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3B-2 GUA DE PRCTICAS FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA LABORATORIO CLNICO Y ANATOMA PATOLGICA

HEMATOLOGA II

LICENCIADO PEDRO MENGOL AMAYA

2012

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INTRODUCCIN

La presente GUIA DE PRACTICAS DE HEMATOLOGA II presenta de manera ordenada una serie de temas relacionados al desarrollo de procedimientos de Laboratorio orientados al Diagnstico de diferentes enfermedades Hematolgicas. Se desarrollan procedimientos orientados a identificar especficamente la causa principal ya sea microscpicamente mediante la identificacin de clulas atpicas de las series eritrocticas y/o leucociticas o de manera indirecta mediante la deteccin de anticuerpos y/o antgenos relacionados a procesos hemolticos. Se emplea intensamente el estudio de lminas patolgicas ya sea de sangre perifrica como de mdula sea para identificar los procesos mielodisplsicos as como mieloproliferativos de mayor prevalencia.

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PRACTICA N 1 DIAGNSTICO HEMATOLGICO DE ANEMIA POR DEFICIENCIA DE HIERRO

1. MARCO TERICO La deficiencia de hierro (Fe) es el resultado final de un perodo prolongado de balance negativo de este metal que pasa por fases prelatente, latente, temprana y tarda. La anemia ocurre en las fases finales de estos estadios progresivos de deficiencia de hierro. La deficiencia de Fe es la forma ms comn de carencia nutricional en pases desarrollados y en vas de desarrollo; se ha comunicado como Causas de deficiencia de hierro
1. BALANCE NEGATIVO DE HIERRO Disminucin de la ingesta de hierro: Dietas vegetarianas estrictas Absorcin deficiente: Aclorhidria, Ciruga gstrica, Enfermedad celaca, Pica 2. PERDIDAS SANGUINEAS o o o o bb Hemorragia gastrointestinal: Ulcera pptica, Vrices esofgicas, Salicilismo, Hernia hiatal, Parasitosis, Colitis ulcerativa Uterinas: Menometrorragias, Parto Donacin de sangre Urinarias Hemoglobinuria, Hemoglobinuria paroxstica nocturna, Hematuria Lesin renal o vesical Otras Enfermedades de la hemostasia Hemodilisis

la causa ms frecuente de anemia. Suele ocurrir bien como una manifestacin tarda de un balance negativo o como una insuficiencia para suplir las necesidades fisiolgicas aumentadas para este metal. La pica es una perversin del apetito caracterizada por la ingestin habitual de sustancias tales como gises, tierra, mezcla de cal (geofagia), hielos (pagofagia), etctera y constituye una manifestacin de deficiencia de Fe.

El conocer las causas prevalentes de la anemia puede ayudar a simplificar el estudio y establecer las causas en los grupos de poblacin vulnerable. 2. COMPETENCIAS

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Aplica mtodos y procedimientos de laboratorio para el diagnstico de anemia por deficiencia de Hierro. Analiza microscpicamente las muestras e identifica las diferentes alteraciones morfolgicas de los hemates compatibles con Anemia por deficiencia de Hierro. Interpreta los resultados obtenidos.

3. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Sistema al vaco: Aguja (21x1), Holder, Tubos con EDTA Lancetas Capilares con heparina y sin heparina Plastelina Lminas portaobjetos Lminas extensoras. Colorante Wright Azul de Cresil Brillante (Reticulocitos) Bandeja de coloracin Agua destilada Microscopio Aceite de inmersin Papel filtro Micropipetas de 10 100 l Micropipetas de 100 1000 l Tubos de 10 x 75 + gradillas Lquido de dilucin para hemates, leucocitos. MIcrocentrfuga Reactivo de Hemoglobina (Drabkin) Reactivo para la determinacin de Hierro Srico Reactivo para la determinacin de TIBC Porcentaje de Transferrina. Bao mara Espectrofotmetro Cmara de Neubauer Lminas de sangre perifrica patolgicas (ANEMIA) teidas con Wright. 4. PROCEDIMIENTOS 1. Determinar Nmero de Hemates, Leucocitos,. 2. Determinacin de Constantes Corpusculares: VCM, HCM, CHCM 3. Determinar Hematocrito, Hemoglobina, Hierro Srico. 4. Determinar microscpicamente el grado de Poiquilocitosis, Anisoicitosis e Hipocroma de los Hemates.

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5. FERREMIA. Fundamento El hierro srico se determina disociando el Fe (III) unido a protenas mediante a un buffer cido que contiene como reductor clorhidrato de hidroxilamina. El Fe (II) producto de esta etapa reacciona con el agente cromgeno generando un complejo coloreado que se fotocolorimtricamente a 560 nm. La Capacidad de Fijacin de Hierro (TIBC) se obtiene matemticamente como producto de la suma entre el valor del hierro srico y la cantidad de hierro absorbido (UIBC) en un medio alcalino al saturar la reaccin con una cantidad de Fe (II) conocida. ALTERACIONES MORFOLGICAS DE LOS HEMATES COMPATIBLES CON ANEMIA POR DEFICIENCIA DE HIERRO

Las imgenes muestras alteraciones morfolgicas de los hemates: Poiquilocitosis (alteracin en la forma), Anisocitosis (alteracin en el tamao) e Hipocroma (escaso nivel de Hemoglobina) Se puede apreciar tambin un alto grado de microcitosis (crculo): hemates de pequeo tamao. Dimetro inferior a 6 u. (Anemia por deficiencia de hierro)

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Dacriocitos: hemates en forma de lgrima

La imagen microscpica muestra una serie de alteraciones destacando principalmente un alto grado de hipocroma

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Dianocitos (Leptocitos): hemates con aspecto de diana por el aumento de la intensidad de tincin central. 5. RESULTADOS ANALISIS MICROSCPICO DE FROTIS DE SANGRE PERIFRICA 1. TAMAO. a) Normocitosis b) Anisocitosis. c) Macrocitosis d) Microcitosis 2. FORMA. a) Poiquilocitosis b) Anisocitosis 3. COLOR a) Normocroma b) Hipocroma
38 54 % HEMATOCRITO % 36 46 % (HOMBRES) ( MUJERES)

38 44 % ( NIOS) 13 18 gr/dl (HOMBRES) HEMOGLOBINA gr/dl 12 16 gr/dl ( MUJERES) 11.5 14.5 gr/dl ( NIOS)

VCM HCM CHCM

m3 80 92 m3 pg 27 32 pg pg 23 36 pg 100 250ug% (RECIEN NACIDO)

FERREMIA

ug%

50 120 ug% (NIOS) 50 160ug% HOMBRES (ADULTOS) 40 150 ug% MUJERES (ADULTOS) 100 400 ug% (HASTA 6 AOS)

TIBC

ug%

250 400 ug% (SOBRE 6 AOS)

% SATURACIN

% 20 55%

6. CUESTIONARIO Explique la relacin de las diferentes alteraciones morfolgicas de los hemates con Anemia por deficiencia de hierro.
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Realice la interpretacin de la determinacin de Hierro srico y la capacidad de fijacin de Hierro en el diagnstico diferencial de las anemias. Explique otros procedimientos hematolgicos y no hematolgicos empleados para el diagnstico de Anemia por deficiencia de Hierro. Realice un anlisis de los resultados presentados en el hemograma automatizado y realice la interpretacin de los histogramas y valores presentados fundamentando para cada caso. FUENTES DE INFORMACIN Balcells Gorina A. La Clnica y el Laboratorio. 20va ed. Barcelona: Masson; 2006. Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4ta edicin. Editorial Masson, 2000.

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INFORME CASO 3 WBC LYM MID GRAN RBC HGB HCT MCV MCH MCHC RDW PLT MPV PCT

6.40 1.08 0.77 4.55 4.14 7.4 26.3 63.5 17.8 28.0 23.8 346 9.0 0.31

K/ul

25.2 %L 5.3 %M 69.5 %G

M/ul g/dl % Fl Pg g/dl % K/ul Fl % INTERPRETACIN

Recuento de Leucocitos y diferencial normales. El Histograma aparece normal y guarda relacin con los resultados. Resultados anormales para todos los parmetros HGB, HTO, MCV, MCHC, y RDW, excepto RBC. El Histograma se correlaciona con los datos. Curva desplazada hacia la IZQUIERDA. Se

microcitosis o poiquilocitosis menor a 60 Fl ACCIN Repetir la muestra o revisar la el frotis sanguneo para confirmar los resultados. PDW 10(GSD) 48.6 COMENTARIOS ANEMIA MICROCTICA HETEROGNEA caracterstica de deficiencia de HIERRO.

Observa cuando los hemates tienen un registro de tamao pequeo, puede ser debido a

PRACTICA N 2 DIAGNSTICO HEMATOLGICO DE ANEMIA MEGALOBLSTICA

1. MARCO TERICO
La falta de la vitamina B12 o del cido flico causa un tipo similar de anemia. En este tipo de anemia hay una disminucin en la produccin de glbulos rojos, la cual se manifiesta con fatiga y agotamiento temprano con cualquier esfuerzo. La deficiencia de vitamina B12 o de cido flico tambin tiene repercusiones a nivel del sistema nervioso con confusin, prdida de la memoria (demencia), alucinaciones, y debilidad muscular, entre otras. La deficiencia de Vit B12 se relaciona por lo general por pobre ingesta, alteracin en la absorcin, deficiencia del factor extrnseco, parsitos entre otras. La deficiencia de folatos se relaciona a pobre ingesta, malabsorcin, medicamentos (sulfas, metrotexate), aumento de los requerimientos (cncer, hipertiroidismo).

