regenerasi plantlet dari Embriogenesis somatikpada in vitrokalus

daribakal bijiCitrusmacroptera. Embriogenesis somatikdan regenerasiplantletdicapai padakalus budayanucellusberasal daribakal bijiyang belum dikembangkanbuah-buahanbelum menghasilkan Jerukmacroptera. Empatjenis mediayang digunakantetapi hanyadimodifikasimedia MS dilengkapi denganmaltmerespon dengan baik. Kalusyang dihasilkan dalammaltdilengkapi Media MSadalahembriogenikdi alam.Setelahpengalihaniniembriogenik kalusdalammedia MShormongratis,embriosomatikdikembangkan. PlantletIndependendikembangkan dariembrio somatikinidengan lebih subkulturdimedia yang sama.Setelah limaminggudari budayaplantletadalah dipindahkan ketanahpotdicampur dengankotoran sapibuburbiogasberasaldan selamat baik.

pengenalan Citrus cropteraMont.var.anammensisumumnya dikenal sebagaiSatKara,yang paling populer danmahal. buah jeruktumbuhdi daerahSylhetlebih besar Bangladesh.Ini adalahspesies liarsemi dandigunakan sebagai obatoleh suku-sukulokal Assam, India (Ghosh, 1990). Di Bangladesh, baik buah-buahanhijau danmatangadalah digunakanuntuk memasak danacarpersiapan.Rasamanisbuahkarena minyak atsiribagianflavedodapat digunakan dalamtujuanpenyedapdalam parfum industri.Setiap tahun, Bangladesh mendapatkanjumlah tampanmata uang asing dengan mengeksporbuah-buahanterutamake negara-negaraInggris, Amerika Serikatdan Timur Tengah.seperti spesiesjeruk lainnyaSatKarajugadiperbanyaksecara konvensionaldengan cara benih,graftingdanbuddingmetode.Karenamenyajikanpermintaanbuah inidi baik lokal maupunpasar luar negeriperlu untukmengembangkan protokolcocok untuk massapropagasidarikultivarelityang ada.

Proses embriogenesis somatik adalah metode yang cocok budidaya dan memiliki potensi propagasi massa secara komersial dengan biaya rendah per unit. Metode pemuliaan konvensional dengan tanaman kayu tahunan memiliki terhambat karena kesenjangan generasi besar dari 6 - 8 tahun sebelum mereka dapat dinilai bersama-sama dengan kesulitan yang berhubungan dengan kerja pada jaringan dari matang asal. Meskipun tidak ada informasi yang tersedia dari Citrus macroptera belum, sukses somatik embriogenesis dari jaringan nucellus jeruk yang berbeda spesies dicapai oleh beberapa peneliti (Rangan dan Murashige 1969; Pahit dkk. 1972; Kochba dkk. 1972; Starrantino dan Russo 1980; Pasqual dkk. 1984; Chen et al. 1990 dan Gill et al. 1994. Selain itu, nucellus adalah nonvascularized jaringan asal ibu dan dapat dianggap sebagai kantong remaja jaringan di pabrik dinyatakan dewasa (Button dan Kochba 1977). Penyelidikan ini dilakukan untuk mengembangkan in vitro cocok protokol untuk budidaya tanaman Sat Kara dari nucellus melalui somatik embriogenesis.

Bahan dan Metode Empat sampai lima minggu buah muda umur dikumpulkan dari Research Jeruk Station, BARI, Jaintapur, Sylhet. Buah dicuci secara menyeluruh di bawah berjalan air keran untuk mengurangi debu dan kontaminan permukaan. Kemudian mereka dicelupkan ke dalam Alkohol 90% selama satu menit diikuti dengan larutan natrium hipoklorit 4% selama 10 menit dan akhirnya dibilas empat kali dengan air suling steril dalam laminar aliran udara kabinet. Buah itu kemudian ditempatkan pada ubin keramik diautoklaf dan dibelah dengan pisau steril tajam dan kemudian berkembang ovula / belum menghasilkan biji dipisahkan. Untuk induksi kalus embriogenik somatik benih adalah dipotong oleh pisau bedah bagian dan nucellus dipisahkan dan dikultur pada semi-padat modifikasi media MS dengan 500 mg / l ekstrak malt menyebutnya somatik embriogenik medium1 (SEM1) setelah Tisseret dan Murashige (1977). Pada saat yang sama waktu bagian nucellus dikultur ke MS + 0,1 mg / l 2,4-D + 0,05 mg / l Kn (SEM2), MS + 0,5 mg / l 2,4-D + 0,1 mg / l Kn (SEM3) dan MS + 1 mg / l 2,4-D + 0,5 mg / l Kn (SEM4) media. Belahan nucellus diambil dalam botol kerucut dan mengandung lima sampel dengan tiga ulangan untuk setiap medium.The menanggapi Kalus disubkultur lebih lanjut
Bahan dan Metode Empat sampailima minggubuahmuda umurdikumpulkandari ResearchJeruk Station,BARI, Jaintapur, Sylhet. Buahdicucisecara menyeluruhdi bawahberjalan air keran untukmengurangi debudan kontaminanpermukaan.Kemudian merekadicelupkan ke dalam Alkohol90%selama satu menitdiikuti denganlarutan natriumhipoklorit4%selama 10 menit danakhirnyadibilasempat kalidengan airsuling sterildalamlaminar aliran udarakabinet.Buahitu kemudianditempatkan padaubinkeramikdiautoklafdan dibelahdengan pisausteriltajam dankemudianberkembangovula/belum menghasilkan bijidipisahkan. Untukinduksikalusembriogeniksomatikbenihadalah dipotong olehpisau bedahbagiandannucellusdipisahkan dandikulturpadasemi-padat modifikasimedia MSdengan 500mg / lekstrak maltmenyebutnyasomatik embriogenikmedium1(SEM1) setelah TisseretdanMurashige(1977).Pada saat yang sama waktubagiannucellusdikulturke MS+ 0,1mg / l2,4-D + 0,05 mg/ lKn (SEM2), MS + 0,5mg / l2,4-D + 0,1mg / lKn(SEM3) dan MS + 1mg / l2,4-D + 0,5 mg / lKn(SEM4) media.Belahannucellusdiambildalam botolkerucut dan mengandunglima sampeldengan tigaulangan untuksetiapmedium.Themenanggapi kalusdisubkulturpada medialebihsama danbersamaan kehormon gratismedia MS. PHsemua mediatelah disesuaikanmenjadi 5,7sebelumpenambahanagar dan disterilkan denganautoklafselama 20 menitpada tekanan1,05kg/cm2(15psi) pada 121_C. Sejumlah10gram/ lagar-agar(BDH) digunakan untuk SEM1dan 0,8lgm/ untuk laintiga media. Paratermosberisieksplandiinkubasipada budaya RegenerasiEmbriogenesisSomatikPlanletMelalui169 rak.Budayadipertahankan pada25_C 2bawahputih dingin neonlampuselama 16jampenyinaran.

