MRS (Glose de Man, Rogosa, Sharpe)

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peptone 10,0 g extrait de viande 8,0 g extrait de levure 4,0 g Glucose 20,0 g Actate de sodium trihydrat 5,0 g Citrate d'ammonium 2,0 g Tween 80 1,0 ml hydrognophosphate de potassium 2,0 g sulfate de magnsium heptahydrat 0,2 g sulfate de manganse ttrahydrat 0,05 g Agar 10,0 g pH = 6,2

62 g par litre. Strilisation l'autoclave. Milieu permettant une bonne croissance des Lactobacillus. Avec Lactobacillus Case les colonies mesurent environ 1 mm de diamtre et apparaissent de couleur blanche. Il existe un quivalent en bouillon.

Isolement et identification des alcalodes antifongiques et algicides de Haplophyllum sieversii * Rsum * Texte HTML HTMLFull * PDFHi-Res PDF [241 Ko] * Infos Soutenir * Les chiffres * Rfrences * Articles citant CL Cantrell, * KK Schrader, LK Mamonov, GT Sitpaeva, TS Kustova, C. Dunbar, et Wedge DE USDA-ARS, produits naturels Unit de recherche sur l'utilisation, l'Universit, dans le Mississippi 38677, Institut de Physiologie des Plantes, Gntique, et bioingnierie, Timiriazeva, 45, Almaty, 05040, Rpublique du Kazakhstan, de l'Institut de botanique et de Phytointroduction, Timiriazeva 36d, Almaty, 05040, Rpublique du Kazakhstan, de l'Universit du Mississippi, Thad Cochran Research Center, Universit, Mississippi 38677 J. Agric. Food Chem., 2005, 53 (20), pp 7741-7748 DOI: 10.1021/jf051478v Date de publication (Web): Septembre 13, 2005 Copyright 2005 American Chemical Society CASSection: Biochimie vgtale Abstrait Essais biologiques fractionnement guid par de l'hexane / actate d'thyle / eau (H/EtOAc/H2O) extrait brut des parties ariennes de Haplophyllum sieversii a t effectue en raison des donnes du dpistage prliminaires qui indiquaient la prsence de composantes de la croissance inhibitrices contre Colletotrichum fragariae, gloeosporioides, et Colletotrichum acutatum. Fractionnement a t ralis en utilisant des mthodes bioautographical rsultant de l'isolement de la flindersine bioactif alcalodes, anhydroevoxine, haplamine, et un eudesmin lignanes. Ces quatre composs ont t valus pour leur activit contre C. fragariae, C. gloeosporioides, C. acutatum, Botrytis cinerea, Fusarium

oxysporum, et Phomopsis obscurans dans une relation dose-rponse inhibitrice de croissance bio-essai 50,0, 100,0, 150,0 et uM. Parmi les quatre composs tests, flindersine dmontr le plus haut niveau de l'activit antifongique. En outre, flindersine, eudesmin, et haplamine ont t projets contre le perornata eau douce phytoplanctons Oscillatoria, Oscillatoria agardhii, Selenastrum capricornutum, et Pseudanabaena sp. (Souche LW397). Haplamine dmontr inhibition slective contre l'odeur perornata produisant cyanobactrie O. par rapport l'activit contre l'algue verte capricornutum S., avec le plus bas des valeurs de concentration observes effet de 1,0 et 10,0 pM, respectivement. Mots-cls: Haplophyllum sieversii; Botrytis cinerea; Fusarium oxysporum; obscurans Phomopsis; Colletotrichum fragariae; gloeosporioides; Colletotrichum acutatum; Oscillatoria perornata; Oscillatoria agardhii; Selenastrum capricornutum; Pseudanabaena; flindersine; eudesmin; anhydroevoxine; haplamine * Haut de la page o o Introduction o Mthodes et matriaux o Rsultats et discussion o L'information prise en charge disponible Introduction Augmentation de la rsistance microbienne aux produits agrochimiques disponibles dans le commerce a conduit un besoin pour de nouveaux pesticides. En outre, le dsir de produits agrochimiques srs et plus efficaces avec la toxicit environnementale et / ou de mammifres rduite, reste importante. Indispensable pour ces efforts est l'identification de nouveaux composs prometteurs possdant des niveaux levs de souhaitables activits biologiques, toxicit rduite vers les espces non cibles, les structures chimiques nouveaux, et peut-tre, des modes d'action diffrents pour aider fournir une protection contre une rsistance croise aux produits agrochimiques utiliss actuellement (1 ). Naturelles base de produits pesticides offrent des avantages en ce que certains peuvent tre spcifiques vers une espce cible, et ils peuvent aussi avoir des modes d'action uniques avec peu toxique pour les mammifres. Un avantage supplmentaire est leur dcomposition rapide,

rduisant ainsi atteinte l'environnement. Nos efforts de recherche actuels sont d'identifier les produits naturels base de fongicides et algicides. Depuis les dbut des annes 1970, les communauts agricoles ont lutt avec l'volution de la rsistance aux agents antimicrobiens par des agents pathognes. Cette situation a entran un besoin accru pour des applications rptes de fongicides qui a clips l'utilisation de fongicides pour la gestion des maladies des plantes. Pour rsoudre les problmes de rsistance aux pesticides, trois stratgies ont t utilises comme suit: (1) l'optimisation des stratgies de rsistance la maladie de contrle, (2) dcouverte et le dveloppement d'agents antimicrobiens avec de nouveaux modes d'action, et (3) le dveloppement de la maladie nouvelle cultivars rsistants. Un aspect de notre recherche se concentre sur de nouveaux drivs de plantes fongicides pour le contrle des agents pathognes importants des cultures mineures et les ravageurs dans l'agriculture. Les agents pathognes de petits fruits et les plantes ornementales telles que Colletotrichum, Botrytis, Fusarium et continuent d'entraver la croissance et la rentabilit de ces secteurs de l'agriculture. Un autre domaine de notre recherche porte sur la dcouverte d'algicides naturels et naturels base de poisson-chat pour une utilisation dans l'aquaculture. "Offgot" a t estim la barbue de rivire (Ictalurus punctatus) l'industrie aux tats-Unis autant que 60 millions de dollars (2). Les types les plus courants de mauvais got sont dues l'absorption de la "terre" et "le moisi" gosmine composs et 2-methylisobornoel (MIB), respectivement, dans la chair du poisson-chat. Certains types de cyanobactries (algues bleu-vert) qui poussent dans les tangs de poisson-chat de produire gosmine et le MIB. Producteurs de poisson-chat doit dtenir la taille du march le poisson-chat qui seraient touchs par ces composs jusqu' ce dpuration de l'arrire-got se produit. Ces retards dans les cots de rcolte augmentation de production en raison des cots d'alimentation supplmentaires, la confiscation du revenu des ventes d'avance, et la perte de revenu de la rcolte tardive. En outre, le poisson-chat qui s'est tenue l'inventaire peut tre perdu de la maladie, la dtrioration de la qualit de l'eau, et de la dprdation des oiseaux. L'approche de gestion le plus couramment utilis par les agriculteurs pour contrler le poisson-chat terreuses / moisi des flaveurs est l'application d'algicides pour tuer les espces nuisibles de cyanobactries. Dans l'ouest du Mississippi (Delta), la premire rgion de production de la barbue aux tatsUnis, MIB-lie mauvais got a t attribue la prsence de la cyanobactrie Oscillatoria (Planktothrix) perornata dans les tangs de poisson-chat (3, 4). En

outre, O. perornata a t rcemment trouve tre prsents dans les tangs de poisson-chat dans l'est du Mississippi et l'Alabama l'ouest (5). Les deux types de algicides silure utilises par les fermiers sont composs base de cuivre (par exemple, le sulfate de cuivre et en cuivre chlat-produits) et l'herbicide diuron [N'-(3,4-dichlorophnyl)-N, N-dimthylure]. Malheureusement, ces produits chimiques ont plusieurs attributs ngatifs, y compris large spectre de toxicit envers les organismes non viss, les longues persistance dans l'environnement et la perception ngative du public l'utilisation de ces composs synthtiques dans les tangs de production alimentaire des poissons. En raison de l'absence de toxicit slective de cuivre composs base de diuron et, la communaut de phytoplancton entier peut tre empoisonn et / ou tus, y compris les types bnfiques du phytoplancton (par exemple, les algues vertes). Cette mortalit massive de phytoplancton dans les tangs-offs poisson-chat peut entraner la dtrioration de la qualit de l'eau qui peut ensuite souligner et / ou de tuer le poisson-chat. Dans un programme de recherche visant identifier des fongicides et algicides naturels, plus de 230 diffrents extraits bruts de plantes reprsentant 38 espces de plantes endmiques la Rpublique du Kazakhstan ont t valus. Sur la base de ces rsultats prliminaires de dpistage, extrait des parties ariennes de Haplophyllum sieversii Fisch. Et Mey (Rutaceae) ont t choisis pour complment d'enqute. Le Haplophyllum genre a t largement tudi pour dtecter la prsence de composs phytochimiques rsultant de l'isolement des coumarines (6-8), lignines (9-11), et des alcalodes (12-15). * Haut de la page o o Introduction o Mthodes et matriaux o Rsultats et discussion o L'information prise en charge disponible Matriels et mthodes Instrumentation. RMN 1H et 13C spectres ont t enregistrs dans CDCI3 sur un spectromtre de Bruker Avance 400 MHz (Boston, MA). Tous les multiplicits 13C ont t dduites partir de 90 et 135 expriences DEPT. Spectres de masse haute rsolution ont t obtenus en utilisant un Agilent 1100 HPLC couple un AccuTOF JEOL JMS (-T100LC) (Peabody, MA).

Chromatographie sur colonne a t ralise en utilisant un Biotage, Inc, la pompe Horizon (Charlottesville, VA) quip d'un collecteur de Flash Horizon et longueur d'onde fixe (254 nm) du dtecteur. Travail HPLC laboration de la mthode a t effectue en utilisant un systme de Agilent 1100 quip d'une pompe quaternaire, passeur d'chantillons, barrettes de diodes dtecteur, et dgazeur vide. Semi-prparative purifications HPLC ont t effectue en utilisant un eaux delta-Prparation systme (Milford, MA) quip d'un dtecteur rseau de diodes et une pompe binaire. Haute rsolution analyse LC-MS. Tous les composs isols ont t prpars dans le chlorure de mthylne et inject directement dans un 0,4 mL / min flux d'une solution MeOH H2O/80% 20% contenant 1 ug / ml de L-tryptophane. Compensations drive de masse ont t effectues par rapport L-tryptophane [M + H] + et / ou [2M + H] + ions. Matriel vgtal. Les parties ariennes des plantes sieversii H. dans le stade de la floraison ont t recueillies sur Juin 13, 2003, au Kazakhstan dans la partie ouest du col de Malay-Sary et des perons au sud-ouest de Jungar Alatauh, o elle pousse entre les accompagnant Ferula-Artemisia espces. Vivace objet vert ou colombe de couleur de cheveux par les plantes glandulaires sont 35-70 cm de hauteur. La tige de la plante est glabre, solitaire, debout, et ramifie. Les feuilles sont larges et oblongues lancoles (2-5 cm de long et 0,5-2,0 cm de large), glabre, et aigu ou bluntish. Les fleurs sont nombreuses, petites, et combins sur le dessus dans les grappes de fleurs corymbous. Les ptales sont oblongueslancoles, 3,5-6 mm de long, et le jaune. Capsula est unopening et glabres avec niduses feuilles caduques. Un numro de bon spcimen 4012a/25-1975 a t dpos l'Institut de Botanique et Herbier Phytointroduction, Almaty, Rpublique du Kazakhstan. Extraction des plantes. Les parties ariennes (1 kg) ont t schs l'air suivi d'un broyage dans un broyeur vgtaux Willey-Moulin. Matriel vgtal au sol a t extrait la temprature ambiante en utilisant 6,1 L d'ther de ptrole, fournissant 19,2 g de matires extractibles aprs vaporation du solvant. Sch marc a ensuite t extrait l'aide 5,9 L d'hexane / actate d'thyle acetate/H2O (54:44:2), fournissant 20 g de matires extractibles aprs vaporation des solvants. Ce processus a t encore une fois rpt en utilisant l'thanol (95%) comme solvant d'extraction, fournissant 94 g de matires extractibles. Enfin, l'extraction avec H2O fourni 109 g de matires extractibles aprs lyophilisation pour liminer H2O. Essais biologiques fractionnement guid. Initialement, 3,0 g de l'H/EtOAc/H2O