2. COMPETENCIAS Aplica mtodos y procedimientos de laboratorio para el diagnstico de anemia Megaloblstica. Analiza microscpicamente las muestras e identifica las diferentes alteraciones morfolgicas de los hemates compatibles con AnemiaMegaloblstica. Interpreta los resultados obtenidos. 3. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Sistema al vaco: Aguja (21x1), Holder, Tubos con EDTA Capilares con heparina y sin heparina Lminas portaobjetos Colorante Wright Azul de Cresil Brillante (Reticulocitos) Agua destilada Microscopio Aceite de inmersin Micropipetas de 10 100 l - Micropipetas de 100 1000 l Tubos de 10 x 75 + gradillas Lquidos de dilucin para hemates y leucocitos Microcentrfuga Reactivo de Hemoglobina (Drabkin) Espectrofotmetro Cmara de Neubauer Lminas de sangre perifrica patolgicas (ANEMIA MEGALOBLSTICA) teidas con Wright. Lminas de mdula sea patolgicas (ANEMIA MEGALOBLSTICA) teidas con Wright.

4. PROCEDIMIENTOS 1. Determinar Nmero de Hemates, Leucocitos,. 2. Determinacin de Constantes Corpusculares: VCM, HCM, CHCM 3. Determinar Hematocrito, Hemoglobina, Hierro Srico. 4. Recuento de Reticulocitos 5. Determinar microscpicamente el grado de Poiquilocitosis, Anisocitosis e Macrocitosis de los hemates, hipersegmentacin de leucocitos (desviacin a la derecha). 6. Estudio de Mdula sea. ALTERACIONES MORFOLGICAS DE LOS HEMATES COMPATIBLES CON ANEMIA MEGALOBLSTICA

Frotis de sangre perifrica): destaca la Anisocitosis de la serie eritroide con presencia de Poiquilocitosis y macroovalocitos y la hipersegmetacin nuclear del neutrfilo segmentado de la imagen. Todo ello conforma el cuadro morfolgico tpico de la Anemia Megaloblstica.

Eritrocito Nuclaeado con presencia de cuerpos de Howell Jolly

Se observan Anisocitosis y Poiquilocitosis. Se apresa tambin hemates con signos evidentes de macrocitosis. Hay hipersegmentacin de neutrfilos (desviacin a la derecha)

El hemograma muestra un incremento del VCM, tpico de la anemia Megaloblstica. El VCM est incrementado en personas que se recuperan de una hemorragia o en la anemia hemoltica, ya que los GR recin liberados, los Reticulocitos, son ms grandes que los GR normales y van disminuyendo de tamao a medida que maduran.

5. RESULTADOS ANALISIS MICROSCPICO DE FROTIS DE SANGRE PERIFRICA 1. TAMAO. a) Anisocitosis. b) Normocitosis d) Microcitosis 2. FORMA. a) Poiquilocitosis b) Esferocitosis d) Hipersegmentacin de neutrfilos 3. COLOR a) Hipocroma b) Hipercroma
HEMATOCRITO % 38 54 % 36 46 % HEMOGLOBINA

c) Macrocitosis c) Clulas en diana

(HOMBRES) ( MUJERES)

38 44 % ( NIOS) gr/dl 13 18 gr/dl (HOMBRES)

12 16 gr/dl ( MUJERES) 11.5 14.5 gr/dl ( NIOS) RETICULOCITOS 0.2 2.5% (MUJERES) 0.5 2.8% (HOMBRES) 0.2 2.2 (NIOS) m3 80 92 m3 pg 27 32 pg pg 23 36 pg

VCM HCM CHCM

6. CUESTIONARIO 1. Fundamente los resultados hematolgicos compatibles con Anemia Megaloblstica. 2. Explique las relaciones de las diferentes alteraciones morfolgicas de los hemates y los leucocitos con la Anemia Megaloblstica observadas en sangre perifrica. 3. Fundamente los cambios morfolgicos que se observan en Mdula sea observados en anemia Megaloblstica. 4. Explique otros procedimientos hematolgicos y no hematolgicos empleados para el diagnstico de Anemia Megaloblstica. 5. Realice un anlisis de los resultados presentados en el hemograma automatizado y realice la interpretacin de los histogramas y valores presentados fundamentando para cada caso. 7. FUENTES DE INFORMACIN Litchman A. Williams W. Hematologa. 6ta ed. Madrid: McGraw-Hill; 2005. Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4ta edicin. Editorial Masson, 2000. Cuellar F. Fundamentos de Medicina. Hematologa. 6ta ed. Medelln: CIB; 2004

INFORME CASO 2 WBC LYM MID GRAN RBC HGB HCT MCV MCH MCHC RDW PLT MPV PCT PDW

2.34 0.75 0.18 1.41 1.19 5.1 15.1 127 42.6 33.5 26.1 82 8.4 0.07 52,6

K/ul

32.1 %L 7.4 %M 60.5 %G

M/ul g/dl % Fl Pg g/dl % K/ul Fl % 10(GSD)

INTERPRETACIN Recuento de Leucocitos est disminuido. El Histograma y la correlacin estn afectados.

ACCIN

Resultados anormales para todos los parmetros RBC, HGB, HTO, MCV,MCH, MCHC, y RDW. El Histograma se correlaciona con los datos. Curva desplazada hacia la DERECHA. Se observa cuando los hemates tienen un registro de tamao aumentado, puede ser debido a clulas macrocticas, policromatfilos, ovalocitos y eliptocitos. Tambin pueden ser normoblastos en nmero aumentado.

Repetir la muestra o revisar la el frotis sanguneo para confirmar los resultados. COMENTARIOS ANEMIA MACROCTICA HETEROGNEA, caracterstica de deficiencia de folato o vitamina B12.

PRACTICA N 3 DIAGNSTICO DE ANEMIAS HEMOLTICAS REACCIONES ANTGENO-ANTICUERPO 1. MARCO TERICO Las anemias hemolticas resultan de la destruccin aumentada de los glbulos rojos. Debido a que la produccin en la mdula sea es normal, las anemias hemolticas revelan signos de destruccin acelerada y de regeneracin activa compensadora al mismo tiempo, caractersticas estas de valor para la aproximacin diagnstica. La mdula sea tiene la capacidad de incrementar la tasa de Eritropoyesis hasta de 6 8 veces de tal modo que la sobreviva de los eritrocitos circulantes podra disminuir de 120 a 15 o 20 das sin ocasionar anemia. El aumento concomitante de la destruccin y la produccin de glbulos rojos, sin anemia, se denomina anemia compensada. La anemia hemoltica se produce cuando la destruccin eritrocitaria es superior a la capacidad de Eritropoyesis. El diagnstico se basa en el estudio de frotis de sangre perifrica y una prueba Antiglobulnica o Coombs directo o indirecto. El resultado de estas pruebas permite clasificar la anemia hemoltica en cinco categoras: a. Anemia hemoltica Inmune. b. Anemia hemoltica microangioptica, talasemias, Hemoglobinopatas c. Anemia hemoltica por dficit de enzimas. d. Anemias por defecto de membrana MTODOS DE AGLUTINACION En estos procedimientos se hacen visibles los complejos Ag-Ac por la aglutinacin que producen los anticuerpos cuando el Ag forma parte o se ha unido artificialmente a la superficie de glbulos rojos, plaquetas, leucocitos, partculas de ltex, etc. Normalmente se utilizan glbulos rojos (hemaglutinacin) o partculas de ltex. Hemaglutinacin directa La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos rojos se puede detectar por la hemaglutinacin producida cuando se aade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antgenos. Este procedimiento se emplea habitualmente para la identificacin de los grupos sanguneos y Rh, para lo cual a la sangre heparinizada se le aaden los antisueros correspondientes: anti- A, anti-B o anti-AB (todos ellos anti-Rh negativos). Habr aglutinacin cuando los glbulos rojos posean la especificidad del antisuero aadido De igual manera se procede con antisueros anti-Rh para la determinacin de los distintos grupos Rh. Hemaglutinacin indirecta Se basa en el principio de la inhibicin de la hemaglutinacin. Para su realizacin se precisan glbulos rojos a los cuales se les ha unido la misma sustancia que se desea detectar o cuantificar Si estos glbulos rojos son puestos en presencia de anticuerpos preparados frente a dicha sustancia se producir su aglutinacin. Por el

contrario, cuando se aade un suero problema que contiene la sustancia a cuantificar entonces los anticuerpos se unirn a dicha sustancia y no a los glbulos rojos. En este caso no se producir la hemaglutinacin. Por tanto, aglutinacin (+) indica ausencia de la sustancia a estudiar, y aglutinacin (-) indica presencia de la misma. La medida de gonadotrofina corinica (HCG) para el diagnstico de embarazo puede realizarse por esta tcnica. 2. COMPETENCIAS Aplica mtodos y procedimientos de laboratorio para la identificacin de las reacciones Antgeno Anticuerpo tiles para el diagnstico de Anemias Hemolticas. Asume su labor con responsabilidad y orienta su aprendizaje a la produccin de nuevos conocimientos. Interpreta los resultados obtenidos. 3. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS 1. Tubos de ensayo 10x75 gradillas 2. Sistemas al vaci: aguja (21x1), Holder 3. Tubos al vaco con EDTA 4. Tubos al vaco sin anticoagulante 5. Goteros (20 gotas por ml) 6. Micropipetas de 10 - 100 ul 7. Micropipetas de 100 1000 ul 8. Suero de clasificacin ANTI A 9. Suero de clasificacin ANTI B 10.Centrfuga 11.Suero fisiolgico 12.espejo cncavo de microscopio. 13. Tubos de ensayo 10x75 13x100 14.Goteros 15. Suspensin al 5% de hemates A (hemates acumulados de tres o ms individuos del grupo A) 16. Suspensin al 5% de hemates B. Muestra: Plasma o suero del paciente Sangre con anticoagulante a partir del cual se prepara la suspensin celular.
4.

