Refrat

MINOCYCLINE DAN SITOPROTEKSI

Oleh: Ramon Otto Andinata Susanto G 0006143

Pembimbing : Mulyo Hadi Sudjito, dr., SpAn. KNA

KEPANITERAAN KLINIK ILMU ANESTESIOLOGI DAN REANIMASI FAKULTAS KEDOKTERAN UNS/RSUD DR. MOEWARDI SURAKARTA

2011 MINOCYCLINE DAN SITOPROTEKSI: MEMBERIKAN TEMUAN BARU PADA KONTROVERSI YANG SURAM J. Jordan1,4,*, F.J. Fernandez-Gomez1,4, M. Ramos1, I. Ikuta2, N. Aguirre3, dan M.F. Galindo1,4
1

Grupo de Neurofarmacologa, Departamento de Ciencias Mdicas, Facultad de Medicina, Universidad de Castilla-La Mancha, Albacete, Spain; 2SUNY Upstate Medical University, College of Medicine, Syracuse, New York, USA; 3Department of Pharmacology, School of Medicine, University of Navarra, Pamplona, Spain; 4 Centro Regional de Investigaciones Biomdicas, Albacete, Spain Abstrak: Dalam tinjauan ini kita mengeksplorasi dan mengintegrasikan pengetahuan tentang target obat yang masuk akal yang bisa menjelaskan aplikasi baru untuk minocycline semisintetik, obat tetrasiklin yang dikenal sebagai obat sitoprotektif. Dengan demikian, kita akan menganalisis mekanisme yang mungkin untuk menjelaskan sifat sitoprotektif yang potensial dari minocycline. Kita meninjau ke aksi antioksidan minocycline mulai dari struktur, kemampuannya untuk memodulasi ekspresi enzim yang berhubungan dengan oksidan seperti nitrit oxide sintase. Target obat yang diteliti bertanggung jawab untuk efek antiinflamasi. Efek dari antibiotik ini adalah membuat tanda pada jalur intraseluler yang terkait dengan proses neurodegeneratif seperti apoptosis yang dimediasi mitokondria, termasuk efek termodulasi minocycline pada ekspresi protein apoptosis. Akhirnya, kita akan mengeksplorasi efek dari minocycline pada metaloproteinase, enzim yang terlibat dalam modulasi cedera reperfusi oksidatif post-iskemik serebrovaskular dan tujuan baru. Sebagai kesimpulan, kita memberi temuan baru pada kontroversi yang suram pada mekanisme sitoprotektif yang potensial dari minocycline dan target dari tindakan. Kata kunci: anti-inflamasi, antioksidan, apoptosis, sitoproteksi, minocycline, mitokondria, modulasi ekspresi protein anti-apoptosis, spesies oksigen reaktif.

PENDAHULUAN Beberapa tahun lalu, banyak kontroversi berkaitan dengan efek

minocycline, antibiotik derivat tetrasiklin, pada kelangsungan hidup sel setelah terjadi sitotoksik. Minocycline merupakan tetrasikilin generasi kedua yang pertama kali dibuat tahun 1967 dan dikomersialisasikan tahun 1972. Digunakan untuk terapi penyakit infeksius seperi: acne vulgaris, urethritis, dan penyakit menular seksual yang meliputi mikoplasma, klamidia, dan triponema. Selain fungsi antimikrobanya, minocycline mempunyai efek yang menguntungkan seperti antiinflamasi pada rheumatoid arthritis, analgesik pada nyeri neuropati, dan belakangan ini sudah digunakan untuk obat sitoprotektif pada penyakit neurodegeneratif. Minocycline sudah digunakan untuk sitoproteksi pada kardiovaskuler, renal, dan sistem saraf. Akan tetapi, beberapa studi baru-baru ini yang berlawanan menunjukkan bahwa terapi minocycline tidak menunjukkan efek atau bahkan cedera toksik eksaserbasi pada kasus-kasus seperti yang disebutkan di atas. Penyebab yang mungkin untuk efek berbeda yang ditunjukkan minocycline masih ditentukan, walaupun minocycline sudah menunjukkan efek yang berbeda pada berbagai macam penyakit neurodegenatif pada model hewan dengan memperhatikan rute administrasi, dosis, dan spesies hewan yang digunakan. Sifat unik minocycline menghasilkan distribusi jaringan yang meningkat ketika dibandingkan dengan tetrasiklin lainnya. Yang menarik adalah bioavailabilitas yang sangat baik dan permeabilitas sawar darah-otak superior untuk tingkat efektif secara klinis karena ukurannya yang kecil dan lipofilisitas. Farmakokinetik minocycline ditandai dengan penyerapan yang sangat baik, waktu paruh yang lama, dan yang penting, sifat lipofilik yang memfasilitasi distribusi yang baik ke jaringan melalui membran fosfolipid. Keamanan yang terbukti pada penggunaan minocycline sebagai antibiotik selama beberapa dekade menunjukkan bahwa mungkin memiliki potensi besar untuk menggunakan sifat sitoprotektif ke arah pengembangan pengobatan yang efektif untuk berbagai kondisi neurologis pada manusia. 3