(54:44:2) extrait a t adsorb au gel de silice et appliqu une colonne de chromatographie sur gel de silice (40-63 um, 40 x 150 mm, de 60 ). L'lution de la colonne a t effectue en utilisant des mlanges de polarit croissante hexane / AcOEt dans une srie de trois tapes linaires comme suit: (tape 1) 100:0 50:50 en utilisant 1200 ml, (tape 2) de 50:50 30:70 utilisant 1200 ml, et (tape 3) 30:70 0:100 utilisant 402 ml. luat de la colonne a t recueilli dans 24 ml-portions et, sur la base de similitudes TLC, 11 recombin dans des fractions (A, 6-13, 428 mg; B, 14-23, 4 mg; C, 24-26, 486 mg; D, 27-30, 76 mg; E, 31-33, 150 mg; F, 34-45, 335 mg; G, 46-55, 131 mg; H, 56-63, 105 mg; I, 6476 , 372 mg, et J, 77-96, 129 mg). Fractions I et J ont t slectionns pour une enqute plus approfondie base sur les activits dans l'activit bioautographic contre C. acutatum et C. gloeosporioides. Fraction I (372 mg) a t adsorb sur du gel de silice et applique sous forme de poudre sche un 25 colonne de gel de silice de 150 mm (40-63 um, 60 ) et lue en utilisant des mlanges de polarit croissante de l'hexane / actate d'thyle dans une srie de trois tapes linaires (tape 1, de 100:0 75:25 en utilisant 1599 ml; l'tape 2, de 75:25 25:75 l'aide de 600 mL, et l'tape 3, 25:75 0:100 en utilisant 600 mL). luat de la colonne a t recueilli dans 24 ml-portions et, sur la base de similitudes TLC, recombin dans des fractions 4 (I1, 1-23, 4 mg; I2, 24-28, 30 mg; I3, 29-38, 257 mg; et I4, 39-72, 10 mg). I2 fraction a t dtermine comme tant flindersine pur. I3 fraction a t en outre purifi en utilisant une 25 150 colonne de gel de silice mm (40-63 um, 60 a) et lue en utilisant des mlanges de polarit croissante de hexane/Et2O dans une srie de trois tapes linaires (tape 1, 100:0 75: 25 en utilisant 2304 ml; l'tape 2, de 75:25 0:100 en utilisant 300 ml, et l'tape 3, 0:100 en utilisant 300 ml). luat de la colonne a t recueilli dans 24 ml-portions et, sur la base de similitudes TLC, recombin dans des fractions (I3 4-1, 1-21, 32 mg; I3-2, 21-25, 163 mg; I3-3, 25 -38, 5 mg, et I3-4, 39-63, 52 mg). Fraction I3-2 produit des cristaux aprs repos temprature ambiante pendant la nuit. Cristaux ont ensuite t filtr et lav pour fournir pur (+)-eudesmin. J Fraction (129 mg) a en outre t purifi en utilisant une phase inverse C-18 colonne HPLC (Zorbax, 9,4 250 mm, 5 um) et les conditions de fonctionnement isocratique (60:40 H2O/acetonitrile), tandis que le suivi 210 nm. Deux composs ont t recueillies, fournissant 56 mg de haplamine et 6 mg de anhydroevoxine. Flindersine. Haute rsolution ESI-MS m / z 228.0989 [M + H] +, calcul pour C14H14NO2, 228,1024. RMN 1H (400 MHz dans CDCI3) : 12.42 (br s, 1H,

espces Colletotrichum et Phomopsis obscurans ont t isols de la fraise (Fragaria x ananassa Duchesne), tandis que Phomopsis viticola et Botrytis cinerea ont t isols partir de raisin commerciale (Vitis vinifera L.) et Fusarium oxysporum partir d'orchides (Cynoches sp.). Les champignons ont t cultivs sur la pomme de terre dextrose agar (PDA, Difco, Detroit, MI) en botes de Ptri de 9 cm et incubes dans une chambre de croissance 24 2 C sous refroidissement des lampes fluorescentes blanches (55 5 pmol m-2 s- 1) avec une photopriode de 12 h. Prparation conidies. Les conidies ont t rcoltes partir de 7 - 10 jours d'ge des cultures par les inondations plaques avec 5 ml d'eau distille strile et dlog les conidies par le brossage doucement les colonies avec une tige de verre en forme de L. Aqueuses des suspensions de conidies sont filtres travers Miracloth strile (Calbiochem-Novabiochem Corp, La Jolla CA) pour enlever le myclium. Concentrations conidies ont t dtermins par photomtrie (20, 21) partir d'une courbe standard sur la base de l'absorbance 625 nm, et les suspensions ont t ajust avec de l'eau distille strile une concentration de 1,0 106 conidies / ml. Standard des concentrations de conidies ont t dtermines partir d'une courbe standard pour chaque espce fongique. Courbes de turbidit standard ont t priodiquement valides l'aide la fois un Bechman / Coulter Z1 compteur de particules et compte hmocytomtre. La croissance du myclium et des conidies sont valus en utilisant un modle de Packard SpectraCount microplaque photomtre (Packard Instrument Company, Meriden, CT). La croissance et le dveloppement des conidies tube germinatif ont t valus en utilisant un Olympus IX 70 microscope invers et enregistre avec une camra numrique DP12, le cas chant pour les composs qui ont affect la germination des spores et du dbut du dveloppement du tube germinatif. Bioautographie direct. Un certain nombre de techniques ont t utilises comme bioautographie systmes de criblage primaire pour dtecter une activit antifongique. Matrix, unidimensionnelle, et les protocoles bioautographie deux dimensions sur des plaques de silice pour CCM de gel ainsi que Colletotrichum spp. que des organismes d'essai ont t utiliss pour identifier l'activit antifongique selon des mthodes publies (22, 23). Matrice bioautographie a t utilis pour cribler un grand nombre d'extrait brut 20 mg / ml. Une dimension chromatographie sur couche mince (CCM 1D) ont ensuite t utilise pour purifier et identifier le nombre d'agents antifongiques dans les extraits. Chaque plaque a ensuite t pulvris avec une suspension de spores (105 spores / ml)

du champignon de l'intrt et incubs dans une chambre humide pendant 3 jours 26 C avec une photopriode de 12 h. Zones claires de l'inhibition de la croissance fongique sur la plaque CCM a indiqu la prsence de constituants antifongiques dans chaque extrait. L'inhibition de la croissance fongique a t value 3-4 jours aprs le traitement. Mtabolites antifongiques ont t facilement localisable sur les plaques en observant visuellement les zones claires o les composs actifs a inhib la croissance fongique (24). 96-Eh bien Microbiassay fongique. Une mthode de rfrence [M27-A du Comit national pour la Clinical Laboratory Standards (NCCLS)] pour le bouillon de dilution des tests de sensibilit antifongique de la levure a t adapt pour l'valuation de composs antifongiques contre la sporulation des champignons filamenteux (21). Ce test de microtitrage 96 puits est utilise pour dterminer et comparer la sensibilit des agents pathognes fongiques des plantes des composs naturels et synthtiques dont on connat les normes fongicides (25). Le dosage de microtitration de 96 puits a t utilise pour dterminer la sensibilit de C. acutatum, C. fragariae, C. gloeosporioides, F. oxysporum, B. cinerea, P. obscurans, et P. viticola aux divers agents antifongiques en comparaison avec plusieurs fongicides commerciaux. Le bnomyl fongicides, l'azoxystrobine, et le captane ont t utiliss comme des normes dans ces essais. Chaque espces fongiques a t conteste dans un format dose-rponse de sorte que les concentrations finales compos d'essai de 0,3, 3,0 et 30,0 uM ont t atteints (en double) dans les diffrentes colonnes de la plaque de 96 puits. La croissance fongique a t value en mesurant l'absorbance de chaque puits 620 nm 0, 24, 48 et 72 h, sauf pour obscurans et P. viticola, o les donnes ont galement t enregistrs 120 h. Des valeurs moyennes d'absorbance et les erreurs types ont t reprsentes, et les graphiques ont t utiliss pour valuer la croissance fongique. Les diffrences dans la germination des spores et la croissance du myclium dans chacun des puits dans la plaque de 96 puits preuve de sensibilit des concentrations particulires de composs purs et a indiqu des effets fongistatique ou fongicide. Tableau 1. Fongiques et des algues Rsultats de la prslection d'inhibition d'extraits de H. brut sieversii des parties ariennes LCIC (ppm) d'un diamtre de zone d'inhibition (mm) b solventc O. perornata S. capricornutum C. acutatum C. fragariae C. gloeosporioides

une inhibition complte plus bas concentration.b moyenne dimensions des zones (mm) d'inhibition fongique produite par des extraits d'chantillons SD. Tous les extraits tests 80 pg. DZ, zone diffuse, indiquant l'absence de zone claire d'inhibition observ. Bnomyl, captane, le cyprodinil, et l'azoxystrobine a t positif controls.c PE, l'ther de ptrole; H/EtOAc/H2O = 54:44:2 hexane / actate d'thyle acetate/H2O. Essais biologiques Algicide. Les isolats de l'cyanobactries agardhii et O. perornata ont t obtenus partir d'chantillons d'eau prlevs dans les tangs de poisson-chat Mississippi (26). Une culture de la cyanobactrie sp Pseudanabaena. (Souche LW397) a t obtenu partir de George Izaguirre, Metropolitan Water District of Southern California, La Verne, CA. Un isolat de l'algue verte S. capricornutum a t obtenu auprs du Dr. JC Greene, des tatsUnis Environmental Protection Agency, Corvallis, OR, et S. capricornutum a t utilis en tant que reprsentant des algues vertes dans le bio-essai pour dterminer la toxicit slective de l'extrait et composs purs. Chaque culture a t maintenue sparment en continu, l'tat d'quilibre de croissance en utilisant les conditions dcrites dans Schrader et al. (27) pour fournir une source de cellules en croissance un taux relativement constant. Le bio-essai rapide de Schrader et al. (27) a t utilis pour valuer les extraits bruts de H. sieversii et le flindersine pur composs, eudesmin, et haplamine. Les solutions mres des extraits bruts et chaque compos pur ont t faite dans 100% de dichloromthane (qualit technique de qualit) 20,0, 200,0, 2000,0 et ppm pour l'extrait brut et de 2,0, 20,0, 200,0 et 2000.0 uM pour chaque compos pur. Les solutions mres de chaque matriau d'essai ont t micropipeted aux puits vides (10 pl / puits) d'un rutilisable microplaque de 96 puits de quartz (Cellules Hellma, Inc, Forest Hills, NY), et le dichloromthane a t autoris s'vaporer compltement avant d'ajouter en continu matriau chantillon de culture (200 pl / puits) de chacun des systmes de culture en continu (un seul organisme d'essai par puits). Contrles ne comprend pas tout matriel de test, la culture matrielle que (200 pl / puits). Concentrations traitement final pour les extraits bruts ont t de 1,0, 10,0 et 100,0 ppm, et des concentrations finales pour chaque compos pur taient de 0,1, 1,0, 10,0 et 100,0 uM. Trois rptitions ont t utiliss pour chaque concentration de l'extrait brut, compos pur, et le contrle. Des expriences ont t rptes. Microplaques ont t placs dans une chambre de croissance s'est tenue 29 1 C et ont t allume en permanence par les lumires fluorescentes (40 W, blanc froid) une densit de flux de photons de

21-27 uE m-2 s-1. Mesures d'absorbance de chaque puits a t mesure 650 nm 24 h d'intervalle pour 4 jours en utilisant un modle de Packard SpectraCount microplaque photomtre. Les valeurs moyennes et carts-types de mesures d'absorbance ont t calcules et reprsentes graphiquement afin de dterminer la concentration minimale avec effet observ (CMEO) et la plus faible concentration d'inhibition complte (LCIC). La concentration de 96 h 50% d'inhibition (96 h CI50) a t dtermine pour flindersine et haplamine pour O. perornata, Pseudanabaena sp. (LW397), et S. capricornutum en utilisant la mthode dcrite dans Schrader et al. (28). comprendre Figure 1 composs isols de H. sieversii. * Haut de la page o o Introduction o Mthodes et matriaux o Rsultats et discussion o L'information prise en charge disponible Rsultats et discussion Prliminaire de dpistage bioautographic d'extraits bruts de plantes indignes de la Rpublique du Kazakhstan contre C. fragariae, C. gloeosporioides et C. acutatum nous a incit tudier plus avant l'extrait hexane/EtOAc/H2O partir des parties ariennes de H. sieversii (Tableau 1 ). Cet extrait brut n'a pas montr de slectivit entre les trois espces de champignons, mais les grandes zones d'inhibition nous a incit tudier plus avant. Essais biologiques fractionnement guid de cet extrait en utilisant un mlange hexane / actate d'thyle gradient suggr que les fractions I et J contenait les composs responsables de l'activit de l'extrait dans son ensemble. Fraction I a t en outre purifi en utilisant un mlange hexane / actate d'thyle gradient fourniture d'un compos avec un ion HRESIMS de m / z 228.0989, qui a propos une formule molculaire de C14H13NO2 possible et donc 9 d'insaturation. D'inspection des donnes spectrales RMN 1H a rvl la prsence de quatre atomes d'hydrogne aromatiques ( 7,88 d, H-10; 7,47 t, H-8; 7,44 d, H-7 et 7.18 t, H-9), deux doublets olfiniques ( 6,80, H-4 et 5,56, H-3), et un six protons singulet ( 1,54, H-11 et H-12). 13C analyse a confirm la prsence

de 14 atomes de carbone. Un ou deux dimensions (HMBC et HSQC) enqutes RMN confirme la structure que celle de flindersine, et complter les donnes d'affectation RMN est rapport ici. RMN 1H de donnes est en accord complet avec celui rapport dans la littrature par Ahmad et al. (16), fournissant en outre la confirmation de sa structure que celle de flindersine (figure 1). comprendre Figure 2 Croissance inhibition / stimulation de gloesporioides C aprs 48 et 72 h en utilisant un format de microtitration de 96 puits dans une relation doserponse flindersine, haplamine, eudesmin, et anhydroevoxine et les fongicides commerciaux normes azoxystrobine, bnomyl, et le captane. Moyens de la croissance pour cent d'inhibition / stimulation ont t regroupes partir de deux expriences rptes dans le temps. comprendre Figure 3 inhibition de la croissance de P. obscurans aprs 120 h en utilisant un format de microtitration de 96 puits dans une relation dose-rponse flindersine, haplamine, eudesmin, et anhydroevoxine et les fongicides commerciaux normes azoxystrobine, bnomyl, et le captane. Moyens de inhibition de la croissance pour cent ont t regroupes partir de deux expriences rptes dans le temps. La purification supplmentaire de la fraction I en utilisant un gradient d'hexane / ther fourni un compos cristallin qui a un ion molculaire de HRESIMS m / z 387.1841 correspondant [M + H] +, suggrant une formule molculaire de C22H27O6 possible, et impliquant 10 d'insaturation. RMN 1H analyse a rvl la prsence de trois protons aromatiques, un singulet ( 6,91) et deux doublets ( 6,88 et 6,84), une mthine oxygne (4,76 ), un mthylne oxygn ( 4,26 et 3,90), une mthine aliphatiques ( 3,11), et deux groupes mthoxy dblinds ( 3,89 et 3,87). 13C analyse a rvl la prsence de seulement 11 atomes de carbone, exactement la moiti de la formule molculaire propose. Les informations ci-dessus nous ont amens souponner une molcule avec un plan de symtrie, et la structure a t confie (+)-eudesmin (Figure 1). 1H et 13C donnes RMN sont en accord complet avec les donnes rapportes prcdemment (19), et les donnes de rotation optique est en accord complet avec les donnes rapportes par Latip et al. (29). Purification de la fraction bioactive J par HPLC conduit l'isolement des deux composs purs. L'analyse du compos majeur de HRESIMS rvl un [M + H] + m / z 258,1133, ce qui suggre une formule possible molculaire