Hasil danDiskusi Empat jenissomatikembriogenikmedia yangdigunakanuntuk mengamatiembriogenik induksi kalusdanregenerasi tanamandari eksplankalus. Waktu untukkalus inisiasiadalah antara8 dan15 haridi semua media.Hasil yang diperoleh dari percobaan inidisajikanpada Tabel 1.Di antarasemua mediadiuji,kalus dikembangkan diSEM1hanyaembriogenikdi alam.Inikaluslonggar lampu hijaudan memilikipertumbuhan yang baik(Gambar1).Kalusdiperolehdi medialainnya kompak danawalnyahijautapidengan selangwaktu yang merekaberubahcoklat. Embriogenikkalusketika ditransfer kemedia MSbebashormonsomatik embriodikembangkan(Gambar2).PlantletLengkapdikembangkan dariini somatikembrioolehsubkulturlebih lanjut dalammediabebashormonyang samaMS (Gbr. 3).

Regenerasi tanaman melalui embriogenesis somatik telah disukai sebagai metode untuk perkalian plasma nutfah layak di tanaman berkayu banyak (Bonga 1987). Para somatik embriogenik kalus dan plantlet diperoleh dari nucellus spesies jeruk banyak di malt dilengkapi SEM1 menengah. Tisserat dan Murashige (1977) diperoleh bahwa media ini cocok untuk mengembangkan protokol untuk embriogenesis somatik dari nucellus spesies jeruk. Namun, beberapa peneliti menggunakan MT (Murashige dan Tucker 1969) media
ditambah denganekstrak maltuntukembriogenesissomatikdarinucellusdari jeruk manis(Pasqual dkk.1984),dan beberapaspesies yang dipilihdarijeruk (Pimental danVillegas1993). Gambar.

Gambar. 1 - 5: Regenerasi plantlet melalui embriogenesis somatik pada Citrus macroptera. 1. Compact embriogenik kalus dari nucellus setelah empat minggu budaya dalam malt dilengkapi dimodifikasi MS. 2. Perkembangan embrio somatik pada kalus setelah empat minggu subkultur di MS basal. 3. Pengembangan planlet dari embrio somatik setelah subkultur kedua di MS basal. 4. Lengkap plantlet dengan tunas dan akar dikembangkan dari embrio somatik. 5. Tunggal didirikan pabrik di tanah pot. Dalam jumlah terbatas perawatan digunakan dalam percobaan ini untuk mendorong somatik embriogenesis di C. macroptera dari nucellus. sukses embriogenik kalus dikembangkan hanya dari SEM1 menengah. Dalam kasus auksin-sitokinin media yang dilengkapi awalnya kalus diinduksi tetapi ini tidak Regenerasi Embriogenesis Somatik Planlet Melalui 171 embriogenik. Tapi, Pasqual dan Ando (1988) digunakan 2,4-D dan Kn untuk somatik embriogenesis dari nucellus dari cv jeruk manis. valecnia dan diperoleh beberapa somatik embriogenik kalus. Tunggal pertumbuhan akar primer (Gambar 4) diamati pada setiap planlet dan berarti tinggi plantlet adalah 13 mm. Rajdan (1993) menyebutkan bahwa embrio

mungkin berkecambah pada media agar-agar tanpa ZPT. Namun, Chen et al. (1990) mengamati GA3 sangat efektif buat embryoid untuk plantlet regenerasi. Planlet yang diperoleh melalui embriogenesis somatik dipindahkan ke dalam tanah dicampur dengan biogas bubur 1: 1 rasio (Gbr. 5) dan tingkat hidup adalah 100%. Pengakuan Dana bantuan keuangan dalam bentuk beasiswa untuk penulis pertama (MNM) oleh National University, Gazipur, Bangladesh untuk menyelesaikan pekerjaan ini adalah syukur diakui.