PROCEDIMIENTOS HEMOAGRUPACION USANDO SUEROS (prueba srica) A fin de asegurar hemoagrupaciones exactas, se confirman los resultados obtenidos en la prueba celular, probndole suero del paciente con hemates conocidos de los grupos A y B. De la constitucin bsica de los grupos sanguneos, se sabe que cuando hay aglutingeno, falta la a aglutinina correspondiente. A la inversa, cuando falta un aglutingeno, existe la aglutinina correspondiente.. Por lo tanto, las pruebas

que usan el suero del individuo y los hemates conocidos confirman las pruebas basadas en la reaccin de los hemates de la persona con antisuero conocido (prueba celular). Procedimiento 1. Si se emplea suero, este deber ser calentado a 56C por 30 minutos a fin de inactivar cualquier complemento que puede presentarse. La presencia de complemento puede causar hemlisis y proporcionar resultados inexactos. 2. En 2 tubos de ensayos limpios y secos marque A y B, respectivamente, adems, escriba el nombre o la clave del paciente claramente. 3. Ponga en cada tubo 2 gotas del suero en estudio. 4. Agrguele al tubo marcado hemates A 1 gota de una suspensin de hemates al 2% de hemates A preparados recientemente. 5. Agrguele al tubo marcado hemates B 1 gota de una suspensin de hemates al 5% de hemates B preparados recientemente. 6. Mezclar bien suavemente. Si se desea potenciar la aglutinacin, los tubos pueden ser incubados 5 minutos a temperatura ambiente 7. Centrifugar los tubos a 1,000 rpm por 1 minuto. 8. Desprender el botn celular del fondo del tubo agitndolo suavemente, inclinarlo hasta la posicin horizontal y leerlo contra fondo bien iluminado. Interpretacin (Nota. Simultneamente deber realizarse la prueba celular como contraste.) 5. RESULTADOS GRUPO A GRUPO B GRUPO AB GRUPO O TUBO A Sin aglutinacin Aglutinacin Sin aglutinacin Aglutinacin TUBO B Aglutinacin Sin aglutinacin Sin aglutinacin Aglutinacin

6. CUESTIONARIO a. Fundamente los resultados hematolgicos obtenidos y relacinelos con las anemias Hemolticas. b. Explique las caractersticas de la membrana celular de los hemates que generan las reacciones antgeno anticuerpo. c. Explique las caractersticas de los anticuerpos incompletos y su relacin con las anemias hemolticas inmunes. 7. FUENTES DE INFORMACIN Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4ta edicin. Editorial Masson, 2000. Litchman A. Williams W. Hematologa. 6ta ed. Madrid: McGraw-Hill; 2005. Garca Espinoza B. Hematologa I. 3ra ed. Madrid: Paraninfo; 2007.

PRACTICA N 4 DIAGNSTICO DE ANEMIA HEMOLTICA POR ANTICUERPOS IRREGULARES 1. MARCO TERICO El panel es realizado para identificar anticuerpos irregulares en el suero de pacientes que tienen un tamizaje positivo, para identificar anticuerpos desconocidos. Es tambin hecho sobre suspensin de clulas rojas que tienen un test positivo antiglobulina directa. La identificacin de los anticuerpos es necesaria antes de cualquier transfusin, si el tamizaje es positivo. Esta prueba es utilizada en estudios de pacientes obsttricas con anticuerpos positivos, para el diagnstico antenatal, de una posible enfermedad hemoltica del recin nacido y en estudios de anemia hemoltica cuando el coombs directo o indirecto son positivos. Cada inmunizacin a los antgenos de los glbulos rojos puede presentar problemas de reaccin cruzada. Cuando se detecta en el panel, un anticuerpo del suero del paciente, si el anticuerpo es clnicamente significativo, las unidades del donante deben carecer del antgeno correspondiente. Los anticuerpos clnicamente significativos de los grupos sanguneos son aquellos que reaccionan inmediatamente despus de la centrifugacin, o anticuerpos que reaccionan a 37oC y por antiglobulina, que presentan hemlisis in vitro, y que han sido reportados como causa de reacciones hemolticas: Por ejemplo Anti-A y Anti-B; anticuerpos del Rh, Kell, Duffy, sistemas Kidd; tambin anti-S, -s, - U. Los que son clnicamente menos importantes son aquellos que reaccionan a temperatura ambiente o ms, y no presentan hemlisis: por ejemplo los anticuerpos Lewis, P, sistemas MN; anticuerpos de alta o baja avidz; aglutininas fras. 2. COMPETENCIAS Explica el fundamento, desarrolla la Prueba de Antiglobulina Indirecta o test de Coombs indirecta para la deteccin de Anticuerpos Irregulares mtodos y procedimientos de laboratorio para Interpreta los resultados obtenidos del test de Coombs Indirecto para la determinacin de anticuerpos irregulares relacionados a Anemia Hemoltica Inmune. 3. 1. 2. 3. 4. 5. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Sistema al vaco: Aguja (21x1), Holder, Tubos al vaco con EDTA Tubos al vaco sin anticoagulante Papel filtro Micropipetas de 10 100 l

6. Micropipetas de 100 1000 l 7. Tubos de 10 x 75 + gradillas 8. Parafilm

9. Centrfuga 10. Bao Mara 11. Suero Fisiolgico 12. Goteros 13. REACTIVO ANTIGLOBULINA HUMANA 14. ALBUMINA BOVINA 15. ANTI -D 4. PROCEDIMIENTOS PRUEBA INDIRECTA DE COOMBS: La prueba indirecta de Coombs es utilizada para demostrar la presencia de los anticuerpos circulares que cubren, pero que no aglutinan, a las clulas suspendidas en salina. Se efecta esta prueba combinando invitro a un anticuerpo con antgeno especfico. Ejemplo, cuando se hace una prueba anti-D en un suero materno, las clulas de la prueba debern contener el antgeno D. METODOLOGA 1. Prepare una suspensin al 2% en solucin salina normal de las clulas seleccionadas para la prueba. 2. Agregue dos gotas del suero que va a probarse a un tubo de ensayo. 3. Agregue dos gotas de la suspensin de las clulas preparadas, al tubo de ensayo 4. Agregue dos gotas de albmina bovina solucin al 22% al tubo 5. Incube en un bao mara a 37C por 15 minutos. (la incubacin puede 6. prolongarse hasta 60 minutos si se desea). 7. Saque el tubo del bao mara, llnela con solucin salina fresca, centrifugue a 3500 r.p.m. durante 1 minuto y decante. Lvese tres veces. 8. Despus del ltimo lavado, decante lo ms posible. 9. Agregue dos gotas de suero Anti-humano y mezcle bien. 10. Centrifugue por 1 minuto a 1000 R.P.M. 11. Resuspenda los eritrocitos con una agitacin moderada y examine el resultado sobre una buena iluminacin.

5. RESULTADOS Un resultado positivo se traduce como de aglutinacin de los hemates por la presencia de Anticuerpos irregulares (Ig G o C3d) circulantes en la sangre del individuo en estudio.

6. CUESTIONARIO 1. Explique detalladamente el fundamento de Prueba de Antiglobulina Humana; detalle las fases de la prueba y su importancia en el diagnstico de anemias hemolticas. 2. Explique la importancia del empleo de la albmina bovina en la prueba. Explique la forma como interviene en la deteccin de anticuerpos irregulares. 3. Defina a que se denomina anticuerpo Irregular o Incompleto. 4. Fundamente y describa el proceso del Test de Coombs Indirecto en la Prevencin de Transfusiones incompatibles. 7. FUENTES DE INFORMACIN Sonnenwirth, Alex. Mtodos y Diagnstico del Laboratorio Clnico. Buenos Aires. 12ma edicin. Editorial Panamericana. 2001.

Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4 ta edicin. Editorial Masson, 2000. Garca Espinoza B. Hematologa I. 3ra ed. Madrid: Paraninfo; 2007.

PRACTICA N 5 ESTUDIO DE LA FRAGILIDAD OSMOTICA DE LOS HEMATIES 1. MARCO TERICO El estudio valora la resistencia de los hemates a soluciones de presin osmtica creciente o decreciente en condiciones constantes de pH y de temperatura. Para ello se enfrentan los hemates problema a soluciones de cloruro de sodio cuya concentracin es decreciente a partir de 0.9% (9/1000). Cuando los hemates entran en contacto con soluciones hipotnicas, penetra agua a travs de su membrana y se hinchan, al hincharse los hemates, una parte de la Hb que contienen puede salir a travs de los poros de su membrana. Si la entrada de lquido es excesiva, los hemates se rompen y dejan libre la Hb (hemlisis). En condiciones normales, un hemate puede aceptar sin hemolizarse una entrada de agua que incremente su volumen en un 70% como mximo. Esta prueba evala por tanto la capacidad que tienen los hemates de soportar un incremento de su contenido acuoso (RESISTENCIA OSMOTICA ERITROCITARIA o ROE) Dentro de la misma sangre, la ROE delos hemates vara de unos a otros. 2. MATERIALES. Pipetas pasteur Tubos de 13x100 Reloj Centrfuga Espectrofotmetro Gradillas

REACTIVOS Suero Fisiolgico al 9/1000 Agua destilada

MUESTRA

Sangre venosa con heparina, EDTA, no debe utilizarse otros como citrato u oxalato porque aportan iones suplementarios al medio hipotnico, que pueden alterar la concentracin salina de este. No debe haber pasado ms de 2 horas desde la extraccin de la sangre hasta su utilizacin. Slo conservar a 4C hasta 6 horas.

3. PROCESO 1. Preparar una batera de soluciones de cloruro de sodio, a concentraciones decrecientes, de la siguiente manera:
TUBO N Agua destilada (gotas) Suero fisiolgico (gotas) Concentracin Obtenida (gr/l) 9 8.5 8 7.5 7 6.5 6 5.5 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 1 0 2 1 3 2 4 3 5 4 6 5 7 6 8 7 9 8 10 9 11 10 12 11 13 12 14 13 15 14 16 15 17 16 18 17

2. Aadir a cada tubo 1 gota (0.05 ml: 50 ul). de sangre total. La condicin es que la gota de caer al fondo, SIN TOCAR LAS PAREDES. 3. Reposar 30 minutos a temperatura ambiente 4. Centrifugar a 2,000 RPM por 5 minutos

5. LECTURA DE LOS RESULTADOS Puede ser visual o espectrofotomtricamente, en ambos casos , lo que se valora es la presencia o ausencia de hemlisis. LECTURA VISUAL Se considera que no hay hemlisis, cuando en el tubo se observa un sedimento en forma de de botn rojizo y un lquido sobrenadante incoloro y transparente. Se estima que hay una hemlisis parcial cuando se observa un botn sedimentario, pero que se acompaa de un sobrenadante rojizo y transparente. Se considera que la hemlisis es total cuando se observa un lquido rojizo y transparente Si los hemates presentes en el botn sedimentario de cualquier tubo se re suspenden mediante agitacin suave, el sobrenadante se enturbia.