Seperti obat lainnya, minocycline harus menghasilkan efek setelah berikatan dengan target farmakologis. Ikatan dengan subunit ribosom 30S, hambatan interaksi antara RNA messenger dan RNA transfer dan hingga translasi protein, bertanggung jawab untuk aksi antimikroba. Namun, mekanisme yang memediasi efek neuroprotektif di atas tetap sulit dipahami. Dalam review ini, kita memperdalam pengetahuan kita tentang target molekuler dan seluler yang mendasari efek sitoprotektif dan relevansi mereka dalam bidang farmakologi. Kita langsung fokus terutama untuk sitoproteksi dalam sistem saraf. Kita percaya minocycline dapat memberi efek pada jalur seluler melalui: reaksi anti-oksidan, jalur sinyal antiinflamasi, apoptosis dimediasi mitokondria, dan modulasi ekspresi protein antiapoptosis (Gbr 1).

Gbr 1. Target farmakologis dan mekanisme minocycline. 4

1. REAKSI ANTI-OKSIDAN Ketidakseimbangan antara pro-oksidan dan anti-oksidan, dengan berlaku sebelumnya, menyebabkan stres oksidatif. Spesies oksigen reaktif (ROS), termasuk radikal anion superoksida, singlet oksigen, peroksinitrit, dan radikal hidroksil diproduksi oleh rantai transpor elektron mitokondria dan oleh berbagai enzim seperti monooksigenase dan oksidase seperti xanthine oxidase, NADPH oksidase, dan sitokrom P450 (s). Radikal bebas terlibat sebagai agen penyebab dalam berbagai bentuk kerusakan jaringan. ROS dapat berinteraksi dengan komponen lipid membran sel, memulai peroksidasi lipid yang mengakibatkan kerusakan komponen produk lemak yang sangat reaktif. Bukti menunjukkan bahwa radikal bebas berbasis oksigen, yang dihasilkan karena aliran darah kembali ke area otak yang iskemik sebelumnya, terutama bertanggung jawab untuk cedera reperfusi yang mengikuti periode iskemia serebral. Stres oksidatif juga telah terlibat dalam beberapa penyakit neurodegeneratif termasuk: amyotrophic lateral sclerosis (ALS, juga dikenal sebagai penyakit Lou Gehrig), penyakit Parkinson (PD), penyakit Alzheimer (AD), dan penyakit Huntington (HD). Banyak efek anti-apoptosis minocycline dapat dijelaskan oleh kapasitas antioksidan, bercampur dengan ROS melalui empat mekanisme yang berbeda: Pertama, menggunakan sel dengan potensi antioksidan, data yang diperoleh menunjukkan bahwa minocycline adalah antioksidan langsung dengan potensi pembersih radikal dibandingkan dengan alfa-tokoferol. Ini konsisten dengan struktur kimianya, yang mencakup banyak cincin fenol tersubstitusi. Kedua, pengaruh langsung pada kompleks enzim yang menyebabkan generasi ROS. Minocycline menghambat tingkat H2O2 dalam xanthinexanthine oxidase dan sistem NADPH oksidase. Lebih jauh, minocycline menghambat generasi radikal bebas yang diinduksi 6-hidroksi-dopamin untuk mengurangi neurotoksisitas, dan juga neurotoksisitas yang diinduksi H2O2 yang dilemahkan. Minocycline juga menekan beberapa produksi ROS dengan leukosit polimorfonuklear (PMNL atau PMN) yang dirangsang zymosan. 5