C15H15NO3 et neuf sites d'insaturation. L'analyse du spectre RMN 1H indique un singulet hautement dblinds 12.78, trois protons aromatiques ( 7.39, 7.23, et 7.11), deux doublets ( 6,80 olfiniques et 5,54), un groupe aromatique mthoxyle ( 3,86), et deux quivalents mthyles ( 1,54). 13C a rvl 14 atomes de carbone comme prvu parce que l'un de carbone correspondaient aux deux groupes mthyles quivalents. Une analyse plus pousse par DEPT, HMQC, et HMBC a confirm sans quivoque la structure que celle de haplamine (Figure 1). 1H et 13C des donnes RMN taient en accord complet avec celui rapport par Campbell et al. (17). Le second compos purifi de J fraction a abouti un ion forte m / z 330.1359, correspondant [M + H] + ion molculaire lorsqu'il est analys par HRESIMS. Une recherche d'ventuelles formules empiriques ont suggr C18H20NO5, ce qui implique que ce compos avait une formule empirique de C18H19NO5 et 10 sites d'insaturation. RMN 1H analyse spectrale a rvl la prsence de quatre protons aromatiques ( 7,98, 7,59, 7,25, et 7,04), les deux groupes aromatiques ( mthoxyles 4.43 et 4.13), les deux protons des groupes mthylnes ( dblinds 4,39 et 4,30), une mthine protons ( 3,25), et deux des groupes mthyle ( 1,39 et 1,36). Analyse de la RMN 13C, DEPT, HMQC, et HMBC donnes spectrales a confirm la structure que celle de anhydroevoxine (Figure 1). 13C donnes de RMN taient en accord complet avec celui rapport dans la littrature (18). Les rsultats de l'valuation des composs isols pour une activit antifongique sont fournis dans les figures 2 et 3 et dans l'information l'appui. Parmi les quatre composs tests, flindersine dmontr le plus haut niveau d'activit contre toutes les espces de champignons, l'exception de B. cinerea, o haplamine tait la plus active (voir l'information l'appui). P. obscurans semblait tre les espces les plus sensibles fongiques de ceux tests cet ensemble de composs (figure 3). Par exemple, plus de 80% d'inhibition a t observe pour la concentration 50,0 uM la fois 120 et 144 h. Les barres d'erreur importantes observes dans la figure 3 sont le rsultat de la germination des spores asynchrone qui se produit pour obscurans P. et est typique pour les essais de cet organisme. A noter galement la tendance gnrale de l'inhibition fongique diminu au fil du temps par les composs d'essai contre toutes les espces de champignons utiliss dans l'essai biologique. Par exemple, 150,0 flindersine uM dmontr une plus grande que l'inhibition de 65% 48 h contre C. gloeosporioides; cependant, 72 h, moins de 40% d'inhibition a t observe (figure 2). Cette diminution de la sensibilit aux produits chimiques au cours du

temps suggre que l'organisme d'essai peuvent avoir des systmes enzymatiques inductibles ou autres mcanismes de rsistance de contourner ces inhibiteurs de produit naturel (30). Il n'y avait pas de perte d'activit dans les trois commerciaux fongicides tests normes ces concentrations. Aucun des composs tests tait aussi actif que l'azoxystrobine positif contrles, bnomyl, ou captane. Deux extraits bruts provenant des parties ariennes de H. sieversii ont t trouvs pour tre slectivement toxique vers O. perornata par rapport S. capricornutum (tableau 1) et, par consquent, l'valuation des composs isols (eudesmin, flindersine, et haplamine) pour l'activit algicide a t mene. Haplamine a t juge la plus toxique des trois composs isols vers O. perornata avec un LCIC de 10 uM, alors que le LCIC de flindersine et eudesmin taient de 100 et plus de 100 uM, respectivement (tableau 2). En outre, haplamine tait slectivement toxique vers O. perornata lorsqu'on compare les rsultats LCIC avec les autres espces testes. Les CI50 24 h les rsultats outre, d'tablir la toxicit slective de haplamine vers O. perornata parce que la CI50 de 24 h haplamine pour O. perornata (1,8 uM) tait d'environ 9 infrieure la CI50 24 h pour S. capricornutum (15,9

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L'effet antibacterien de Nigella Sativa

par Nour Elyakin BOUDJEMAA et Hadjer BEN GUEGUA Universit Kasdi Merbah Ouargla - Diplme d'Etudes Suprieures en Biologie Option Microbiologie 2010 Dans la categorie: Biologie et Mdecine prcdent sommaire

Introduction Depuis longtemps l'homme reconnat et utilise les plantes pour se nourrir et pour traiter diverses

maladies. Aujourd'hui encore, la science confirme les diffrentes vertus des plantes aromatiques et de leurs huiles essentielles et leurs extraits bruts dont les domaines d'application sont trs varis et qui sont trs utiliss dans l'industrie alimentaire comme additifs, et dans les cosmtiques, les parfumeries, les industries de savon et de dtergents en volume impressionnant. Elles rentrent galement dans la composition de plusieurs mdicamentes, sous forme de crmes, glules et suppositoires. Leur utilisation s'appelle "l'aromathrapie", qui consiste utiliser les huiles essentielles pour le traitement de diverses manifestations pathologiques (YAHIAOUI, 2005). Au cours de ces dernires annes, plusieurs raisons ont men au rtablissement de l'usage des plantes mdicinales. Elles sont d'abord d'un cot infrieur aux mdicaments de synthse, aussi bien elles arrivent un moment o le publique est dsillusionn devant la mdecine moderne, laquelle en effet il n'a plus trouv remde tous les maux, en plus de se buter une rsistance accrue des agents pathognes et une panoplie d'effets secondaires lis l'usage des mdicaments traditionnels. Nigella sativa est l'une des plantes mdicinales les plus utilises travers le monde. Les extraits des graines de cette plante sont largement utiliss, dans la mdecine traditionnelle, depuis des sicles contre une multitude de maux, et notamment comme antidiabtique, antihypertenseur et anti-inflammatoire. Les tudes rcentes soulignent des proprits antimicrobiennes de ces grains. C'est dans ce sens que vons jug utile de contribuer l'tude des efficacits antibactriennes et antifongiques d'huiles essentielles, extraites brutes, les huiles fixes, les huiles commerciales obtenu par extraction de grain de Nigella sativa sur quelques germes pathognes tel que Escherichia coli, Pseudomonas aeroginosa, Staphylococcus aures et Candida albicans. L'extraction des huiles essentielles, des huiles fixes et des extraits bruts est ralis dans le laboratoire de l'Universit Kasdi Merbah Ouargla. Alors que le test de leur effet antimicrobien et antifongique sur quelques germes pathognes est ralis dans le laboratoire l'hpital Slimane Amirat Touggourt.

1- Les huiles essentielles 1 .1- Dfinition des huiles essentielles Les huiles essentielles sont des mlanges complexes de substances organiques aromatiques liquides qu'on trouvant naturellement dans diverses partie des vgtaux. Elles sont trs concentres, volatiles, non huileuses et sensibles la dcomposition sous l'effet de la chaleur. Actuellement, leur utilisation en parfumerie et en alimentation est considrablement ; c'est pour quoi certain organisme de normalisation AFNOUR NF et ISO ont donn une dfinition beaucoup plus prcise des huiles essentielles ; l'huile essentielle est un produit obtenu partir d'une hydrodistillation. L'huile essentielle est spare de la phase aqueuse par des procds physiques. Cette dfinition est restrictive elle d'une part les produits odorants d'origine animale, et d'autre part les essences obtenu selon d'autre procds d'extraction (HAMMOUDI, 2008). 1.2-Rpartition Les huiles essentielles peuvent tre stockes dans divers organe fleur (origan), feuills (citronnelle), corce (cannelier), bois (bios de rose), rhizomes (acore), fruits (badiane), ou grain carvi (DEGRYSE et al, 2008).

1.3- Activits biologique des huiles essentielles Les huiles essentielles possdent de nombreuses activits biologiques. En phytothrapie, elles sont utilises pour leurs proprits antiseptique contre les maladies infectieuses d'origine bactrienne, par exemple contre les bactries endocanalaires ou au niveau de la microflore vaginale et d'origine fongique contre les dermatophytes (HAMMOUDI, 2008). 1.4- Classification des huiles essentielles Selon le pouvoir spcifique sur les germes microbiens, et grce l'indice aromatique obtenu par des aromatogramme, les huiles essentielles sont classes en groupe : Les huiles majeures Les huiles mdiums Les huiles terrains (CHAKOU et BASSOU, 2007). 1.5- Composition chimiques des huiles essentielles Dans le cas des huiles essentielles : seuls seront rencontrs plus volatiles, c'est -dire ceux dont la niasse molculaire n'est pas trop leve : des microorganismes et sesquiterpnes. *- Les mono terpnes Sont des molcules a dix carbone et sont considre comme forme de deux units Le carbures monoterpiniques peuvent tre acyclique (Myrcne, Ocimne) monocyclique (a et y -terpne, para-cymre) ou bi cyclique (pinnes, camaphn) ils constituent parfois plus de 90%de l'huile essentielle (citrus, trbenthine).Plusieurs milliers des composes et sont classes selon la nature des fonctions qu'ils portent, comme (alcool,menthole),aldhyde (citronellal),ctone (carvon), ester (actate de citronellyl), ether, phnol et peroxyde. Les effets Stimulant du systme immunitaire Antalgique action percutanoe *- Les sesquiterpnes Les variations structurales au niveau de la feuille dans cette srie sont importants nous trouvent le mme groupement fonctionnels que dans le cas demonotrpens, savoir, carbures, alcools et ctron sont les plus frquents. Les effets Calmant Anti-inflammatoire

*- Composs aromatiques Les composs de cette srie, beaucoup moins frquent les mono terpnes et les sesquiterpnes Sont en majorit des drives du phenylpropane (C6-C3).Elles reprsentent un mlange de diffrent aldhyde, ctones, alcools, ester et autre elle confrant un gout et une odeur caractristique. Les effets Anti-infectieux Dermatoptique *- Composs d'origines diverses Il s'agit la produits rsultant de la transformation de molcules non volatiles gnralement de faible masse molculaire. Il en est de mme pour les huiles essentielles lorsqu'ils sont entrainables par la vapeur d'eau. De chaine linaire ou ramifie; satures ou non et portant diffrentes fonctions (CHAKOU et BASSOU, 2007). 1.6- les techniques d'extraction des huiles essentielles Le mode d'obtention d'huile essentielle et les transformations chimiques qui l'accompagnent. Il existe plusieurs mthodes d'extraction des huiles essentielles : L'expression froid L'expression par les solvants organiques L'expression par distillation la vapeur La plus part des huiles essentielles sont obtenus par l'entrainement la vapeur d'eau qui est applicable en gnrale tous les essences qui ne sont pas sensiblement altres par l'eau 100C. *- l'hydro distillation C'est le processus le plus rpandu car il convient la majorit des plantes : les vgtaux sont dposs sur une grille travers laquelle circule de la vapeur d'eau. Celle-ci entrane avec elle les molcules parfumes qu'elle enlve aux plantes. La solution obtenue circule dans un serpentin o elle se condense en refroidissant. L'huile essentielle tant plus lgre que l'eau, elle reste en surface. On obtient ainsi deux phase non miscibles que l'on peut sparer par dcantation : les huiles essentielles et les eaux aromatiques (ou hydrolats) charges des parties hydrosolubles des essences distilles (exemple : eau de fleur d'oranger, eau de rose, eau de lavande, ...) (DEGRYSE et al., 2008). 2- La plante Nigella sativaL 2.1- Gnralits

Des latines nigelles noirtres", la nigelle nous offre ses petites graines aromatiques Menes d'une noire intense communment connues sous le nom de cumin noire, black speed En anglais, Shabbat el baraka ou encore El habbah sauda dans les pays arabes, Sinoudj en Algrie. Nigella sativa L est une plante herbace appartenant la famille des Renonculaces. C'est une herbe originaire du moyen orient, de l'Europe centrale et de l'ouest de l'Asie, elle est maintenant cultive dans plusieurs rgions du monde surtout dans le bassin mditerranen et en Inde. Elle se dveloppe sur les terres semis arides au sein decommunauts naturelles ou prdominent les throphytes (Antuono et hamaza. 2002; Badary et al., 2003 in MEZITI, 2009)Traditionnellement utilise dans les pays arabes, dans le sous continent indien et en Europe depuis des millnaires des fins culinaires et mdicinales. C'est un remde naturel pour de nombreuses pathologies, notamment pour le traitement de l'asthme, de l'inflammation, de la toux, de l'eczma et des tats grippaux. La graine ou l'huile qui en est issue est employe comme diurtique, carminatif, cholagogue et vermifuge Leur popularit tait raisonne par la croyance idologique de pouvoir gurir plusieurs maladies. En fait, cette plante a occup une place spciale pour son grand spectre d'application mdicale dans la civilisation islamique, d au proverbe du Prophte Mohamed (salut et meriscorde soit sur lui); El habbah sauda est un mdicament pour toutes les maladies sauf la mort , ces paroles sont restes pour longtemps un mystre pour la science jusqu' l'arrive des techniques modernes qui ont russi prouver les vertus thrapeutiques des graines de cette plante (MEZITI, 2009). 2.2- N-sativa et l'histoire de son usage traditionnel La nigelle tient une place importante parmi les plantes mdicinales les plus utilises et ce, depuis plus que 2000 ans. Elle tait le Chanquit des anciens gyptiens. Elle est cite dans leurs papyrus comme un mdicament pour les maladies pulmonaires et la toux. Elle est aussi cite dans certaines livres sacrs ainsi que dans le trait des simples d'Hippocrate. Discorde, prconisait l'usage des graines de N. sativa contre les maux de tte, les affections des yeux, les maux des dents et les morsures d'araignes. Galien conseille de les brler pour tuer les moucherons et les moustiques et Tragus les employait comme antihelminthiques On crdite l'excellence des arabes en mdecine l'largissement du champ d'application de cette plante en thrapeutique. Les disciples du prophte Mohamed, tel qu'Ibn Atq, avait utilis les graines de N. sativa macres dans l'huile d'olive. On instille trois gouttes de cette huile dans chaque orifice nasal pour traiter la grippe qui s'accompagnait d'ternuements en salves Avicenne (Ibn Sina) conseillait de griller les graines et de les rduire en poudre. Cette prparation est mise dans une bourse en tissu qu'on fait inhaler quotidiennement pour dsobstruer les voies nasales, selon le mme principe qu'un vaporisateur Avicenne prconisait aussi la nigelle dans la dyspne et dans le traitement de l'asthme et les bronchites. Cette mme prparation, prise avec de l'eau bouillie, possde des actions diurtiques et dissolvantes des calculs rnaux D'autre part, la prise de l'huile de nigelle avec de l'huile de l'olive tait trs rpute comme aphrodisiaque. la nigelle on reconnat aussi des proprits emmnagogues, galactagogues, abortives, vermifuges, ettnicides. Les graines de N. sativa en poudre utilise en cataplasme avec du vinaigre aurait une action rsolutive dans les pustules et la gale surinfecte et aurait une action verrucide, si on lui ajoute de miel (Ibn Sina, 1972; Ibn Al-Qam, 1957). Enfin, les mdecins arabes connaissaient la toxicit de N. sativa forte dose. De ce fait, ils recommandaient de ne pas