LECTURA AL ESPECTROFOTMETRO. Se recoge de forma separada el contenido en todos los tubos, y se mide al Abs. De cada uno de ellos a 540 nm. El blanco utilizado corresponde al lquido del tubo 1 (isotnico). Las Abs. De cada tubo se expresan en forma de porcentaje de hemlisis (% de hemlisis). Para ello se considera que la Abs. Del tubo 18 corresponde al 100% de hemlisis, ya que al haber sido preparado con la solucin ms hipotnica, debe ser el ms hemolizado.

CALCULO:
%HEMLISIS= A x 100 AM A = Abs. Del lquido sobrenadante del tubo analizado AM= Abs. Del lquido del tubo 18 (Abs, mxima)

La ROE se valora mediante la determinacin de la concentracin de NaCl que se precisa para producir un 50% de hemlisis.

INTERPRETACION CLINICA En condiciones normales debe observarse una hemlisis parcial clara a partir del tubo n 10 (NaCl a 4.5g/l) Hemlisis total a nivel de los tubos 12, 13 o 14 ( NaCl 3.5, 3 y 2.5 g/l respectivamente) Generalmente el 50% de hemlisis se produce a nivel de los tubos 10 u 11 (NaCl 4.5 y 4.=g/l respectivamente.) Cuando la ROE baja aumenta la hemlisis en los tubos que contienen solucin salina a mayor concentracin. Esto sucede en la esferocitosis hereditaria, en la eliptocitosis, en la estomatocitosis hereditaria, debido a que en estos casis la superficie de los hemates est disminuida con respecto a su volumen, por lo stos toleran peor la entrada de agua y tienen aumentada su fragilidad osmtica. Cuando la ROE sube, la aparicin de la hemlisis se retarda y empieza a nivel de los tubos que contienen NaCl a una concentracin menor que lo previsto. Esto acontece en los reticulocitos y en los hemates de la talasemia menor y de la anemia ferropnica, debido a que estas clulas tienen incrementada su superficie en relacin a su volumen, por lo que toleran mejor la entrada de agua y tiene disminuida su fragilidad osmtica. LECTURA: CONTROL

PACIENTE

6. CUESTIONARIO 1. Explique detalladamente el fundamento de la Prueba. 2. Interprete la prueba realizada. 7. FUENTES DE INFORMACIN Sonnenwirth, Alex. Mtodos y Diagnstico del Laboratorio Clnico. Buenos Aires. 12ma edicin. Editorial Panamericana. 2001. Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4 ta edicin. Editorial Masson, 2000. Garca Espinoza B. Hematologa I. 3ra ed. Madrid: Paraninfo; 2007. Turgeon M. Hematologa Clnica. Teora y procedimientos. 5ta ed. Mxico: Manual Moderno; 2006. Cuellar, Francisco. Fundamentos de Medicina. Hematologa. Medelln 6ta edicin. CIB, 2004.

PRACTICA N 6 DIAGNSTICO DE ANEMIA HEMOLTICA CUERPOS DE HEINZ -

1. MARCO TERICO La presencia de cuerpos de Heinz en el interior de los eritrocitos y, por tanto, el hallazgo de precipitados de Hb, se encuentra en una serie de defectos congnitos de esta, que conllevan una alteracin en el enlace hem-globina. Este trastorno en el enlace hem-globina comporta una inestabilidad de la Hb, que hace que sta se desnaturalice en presencia de algunos medicamentos (por ejemplo, sulfamidas) y que precipite, intracelularmente, el tetrmero de globina. Tambin aparecen cuerpos de Heinz intraeritrocitarios en el dficit congnito de glucosa-6fosfato deshidrogenasa, por precipitacin de la Hb oxidasa. La oxidacin de la Hb puede producirse a causa de la actuacin de diversas productos (sulfamidas, antipaldicos, antipirticos, analgsicos, habas, etc.). Los precipitados intraeritrocitarios de hemoglobina desnaturalizada (estn formados por globina desnaturalizada que se produce cuando se destruye la hemoglobina) se tien con el cristal violeta y adquieren el aspecto de pequeas granulaciones que reciben el nombre de cuerpos de Heinz. Se presentan en eritrocitos jvenes y maduros. Se observan en las siguientes condiciones clnicas: Talasemia Deficiencia de glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa Favismo Hemoglobinopatas inestables Enfermedad de Wilson 2. COMPETENCIAS Aplica mtodos y procedimientos de laboratorio para realizar estudios de anemia hemoltica Interpreta los resultados. 3. MATERIALES Y EQUIPOS Jeringas de 5 ml. Sistema al vaco: Aguja (21x1), Holder, Tubos con EDTA Micropipetas de 10 100 l Micropipetas de 100 1000 l Tubos de 13x100 + gradillas Bao Mara Solucin salina Aceite de inmersin. Goteros plsticos

REACTIVO: Solucin de cristal violeta al 10% en solucin salina.

4. PROCEDIMIENTOS
1. Mezclar en un tubo de ensayo, volmenes iguales de la solucin de cristal violeta y de la sangre problema (por ejemplo: 1 ml de colorante y 1 ml de muestra. 2. Incubar la mezcla, a 37 C, durante 5 minutos. 3. Hacer una extensin fina de la muestra.

4. 5.

Dejar secar la extensin. Observar la extensin al microscopio, con aceite de inmersin.

5. RESULTADOS Los cuerpos de Heinz, una vez tenidos, se observan como pequeas granulaciones de color prpura que se localizan en la periferia de los hemates.
INTERPRETACIN:

6. CUESTIONARIO 1. Describa el procedimiento. 2. Indique criterios de control de calidad. 3. Determine las diferencias con el contenido de los Reticulocitos y otras inclusiones eritrocitarias. 8. FUENTES DE INFORMACIN Garca Espinoza B. Hematologa I. 3ra ed. Madrid: Paraninfo; 2007. Litchman A. Williams W. Hematologa. 6ta ed. Madrid: McGraw-Hill; 2005. Cuellar, Francisco. Fundamentos de Medicina. Hematologa. Medelln 6ta edicin. CIB, 2004.

PRACTICA N 7 PRESENTACIN DE CASO CLNICO DIAGNSTICO INMUNOHEMATOLGICO DE ANEMIA HEMOLTICA DEL RECIEN NACIDO O ERITROBLASTOSIS FETAL 1. MARCO TERICO

La enfermedad hemoltica del recin nacido (EHRN) se produce cuando existe una incompatibilidad entre los antgenos eritrocitarios de la madre y los del feto. Aunque el ejemplo clsico es la isoinmunizacin por el antgeno D del sistema Rh (por ser el ms inmunognico), cualquier antgeno de grupo sanguneo ausente en la madre y presente en el feto puede inducir la formacin de aloanticuerpos que causen la hemlisis neonatal. Etiologa. La mujer puede entrar en contacto por primera vez con el antgeno por una transfusin o por un embarazo. Cuando se produce el segundo contacto con el antgeno, habitualmente en el segundo embarazo, los anticuerpos de clase IgG (especialmente IgG3 o IgG1) desarrollados en la madre atraviesan la placenta y se fijan a los hemates del feto portadores del antgeno correspondiente, produciendo su hemlisis. Cuadro clnico. La intensa anemia que ocurre en el feto provoca insuficiencia cardaca con anasarca e hipoproteinemia (hidropesia fetal) y, en algunos casos, muerte fetal intrauterina. La bilirrubina que procede de la destruccin de la hemoglobina se libera al lquido amnitico, pudiendo ser eliminada por el hgado de la madre. Si la afeccin no es tan grave y el feto llega a nacer, la bilirrubina ya no puede ser metabolizada por la madre, por lo que la intensa anemia se acompaa de ictericia (eritroblastosis fetal). Cuando la bilirrubina indirecta sobrepasa ciertos valores se fija a los ncleos cerebrales y causa un proceso neurolgico grave denominado kernicterus. Diagnstico. El diagnstico se puede efectuar antes del nacimiento mediante la deteccin de anticuerpos en el suero de la gestante. En el momento de nacer, la prueba de la antiglobulina directa (prueba de Coombs directa) sobre los hemates del recin nacido e indirecta (prueba de Coombs indirecta) en el suero de la madre permite establecer el diagnstico diferencial con otras ictericias neonatales. En el caso de la EHRN por mecanismo inmune ambas pruebas son positivas. Prevencin y tratamiento. Es posible prevenir la EHRN producida por el antgeno Rh(D), en primer lugar, evitando administrar sangre Rh(D)-positiva a las nias y mujeres en edad frtil Rh(D)-negativas. En segundo lugar, debe prevenirse la aloinmunizacin fetomaterna despus del parto de un feto Rh(D)-positivo mediante la administracin a la madre de inmunoglobulina especfica anti-D (250-300 mg por va intramuscular), ya sea despus del parto o bien mediante una dosis antes del parto y otra posparto. Si ya se ha producido la isoinmunizacin, son fundamentales el diagnstico temprano y la vigilancia del recin nacido para evitar la anemia y la hiperbilirrubinemia excesivas, mediante fototerapia y exanguinotransfusin. Experiencias recientes demuestran que el tratamiento con inmunoglobulinas inespecficas a dosis altas puede disminuir la respuesta inmune en la madre.