Ketiga, melalui efek tidak langsung pada tingkat ekspresi gen yang terlibat dalam produksi ROS. Minocycline menghambat tingkat ekspresi siklooksigenase-2 (COX-2) dan inducible nitric oxide synthase (iNOS). Pengaturan intraperitoneal mengurangi peningkatan ekspresi peptida, amyloid yang diinduksi COX-2 di mikroglia. Dalam kultur sel primer (otak tengah, sel granula, atau glia) dan dalam otak tikus HD yang diberi 1-metil-4phenylpyridium (MPP+), minocycline memblok induksi iNOS. Namun, minocycline gagal mengubah tingkat basal dua sistem anti-oksidan utama yang digunakan oleh sel untuk memblok kelebihan produksi ROS, glutathione, dan NAD(P)H, yang ditunjukkan dalam model neurodegeneratif yang berbeda. Keempat, dengan mekanisme tidak langsung karena kemampuannya untuk memblok aktivasi mikroglia. Dalam sistem saraf, mikroglia teraktivasi adalah sumber utama dari NO dan ROS, termasuk H2O2 dan superoksida. Inhibisi minocycline pada produksi mikroglial baik NO dan superoksida, dan hingga mungkin pembentukan peroksinitrit berikutnya, juga bisa berfungsi sebagai pembenaran untuk efek sitoprotektif yang potensial. 2. JALUR SINYAL ANTI-INFLAMASI Respon inflamasi menghasilkan aktivasi dari beberapa jenis sel dan produksi molekul yang berbeda yang dapat menyebabkan kematian sel. Sebuah contoh dari sel yang teraktivasi oleh respon inflamasi dalam sistem saraf adalah mikroglia. Mikroglia adalah sel efektor kekebalan intrinsik dari sistem saraf pusat (SSP) yang biasanya tidak aktif tetapi menjadi aktif di otak setelah berbagai peristiwa yang melemahkan, seperti infeksi, trauma, penurunan aliran darah dan oksigen, dan penyakit neurodegeneratif termasuk AD dan HD. Peran mikroglia dalam respon neuroinflamasi adalah kompleks dan mungkin melibatkan perbaikan jaringan melalui pelepasan neurotrophins dan pembuangan debris nekrotik, dan juga dapat melepaskan berbagai sitokin proinflamasi dan oksidan termasuk interleukin-1-beta (IL-1) dan tumor necrosis factor-alfa (TNF-). Tampaknya bahwa sifat anti-inflamasi minocycline, terutama kemampuan mereka untuk menekan aktivasi mikroglia dapat 6

menyebabkan sitoproteksi dalam SSP. Efek penghambatan langsung dari minocycline terhadap proliferasi dan aktivasi sel mikroglia tikus telah diusulkan. Minocycline secara signifikan menghambat produksi NO dan prostaglandin E2 (PGE2) dan ekspresi iNOS dan COX-2 dalam mikroglia BV2. Meskipun minocycline dapat mengurangi ekspresi COX-2 dan iNOS, efeknya tidak mencapai signifikansi pada penyakit model binatang lain seperti pengaturan asam quinolinik untuk mensimulasikan HD. Minocycline sangat efektif dalam melindungi neuron dopaminergik dari substansia nigra dan hilangnya astrosit reaktif. Penilaian mikroglia mengungkapkan bahwa pengobatan minocycline secara signifikan mengurangi lipopolisakarida yang diinduksi aktivasi mikroglia reaktif. Minocycline sebagian mencegah peningkatan kadar mRNA IL-1 dan tumor necrosis factoralfa (TNF-) yang diinduksi oleh lipopolisakarida. Dalam model ensefalitis imun inflamasi, minocycline mengurangi pelepasan TNF- dari oligodendrosit yang teraktivasi sementara terjadi peningkatan pelepasan IL-10, sebuah sitokin anti-inflamasi. Selain itu, minocycline mengurangi ekspresi CD11b dan ekspresi CD45 pada tikus J20 APP-tg, model hewan AD. Minocycline menekan produksi inflamasi mikroglial (IL-1, IL-6, dan TNF-) yang disebabkan oleh inkubasi dengan peptida Ab42. Akhirnya, minocycline secara signifikan mengurangi sekresi dari kedua IL-6 dan TNF- sel mikroglial yang terstimulasi dalam hubungannya dengan peptida amiloid dan komponen serum amiloid P (SAP) dan faktor komplemen seperti C1q. Hiperalgesia termal dan taktil allodynia berkembang dalam respon terhadap ligasi saraf skiatik. Data terbaru sangat mendukung gagasan bahwa aktivasi dan proliferasi mikroglia saraf tulang belakang berkontribusi langsung kepada nyeri neuropatik pada tikus, efek yang dapat dihindari dengan menggunakan minocycline untuk menghambat aktivasi mikroglia. Sejalan dengan studi ini, Hains dan Waxman telah menunjukkan bahwa peningkatan p38 MAP kinase terfosforilasi adalah seiring dengan aktivasi mikroglia di ujung dorsal lumbalis setelah cedera tulang belakang. Tingkat aktivasi p38 terfosforilasi dan mikroglia menurun pada hewan yang menerima minocycline, 7