Partie I Dpasser une dose unitaire d'un demi Dirhams (6,48 g) (Fig. 1) (BENHADDOU ANDALOUSSI

2.3- Aspect botanique de Nigella Nigella sativa est une plante annuelle herbac feuilles pennatisques, divises en lobes troits, elles sont lancoles linaires et des onglets nectarifres, les feuilles infrieures sont petites et ptalodes et les sont longues Les fleurs sont petites ptales blanchtres et spales ptalodes et prsentent de nombreuses tamines insres sur le rceptacle La plante est hermaphrodite reproduction autonome dont le fruit est une capsule forme de 3 6 carpelles souds entre eux jusqu' base des styles persistants Chaque capsule contient plusieurs graines triangulaires et maturit, elles s'ouvrent et l'exposition des graines l'air les rend noire, ses ovodes de 2 3.5 mm prsentent 3 4 angles avec une fa et rticule (Fig. 2) (MEZITI

Figure2. Aspect morphologique de la plante Nigella sativa (MEZITI, 2009) 2.4- Culture de la nigelle La culture de grain de Nigelle reutable dans La rgion normale ni dure, ni fragille condition qu'elle soit riche en matires alimentaires, le lieu le plus conseill pour sa culture c'est le sol sableux sable argileux, Sa culture rend une bonne rcolte dans Les pays tides humidit

leve, c'est rcolte d'hiver, les grains se sment dans la rgion permanant au mois d'octobre ou novembre, pour culturer un hectare besoin besoin de septe douze (kg) de grains (Fig.3) (MAHMOUDI, 2008).

Figure 3. Culture des Nigelles 2.4.1- Culture de Nigella sativa Nigella sativa est trouv dans beaucoup d'endroits, de la Mditerrane est au nord de linde. Il est couramment cultiv en Egypte, au Moyen-Orient (Arabie saoudite, en particulier), la Turquie, le Sri Lanka, Kenya, Soudan, Afghanistan, Europe et beaucoup plus d'endroits.

2.5- Place et distribution de N. sativa dans le monde

Nigella sativa est trouv dans beaucoup d'endroits, de la Mditerrane est au nord de l'Inde. Il est couramment cultiv en Egypte, au Moyen Orient (Arabie saoudite, en

particulier), la Turquie, le Sri Lanka, Kenya, Soudan, Afghanistan, Europe et beaucoup plus d'endroits (Fig. 4) (ZELMATI, 1990).

Figure4. Distribution de N. sativa 2.6- Composition chimique des graines de Nigella sativa En raison de leur large domaine d'usage mdicinal, les graines de Nigella sativa ont fait l'objet de plusieurs tudes photochimiques intensives dans le but d'identifier ses principes actifs. Ces tudes ont rvl que ces graines sont trs riches en plusieurs constituants tant de mtabolites secondaires que primaires, dont la teneur varie selon les conditions gographiques et climatiques, ainsi que les mthodes d'tudes (extraction et dtection). 2.6.1- L'huile fixe Reprsente 37,9- principalement de 39,2% du poids de la graine. Elle est constitue lipides neutres 96,1%- 97,2%, de lipides polaires 3% et de phospholipides 0,32-1,05%. L'analyse des phospholipides(PL) par chromatographie liquide haute performance (HPLC) a permis d'identifier principalement sept constituants; phosphatidyl choline (46% des PL), phosphatidylthanolamine (25%), phosphatidyl srine (12%), phosphatidylinositol (9,56%), lysophosphatidyl choline (4,23%), phosphatidyl glycrol (1,51%) et lysophosphatidylthanolamine (1,2%)). Une tude complmentaire sur les glycolipides de Nigella sativaa permis de sparer et d'identifier six composs dont le plus abondant est le digalactosyldiacyl glycrol qui forme 55,6% des glycolipides totaux. L'analyse phytochimiques de deux varits des graines Nigella sativa (provenant d'Iran et de Tunisie) montre que le principal acide gras insaturest l'acide linolique suivi par l'acide olique, alors que l'acide gras satur majoritaire estl'acide palmitique. La prsence d'autres acides gras ; myristoleique, palmitoleique,margarique, arachidique, eicosenoique, behnique, lignocrique t galement

dtecte. Ces rsultats correspondent bien avec ceux trouvs par Nickavar et ses collaborateurs (2003). Ultrieurement Cheikh-Rouhou et collaborateurs,(2008) ont mis en vidence la richesse de l'huile de la Nigelle en strols (17,41-42,66% de la matire insaponifiable), dont le sitostrol est le plus abondant (44-54%), suivi par les stigmastrols (16.57-20.92%), A7stigmasterol, A7-avenasterol et le cholestrol qui sont galement dtects mais des taux plus faibles (MAHMOUDI, 1986). 2.6.2- L'huile essentielle Reprsente entre 1,4-1,9% du poids de l'huile fixe et 0,18 0, 50% du poids des graines. L'analyse de cette huile par GC-MSralise par Burits et Bucar (2000) a permis d'identifier 32 composants, dont la majoritd'entre eux sont des monoterpnes ; la thymoquinone (27,8%57%), p-cymne (7,07-15,83%), carvacrol (5,8-11,6%), longifolne (1,2-8%), 4-terpinol (1,986,59%), et le tanethol (0,25-4,28%). Contrairement l'tude prcdente, Moretti et ses collaborateurs(2004) ont trouv que le composant majeur est le pcymene suivi du thymol alors que lathymoquinone prsente un taux faible. Rcemment, L'huile essentielle de Nigella sativa cultive au Sahara algrien (Timimoune et Adrar), extraite par deux mthodes diffrentes ; l'hydrodistillation et distillation par micro-onde a t analyse par CPG et GC-MS, 112composs ont t identifis et caractriss, le p-cymene reprsente toujours le compos le plus abondant suivi de la thymoquinone(MAHMOUDI, 1986). 2.6.3- Les alcalodes Les graines de Nigella sativa contiennent galement des alcalodes; nigellicine (AttaUr-Rahman et al.,1985a) et nigellidine, ayant un noyau indazol (Atta-Ur-Rahman et al. ,1995), l'isoquinonenigellimine(Atta-Ur-Rahman et al.,1992 in MEZITI, 2009) et son Noxyde(AttaUr-Rahman et al.,1985 in MEZITI, 2009), et les alcalodes diterpnesDollabllanetypesnigellamines A1, A2, B1, B2 (Morikawaetal., 2004a in MEZITI, 2009), A3, A4, A5, et C (MEZITI, 2009). 2.6.4- Les triterpnes saponines Dans une tude ralise par Kumara et Huat (2001) il at possible d'isoler et de caractriser partir des graines de Nigella sativa une saponosidetriterpnique doue de proprits antitumorales appele l'-hederine. Une tude ultrieuredeTaskin et collaborateurs (2005) a permis d'isoler partir de l'extrait mthanoliquetroisautressaponosides apparentes l' hederine, avec l'lucidation de leurs structures par desmthodes chimiques et spectrales ; 3-O-D-xyl (1-3)--L-rha- (1-2)--L-ara-28-O--L-rha(1-4)--D-glu(1-6)--D-gluhdragnine,3-O--L-rha-(1-2)-L-ara-28-O--Lrha(1-4)--D-glu(1-6)--D-gluhdragnine,3-O--D-xyl(1-3)--L-rha-(1-2)--L-arahdragnine (BEN HADOU ANDALOUSSI,2008). 2.6.5- Les flavonodes Trois flavonodes triglycosyls ont t isols partir des grains de Nigella sativa; la querctine3-glycosyl, (1?2), galactosyl, (1?2) glucoside, kmpfrol, 3-glycosyl, (1?2) galactosyl, (1?2) glucoside et querctine-3-(6-feruloglucosyl), (1?2) galactosyl, (1?2) glucoside (BENHADOU ANDALOUSSI, 2008).

2.6.6- Les protines Les graines de Nigella sativa sont trs riches en protines (environ16 %), avec dominance de l'acide glutamique (22,4%), d'acide aspartique (10,05%) et d'arginine (9,18%) (Al-Gaby, 1998 in MEZITI, 2009). Le fractionnement de ces derniers par SDSPAGEmontre des bandes de poids molculaire compris entre 10 et 94 KDa. Laprotine la plus tudie jusqu' maintenant est la lipase qui catalyse des ractions de transestrification (Tuteretal., 2003 in MEZITI, 2009). L'analyse des acides amins de l'hydrolysat de ces protines rvle la prsence de 17 acides amins y compris les 8 acides amins essentiels (MEZITI, 2009). 2.6.7- Les vitamines et les sels minraux La composition en vitamines a t dtermine et rvle la prsence des vitamines B1, B2, B6, PP et de l'acide folique, ont analys les vitamines liposolubles de Nigella sativa et ont pu identifier toutes les classes des tocophrols dans l'huile. Les tocophrols totaux constituent 0,05% de l'huile, et sont constitus majoritairement de l'-tocophrol (48%) et du -tocophrol (28%). Ces mmes chercheurs ont pu galement identifier d'autres vitamines liposolubles; la carotne (0,05%) et la vitamine K1 (0,1%). Dans une tude ultrieur, AlSaleh et son quipe (2006) ont affirm aprs analyse par HPLC que les teneurs en et tocophrols sont relativement leves: de 5, 65 11,39 et de 2,26 6,95 mg/kg respectivement alors que celle de all-trans-rtinol est trs faible de 0 0,54 mg /kg des grains. Des travaux sur la composition minrale de la graine de Nigella sativa ont rapport que sa teneur en potassium est importante (1.18 % de poids total de la graine) et que le calcium, le fer, le sodium reprsentent 0.188, 0. 0575 et 0. 0853 % respectivement (Nergiz et Otles, 1993 in MEZITI, 2009), la teneur des graines en slnium a t galement dtermine, elle reprsente 0,27-0,54 mg/kg des graines (Al-Saleh et al., 2006 in MEZITI, 2009). 3- Proprits 3.1- Proprits anti-oxydante 3.1.1- Systme de stress oxydant et de la toxicit Dommages oxydatifs des structures biologiques a t impliqus dans la toxicit induite par physiopathologie de plusieurs maladies, en particulier les maladies cardiovasculaires set le cancer. La cause de ces dommages oxydatif son t signal comme tant due la modification de l'quilibre de la pro-oxydantes (radicaux libres) et l'antioxydant (balayage) des mdiateurs, o les conditions pro-oxydantes dominent, soit en raison de la production accrue de la radicaux libres causs par le stress oxydatif excessif, ou en raison de la capacit de balayage pauvres dans le corps. Les radicaux libres de l'oxygne, y compris O2, OH, etN2O (collectivement connus comme le stress oxydant), sont lec -trically molcules charges qui s'attaquent aux cellules, aux dchirures travers les membranes cellulaires ragir et crer des ravages dans les acides nucliques, protines et enzymes prsents dans le Corp. Les attaques menes par ROS cause dommages la structure cellulaire et de la fonction et peut mme -tually les dtruire. ROS sont produites essentiellement par certaines cellules du systme immunitaire, y compris macro -phages (Mf) et de neutrophile. Elle a rcemment dclar que la suppression de la fonction de cellules immunitaires associes la