2. COMPETENCIAS Explica el fundamento, aplica mtodos y procedimientos de laboratorio para el diagnstico de anemia Hemoltica del Recin nacido. Interpreta los resultados obtenidos de la Prueba Antiglobulina Humana Directa.

3. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Sistema al vaco: Aguja (21x1), Holder, Tubos al vaco con EDTA Tubos al vaco sin anticoagulante Papel filtro Micropipetas de 10 100 l Micropipetas de 100 1000 l Tubos de 10 x 75 + gradillas Parafilm Centrfuga Bao Mara Suero Fisiolgico Goteros REACTIVO ANTIGLOBULINA HUMANA ALBUMINA BOVINA ANTI -D 4. PROCEDIMIENTOS PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA Detecta loa anticuerpos o componentes del complemento fijados in vivo en los hemates de un paciente. Por ello, podemos aplicar dicha prueba al estudio de la enfermedad hemoltica del recin nacido y de las anemias hemolticas, ya sean autoinmunes o inducidas por frmacos y de las reacciones transfusionales PRUEBA DIRECTA Enfermedad hemoltica del recin nacido Anemia hemoltica por autoanticuerpos Anemia hemoltica debido a frmacos Investigacin de reacciones transfusionales Suero Glbulos rojos O positivo al 2%

MUESTRA:

PROCEDIMIENTO LAVADO Y PREPARACIN DE SUSPENSIONES DE GLBULOS ROJOS. Material: o Tubos de 10 x 75 o Muestra de sangre (1.5 2.5 ml de sangre/ 50 ul de EDTA) o o Solucin salina (0.9%) Mtodo: 1. Centrifugar la muestra para separar el plasma de los hemates. Pasar el plasma a otro tubo limpio y rotulado. 2. Con una pipeta, colocar 0.2 0.5 ml de glbulos rojos en un tubo limpio.

3.

Completa con solucin salina hasta 1 cm del borde. 4. Centrifugar a 3500 rpm durante 1 2 minutos para sedimentar las clulas. 5. Extraer la solucin salina. 6. Resuspender los hemates. (primer lavado) 7. Repetir los pasos 3 6 dos veces. En el ltimo lavado, la solucin salina debe ser clara, sin signos de hemlisis. Retirar al mximo la solucin salina. 8. Para preparar la suspensin de hemates utilizar los hemates sedimentados, de acuerdo al volumen que se necesite. 9. Glbulos rojos al 5%: 2 gotas de glbulos rojos lavados + 2 ml de solucin salina METODOLOGA 1. Preparar una suspensin al 5% en solucin salina normal de las clulas probadas. 2. Agregue dos gotas de la suspensin de las clulas preparadas a un tubo de 13 x 100. 2. Lavar con solucin salina y centrifuge a 3500 r.p.m. durante 1 minuto. Efecte este lavado tres veces. Despus del ltimo lavado, decante lo ms posible. 3. Agregue dos gotas de suero anti-humano. 4. Mezcle bien y centrifugue a 1000 r.p.m por 1 minuto. 5. Resuspenda los eritrocitos de los tubos y examine el resultado. 5. RESULTADOS La aglutinacin de los eritrocitos del paciente por el Suero Antiglobulina humana, indica que estos se encontraban sensibilizados por anticuerpos. 6. CUESTIONARIO 1. Fundamente los resultados de la Prueba Antiglobulina directa. 2. Indique que Anticuerpos se involucran con la enfermedad hemoltica del recin nacido. 3. Describa la patogenia de la enfermedad hemoltica del recin nacido. 4. Explique brevemente otras anemias hemolticas adquiridas por Isoanticuerpos. 7. FUENTES DE INFORMACIN 1. Dacie Jhon V. Hematologa Prctica.6ta ed. Madrid: Elsevier;2008. 2. Osorio S, G. Hematologa. Principios generales. Santiago: Mediterrneo; 2007. 3. Bernard Henry, J. El Laboratorio en el diagnstico Clnico. Madrid: Marbn;2007 4. Garca Espinoza B. Hematologa I. 3ra ed. Madrid: Paraninfo; 2007. 5. Balcells Gorina A. La Clnica y el Laboratorio. 20 va ed. Barcelona: Masson; 2006.

PRACTICA N 9 DIAGNSTICO MICROSCPICO DE LEUCEMIA I LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M1-M2. SANGRE PERIFRICA Y MDULA SEA. 1. MARCO TERICO La Leucemia Mieloide Aguda es una neoplasia clonal del tejido hemopoytico, caracterizada por la proliferacin de clulas blsticas anormales de estirpe mieloide en la medula sea y menor produccin de clulas hemticas normales, condicionando anemia y trombopenia. La leucemia mieloide aguda se produce por daos genticos adquiridos (no heredados) en el ADN de las clulas en desarrollo dentro de la mdula sea. Sus efectos son: 1) el crecimiento incontrolado y exagerado y la acumulacin de clulas llamadas "blastos leucmicos" los que no pueden funcionar como las clulas sanguneas normales 2) el bloqueo de la produccin de clulas normales de la mdula, lo que resulta en una deficiencia de glbulos rojos (anemia) y plaquetas (trombocitopenia) y de glbulos blancos normales (especialmente neutrfilos, es decir, neutropenia) en la sangre. La leucemia mieloide aguda es una enfermedad que avanza rpidamente y afecta a la mayora de las clulas que se estn formando o primitivas (an no completamente desarrolladas o diferenciadas). Estas clulas inmaduras no pueden desempear sus funciones normales. La leucemia crnica avanza lentamente y permite el crecimiento de un mayor nmero de clulas ms desarrolladas. La leucemia mieloide aguda (LMA) en adultos es una enfermedad en la cual se encuentran clulas cancerosas (malignas) en la sangre y la mdula sea. Normalmente, la mdula sea produce clulas llamadas blastos, las cuales al madurar se transforman en varios tipos de glbulos que a su vez cumplen funciones especficas en el cuerpo. La LMA afecta los blastos que se estn transformados en glbulos blancos llamados granulocitos. En los pacientes con LMA, los blastos no maduran y se vuelven demasiado numerosos. Estas clulas blsticas inmaturas se encuentran entonces en la sangre y la mdula sea. 2. COMPETENCIAS Analiza microscpicamente las muestras e identifica las diferentes alteraciones morfolgicas de los leucocitos, hemates y plaquetas, compatibles con Leucemia mieloide aguda (LMA) Interpreta los resultados obtenidos.

3. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Lminas portaobjetos Lminas extensoras. Colorante Wright Bandeja de coloracin Agua destilada Micropipetas de 10 100 l. Micropipetas de 100 1000 l Cmara de Neubauer Lquido de Turk Extendidos de sangre perifrica coloreados con Wright: Leucemia Aguda Extendidos de mdula sea coloreados con Wright: Leucemia Aguda Microscopio Aceite de inmersin Papel filtro 3. PROCEDIMIENTOS 7. Determinar el nmero de Leucocitos. 8. Estudio microscpico de sangre perifrica: cualitativo y frmula leucocitaria. 9. Estudio microscpico de Mdula sea: Mielograma FRMULA LEUCOCITARIA: SANGRE PERIFERICA
TIPO DE LEUCOCITO Blastos Promielocitos Mielocitos Metamielocitos Neutrfilo en cayado Neutrfilo segmentado Eosinfilos Basfilos Monocitos Linfocitos Otros TOTAL PALOTEO TOTAL

NMERO DE LEUCOCITOS POR mm3:.

Blastos de una LAM. Obsrvese la presencia de bastones de Auer.

Se observan tres blastos con nucleolos. Se observa un Promielocito con nucleolos y grnulos indiferenciados.

Se observan blastos con nucleolos. Obsrvese la presencia de bastones de Auer. . MIELOGRAMA:

ELEMENTOS FORMES CELULARES CLULAS INDIFERENCIADAS CLULAS DEL RETCULO MIELOBLASTOS PROMIELOCITOS MIELOCITOS NEUTROFILO MIELOCITO EOSINOFILO MIELOCITO BASOFILO METAMIELOCITO NEUTROFILO METAMIELOCITO EOSINFILO METAMIELOCITO BASIFILO NEUTRFILO EN BANDA EOSINOFILO EN BANDA NEUTRFILO SEGMENTADO EOSINOFILO SEGMENTADO2.0 BASOFILO SEGMENTADO MONOCITOS LINFOCITOS MEGACARIOCITOS PRONORMOBLASTO NORMOBLASTO BASOFILO NORMOBLASTO POLICROMATOFILO NORMOBLASTO ORTOCROMATICO PROMEGALOBLASTO MEGALOBLASTO BASOFILO MEGALOBLASTO POLICROMTICO MEGALOBLASTO ORTOCROMATICO RELACIN MIELOIDE / ERITROIDE (M/E) NORMAL (MEDIO%) 0.0 0.4 2.0 5.0 12.0 1.5 0.3 25.6 0.4 0.0 12.2 1.3 20.0 2.0 0.2 2.0 10.0 0.4 0.5 1.6 10.4 6.4 0 0 0 0 34:1 LMITES % 0.0 1.0 0.0 1.3 0.3 5.0 1.0 8.0 5.0 19.0 0.5 3.0 0.0 0.5 17.5 33.7 0.0 1.1 0.0 0.2 9.5 15.3 0.2 2.4 11.6 30.0 0.5 4.0 0.0 - 3.7 1.6 4.3 3.0 20.7 0.0 3.0 0.2 4.2 0.25 4.8 3.5 20.5 3.0 25.0 0 0 0 0

4. RESULTADOS En la LMA los leucocitos estn muy aumentados (con presencia de blastos), aunque pueden haber formas aleucmicas, la Hemoglobina suele ser menor de 8gr/dl y las plaquetas suelen ser menor de 20,000/mm3 (anemia y trombocitopenia severas) En el frotis, en las leucemias granulocticas se observan bastones de Auer, que corresponde a fusin de los grnulos primarios. El aspirado de mdula sea es la prueba diagnstica clave, ya que permite analizar mejor que la biopsia. Se caracteriza por ncleos mieloblsticos que tienen una cromatina vesicular reticulada sin condensaciones y sin membrana nuclear pero con uno o ms nucleolos de color azul grisceo. Contienen un reborde de citoplasma basfilo homogneo sin grnulos especficos, pero con algunos grnulos azurfilos. Existen escasos promielocitos , mielocitos y metamielocitos, lo que da lugar a un Hiatos leucmico. Resultado del Mielograma Cociente mieloide : eritrocitos nucleados normales (2-5:1) o variable: mdula normal, anemia aplstica, anemia mielotsica. 2. Cociente mieloide : eritrocito nucleado disminuido(0,5-2:1). a. Por disminucin de clulas mieloides: agrunalocitosis; b. Por aumento de eritrocitos nucleados: anemia hemoltica, anemia poshemorrgica, anemia deficitaria de hierro, policitemia vera. 3. Cociente mieloide: eritrocitos nucleados aumentados (5+:1) por aumento de clulas mieloides: leucemia mieloblstica aguda, leucemia mieloctica crnica, reacciones leucemoides.
1.