sedangkan penghentian pengiriman minocycline mengakibatkan segera kembalinya fenomena rasa sakit. Akhirnya, itu menunjukkan bahwa minocycline melindungi terhadap neurotoksisitas dalam sistem serotonergik dan dopaminergik di otak monyet dan tikus yang diperlakukan dengan amfetamin derivatif metamfetamin atau 3,4-metil-enedioxymethamphetamine (MDMA, "ekstasi"), efek yang dimediasi oleh penghambatan aktivasi mikroglia. Namun, berbagai bukti menunjukkan bahwa pembentukan radikal bebas yang bersumber dari dopamin memainkan peran penting dalam neurotoksisitas yang disebabkan oleh methamphetamine dan MDMA. Akibatnya, bisa juga berspekulasi bahwa efek sitoprotektif dari minocycline mungkin karena sifat antioksidan mereka (lihat di atas) atau pencegahan spesies pro-oksidan yang berasal dari dopamin setelah minocycline melemahkan pelepasan dopamin akut yang diinduksi methamphetamine. 3. MODULASI JALUR INTRASELULER Second messengers mentransmisikan sinyal dari agen ekstraselular untuk memodifikasi proses intraselular. Second messengers mengatur fungsi seluler dengan modulasi fosforilasi protein intraseluler. Protein kinase dan fosfatase biasanya bertindak atas residu serin atau treonin (Ser / Thr kinase atau fosfatase) atau residu tirosin (Tyr kinase atau fosfatase) dari substrat mereka. Rute phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) telah muncul sebagai faktor penting dalam sinyal transduksi anti-apoptosis. Aktivasi ini diketahui untuk melindungi sel dari berbagai rangsangan apoptosis. Efek neuroprotektif dari minocycline diblok oleh PI3K inhibitor LY294002 dan wortmannin pada beberapa model termasuk apoptosis yang diinduksi glutamat dalam sel granula cerebellar di mana minocycline mempertahankan jalur P3I-K/Akt. Efek sitoprotektif dari minocycline juga telah dikaitkan dengan kemampuannya untuk memblok aktivitas enzimatik mitogen-activated protein kinases (MAPKs). MAPKs, termasuk extracellular-signal regulated kinase (ERKs), biasanya tidak aktif di neuron tetapi diaktifkan ketika mereka terfosforilasi oleh kinase lainnya. MAPKs teraktivasi dapat memfosforilasi 8

