi yang diperoleh sebanyak 130 tabung. Setiap tabung diuji dengan KLT untuk mengetahui tabung yang megandung artemisinin dalam jumlah relatif lebih banyak. Hasil uji KLT diperlihatkan pada Lampiran 13, Lampiran 14, Lampiran 15, dan Lampiran 16. Profil KLT memperlihatkan bahwa pada fraksi 55 sampai dengan fraksi 70 teridentifikasi adanya artemisinin dalam jumlah relatif lebih banyak. Fraksi tersebut digabungkan lalu dipekatkan dengan penguap putar untuk menghilangkan pelarutnya. Setelah pekat sampel disimpan di dalam lemari pendingin untuk pembentukan kristal. Setelah didinginkan ternyata sampel tidak terbentuk kristal namun dalam fase minyak. Hasil yang diperoleh diperlihatkan pada Gambar 5.

Gambar 5 Artemisinin hasil isolasi dengan MPLC. Perbandingan Hasil Isolasi dari Setiap Metode Isolasi artemisinin dari Artemisia Annua dapat dilakukan dengan berbagai metode. Setiap metode memberikan hasil yang berbeda-beda. Perbandingan hasil dari setiap metode diperlihatkan pada Tabel 8. Tabel 8 Perbandingan hasil isolasi setiap metode Metode Etanol skala laboratorium Etanol skala pilot 1 Etanol skala pilot 2 n-heksana MPLC Rendemen (%) 0.03 0.04 0.05 1.31 Efisiensi ekstraksi (%) 13.73 20.39 21.42 7.56 Bentuk Kristal Kristal Kristal Minyak Minyak

23 Berdasarkan data pada Tabel 8 dapat diketahui bahwa metode isolasi pada skala pilot 2 memberikan hasil paling baik karena terbentuk kristal yang paling banyak. Jumlah kristal yang diperoleh dari isolasi skala pilot 2 tidak berbeda jauh dengan isolasi pada skala pilot 1, sehingga dari segi efisiensi waktu metode isolasi skala pilot 1 lebih efisien karena dalam waktu isolasi yang lebih singkat dapat menghasilkan kristal yang tidak terlalu berbeda jauh hasilnya dengan waktu isolasi 2 malam. Isolasi etanol skala laboratorium memberikan hasil cukup baik karena terbentuk kristal walaupun dengan jumlah simplisia yang lebih sedikit. Data pada Tabel 8 menunjukkan semakin banyak jumlah simplisia maka semakin besar rendemen yang diperoleh. Ekstraksi dengan menggunakan n-heksana kurang baik walaupun dapat mengekstrak artemesinin lebih cepat dan tahapan yang dilakukan lebih sedikit. Hasil yang diperoleh dengan n-heksana berbentuk minyak dan persentasi rendemen dan ekstraksinya pun kecil. Perhitungan rendemen dan persentasi ekstraksi pun sulit dilakukan karena artemisinin masih dalam bentuk minyak dan bercampur dengan senyawa lainnya, sehingga metode ini kurang efektif. Metode isolasi dengan menggunakan MPLC, artemisinin yang dihasilkan belum berbentuk kristal melainkan masih dalam bentuk minyak, selain itu masih mengandung banyak pengotor. Artemisinin yang tidak mengkristal kemungkinan disebabkan oleh masih banyaknya warna hijau daun dan pengotor lain. Teknik isolasi dengan MPLC ini memiliki kekurangan, yaitu hanya dapat digunakan untuk skala kecil dan banyak menggunakan pelarut sehingga kurang efisien dibandingkan dengan metode lainnya.

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan Isolasi artemisinin dari Artemisia annua dapat dilakukan dengan berbagai metode. Metode yang paling banyak menghasilkan kristal artemisinin, yaitu menggunakan teknik maserasi dalam skala pilot dengan perendaman menggunakan etanol selama 2 malam dengan rendemen 0.05% dan efisiensi ekstraksi 21.42 %. Kristal yang terbentuk berwarna putih. Metode isolasi menggunakan n-heksana dan instrumen MPLC tidak menghasilkan artemisinin dalam bentuk kristal melainkan dalam wujud cairan. Saran Pembentukan kristal pada isolasi artemisinin diperlukan penambahan etil asetat, kristal yang diperoleh larut dalam etil asetat namun tidak larut n-heksana. Perlu dilakukan penelitian isolasi artemisinin menggunakan etil asetat.