chimiothrapie, la radiothrapie, infection, et portant des tumeurs htes est mdie par la production de NO produit par les cellules immatures mylodes qui sont massivement gnr Dans ces conditions. Le rle central de ROS dans la mdiation de la pathologie dans plusieurs maladie sa stimul l'intrt pour le rle possible des ressources naturelles des agents anti oxydants dans la prvention du dveloppement de ces maladies. Il a t rapport que la sant promotion, de prvention des maladies et de rajeunissement ap-che base sur l'utilisation des plantes mdicinales dans d'Ayurveda, TUn T anciens systmes indiens, est due l'antioxydant effets de ces plantes. L'un des potentiels proprits des graines de N. sativa est la capacit d'une ou de plusieurs de ses mandants rduire la toxicit en raison de ses activits anti-oxydantes. Parmi les tudes qui ont t ralise pour valuer les diffrents effets de N. sativa, la majorit (plus de 35) des tudes ont limit rpondre ses proprits antitoxiques tant in vitro et in vivo (MEZITI, 2009). 3.2- Effets sur le systme immunitaire Les graines de Nigella sativa prsentent in vitro des proprits immunes potentialisatrices des lymphocytes T humains (EL-Kadi et a!, 1987MEZITI, 2009).Confirmes par (Haqet a!.,1995 in MEZITI, 2009), qui ont montr que les graines activent la scrtion d'IL-3 et augmente la production d' l'IL-1 par les lymphocytes T, ce qui indique un effet stimulateur sur les macrophages, soit direct ou via IL-1. Des tudes ultrieures conduites par les mmes auteurs (Haq et a!, 1995 in MEZITI, 2009) ont montr que les protines isoles de la graine entire sont responsable d'effet stimulant sur la production de cytokine (TNF-) ainsi que la prolifration des lymphocytes en culture. Salem et Hussain (2000) ont rapport que Nigella sativa stimule galement la production de l'INF- et la prolifration des macrophages et des lymphocytes T4 in vivo. Ces rsultats sont en concordance avec les travaux de Swamy et Tan. (2000), qui ont montr, qu'en prsence de doses optimales de mitognes, l'extrait d'actate d'thyle possde un effet cytotoxique trs important sur diffrentes cellules cancreuses qui est accompagn d'une potentialisation significative de la rponse immune, mais dont le mcanisme d'action n'est pas encore lucid. D'autre part, la plupart des sujets qui ont t traits par l'huile de Nigella sativa pendant quatre semaines ont montr une augmentation de 55% des cellules CD4 et CD8, et30% des cellules naturel killer (NK) (Salem, 2005 in MEZITI, 2009). Nigella sativa a t traditionnellement utilise dans le traitement des maladies allergiques. Cette action ne fait pas intervenir les cellules LTh1 et LTh2 en rponse un stimulus allergique (Bykztrketa!., 2005 in MEZITI, 2009). D'autres voies peuvent tre impliques comme l'inhibition de la libration d'histamine des mastocytes activs par diminution du taux du calcium intracellulaire et inhibition de la protine kinase C (Chakravarty, 1993 in MEZITI, 2009). 3.3- Effets anti inflammatoire Plusieurs auteurs ont tudi l'ventuelle activit analgsique et anti inflammatoire d'extraits ou de composs purs issus de Nigella sativa. (Khannaet a!., 1993in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008) ont montr quel' huile fixe de Nigella sativa possde une importante action anti nociceptive qui est d la prsence d'un principe opiode. Cette action est antagonise par la naloxone. Des tudes plus approfondies ont dmontr que l'action antinociceptive peut tre galement engendre par la thymoquinone aussi bien que l'huile fixe par activation indirecte des rcepteurs super spinaux jt et (Abdel-Fattahetal., 2000 ; Ali et

Blunden, 2003 in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008). (Ghannadiet al., 2005 in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008) ont montr que les polyphnols de Nigella sativa disposent des proprits anti-inflammatoires chez le rat et la souris dans le test de l'oedme de la pteinduit par le carragnane, et montre des proprits analgsiques dans le test de la fomalineet de l'acide actique. Le mcanisme par lequel l'huile fixe de Nigella sativa et la -thymoquinone exercent leurs effets anti-inflammatoires a t tudi, la thymoquinone s'estavre tre un puissant inhibiteur de la synthse des eicosanoides notamment lathromboxane B2 et leucotrine B4 par l'inhibition respective des cycloognase etlipoxygnase. Cependant, l'activit de l'huile fixe sur ces deux enzymes est plusimportante que la thymoquinoneelle mme ; l'activit anti-inflammatoire n'est pas doncentirementde la prsence de la thymoquinone ; des acides gras insaturs de type 0 :2semblent tre impliqus (Houghton et al., 1995 ; Gilanietal., 2004 in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008). 3.4- Activit anti-microbienne Les diffrents extraits des graines de Nigella sativa prsentent un large spectre d'inhibition vis-vis de nombreuses souches bactriennes. L'huile essentielle mme dilue 1%, la dithymoquinone ainsi que l'extrait mthanolique exercent une importante activit antimicrobienne sur des germes Gram positif et Gram ngatif, (Agrawal et al. ,1979 ; Aljabreetal., 2005 in MEZITI, 2009). L'huile de la Nigelle possde galement un pouvoir inhibiteur suprieur celui de la gentamicine sur une vingtaine de souches de Listeriamonocytogenes(Nair et al.,2005 in MEZITI, 2009). Diffrents extraits bruts issus de la graine ont t tests vis--vis de germes antibiorsistant (16 Gram ngatifs et 6 Gram positifs), les alcalodes totaux et le dcoct se sont rvls tre les extraits les plus actifs, notamment l'gard desbactries gramme positif (Morsi, 2000 in MEZITI, 2009). De mme, L'extrait mthanolique et hexanique possdent aussi un effet inhibiteur trs considrable sur Candida albicans, Staphylococcus aureus et Pseudomonas aeroginosa (Mashhadian et Rakhshandeh., 2005 in MEZITI, 2009). L'huile fixe prsente galement une excellente activit antifongique, notamment sur Aspergillus niger (Agrawal et al., 1979 in MEZITI,2009). Par ailleurs, l'extrait l'ther et la thymoquinone exercent une activit inhibitrice sur huit espces de dermatophytes (Aljabreetal., 2005 in MEZITI, 2009). En plus des activits antibactriennes et antifongiques, l'huile de Nigella sativa possde aussi un effet antiviral vis--vis de virus de l'herpe : cytomgalovirus murin (MCMV) (Salem, 2005 in MEZITI, 2009), des proprits anti-cestodales et anti-nmatiques comparables celles de la piprazine (antiparasitaire) (Agrawal et al., 1979 in MEZITI, 2009). 3.5- Effets anticancreux et antimutagne L'activit anti-tumorale des extraits ou de composs isols de Nigella sativa a t teste par plusieurs auteurs. L`extrait mthanoque brut prpar partir des graines de Nigella sativa prsente une importante action cytotoxique sur le carcinome ascitique d'Ehrlich et sur le lymphome ascitique de Dalton tout en exerant une cytotoxique minimale vis--vis des lymphocytes normaux (Musa et al., 2004 ; Ghedira, 2006 in MEZITI, 2009). L'extrait dcoct des graines de Nigella sativa exerce une forte activit cytotoxique sur lescellules hpatiques cancreuses, notamment sur la synthse d'ADN (Thabrewet al., 2005 in MEZITZI, 2009). Iddamaldeniya et ses collaborateurs 2003 ont montr que le traitement des souris atteintesd'un cancer hpatique initi par dithyl nitrosamine (DEN), avec le dcoct des

graines de Nigella sativa pendant 10 semaines, rduit significativement le nombre de cellules atteinte/cm2, ce qui indique que cet extrait a un effet protecteur contre ces cancers hpatiques induits par le DEN. Diffrents extraits de Nigella sativa; l'huile essentielle, l'extrait d'actate thyle et celui du butanol, ont t tests sur diffrents tissus cancreux (murine mastocytoma, kidneycarcinoma, sheepheartcarcinoma). L'huile essentielle amontr un effet cytotoxique le plus important sur les trois lignes cellulaires suivi de l'extrait d'actate thyle, alors que celui du butanol prsente un effet moindre (Ait-Mbareket al., 2007 in MEZITI, 2009). D'autre part, L'huile essentielle de Nigella sativaest capable d'inhiber lacarcinogense du colon au stade post initiation chez la souris traite par voie orale sans effets secondaires, cette inhibition est associe la suppression de la prolifration cellulaire dans la muqueuse du colon (Salim et Fukushima., 2003 in MEZITI, 2009). In vitro, lathymoquinone et la dithymoquinone sont trs cytotoxiques contre diffrentes lignes decellules tumorales humaines : adnocarcinome pancratique, sarcome utrine et laleucmie. Ils provoquent l'appoptose en bloquant le cycle cellulaire en phase G1, enaugmentant le temps d'expression de p53 et en inhibant la protine anti-appoptique Bcl-2en mme temps (Salem, 2005 in MEZITI, 2009). Les graines de Nigella sativa ou ses constituants prsentent une action prventive des cancers et/ou rductrice de la cytotoxicit des mdicaments santinoplasiques usuels. En effet, la thymoquinone exerce in vitroet in vivoun effetinhibiteur de la carcinogense de l'estomac et du fibrosarcome induit par 20 mthylcholanthrne chez la souris (Badaryet al., 1999 ; Badary et Gamal, 2001 in MEZITI, 2009). Parailleurs, Kumara et Huat (2001) ont montr que l'-hederine exerce d'importantes proprits antitumorales chez la souris prsentant un sarcome du poumon de Lewis ou laleucmie murine P388. De mme, l'huile des graines de Nigella sativ a rduit le potentielfibrinolytique des cellules tumorales li leur phnotype de malignit. Cette action conduit l'inhibition des invasions tumorales locales et de la mtastase (Awad, 2005 in MEZITI, 2009). 3.6- Effets sur le systme gastro-intestinal Les graines de Nigella sativa sont largement utilises dans la mdecine traditionnelle pour le traitement des dsordres gastro-intestinaux, L'extrait aqueux des graines rduit de36% l'indice d'ulcre induit par l'acide acetylsalicylique (aspirine) et diminue l'activit peptique et la production d'acide chez le rat (Ghedira, 2006 in MEZITI, 2009). Il a t dmontr que l'administration de L'huile fixe raison de 0.88g/kg/jours pendant deux semaines augmente la mucine gastrique et le contenu en glutathion et avec diminution du taux del'histamine, sans affecter l'acidit libre ni le suc gastrique (EI-Dakhakhnyet al., 2000 in MEZITI, 2009).Cette huile ainsi que la thymoquinone protgent contre les lsions gastriques, induites pale processus d'ischmie-rperfusion, grce leur pouvoir anti-radicalaire (El-Abhar et al., 2003 in MEZITI, 2009). L'extrait alcoolique des graines de Nigella sativa prsente galement une activit anti-ulcreuse qui a t attribue aux flavonodes qu'il contient (Rajkapoor et al. , 2002 in MEZITI, 2009). De mme, l'extrait mthanolique montre un effet spasmolytique ce qui confirme l'utilisation traditionnelle de la Nigelle dans le traitement des diarrhes (Gilanietal., 2004 in MEZITI, 2009). 3.7- Effets sur le systme respiratoire Les proprits anti-tussives et antiasthmatiques des graines de Nigella sativa sont bien reconnues depuis des sicles, faisant d'elle une des plantes les plus recommandes pour le

traitement des maladies respiratoire, cette activit de Nigella sativa a t tudie par un grand nombre de chercheurs. En 1993, El Tahir et al ont prouv que l'administration intraveineuse des huiles essentielles de Nigella sativa est responsable d'une augmentation dose dpendante du quotidien respiratoire et de la pression intra trachal chez le cobaye.Gilani et ses collaborateurs (2001) ont montr que l'extrait brut mthanolique des grains de Nigella sativa a un effet spasmolytique et broncho-dilatateur avec implication probable de bloqueurs des canaux calciques. Cette activit est concentre dans la fraction organique qui est dix fois suprieure celle de l'extrait brut. Le traitement des cobayes pralablement exposs des arosols de l'acide citrique par diffrents extraits de Nigella sativa (extrait aqueux, extrait macr et extrait dcoct) montre un effet antitussif trs important comparable celui de la codine (Boskabadyetal., 2004 in MEZITI, 2009). Les investigations d'autres chercheurs ont permis de prouver que le Nigellone (polythymoquinone) est un agentprotecteur efficace contre l'asthme et la bronchite, en inhibant efficacement la libration del'histamine (Gilanietal., 2004 in MEZITI, 2009). L'action des graines de Nigella sativa sur le systmerespiratoire est probablement la rsultante de plusieurs effets ; cholinergiques (BoskabadyetShahabi, 1997 in MEZITI, 2009), inhibition des rcepteurs H1 de l'histamine (BoskabadyetShiravi, 2000) et antagonisme du calcium (Gilanietal., 2001, Boskabady et Shirmohammadi, 2002 ; Boskabadyetal., 2004 in MEZITI, 2009). 3.8- Activit antidiabtique Les effets de Nigella sativa sur certaines complications du diabte exprimental induit Chez les animaux ont fait l'objet de nombreux travaux, (Al-Haderetal., 1993 in MEZITI, 2009) rapportent que l'huile essentielle de la graine administre par voie intra pritonale ( raison de 50mg/kg) abaisse de faon significative (de 15 23 %) la glycmie jeun chez les animauxnormo et hyper glycmiques. L'insulinmie n'ayant pas t affecte par les traitements.L'effet hypoglycmiant observ se manifeste selon un mcanisme non encore identifin'impliquant pas l'insuline (Hawsawietal., 2001 ; El-Dakhakhnyetal., 2002 inMEZITI, 2009). D'autres auteurs ont mis en vidence un effet hypoglycmiant via l'oxyde nitrique de la thymoquinone chez l'animal rendu diabtique par la streptozotocine (Elmahmoudyetal., 2005 in MEZITI, 2009). Le traitement des rats avec l'extrait de Nigella sativa seul ou combin avec les hormones thyrodiennes humaines a montr une augmentation de la production d'insulinepar les cellules du pancras (Altanetal., 2007 in MEZITI, 2009). Les travaux mens par (Houcher et al., 2007 in MEZITI, 2009) sont en concordance avec les tudes antrieures, ils ont montr que le traitement des rats diabtiques avec l'extrait brut et l'huile commerciale provoque une rduction importante de la glycmie de 58. 09 et 73. 27 %, respectivement. Le mcanisme d'action impliqu n'est pas reli l'inhibition de l'absorption intestinale du glucose ni la stimulation de l'insuline scrtion, mais il est probablement d l'inhibition des enzymes de la noglucogense hpatique (MEZITI, 2009). 3.9- Activits cardio-vasculaire de N. sativa En 1962 Mahfoud et collaborateurs ont confirm l'effet antihypertenseur en utilisant des huiles de graines de nigelle. D'autres chercheurs ont montr que les huiles volatiles des graines de N. sativa, administres par voie intraveineuse chez le rat normo tendu, pouvaient aussi induire une baisse de la pression artrielle (El-Tahiret coll., 1993 in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008). Selon ces chercheurs, l'effet hypotenseur observ serait d'origine crbrale via des mcanismes autant srotoninergiques que muscariniques. UN groupe marocain a dmontr que les huiles de N. sativa rduisent la tension artrielle chez le rat spontanment hypertendu. Cet