faktor transkripsi, protein yang mengatur ekspresi gen. Kaskade ERK (p42/p44 MAPK) dipertimbangkan memainkan peran kunci dalam mengintegrasikan dan mengirimkan sinyal transmembran yang diperlukan untuk pertumbuhan dan diferensiasi. Aktivitas jalur ini sering diwakili oleh tingkat MEK-fosforilasi ERK1 dan ERK. Minocycline memblok aktivasi p38 MAPK yang disebabkan oleh rangsangan yang berbeda seperti NO, 1-metil-4-fenil-1,2,3,6tetrahydropyridine (MPTP), dan pengaturan glutamat-reseptor famili oleh NMDA agonis atau glutamat. Efek neuroprotektif pada hipoplasia cerebellar yang diinduksi oleh bilirubin dalam tikus Gunn, model genetik hiperbilirubinemia, mungkin karena sebagian penghambatan aktivitas p38 MAPK. Selain itu, efek sitoprotektif dari minocycline pada ototoksisitas yang diinduksi gentamisin dimediasi oleh penghambatan aktivasi p38 MAPK. Untuk menentukan mekanisme penghambatan minocycline dari MAPKs, Nikodema et al., menggunakan rangsangan yang berbeda untuk mengaktifkan jalur sinyal MAPK termasuk H2O2 dan BzATP, sebuah agonis reseptor P2X7 purinergik, yang dengan kuat mengaktifkan p38, ERK 1/2 dan JNK 1/2 MAPKs dalam sel mikroglial BV-2 murine. Dengan kondisi tersebut, minocycline secara mengejutkan tidak bisa menghambat aktivasi dari setiap MAPKs dalam menanggapi rangsangan dengan H2O2. Selain itu, minocycline memiliki efek yang berbeda pada MAPKs yang dirangsang BzATP; aktivasi ERK 1/2 dan JNK 1/2 secara signifikan berkurang, sedangkan aktivasi p38 tidak terpengaruh. Minocycline mampu menghambat p38 MAPK di mikroglia dan bahwa penghambatan spesifik p38 MAPK, tapi tidak p44/42 MAPK, memberikan neuroproteksi terhadap toksisitas NMDA dan mencegah proliferasi microglial. p38 MAPK dipertimbangkan memediasi respon inflamasi pada berbagai tipe sel, termasuk mikroglia; oleh karena itu, penghambatan p38 MAPK mungkin bermanfaat untuk lesi yang melibatkan inflamasi dan aktivasi mikroglial. Beberapa penelitian dengan inhibitor spesifik p38 MAPK telah terbukti neuroprotektif dan memberikan efek anti-inflamasi. Anggota lain dari MAPK, p44/42, dirangsang oleh mitogen ekstraseluler dan terlibat dalam proliferasi 9

dan diferensiasi berbagai jenis sel, dengan demikian mendukung kelangsungan hidup sel. Menurut peran pendukung kelangsungan hidup dari p44/42 MAPK, Sugino dkk tidak menemukan neuroproteksi terhadap iskemia serebral transien dengan inhibisi p44/42 MAPK, dan dalam studi baru-baru ini penghambatan p44/42 MAPK meningkatkan kematian neuronal yang diinduksi NMDA daripada menjadi pelindung. Namun, p44/42 juga telah ditunjukkan untuk berkontribusi terhadap kematian neuronal iskemik secara in vivo dan in vitro, menunjukkan bahwa peran p44/42 MAPK mungkin tergantung pada model cedera, waktu, dan dosis pengobatan inhibitor. 4. INHIBISI JALUR APOPTOSIS MITOKONDRIA Mitokondria dianggap sebagai link utama antara sinyal stres selular yang teraktivasi selama kerusakan sel saraf akut dan kronis dan pelaksanaan kematian sel saraf yang terprogram. Dalam kebanyakan vertebrata, peristiwa sentral dalam proses apoptosis melibatkan peningkatan permeabilitas membran luar mitokondria (OMM), yang mengakibatkan pelepasan berbagai protein yang normalnya berada di ruang intermembran mitokondria. Prospek luar biasa untuk efek neuroprotektif dari minocycline dapat dikaitkan dengan laporan yang menunjukkan bahwa minocycline memblok pembukaan pori transisi permeabilitas (PTP) konduktansi tinggi mitokondria. Pembentukan PTP merupakan langkah kunci dalam program seluler yang terkait dengan situasi kematian sel. Proses ini dapat memicu pelepasan mitokondria dari kematian sel yang menginduksi factor-faktor termasuk: sitokrom c, second mitochondriaderived activator of caspase (SMAC), direct inhibitor-of-apoptosis proteinbinding protein with low pI (Diablo), dan apoptosis-inducing factor (AIF). Beberapa studi, termasuk kita sendiri, telah menunjukkan bahwa minocycline adalah efektif dalam menghambat pembengkakan mitokondria ketika stimulus adalah kalsium. Bahkan, minocycline mungkin memiliki mekanisme aksi yang berbeda terhadap oksidasi (ters-butil hidroperoksida, oksida phenylarsine) dan PTP induser nonoxidatif (Ca/Pi, t-Bid, Bid) setelah minocycline memblok kalsium, tapi bukan pembengkakan mitokondria otak 10