DAFTAR PUSTAKA
Alegantina S, Isnawati A, Rooslamiati I. 2010. Isolasi dan identifikasi artemisinin dari herba Artemisia annua L. Buletin Penelitian Kesehatan 38 (3) :159-168. [Anonim]. 2008. Artemisia annua L. [terhubung berkala]. http://www.plantamor.com/index.php?plant=139 [7 Agustus 2011]. Gusmaini, Nurhayati H. 2007. Potensi pengembangan budidaya Artemisia annua L. di Indonesia. Perspektif 6 (2):57-67. Hien et al. 2011. Orally formulated artemisinin in healthy fasting vietnamese male subjects: a randomized, four-sequence, open-label, pharmacokinetic crossover study. Clinical Therapeutics 33(5): 644-654. Kardinan A. 20 April 2006. Tanaman artemisia penakluk penyakit malaria. Kompas. Liang XT, Fang WS. 2006. Medicinal Chemistry of Bioactive Natural Product. New Jersey: John Wiley & Sons, Inc. Sugita P. 2001. Analisis artemisinin pada tanaman Artemisia sacrorum, Ledeb dengan metode kromatografi. Buletin Kimia 1: 107-111. [WHO] World Health Organization. 2010. Guidelines for the treatment of malaria Second Edition.Geneva: WHO.

LAMPIRAN
Lampiran 1 Struktur organisasi PT Kimia Farma (Persero), Tbk., Unit Riset dan Pengembangan
MANAGER

RISET DAN PENGEMBANGAN

KELOMPOK PENELITI

ASISTEN MANAGER

PENGEMBANGAN FORMULASI & EKSTRAKSI BAHAN ALAM

PENGEMBANGAN METODE ANALISIS & VALIDASI

PENGELOLAAN INFORMASI REGISTRASI

JABATAN FUNGSIONAL

LAB & PILOT FORMULASI BUDIDAYA TANAMAN OBAT LAB & PILOT EKSTRAKSI & ISOLASI

ANALIS

DOKUMENTASI REGISTRASI

STABILITAS

UMUM & ADM. PERSONALIA

MIKROBIOLOGI KEUANGAN & AKUNTANSI KALIBRASI TEKNOLOGI INFORMASI

KTO BINTANG

SUPERVISOR

27 Lampiran 2 Diagram alir isolasi artemisinin dari simplisia dengan etanol 300 g Simplisia Artemisia anuua 1. 2. 3. 4. Ekstraksi refluks dengan 2250 mL etanol Penyaringan ampas Penambahan 30 g arang aktif Penyaringan arang aktif

Ekstrak etanol bebas warna hijau daun 1. Penguapan etanol dengan penguap putar Ekstrak etanol pekat
1. Partisi dalam corong pisah dengan air:n-

heksana (1:2)

Fase larut air

Fase larut n-heksana

Fase ekstrak

1. Pemekatan dengan penguap putar 2. Penambahan beberapa tetes etil asetat 3. Penyimpanan dalam lemari pendingin selama 2 hari Kristal artemisinin

28 Lampiran 3 Diagram alir isolasi artemisinin skala besar/pilot 5 kg Simplisia Artemisia anuua L. 1. Ekstraksi maserasi dengan 37500 mL etanol (1 atau 2 hari) 2. Penyaringan ampas 3. Penambahan 500 g arang aktif 4. Penyaringan arang aktif Ekstrak etanol bebas warna hijau daun 1. Penguapan etanol dengan penguap putar Ekstrak etanol pekat
1. Partisi dalam corong pisah dengan air:n-

heksana (1:2)

Fase larut air

Fase larut n-heksana

Fase ekstrak dan emulsi

1. Pemekatan dengan penguap putar 2. Penambahan beberapa tetes etil asetat 3. Penyimpanan dalam lemari pendingin selama 2 hari 4. Penambahan beberapa tetes etil asetat

Kristal artemisinin

29 Lampiran 4 Diagram alir proses isolasi artemisinin dengan n-heksana 300 g Simplisia Artemisia anuua L.
1. Ekstraksi refluks dengan 2250 mL n-

heksana 2. Penyaringan ampas 3. Penambahan 20 g arang aktif 4. Penyaringan arang aktif Ekstrak n-heksana bebas warna hijau daun 1. Pemekatan ekstrak n-heksana dengan penguap putar Kristal artemisinin dan fase minyak

Lampiran 5 Proses ekstraksi dengan etanol

Lampiran 6 Alat pemindai KLT (Camag)

30 Lampiran 7 Profil KLT analisis kadar artemisinin hasil isolasi dengan penampak noda anisaldehida dalam asam sulfat

1
Keterangan:

1 = 2.47 mg standar dalam 5 mL etanol 70% 2 = 2.10 mg kristal sampel dalam 5 mL etanol 70% 3 = 2.07 mg standar dalam 5 mL n-heksana 4 = 1.91 mg kristal sampel dalam 5 mL n-heksana

Lampiran 8 Profil KLT standar dan simplisia dengan penampak noda anisaldehida dalam asam sulfat

31

Keterangan: 1 = 2.47 mg standar dalam 5 mL etanol 70% 2 = 1.0014 g simplisia dalam 20 mL etanol 70% 3 = 1.0117 g simplisia dalam 20 mL etanol 70%

