2.3.2.6.

4 Para Harada Mori-tabung budaya Sebuah metode tabung bersih dan sederhana untuk budidaya cacing tambang dan larva nematoda usus dari telur ditemukan oleh Harada dan Mori pada tahun 1955. Para Harada Mori-asli tabung metode (Harada dan Mori, 1955) telah banyak dimodifikasi oleh orang lain (Sasa dkk, 1958;. Hsieh, 1961) untuk diagnosis dan diferensiasi Necator dari infeksi Ancylostoma. Sasa dkk. (1958) dan Hsieh (1961) telah mencatat bahwa modifikasi Harada Mori-teknik kultur memiliki beberapa keunggulan dibandingkan metode lain untuk budidaya larva cacing tambang. 2.3.2.6.4.1 Prinsip dari teknik-Harada Mori budaya dimodifikasi Teknik ini menggunakan kertas saring yang feces dicoreng dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi sekitar 3 ml air suling (Sasa dkk, 1958;. Hsieh, 1961). Aliran air kapiler ke atas melalui kertas memberikan kelembaban cukup dengan perendaman terus menerus dari kertas saring dan film feses (Sasa dkk, 1958;. Hsieh, 1961). Oleh aliran kapiler, elemen larut dari kotoran terbawa ke atas kertas, di mana mereka baik diuapkan atau menumpuk di deposit gelap (Garcia, 2001). Inkubasi pada kondisi nikmat penetasan pembangunan ovum dan selanjutnya larva (De Kaminsky, 1993). Keuntungan dari metode ini adalah bahwa itu tidak memerlukan tambahan bahan organik seperti arang atau agaragar, tabung sampel individu dapat diinkubasi bersama dalam jumlah besar, memerlukan bahan murah tersedia, memiliki tingkat deteksi yang tinggi untuk spesies cacing tambang, sederhana untuk melakukan, dan buang aman kertas filter yang digunakan (Harada dan Mori, 1955; Beaver dkk, 1964;. Sasa dkk, 1958;. Hsieh, 1961). Lebih dari itu, percobaan dapat didirikan di setiap ruangan, asalkan tindakan pencegahan yang memadai diambil untuk mencegah kontak manusia dengan kotoran yang mengandung telur

cacing tambang (Garcia, 2001; HHS, 1993). Kelemahan dari theHarada-Mori teknik adalah bahwa kultur tinja harus dipantau ketat untuk mencegah pengeringan disebabkan oleh penguapan (Garcia, 2001). 3.6.2.1 Prosedur uji-diubah-Harada Mori tabung budidaya kertas filter Sebuah jalur sempit (13 dengan 120 mm) kertas filter (Whatmann No 3) dipotong, dan salah satu ujungnya dipotong menjadi sedikit meruncing. Sekitar 4 g sampel tinja cacing tambang positif ditempatkan pada bagian tengah kertas saring dan menyebar untuk membuat sediaan tebal dari kotoran (1 sampai 2 mm) pada sepertiga tengah (satu sisi saja) dari secarik kertas filter dan dimasukkan ke dalam mesin pemisah kerucut-tip 15-ml; memastikan bahwa akhir meruncing dari strip kertas adalah di dekat bagian bawah tabung. Sekitar 3 sampai 4 ml air suling ditambahkan ke bagian bawah tabung masing-masing sehingga meniskus adalah sekitar 5 mm di bawah tempat tinja. Tabung yang longgar ditutupi dengan topi yang telah meninju membuat lubang di dalamnya untuk memungkinkan udara ke dalam sistem budaya. Setiap tabung bertuliskan angka dan tanggal studi budaya (yang selalu sampel hari yang sama dikumpulkan). Tabung yang disimpan tetap tegak di rak dan diinkubasi pada suhu kamar (24o-28oC) dalam gelap untuk jangka waktu maksimum 10 hari (Gambar 4). Volume cairan dalam tabung masing-masing dipantau setiap hari dan disesuaikan sesuai kebutuhan, untuk mempertahankan tingkat air asli, untuk kelembaban optimal. Pada akhir inkubasi, tabung diletakkan dalam penangas air pada 500C selama 15 menit untuk membunuh larva infektif. Tabung terungkap dan melalui forsep, strip kertas saring dibuang ke dalam disinfektan, dan tabung disentrifugasi pada 1000 rpm selama 5 menit untuk berkonsentrasi larva. Supernatan disedot dan setetes yodium

Lugol ditambahkan ke sedimen untuk memungkinkan memudahkan identifikasi fitur larva. Gambar 4. Foto dari budaya-Harada Mori dimodifikasi mengatur (sumber: penelitian) Harada mori kertas filter jalur budaya deskripsi Untuk mendeteksi infeksi cacing tambang terang, S.stercoralis, dan Trichostrongylusspp, serta. Untuk memfasilitasi identifikasi spesifik, Harad a mori kertas filter jalur teknik kultur sangat berguna. technicque memerlukan kertas saring yang countinouslymembasahi ker tas saring oleh kapiler. Inkubasi pada kondisi nikmat penetasan telurdan / atau perkembangan larva. Spesimen tinja untuk dibudidayakan tidak harus didinginkan, karena beberapa parasit (terutama Necator am ericanus) rentan terhadapdingin dan mungkin gagal untuk berkembang setelah pendinginan. Juga, hati-hati har us dilakukan dalam menangani kertas filter menelanjangi dirinya sendiri, karena larvainfektif Strongyloides dapat bermigrasi ke atas sebagai wel sebagai ke bawah pada strip kertas.. Selalu mengamati tindakan pencegahan universal dan memakai sarung tangan saat melakukan prosedur ini. kontrol kualitas 1 mengikuti prosedur rutin untuk koleksi yang optimal dan penanganan spesimen tinjauntuk pemeriksaan parasitologis resh 2 memeriksa dikenal sampel positif dan negatif dari kotoran (dari laboratoriumpidatohewan), jika tersedia, untuk memastikan bahwa prosedur bekerja. 3 diagram larva review dan deskripsi untuk comfirmation identifikasi larva 4 mikroskop harus dikalibrasi, dan tujuan dan okuler yang digunakan untuk prosedurkalibrasi harus digunakan untuk semua pengukuran pada mikroskop. Faktor kalibrasiuntuk s emua tujuan harus diposting pada akses musuh mikroskop mudah (faktorperkalian dapat disisipkan pada tubuh mikroskop) 5 catatan semua hasil QC pelaporan

Nematoda larva cacing tambang, dapat dipulihkan. Jika ..... organisme ya ng hadir,hidup bebas dan tahap larva dapat ditemukan setelah beberapa hari dalam budaya 1 laporan "larva tidak terdeteksi