yang diinduksi KO2. Minocycline mengurangi potensial listrik trans-membran mitokondria, mencegah akumulasi kalsium dan pembentukan konsekuen intraseluler dan pembukaan PTP mitokondria. Pada saat yang sama, baru-baru ini ditunjukkan bahwa minocycline tidak menunjukkan karakteristik penghambatan PTP di mitokondria SSP yang terisolasi, meskipun penghambatan pembengkakan dapat dideteksi dalam dosis di mana respirasi mitokondria terpengaruh dan serapan Ca2+ terhambat. Dalam kasus apapun, minocycline, dengan menghambat penyerapan Ca2+ mitokondria, bisa mengurangi produksi spesies oksigen reaktif yang telah berpartisipasi dalam beberapa model kematian neuronal. Dalam lapisan ini, dilaporkan bahwa minocycline memblok pelepasan sitokrom c dari mitokondria dalam beberapa model, termasuk sel-sel rambut yang terkena gentamisin. Di sisi lain, pemilihan mitokondria oleh protein famili Bcl-2 proapoptosis (misalnya Bax, Bak, dan Bid) bisa menjadi penyebab utama kebocoran membran luar. Selain itu, minocycline dapat mencegah perubahan permeabilitas membran mitokondria yang berhubungan dengan apoptosis dengan mencegah akumulasi protein Bax pro-apoptosis dalam membran mitokondria bagian luar. Minocycline telah ditunjukkan untuk memperbaiki pemilihan Bax untuk mitokondria dalam kondisi apoptosis.

5. EFEK MODULATOR PADA EKSPRESI PROTEIN TERKAIT APOPTOSIS Ekspresi gen terlibat dalam banyak program kematian sel mungkin karena banyak respon seluler terhadap perubahan lingkungan dimediasi oleh faktor-faktor transkripsi seperti nuclear factor B (NF B) dan p53. Gangguan aktivitas faktor transkripsi dapat memiliki efek mendalam pada nasib sel. Minocycline ditunjukkan untuk menghambat NF B yang berikatan dengan DNA pada mikroglia yang terinfeksi HIV-1, dan mencegah degradasi NF B inhibitor subunit I B yang diinduksi lipopolisakarida. Temuan ini menunjukkan 11

bahwa minocycline dapat mengurangi translokasi NF B ke nukleus, sehingga mengurangi aktivitas transkripsional. Gen supresor tumor p53 adalah faktor transkripsi yang terangkai spesifik yang mengaktifkan ekspresi gen dengan mempromosikan penghentian pertumbuhan atau kematian sel dalam menanggapi berbagai bentuk stres selular. Dalam sistem saraf matur, banyak penelitian menunjukkan bahwa p53 memainkan peran kunci dalam kematian neuronal. Baru-baru ini, Kelly dkk melaporkan bahwa minocycline mampu memblok pengaturan p53 pada sebuah model tikus dengan cedera ginjal iskemik. Famili protein Bcl-2 mengatur jalur dependen mitokondria untuk apoptosis. Bcl-2 adalah penentu kunci molekuler pada proteksi yang dimediasi minocycline. Hubungan antara molekul anti- dan pro-apoptosis menentukan nasib sel, tingkat yang relatif tinggi pada Bcl-2 mempromosikan kelangsungan hidup sel sementara tingkat yang relatif tinggi pada Bax mempromosikan kematian sel. Induksi protein Bcl-2 anti-apoptosis oleh minocycline bisa menjadi mekanisme yang mungkin untuk menjelaskan sitoproteksi diberikan oleh obat ini. Minocycline mampu menginduksi akumulasi Bcl-2 mitokondria dan interaksi dengan apoptosis-promoting faktor seperti Bax, Bak, dan Bid. Menariknya, penurunan regulasi ekspresi Bcl-2 oleh oligonukleotida anti-sense menghapuskan efek neuroprotektif dari minocycline. Interaksi X chromosome-linked inhibitor-of-apoptosis protein (XIAP) dengan SMAC / DIABLO berkontribusi pada regulasi apoptosis dalam beberapa model. Minocycline menurunkan tingkat caspase dan meningkatkan hubungan antara XIAP dan SMAC / DIABLO. Tindakan sinergis ini mencegah induksi aktivitas caspase yang biasanya terkait dengan kerusakan reperfusi pasca-iskemik dan oksidatif. Selain itu, pengobatan minocycline mengurangi translokasi SMAC / DIABLO dari mitokondria ke dalam sitosol, mirip dengan dampaknya pada translokasi sitokrom c. Famili sistein protease, termasuk caspases dan calpains adalah perwakilan terbaik, memainkan peranan penting dalam induksi, transduksi, dan amplifikasi sinyal apoptosis intraseluler seperti yang terlihat dalam patogenesis 12