effet serait partiellement li l'activit diurtique des graines de N. sativa (Zaoui et coll., 2000 in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008). Les mmes effets ont t observs quand les huiles de N. sativa ont t remplaces par la thymoquinone, celle citant un important principe actif des huiles de N. sativa. La thymoquinone normalise notamment la pression artrielle chez le rat rendu hypertendu par dficience en NO (Khattab et Nagi, 2007 in BENHADOUANDALOUSSI, 2008).Par ailleurs, la nigelle et ses drivs possdent aussi des effets antispasmodiques quise manifestent par une inhibition des contractions spontanes et une baisse du tonus de la musculature lisse in vitro, qu'elle soit de nature vasculaire (Aqel, 1992), utrine(Aqel et Shaheen, 1996 in BENHADOUANDALOUSSI, 2008) ou intestinale (Aqel, 1993 in BENHADOU ANDALOUSSI,2008). Selon ces auteurs, cet effet antispasmodique serait probablement d une activit antagoniste au niveau des canaux calciques membranaires de type L. De mme, une tude a montr que les graines de N. un effet broncho-dilatateur engendr par unmcanisme d'antagonisme calcique (Gilani etcoll., 2001 in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008). Finalement, une tude japonaise a permis de dcouvrir que les huiles fixes de N. Sativa, ainsi que trois molcules pures isoles de ces huiles, possdent un effet inhibiteur sur la coagulation sanguine et l'agrgation plaquettaire comparable celui de l'aspirine (Enomoto et coll., 2001 in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008). 3.10- Activits hypocholestrolmiante et hypolipmiante de N. sativa Le groupe de Labhal ont montr que l'extrait aqueux des graines de N. sativa aurait une action hypocholestrolmiante et hypotriglycridmiante chez le rat dessables et que cette action serait accompagne d'une baisse de l'insulinmie (La bheletcoll, 1997 in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008). Ces effets ont t galement souligns par d'autres auteurs chez le rat diabtique (Al-Awadi et Shoukry, 1988; Eskander et coll., 1995). Chez le rat Wistar,la nigelle diminue significativement les valeurs de cholestrol et des triglycrides auniveau plasmatique (Zaoui et coll., 2002 in BENHADOU ANDALOUSSI,2008). Une tude biochimique a dmontr que les huiles fixes des graines de N. sativa pouvaient inhiber la production de leucotrine B-4 et de thromboxane B-2 au niveau des liposomes, une inhibition de la peroxydation des lipides et augmenter la permabilit membranaire des leucocytes en culture (Houghton et coll., 1994 in BENHADOUANDALOUSSI, 2008). 3.11- Action de N. sativa sur la masse pondrale En Afrique de nord, les graines de N. sativa sont traditionnellement Prconises dans le traitement de l'obsit et de l'hyperlipidmie qui l'accompagne Souvent. Cette action antiobsit a t confirme chez le rat des sables traitoralement par un extrait aqueux des graines de N. sativa (Labhel et coll., 1997 in MEZITI, 2009). Dans le mme sens, les huiles fixes de N. sativa permettent de diminuer le poids corporel partir de 6 semaines chez le rat Wistar (Zaoui et coll., 2002 in MEZITI, 2009). Ces rsultats Sont confirms par l'tude mene par Meddah et collaborateurs o un traitement de 6Semaines avec l'extrait aqueux des graines de nigelle a rduit la masse pondrale desrats Wistar(Meddah et coll., 2009 in MEZITI, 2009). 3.12- Activit de N. sativa sur la rponse immunitaire

Pour la premire fois en 1987, l'effet de N. sativa sur la rponse immunitaire a t valuchez des sujets humains volontaires. L'administration de capsules renfermant la poudre de N. sativa a entrain, aprs cinq semaines de traitement, une augmentation de la population lymphocytaire T helper (CD4) et a contribu l'amlioration du rapport cellules T helper/cellules T suppresseurs (CD4/CD8). Parailleurs, N. sativa augmente de 30% l'activit des cellules tueuses NK (El-Kadi etKandil, 1987 in MEZITI, 2009). Une autre tude a montr que l'extrait aqueux de N. sativa stimule la rponse lymphocytaire et la production des interleukine-3. N. sativa stimule aussi la libration des interleukines-1. Cela entrane une stimulation de l'activit phagocytaire des leucocytes polynuclaires et macrophages (Haq et coll ., 1995 in BENHADOU ANDALOUSSI, 2008). 3.13-Autres actions biologiques de N. sativa Plusieurs autres activits biologiques de N. sativa ont t rapportes dans la litt rature. La liste suivante en cite la majeure partie : Activit chronotrope ngative Activit anti-nmatodes Inhibition de plaque dentaire Inhibition de la formation de l'aflatoxine Activit analgsique, Activit hmostatique Activit neuroleptique Protection contre la fibrose et la cirrhose du foie, Protection contre l'ulcre Activit anti-oxydante En plus de son action hypoglycmiante, la nigelle possde d'autres proprits bnfiques sur la plupart des dsordres mtaboliques et anomalies associs au diabte de type II, notamment son action anti hypertensive, sa capacit contrler le poids corporel et son pouvoir de rgler l'hypercholestrolmie et hypertriglycridmie. On peut donc conclure que cette plante possde un potentiel thrapeutique prometteur (BENHADOU ANDALOUSSI, 2008). 4-Toxicit de N. sativa La toxicit de la nigelle est bien connue par la plupart des herboristes. En effet, n'est utilise qu' faible dose, que ce soit par la voie interne, externe, en fumigation ou en inhalation. Un surdosage des graines de N. sativa peut tre mortel. (J. Bellakhdar, 1978 in MEZITI, 2009) a rapport dans son ouvrage que le surdosage thrapeutique peut provoquer des d'avortements. Cette toxicit, comme celles de la plupart des espces de la famille des renonculaces, est due essentiellement la prsence de forte quantit de saponines et d'alcalodes dans les graines de nigelle. Mahfouz et collaborateurs en 1965, et ensuite Tenekoon et collaborateurs en 1991, ont tudi la toxicit des extraits aqueux et alcooliques de N. sativa. Les concentrations plasmatiques de -glutamyl transfrase (GGT) et

de l'alanine aminotransfrase(ALAT) ont t augmentes chez le rat aprs un traitement oral durant 14 jours; cependant aucune anomalie histologique n'a t observe chez ces rats (Tenekoon et coll., 1991 in MEZITI, 2009). Zaoui et collaborateurs ont rapport que les huiles fixes prsentent un DL50 de 28,8 ml/kg (po) et 2,06 ml/kg (IP). Dans le mme sens, la toxicitchronique de 2 mL/kg des huiles durant 12 semaines prsente des valeurs normales pour les ALAT, les GGT et l'aspartateaminotransfrase (ASAT) (Zaouiet coll., 2002 in MEZITI, 2009). La plupart de ces tudes montrent clairement que la nigelle possde un index thrapeutique lev et une excellente innocuit des doses infrieures 4 g/kg/Jour de N. sativa (MEZITI, 2009). 5-L'utiisation Voici maintenant quelques pathologies pour lesquelles le traitement la graine de nigelle a donn des rsultats concluants Ibn al-Qayyim affirme dans le chapitre La mdecine prophtique de son ouvrage Le bagage pour l'au-del : L'application de l'huile de nigelle en pansement limine les maux de tte non accompagns de fivre Prise d'une cuillre caf d'huile de nigelle jeun et ce, pendant trois jours. 5.1- Le rhume Un second mode d'emploi: appliquer l'huile de nigelle sur la partie douloureuse puis masser Un troisime: mlanger les graines de nigelle piles de l'huile d'olive et administrer par voie nasale quelques gouttes du produit rsultant (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.2- La migraine hmi-cphalique Prendre une petite quantit de graines de girofle piles, de la poudre de graines de nigelle et de l'orge pile, bien mlanger le tout et ptrir avec du miel d'abeille. Appliquer le mlange sur la partie souffrante le soir jusqu'au matin en accompagnant ce traitement d'une Si le patient met dans un bocal de la graine de nigelle pile qu'il sent rgulirement, il sera dlivr de son rhume . (Ibn al-Qayyim in Le bagage pour l'au-del ) Grille puis pill, enfin mlange de l'huile d'olive puis administre par voie nasale sous forme de gouttes, trois quatre fois par jour, le patient s'en trouve guri du rhume occasionnel accompagn d'ternuements nombreux (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.3- Le mal de dent, de la gencive, de l'aluette et de la gorge Ibn al-Qayyim dclare: Si la graine de nigelle est cuite avec du vinaigre et que le patient utilise la prparation dans des bains de bouche, le mal de dents du patient produit par la sensibilit au froid disparait alors . Autre prparation : Faire bouillir de la graine de nigelle et utiliser l'eau de la bouillie dans des bains de bouche et des gargarismes. taler de l'huile de nigelle sur le cou et des bords du maxillaire suprieur du ct des dents en prenant une cuillere d'huile de nigelle jeun tous les matins (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.4- Le vertige, l'otite et les troubles d'audition Contre les vertiges, il est conseill de masser les tempes et la nuque d'huile de nigelle. Contre

l'otite, il est conseill de mettre quelques gouttes d'huile de nigelle bien filtre dans l'oreille (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.5- Les maux de l'oeil Appliquer l'huile de nigelle sur le pourtour de l'oeil et mlanger quelques gouttes de cette huile n'importe quelle boisson chaude ou encore du jus de carottes et consommer le mlange (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.6- La dformation occasionnelle du facis Ibn al-Qayyim dclare : L'huile de nigelle remdie aussi aux dformations du menton (lorsque ce dernier a tendance pencher vers un ct du visage) par application et massage du nez (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.7- Dans le traitement de l'insomnie Prendre une cuillere d'huile de nigelle mlange du lait bien chaud sucr au miel d'abeilles (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.8- Dans le traitement des cphales Prendre une cuillere d'huile de nigelle mlange du jus de mres sauvages (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.9- Le traitement de l'essoufflement et de l'insuffisance respiratoire Ibn al-Qayyim dclare : La prise d'une quantit de graines de nigelles mlange de l'eau limine l'essoufflement et les troubles respiratoires (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.10- L'asthme Faire bouillir de l'huile de nigelle et respirer profondment la vapeur dgage matin et soir en y ajoutant une cuillere d'huile de nigelle broyer et avaler matin et soir galement, condition que cela soit fait en avant des repas. Il est tout aussi conseill de se masser la poitrine et le cou d'huile de nigelle avant de se coucher. II est gnralement conseill de consommer beaucoup d'huile de nigelle en raison de ce qu'elle renferme de la nigelle dont les proprits favorisant une bonne respiration sont connues dans le traitement de l'asthme et de la toux (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.11- Les problmes cardiaques et la tension artrielle Il est conseill de consommer de l'huile de nigelle en quantit avec n'importe quelle boisson chaude en raison de son absorption des matires grasses et de son pouvoir largir veines et artres (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.12- L'hypertension Ajouter quelques gouttes une quelconque boisson chaude et consommer (ENCYCLOPEDIE

DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.13- Les maladies pulmonaires dues au froid Prendre une grande cuillre d'huile de nigelle, mlanger de l'eau, mettre bullition, inspirer les vapeurs dgages en mettant une serviette de bain sur la tte; prendre paralllement de la tisane de thym mlange de la poudre de graine de nigelle o son huile (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.14- Les maux de l'estomac et des intestins Ibn al-Qayyim dclare: "la graine d'huile de nigelle amoindrit les maux de l'estomac (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.15- L'aigreur Quelques gouttes d'huile de nigelle mlange du lait bien chaud sucr au miel d'abeilles (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.16- Les ulcre Prendre une cuillere d'huile de nigelle, mlanger une tasse caf de miel d'abeilles, ajouter une cuillre de pelures de grenades douces, consommer le mlange quotidiennement jeun en le faisant suivre d'un verre de lait non sucr et ce, pendant deux mois(ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.17- Les crises intestinales Prendre des quantits gales d'anis, de cumin et de menthe, mlanger et faire bouillir, sucrer au miel et ajouter l'infusion une cuillre d'huile de nigelle. Consommer chaud. Il est souhaitable de masser l'endroit douloureux avec de l'huile de nigelle (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.18- Les maux du pancras Mettre une compresse de confis de graine de nigelle ptrie dans de l'huile d'olive rchauffe sur le ct gauche avant de dormir. Consommer en parallle un verre de tisane de fenugrec sucre au miel et ajoute d'une cuillre d'huile de nigelle et ce, pendant quinze jours (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.19- Les ballonnements et l'expulsion des gaz Ibn al-Qayyim dclare: la graine de nigelle limine les ballonnements, dgage les conduits obstrus et dissout les gaz (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). Mettre trois gouttes d'huile de nigelle dans une tasse de caf ou de th et consommer. 5.20- Les nauses et les vomissements Une cuillere de clou de girofle pile, une cuillere d'huile de nigelle, mlanges une tisane de

menthe trois jours durant (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). Autre procd: Faire bouillir de la graine de nigelle et du clou de girofle et consommer trois fois par jour sans sucrer (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.21- Les diarrhes Mlanger une cuillre soupe d'huile de nigelle un verre de yaourt et consommer. Ritrer le traitement jusqu' disparition de la diarrhe (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.22- Les problmes lis l'limination de l'urine, les rgles et l'activit mammaire Ibn al-Qayyim nous dit: "Pile, ptrie avec du miel et consomme avec de l'eau chaude, la graine de nigelle facilite l'limination de l'urine, des rgles et pallie les problmes de scrtion de lait si le mlange est consomm rgulirement. Autre faon: Masser la partie au dessus de la vessie avec de l'huile de nigelle en consommant en parallle de l'infusion de graine de nigelle sucre au miel chaque soir avant de dormir (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.23- L'insuffisance sexuelle Prendre 200 grammes de graines de nigelle bien piles, ajouter 100 grammes d'encens mle cras, 50 grammes d'huile de nigelle, 50 grammes d'huile de roquette 50 grammes d'huile d'olives, 200 grammes de miel d'abeille pur. Mlanger le tout et consommer une cuillre avec chaque repas. Le vieillard de 120 ans ressentira la vitalit d'un homme de 20 ans(ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.24- Les maux du dos et des articulations (le rhumatisme) Rchauffer lgrement de l'huile de nigelle et masser nergiquement l'endroit douloureux. Consommer aussi une cuillre d'huile de nigelle trois fois par jour (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.25- Le traitement des entorses et des contusions Faire bouillir une poigne de graines de nigelle, immerger le membre atteint dans l'eau de la bouillie pendant un quart d'heures en tachant d'articuler doucement le membre. Masser ensuite le membre d'huile de nigelle. Ne pas bander, ni agiter ni porter quoique ce soit et ce, avant de dormir (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.26- La rsorption des fractures Prendre une soupe de lentilles, de l'oignon et des oeufs durs. Consommer avec une cuillre bien remplie d'huile de nigelle. Masser d'huile de nigelle les emplacements proches de la fracture. Ds retrait du pltre, masser doucement l'huile de nigelle chauffe (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002).