Lampiran 9 Profil KLT kristal artemisinin sampel 1 dan sampel 2 skala pilot

Standar EtOH

Sampel 1

Sampel 2

Lampiran 10 Proses pemekatan dengan penguap putar (Buchi)

32

Lampiran 11 Profil KLT hasil analisis fase minyak ekstrak n-heksana

1
Keterangan:

1 = 2.47 mg standar dalam 5 mL etanol 70% 2 = 0.5126 g sampel dalam 10 mL n-heksana lalu 6 mL diambil dan diencerkan dalam labu takar 10 mL 3 = 0.5097 g sampel dalam 10 mL etanol 70% 4 = 2.07 mg standar dalam 5 mL n-heksana 5 = 0.5126 g sampel dalam 10 mL n-heksana

Lampiran 12 Instrumen MPLC

33

Lampiran 13 Profil KLT fraksi 31 sampai dengan fraksi 50

Lampiran 14 Profil KLT fraksi 55 sampai dengan fraksi 75

34

Lampiran 15 Profil KLT fraksi 80 sampai dengan fraksi 100

Lampiran 16 Profil KLT fraksi 115 sampai dengan fraksi 130

35

Lampiran 17 Data hasil analisis KLT dengan pemindai KLT (Camag)

36

37 Lampiran 18 Perhitungan setiap tabel Tabel 1 Perhitungan konsentrasi (ppm) Standar etanol Konsentrasi = = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 2.47 10 -3 g 1000 mL 1000 mg 5 mL 1 mL 1g

= 494 ppm
Standar n-heksana

Konsentrasi =

bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g

2.07 10 -3 g 1000 mL 1000 mg = 5 mL 1 mL 1g = 414 ppm Kristal etanol Konsentrasi = = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 2.10 10 -3 g 1000 mL 1000 mg 5 mL 1 mL 1g

= 420 ppm
Kristal n-heksana

Konsentrasi = =

bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 1.91 10 -3 g 1000 mL 1000 mg 5 mL 1 mL 1g

= 382 ppm Perhitungan kadar (%) Kristal etanol Kadar = luas area sampel konsentras i standar volume penotolan standar 100% luas area standar konsentras i sampel volume penotolan sampel

38
1154.20 494 ppm 5 L 100% l300.50 420 ppm 5 L

Kadar =

= 104.38% Tabel 2 Perhitungan konsentrasi (ppm) Standar etanol Konsentrasi = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g

2.47 10 -3 g 1000 mL 1000 mg = 5 mL 1 mL 1g = 494 ppm Simplisia 1 Konsentrasi = = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 1.0117 g 1000 mL 1000 mg 20 mL 1 mL 1g

= 50585 ppm Simplisia 2 Konsentrasi = = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 1.0014 g 1000 mL 1000 mg 20 mL 1 mL 1g

= 50070 ppm Perhitungan kadar (%) Simplisia 1 Kadar = luas area sampel konsentras i standar volume penotolan standar 100% luas area standar konsentras i sampel volume penotolan sampel
1220.75 494 ppm 5 L 100% 2121.00 50585 ppm 15 L

Kadar =

= 0.19%

39

Simplisia 2 Kadar = luas area sampel konsentras i standar volume penotolan standar 100% luas area standar konsentras i sampel volume penotolan sampel
1215.20 494 ppm 5 L 100% 2121.00 50070 ppm 15 L

Kadar =

= 0.19% Rerata kadar simplisia Kadar simplisia = 0.19% + 0.19% 2

= 0.19% Tabel 3 Perhitungan bobot artemisinin (g) Simplisia Bobot artemisinin = bobot (g) = 300.07 g = 0.5701 g Kristal sampel Bobot artemisinin = bobot (g) = 0.0750 g = 0.0783 g Perhitungan rendemen (%)

kadar artemisini n 100 0.19 100

kadar artemisini n 100

104.39 100

Rendemen

= =

bobot kristal sampel 100% bobot simplisia 0.0750 g 100% 300.07 g

= 0.03%

40

Perhitungan efisiensi ekstraksi (%) Efisinsi ekstraksi = bobot artemisini n sampel 100% bobot artemisini n simplisia = 0.0783 g 100% 0.5701 g

= 13.73% Tabel 4 Perhitungan konsentrasi (ppm) Standar etanol Konsentrasi = = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 2.47 10 -3 g 1000 mL 1000 mg 5 mL 1 mL 1g

= 494 ppm Kristal sampel 1 Konsentrasi = = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 4.25 10 -3 g 1000 mL 1000 mg 10 mL 1 mL 1g

= 425 ppm Kristal sampel 2 Konsentrasi = = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 4.57 10 -3 g 1000 mL 1000 mg 10 mL 1 mL 1g