5. FUENTES DE INFORMACIN Sonnenwirth, Alex. Mtodos y Diagnstico del Laboratorio Clnico. Buenos Aires. 12ma edicin. Editorial Panamericana. 2001. Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4 ta edicin. Editorial Masson, 2000.

Platt, Williams. Atlas de Hematologa en color. 4ta edicin. Barcelona. Editorial JIMS, 2000. San Miguel, Jess. Cuestiones en Hematologa. 2ta edicin. Madrid. Harcourt Brace, 2000.

PRACTICA N 10 DIAGNSTICO MICROSCPICO DE LEUCEMIA II LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M3-M4. SANGRE PERIFRICA Y MDULA SEA. 4. MARCO TERICO La Leucemia Mieloide Aguda es una neoplasia clonal del tejido hemopoytico, caracterizada por la proliferacin de clulas blsticas anormales de estirpe mieloide en la medula sea y menor produccin de clulas hemticas normales, condicionando anemia y trombopenia. La leucemia mieloide aguda se produce por daos genticos adquiridos (no heredados) en el ADN de las clulas en desarrollo dentro de la mdula sea. Sus efectos son: 1) el crecimiento incontrolado y exagerado y la acumulacin de clulas llamadas "blastos leucmicos" los que no pueden funcionar como las clulas sanguneas normales 2) el bloqueo de la produccin de clulas normales de la mdula, lo que resulta en una deficiencia de glbulos rojos (anemia) y plaquetas (trombocitopenia) y de glbulos blancos normales (especialmente neutrfilos, es decir, neutropenia) en la sangre. La leucemia mieloide aguda es una enfermedad que avanza rpidamente y afecta a la mayora de las clulas que se estn formando o primitivas (an no completamente desarrolladas o diferenciadas). Estas clulas inmaduras no pueden desempear sus funciones normales. La leucemia crnica avanza lentamente y permite el crecimiento de un mayor nmero de clulas ms desarrolladas.

La leucemia mieloide aguda (LMA) en adultos es una enfermedad en la cual se encuentran clulas cancerosas (malignas) en la sangre y la mdula sea. La LMA tambin se conoce con el nombre de leucemia no linfoctica aguda o LNLA. Normalmente, la mdula sea produce clulas llamadas blastos, las cuales al madurar se transforman en varios tipos de glbulos que a su vez cumplen funciones especficas en el cuerpo. La LMA afecta los blastos que se estn transformados en glbulos blancos llamados granulocitos. En los pacientes con LMA, los blastos no maduran y se vuelven demasiado numerosos. Estas clulas blsticas inmaturas se encuentran entonces en la sangre y la mdula sea. 5. COMPETENCIAS Analiza microscpicamente las muestras e identifica las diferentes alteraciones morfolgicas de los leucocitos, hemates y plaquetas, compatibles con Leucemia mieloide aguda (LMA) y Leucemia Linfoblstica aguda (LLA). Interpreta los resultados obtenidos. 4. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Lminas portaobjetos Lminas extensoras. Colorante Wright Bandeja de coloracin Agua destilada Micropipetas de 10 100 l. Micropipetas de 100 1000 l Cmara de Neubauer Lquido de Turk Extendidos de sangre perifrica coloreados con Wright: Leucemia Aguda Extendidos de mdula sea coloreados con Wright: Leucemia Aguda Microscopio Aceite de inmersin Papel filtro 6. PROCEDIMIENTOS 10. Determinar el nmero de Leucocitos. 11. Estudio microscpico de sangre perifrica: cualitativo y frmula leucocitaria. 12. Estudio microscpico de Mdula sea: Mielograma FRMULA LEUCOCITARIA: SANGRE PERIFERICA
TIPO DE LEUCOCITO Blastos Promielocitos Mielocitos Metamielocitos Neutrfilo en cayado Neutrfilo segmentado PALOTEO TOTAL

Eosinfilos Basfilos Monocitos Linfocitos Otros TOTAL

NMERO DE LEUCOCITOS POR mm3:.

LEUCEMIA AGUDA M3

MIELOIDE

AGUDA

LEUCEMIA MIELOIDE M3

LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M4

LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M4 MIELOGRAMA:

ELEMENTOS FORMES CELULARES CLULAS INDIFERENCIADAS CLULAS DEL RETCULO MIELOBLASTOS PROMIELOCITOS MIELOCITOS NEUTROFILO MIELOCITO EOSINOFILO MIELOCITO BASOFILO METAMIELOCITO NEUTROFILO METAMIELOCITO EOSINFILO METAMIELOCITO BASIFILO NEUTRFILO EN BANDA EOSINOFILO EN BANDA NEUTRFILO SEGMENTADO EOSINOFILO SEGMENTADO2.0 BASOFILO SEGMENTADO MONOCITOS LINFOCITOS MEGACARIOCITOS PRONORMOBLASTO NORMOBLASTO BASOFILO NORMOBLASTO POLICROMATOFILO NORMOBLASTO ORTOCROMATICO PROMEGALOBLASTO MEGALOBLASTO BASOFILO MEGALOBLASTO POLICROMTICO MEGALOBLASTO ORTOCROMATICO RELACIN MIELOIDE / ERITROIDE (M/E)

NORMAL (MEDIO%) 0.0 0.4 2.0 5.0 12.0 1.5 0.3 25.6 0.4 0.0 12.2 1.3 20.0 2.0 0.2 2.0 10.0 0.4 0.5 1.6 10.4 6.4 0 0 0 0 34:1

LMITES % 0.0 1.0 0.0 1.3 0.3 5.0 1.0 8.0 5.0 19.0 0.5 3.0 0.0 0.5 17.5 33.7 0.0 1.1 0.0 0.2 9.5 15.3 0.2 2.4 11.6 30.0 0.5 4.0 0.0 - 3.7 1.6 4.3 3.0 20.7 0.0 3.0 0.2 4.2 0.25 4.8 3.5 20.5 3.0 25.0 0 0 0 0

5. RESULTADOS En la LMA los leucocitos estn muy aumentados (con presencia de blastos), aunque pueden haber formas aleucmicas, la Hemoglobina suele ser menor de 8gr/dl y las plaquetas suelen ser menor de 20,000/mm3 (anemia y trombocitopenia severas)

En el frotis, en las leucemias granulocticas se observan bastones de Auer, que corresponde a fusin de los grnulos primarios. El aspirado de mdula sea es la prueba diagnstica clave, ya que permite analizar mejor que la biopsia. Se caracteriza por ncleos mieloblsticos que tienen una cromatina vesicular reticulada sin condensaciones y sin membrana nuclear pero con uno o ms nucleolos de color azul grisceo. Contienen un reborde de citoplasma basfilo homogneo sin grnulos especficos, pero con algunos grnulos azurfilos. Existen escasos promielocitos , mielocitos y metamielocitos, lo que da lugar a un Hiatos leucmico. Resultado del Mielograma 4. Presencia de clulas que normalmente no se encuentran en la mdula: de mieloma, de carcinoma, de Gaucher, de Niemmann-Pick. 5. Presencia de parsitos: leishmania, plasmodio, histoplasma. 6. Cociente mieloide : eritrocitos nucleados normales (2-5:1) o variable: mdula normal, anemia aplstica, anemia mielotsica. 7. Cociente mieloide : eritrocito nucleado disminuido(0,5-2:1). a) Por disminucin de clulas mieloides: agrunalocitosis; b) Por aumento de eritrocitos nucleados: anemia hemoltica, anemia poshemorrgica, anemia deficitaria de hierro, policitemia vera. 8. Cociente mieloide : eritrocitos nucleados aumentados (5+:1) por aumento de clulas mieloides: leucemia mieloblstica aguda, leucemia mieloctica crnica, reacciones leucemoides. 9. Aumento de clulas no mieloides : leucemias linfticas aguda y crnica, monocleosis infecciosa, anemia aplstica. 6. CUESTIONARIO 1. Fundamente los resultados hematolgicos compatibles con Leucemia Mieloide Aguda en sangre perifrica y en Mdula sea. 2. Fundamente los resultados hematolgicos compatibles con Leucemia Linfoblstica Aguda en sangre perifrica y en Mdula sea. 3. Describa las dos tinciones citoqumicas empleadas en el diagnstico de Leucemia Mieloide Aguda 4. Cules son las alteraciones citogenticas que afectan los genes detectados por biologa molecular en la Leucemia Mieloide Aguda. 5. Indique que parmetros bioqumicos se alteran en Leucemia Mieloide Aguda. 6. Cules son las tinciones histoqumicas empleadas en Leucemia Linfoblstica Aguda. 7. Indique algunas alteraciones citogenticas importantes en la LMA. 8. Comente el Hemograma tpico de Leucemia Mieloide Aguda.