5.27- La fragilit des os et le problme de la paralysie chez l'enfant Aprs retrait des vtements de l'enfant dans une salle chaude, lui piquer tout le corps d'pines de poisson aprs quoi masser l'huile de nigelle. Administrer trois fois par jour au malade une cuillre d'huile de poisson (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.28- La lutte contre la chute de cheveux Bien masser le cuir chevelu de citron, et laisser agir pendant un quart d'heure. Bien laver au shampoing puis bien scher. Appliquer ensuite de l'huile de nigelle sur tout le cuir chevelu pendant une semaine et la chute de cheveux disparatra totalement si Dieu le veut (ENCYCLOP2EDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.29- Le traitement de la calvitie totale et partielle Une cuillre de graine de nigelle pile, une tasse caf de vinaigre dilu, une cuillre caf de jus d'ail Mlanger le tout et appliquer sur la partie atteinte aprs limination des poils et grattage de la partie malade. Recouvrir d'une compresse et laisser agir du matin au soir. Masser alors d'huile de nigelle pendant une semaine (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.30- Le traitement de l'herps Appliquer de l'huile de nigelle sur la partie malade quotidiennement. Il est conseill de rpter l'opration plusieurs fois par jour (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.31- Le traitement des diverses manifestations de champignons dermiques Prendre un verre de graines de nigelle piles, un verre d'essence de pommes, un verre d'huile de nigelle. Faire bouillir l'essence de pomme puis verser successivement la graine de nigelle pile puis l'huile. Remuer jusqu' paississement. Appliquer sur la partie malade pendant une semaine (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.32- Le traitement des verrues Masser l'huile de nigelle pendant quinze jours en s'appliquant prendre une cuillere d'huile de nigelle trois fois par jour (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.33- Le traitement de la dpigmentation de la peau et des crotes Ibn al-Qayyim dclare: "Pile et mlange du vinaigre puis tale sur les parties atteintes de dpigmentation ou de crotes ou de pellicules, la graine de nigelle radique le mal (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.34- L'limination de l'acn juvnile

Ajouter un verre de graines de nigelle un demi-verre d'pluchures de grenades. Malaxer le tout avec un verre d'essence de pomme. Rchauffer temprature supportable et mlanger une mme quantit d'huile de nigelle. Appliquer sur les boutons et les tubrosits (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.35- Traitement des maladies dermiques en gnral Prparer un mlange d'huile de nigelle, d'essence de rose et de farine de bl aux proportions respectivement. Nettoyer l'endroit malade par un coton imbib de vinaigre dilu, taler la prparation et exposer l'endroit malade au soleil de bon matin. Il est conseill d'viter les nourritures entranant des effets allergiques: oeufs, poissons, mangue etc (ENCYCLOP2DIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.36- Traitement de l'eczma Appliquer de l'huile de nigelle tide sur les parties irrites (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.37- Traitement des tats dpressifs Ajouter cinq gouttes d'huile de nigelle une tasse de caf ou de th (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.38- Traitement du cancer localis Masser trois fois par jour l'emplacement de la tumeur et prendre aprs chaque repas, pendant trois mois, un verre de jus de carottes mlang une cuillre d'huile de nigelle (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.39- Traitement du diabte Un verre de graines de nigelle piles mlang une cuillre de myrrhe finement moulu, un demi-verre de graines de cardamine, un verre de pelures de grenades crases, un verre de semences de choux crases, une cuillre de frule mlange de l'huile de nigelle ; consommer jeun (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.40- Traitement des problmes gyncologiques et obsttriques Prendre une cuillere d'huile de nigelle et mlanger une infusion d'anis sucre au miel, cinq fois par jour pendant quarante jours. Il est conseill d'utiliser l'huile de nigelle avec toutes boissons chaudes contre les maladies obsttriques (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.41- Traitement de la mauvaise mine Mlanger une cuillre d'huile de nigelle et une cuillre d'huile d'olive, masser le visage de ce mlange et laisser agir pendant une heure. Laver le visage l'eau et au savon (ENCYCLOPEDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002).

5.42- Dveloppement de l'intelligence et amlioration de la mmoire Mettre une cuillere d'huile de nigelle dans une tisane de menthe sucre au miel naturel. Consommer chaud (ENCYCLOP2 EDIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 5.43- Traitement des tats de fatigue gnrale Prendre quotidiennement et jeun un verre de jus d'orange mlang une cuillre moyenne d'huile de nigelle pendant dix jours (ENCYCLODIE DES PLANTES MEDICINALES, 2002). 6- Toxicit de N. sativa La toxicit de la nigelle est bien connue par la plupart des herboristes. En effet, elle n'est utilise qu' faible dose, que ce soit par la voie interne, externe, en fumigation ou en inhalation. Un surdosage des graines de N. sativa peut tre mortel. (J. Bellakhdar, 1978 in MEZITI, 2009) a rapport dans son ouvrage que le surdosage thrapeutique peut provoquer des d'avortements. Cette toxicit, comme celles de la plupart des espces de la famille des renonculaces, est due essentiellement la prsence de forte quantit de saponines et d'alcalodes dans les graines de nigelle. Mahfouz et collaborateurs en 1965, et ensuite Tenekoon et collaborateurs en 1991, ont tudi la toxicit des extraits aqueux et alcooliques de N. sativa. Les concentrations plasmatiques de -glutamyl transfrase (GGT) et de l'alanine aminotransfrase(ALAT) ont t augmentes chez le rat aprs un traitement oral durant 14 jours;cependant aucune anomalie histologique n'a t observe chez ces rats (Tenekoonetcoll., 1991 in MEZITI,2009). Zaoui et collaborateurs ont rapport que les huiles fixes prsentent un53DL50 de 28,8 mL/kg (po) et 2,06 ml/kg (ip). Dans le mme sens, la toxicit chronique de 2 ml/kg des huiles durant 12 semaines prsente des valeurs normalespour les ALAT, les GGT et l'aspartateaminotransfrase (ASAT) (Zaoui et coll., 2002 in MEZITI, 2009). La plupart de ces tudes montrent clairement que la nigelle possde un index thrapeutique lev et une excellente innocuit des doses infrieures 4 g/kg/jour de N. sativa (MEZITI, 2009). 7- Activit antibactrienne 7.1- L'aromatogramme Est la phytothrapie ce que l'antibiogramme dcrit par la pharmacope franaise des antibiotiques est la mdecine .Cette transposition due au Dr M GIRAUT ds 1971, est dcrit dans le tome3du trait de phytothrapie et d'aromathrapie. L'aromatogramme est base sur une technique utilise en bactriologie mdicale, appel antibiogramme ou mthode par diffusion en milieu glos ou encore mthode des disques .cette mthode a l'avantage d'tre d'une grand souplesse dans le choix des antibiotiques tests, de s'appliquer un grand nombre d'espces bactriennes, et d'avoir t largement value par 50 ans d'utilisation mondiale, il s'agit d'une mthode en milieu glos l'agar 1 ralise dans boite de ptri. Le contact se fait par l'intermdiaire d'un disque de papier sur lequel on dispose une quantit d'extrait (Fig. 5) (DEGRYSE et al., 2008).

Figure 5. Schma illustrant la mthode des aromatogrammes 7.2- Microatmosphres Cette technique permet de mettre en vidence la diffusion des composants volatiles des huiles essentielles l'intrieur d'une bote de Ptri. La technique consiste disposer le disque imbib d'une quantit dtermine d'huile essentielle au milieu du couvercle de la bote de Ptri. La bote est ferme avec le couvercle en bas (ce qui empche le disque de tomber sur la glose) et mise l'tuve 37 pendant 12 18 heures. A la sortie de l'tuve, l'absence de la croissance microbiennes traduit par une zone translucide sur la glose de contour plus ou moins nette, tendance circulaire lorsque le disque est bien centr. Les rsultats se lisent avec un pie d' coulisse et s'expriment par un diamtre moyen en cm, ou mm. Le tmoin ralis pour chaque exprience est une boite ensemence dont le disque dpos sur le couvercle n'est pas imbib d'huile essentielle. La bote de contrle est une boite de Ptri ensemence dans les conditions de l'exprience. Elle nous renseigne sur l'homognit du tapis bactrie (Fig. 6) (DEGRYSE et al., 2008).

Figure 6. Schma illustrant la mthode des microatmosphres

1- Matriels et mthodes 1.1- Matriels Biologique L'tude a port sur des huiles essentielles ,extrait brut ,les huiles fixes des graines de Nigella sativa, cette grain achete en pharmacie d'erbes mdicinales dans un sachet de plastique normale ferme avec huile commerciale pour l'tude comparative , aprs sa en extrait les huiles essentielles ,extrait brut et les huiles fixes dans laboratoire de l'universit Kasdi Merbah Ouargla. 1.2- Techniques d'extraction des huiles de N. sativa (articles de kacem) L'extraction des huiles essentielles des graines de Nigella sativa est effectue selon le protocole dcrit par (kacem et Meraihi, 2006) avec quelques modifications (On peut faire l'extraction de l'huile essentielle directement partir des graines broyes ou indirectement partir de l'huile fixe commerciale obtenue par expression des graines froid) Mettre les gaines ou l'huile fixe + l'eau distille dans le ballon Raliser le montage de l'hydro distillation (Fig. 7).

 Faire circuler l'eau froide dans le rfrigrant eau, puis, l'aide du chauffe-ballon, porter le mlange bullition la fin de l'hydro distillation, Placer la totalit du distillat recueilli dans une ampoule dcanter et, sous la hotte, ajouter l'ether dithylique, agiter et laisser reposer. Aprs dcantation rcupr la phase organique suprieure contenant les huiles essentielles enlever toute trace d'eau de la phase organique par filtration sur Bchner contenant le sulfate de sodium anhydre vaporer le solvant (l'ether dithylique) l'vaporateur rotatif avec un ballon Pralablement tar. peser le produit obtenu afin de pouvoir dterminer ultrieurement le rendement.

Figure 7. Montage d'extraction par hydrodistillation. 1. 3- Macration l'actone L'extraction par macration est une extraction froid. C'est un simple contact entre le support solide et le solvant, la sparation se fait par filtration .Elle consiste prendre 50 g de grains (poudre) on les macrs dans 300 ml d'actone pendant 24 heures (figure) .La filtration est ensuite effectue sous vide l'aide d'une fiole vide et entonnoir le filtrat recueilli est soumis une vaporation sous vide dans rotor vapeur muni d'une pompe vide pour liminer l'actone. Le mlange constitue donc le produit tester (Fig. 8) (AISSAOUI et MAAMRI, 2009). Matire vgtal Grains de nigelles en poudre Macration l'actone24h

Filtration Filtration sous vide Evaporation sous vide Extrait brut de N.sativa

Figure 8. Diffrentes tapes d'extraction par macration de Nigella sativa

Figure 9. Extraction par macration vapeur Figure 10. Evaporation sous vide par rotor 1.4- Extraction des huiles fixes L'extraction des huiles fixes par macration est une extraction froid. C'est un simple contact entre le support solide et solvant, la sparation se fait par filtration .Elle consiste prendre 10 jusqu' 20 g de grains broys, on les macrs dans 30 ml d'actone pendant 24heures.A l'aide d'un entonnoir on fait la filtration ensuite mettes la mlange la conglation 24 H aprs la conglation on observe une couche blanchtre en dessous de la mlange faire conservation de cette couche et liminer l'actone (Fig. 11)(AISSAOUI et MAAMRI, 2009).

Figure 11. Extraction des huiles fixes 1.5- Matriels de laboratoire Tableau 1. Les matrielles et les produits utiliss dans laboratoire Matriels Autoclave, Bain marie, Balance lectrique, Etuve Microscope optique, Rfrigrateur, Ances de platine Boite de Ptri, Spatules, Ballon, Becher, Fiole, Lame Lamelles, Pipettes gradues, Chauffe-ballon, Ampoule , Mortier, Papier filtre,Agitateur magntique. Produits Agar, Alcool, Amidon, Eau distille, Indole, Lugol, ther Dithylique, Sulfate de sodium anhydre 1.6- Les micro-organismes tests Les souches microbiennes testes ont t fournies par le laboratoire d'tablissement Slimane Amirat, Touggourt,Il s'agit d'isol cliniques responsable d'infections nosocomiales. Ainsi nous avons retenu les espces suivantes cites dans le tableau : Tableau 2. Les souches microbiennes utilises Bactries E-coli Staphylococcus aureus Pseudomonas aeroginosa Levure Candida albicans

1.6.1- Bacille gram ngatif 1.6.1.1- Pseudomonas aeroginosa *- Habita C'est une bactrie rependue dans la nature. Il vit dans l'eau et sur le sol, on le trouve aussi dans l'environnement hospitalier, surtout dans les endroits humides de lavabos, savons liquides, humidificateur, solution d'antiseptiques (chlorhexidine chlorure de benzelkonium, ctrimide notamment).Pseudomonas aeruginosa se trouve dans le tube digestif et plus rarement dans la saline (FAUCHEREet AVRIL, 2002). *- Caractres principaux Bacille gram ngatif, mobile ciliature polaire monotriche, caractris par la pigmentation bleu,vert, sporule, temprature optimale: 30 43C, pH optimal 6,5-8, arobie strict,chimioorganotrophe, oxydas+, catalase+, gaz-, LDC-, ODC-, ADH+, gatuie+, psychrotrophe(FAUCHEREet AVRIL,2002). *- Pouvoir pathogne La bactrie peut provoquer des infections parfois svres chez les sujets dont les dfenses sont amoindries .Elle peut provoquer des infections urinaires, bronchiques (Auciel etVild, 2005 in DELLARS, 2007). Responsable d'infections cutanes, (imptigo, furoncles ), d'infection de la sphre ORL (sinusites, otites...) et d'infection divers (DELLARS, 2007). *- Sensibilit aux antibiotiques Pseudomonas aeroginosa est une bactrie gnralement multi rsistante, les antibiotiques pouvant avoir une bonne activit sont: la ticarcilline, la pipracilline, l'azolocilline, la ceftazidime, la cefuslodime, le cefpime, l'imipenme et les aminosides. Les souches rsistantes la colistine sont trs rares. La ciprofloxacine est la plus active des quinolones.L'activit de tous ces antibiotiques n'est pas rgulire et doit toujours tre prcise par antibiogramme (Fig. 12) (FAUCHERE et AVRIL, 2002).