= 457 ppm Perhitungan kadar (%) Kristal sampel 1

41 Kadar = luas area sampel konsentras i standar volume penotolan standar 100% luas area standar konsentras i sampel volume penotolan sampel
2140.57 494 ppm 5 L 100% 2372.27 425 ppm 5 L

Kadar =

= 104.89% Kristal sampel 2 Kadar = luas area sampel konsentras i standar volume penotolan standar 100% luas area standar konsentras i sampel volume penotolan sampel
1958.07 494 ppm 5 L 100% 2372.27 457 ppm 5 L

Kadar =

= 89.22% Tabel 5 Perhitungan bobot artemisinin (g) Simplisia Bobot artemisinin = bobot (g) = 5000 g = 9.5000 g Kristal sampel 1 Bobot artemisinin = bobot (g) = 1.8471 g = 1.9374 g Kristal sampel 2 Bobot artemisinin = bobot (g) = 2.2812 g = 2.0353 g kadar artemisini n 100 89.22 100 kadar artemisini n 100 kadar artemisini n 100

0.19 100

104.89 100

42

Perhitungan rendemen (%) Rendemen kristal sampel 1 Rendemen = = bobot kristal sampel 100% bobot simplisia 1.8471 g 100% 5000 g

= 0.04%

Rendemen kristal sampel 2 Rendemen = = bobot kristal sampel 100% bobot simplisia 2.2812 g 100% 5000 g

= 0.05% Perhitungan efisiensi ekstraksi (%)

Efisiensi ekstraksi kristal sampel 1 Efisiensi ekstraksi = = bobot artemisini n sampel 100% bobot artemisini n simplisia 1.9374 g 100% 9.5000g

= 20.39%

Efisiensi ekstraksi kristal sampel 2 Efisiensi ekstraksi = = bobot artemisini n sampel 100% bobot artemisini n simplisia 2.0353 g 100% 9.5000g

= 21.42% Tabel 6 Perhitungan konsentrasi (ppm) Standar etanol Konsentrasi = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g

43 2.47 10 -3 g 1000 mL 1000 mg 5 mL 1 mL 1g

= 494 ppm

Sampel etanol Konsentrasi = = bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 0.5097 g 1000 mL 1000 mg 10 mL 1 mL 1g

= 50970 ppm
Standar n-heksana

Konsentrasi =

bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g

2.07 10 -3 g 1000 mL 1000 mg = 5 mL 1 mL 1g = 414 ppm

Sampel n-heksana

Konsentrasi = =

bobot yang ditimbang (g) 1000 mL 1000 mg volume labu ukur (mL) 1 mL 1g 0.5126 g 1000 mL 1000 mg 10 mL 1 mL 1g

= 51260 ppm
Sampel n-heksana encer

Vsampel n-heksana Nsampel n-heksana = Vsampel n-heksana encer Nsampel n-heksana encer 6 mL 51260 ppm = 10 mL Nsampel n-heksana encer Nsampel n-heksana encer = 30756 ppm Perhitungan kadar (%) Sampel etanol

44 Kadar = luas area sampel konsentras i standar volume penotolan standar 100% luas area standar konsentras i sampel volume penotolan sampel
1608.35 494 ppm 5 L 100% 1300.50 50970 ppm 5 L

Kadar =

= 1.20%

Sampel n-heksana

Kadar =

luas area sampel konsentras i standar volume penotolan standar 100% luas area standar konsentras i sampel volume penotolan sampel
1226.43 414 ppm 5 L 100% 1209.30 51260 ppm 5 L

Kadar =

= 0.82%
Sampel n-heksana encer

Kadar =

luas area sampel konsentras i standar volume penotolan standar 100% luas area standar konsentras i sampel volume penotolan sampel
1143.60 414 ppm 5 L 100% 1209.30 30756 ppm 5 L

Kadar =

= 1.27% Rerata kadar artemisinin sampel Kadar simplisia = 1.20% + 0.82% + 1.20% 3

= 1.10% Tabel 7 Perhitungan bobot artemisinin (g) Simplisia Bobot artemisinin = bobot (g) kadar artemisini n 100

45 = 300.07 g = 0.5701 g Sampel Bobot artemisinin = bobot (g) = 3.9212 g = 0.0431 g kadar artemisini n 100 0.19 100

1.10 100

Perhitungan rendemen (%)

Rendemen sampel berdasarkan bobot Rendemen = = bobot sampel 100% bobot simplisia 3.9212 g 100% 300.07 g

= 1.31% Perhitungan efisiensi ekstraksi (%)

Efisiensi ekstraksi sampel Efisiensi ekstraksi = = bobot artemisini n sampel 100% bobot artemisini n simplisia 0.0431 g 100% 0.5701 g

= 7.56%