6. FUENTES DE INFORMACIN Sonnenwirth, Alex. Mtodos y Diagnstico del Laboratorio Clnico. Buenos Aires. 12ma edicin. Editorial Panamericana. 2001.

Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4 ta edicin. Editorial Masson, 2000. Platt, Williams. Atlas de Hematologa en color. 4ta edicin. Barcelona. Editorial JIMS, 2000. San Miguel, Jess. Cuestiones en Hematologa. 2ta edicin. Madrid. Harcourt Brace, 2000.

PRACTICA N 11 DIAGNSTICO DE LEUCEMIA III LEUCEMIA MIELOIDE CRNICA. INVESTIGACIN MICROSCPICA DE SANGRE PERIFRICA Y MDULA SEA

7. MARCO TERICO La leucemia mieloide crnica (LMC) es un sndrome mieloproliferativo crnico caracterizado por una proliferacin de la serie granuloctica hasta las ltimas fases madurativas de su diferenciacin. Cursa, por tanto, con granulocitosis a nivel perifrico. Representa un 9% del total de casos nuevos de leucemia La causa de la LMC es desconocida. No hay evidencia de que tenga relacin con frmacos o infecciones. Lo que s se conoce es que aparece una traslocacin gentica de tipo t(9,22) produce un reordenamiento de los genes BCR/ABL, produciendo el denominado cromosoma Filadelfia. La protena es una tirosin quinasa que transforma el ATP en ADP, fosforilando un sustrato que altera la mdula sea y su funcionamiento. La LMC es el sndrome mieloproliferativo caracterizado por la produccin exagerada de granulocitos de medula sea con la elevacin en sangre perifrica de los elementos celulares de la serie mieloide en distintos estadios de maduracin y con aparente normalidad morfolgica. Citologa: Esta enfermedad se produce por: En la minora de los casos por causas ambientales es decir por, radiaciones ionizantes compuestos qumicos, como ser el BENCENO, factores ocupacionales o estatus socioeconmicos. Siendo lo ms importante y lo ms frecuente las radiaciones inicas.

En la mayora de los casos es una alteracin adquirida por una translocacin entre los cromosomas IX y XXII. Tambin puede haber alteraciones cromosmicas adicionales: faltas de cromosomas en varones, y presencia de cromosomas extras del grupo C ( especialmente del numero 8)

Incidencia:

La LMC es una enfermedad que se da en todas las razas con ligero predominio en los varones. Representando el 15 al 20 % de todas las leucemias. Puede presentarse a cualquier edad, y no se da con frecuencia en nios. El mayor nmero de casos aparece en pacientes de 40 a 60 aos. Segn uno de los artculos originales, que trataba de las causas de muerte de la LMC la edad media del paciente con LMC en el momento del diagnostico era de 49 aos, lo que coincide con lo mencionado anteriormente.

Fases: La LMC en su evoluciones cuatro fases clnicamente importantes y cada una de las mismas tiene un pronostico y una respuesta diferente
1. Fase

Crnica: Se caracteriza por su excelente respuesta al tratamiento con agentes alquilantes (Busulfan) y progresiva reduccin de la masa mieloidea, de manera tal que en un intervalo de varias semanas se consigue la remisin de la enfermedad.
2. Fase

controlada: Se caracteriza por la tendencia a la normalizacin de la cifra leucocitaria, eritrocitos, plaquetas y fosfatasa alcalina. Se observa desaparicin de signos y sntomas con disminucin notable y evidente de la hepatoesplenomegalia a menudo surge durante este periodo brotes crnicos controlables con tratamiento. Es importante resaltar en estas fases, el estudio citogentico de las clulas de la medula sea.
3. Metamorfosis:

Esta fase es llamada tambin fase de aceleracin. Se caracteriza porque se rompe la estabilidad ya que la enfermedad deja de ser crnica y benigna y la salud de los pacientes se deteriora progresivamente. Se observa cuadros clnicos y hematolgicos confusos, ya que no sigue un patrn definido. En unos pacientes el proceso se inicia con la aparicin de sntomas inexplicables desde el punto de vista analtico apareciendo malestar general, fiebre, perdida de peso y depresin. En otros se produce importantes alteraciones cualitativas y/o cuantitativas del hemograma, an en ausencia de sntomas subjetivos. Entre estos dos extremos puede aparecer un gran nmero de combinaciones como ser alteraciones hemorrgicas evidentes hepatoesplenomegalia infecciones de origen bacteriano o fungicidas, favorecidas por la neutropenia. 8. COMPETENCIAS Analiza microscpicamente las muestras de sangre perifrica y mdula sea e identifica las diferentes alteraciones morfolgicas de los leucocitos compatibles con Leucemia Mieloide Crnica Interpreta los resultados obtenidos. 5. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Lminas portaobjetos Lminas extensoras.

Colorante Wright Bandeja de coloracin Agua destilada Micropipetas de 10 100 l. Micropipetas de 100 1000 l Cmara de Neubauer Lquido de Turk Extendidos de sangre perifrica coloreados con Wright: Leucemia crnica Extendidos de mdula sea coloreados con Wright: Leucemia crnica Microscopio Aceite de inmersin Papel filtro

9. PROCEDIMIENTOS 13. Determinar el nmero de Leucocitos. 14. Estudio microscpico de sangre perifrica: cualitativo y frmula leucocitaria. 15. Estudio microscpico de Mdula sea: Mielograma FRMULA LEUCOCITARIA: SANGRE PERIFERICA
TIPO DE LEUCOCITO Blastos Promielocitos Mielocitos Metamielocitos Neutrfilo en cayado Neutrfilo segmentado Eosinfilos Basfilos Monocitos Linfocitos Otros TOTAL PALOTEO TOTAL

NMERO DE LEUCOCITOS POR mm3:.

Presencia de clulas inmaduras a predominio. Se observan un Promielocito, dos Blastos con presencia de nucleolos y un Mielocito basfilo

MIELOGRAMA:
ELEMENTOS FORMES CELULARES CLULAS INDIFERENCIADAS CLULAS DEL RETCULO MIELOBLASTOS PROMIELOCITOS MIELOCITOS NEUTROFILO MIELOCITO EOSINOFILO MIELOCITO BASOFILO METAMIELOCITO NEUTROFILO METAMIELOCITO EOSINFILO METAMIELOCITO BASIFILO NEUTRFILO EN BANDA EOSINOFILO EN BANDA NEUTRFILO SEGMENTADO EOSINOFILO SEGMENTADO2.0 BASOFILO SEGMENTADO MONOCITOS LINFOCITOS MEGACARIOCITOS PRONORMOBLASTO NORMOBLASTO BASOFILO NORMOBLASTO POLICROMATOFILO NORMOBLASTO ORTOCROMATICO PROMEGALOBLASTO MEGALOBLASTO BASOFILO MEGALOBLASTO POLICROMTICO MEGALOBLASTO ORTOCROMATICO RELACIN MIELOIDE / ERITROIDE (M/E) NORMAL (MEDIO%) 0.0 0.4 2.0 5.0 12.0 1.5 0.3 25.6 0.4 0.0 12.2 1.3 20.0 2.0 0.2 2.0 10.0 0.4 0.5 1.6 10.4 6.4 0 0 0 0 34:1 LMITES % 0.0 1.0 0.0 1.3 0.3 5.0 1.0 8.0 5.0 19.0 0.5 3.0 0.0 0.5 17.5 33.7 0.0 1.1 0.0 0.2 9.5 15.3 0.2 2.4 11.6 30.0 0.5 4.0 0.0 - 3.7 1.6 4.3 3.0 20.7 0.0 3.0 0.2 4.2 0.25 4.8 3.5 20.5 3.0 25.0 0 0 0 0

5. RESULTADOS Los hallazgos en sangre perifrica se caracterizan por anemia normoctica normocrmica con ligera policromasia. En ocasiones existen normoblastos con el 2 5% de reticulocitosis. El nmero de leucocitos es de 80,000 250,000/mm3, con un aumento de las clulas polimorfonucleares y eosinofilia o basofilia asociadas. Los promielocitos y mieloblastos aumentan a medida que la enfermedad se aproxima a sus fases finales; la concentracin de fosfatasa alcalina de los polimorfonucleares es menor de lo normal. Las plaquetas aumentan al principio y descienden al final; a veces se aprecian fragmentos de megacariocitos y plaquetas atpicas. La mdula sea es muy celular, con desviacin moderada a la izquierda y aumento del cociente M/E. Predominan los mielocitos y metamielocitos, con un aumento variable de los mielocitos Basfilos y Eosinfilos. Despus predominan los promielocitos y las formas blsticas; los megacariocitos estn aumentados al principio y disminuyen despus. La serie eritroide est disminuida. Con frecuencia se aprecia la existencia del cromosoma Filadelfia (Ph) en las clulas de la mdula sea de muchos pacientes. Resultado del Mielograma 6. CUESTIONARIO 9. Fundamente los resultados hematolgicos compatibles con Leucemia Mieloide Crnica en sangre perifrica y en Mdulla sea. 10. Comente el Hemograma tpico de Leucemia Mieloide Crnica. 11. En que consiste el cromosoma Filadelfia (Ph+) 12. Explique otros procedimientos hematolgicos y no hematolgicos empleados para el diagnstico de Leucemia Crnica. 7. FUENTES DE INFORMACIN Sonnenwirth, Alex. Mtodos y Diagnstico del Laboratorio Clnico. Buenos Aires. 12ma edicin. Editorial Panamericana. 2001.

Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4 ta edicin. Editorial Masson, 2000. Platt, Williams. Atlas de Hematologa en color. 4ta edicin. Barcelona. Editorial JIMS, 2000. San Miguel, Jess. Cuestiones en Hematologa. 2ta edicin. Madrid. Harcourt Brace, 2000.