Figure 12. Pseudomonas Aeroginosa sur glose de Ctrimide 1.6.1.2- Escherichia coli (colibacille)

Bacille gram ngatif apparentant la famille des Entrobactrie .E coli se dveloppe sur glose ordinaire. Indole+, ure-fermente le lactose, gazogne, mais ne produit pas d'actine(Fig.13). *- Habitat E. coli est une hte normal du tube digestif de l'homme et des animaux. Chez l'homme, il est prsent raison de 1010 bactries /g de selles, densit cependant trs infrieure celle des anarobies qui constituent la flore dominante. La prsence d'E. coli dans l'environnement est le tmoin d'une contamination fcale (LAMARAT et YKRELEF, 2009). Pouvoir pathogne. *- Infection urinaire Plus frquent chez la femme en raison de la brivet, chez l'homme l'infection est gnralement secondaire un obstacle sur les voies urinaires. *- Infection intestinal Responsable de gastro-entrites. *- Infection nonatale Peut se traduire par une mningite ou une septicmie. *- Infection diverses Escherichia coli est impliqu dans de nombreuses infections point de dpart digestif ou urinaire, suppuration localises, il peut s'agir d'infections communautaires Ou nosocomiales. *- Sensibilit aux antibiotiques La bactrie tait initialement sensible beaucoup d'antibiotiques, mais l'acquisition de rsistance est frquente, surtout en milieu hospitalier (Nauciel et vild, 2005 in FAUCHERE et AVRIL, 2002). Cependant la rsistance aux amino et aux carboxipnicillines par production de pnicillinase dfasse 40 des souches, une partie de ces souches rsistent l'association amoxicilline-acide clavulainiquepour les autres antibiotiques, les frquences de rsistance, sont faible l'exception des sulfa- mides (50%), et ttracyclines (40 %) et du chloromphimcol (25%) (FAUCHERE et AVRIL, 2002).

Figure 13.Echirichia coli sur Hecktoen 1.6.2- Cocci Gram positif 1.6.2.1- Staphylococcus aureus *- Habitat C'est un germe ubiquitaire, retrouv dans le sol, l'air. C'est un commensal de la peau et des muqueuses de l'homme. On le trouve l'tat normal dans l'oropharynx, les fosses nasales, dans les selles au niveau du Prine ou des aisselles (Fig. 14)(FAUCHERE et AVRIL, 2002). *- Caractres principaux Cocci gram positif, immobile, pigment jaune, non sporul en amas (grappes de raisin), G+C: 30-39%, temprature optimal 37C, PH optimal: 7.2-7.4, NaCl: 7.5%, Anarobie facultatif, oxydase+, catalase+ (FAUCHERZ et AVRIL, 2002; NUCIEL et VILDE, 2005; DELLARRAS, 2007). *- Pouvoir pathogne Les manifestations dues Staphylococcus aureus sont trs nombreuses, elles sont suppurations, ncrotiques ou entriques: -les suppurations localises. - Les manifestations digestives. -le syndrome de choc toxique (FAUCHERE et AVRIL, 2002). *-Sensibilit aux antibiotiques: Les souches communautaires sont gnralement rsistantes aux pnicillines G et A, mais sensibles aux pnicillines M. Elles sont souvent sensibles aux macrolides, aux synergistines, aux fluoroquinolones(FAUCHERE et AVRIL, 2002).

Figure 14.Staphylococcus aureus sur Chapman 1.6.3- Candida albicans C'est un organisme vivant l'tat normal de la bouche, le vagin et le tube digestif de l'tre humain (TONY et PAUL, 1997). *- Caractres principaux Candida albicas est l'espce de levure la plus connue .Au laboratoire mdical, la culture en boite ptri donne des colonies qui sont grandes, rondes, de couleur blanche ou crme, elles poussent bien sur milieu de sabouraud ou sur glose au sang (Fig.15) (CHAKON et BASSOU, 2005). *- Pouvoir pathogne *- Candidose Le principal agent pathogne est Candida albicans responsable d'infections superficielles aussi bien que systmiques .Ces dernires ne sont souvent que chez des individus immunodprims .Il fait partie de la flore normale de l'intestin ,les infections superficielles comprennent le muguet (sur la muqueuse buccale), des vulvo-vaginites .La pathognisit de Candida albicans est lie la phase de filamenteuse. Cette levure peut provoquer des infections du vagin, de la bouche ou des poumons. *-Sensibilit aux antibiotiques Candida pathogne sont devenues rsistantes tous les antifongiques actuellement utiliss.

Figure 15.Candida albicans 1.7- Etude de pouvoir antimicrobienne l'huile de Nigella sativa La mthode valuation du pouvoir antimicrobienne des huiles essentielles, extrait brut, huile fixe et huile commerciale de Nigella sativa. 1.7.1- Evaluation de pouvoir antibactrien Pour dtermine la sensibilit des souches.

1.7.2- Mthode de diffusion sur glose 1.7.3- Technique des disques La technique de diffusion sur milieu glose, consiste mettre sur des milieux des cultures spcifiques des agents microbien contact de substance naturelle ou chimique dans le but d'apprcier leur effet antiseptique. *- Prparation de milieu de culture (Muller Hinton) pour le teste biologique Infusion de viande de boeuf 3, 00g Hydrolysate de casine 17,5g Amidon 01, 5g Agar 17, 0g Eau distill qsp1L PH=7,4 *- prparation de l'inoculum On prlave l'aide d'anse de platine deux trois colonies pures et bien isoles qu'on dcharge dans un tube contenant 5 ml d'eau physiologie strile. *- Ensemencement Sur des boites contenant le milieu glos MH sur une paisseur de 4mm bien sches, On introduit 3 5 ml de l'inoculum. On obtient ainsi, un talement uniforme en nappe. L'excs du liquide est aspir l'aide d'une pipette pasteur et rejet dans un bac d'eau de javel et les boites sont mises scher pendant 15 minutes. *- Application des disques On dpose dans chaque boite des disques striles imprgns par l'huile essentielle, extrait brut, huile fixe et huile commerciale de Nigella sativa. *- L'incubation Les boites sont incubes 18 24 37C. *- Lecteur Elle consiste mesurer avec prcision les diamtres des zones d'inhibition l'aide d'une rgle l'extrieure de la boite.

2- Rsultat et discussion 2.1- Rsultats 2.1.1- Examen organoleptique Les caractres organoleptiques de l'huile essentielle, de l'extrait brut, de l'l'huile fixe et de l'l'huile commerciale de la Nigella sativa obtenu par l'hydrodistillation et macration froid par l'actone sont reprsents dans le tableau 3 : Tableau 3.Proprits organoleptiques de l'EB, HC, HF et HC Origine Caractre organoleptique Aspect EB HF HC HE Liquide, mobile Incouleur Couleur Odeur Pas odeur Donnt une forte odeur rappelant l'odeur des grains Donnt une forte odeur rappelant l'odeur des grains Dgagement d'une forte odeur rappelant l'odeur des grains Liquide, mobile Vert jauntre Liquide, mobile Liquide, mobile Vert Marron

2.1.2- Etude de l'effet inhibiteur d'HE, EB, HF et HC Cette tude est base sur la mesure du diamtre des halos d'inhibition des l'extraits obtenus. Les rsultats du pouvoir antimicrobien de : EB, HF, HE et HC de Nigella sativa sur les souches tudies sont reprsents dans le tableau 4. Tableau 4. Activit antibactrienne et antifongique des extraits : HE, EB, HF et HC. Les chiffres indiquent les diamtres d'inhibition par mm. Souches E .coli Pseudomonas aeroginosa Staphylococcus aureus Candida albicans Gram + EB HF HC HE ANT 24mm 28mm

21mm 22mm 12mm 0 26mm 20mm 17mm 11mm 0 23mm 21mm 13mm 0

Levure 18mm 11mm

E. coli est sensible l'HF, EB et HC avec des degrs diffrents, le HF est le plus efficace suivi de EB, en fin, l'HC est le moins efficace. Les rsultats sont compars avec l'antibiotique

(Fosfomycin) comme tmoin positif (Fig. 17) Pseudomonas aeroginosa est sensible respectivement EB, HF et HC avec des degrs diffrents. Les rsultats sont compars avec l'antibiotique (Amikacin) comme tmoin positif(Fig.19) Staphylococcus aureus respectivement EB, HF et HC avec des degrs diffrents. Les rsultats sont compars avec l'antibiotique (cefoxitine) comme tmoin positif(Fig.16) Candida albicans est faiblement sensible l'EB et l'HF, elle est rsiste l'HC (Fig.18). L'extrait EB est plus efficace sur Staphylococcus aureus que les autres. L'extrait HF est plus efficace sur E.coli que les autres. L'extrait HC est plus efficace sur Staphylococcus aureus que les autres. Le Candida albicans est insensible au HC

Figure 16. Aromatogramme E .coli HC

HF EB

Figure 20. Reprsentation graphique des diamtres des zones d'inhibition Nigella sativa (en mm) de la sur les diffrentes souches testes 2.2- Discussion Nous avons extrait des traces des huiles essentielles la difficult de trouver d'une quantit suffisante des huiles essentielles peut s'expliquer par des raisons suivantes : l'origine de , la nature du sol, le temps de la rcolte, l'espce, la rgion de la culture la dure de schage, le mode et la dure d' extraction des huiles essentielles et par manque des appareillages et montages comme le C levengere ? En fait il a t montr (Kacem et Mraihi, 2006) que le rendement de l'huile essentielle dans les nouveaux grains schs au bout de huit heure est plus lev (0,4 ml par minute) et par 50 grammes. Alors que nous avons travaill sur des

grains secs. Ce type de l'huile volatile peut tre perdu en fonction de temps de stockage. Les rsultats de l' tude montre que tous les souches testes sont sensibles l'action inhibitrice de l' huile fixe, extrait brut et huile commerciale de la Nigella sativa, ce 'action antimicrobienne et antifongique qu'illustrent leurs larges spectres d . On peut expliquer c ette activit antimicrobienne leve de l' extrait brut par sa composition contenant certaines molcules telles que ; les flavonodes, les tritrpnes saponines et les alcalodes . Il semble que cette composition est la composition d'excellente . pour cette fonction antimicrobienne Activit antimicrobienne d'huile fixe et huile commerciale pour leur composition extrait brut et huile fixe faire d'excellent antimicrobienne et fongicide. L'huile commerciale moyenne antimicrobienne et fongicide puisque leur composition contenu des additifs mentionns la boite d'emballage (graine de bndiction ou noire, graine olagineuse, elle contient la matire nigellone et autre matires mtallique comme caprylique, phosphate, fer et calcium, aussi des matires digestique, carbohydrolique, protenes et vitamines rtinol et tocofyrole). On peut remarquer que ces extraits possdent un pouvoir antimicrobien sur toutes les souches utilises. Mais le HC n'est pas efficace sur la souche fongique cause de ses composes additifs L'effet des extraits tests ; EB, HF, et HC peut s'expliquer par une inhibition des enzymes impliques dans la croissance et le dveloppement de ces germes d'o leur pouvoir antiseptique.

Conclusion Au dbut nous avons fix comme objectif pour cette tude, de tester l'effet antimicrobien de quatre prparatifs de Nigella sativa. Trois extraits de grain de Nigella sativa (l'huile essentielle, l'huile fixe extrait, extrait brut) et un chantillon de l'huile commerciale avec une srie des dilutions. Mais des problmes techniques nous ont empch d'extraire des quantits suffisantes et le manque des ractifs ncessaires pour faire des dilutions (DMSO), nous a oblig de faire des tests partir de : l'huile fixe extrait, extrait brut et l'huile commerciale sans dilutions. Les rsultats obtenus sont positifs pour les trois prparatifs avec des diffrent degrs mentionnes dans le tableau 4. Les rsultats obtenus nous ont permis de dgager ce qui suit : Avoir un bon rendement des huiles essentielles ncessite : - Une quantit importante des grains

- De nouveaux grains (grains rcemment rcolts) Ces rsultats montrent clairement que l'huile de Nigella sativa est dote d'un large spectre d'activit inhibitrice sur les microorganismes tests. Ces rsultats pourraient trouver une application possible dans le traitement des diffrentes maladies voques en bibliographie. La valeur mdicinale de Nigella sativa (el haba asoudaa) est plus en plus dmontre scientifiquement, et prenne l'importance dans les recherches pharmaceutiques et mdicinale. Il faut que prendre bien la parole de notre prophte .MO3L2LTv4D : " ????? ??? ??? ?? ?? ???? ??????? ?????"

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Application des disques

Mesure de diamtre des zones

Bain marin

Etuve

Les tubes d'chantillonnage et Souches bactriennes

Mortier

Huile commercial

l'ensemencement

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