berbagai gangguan SSP. Ada dua jenis caspases: caspases inisiator dan caspases efektor. Caspases inisiator (misalnya caspase-8, caspase-9) memecah bentuk sebelumnya yang tidak aktif (pro-caspases) dari caspases efektor, sehingga mengaktifkan mereka. Caspases efektor (misalnya caspase-3, caspase-7) pada gilirannya memecah substrat protein lain dalam sel, menghasilkan promosi proses apoptosis. Aktivasi dari protease sel yang mati ini setelah cedera dapat terjadi dalam neuron atau sel glial, seperti astrosit dan mikroglia. Caspase-3 adalah sebuah caspase eksekusioner yang bertanggung jawab untuk membelah berbagai substrat yang mengarah ke ciri-ciri morfologi apoptosis. Minocycline menghambat aktivasi famili caspase melalui mekanisme ganda. Pertama, dengan menghalangi pelepasan sitokrom c dari mitokondria, minocycline mencegah pembentukan kompleks apoptosomal, multi-protein yang diperlukan untuk aktivasi caspase-9 dan capase-3 nanti. Kedua, minocycline bisa memodulasi ekspresi, dan karena itu mampu mengurangi ekspresi mRNA caspase-1 dan caspase-3 dalam model tikus transgenik HD. 6. MODULASI DALAM CEREBROVASKULATUR Perubahan dalam sifat-sifat cerebrovaskulatur telah disarankan sebagai kontribusi terhadap patogenesis yang potensial pada penyakit neurodegeneratif. Misalnya, gangguan sirkulasi cerebral, inflamasi vaskuler, dan disfungsi sawar darah-otak (BBB) telah diidentifikasi dalam otak pasien AD. Signifikansi fungsional dari cerebrovaskulatur di AD didasarkan pada kemampuannya untuk menjaga lingkungan homeostatik, penting untuk kelangsungan hidup neuron. Minocycline menunjukkan sifat anti-angiogenik sebanding dengan kombinasi heparin dan kortison, dan telah diusulkan sebagai calon senyawa terapeutik untuk menghambat gangguan serebrovaskular di AD. Aktivitas matriks metalloproteinase (MMP) meningkatkan permeabilitas BBB. Minocycline melemahkan kekebalan adaptif dengan mengurangi ekspresi dan aktivitas MMP, sehingga mengurangi migrasi sel T ke dalam SSP, sehingga mencegah degradasi mielin yang dimediasi sel T. 13