PRACTICA N 12 DIAGNSTICO DE LEUCEMIA IV LEUCEMIA LINFOBLASTICA. INVESTIGACIN MICROSCPICA DE SANGRE PERIFRICA Y MDULA SEA

1. MARCO TERICO La leucemia linfoblstica aguda (LLA) es la neoplasia ms frecuente en la infancia, correspondiendo a 32-35% del total de cnceres, con una incidencia anual de 2,5 a 3 casos por cada 100 000 nios menores de 15 aos. Esta enfermedad se inicia en la mdula sea cuando una clula progenitora linfoide se escapa de los mecanismos de control producindose una proliferacin descontrolada y perdiendo la capacidad de diferenciarse a linfocito maduro. Dependiendo en cul etapa se produce esta proliferacin clonal, se originan los diferentes fenotipos de LLA, los que tienen relacin con la clnica y la respuesta al tratamiento. La LLA se puede presentar como cuadro agudo o insidioso, como hallazgo en el hemograma de un nio casi asintomtico o como paciente grave con anemia y/o hemorragia, y/o infeccin severa. Los sntomas y signos pueden ser secundarios a la falla medular y/o a la invasin de tejidos. La insuficiencia medular es producida tanto por la invasin por blastos como por la inhibicin del tejido hematopoytico normal que estos pueden inducir. La insuficiencia medular es la responsable de la anemia, que se expresa

en palidez y decaimiento; de la neutropenia que se asocia con gran frecuencia a sndrome febril e infeccin, y de la trombopenia que provoca los sangramientos. 2. COMPETENCIAS Analiza microscpicamente las muestras de sangre perifrica y mdula sea e identifica las diferentes alteraciones morfolgicas de los leucocitos compatibles con Leucemia Mieloide Crnica Interpreta los resultados obtenidos. 6. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Colorante Wright Agua destilada Cmara de Neubauer Lquido de Turk Extendidos de sangre perifrica coloreados con Wright: Leucemia crnica Extendidos de mdula sea coloreados con Wright: Leucemia crnica Microscopio Aceite de inmersin

3. PROCEDIMIENTOS Estudio microscpico de Mdula sea: Mielograma

LEUCEMIA LINFOBLSTICA L1

LEUCEMIA LINFOBLSTICA L2

MIELOGRAMA:

LEUCEMIA LINFOBLSTICA L3

7. RESULTADOS En la LLA, el ncleo de los Linfoblastos es condensado con una membrana nuclear gruesa con cromatina granular densa, que contiene de uno a cuatro nucleolos poco diferenciados y una zona perinuclear clara con un fino citoplasma homogneo agranular. En ocasiones los Linfoblastos presentan indentaciones nucleares, hendiduras nucleares profundas o lobulaciones poco habituales. Los nucleolos existen incluso en los linfocitos maduros, pero estn enmascarados con la cromatina.

7. FUENTES DE INFORMACIN Sonnenwirth, Alex. Mtodos y Diagnstico del Laboratorio Clnico. Buenos Aires. 12ma edicin. Editorial Panamericana. 2001. Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4 ta edicin. Editorial Masson, 2000. Platt, Williams. Atlas de Hematologa en color. 4ta edicin. Barcelona. Editorial JIMS, 2000. San Miguel, Jess. Cuestiones en Hematologa. 2ta edicin. Madrid. Harcourt Brace, 2000.

PRACTICA N 13 DIAGNSTICO DE LEUCEMIA PRESENTACIN DE CASO CLNICO 1. COMPETENCIAS Analiza los resultados del hemograma automatizado Interpreta los resultados obtenidos. 2. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Lminas portaobjetos Lminas extensoras. Extendidos de sangre perifrica y mdula sea coloreados con Wright. Microscopio Aceite de inmersin 3. PROCEDIMIENTOS 1. Anlisis del documento presentado: casos clnicos. 2. Estudio microscpico de sangre perifrica y Mdula sea: Mielograma

4.

CASO 1:

5.

CASO 2:

6. RESULTADOS 1. Realizar los anlisis respectivos para cada caso teniendo en cuenta los valores expuestos para cada caso. 2. En equipos de trabajo presentar las conclusiones 3. Realizar la discusin para cada uno de los casos. 7. FUENTES DE INFORMACIN Sonnenwirth, Alex. Mtodos y Diagnstico del Laboratorio Clnico. Buenos Aires. 12ma edicin. Editorial Panamericana. 2001. Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4 ta edicin. Editorial Masson, 2000. Platt, Williams. Atlas de Hematologa en color. 4ta edicin. Barcelona. Editorial JIMS, 2000. San Miguel, Jess. Cuestiones en Hematologa. 2ta edicin. Madrid. Harcourt Brace, 2000.

PRACTICA N 14

DIAGNSTICO DE TRASTORNOS DE LA HEMOSTASIA. PRESENTACIN DE CASOS CLNICOS CASO CLINICO 24: Paciente varn de 31 aos con antecedentes personales de ditesis hemorrgica fcil desde la infancia en forma de epistaxis y equmosis y esguince de tobillo derecho hace unos 12 aos. Antecedentes familiares de un hijo de 2 aos con episodio de hemorragia traumtica desproporcionada. MOTIVO DE CONSULTA: Acude a nuestro Centro por presentar hemorragia muy importante tras desbridamiento de absceso retroauricular. HISTORIA CLINICA: Anamnesis: anodina a excepcin de los antecedentes ya mencionados y de discretas molestias en tobillo derecho de unos 10 aos de evolucin. Exploracin: absceso retroauricular desbridado con hematoma local importante; resto anodino. El estudio de hemostasia mostr una cifra de plaquetas, T. protrombina, T. trombina, fibringeno, AT-III, plasmingeno y alfa-2-antiplasmina normales. PTTA 39" (C 30"), T. IVY > 15 min., FVIII:C 22%, vWF:CoR 16%, vWF:Ag 40%, agregacin plaquetar a la Ristocetina muy descendida para concentraciones elevada y nula para bajas. Bioqumica general y hemograma normales. Se realiz el estudio familiar de su hijo, que mostr un patrn similar.

CASO CLNICO 1: Mujer de 60 aos con hematurias y prpura petequial en extremidades inferiores. Hemograma: normal, salvo plaquetas: 1000/ul.

T. protrombina PTTA Fibringeno AT-III Plasmingeno Factores DD/PDF CASO CLNICO 4:

92% 31 seg. 2,8 g/L 89% 123% > 90% Negat.

Varn de 14 meses de edad, sin antecedentes de inters, con dolor, tumefaccin e impotencia funcional en rodilla derecha.

Plaquetas T. protrombina PTTA T. trombina Fibringeno AT-III Plasmingeno FII/VII FV/X FVIII/IX

200000/ul. 82% 138 s. (C 30 s.) 20 s. (C 20 s.) 3,2 g/L. 91% 105% 79/84% 93/99% 1%/90%

CASO CLNICO 4: Mujer de 35 aos con fiebre, rigidez de nuca y lesiones vasculticas generalizadas. Plaquetas T. protrombina PTTA Fibringeno AT-III Plasmingeno a -2-ATPL DD/PDF FII/FVII FV/FX 4. COMPETENCIAS 40000/ul. 30% 60 s. (C 30 s.) 0,5 g/L. 54% 25% 35% 16/256 m g/mL. 60/50% 35/50%

Analiza los resultados del hemograma automatizado Interpreta los resultados obtenidos.

5. PROCEDIMIENTOS 3. Anlisis del documento presentado: casos clnicos. 7. RESULTADOS 4. Realizar los anlisis respectivos para cada caso teniendo en cuenta los valores expuestos para cada caso. 5. En equipos de trabajo presentar las conclusiones 6. Realizar la discusin para cada uno de los casos. 7. Presentacin de los marcos tericos respectivos.

8. BIBLIOGRAFIA 9. Dacie Jhon V. Hematologa Prctica.6ta ed. Madrid: Elsevier; 2008. 10. Osorio S, G. Hematologa. Principios generales. Santiago: Mediterrneo; 2007. 11. Bernard Henry, J. El Laboratorio en el diagnstico Clnico. Madrid: Marbn;2007 12. Garca Espinoza B. Hematologa I. 3ra ed. Madrid: Paraninfo; 2007. 13. Balcells Gorina A. La Clnica y el Laboratorio. 20va ed. Barcelona: Masson; 2006. 14. Sans Sabrafen J. Hematologa Clnica. 5ta ed. Madrid: Elsevier; 2006 15. Turgeon M. Hematologa Clnica. Teora y procedimientos. 5 ta ed. Mxico: Manual Moderno; 2006. 16. Litchman A. Williams W. Hematologa. 6ta ed. Madrid: McGraw-Hill; 2005.

PRACTICA N 15

DIAGNSTICO MICROSCPICO DE LAS PRINCIPALES ENFERMEDADES HEMATOLGICAS. PRESENTACIN DE CASOS CLNICOS. HEMOGRAMA AUTOMATIZADO. 1. COMPETENCIAS Analiza los resultados del hemograma automatizado Evala con criterio extendidos de sangre perifrica y mdula sea. Interpreta los resultados obtenidos. 2. MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS Extendidos de sangre perifrica y mdula sea coloreados con Wright. Microscopio Aceite de inmersin 3. PROCEDIMIENTOS 4. Anlisis del documento presentado: casos clnicos. 5. Estudio microscpico de frotis sanguneo y Mdula sea. 5. PRESENTACIN DE CASOS: Se presentar casos selecionados.

6. RESULTADOS Realizar los anlisis respectivos para cada caso teniendo en cuenta los valores expuestos para cada caso. En equipos de trabajo presentar las conclusiones Realizar la discusin para cada uno de los casos. 7. BIBLIOGRAFIA Sonnenwirth, Alex. Mtodos y Diagnstico del Laboratorio Clnico. Buenos Aires. 12ma edicin. Editorial Panamericana. 2001. Vives, Joan. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Barcelona. 4 ta edicin. Editorial Masson, 2000. Platt, Williams. Atlas de Hematologa en color. 4ta edicin. Barcelona. Editorial JIMS, 2000. San Miguel, Jess. Cuestiones en Hematologa. 2ta edicin. Madrid. Harcourt Brace, 2000.