MMP adalah famili protease yang tergantung seng yang bertanggung jawab untuk pergantian matriks ekstraseluler dan degradasi protein bioaktif. Pada iskemia serebral, MMPs 2 dan 9 telah diidentifikasi sebagai mediator dari degradasi membran basal dan transformasi hemoragik. Interferensi kaskade ini oleh minocycline mungkin merupakan cara yang partisipatif untuk sifat protektif neurovaskular. Minocycline memiliki efek penghambatan yang lebih besar pada MMP-9 dari MMP-2 di bawah kondisi in vivo dan in vitro. MMPs membutuhkan seng pada tempat aktifnya untuk aktivitas fungsional, dan penghapusan dari seng menyebabkan perubahan dalam konformasi dengan inaktivasi enzim yang dihasilkan. Untuk menjelaskan efek penghambatan ini, mekanisme ganda yang melibatkan kemampuan untuk khelat ion divalen dan pengaturan ekspresi gen telah diusulkan. 7. MEKANISME AKSI LAINNYA YANG DAPAT DITERIMA Selain mekanisme yang dijelaskan di atas, efek penghambatan minocycline terhadap pembentukan protein total telah dijelaskan sebelumnya. Tetrasiklin dan turunannya diklaim untuk mengikat fibril amiloid yang dihasilkan oleh peptida sintetis dari PrP manusia dan Ab1-42/Ab1-40 manusia, dan mengurangi pembentukan fibril amiloid oleh peptida ini. Meskipun mekanismenya tidak sepenuhnya dipahami, interaksi kutub dan pembentukan ikatan hidrogen menunjukkan dasar molekuler yang mungkin untuk pengikatan tetrasiklin dengan struktur fibrillogenik. Minocycline adalah inhibitor huntingtin yang kuat, protein penting untuk pembentukan agregat protein dalam irisan hippocampus dalam model HD. Namun, tidak ada perbedaan yang signifikan yang diamati antara perilaku abnormal dan jumlah agregat dalam otopsi hewan post-mortem. Akhirnya, minocycline telah ditunjukkan untuk menghambat poli (ADP-ribosa) polimerase-1 (PARP-1), sebuah enzim yang ketika diaktifkan oleh kerusakan DNA mempromosikan kematian sel dan inflamasi. Alano dkk telah melaporkan bahwa minocycline mampu memblok kematian neuronal yang dimediasi oleh PARP-1 dengan langsung menghambat aktivitas PARP-1. 14

KESIMPULAN Tinjauan ini menambahkan gambaran terbaru target yang masuk akal yang dapat dimodulasi oleh minocycline. Minocycline adalah suatu antibiotik yang digunakan secara klinis dalam beberapa tahun terakhir telah diusulkan untuk digunakan sebagai obat sitoprotektif. Namun, tidak semua hasil mendukung minocycline sebagai alat yang tepat untuk membantu memerangi penyakit neurodegeneratif. Ada laporan yang diterbitkan tentang model fenotipik PD dan HD pada monyet dan tikus di mana pengobatan minocycline benar-benar meningkatkan efek racun dan menghasilkan kehilangan yang besar dari ujung saraf dopaminergik. Apa yang menjelaskan efek minocycline yang tampaknya kontradiktif pada kelangsungan hidup sel saraf setelah cedera akut? Perbedaan-perbedaan ini dalam hasil dari modulasi target sebelumnya dapat tergantung tidak hanya sifat dan keparahan dari cedera, tetapi juga jenis sel yang teraktivasi. Dengan menghambat mikroglia, minocycline bisa memblok mekanisme perbaikan. Sebagai tambahan, efek negatif minocycline dalam status pernafasan mitokondria dalam SSP tidak kompatibel dengan permintaan energi yang tinggi dari sel-sel saraf, dan dapat berkontribusi pada neurotoksisitas dari minocycline pada hewan dan manusia pada dosis tinggi seperti yang ditunjukkan di tempat lain. Seperti yang diharapkan pada penyakit neurodegeneratif, salah satu kaskade berbahaya di atas dapat diaktifkan yang mengakibatkan kematian sel terprogram. Selain itu, beberapa dari mereka mungkin memediasi proses apoptosis ini secara bersamaan dan paralel. Jika beberapa dari kaskade patologis ini memotong efek sitoprotektif yang diinduksi minocycline, mungkin kematian neuronal tidak dapat dihindari. Untuk alasan ini, lebih banyak data dari kondisi eksperimental diperlukan untuk memperjelas semua jalur yang relevan dengan penyakit neurodegeneratif, dan untuk menentukan dosis yang paling tepat, rute administrasi, dan jendela terapeutik di mana minocycline menghasilkan neuroproteksi.

15